JPH07119233B2 - 生理活性物質プロベスチンの合成法 - Google Patents
生理活性物質プロベスチンの合成法Info
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- JPH07119233B2 JPH07119233B2 JP1237172A JP23717289A JPH07119233B2 JP H07119233 B2 JPH07119233 B2 JP H07119233B2 JP 1237172 A JP1237172 A JP 1237172A JP 23717289 A JP23717289 A JP 23717289A JP H07119233 B2 JPH07119233 B2 JP H07119233B2
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- amino
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、特開昭64−85995号公報に示されるアミノペ
プチダーゼＭの阻害活性を有する生理活性物質プロベス
チン（Probestin）の合成的製造法に関する。
プチダーゼＭの阻害活性を有する生理活性物質プロベス
チン（Probestin）の合成的製造法に関する。
（従来の技術及び本発明が解決しようとする課題） 生理活性物質プロベスチン（Probestin）は非天然型ア
ミノ酸を含むテトラペプチドであり次式 を有する｛（2S,3R）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−
４−フェニルブタノイル｝ロイシルプロリルプロリンに
相当し、この化合物の構成アミノ酸の内、ロイシン及び
プロリンは天然型（Ｌ型）である。プロベスチンはアミ
ノペプチダーゼＭを阻害する活性を有する。アミノペプ
チダーゼＭを阻害する酵素阻害剤はエンケファリンなど
の生理活性物質の代謝を押える働きが期持されている
（例えば「Peptides」Vol.8,pp.523〜532（1986）参
照）。プロベスチンのアミノペプチダーゼＭ阻害作用は
特異的であり、既知のアミノペプチダーゼＭ阻害物質で
あるアクチノニン（Actinonin）より強い阻害活性を有
する。一方、特開昭64−85995号公報には、微生物によ
るプロベスチンの製造方法が記載されているが、この方
法では一度に大量の高純度のプロベスチンを得ることは
難しく、工業的にも利用できるプロベスチンの製造法が
望まれている。
ミノ酸を含むテトラペプチドであり次式 を有する｛（2S,3R）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−
４−フェニルブタノイル｝ロイシルプロリルプロリンに
相当し、この化合物の構成アミノ酸の内、ロイシン及び
プロリンは天然型（Ｌ型）である。プロベスチンはアミ
ノペプチダーゼＭを阻害する活性を有する。アミノペプ
チダーゼＭを阻害する酵素阻害剤はエンケファリンなど
の生理活性物質の代謝を押える働きが期持されている
（例えば「Peptides」Vol.8,pp.523〜532（1986）参
照）。プロベスチンのアミノペプチダーゼＭ阻害作用は
特異的であり、既知のアミノペプチダーゼＭ阻害物質で
あるアクチノニン（Actinonin）より強い阻害活性を有
する。一方、特開昭64−85995号公報には、微生物によ
るプロベスチンの製造方法が記載されているが、この方
法では一度に大量の高純度のプロベスチンを得ることは
難しく、工業的にも利用できるプロベスチンの製造法が
望まれている。
（課題を解決する為の手段） 本発明者らは上記の問題点を解決するため、有機合成に
よるプロベスチンの製造法を検討した結果、ベスタチン
（Bestatin）を原料物質として用いて、ベスタチンにＬ
−プロリンを２分子順次縮合させる短いステップで、収
率よくプロベスチンを製造する事に成功した。
よるプロベスチンの製造法を検討した結果、ベスタチン
（Bestatin）を原料物質として用いて、ベスタチンにＬ
−プロリンを２分子順次縮合させる短いステップで、収
率よくプロベスチンを製造する事に成功した。
なお、ベスタチンは次式 を有する（2S,3R）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４
−フェニルブタノイルロイシンに相当する既知物質であ
り、培養法（特開昭52−116435号）および合成法（特開
昭52−136118号）によるベスタチンの製造法が確立され
ている。
−フェニルブタノイルロイシンに相当する既知物質であ
り、培養法（特開昭52−116435号）および合成法（特開
昭52−136118号）によるベスタチンの製造法が確立され
ている。
すなわち、本発明は、次の一般式 〔式中、R1はアミノ保護基である〕で示されるベスタチ
ンのアミノ保護体又はこれのカルボキシル基における活
性化誘導体に次式 〔式中、R2はカルボキシル保護基である〕で示されるプ
ロリンのカルボキシル保護体を縮合させて次の一般式 〔式中、R1及びR2は前記の意味を有する〕で示される化
合物を生成し、この式（IV）の化合物のカルボキシル保
護基(R2)を常法で脱離して次式 〔式中、R1及びR2は前記の意味を有する〕で示される化
合物を生成し、式（IV′）の化合物又はこれのカルボキ
シル基における活性化誘導体に式（III）で示されるプ
ロリンのカルボキシル保護体を縮合させて次の一般式 〔式中、R1及びR2は前記の意味を有する〕で示される化
合物を生成し、さらに式（Ｖ）の化合物からアミノ保護
基(R1)及びカルボキシル保護基(R2)を常法で脱離するこ
とを特徴とする、次式 を有するプロベスチンの製造法を要旨とするものであ
る。
ンのアミノ保護体又はこれのカルボキシル基における活
性化誘導体に次式 〔式中、R2はカルボキシル保護基である〕で示されるプ
ロリンのカルボキシル保護体を縮合させて次の一般式 〔式中、R1及びR2は前記の意味を有する〕で示される化
合物を生成し、この式（IV）の化合物のカルボキシル保
護基(R2)を常法で脱離して次式 〔式中、R1及びR2は前記の意味を有する〕で示される化
合物を生成し、式（IV′）の化合物又はこれのカルボキ
シル基における活性化誘導体に式（III）で示されるプ
ロリンのカルボキシル保護体を縮合させて次の一般式 〔式中、R1及びR2は前記の意味を有する〕で示される化
合物を生成し、さらに式（Ｖ）の化合物からアミノ保護
基(R1)及びカルボキシル保護基(R2)を常法で脱離するこ
とを特徴とする、次式 を有するプロベスチンの製造法を要旨とするものであ
る。
本発明の方法で出発化合物として用いられるベスタチン
のアミノ保護体（II）は、原料のベスタチンに対してペ
プチド合成に常用される既知のアミノ保護基導入試薬を
反応させることにより常法で調製される。例えば、特開
昭52−136118号公報に記載されるアミノ保護法を使用で
きる。ベスタチンのアミノ保護体（II）におけるアミノ
保護基(R1)は、一般にはペプチド合成に常用されるもの
であることができ、接触還元により脱離できるが加水分
解で脱離しないアミノ保護基であるのが良く、特にアラ
ルコキシカルボニル基、例えばベンジルオキシカルボニ
ル基、若しくはベンジル基であるのが好ましい。縮合さ
せるプロリンのカルボキシル保護体（III）におけるカ
ルボキシル保護基(R2)は、一般には、ペプチド合成に常
用されるものであることができ、特に、加水分解により
脱離し易いエステル形成基、例えばアルキル基又は置換
されたアルキル基、好ましくはジフェニルメチル基又は
ベンジルオキシメチル基、若しくはアリール基であるの
がよい。
のアミノ保護体（II）は、原料のベスタチンに対してペ
プチド合成に常用される既知のアミノ保護基導入試薬を
反応させることにより常法で調製される。例えば、特開
昭52−136118号公報に記載されるアミノ保護法を使用で
きる。ベスタチンのアミノ保護体（II）におけるアミノ
保護基(R1)は、一般にはペプチド合成に常用されるもの
であることができ、接触還元により脱離できるが加水分
解で脱離しないアミノ保護基であるのが良く、特にアラ
ルコキシカルボニル基、例えばベンジルオキシカルボニ
ル基、若しくはベンジル基であるのが好ましい。縮合さ
せるプロリンのカルボキシル保護体（III）におけるカ
ルボキシル保護基(R2)は、一般には、ペプチド合成に常
用されるものであることができ、特に、加水分解により
脱離し易いエステル形成基、例えばアルキル基又は置換
されたアルキル基、好ましくはジフェニルメチル基又は
ベンジルオキシメチル基、若しくはアリール基であるの
がよい。
本発明の方法における式（II）のベスタチンＮ−保護体
と式（III）のプロリンＣ末端−保護体との縮合は、有
機溶媒中でペプチド合成に常用される活性エステル化剤
と縮合剤の共存下に０℃〜30℃で0.5時間〜数時間行な
うのが都合よい。有機溶媒としてはアセトニトリル、TH
F、DMFなどの非プロトン性溶媒が使用できる。活性エス
テル化剤としてはＮ−ヒドロキシサクシミド、ヒドロキ
シベンゾトリアゾール等、縮合剤としては１−エチル−
３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩
酸塩（WSCDと略記される）、DCC等の一般的なペプチド
合成用の試薬が用いられる。式（IV′）の化合物と式
（III）のプロリン化合物との縮合も同様に、有機溶媒
中で活性エステル化剤と縮合剤の共存下に０℃〜30℃で
0.5時間〜数時間おこなわれる。有機溶媒としてはアセ
トニトリル、THF、DMFなどの非プロトン性溶媒が使用で
きる。ここでも、活性エステル化剤としてはＮ−ヒドロ
キシサクシミド、ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOB
t）等、縮合剤としてはWSCD、DCC等の一般的なペプチド
合成用の試薬が用いられる。
と式（III）のプロリンＣ末端−保護体との縮合は、有
機溶媒中でペプチド合成に常用される活性エステル化剤
と縮合剤の共存下に０℃〜30℃で0.5時間〜数時間行な
うのが都合よい。有機溶媒としてはアセトニトリル、TH
F、DMFなどの非プロトン性溶媒が使用できる。活性エス
テル化剤としてはＮ−ヒドロキシサクシミド、ヒドロキ
シベンゾトリアゾール等、縮合剤としては１−エチル−
３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩
酸塩（WSCDと略記される）、DCC等の一般的なペプチド
合成用の試薬が用いられる。式（IV′）の化合物と式
（III）のプロリン化合物との縮合も同様に、有機溶媒
中で活性エステル化剤と縮合剤の共存下に０℃〜30℃で
0.5時間〜数時間おこなわれる。有機溶媒としてはアセ
トニトリル、THF、DMFなどの非プロトン性溶媒が使用で
きる。ここでも、活性エステル化剤としてはＮ−ヒドロ
キシサクシミド、ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOB
t）等、縮合剤としてはWSCD、DCC等の一般的なペプチド
合成用の試薬が用いられる。
本発明の方法における第１段の縮合反応で生成された式
（IV）の化合物からカルボキシル保護基(R2)を脱離する
には、酸の存在下で式（IV）の化合物を加水分解反応に
付する。この酸としては、トリフルオロ酢酸、塩酸、酢
酸等の酸が使用できる。
（IV）の化合物からカルボキシル保護基(R2)を脱離する
には、酸の存在下で式（IV）の化合物を加水分解反応に
付する。この酸としては、トリフルオロ酢酸、塩酸、酢
酸等の酸が使用できる。
本発明の方法における第２段の縮合反応で生成された式
（Ｖ）の化合物から脱保護するには、カルボキシル保護
基(R2)を加水分解により脱離するために先づトリフルオ
ロ酢酸、塩酸、酢酸等の酸により処理した後に、アミノ
保護基(R1)がアラルコキシカルボニル基である場合に
は、パラジウムやパラジウム炭素等の触媒の共存下にメ
タノール、エタノール、酢酸エチル、ジオキサン等の溶
媒中で接触還元するか、パラジウムやパラジウム炭素等
の触媒の共存下にメタノール、エタノール、酢酸エチ
ル、ジオキサン等の溶媒中で接触還元してアミノ保護基
(R1)を脱離させる方法を用いることができる。式（IV）
の化合物からの脱保護は、前記と逆の順序で先づアミノ
保護基(R1)を脱離し、その後にカルボキシル保護基(R2)
を脱離することもできる。
（Ｖ）の化合物から脱保護するには、カルボキシル保護
基(R2)を加水分解により脱離するために先づトリフルオ
ロ酢酸、塩酸、酢酸等の酸により処理した後に、アミノ
保護基(R1)がアラルコキシカルボニル基である場合に
は、パラジウムやパラジウム炭素等の触媒の共存下にメ
タノール、エタノール、酢酸エチル、ジオキサン等の溶
媒中で接触還元するか、パラジウムやパラジウム炭素等
の触媒の共存下にメタノール、エタノール、酢酸エチ
ル、ジオキサン等の溶媒中で接触還元してアミノ保護基
(R1)を脱離させる方法を用いることができる。式（IV）
の化合物からの脱保護は、前記と逆の順序で先づアミノ
保護基(R1)を脱離し、その後にカルボキシル保護基(R2)
を脱離することもできる。
次に、出発化合物の調製を示す参考合成例、並びに式
〔Ｉ〕の化合物の製造を示す実施例により本発明を更に
詳しく説明する。
〔Ｉ〕の化合物の製造を示す実施例により本発明を更に
詳しく説明する。
参考例１ ベスタチン2042mg（6.62ミリモル）を水120mlおよびジ
オキサン20mlに溶解し、炭酸水素ナトリウム723mgを加
えた。ベンジルオキシカルボニルクロリド0.75gを含む
エーテル溶液20mlを加え、１時間撹拌した。更に、炭酸
水素ナトリウム723mg、ベンジルオキシカルボニルクロ
リド0.75gのエーテル溶液20mlを加え、終夜撹拌した。
水層を分取し、6NHClにて酸性にした後、エーテルで抽
出した。溶媒を硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮乾固し、
酢酸エチルより再結晶して、Ｎ−ベンジルオキシカルボ
ニルベスタチンの2560mgを得た。収率88％。m.p.212℃ TLC:Rf＝0.3（クロロホルム−メタノール＝10:1） NMR（DMSO−d6）；δ0.72〜0.97（6H,m）、1.37〜1.87
（3H,m）、2.59〜2.92（2H,t,J＝8Hz）、3.82〜4.47（3
H,m）、4.92（2H,d,J＝5Hz）、6.73（1H,d,J＝8Hz）、
7.19（5H,s）、7.27（5H,s）、7.68（1H,d,J＝8Hz） 実施例１ （ａ）Ｎ−ベンジルオキシカルボニルベスタチン1024mg
（2.32ミリモル）をアセトニトリル230mlに溶解し、氷
冷撹拌下にHOBt345mg、WSCD490mg及びプロリン・ジフェ
ニルメチルエステル652mgを加え、４時間反応させた。
反応溶液を濃縮し、残渣に酢酸エチルを加え、有機層を
水で洗浄したのち硫酸マグネシウムで乾燥し、シリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーにて精製すると、油状物と
してＮ−ベンジルオキシカルボニルベスタチニルプロリ
ンのジフェニルメチルエステルの1280mgを得た。収率78
％。
オキサン20mlに溶解し、炭酸水素ナトリウム723mgを加
えた。ベンジルオキシカルボニルクロリド0.75gを含む
エーテル溶液20mlを加え、１時間撹拌した。更に、炭酸
水素ナトリウム723mg、ベンジルオキシカルボニルクロ
リド0.75gのエーテル溶液20mlを加え、終夜撹拌した。
水層を分取し、6NHClにて酸性にした後、エーテルで抽
出した。溶媒を硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮乾固し、
酢酸エチルより再結晶して、Ｎ−ベンジルオキシカルボ
ニルベスタチンの2560mgを得た。収率88％。m.p.212℃ TLC:Rf＝0.3（クロロホルム−メタノール＝10:1） NMR（DMSO−d6）；δ0.72〜0.97（6H,m）、1.37〜1.87
（3H,m）、2.59〜2.92（2H,t,J＝8Hz）、3.82〜4.47（3
H,m）、4.92（2H,d,J＝5Hz）、6.73（1H,d,J＝8Hz）、
7.19（5H,s）、7.27（5H,s）、7.68（1H,d,J＝8Hz） 実施例１ （ａ）Ｎ−ベンジルオキシカルボニルベスタチン1024mg
（2.32ミリモル）をアセトニトリル230mlに溶解し、氷
冷撹拌下にHOBt345mg、WSCD490mg及びプロリン・ジフェ
ニルメチルエステル652mgを加え、４時間反応させた。
反応溶液を濃縮し、残渣に酢酸エチルを加え、有機層を
水で洗浄したのち硫酸マグネシウムで乾燥し、シリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーにて精製すると、油状物と
してＮ−ベンジルオキシカルボニルベスタチニルプロリ
ンのジフェニルメチルエステルの1280mgを得た。収率78
％。
この化合物は、前出の式（IV）においてR1がベンジオキ
シカルボニル基でR2がジフェニルメチル基である場合の
化合物に相当する。
シカルボニル基でR2がジフェニルメチル基である場合の
化合物に相当する。
TLC:Rf＝0.3（クロロホルム−酢酸エチル＝2:1） NMR(CDCl3)：δ0.75〜0.95（6H,m）、1.35〜1.70（3H,
m）、1.75〜2.25（4H,m）、2.78〜3.00（2H,m）、3.40
〜3.95（2H,m）、4.00〜4.28（2H,m）、4.97（2H,s）、
6.79（1H,s）、7.13（5H,s）、7.21（15H,s） MS（FD）：M+＋１＝706 （ｂ）前項（ａ）で得られたＮ−ベンジルオキシカルボ
ニルベスタチニルプロリン・ジフェニルメチルエステル
1180mg（1.674ミリモル）を、氷冷下にトリフルオロ酢
酸11ml、及びアニソール1mlを加え10分間撹拌し、イソ
プロピルエーテル−ヘキサン（2:1）の溶液50mlを加え
沈殿物を濾取すると、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルベ
スタチニルプロリンの840mgを得た。収率98％。
m）、1.75〜2.25（4H,m）、2.78〜3.00（2H,m）、3.40
〜3.95（2H,m）、4.00〜4.28（2H,m）、4.97（2H,s）、
6.79（1H,s）、7.13（5H,s）、7.21（15H,s） MS（FD）：M+＋１＝706 （ｂ）前項（ａ）で得られたＮ−ベンジルオキシカルボ
ニルベスタチニルプロリン・ジフェニルメチルエステル
1180mg（1.674ミリモル）を、氷冷下にトリフルオロ酢
酸11ml、及びアニソール1mlを加え10分間撹拌し、イソ
プロピルエーテル−ヘキサン（2:1）の溶液50mlを加え
沈殿物を濾取すると、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルベ
スタチニルプロリンの840mgを得た。収率98％。
この化合物は前出の式（IV′）でR1がベンジルオキシカ
ルボニル基である場合に相当する。
ルボニル基である場合に相当する。
m.p.96〜99℃ TLC:Rf＝0.2（クロロホルム−メタノール＝3:1） NMR(CDCl3)：δ0.71〜1.20（6H,m）、1.36〜1.76（3H,
m）、1.81〜2.36（4H,m）、2.61〜3.06（2H,m）、3.26
〜3.96（2H,m）、4.00〜4.81（4H,m）、4.92（2H,s）、
7.16（5H,s）、7.31（5H,s） MS（FD）：M+＋１＝540 （ｃ）前項（ｂ）で得られたＮ−ベンジルオキシカルボ
ニルベスタチニルプロリン740mgを、実施例１と同様に
プロリン・ジフェニルメチルエステルと縮合してＮ−ベ
ンジルオキシカルボニルベスタチニルプロリルプロリン
・ジフェニルメチルエステルの830mgを油状物として得
た。収率76％。
m）、1.81〜2.36（4H,m）、2.61〜3.06（2H,m）、3.26
〜3.96（2H,m）、4.00〜4.81（4H,m）、4.92（2H,s）、
7.16（5H,s）、7.31（5H,s） MS（FD）：M+＋１＝540 （ｃ）前項（ｂ）で得られたＮ−ベンジルオキシカルボ
ニルベスタチニルプロリン740mgを、実施例１と同様に
プロリン・ジフェニルメチルエステルと縮合してＮ−ベ
ンジルオキシカルボニルベスタチニルプロリルプロリン
・ジフェニルメチルエステルの830mgを油状物として得
た。収率76％。
この化合物は前出の式（Ｖ）においてR1がベンジルオキ
シカルボニル基でR2がジフェニルメチル基である場合の
化合物に相当する。
シカルボニル基でR2がジフェニルメチル基である場合の
化合物に相当する。
TLC:Rf＝0.3（酢酸エチル） NMR(CDCl3)：δ0.75〜1.08（6H,m）、1.40〜1.65（3H,
m）、1.70〜2.20（8H,m）、2.82〜3.30（2H,m）、3.43
〜3.85（4H,m）、4.05〜4.80（3H,m）、4.97（2H,s）、
6.79（1H,s）、7.15（5H,s）、7.23（15H,s） MS（FD）：M+＋１＝803 （ｄ）前項（ｃ）で得られたＮ−ベンジルオキシカルボ
ニルプロリルプロリン・ジフェニルメチルエステル730m
g（0.911ミリモル）を、前項（ｂ）と同様にしてジフェ
ニルメチル基を脱離させる処理にかけると、Ｎ−ベンジ
ルオキシカルボニルベスタチニルプロリルプロリンを得
た。収量573mg（収率99％） m.p.105〜106℃ TLC:Rf＝0.5（クロロホルム−メタノール＝3:1） NMR(CDCl3)：δ0.69〜1.01（6H,m）、1.34〜1.67（3H,
m）、1.74〜2.34（8H,m）、2.59〜3.04（2H,m）、3.24
〜3.87（4H,m）、3.96〜4.84（5H,m）、4.91（2H,s）、
7.13（5H,s）、7.19（5H,s） MS（FD）：M+＝636 （ｅ）前項（ｄ）で得られたＮ−ベンジルオキシカルボ
ニルベスタチニルプロリルプロリン475mg（0.747ミリモ
ル）を、10％含水メタノール50mlに溶かし、10％Pd−C2
50mgを加え１時間常圧の水素下で接触還元した。Ｎ−ベ
ンジルオキシカルボニル基が脱離された。触媒を濾去し
溶媒を留去した後、残渣をHP−20レジンクロマトグラフ
ィーにて精製すると、プロベスチンの278mgを得た。
m）、1.70〜2.20（8H,m）、2.82〜3.30（2H,m）、3.43
〜3.85（4H,m）、4.05〜4.80（3H,m）、4.97（2H,s）、
6.79（1H,s）、7.15（5H,s）、7.23（15H,s） MS（FD）：M+＋１＝803 （ｄ）前項（ｃ）で得られたＮ−ベンジルオキシカルボ
ニルプロリルプロリン・ジフェニルメチルエステル730m
g（0.911ミリモル）を、前項（ｂ）と同様にしてジフェ
ニルメチル基を脱離させる処理にかけると、Ｎ−ベンジ
ルオキシカルボニルベスタチニルプロリルプロリンを得
た。収量573mg（収率99％） m.p.105〜106℃ TLC:Rf＝0.5（クロロホルム−メタノール＝3:1） NMR(CDCl3)：δ0.69〜1.01（6H,m）、1.34〜1.67（3H,
m）、1.74〜2.34（8H,m）、2.59〜3.04（2H,m）、3.24
〜3.87（4H,m）、3.96〜4.84（5H,m）、4.91（2H,s）、
7.13（5H,s）、7.19（5H,s） MS（FD）：M+＝636 （ｅ）前項（ｄ）で得られたＮ−ベンジルオキシカルボ
ニルベスタチニルプロリルプロリン475mg（0.747ミリモ
ル）を、10％含水メタノール50mlに溶かし、10％Pd−C2
50mgを加え１時間常圧の水素下で接触還元した。Ｎ−ベ
ンジルオキシカルボニル基が脱離された。触媒を濾去し
溶媒を留去した後、残渣をHP−20レジンクロマトグラフ
ィーにて精製すると、プロベスチンの278mgを得た。
m.p.121〜123℃ TLC:Rf＝0.3（アセトニトリル−水＝4:1） NMR(D2O)：δ0.80〜1.05（6H,m）、1.45〜1.75（3H,
m）、1.80〜2.40（8H,m）、2.85〜3.15（2H,m）、3.55
〜3.85（5H,m）、4.25（2H,s）、4.50〜4.70（2H,m）、
7.35（5H,s） MS（FD）：M+＋１＝503 実施例２ 実施例１（ｃ）で得られたＮ−ベンジルオキシカルボニ
ルベスタチニルプロリルプロリン・ジフェニルメチルエ
ステル70mg（0.0873ミリモル）をメタノール20mlに溶か
し、10％Pd−C70mgを加えて1.5時間常圧の水素下に接触
還元を行った。触媒を濾去し溶媒を留去した後、残渣を
LH−20レジンクロマトグラフィー（クロロホルム−メタ
ノール＝1:1）にて精製し、プロベスチンの35mgを得
た。
m）、1.80〜2.40（8H,m）、2.85〜3.15（2H,m）、3.55
〜3.85（5H,m）、4.25（2H,s）、4.50〜4.70（2H,m）、
7.35（5H,s） MS（FD）：M+＋１＝503 実施例２ 実施例１（ｃ）で得られたＮ−ベンジルオキシカルボニ
ルベスタチニルプロリルプロリン・ジフェニルメチルエ
ステル70mg（0.0873ミリモル）をメタノール20mlに溶か
し、10％Pd−C70mgを加えて1.5時間常圧の水素下に接触
還元を行った。触媒を濾去し溶媒を留去した後、残渣を
LH−20レジンクロマトグラフィー（クロロホルム−メタ
ノール＝1:1）にて精製し、プロベスチンの35mgを得
た。
試験例１ 実施例１（ｅ）又は実施例２で得られた合成品プロベス
チンと天然品プロベスチンをそれぞれ同じ精製法で再精
製（すなわちYMC−Gelカラムで0.1％トリフルオロ酢酸
−アセトニトリル（7:3）を溶出溶媒として用いる第１
回のHPLCと、Dowex50Wカラムで0.5Nアンモニア水を溶出
溶媒として用いる第２回のHPLCとにかけて精製した）す
ることにより、夫々に純品を得た。上記の如く精製され
た合成品プロベスチンと精製された天然品プロベスチン
とについて、アミノペプチダーゼＭ（AP−Ｍ）阻害活性
の値(IC50)及び旋光度▲〔α〕25 D▼（c0.2、メタノー
ル）を測定した。その結果を次表に表す。
チンと天然品プロベスチンをそれぞれ同じ精製法で再精
製（すなわちYMC−Gelカラムで0.1％トリフルオロ酢酸
−アセトニトリル（7:3）を溶出溶媒として用いる第１
回のHPLCと、Dowex50Wカラムで0.5Nアンモニア水を溶出
溶媒として用いる第２回のHPLCとにかけて精製した）す
ることにより、夫々に純品を得た。上記の如く精製され
た合成品プロベスチンと精製された天然品プロベスチン
とについて、アミノペプチダーゼＭ（AP−Ｍ）阻害活性
の値(IC50)及び旋光度▲〔α〕25 D▼（c0.2、メタノー
ル）を測定した。その結果を次表に表す。
上記の表の結果並びにNMR、MASS分析等の理化学的性状
が一致したことから、本発明の方法で合成されたプロベ
スチンは特開昭64−85995号公報に示された微生物由来
の天然プロベスチンと同一物質であると判明した。
が一致したことから、本発明の方法で合成されたプロベ
スチンは特開昭64−85995号公報に示された微生物由来
の天然プロベスチンと同一物質であると判明した。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 柴原 聖至 神奈川県横浜市港北区師岡町760 明治製 菓株式会社薬品総合研究所内 (72)発明者 井上 重治 神奈川県横浜市港北区師岡町760 明治製 菓株式会社薬品総合研究所内 (72)発明者 吉田 茂美 神奈川県横浜市港北区師岡町760 明治製 菓株式会社薬品総合研究所内 (72)発明者 近藤 信一 神奈川県横浜市緑区市ケ尾町1157―１ 市 ケ尾アネツクス801 (72)発明者 青柳 高明 神奈川県藤沢市本鵠沼３―３―６ (72)発明者 竹内 富雄 東京都品川区東五反田５―１―11 ニユー フジマンシヨン701
Claims (3)
- 【請求項１】次の一般式 〔式中、R1はアミノ保護基である〕で示されるベスタチ
ンのアミノ保護体又はこれのカルボキシル基における活
性化誘導体に次式 〔式中、R2はカルボキシル保護基である〕で示されるプ
ロリンのカルボキシル保護体を縮合させて次の一般式 〔式中、R1及びR2は前記の意味を有する〕で示される化
合物を生成し、この式（IV）の化合物のカルボキシル保
護基(R2)を常法で脱離して次式 〔式中、R1及びR2は前記の意味を有する〕で示される化
合物を生成し、式（IV′）の化合物又はこれのカルボキ
シル基における活性化誘導体に式（III）で示されるプ
ロリンのカルボキシル保護体を縮合させて次の一般式 〔式中、R1及びR2は前記の意味を有する〕で示される化
合物を生成し、さらに式（Ｖ）の化合物からアミノ保護
基(R1)及びカルボキシル保護基(R2)を常法で脱離するこ
とを特徴とする、次式 を有するプロベスチンの製造法。 - 【請求項２】式（II）で示されるベスタチンのアミノ保
護体と式（III）で示されるプロリンのカルボキシル保
護体との縮合反応は、アミノ酸のカップリングによるペ
プチドの合成に常用される活性エステル化剤と縮合剤と
の存在下に行って、これにより、式（II）で示されるベ
スタチンのアミノ保護体の活性エステルを中間体として
形成させてから、これを式（III）で示されるプロリン
のカルボキシル保護体と縮合させることから成り、ま
た、式（IV′）の化合物と式（III）で示されるプロリ
ンのカルボキシル保護体との縮合反応も、アミノ酸のカ
ップリングによるペプチドの合成に常用される活性エス
テル化剤と縮合剤との存在下で上記の縮合工程と同様に
行う請求項１記載の方法。 - 【請求項３】次式 〔式中、R1はアミノ保護基である〕で示されるＮ−保護
−ベスタチニルプロリン。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1237172A JPH07119233B2 (ja) | 1989-09-14 | 1989-09-14 | 生理活性物質プロベスチンの合成法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1237172A JPH07119233B2 (ja) | 1989-09-14 | 1989-09-14 | 生理活性物質プロベスチンの合成法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03101694A JPH03101694A (ja) | 1991-04-26 |
| JPH07119233B2 true JPH07119233B2 (ja) | 1995-12-20 |
Family
ID=17011446
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1237172A Expired - Lifetime JPH07119233B2 (ja) | 1989-09-14 | 1989-09-14 | 生理活性物質プロベスチンの合成法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07119233B2 (ja) |
-
1989
- 1989-09-14 JP JP1237172A patent/JPH07119233B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH03101694A (ja) | 1991-04-26 |
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