JPH0699313B2 - マクロファージ及び好中球活性化剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は卵白を含有するマクロファージ及び好中球活性
化剤に関する。更に詳しくは、生体の免疫能力の低下に
基づくと考えられる各種症患、各種病原微生物感染症の
予防・治療に有効な、卵白を含有する免疫増強・感染防
御剤に関する。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕

近年、抗菌性物質の開発が多くなされているにもかかわ
らず、生体側の宿主防御機能の低下が原因と考えられる
日和見感染症や癌などの症病が重要な課題となってい
る。

生体の免疫能力の低下に基づくと考えられる各種症患、
例えば癌、各種病原微生物感染症などに対する免疫増強
剤あるいは癌の免疫療法剤は種々あるが、いずれも発熱
などの重篤な副作用が多く、決定的な免疫療法がないの
が現状である。

また、健康に対する人間の願望が高まり、個々の症病予
防を特異目的とした食品、即ち、新しい概念に基づく食
品の栄養・嗜好の機能に加え、生体調節機能を有する
“機能性食品”の研究が進められ、食品産業活性化の大
きな駆動力となりつつあり、今後の課題でもある。

一方、畜水産業界においても、国民の食生活における健
康志向に対応し、消費量が増大している中、家畜、家禽
又は養殖魚は集約化され、大規模経営が行われ、増殖或
いは過密飼育によって市場への需要に対応している。

しかしながら家畜などの過密飼育によるストレスや幼若
期における免疫不全による日和見感染症が多発してい
る。また、養殖魚の感染症の被害も増大傾向にある。

このような現状の中で免疫不全感染防御のために近年、
抗生物質の使用が多くなっている。しかし、大量の抗生
物質投与により畜水産物への残留の問題また耐性菌の増
加などが大きな社会問題となっている。

これに伴い、畜水産物の品質確保のための食鳥検査制度
など法的規制が厳しくなり、抗生物質の投与は適当でな
いとの気運が高まりつつある。このため抗生物質に代わ
る免疫不全・感染防御剤を有する予防方法の開発が望ま
れている。

免疫機構は異種の抗原を識別し、処理排除するという生
体に備わった重要な機構であり、微生物などの病原性物
質の生体内への侵入あるいは癌細胞などの生体内で生じ
た異物に対して防御機構として働いている。

従って、宿主が本来持っている宿主防御能を増強する安
全性の高い免疫増強剤が期待されている。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは免疫増強・感染防御剤について鋭意検討し
た結果、卵白がマクロファージ及び好中球活性化作用を
有することを見出し、本発明を完成した。

即ち、本発明は、卵白を含有することを特徴とするマク
ロファージ及び好中球活性化剤を提供するものである。

以下、本発明を詳細に説明する。

本発明者らは生体防御系の増強を目的として感染防御に
主要な役割を果たすマクロファージの活性化を指環とし
て、生薬、食品など天然物質の生理活性成分につき、探
索した。

即ち、マクロファージには多様な機能がある（マクロフ
ァージの機能と機能測定法；日本細菌学会教育会編，薬
根出版,1985）。その基本は異物・老廃組織・微生物を
貧食し、処理することにあるが、細胞増強因子などのモ
ノカインを産出し、組織の修復を図り、自己及び好中
球、リンパ球の細胞分裂の補助やそれら細胞を活性化さ
せる働きを有する。

具体的には次の１）〜９）に示すような作用を有する。

１）異物・老廃物の処理 ２）貧食・殺菌作用・ウィルスの不活化 ３）炎症反応惹起 ４）抗腫瘍作用 ５）リンパ球機能の補助 ６）免疫抑制 ７）生体防御物質の産出 ８）組織修復 ９）脂質代謝への関与 本発明者らは卵白を用いてマウス、モルモット及び豚の
マクロファージ活性化作用、並びに豚好中球の活性化作
用を検討したところ、各種動物由来のマクロファージを
活性化することが判明した。また、卵白を経口投与さ
せ、マウスでの細菌感染に対する感染防御効果を検討し
たところ、大腸菌、黄色ブドウ球菌等、各種細菌感染に
対して感染抵抗性を著しく増強させることが明らかとな
った。

従って卵白がマクロファージ及び好中球活性化作用を有
し、免疫増強・感染防御効果を有することを見出した。

本発明の作用機構は必ずしも明らかではないが、卵白の
摂取により消化管内で分解され、何らかの免疫増強物質
が生産されることによるものであると推定され、この免
疫賦活によって癌をはじめ広く細菌感染症、その他免疫
機能不全に基づく疾患（自己免疫疾患）に有用であると
推定される。

本発明で使用される卵白としては、生卵白、全卵末、卵
白末あるいは消化酵素で処理した画分や卵白を構成する
成分が入っているものであれば、特に制限はなく使用可
能である。

本発明のマクロファージ及び好中球活性化剤を投与する
対象としては、特に制限はない。例えば、食品の栄養・
嗜考機能に加えて個々の疾病の予防を特異目的としてい
る生体調節機能を有する食品、いわゆる“機能性食品”
として用いることができる。

更に、抗生剤にみられる耐性菌の影響がなく、残留性の
問題もなく、安全かつ生体防御調節機能を有する飼料、
即ち、“機能性飼料”として、豚、鶏、牛、馬、羊など
の家畜や魚類、ペット（犬、猫）などに使用することも
できる。

卵白の投与量は、卵白末の場合、体重1kg当たり、１日1
mg以上で、好ましくは10mg〜2g程度である。

投与は通常経口的に摂取される。投与期間は各種病原微
生物感染症や癌などの疾病の予防・治療の時期に使用す
る。

本発明を実施する際は卵白又はその画分・成分を通常の
製剤化方法を用いて経口用の錠剤・カプセル剤・散剤・
顆粒剤・シロップ剤などとすることもできる。

即ち、経口投与用固形製剤を調製する場合には、主薬に
賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を添加し、常法によ
り錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤とする。

また、経口液状製剤を調製する場合は、主薬に緩衝剤、
矯味剤、安定剤を増加して常法によりシロップ剤等とす
る。また、卵白又はその画分・成分と抗菌剤又は抗悪性
腫瘍剤とを併用する際はそれぞれ別個に投与してもよい
し、必要によりこれらを合剤としてもよい。

また、水、牛乳、人工乳、健康食品など機能性食品など
の食物又は飼料に添加して投与してもよい。飼料の場合
は、飼料用原料やプレミックス素材としても利用でき
る。

〔発明の効果〕

以下、本発明の効果を実験例により説明する。

実験例１ 鶏卵卵白のIn vitro添加によるマウス、モルモット及び
豚のマクロファージ活性化作用、並びに豚好中球の活性
化作用 マウスマクロファージの調整法： マウスをエーテル麻酔し、頚動脈切断による脱血後、冷
ハンクス液を5ml腹腔内に注入する。30秒間腹壁をマッ
サージしたのち、常在マクロファージを含むハンクス液
を回収した。遠心洗浄し15％マウス血清加MEM培地にて
2.5×10⁶/mlに調整した。

モルモットマクロファージ調整法： ４日前に１％カゼインNa生食水10mlを腹腔内に注射した
モルモット（ハートレイ系雌：体重300g）をエーテル麻
酔し、頚動脈切断による脱血後、冷ハンクス液を50ml腹
腔内に注入する。30秒間腹壁をマッサージしたのち腹腔
浸出細胞を含むハンクス液を回収する。遠心洗浄し、15
％モルモット血清加MEM培地にて2.5×10⁶/mlに調整し
た。

豚マクロファージ（末梢血単球）及び好中球の調整法： 豚の腋下大静脈より末梢血10ml（ヘパリン25単位/ml含
有）を採血し６％（W/V）デキストラン生食水（分子量6
6900）を3ml混和し37℃30分間放置して白血球層を分離
する。これをフィコールパック10mlの上層に静かに注ぎ
1900rpm,4分間遠心して単球及び好中球分画を得た。単
球分画は、非付着細胞（リンパ球）を除き2.5×10⁶mlに
調整してマクロファージとした。好中球分画は0.85％塩
化アンモニウム液で赤血球を破壊し遠心洗浄して好中球
を採取した。15％豚血清加MEM培地にて2.5×10⁶/mlに調
整した。

マウス、モルモット及び豚マクロファージの活性化測
定： マクロファージが活性化するとグルコースが代謝亢進す
る。それ故、培養液中のグルコースの消費を測定するこ
とによってマクロファージの活性化を測定できる。

卵白末を100,10,1μg/mlの割合でマクロファージ培養液
にin vitroで添加し５％CO₂下、37℃,48時間インキュベ
ーション後、培養液中のグルコース含量をグルコース測
定試薬（グルコース−Ｂ−テストワコー：和光純薬）を
用いて測定した。

すなわち培養上清20μを小試験管にとりグルコース測
定用酵素液1.5mlを加え、37℃,30分間インキュベート
後、505nmで比色した。マクロファージの活性化index
（MAI）は次の式で計算した。

結果を表１に示す。

表１から明らかな如く、卵白末を100,10,1μg/mlの割合
でマウス、モルモット及び豚マクロファージに添加する
とグルコースの消費が著しく亢進し各種動物由来マクロ
ファージを活性化させた。

豚好中球の活性化測定法： ラブテックチャンバー （４チャンバー）に豚好中球
（2.5×10⁶/ml）を0.5ml入れ卵白末を100μg/mlの割合
で添加し５％CO₂下、37℃,3時間培養した。反応終了
後、オプソニン化したラテックス粒子（0.81μｍ）を0.
05ml添加し45分間貧食させた。上清を捨てよく洗浄しメ
タノール固定しギムザ染色した。鏡検にて貧食率が亢進
しているかどうか検討した。

結果を表２に示す。

表２から明らかな如く、卵白末を100μg/mlの割合で豚
好中球に添加した結果、好中球のラテックス粒子に対す
る貧食能を著しく亢進させた。

上記のように卵白は生体防御機構において重要な役割を
担うマクロファージ及び好中球を活性化させ免疫増強効
果を有することがここに新しく発見された。

実験例２ 鶏卵卵白の経口投与によるマウスでの細菌感染に対する
感染防御効果 In vivoでマウスに卵白を経口投与し各種細菌感染に対
する感染防御効果を検討した。

slc:ICR系雄性マウス（５〜６週令、体重25〜33g）に卵
白又は卵白画分或いは成分の表３に示す量を１日３回経
口投与し、24時間後に臨床由来大腸菌（Escherichia co
li）を5.0×10⁷/マウスの菌量で静脈内接種し感染後７
日目の生存数より生残率を求めた。また比較として大豆
蛋白及びスキムミルクを経口投与した場合についても同
様に生残率を求めた。結果を表３に示す。

また臨床由来大腸菌（Escherichia coli）に代えて臨床
由来黄色ブドウ球菌（Staphylococcusaureus）を3.8×1
0⁷/マウスの菌量で静脈内に接種し感染後の延命効果及
び14日後までの生残率を求めた。結果を図１に示す。

表３及び図１の結果より卵白及び卵白画分または成分は
各種細菌感染に対して感染抵抗性を著しく増強すること
が明らかとなった。

また、抗生物質オキシテトラサイクリン（OTC）との併
用実験を行った。即ち、卵白を投与して一日後に大腸菌
を感染させ、感染と同時に抗生物質オキシテトラサイク
リンを経口投与して併用効果を検討した。結果を図２に
示す。

図２に示した如く、卵白と抗生物質との併用は、抗生物
質の少量でも著しい生残率の上昇を示し、抗生物質の量
を減らすことができ、かつ相乗効果が認められた。

このような例は他になく新しい発見である。

実験例３ 鶏卵卵白の経口投与によるマクロファージの活性化作用 slc:ICR系雄性マウス（５〜６週令、体重25〜33g）に卵
白末の表４に示す量を１日３回経口投与し、24時間後に
カーボンクリアランステストを行いマクロファージの活
性化の有無を見た。

カーボンクリアランステストはコロイドカーボンの血中
からのクリアランスを指標として、肝、脾のマクロファ
ージ機能を測定するものである。カーボン（ペリカン社
製）を160mg/kgの割合で尾静脈に注入した。注入後3,6,
9,12,15分後に後眼窩静脈叢より２μを採血し小試験
管中で2mlの0.1％炭酸ナトリウムと混合した。これを66
0nmの波長で吸光度を測定した。横軸に時間（分）を、
縦軸に吸光度の対数値をとり３分ごとの値をプロットす
る。この直線の勾配（貧食指数Ｋ）を求め肝、脾の重量
を補正して訂正貧食指数（α）を算出した。

結果を表４に示す。

表４に示すように卵白投与群はいずれも貧食指数Ｋ及び
訂正貧食指数α値が対照に比べ大きくなり、卵白の経口
投与によってマウスマクロファージの貧食能が亢進し活
性化されていることが明らかとなった。

実験例４ 鶏卵卵白の経口投与による豚の末梢血好中球の活性化作
用 卵白末500mg/kgを豚（体重約20kg）４頭に飼料添加して
１日後の末梢血好中球のラテックス粒子に対する貧食能
が亢進するかどうか検討した。

末梢血好中球の分離はフィコールパック比重遠心法によ
り分離し、ラテックス粒子に対する貧食能は実験例１で
述べた方法により実施した。

結果を表５に示す。

表５に示すように豚に卵白を飼料添加して摂取させるこ
とにより末梢血好中球の貧食能が著しく亢進し活性化し
ていることが明らかとなった。

以上の実験例の結果より、鶏卵卵白の免疫増強・感染防
御効果が明らかとなり生体の免疫能力の低下に基づくと
考えられる各種疾患や各種病原微生物感染症（細菌、マ
イコプラズマ、ウイルス、真菌、原虫など）、癌などの
予防、治療剤、まは機能性食品及び機能性飼料（飼料添
加）素材として期待される。

【図面の簡単な説明】

図１は卵白の経口投与によるマウスでの黄色ブドウ球菌
に対する感染防御効果を示す図であり、図２は卵白の経
口投与によるマウスでの大腸菌に対する抗生物質オキシ
テトラサイクリンとの併用効果を示す図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】卵白を含有することを特徴とするマクロフ
   ァージ及び好中球活性化剤。