JPH0695866B2 - 植物成長ホルモンによるステビア４倍体の作出方法 - Google Patents
植物成長ホルモンによるステビア４倍体の作出方法Info
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- JPH0695866B2 JPH0695866B2 JP1064120A JP6412089A JPH0695866B2 JP H0695866 B2 JPH0695866 B2 JP H0695866B2 JP 1064120 A JP1064120 A JP 1064120A JP 6412089 A JP6412089 A JP 6412089A JP H0695866 B2 JPH0695866 B2 JP H0695866B2
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- Japan
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- stevia
- artificial
- tetraploid
- producing
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- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
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- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は植物成長ホルモン処理によって、人為４倍体を
作出する方法に関するものであり、農業、林業における
品種改良、又は組織培養等に利用できる。
作出する方法に関するものであり、農業、林業における
品種改良、又は組織培養等に利用できる。
植物の倍数体作出による育種は、種々の作物において利
用され、実用化されている。そしてこれら倍数体を人為
的に誘発させる薬剤としては、コルヒチン、コルセミ
ド、ピンプラスチン、ポドフィロトキシンさらには、笑
気ガス、クマリン等が用いられてきた。
用され、実用化されている。そしてこれら倍数体を人為
的に誘発させる薬剤としては、コルヒチン、コルセミ
ド、ピンプラスチン、ポドフィロトキシンさらには、笑
気ガス、クマリン等が用いられてきた。
上記誘発剤は、いずれも、細胞分裂能の高い部位、例え
ば茎頂、えき芽、根端等の細胞に施すことで、人為４倍
体を作出するものである。
ば茎頂、えき芽、根端等の細胞に施すことで、人為４倍
体を作出するものである。
また最近では、培養組織であるカルス、苗条原基にも同
様の誘発剤で処理することで、人為４倍体を作出する方
法も開発されている。
様の誘発剤で処理することで、人為４倍体を作出する方
法も開発されている。
しかし、これら誘発剤は、植物体または、培養組織に与
える毒性が強いため副作用があり、処理した後の栽培に
悪影響を及ぼしている。さらに、これらの薬剤は、毒物
又は、劇物で取扱いに注意を要するなど効率、安全の面
で問題がある。
える毒性が強いため副作用があり、処理した後の栽培に
悪影響を及ぼしている。さらに、これらの薬剤は、毒物
又は、劇物で取扱いに注意を要するなど効率、安全の面
で問題がある。
また、特にコルヒチンを誘発剤として使用する場合、４
倍体の作出は容易であるが、得られた４倍体の順化によ
る屋外栽培が困難であるといった問題もあった。他方、
ステビア甘味料の抽出原料として使用される南米原産の
キク科植物であるステビアにおいて、価格の低減のため
甘味成分の増大が求められていた。
倍体の作出は容易であるが、得られた４倍体の順化によ
る屋外栽培が困難であるといった問題もあった。他方、
ステビア甘味料の抽出原料として使用される南米原産の
キク科植物であるステビアにおいて、価格の低減のため
甘味成分の増大が求められていた。
従って、その対策としてステビア植物への毒性が少なく
取扱の容易な新規な誘発剤による甘味成分含量の多いス
テビア倍数体の効率的な作出と安定した生育が求められ
ている。
取扱の容易な新規な誘発剤による甘味成分含量の多いス
テビア倍数体の効率的な作出と安定した生育が求められ
ている。
そこで、本発明者らは、上記問題点を解決すべく安全に
取り扱える薬剤について種々検討した結果、無菌的に育
成したステビア苗を、植物成長ホルモンの一種であるサ
イトカイニンで処理することにより、新たに発生するえ
き芽に変異誘発された人為４倍体が、短期間に出現する
ことを見い出した。
取り扱える薬剤について種々検討した結果、無菌的に育
成したステビア苗を、植物成長ホルモンの一種であるサ
イトカイニンで処理することにより、新たに発生するえ
き芽に変異誘発された人為４倍体が、短期間に出現する
ことを見い出した。
つまりサイトカイニンで処理することで細胞分裂が促進
され、染色体の複製過程が細胞分裂と同調しなくなり、
結果的に染色体数の倍加が生じると考えられる。
され、染色体の複製過程が細胞分裂と同調しなくなり、
結果的に染色体数の倍加が生じると考えられる。
すなわち、本発明の要旨は、植物成長ホルモンの一種で
あり、現在、組織培養等で広く用いられているサイトカ
イニンで処理することによりステビア人為４倍体を効率
よく得ることを、特徴とする方法である。
あり、現在、組織培養等で広く用いられているサイトカ
イニンで処理することによりステビア人為４倍体を効率
よく得ることを、特徴とする方法である。
本発明法でサイトカイニンにより誘発されたステビア人
為４倍体植物は、薬剤による害がなく、以後、安定して
生育させることができる。
為４倍体植物は、薬剤による害がなく、以後、安定して
生育させることができる。
本発明をさらに、詳しく説明する。
ステビア無菌苗を節間ごとに切断した供試材料は、サイ
トカイニンを含む処理液（人工培地）に10日から30日間
浸漬して処理する。
トカイニンを含む処理液（人工培地）に10日から30日間
浸漬して処理する。
上記、サイトカイニンとしては、カイネチン、６−ベン
ジルアミノプリン、ゼアチン、２−イソペンテニルアデ
ニンを用いることができる。人工培地は、ムラシゲ・ス
クーグ（Murashigeskoog）、ガンボーグ（Gamborg）、
ホワイト（White）等の組成を有する培地を用いること
が出来る。
ジルアミノプリン、ゼアチン、２−イソペンテニルアデ
ニンを用いることができる。人工培地は、ムラシゲ・ス
クーグ（Murashigeskoog）、ガンボーグ（Gamborg）、
ホワイト（White）等の組成を有する培地を用いること
が出来る。
浸漬処理中に、新たに発生したえき芽を切りとり、滅菌
水で洗浄後、無機塩類及び炭素源を含む人工固定培地
に、いわゆるさし木の要領で移植後、１〜２週間で根を
形成させる。根端組織を用いて、染色体数を算定するこ
とで、４倍体を選抜することができる。このようにして
得られた４倍体は、以後、何ら問題なく順調に生育し、
最終的に屋外栽培できる。
水で洗浄後、無機塩類及び炭素源を含む人工固定培地
に、いわゆるさし木の要領で移植後、１〜２週間で根を
形成させる。根端組織を用いて、染色体数を算定するこ
とで、４倍体を選抜することができる。このようにして
得られた４倍体は、以後、何ら問題なく順調に生育し、
最終的に屋外栽培できる。
ステビア（Stevia rebaudiana BERTONI）の種子を殺菌
した後、ショ糖２％を含むムラシゲ・スクーグの固定培
地上には種して、無菌苗を生育させた。さらに節間ごと
に切断して実験に供試した。
した後、ショ糖２％を含むムラシゲ・スクーグの固定培
地上には種して、無菌苗を生育させた。さらに節間ごと
に切断して実験に供試した。
尚、実験に供試した苗の染色体数は、すべて2n＝22の２
倍体であった。
倍体であった。
処理液は、ムラシゲ・スクーグ培地を用い、ショ糖３％
を加え、６−ベンジルアミノプリンを0,0.5,1.0,2.0ppm
の各濃度になるように添加して調整した。
を加え、６−ベンジルアミノプリンを0,0.5,1.0,2.0ppm
の各濃度になるように添加して調整した。
処理液のpHは5.7〜5.8に調整した。
それぞれの処理液を200ml三角フラスコに50ml分注し、
次いで高圧滅菌器で121℃15分間滅菌した。調整した処
理液に、節間ごとに切断した植物片を温度24℃、照度20
00ルクス（明期16時間、暗期８時間）の条件下で、それ
ぞれにつき無菌的に10日間、20日間、30日間浸漬処理し
た。
次いで高圧滅菌器で121℃15分間滅菌した。調整した処
理液に、節間ごとに切断した植物片を温度24℃、照度20
00ルクス（明期16時間、暗期８時間）の条件下で、それ
ぞれにつき無菌的に10日間、20日間、30日間浸漬処理し
た。
処理中に新たに発生するえき芽をメスで切りとり、滅菌
水で充分に洗浄後、無機塩類、炭素源に寒天を加えた人
工固定培地にいわゆるさし木の要領で移植した。各濃
度、各処理時間ごとに50本ずつのえき芽を得た。
水で充分に洗浄後、無機塩類、炭素源に寒天を加えた人
工固定培地にいわゆるさし木の要領で移植した。各濃
度、各処理時間ごとに50本ずつのえき芽を得た。
固定培地としては、無機塩類組成1/2希釈のムラシゲ・
スクーグにショ糖１％、寒天0.85％を加え、pH5.7〜5.8
に調整して用いた。
スクーグにショ糖１％、寒天0.85％を加え、pH5.7〜5.8
に調整して用いた。
２〜３週間すると、根が形成され、それらの根端組織を
用いて染色体数を算定した。
用いて染色体数を算定した。
その結果、６−ベンジルアミノプリン1.0ppmで10日間、
及び20日間浸漬処理して、得たえき芽から生育させた苗
のなかに、それぞれ５本ずつの４倍体（2n＝44）を確認
した。さらに４倍体は、茎頂を用いても染色体数を確認
した。
及び20日間浸漬処理して、得たえき芽から生育させた苗
のなかに、それぞれ５本ずつの４倍体（2n＝44）を確認
した。さらに４倍体は、茎頂を用いても染色体数を確認
した。
他の処理区では、外部形態などの異常は見られたが染色
体数は、いずれも２倍体（2n＝22）であった。
体数は、いずれも２倍体（2n＝22）であった。
得られた４倍体は、その後培養器より取り出し、順化を
へて、屋外栽培に移した。２倍体に比較して、草丈が高
く、葉面積も大きくなる傾向を示した。
へて、屋外栽培に移した。２倍体に比較して、草丈が高
く、葉面積も大きくなる傾向を示した。
さらに、葉に含有される甘味成分についても比較した。
４倍体及び従来品（２倍体）とも10月に葉を収穫して乾
燥させた。次いで溶媒（アセトニトリル82％）で甘味成
分を抽出して高速液体クロマトグラフィーでステビオサ
イドとレバウディオサイドＡの含有率を求めた。
４倍体及び従来品（２倍体）とも10月に葉を収穫して乾
燥させた。次いで溶媒（アセトニトリル82％）で甘味成
分を抽出して高速液体クロマトグラフィーでステビオサ
イドとレバウディオサイドＡの含有率を求めた。
測定方法はカラムとして、Shodex RS pak DC-613（6mm
×150mm）を用い、溶離液82％アセトニトリル、流速1ml
/min、溶離温度45℃、紫外検出214nmの条件で行い、二
点検量線法により定量した。
×150mm）を用い、溶離液82％アセトニトリル、流速1ml
/min、溶離温度45℃、紫外検出214nmの条件で行い、二
点検量線法により定量した。
その結果、４倍体はステビオサイド10.3％、レバウディ
オサイドA10.3％の合計20.6％であった。２倍体の平均
含有率は、ステビオサイド7.6％、レバウディオサイドA
1.9％であった。
オサイドA10.3％の合計20.6％であった。２倍体の平均
含有率は、ステビオサイド7.6％、レバウディオサイドA
1.9％であった。
本発明の方法によれば、取り扱いが容易でかつ安全なサ
イトカイニンを使用することにより、甘味成分含量の多
いステビア人為４倍体を短期間に効率良く、しかも後の
生育に悪影響を与えることなく作出することができる。
さらに、他の倍数体を用いた育種にも応用できその効果
は大である。
イトカイニンを使用することにより、甘味成分含量の多
いステビア人為４倍体を短期間に効率良く、しかも後の
生育に悪影響を与えることなく作出することができる。
さらに、他の倍数体を用いた育種にも応用できその効果
は大である。
Claims (5)
- 【請求項１】ステビア無菌苗をサイトカイニンで処理す
ることを特徴とするステビア人為４倍体の作出方法。 - 【請求項２】ステビア無菌苗をサイトカイニンを含む溶
液で処理することを特徴とするステビア人為４倍体の作
出方法。 - 【請求項３】サイトカイニンがカイネチン、６−ベンジ
ルアミノプテリン、ゼアチン、２−イソペンテニルアデ
ニンである請求項１又は請求項２記載のステビア人為４
倍体の作出方法。 - 【請求項４】溶液が無機塩及び炭素源を含む液体人工培
地である請求項２又は請求項３記載のステビア人為４倍
体の作出方法。 - 【請求項５】ステビア無菌苗をサイトカイニンを含む溶
液に浸せき処理し、新たに発生するえき芽を固定培地に
移植するステビア人為４倍体の作出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1064120A JPH0695866B2 (ja) | 1989-03-16 | 1989-03-16 | 植物成長ホルモンによるステビア４倍体の作出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1064120A JPH0695866B2 (ja) | 1989-03-16 | 1989-03-16 | 植物成長ホルモンによるステビア４倍体の作出方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02242623A JPH02242623A (ja) | 1990-09-27 |
| JPH0695866B2 true JPH0695866B2 (ja) | 1994-11-30 |
Family
ID=13248890
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1064120A Expired - Fee Related JPH0695866B2 (ja) | 1989-03-16 | 1989-03-16 | 植物成長ホルモンによるステビア４倍体の作出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0695866B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4741722B2 (ja) * | 2000-10-11 | 2011-08-10 | 耕三 丹羽 | 植栽方法 |
| CN102893860A (zh) * | 2011-10-19 | 2013-01-30 | 崔广荣 | 一种甜叶菊多倍体离体诱导技术 |
| CN102613085A (zh) * | 2012-04-09 | 2012-08-01 | 南京农业大学 | 甜叶菊同源四倍体植株的培育方法 |
| CN115067209B (zh) * | 2022-07-21 | 2023-06-27 | 北京市农林科学院 | 一种利用玉米素提高玉米单倍体加倍效率的方法 |
-
1989
- 1989-03-16 JP JP1064120A patent/JPH0695866B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02242623A (ja) | 1990-09-27 |
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| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |