JPH0733348B2

JPH0733348B2 - ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼの阻害剤

Info

Publication number: JPH0733348B2
Application number: JP4327812A
Authority: JP
Inventors: シエオ・バクス・シング; ジエラルド・エフ・ビルズ; ラツセル・ビー・リンガム; キース・シー・シルバーマン; デボラ・エル・ジンク
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 1991-12-16
Filing date: 1992-12-08
Publication date: 1995-04-12
Anticipated expiration: 2010-04-12
Also published as: JPH05279290A; US5260465A; EP0547670A3; CA2084795A1; EP0547670A2

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】結腸・直腸癌、外分泌性膵臓癌及
び骨髄性白血病を含む多くのヒトの癌において、Ras 遺
伝子が活性化することが知られている。Ras 活動の生物
学的及び生化学的研究によると、Ras はＧ調節蛋白質の
ように機能することが示された。その理由は、細胞を形
質転換するためには、Ras は形質膜に位置しGTP に結合
するはずだからである〔Gibbs,J.ら、Microbiol.Rev. 5
3:171-286 (1989)〕。癌細胞中のRas 遺伝子の形状は変
異していて、正常細胞中のRas 蛋白質と区別することが
できる。

【０００２】Ras が形質膜に位置するまでには、少なく
とも３種の翻訳後修飾が含まれており、その全てはRas
のＣ末端で起こる。Ras のＣ末端には、“CAAX”、即ち
“Cys - Aaa ¹ - Aaa²- Xaa ”ボックス〔Aaa は脂肪
族アミノ酸であり、Xaa はいずれのアミノ酸でもよい〕
と呼ばれる部分配列が含まれる〔Willumsen ら、Nature
310:583-586 (1984) 〕。この部分（motif ）は、Rho
、真菌性交配因子、核ラミン及びトランスデューシン
のγサブユニット等の Ras関連GTP 結合蛋白質にも含ま
れている。

【０００３】イソプレノイドファルネシルピロ燐酸（FP
P ）によるRas のファルネシル化は、生体内でシステイ
ン部分に起こり、チオエーテル結合を生成する〔Hancoc
k ら、Cell 57:1167 (1989); Caseyら、Proc.Natl.Aca
d.Sci.USA 86:8323 (1989) 〕。さらに、Ha-Ras及びN-R
as は、Ｃ末端のCys ファルネシル受容体近くのCys 残
基にチオエーテルを作ってパルミトレイン化する〔Guti
errez ら、EMBO J. 8:1093-1098(1989); Hancockら、Ce
ll 57:1167-1177 (1989)〕。Ki-Rasは、パルミテート受
容体Cys を欠いている。Ras Ｃ末端の最後の３アミノ酸
は蛋白質分解で除去され、新たなＣ末端にメチルエステ
ル化が起こる〔Hancock ら、前出〕。真菌性交配因子や
哺乳類核ラミンにあっても、同様の修飾段階がある〔An
dereggら、J.Biol.Chem. 263:18236 (1988); Farnswort
h ら、同誌 264:20422 (1989) 〕。

【０００４】Ras のファルネシル化がロバスタチン〔Me
rck & Co., Rahway, NJ 〕及びコンパクチン〔Hancock
ら、前出; Casey ら、前出; Schafer ら、Science 245:
379(1989)〕により生体内で阻害されることが実証され
た。これら薬剤は、ポリイソプレノイド及びファルネシ
ルピロ燐酸前駆体生成の律速酵素であるHMG-CoA リダク
ターゼを阻害する。ファルネシルピロ燐酸を前駆体とし
て利用するファルネシル蛋白質トランスフェラーゼが、
Ras ファルネシル化をもたらすことが示された〔Reiss
ら、Cell 62:81-88 (1990); Schaber ら、J.Biol.Chem.
265: 14701-14704 (1990); Schafer ら、Science 249:
1133-1139(1990); Manne ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA
87:7541-7545 (1990)〕。

【０００５】ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼが
阻害され、それによりRas 蛋白質のファルネシル化が防
止されると、Ras が正常細胞を癌細胞に形質転換する能
力が失われる。本発明の化合物は、Ras のファルネシル
化を阻止し、それにより可溶性Ras が生成し、後述のよ
うにこれがRas 機能の優性負阻害剤として働くことがで
きる。癌細胞中の可溶性Ras は優性負阻害剤となり得る
ものの、正常細胞中の可溶性Ras は阻害剤とならない。

【０００６】“Cys - Aaa ¹ - Aaa²- Xaa ”ボックス
膜領域のない、シトソル所在の、及び活性化形態（GTPa
se活性が損なわれ、GTP に結合している）のRas は、膜
結合型のRas 機能の優勢負Ras 阻害剤として作用する
〔Gibbs ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:6630-6634 (1
989)〕。GTPase活性が普通のシトソル所在のRas は、阻
害剤として機能しない。前出のGibbs らは、この効果を
Xenopus oocytes 及び哺乳類細胞において実証した。

【０００７】Ras のファルネシル化を阻止するため本発
明化合物を投与すると、膜内Ras 量が減少するばかりで
なく、Ras のシトソル集中が生ずる。活性化Ras を持つ
腫瘍細胞では、このシトソル集中は膜結合Ras 機能の他
の拮抗原因として働く。Rasが普通の正常細胞にあって
は、Ras のシトソル集中が拮抗原因として働くことはな
い。ファルネシル化が完全に阻止されぬ場合には、他の
ファルネシル化蛋白質がその機能を持続することが可能
である。

【０００８】ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼ活
性は、化合物の投与量に応じ抑制するか、完全に阻害す
ることができる。ファルネシル蛋白質トランスフェラー
ゼ酵素活性を化合物の投与量を調整して抑制するに止め
ると、当該酵素を利用する他の代謝反応への影響等の好
ましからざる副作用を避けるのに役立つ。

【０００９】上記化合物及びその同族体は、ファルネシ
ル蛋白質トランスフェラーゼの阻害剤である。ファルネ
シル蛋白質トランスフェラーゼは、ファルネシルピロ燐
酸を用いて、Ras のCAAXボックスのCys チオール基をフ
ァルネシル基で共有結合により修飾する。HMG-CoA リダ
クターゼ阻害によりファルネシルピロ燐酸生合成を阻止
すると、生体内でRas の膜局在ができなくなり、Ras の
機能が阻害される。ファルネシル蛋白質トランスフェラ
ーゼの阻害は、イソプレン生合成阻害剤一般に比して、
より特異的であり副作用が少ない。

【００１０】過去に、CAAXボックスのテトラペプチド疑
似体がRas ファルネシル化を阻害するとされたことがあ
る〔Schaber ら、前出; Reiss ら、前出; Reiss ら、PN
AS 88:732-736 (1991)〕。しかしながら、そこに報告さ
れたファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は代謝的に
不安定で、細胞内では不活性である。

【００１１】さらに、Piptoporus australiensisからの
新規無水シトラコン酸誘導体の構造がスペクトル解析と
化学的手法により、3-[(7Z)-ヘキサデセニル]-4-メチル
フラン-2,5- ジオンと決定された旨も報告されている
〔M.Gill、Phytochemistry, 21: 1786-1788 (1982)〕。

【００１２】

【発明が解決しようとする課題】上記した事項に鑑み、
本発明はファルネシル蛋白質トランスフェラーゼを阻害
し、もって発癌遺伝子蛋白質Ras がファルネシル化する
のを防止する医薬化合物及び組成物並びに当該化合物の
利用方法の提供をその目的とする。

【００１３】

【課題を解決するための手段】本発明の医薬化合物は、
下記の構造式（Ｉ）で示される。本化合物はファルネシ
ル蛋白質トランスフェラーゼを阻害し、もって発癌遺伝
子蛋白質Ras がファルネシル化するのを防止する。

【００１４】

【化１０】

【００１５】〔式中、X-X はCH=CH （シス）、CH=CH
（トランス）又はエチレン（＝1,2-エタンジイル）であ
り；Ｒ¹及びＲ²は、それぞれ独立に、a)水素、b)Ｃ₁
〜Ｃ₅アルキル又はc)i)フェニル又はii) メチル、メト
キシ、ハロゲン（Cl、Br、Ｆ、Ｉ）若しくはヒドロキシ
で置換されたフェニルで置換されたＣ₁〜Ｃ₅アルキル
である〕の化合物、或いはＲ¹及びＲ²の少なくとも一
方が水素である式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容可能な
塩である。Ｒ¹及びＲ²がいずれも水素でない場合に
は、式（Ｉ）の化合物はファルネシル蛋白質トランスフ
ェラーゼ阻害剤としての作用に欠ける可能性があるが、
その薬剤前駆体として作用することがある。

【００１６】本発明の一態様として、下記の構造式（I
I）：

【００１７】

【化１１】

【００１８】〔式中、X-X はCH=CH （シス）、CH=CH
（トランス）又はエチレンである〕の化合物を含む医薬
組成物がある。本明細書を通じ、2,3-オレフィンの配置
は図示されたとおりのものであるとする。

【００１９】本発明の好ましい化合物(9) は、次式：

【００２０】

【化１２】

【００２１】で示される。

【００２２】本発明の第２の好ましい化合物(10)は、次
式：

【００２３】

【化１３】

【００２４】で示される。

【００２５】化合物(9) 及び(10)は、Chaetomella acut
iseta と同定された、新規な培養菌MF5685を用いる好気
性醗酵により製される。本明細書ではこの微生物につき
具体的に述べるが、上記株の変異株も含めてChaetomell
a 属の他の微生物も本発明の化合物を産生する能力があ
る。

【００２６】培養菌MF5685は、New Jersey州Sussex郡で
Robinia pseudoacaciaに寄生的に生育したPhellinus ro
binae の腐敗果肉から単離された、真菌Chaetomella ac
utiseta である。この培養菌は、12301 Parklawn Driv
e, Rockville, MD 20852 所在のAmerican Type Culture
Collectionに、ATCC 74113として寄託されている。

【００２７】Chaetomella acutiseta と同定された本培
養菌MF5685は、以下のような形態的特徴を有する：オー
トミール寒天（Difco Laboratories）上の集落［コロニ
ー］は、20℃、相対湿度95 %、螢光照射期間12 hr で３
週間後に40 -42 mm 径に達した。これは僅かに盛り上が
っており、濃密なフェルト状ないし殆ど交絡、鈍色、縁
は明確な白色だが直ぐに淡黄色ないし桃色系黄色又は青
白い褐色でTilleul-Buff（英字による色表示は、Ridgwa
y,R. 1912, Color Standard and Nomenclature, Washin
gton, D.C.による）に近く、Vinaceous-Buff, Avellane
ous で、褐色ないし暗褐色でCarob Brown の濃い凝集物
があり、分生子は不規則同心円帯状に生育し、周辺には
細かい逆まだら黄色ないし葡萄褐色ないし暗褐色の繊毛
ないし羽毛を有する。臭気及び滲出はない。

【００２８】麦芽酵母抽出物寒天（Difco Laboratorie
s）上のコロニーは、20℃、相対湿度95 %、螢光照射期
間12 hr で３週間後に40 -41 mm 径に達した。これは僅
かに盛り上がっており、濃密なフェルト状で微かに放射
状ひだがあり、白色ないし桃色系黄色ないし灰色系黄
色、Pale Cinnamon-Pink, Pale Pinkish Cinnamon, Lig
htPinkish Cinnamon ないしAvellaneous 、所々暗褐色
でCarob Brown 、分生子は周辺を覆い隠す程の逆淡黄色
−黄色ないし桃色系黄色。臭気及び滲出はない。

【００２９】ひき割りトウモロコシ寒天（Difco Labora
tories）上のコロニーは、20℃、相対湿度95 %、螢光照
射期間12 hr で３週間後に28 -29 mm 径に達した。これ
は付着性半透明で気菌糸はなく、寒天表面には所々不規
則な分生子が周辺を覆い隠す程の逆半透明に生育。臭気
及び滲出はない。

【００３０】分生子は、300-700 μm 径、200-500 μm
高、ほぼ球形の楕円体、横から見ると腎臓形、普通両側
対称でやや横に潰され、無柄ないし僅かな基底柄で、二
つの対立する貝殻状の子嚢をなし、子嚢間の中央の縫合
ないし縦溝は裂開しており、外壁は剛毛が多く、側壁は
等径ないし僅かに伸びた細胞状をなし、細胞の外層は暗
褐色、内層は無紋。子殻剛毛は披針形、90-200μm 長、
中央で5-10μm 幅、滑らかな壁、壁は厚く4-10の隔膜が
あり、青白色ないし暗褐色。分生子柄は分生子洞の基底
域に沿っており、多くは子嚢の直上にあり、無紋で分岐
を有し、12-30μm 高。分生子細胞は、内生出芽型、フ
ィアロ型、無紋の糸状で、微細な気孔を分生子座に有す
る。分生子は、無紋で滑らか、無隔、紡錘状ないしほぼ
鎌状をなし、8.5-11.5×1.8-2.2 μm 。

【００３１】本発明の化合物は、上記した微生物を資化
可能な炭素及び窒素源を含む水性栄養培地中で、好まし
くは好気性条件下に培養することにより得られうる。栄
養培地には、無機塩及び消泡剤を含むことができる。

【００３２】栄養培地中の炭素源として好ましいもの
は、葡萄糖、グリセリン、澱粉、デキストリン等の炭水
化物である。含有するによい他の炭素源には、麦芽糖、
マンノース、蔗糖等がある。さらに複合栄養源、例えば
オート粉、ひき割りトウモロコシ、黍、トウモロコシ等
も利用可能な炭素を供給することができる。培地中に用
いる炭素源の具体的な数量は、一部には培地中の他の成
分にもよるが、通常は重量で0.5 から５％の範囲でよい
ことが見出だされた。これら炭素源は、個々に所定の培
地に入れてもよいし、数種を混ぜて同一培地に加えても
よい。

【００３３】窒素源として好ましいものには、グリシ
ン、メチオニン、プロリン、トレオニン等のアミノ酸
や、酵母抽出物（加水分解物ないし自己分解物）、乾燥
麦芽、トマトペースト、ひき割り大豆、ペプトン、コー
ンスティープ液、蒸溜可溶物、麦芽抽出物等の複合源が
ある。アンモニウム塩（例えば硝酸アンモニウム、硫酸
アンモニウム、燐酸アンモニウム等）などの無機窒素源
もまた、使用することができる。各種窒素源は、単独又
は組合せで培地に対する重量％で0.2 から70％の範囲で
用い得る。

【００３４】これら炭素及び窒素源は、通常は組合せて
用いられるが、必ずしも純粋形でなくともよい。痕跡の
成長因子、ビタミン類及び無機栄養素を含む、比較的低
純度のものも用い得る。これらに限定はされないが、炭
酸カルシウム、燐酸ナトリウム若しくはカリウム、塩化
ナトリウム若しくはカリウム、マグネシウム塩、銅塩、
コバルト塩等の無機塩類も、培地に添加し得る。マンガ
ン、鉄、モリブデン、亜鉛等の微量金属も含ませ得る。
加えて、特に培養媒体の発泡が著しいときには、必要に
応じポリエチレングリコール又はシリコーン等の消泡剤
の添加ができる。

【００３５】本発明化合物の生産に好ましい方法は、産
生生物の胞子又は菌糸体を適する培地に接種し、次いで
これを好気性条件下に培養することから成る。

【００３６】一般に醗酵操作は次のようにする。まず、
培養体の保存菌を栄養種媒体中に接種し、時には２段法
により、生物生育をなし、これを活性化合物生産のため
の種菌とする。接種後、撹拌下20〜30℃、好ましくは25
〜28℃の温度でフラスコをインキュベートする。撹拌速
度は400 rpm までとすることができるが、好ましくは20
0 〜220 rpm である。種フラスコは、２〜10日間、好ま
しくは２〜４日間インキュベートする。通常は２〜４日
間で十分生育するので、この培養物を生産媒体フラスコ
の接種用に使うことができる。特に大規模容器では、第
２段の種生育をするのがよい。その場合には、培養生育
物の一部を第２の種フラスコへの接種に用い、時間は短
くなるが同様の条件でインキュベートする。

【００３７】接種が終了すると、醗酵生産媒体を撹拌せ
ずに３〜30日間、好ましくは４〜２２日間インキュベー
トする。醗酵は、好気的に２０〜40℃の温度で実施す
る。最適の結果を得るには、温度は22〜28℃、格別好ま
しくは24〜26℃とする。活性化合物の生産に適する栄養
媒体のpHは、3.5 〜8.5 の範囲、特に好ましくは5.0 〜
7.5とする。所望化合物の生産に適する期間の経過後、
醗酵フラスコから採取し、活性化合物を単離する。

【００３８】アルコール性溶媒及びエステルないしケト
ンのような酸素化溶媒の混合物が、固体醗酵媒体から本
発明化合物を抽出するのに用いられる。

【００３９】混合物を激しく撹拌、瀘過し、瀘液を減圧
下に濃縮する。濃縮物に水を加え、鉱酸によりpHを約３
に調整する。水性濃縮物を次いで水不混和性酸素化溶媒
により繰返し抽出する。水不混和性有機層を分け、蒸発
乾固する。残渣を次に通常は吸着及び脱着クロマトグラ
フィー及び沈澱化といった数種の分離操作に供する。各
分離操作に際しては、画分を収集し、検定及び／又はHP
LC/TLC解析の結果に基づき、これをまとめる。

【００４０】固体醗酵物の抽出に好ましい溶媒は、メタ
ノールと2-ブタノンの1:1 混合物である。初期抽出物を
濃縮し水で稀釈した後の分別溶媒として好ましいのは、
ジクロロメタンである。

【００４１】クロマト分離は、イオン性又は非イオン性
吸着剤ないし樹脂を用いての、慣用のカラムクロマトグ
ラフィーによることができる。E. Merck社から得られる
ようなシリカゲルが吸着剤として好ましい。シリカゲル
を吸着剤とする場合には、メタノール／クロロホルム／
酢酸／水といったアルコール／塩素化炭化水素／有機酸
混合物が、溶離剤として有用である。逆相クロマトグラ
フィーに際しては、C8固定相シリカゲルが吸着剤として
好ましい。逆相クロマトグラフィーに適する溶離剤は、
低pHに0.1%燐酸又は三弗化酢酸等で緩衝した、アセトニ
トリルと水の混合物である。Dowex-1 （Cl^-）又はDowe
x-50（Ca⁺⁺）のようなイオン性樹脂も、精製において有
用である。

【００４２】本発明の化合物の医薬的に許容可能な塩に
は、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウ
ム、リチウム、マグネシウム、亜鉛等のカチオンからの
もの；アンモニア、エチレンジアミン、N-メチルグルカ
ミン、リシン、アルギニン、オルニチン、コリン、N,N
′- ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイ
ン、ジエタノールアミン、プロカイン、N-ベンジルフェ
ネチルアミン、ジエチルアミン、ピペラジン、トリス
（ヒドロキシメチル）アミノメタン、及びテトラメチル
アンモニウムヒドロキシド等の塩基からのものが含まれ
る。これらの塩には、カルボキシル基の両方又は一方が
塩の形になっているものが含まれる。

【００４３】〔特性評価法〕ウシ脳からのファルネシル
蛋白質トランスフェラーゼ（FTase ）を、DEAE- Sephac
elカラム（Pharmacia 、0 -0.8 M NaCl 傾斜溶出）、N-
オクチルアガロースカラム（Sigma 、0 -0.6 M NaCl 傾
斜溶出）及びmono Q HPLC カラム（Pharmacia 、0 -0.3
M NaCl 傾斜）でクロマトグラフした。3.5 μモルのRa
s-CVLS（Cys-Val-Leu-Ser ）、0.25μモルの〔³H 〕FP
P と所定の化合物を、この半精製酵素調製物とインキュ
ベートした。以下に示したFTase 阻害データは、生体外
における被験化合物によるRas ファルネシル化の阻害能
力を測定したものである。

【００４４】

【表１】ここで(9) 又は(10)とあるのは、(9) を被験化合物とす
る際、アッセイ条件のpH (7.4)で開環して(10)になって
いることがあり得ることを示す。

【００４５】代表的な本発明化合物によるRas ファルネ
シル化の阻害〔用途〕構造式Ｉ及びIIの化合物を含む医薬組成物は、
ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼを阻害し、発癌
遺伝子蛋白質Ras のファルネシル化を阻止する。これら
化合物は哺乳類、特にヒトに対する医薬として有効であ
る。本発明の化合物は癌治療の分野で患者に投与するこ
とができる。本発明の化合物による治療対象の癌種は、
結腸・直腸癌、外分泌性膵臓癌及び骨髄性白血病を含む
が、それに限定されない。

【００４６】本発明の化合物を哺乳類、特にヒトに対し
て投与する場合、単独でもよいが、好ましくは標準的医
薬慣行に基づき、医薬的に許容可能な担体若しくは稀釈
剤、明礬等の任意のアジュバントと共に医薬組成物とし
て用いることができる。これら化合物は、経口又は静
脈、筋肉内、腹膜内、皮下及び局所投与を含む非経口で
投与することができる。

【００４７】本発明の化学療法化合物の経口投与に際し
ては、選定された化合物を錠剤若しくはカプセル剤、又
は水溶液若しくは懸濁剤の形で服用することができる。
経口用錠剤の場合は、乳糖及びコーンスターチを含む常
用の担体や、ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤が通
常添加される。経口用カプセル剤にあっては、有効な稀
釈剤には乳糖及び乾燥コーンスターチが含まれる。経口
用に水性懸濁液を要する場合には、活性成分に乳化剤な
いし懸濁剤を組合せる。所望ならば、適当に甘味剤及び
／又は着香剤を加えてもよい。筋肉内、腹膜内、皮下及
び静脈への用途には、通常活性成分の無菌溶液を用意
し、溶液のpHを適宜調節して緩衝化する。静脈用途のた
めには、溶質類の合計濃度を管理して組成物を等張とす
る必要がある。

【００４８】本発明はまた、治療有効量の本発明化合物
を、医薬的に許容可能な担体若しくは稀釈剤を伴わず又
は伴って、投与することから成る、癌治療に有効な医薬
組成物をも包含する。かかる本発明の適する組成物に
は、本発明化合物と食塩水等の薬学的に許容可能な担体
とから成り、例えばpH水準7.4 とした水性溶液を含む。
この溶液は、患者の筋肉内血流に局所濃縮塊注射（loca
l bolus injection ）として導入することができる。

【００４９】本発明化合物をヒト患者に投与する場合、
処方すべき日量は一般に年齢、体重、その患者の感受
性、さらには患者症状の重篤度に応じて変動するが、通
常は担当医師により決められる。

【００５０】典型的投与としては、癌治療を受けている
ヒト患者に適量の化合物が与えられる。かかる投与は、
一日当たり哺乳類体重1 kg毎に約0.1 〜約20 mg の量で
なされ、好ましくは約0.5 〜約10 mg である。

【００５１】本発明の化合物は、以下に示す反応図式に
則り化学合成によっても得ることが可能である：オレイ
ン酸メチル(1) をピルビン酸メチルと-78 ℃ないし室温
においてアルドール縮合すると、ジアステレオ異性体混
合物としての(2) 及び(3) が生じ、これを分離する。３
級水酸基をトシル化すると、(4) 及び(5) が得られ、DB
U とβ−脱離するとオレフィン類となる。３種の脱離生
成物(6) 、(7) 及び(8) のそれぞれをシリカゲルクロマ
トグラフィーで分離する。メチルエステルをメタノール
／THF 混合物中の水酸化ナトリウム水溶液と還流するこ
とにより、加水分解する。ジエステル(6) を加水分解し
て酸性化すると(9) が生じ、これをpH 7.0〜7.2 のメタ
ノール／水（8:2 ）中で(10)に変換する。

【００５２】

【化１４】

【００５３】

【化１５】

【００５４】溶液状態における二酸(10)と無水物(9) と
の間の平衡は、pH依存性である。溶液が酸性のときは無
水物(9) が主となり、以下に示すように溶液が塩基性と
なると二酸(10)が主体となる。アセトニトリル中での
(9) の紫外スペクトルは、環状無水物特有の254 nmの最
大値を示し、これは希塩酸添加により変化しない。これ
に対し希水酸化ナトリウムで塩基性化すると、この最大
値はλ_max243 nmに移動する。この移動は、無水物が開
環して二酸を生じたことの確証である。

【００５５】

【化１６】

【００５６】pH 7.5におけるメタノール／HEPES 緩衝液
（7:5 ）（この緩衝液及びpHは生理活性検定で用いられ
るものである）中で(9) の紫外スペクトルを記録する
と、紫外最大値は243 nmにあった。これからすると、検
定条件下で化合物(10)は実質上開環して二酸形式にあ
る。メタノール単独中では、紫外スペクトルは211 及び
253 nmに二つの最大値を示す。後者は希水酸化ナトリウ
ムの添加後、240 nmへと浅色効果により移動する。無水
物(9) は徐々にメタノールと反応〔無水物(9) のメタノ
ール溶液はジアゾメタンと反応後、ジメチルエステル
(6) を生じる〕する。開環した二酸(10)は、ジイソプロ
ピルエチルアミン塩として捕捉可能で、このものはRas
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害活性が損なわれて
いない。

【００５７】

【実施例】以下の実施例で用いる各培地の組成は、下記
に列挙するとおりである：MYE 寒天媒体 pH無調整、オートクレーブ20分（121
℃, 15 psi） g/L 麦芽抽出物 10.0 酵母抽出物 2.0 寒天 20.0 2%ジエルドリン 1.0 mL （2 g/100 mLアセトン、Velsicol Chemical Corporation, Chicago IL ）KF種媒体 pH 6.8に調整（予備滅菌）、250 mL邪魔
板なし三角フラスコに50 mL 、オートクレーブ20分（12
1 ℃, 15 psi）微量金属#2は、硫酸第一鉄七水塩 1.0 g/L、硫酸マンガ
ン（II）四水塩 1.0 g/L、塩化第二銅二水塩 0.025 g/
L、塩化カルシウム二水塩 1.0 g/L、オルト硼酸0.056 g
/L、ヘプタモリブデン酸アンモニウム四水塩 0.019 g/L
及び硫酸亜鉛七水塩 1.0 g/Lを、1 L の0.6 N 塩酸に溶
解したもの。

【００５８】生産媒体 250 mL邪魔板なし三角フラ
スコに調製する固体基質生産用媒体pH無調整、オートク
レーブ15分（121 ℃, 15 psi）、フラスコに蒸溜水15.0
mLを加え、オートクレーブ20分（121 ℃, 15 psi）BRF フラスコ当り玄米 10.0 g 基礎液#3 20.0 mL 基礎液#3は、酵母抽出物 1.0 g/L、酒石酸ナトリウム
0.5 g/L、燐酸第二カリウム 0.5 g/L及び蒸溜水 1000 m
Lから成る。

【００５９】以下の実施例は、本発明はさらによく理解
するのを助ける意図のものである。ここで用いられた特
定の物質、種及び条件は、本発明をさらに明確にするも
のであり、本発明の合理的範囲を制限するものではな
い。

【００６０】実施例１醗酵による化合物(9) 及び(10)の調製Ａ．MF5685の培養 MYE 寒天斜面の生育物から取った胞子と菌糸体の混合物
を用い、KF種媒体にMF5685の培養物を接種した。KF種フ
ラスコには、67時間の間、25℃、220 rpm 、湿度85 %の
条件でインキュベートした。このインキュベートが終わ
ったら、KFフラスコの内容を集め、2.0 mLの部分を無菌
的に40 BRF固体生産媒体フラスコの各々に移す。この生
産フラスコを静置し、25℃、湿度85 %で９日（20フラス
コ）又は16日（16フラスコ）インキュベートした。採集
の際には、各生産フラスコにメチルエチルケトン（MEK
）75 mL を加え、固形生育物を手で小塊に分ける。フ
ラスコは溶媒処理して、ジャイロ回転振盪機上で220 rp
m 、30分撹拌し、残存細胞塊をさらに引き離し、同時に
溶媒が細胞とさらによく接触するようにする。

【００６１】Ｂ．化合物(9) 及び(10)の単離 BRF 固定培地に生育したChaetomella acutiseta の培養
物1 L （20フラスコ）を、MEK （1.5 L ）で振盪しなが
ら上記のごとくして20分間抽出した。抽出物をセライト
を通じて瀘過し、菌体を75 mL ずつのMEK で洗い、抽出
物総量3.0 L を得た。瀘液を減圧乾固した。残存半固体
をメタノール（55 mL ）に溶かして瀘過した。この瀘液
（55 mL ）を2.0 L Sephadex LH-20カラムにて、メタノ
ールによりクロマトグラフした。Ras ファルネシルトラ
ンスフェラーゼ活性を有する画分が、２個得られた。こ
の画分を別々にメタノール（4 mLずつ）に懸濁し、遠心
して固形分を除いた。メタノール性上澄を1 mLずつ取
り、Whatman C-8 カラム（22×250 mm）でアセトニトリ
ル（75 %）及び水（25 %、0.25 %の燐酸を含む）を流速
10 mL/分で流してクロマトグラフした。この時には、Ra
s ファルネシルトランスフェラーゼ活性は、保持時間1
3.2及び14.2分［Whatman C-8 カラム（4.8 ×250 m
m）、アセトニトリル（80 %）及び水（20 %、0.25 %の
燐酸を含む）、流速1.5 mL/ 分］の異なる２物質（量比
約56:44 ）に基づくことがわかっていた。分取HPLCは７
度反復した。このようにして得た画分を濃縮してアセト
ニトリルを大部分除き、酢酸エチルで抽出した。酢酸エ
チル抽出物を等量の水で１回洗い、濃縮乾固すると化合
物(9) 及び(10)に富む第１画分70 mg （両者の比率は溶
液pHによる）が得られた。この画分をさらに同一HPLC条
件で繰返しクロマト精製し、画分を真空下に徹底的に乾
燥すると、化合物(9) （29 mg 、保持時間14.2分）が油
状物として得られた。化合物(10)はpH 7以下では溶液中
に存在するが、画分をまずpH 7.0より上に塩基性化し、
溶媒を蒸発して単離することができる。

【００６２】質量分析データ質量分析は、Finnigan-MAT MAT212 型（電子衝撃, EI,
90eV）、MAT 90（高速原子衝撃, FAB ）及びTSQ70B（FA
B, EI ）の各質量分析計により記録した。精密な質量解
析は、パーフルオロケロセン（PFK ）又はパーフルオロ
酸化プロピレン（Ultramark U1600F）を内部標準とし
て、高分解能（HR-EI ）により測定した。トリメチルシ
リル誘導体は、BSTFA-ピリジン1:1 混合物と室温で処理
して調製した。

【００６３】¹³ＣＮＭＲデータ¹³ ＣＮＭＲスペクトルは、CD₂Cl₂、CD₃OD又はCDCl
₃中でVarian XL-300スペクトロメータにより75 MHzで
記録した。化学シフトは、TMS を0 とするppm単位で、5
3.8 ppm（CD₂Cl₂）、49.00 ppm （CD₃OD）及び77.00
ppm （CDCl₃）の各溶媒ピークを内部標準として示し
た。

【００６４】¹ＨＮＭＲデータ¹ ＨＮＭＲデータは、CD₂Cl₂、CD₃OD又はCDCl₃中
でVarian XL-300 スペクトロメータにより300 MHz で記
録した。化学シフトは、TMS を0 とするppm 単位で、5.
32 ppm（CD₂Cl₂）、3.30 ppm（CD₃OD）及び7.26 ppm
（CDCl₃）の各溶媒ピークを内部標準として示した。

【００６５】化合物(9) 及び(10)の物性化合物(10)の質量スペクトルデータこの化合物は分子量352 を有する。分子式 C₂₁ H₃₆ O₄
は、ジトリメチルシリル誘導体についてのHR-MS 測定に
より定めた（ C₂₁ H₃₆ O₄＋ C₅ H₁₃Si₂についての計
算値: 481.3166、測定値: 481.3164）。

【００６６】化合物(9 )の質量スペクトルデータこの化合物を徹底的に乾燥し質量スペクトルを観測する
と、分子量334 を与えた。分子式 C₂₁ H₃₄ O₃は、HR-M
S 測定により定めた（ C₂₁ H₃₄ O₃についての計算値:
334.2508、測定値: 334.2506）。

【００６７】化合物(9 )の¹ＨＮＭＲデータ CD₂Cl₂中での¹ＨＮＭＲスペクトル：5.36(1H,m),
5.33(1H,m), 2.45(2H,t,J=8.1Hz), 2.05(3H,brs), 2.02
(4H,m), 1.57(2H,m), 1.34-1.26(18H,m), 0.88(3H,t,J=
6.7Hz)．化合物(9 )の¹³ＣＮＭＲデータ CD₂Cl₂中での¹³ＣＮＭＲスペクトル：166.8, 166.
3, 145.1, 141.0, 130.49, 129.38, 32.3, 30.15, 29.9
3, 29.90, 29.71（× 3）, 29.67, 27.88, 27.56, 27.4
4, 24.7, 23.07, 14.3, 9.7．化合物(9 )の赤外スペクトルデータ乾燥試料のνmax (ZnSe): 2925, 2854, 1857, 1821, 17
65, 1741, 1673, 1465, 1367, 1270, 1230, 1218, 111
8, 1016, 922, 735 cm ^-1．化合物(9 )の紫外スペクトルデータ νmax （CHCl₃）： 254（ε=7985 nm）．実施例２化学合成による化合物(9) 及び(10)の調製ステップ１：オレイン酸メチルとピルビン酸メチルのア
ルドール縮合（化合物(2) 及び(3) の調製） THF （30 mL ）中のジイソプロピルアミン（4.2 mL, 30
mmol ）の-78 ℃に冷却した溶液に、n-ブチルリチウム
（ヘキサン中 1.6 M, 13.1 mL, 21 mmol）を加えた。溶
液を窒素下-78 ℃で10分、次いで0 ℃で10分撹拌した。
このLDA 溶液を-78 ℃に冷却した後、オレイン酸メチル
（5.92 g, 20 mmol ）のTHF （30 mL ）溶液を注射器か
ら10分間かけて添加し、さらに10分間撹拌を続けた。反
応混合物をゆっくりと0 ℃に暖め、30分撹拌した（淡い
黄色）。反応混合物を再び-40 ℃に冷やした後、ピルビ
ン酸メチル（2.17 mL, 24 mmol）を注射器から加え、1
hr撹拌しながら徐々に室温まで暖めた。反応進行状況
は、TLC （ヘキサン／酢酸エチル, 4:1 ）で監視した。
極性の製品が２つ得られ、未反応のピルビン酸メチルが
多少残存していた。-78 ℃にて水により反応を停止し、
室温まで暖め、枸櫞酸水溶液（100 mL）で稀釈し酢酸エ
チル（3 × 200 mL ）で抽出した。酢酸エチル抽出物を
水（100 mL）で洗い、脱水（硫酸ナトリウム）し、減圧
蒸発して油状物を得た。これをヘキサンを充填したシリ
カゲル（200 cc）フラッシュカラムにてクロマト精製に
付した。カラムはヘキサン中 5 %の酢酸エチルにより溶
離し、第一のジアステレオマー(2) 又は(3) 362 mg、混
合物 2.19 g 及び第二のジアステレオマー(3) 又は(2)
496 mgを、全て液体として得た。ジアステレオマー(2)
及び(3) の立体化学同定はなされなかった。

【００６８】第一のジアステレオマー(2) 又は(3) のCD
Cl₃中での¹ＨＮＭＲデータ：5.34(2H,m), 3.76(3H,
s), 3.68(3H,s), 3.65(1H,brs), 2.76(1H,dd,J=10.2,3.
9Hz), 2.0(4H,m), 1.66(2H,m), 1.42(3H,s), 1.27(20H,
brm), 0.88(3H,t,J=6.8Hz)．第二のジアステレオマー(3) 又は(2) のCDCl₃中での¹
ＨＮＭＲデータ：5.34(2H,m), 3.80(3H,s), 3.72(3H,
s), 3.51(1H,brs), 2.72(1H,dd,J=11.7,3.3Hz), 2.0(4
H,m), 1.84(2H,m), 1.43(3H,s), 1.27(20H,m), 0.88(3
H,t,J=6.6Hz)．ステップ２：アルドール反応物のβ- 脱離反応（化合物
(6), (7)及び(8) の調製）ステップ１で得られたアルドール製品のジアステレオマ
ー混合物(2) 及び(3)(2.2 mg, 5.5 mmol）の塩化メチレ
ン（10 mL ）及びピリジン（5 mL）中の溶液に、2,6-ジ
t-ブチル-4- メチルピリジン（2.3 g, 11 mmol）、次い
で無水p-トルエンスルホン酸（5.4 g, 16.5 mmol）を加
え、窒素下室温で終夜撹拌した。反応進行状況は、TLC
（ヘキサン／酢酸エチル, 85:15 ）で監視した。生成し
たトシル酸塩は、原料のアルコールよりも極性が小さか
った。DBU （4 mL）を添加し、塩化メチレンを真空除去
して、反応混合物を130 〜140 ℃に6 hr加熱した。これ
を室温に冷やして酢酸エチル（400 mL）上に注ぎ、4 N
塩酸（3 × 100 mL ）、水、10 %重曹水（3 × 100 mL
）、さらに水で順次洗浄した。酢酸エチル抽出物を脱
水（硫酸ナトリウム）し、減圧蒸発して得られた粗製品
を、ヘキサンを充填したシリカゲル（300 cc）フラッシ
ュカラムにてクロマト精製に付した。カラムはヘキサン
中 1 %〜 3 %の酢酸エチルにより溶離し、第一のメサコ
ン酸ジエステル（trans ）同族体(8) （70 mg ）、イタ
コン酸ジエステル同族体(7) （1.56 g）及びシトラコン
酸ジエステル（cis ）同族体(6) （160 mg）を得た。

【００６９】シトラコン酸ジエステル（cis ）同族体
(6) のCDCl₃中の¹ＨＮＭＲデータ：5.34(2H,m), 3.
76(3H,s), 3.74(3H,s), 2.32(2H,t,J=7.5Hz), 2.00(4H,
m), 1.94(3H,brs), 1.57(1H,m), 1.42(1H,m), 1.31-1.2
4(18H,m), 0.88(3H,t,J=6.0Hz)．メサコン酸ジエステル（trans ）同族体(8) のCDCl₃中
の¹ＨＮＭＲデータ：5.34(2H,m), 3.78(3H,s), 3.77
(3H,s), 2.44(2H,t,J=7.4Hz), 2.00(7H,brs 及びm), 1.
40(2H,m), 1.27(18H,m), 0.88(3H,t,J=6.8Hz) ．イタコン酸ジエステル同族体(7) のCDCl₃中の¹ＨＮ
ＭＲデータ：6.36(1H,s), 5.75(1H,s), 5.34(2H,m), 3.
77(3H,s), 3.68(3H,s), 3.50(1H,t,J=7.2Hz), 2.0(4H,
m), 1.90(1H,m), 1.66(1H,m), 1.27(20H,m), 0.88(3H,
t,J=6.8Hz)．ステップ３：シトラコン酸ジエステル（cis ）同族体
(6) の加水分解（化合物(9) の調製）シトラコン酸ジエステル（cis ）同族体(6) （55 mg ）
のTHF （2.5 mL）、メタノール（1.5 mL）、水（1 mL）
及び4 N NaOH（0.5 mL）中の溶液を一夜還流加熱し、反
応進行状況を解析用HPLC（Whatman C-18, 4.6 × 250m
m, 0.2 % TFA を含むアセトニトリル／水 90:10, 流速
1.5 ml/分）で監視した。反応が完了したら、0 ℃に冷
やして4 N HCl でpH 2に酸性化する。酢酸エチル（3 ×
50 mL）で生成物を抽出する。酢酸エチル溶液を水洗
し、脱水（硫酸ナトリウム）・蒸発すると、無色無水物
製品が油状物として得られた。

【００７０】実施例３本発明化合物の経口投与用組成物の一態様として、化合
物(9) 又は(10) 20 mgを、十分微粉化した乳糖と配合し
て全量580 〜590 mgとし、これをサイズ0 硬ゼラチンカ
プセルに充填した。

【００７１】実施例４アンモニウム塩の調製遊離酸(10)の試料 0.1 mmol を 10 mLの酢酸エチルに溶
解する。生じた溶液にガス状アンモニアを飽和せしめ、
蒸発するとアンモニウム塩が残る。

【００７２】実施例５カリウム塩の調製化合物(9) 又は(10) 0.1 mmol のメタノール／水（6:4,
10 mL）中の溶液を、0.2 mmol の水酸化カリウムを含
む水性又はメタノール性溶液で処理する。溶媒を蒸発さ
せると、ジカリウム塩が生ずる。 0.1 mmol ないし 0.2
mmol の間の水酸化カリウムを添加すると、同様にモノ
カリウム塩とジカリウム塩の混合物が生ずる。この組成
比は、添加した水酸化カリウムの正確な量に応じて定ま
る。

【００７３】同様にして、ナトリウム塩やリチウム塩も
得ることができる。

【００７４】実施例６カルシウム塩の調製化合物(9) 又は(10) 0.1 mmol のメタノール／水（6:4,
20 mL）中の溶液を、0.1 mmol の水酸化カルシウム水
溶液で処理する。溶媒を蒸発させると、対応のカルシウ
ム塩が生ずる。

【００７５】実施例７エチレンジアミン塩の調製化合物(9) 又は(10) 0.1 mmol のメタノール／水（6:4,
10 mL）中の溶液を、0.1 mmol のエチレンジアミンで
処理する。溶媒を蒸発させると、エチレンジアミン塩が
生ずる。

【００７６】この操作を、 N′,N″- ジベンジルエチレ
ンジアミン塩の調製に応用することもできる。

【００７７】実施例８トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩の調製化合物(9) 又は(10) 0.1 mmol のメタノール／水（6:4,
10 mL）中の溶液に、10 mL のメタノールに溶解した
0.1〜0.2 mmolのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメ
タンを添加する。溶媒を蒸発させると、対応の塩となっ
た化合物(10)が生ずる。この正確な組成は、添加したア
ミンのモル比に応じて定まる。

【００７８】同様にして、L-オルニチン、L-リシン及び
N-グルカミンの塩も得ることができる。

【００７９】実施例９ L-アルギニン塩の調製遊離酸(10)又は無水物(9) 0.1 mmolのメタノール／水
（6:4, 10 mL）中の溶液を、 0.1〜0.2 mmolのL-アルギ
ニン水溶液で処理する。溶媒を蒸発させると、標題の塩
が生ずる。この正確な組成は、使用した遊離酸(10)又は
無水物(9) のモル比に応じて定まる。

【００８０】同様にして、L-オルニチン、L-リシン及び
N-グルカミンの塩も得ることができる。

【００８１】実施例１０ジメチルエステルの調製化合物(9) 又は(10) 5 mg の塩化メチレン（1 mL）及び
メタノール（0.2 mL）中の溶液に、トリメチルシリルジ
アゾメタンのヘキサン溶液（1 mL）を加えた。黄色溶液
を冷蔵庫に一夜置き、溶媒を窒素気流下に蒸発させた。
シリカゲルを詰めたピペットを通して瀘過し、塩化メチ
レン中2 % のメタノールで溶離すると、ジメチルエステ
ル5.0 mgが油状物として得られた。質量スペクトル m/z
380；CDCl₃中の¹ＨＮＭＲデータ：5.34(2H,m), 3.
76(3H,s), 3.74(3H,s), 2.32(2H,t,J=7.5Hz), 2.00(4H,
m), 1.94(3H,brs), 1.57(2H,m), 1.42(2H,m), 1.31-1.2
4(18H,m), 0.88(3H,t,J=6.0Hz)；赤外スペクトル νma
x (ZnSe): 2925, 2855,1736, 1725, 1644, 1459, 1435,
1366, 1301, 1264, 1198, 1099, 1038, 950, 861, 77
0, 725 cm ^-1．実施例１１Ａ．化合物(6) の10,11-ジヒドロ誘導体の調製シトラコン酸ジメチルエステル同族体(6) 55 mg をベン
ゼン（5 mL）に溶かして、Wilkinson 触媒、即ち塩化ト
リス（トリフェニルホスフィン）ロジウム（50mg ）の
存在下に40 psi圧力の下に一夜振盪しつつ水素化した。
反応進行状況をHPLC（Whatman C-18, 4.6 × 250mm, 0.
2 % TFA を含むアセトニトリル／水 90:10, 流速 1.5 m
l/分）で監視した。反応生成物は保持時間15分を有し、
これに対し出発物質は保持時間9.8 分を有していた。反
応混合物は直接シリカゲルカラム（50 cc ）でのクロマ
ト処理に付し、5 % 酢酸エチル／ヘキサンで溶離せしめ
て溶媒蒸発後に無色粉状ジヒドロ化合物を得た。CDCl₃
中の¹ＨＮＭＲデータ：3.75(3H,s), 3.74(3H,s), 2.
32(2H,t,J=7.5Hz), 1.93(3H,s), 1.43(2H,m), 1.25(26
H,m), 0.87(3H,t,J=6.3Hz) ．Ｂ．化合物(9) の10,11-ジヒドロ誘導体の調製ステップＡからの10,11-ジヒドロシトラコン酸ジメチル
同族体（38 mg ）を、実施例２記載の条件で加水分解
し、次いで同様に処理して、対応する無水10,11-ジヒド
ロシトラコン酸同族体（28 mg ）を無色固体として得
た。CDCl₃中の¹ＨＮＭＲデータ：2.45(2H,t,J=7.8H
z), 2.07(3H,s), 1.57(2H,m), 1.31-1.25(26H,m), 0.88
(3H,t,J=6.8Hz)．

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｎ 1/14 Ａ 7236−4ＢＣ１２Ｐ 7/44 8114−4Ｂ 17/04 7432−4Ｂ // Ｃ１２Ｎ 9/99 (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 7/44 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 17/04 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者ジエラルド・エフ・ビルズアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07203、ローズル、オールデン・ロード・ 401 (72)発明者ラツセル・ビー・リンガムアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07060、ウオツチヤン、ジヨアンナ・レーン・５ (72)発明者キース・シー・シルバーマンアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 08873、サマーセツト、スウイートブライアー・ロード・８ (72)発明者デボラ・エル・ジンクアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07726、マナラパン、ブレンヘイム・ロード・37 (56)参考文献ＰＨＹＴＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，1977, Ｖｏｌ．16，134−135 ＰＨＹＴＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，1982, Ｖｏｌ．21，Ｎｏ．７，1786−1788

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】構造式（Ｉ）：【化１】〔式中、X-X はCH=CH （シス）、CH=CH （トランス）又
はエチレンであり；Ｒ¹及びＲ²は、それぞれ独立に、
a)水素、b)Ｃ₁〜Ｃ₅アルキル又はc)i)フェニル又はi
i) メチル、メトキシ、ハロゲン（Cl、Br、Ｆ、Ｉ）若
しくはヒドロキシで置換されたフェニルで置換されたＣ
₁〜Ｃ₅アルキルである〕を有し、ファルネシル蛋白質
トランスフェラーゼを阻害するか、或いはファルネシル
蛋白質トランスフェラーゼの阻害剤のプロドラッグをな
す化合物、或いはＲ¹及びＲ²の少なくとも一方が水素
である式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項２】構造式（II）：【化２】〔式中、X-X はCH=CH （シス）、CH=CH （トランス）又
はエチレンである〕の化合物の治療有効量を含む、ファ
ルネシル蛋白質トランスフェラーゼを阻害し、発癌遺伝
子蛋白質Ras がファルネシル化するのを防止するための
医薬組成物。
【請求項３】式：【化３】である、請求項１記載の化合物。
【請求項４】 Chaetomella acutiseta の醗酵により得
られ、それから単離される請求項３記載の化合物。
【請求項５】請求項１記載の化合物の治療有効量及び
医薬的に許容可能な担体とを含む、ファルネシル蛋白質
トランスフェラーゼを阻害し、発癌遺伝子蛋白質Ras が
ファルネシル化するのを防止するための医薬組成物。
【請求項６】請求項１記載の化合物又は請求項２記載
の組成物の治療有効量及び医薬的に許容可能な担体とを
含む、癌治療用医薬組成物。
【請求項７】構造：【化４】の化合物及び構造：【化５】の化合物から成る群から選ばれた化合物を回収可能な量
で産生する能力のある、生理的に純粋なChaetomella ac
utiseta MF5685 (ATCC 74113) 培養物、又はその活性変
異体。
【請求項８】構造：【化６】の化合物及び構造：【化７】の化合物から成る群から選ばれた化合物を回収可能な量
で産生する能力のある、Chaetomella acutiseta MF5685
(ATCC 74113) 培養物、又はその活性変異体。
【請求項９】構造：【化８】の化合物及び構造：【化９】の化合物から成る群から選ばれた化合物を得る方法であ
って、Chaetomella acutiseta MF5685 (ATCC 74113) 又
はその活性変異体を上記化合物産生に適する条件下に培
養し、当該化合物を回収することを含む方法。