JPH0734752B2 - アラキドン酸及びこれを含有する脂質の製造方法 - Google Patents
アラキドン酸及びこれを含有する脂質の製造方法Info
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- JPH0734752B2 JPH0734752B2 JP62015920A JP1592087A JPH0734752B2 JP H0734752 B2 JPH0734752 B2 JP H0734752B2 JP 62015920 A JP62015920 A JP 62015920A JP 1592087 A JP1592087 A JP 1592087A JP H0734752 B2 JPH0734752 B2 JP H0734752B2
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- arachidonic acid
- culture
- methyl
- medium
- fatty acid
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は醗酵法によるアラキドン酸及びこれを含有する
脂質の製造方法に関する。
脂質の製造方法に関する。
従来から、微生物によるアラキドン酸の生産方法として
は、炭素源として、炭水化物、又は炭化水素を用い、微
生物として、ペニシリューム（Penicillium）属、アス
ペルギルス（Aspergillus）属、ロードトルラ（Rhodoto
rula）属、又はフザリューム（Fusarium）属に属する微
生物を使用する方法が報告されている（特公昭56−1923
1,56−19232,56−19233を参照のこと）。
は、炭素源として、炭水化物、又は炭化水素を用い、微
生物として、ペニシリューム（Penicillium）属、アス
ペルギルス（Aspergillus）属、ロードトルラ（Rhodoto
rula）属、又はフザリューム（Fusarium）属に属する微
生物を使用する方法が報告されている（特公昭56−1923
1,56−19232,56−19233を参照のこと）。
しかしながら、いずれの方法においても収量が低く、ま
たは培養時間が長く、あるいは、工程が複雑である。
たは培養時間が長く、あるいは、工程が複雑である。
また、モルティエレラ（Mortierella）属の微生物を用
いるアラキドン酸の製造方法は知られていない。
いるアラキドン酸の製造方法は知られていない。
本発明は、従来アラキドン酸を生産する能力を有するこ
とが知られていなかったモルティエレラ属微生物を使用
して、安価な常用の培地を用いて、従来法より短い培養
時間で、高収率で、しかも単純な工程でアラキドン酸及
びこれを含有する脂質を製造することができる方法を提
供しようとするものである。
とが知られていなかったモルティエレラ属微生物を使用
して、安価な常用の培地を用いて、従来法より短い培養
時間で、高収率で、しかも単純な工程でアラキドン酸及
びこれを含有する脂質を製造することができる方法を提
供しようとするものである。
上記の目的はモルティエレラ属に属してアラキドン酸生
産能を有する微生物を培養液してアラキドン酸、又はア
ラキドン酸を含有する脂質を生成せしめ、そしてアラキ
ドン酸を採取することを特徴とするアラキドン酸の製造
方法；及びモルティエレラ属に属しアラキドン酸生産能
を有する微生物を培養してアラキドン酸を含有する脂質
を採取することを特徴とするアラキドン酸を含有する脂
質の製造方法により達成される。
産能を有する微生物を培養液してアラキドン酸、又はア
ラキドン酸を含有する脂質を生成せしめ、そしてアラキ
ドン酸を採取することを特徴とするアラキドン酸の製造
方法；及びモルティエレラ属に属しアラキドン酸生産能
を有する微生物を培養してアラキドン酸を含有する脂質
を採取することを特徴とするアラキドン酸を含有する脂
質の製造方法により達成される。
本発明においては、モルティエレラ属に属し、アラキド
ン酸生産能を有する微生物であれば、すべて使用するこ
とができる。このような微生物として、例えばモルティ
エレラ・エロンガタ（Mortierella elongata）IFO 857
0、モルティエレラ・エキシグア（Mortierella exigu
a）IFO 8571、モルティエレラ・ヒグロフィラ（Mortier
ella hygrophila）IFO 5941等を挙げることができる。
これらの菌株はいずれも、財団法人醗酵研究所からなん
ら制限なく入手することができる。
ン酸生産能を有する微生物であれば、すべて使用するこ
とができる。このような微生物として、例えばモルティ
エレラ・エロンガタ（Mortierella elongata）IFO 857
0、モルティエレラ・エキシグア（Mortierella exigu
a）IFO 8571、モルティエレラ・ヒグロフィラ（Mortier
ella hygrophila）IFO 5941等を挙げることができる。
これらの菌株はいずれも、財団法人醗酵研究所からなん
ら制限なく入手することができる。
また、本発明者らが土壌から分離した菌株モルティエチ
レラ・エロンガタSAM 0219（微工研条寄第1239号）を使
用することもできる。
レラ・エロンガタSAM 0219（微工研条寄第1239号）を使
用することもできる。
次に、上記の菌株SAM 0219（微工研条寄第1239号）の菌
学的性質を記載する。
学的性質を記載する。
各培地における生育状態 培養条件:25℃、暗黒下 1.麦芽エキス寒天培地 コロニーの生育は良好、培養２日目のコロニーは直径28
−31mm、培養５日目のコロニーは直径65−72mm、コロニ
ーは浅裂状を呈する、気菌糸の発達は乏しい、胞子のう
胞子の形成は良好、胞子のう柄は気菌糸より生じる、ニ
ンニクに類似した臭いあり。
−31mm、培養５日目のコロニーは直径65−72mm、コロニ
ーは浅裂状を呈する、気菌糸の発達は乏しい、胞子のう
胞子の形成は良好、胞子のう柄は気菌糸より生じる、ニ
ンニクに類似した臭いあり。
2.バレイショ・ブドウ糖寒天培地 コロニーの生育は良好、培養２日目のコロニーは直径27
−31mm、培養５日目のコロニーは直径75−80mm、コロニ
ーはバラの花状を呈する、コロニー中心部で気菌糸が著
しく発達する、コロニーの裏側は黄白色あるいは黄色、
胞子のう胞子の形成は不良、ニンニクに類似した臭いあ
り、臭いはやや強い。
−31mm、培養５日目のコロニーは直径75−80mm、コロニ
ーはバラの花状を呈する、コロニー中心部で気菌糸が著
しく発達する、コロニーの裏側は黄白色あるいは黄色、
胞子のう胞子の形成は不良、ニンニクに類似した臭いあ
り、臭いはやや強い。
3.ツァペック寒天培地 コロニーの生育は比較的良好、培養２日目のコロニーの
直径は22−24mm、培養５日目のコロニーの直径は50−53
mm、気菌糸の発達は乏しい、気菌糸が密にからまりあう
ことがある。胞子のう胞子の形成は非常に良好、胞子の
う柄は気菌糸より生じる。ニンニクに類似した臭いあ
り。
直径は22−24mm、培養５日目のコロニーの直径は50−53
mm、気菌糸の発達は乏しい、気菌糸が密にからまりあう
ことがある。胞子のう胞子の形成は非常に良好、胞子の
う柄は気菌糸より生じる。ニンニクに類似した臭いあ
り。
4.LCA寒天培地（培地の調製方法は、三浦宏一郎、工藤
光代著“水生不完全菌のための一寒天培地”日本菌学会
会報11巻、116−118頁、1970年に従った） コロニーの生育は良好、培養２日目のコロニーの直径は
27−29mm、培養５日目のコロニーは直径64−66mm、コロ
ニーは浅裂状を呈する、気菌糸の発達はコロニーの中心
部を除いて乏しい、胞子のう胞子の形成は良好。胞子の
う柄は気菌糸より生じる。ニンニクに類似した臭いあ
り。
光代著“水生不完全菌のための一寒天培地”日本菌学会
会報11巻、116−118頁、1970年に従った） コロニーの生育は良好、培養２日目のコロニーの直径は
27−29mm、培養５日目のコロニーは直径64−66mm、コロ
ニーは浅裂状を呈する、気菌糸の発達はコロニーの中心
部を除いて乏しい、胞子のう胞子の形成は良好。胞子の
う柄は気菌糸より生じる。ニンニクに類似した臭いあ
り。
検鏡観察 各培地の検鏡標本およびコロニーの直接検鏡で、胞子の
う柄、胞子のう柄の分岐の仕方、胞子のう、胞子のう胞
子などを観察した。
う柄、胞子のう柄の分岐の仕方、胞子のう、胞子のう胞
子などを観察した。
胞子のう柄は長さ87.5−320μｍ、幅は基部で３−7.5μ
ｍ、先端に向けて先細り、1.0−2.5μｍとなる。胞子の
う柄はしばしば基部で分岐する。胞子のうは球形、直径
15−30μｍ、内部に多数の胞子のう胞子を含む、離脱後
やや不明瞭なカラーを残す。胞子のう胞子は楕円形、希
に腎臓形、表面は平滑、7.5−12.5×５−7.5μｍ、厚膜
胞子は比較的多数形成される。単独、希に連鎖すること
がある。時に数本の菌糸を周囲に出すことがある。楕円
形また亜球形、12.5−30×7.5−15μｍ。または直径12.
5−15μｍ。接合胞子は観察されない。
ｍ、先端に向けて先細り、1.0−2.5μｍとなる。胞子の
う柄はしばしば基部で分岐する。胞子のうは球形、直径
15−30μｍ、内部に多数の胞子のう胞子を含む、離脱後
やや不明瞭なカラーを残す。胞子のう胞子は楕円形、希
に腎臓形、表面は平滑、7.5−12.5×５−7.5μｍ、厚膜
胞子は比較的多数形成される。単独、希に連鎖すること
がある。時に数本の菌糸を周囲に出すことがある。楕円
形また亜球形、12.5−30×7.5−15μｍ。または直径12.
5−15μｍ。接合胞子は観察されない。
3.生理的性質 最適生育条件 pH:6−９ 温度:20−30℃ 生育の範囲 pH:4−10 温度:5−40℃ 以上の菌学的諸性質に従い本発明の菌株（SAM−0219）
の分類学的位置の検索を、J.A.von Arx,“The Genera o
f Fungi sporulating in Pure Culture,"3rd ed.,J.Cra
mer,1981およびK.H.Domsch,W.Gams,＆ T.−H.Anderson,
“Compendium of Soil Fungi,“Academic Press.1980に
準拠して求めると、胞子のう柄の先端に球状の胞子のう
を形成する、柱軸を持たない、胞子のう胞子に付属糸が
ない、培養菌糸がニンニクに類似した臭いを発する、と
いうことから本菌株はMortierelia属に属する真菌であ
ると考えられる。
の分類学的位置の検索を、J.A.von Arx,“The Genera o
f Fungi sporulating in Pure Culture,"3rd ed.,J.Cra
mer,1981およびK.H.Domsch,W.Gams,＆ T.−H.Anderson,
“Compendium of Soil Fungi,“Academic Press.1980に
準拠して求めると、胞子のう柄の先端に球状の胞子のう
を形成する、柱軸を持たない、胞子のう胞子に付属糸が
ない、培養菌糸がニンニクに類似した臭いを発する、と
いうことから本菌株はMortierelia属に属する真菌であ
ると考えられる。
そこで、W.Gams,“A key to the species of Mortierel
la."Persoonia ９,381−391,1977に準拠して既知のMort
ierella属の種類と菌学的諸性質を比較すると、本菌株
はコロニーがビロード状でない、培養菌糸がニンニクに
類似した臭いを発する、胞子のう柄が長さ87.5−320μ
ｍで分岐は下部でのみ生じ、葡萄の房状に分岐しない、
胞子のうは内部に多数の胞子のう胞子を含む、というこ
とからMortierella属Mortierella亜属（Sugem.Morti−e
rella）Hygrophila節（Sect.Hygrophila）に含まれると
考えられる。Hygrophila節には22種が含まれている。本
菌株とこれら22種と菌学的諸性質を比較すると、本菌株
はMortierella zychae,M.elongatula,およびM.elongata
の３種に類似すると考えられる。そこで、K.H.Domsch,
W.Gams,＆ T,−H.Anderson,“Compendium of Soll Fung
i,“Academic Press,1980、およびW.Gams,“Some new o
f noteworthy species of Mortierella,"Persoonia ９,
111−140,1976、およびG.Linnemann,“Mortierella Coe
mans 1863."H.Zycha＆R.Siepmann."Mucorales Eine Bes
chreibung Aller Gattungen und Arten dieser Pilzgru
ppe.“pp.155−241,J.Cramer,1969を参考にして、本菌
株とこれら３種と菌学的諸性質を比較した。本菌体は、
M.zychaeとは胞子のう柄の長さと基部の幅、胞子のうの
大きさで、明瞭に異なる。M.elongaulaとは胞子のう胞
子の形態と大きさで、明瞭に異なる。M.elongataとは胞
子のう柄がやや短い、厚膜胞子の形態が楕円形または亜
球形で希に連鎖することがあり、さらに厚膜胞子がとき
に数本の菌糸を周囲に出す、という点で異なるが、本発
明者らはこのような差異は本菌株をMortierella elonga
taと別種であるとするには十分でないと判断した。そこ
で、本発明者らは本菌株をMortierella elongata SAM
0219と同定した。SAM 0219株は昭和61年３月19日に通
商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（FRI）に受
託番号 FERM BP−1239として寄託されている。
la."Persoonia ９,381−391,1977に準拠して既知のMort
ierella属の種類と菌学的諸性質を比較すると、本菌株
はコロニーがビロード状でない、培養菌糸がニンニクに
類似した臭いを発する、胞子のう柄が長さ87.5−320μ
ｍで分岐は下部でのみ生じ、葡萄の房状に分岐しない、
胞子のうは内部に多数の胞子のう胞子を含む、というこ
とからMortierella属Mortierella亜属（Sugem.Morti−e
rella）Hygrophila節（Sect.Hygrophila）に含まれると
考えられる。Hygrophila節には22種が含まれている。本
菌株とこれら22種と菌学的諸性質を比較すると、本菌株
はMortierella zychae,M.elongatula,およびM.elongata
の３種に類似すると考えられる。そこで、K.H.Domsch,
W.Gams,＆ T,−H.Anderson,“Compendium of Soll Fung
i,“Academic Press,1980、およびW.Gams,“Some new o
f noteworthy species of Mortierella,"Persoonia ９,
111−140,1976、およびG.Linnemann,“Mortierella Coe
mans 1863."H.Zycha＆R.Siepmann."Mucorales Eine Bes
chreibung Aller Gattungen und Arten dieser Pilzgru
ppe.“pp.155−241,J.Cramer,1969を参考にして、本菌
株とこれら３種と菌学的諸性質を比較した。本菌体は、
M.zychaeとは胞子のう柄の長さと基部の幅、胞子のうの
大きさで、明瞭に異なる。M.elongaulaとは胞子のう胞
子の形態と大きさで、明瞭に異なる。M.elongataとは胞
子のう柄がやや短い、厚膜胞子の形態が楕円形または亜
球形で希に連鎖することがあり、さらに厚膜胞子がとき
に数本の菌糸を周囲に出す、という点で異なるが、本発
明者らはこのような差異は本菌株をMortierella elonga
taと別種であるとするには十分でないと判断した。そこ
で、本発明者らは本菌株をMortierella elongata SAM
0219と同定した。SAM 0219株は昭和61年３月19日に通
商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（FRI）に受
託番号 FERM BP−1239として寄託されている。
本発明に使用される菌株を培養する為には、その菌株の
胞子、菌糸又は予め培養して得られた前培養液を、液体
培地又は固体培地に接種し培養する。液体培地の場合
に、炭素源としてはグルコース、フラクトース、キシロ
ース、サッカロース、マルトース、可溶性デンプン、糖
蜜、グリセロール、マンニトール等の一般的に使用され
ているものがいずれも使用できるが、これらに限られる
ものではない。窒素源としてはペプトン、酵母エキス、
麦芽エキス、肉エキス、カザミノ酸、コーンステイプリ
カー等の天然窒素源の他に、尿素等の有機窒素源、なら
びに硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硝酸アンモニ
ウム等の無機窒素源を用いることができる。この他必要
に応じリン酸塩、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸銅等
の無機塩及びビタミン等も微量栄養源とて使用できる。
これらの培地成分は微生物の生育を害しない濃度であれ
ば特に制限はない。実用上一般に、炭素源は0.1〜30重
量％、好ましくは１〜10重量％、窒素源は0.01〜５重量
％、好ましくは0.1〜２重量％の濃度とするのが良い。
又、培養温度は５〜40℃、好ましくは20〜30℃とし、培
地のpHは４〜10、好ましくは６〜９として、通気撹拌培
養、振盪培養、又は静置培養を行なう。培養は通常２〜
10日間行う。
胞子、菌糸又は予め培養して得られた前培養液を、液体
培地又は固体培地に接種し培養する。液体培地の場合
に、炭素源としてはグルコース、フラクトース、キシロ
ース、サッカロース、マルトース、可溶性デンプン、糖
蜜、グリセロール、マンニトール等の一般的に使用され
ているものがいずれも使用できるが、これらに限られる
ものではない。窒素源としてはペプトン、酵母エキス、
麦芽エキス、肉エキス、カザミノ酸、コーンステイプリ
カー等の天然窒素源の他に、尿素等の有機窒素源、なら
びに硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硝酸アンモニ
ウム等の無機窒素源を用いることができる。この他必要
に応じリン酸塩、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸銅等
の無機塩及びビタミン等も微量栄養源とて使用できる。
これらの培地成分は微生物の生育を害しない濃度であれ
ば特に制限はない。実用上一般に、炭素源は0.1〜30重
量％、好ましくは１〜10重量％、窒素源は0.01〜５重量
％、好ましくは0.1〜２重量％の濃度とするのが良い。
又、培養温度は５〜40℃、好ましくは20〜30℃とし、培
地のpHは４〜10、好ましくは６〜９として、通気撹拌培
養、振盪培養、又は静置培養を行なう。培養は通常２〜
10日間行う。
固体培地で培養する場合は、固形物重量に対して50〜10
0重量％の水を加えたふすま、もみがら、来ぬか等を用
い、５〜40℃、好ましくは20〜30℃の温度において、３
〜14日間培養を行う。この場合に必要に応じて培地中に
窒素源、無機塩類、微量栄養源を加えることができる。
0重量％の水を加えたふすま、もみがら、来ぬか等を用
い、５〜40℃、好ましくは20〜30℃の温度において、３
〜14日間培養を行う。この場合に必要に応じて培地中に
窒素源、無機塩類、微量栄養源を加えることができる。
アラキドン酸の生産量を増加せしめるためには、培地中
にヘキサデカンもしくはオクタデカンのごとき炭化水
素；オレイン酸もしくはリノール酸のごとき脂肪酸又は
その塩、例えばナトリウム塩もしくはカリウム塩；又は
オリーブ油、綿実油もしくはヤシ油のごとき油脂類を単
独で、又は組み合わせて存在せしめるのが好ましい。こ
れらの添加物は培養開始前の培地又は培養中の培養液に
添加することができる。これらの添加物は一度に添加す
ることもでき、又は連続的に、もしくは複数回に分けて
経時的に添加することもできる。培養開始前においては
炭化水素、脂肪酸もしくはその塩、又は油脂類の添加が
好ましく、培養中においては脂肪酸もしくはその塩、又
は油脂類の添加が好ましい。
にヘキサデカンもしくはオクタデカンのごとき炭化水
素；オレイン酸もしくはリノール酸のごとき脂肪酸又は
その塩、例えばナトリウム塩もしくはカリウム塩；又は
オリーブ油、綿実油もしくはヤシ油のごとき油脂類を単
独で、又は組み合わせて存在せしめるのが好ましい。こ
れらの添加物は培養開始前の培地又は培養中の培養液に
添加することができる。これらの添加物は一度に添加す
ることもでき、又は連続的に、もしくは複数回に分けて
経時的に添加することもできる。培養開始前においては
炭化水素、脂肪酸もしくはその塩、又は油脂類の添加が
好ましく、培養中においては脂肪酸もしくはその塩、又
は油脂類の添加が好ましい。
このように培養して、菌体内に、アラキドン酸を含有す
る脂質が生成蓄積される。液体培地を使用した場合に
は、培養菌体から、次のようにしてアラキドン酸の採取
を行なう。
る脂質が生成蓄積される。液体培地を使用した場合に
は、培養菌体から、次のようにしてアラキドン酸の採取
を行なう。
培養終了後、培養液より遠心分離及び濾過等の常用の固
液分離手段により培養菌体を得る。菌体は十分水洗し、
好ましくは乾燥する。乾燥は凍結乾燥、風乾等によって
行うことができる。乾燥菌体は、好ましくは窒素気流下
で有機溶媒によって抽出処理する。有機溶媒としてはエ
ーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、クロロホ
ルム、ジクロロメタン、石油エーテル等を用いることが
でき、またメタノールと石油エーテルの交互抽出や、ク
ロロホルムーメタノールー水の一層系の溶媒を用いた抽
出によっても良好な結果を得ることができる。抽出物か
ら減圧下で有機溶媒を留去することにより、高濃度のア
ラキドン酸を含有した脂質が得られる。
液分離手段により培養菌体を得る。菌体は十分水洗し、
好ましくは乾燥する。乾燥は凍結乾燥、風乾等によって
行うことができる。乾燥菌体は、好ましくは窒素気流下
で有機溶媒によって抽出処理する。有機溶媒としてはエ
ーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、クロロホ
ルム、ジクロロメタン、石油エーテル等を用いることが
でき、またメタノールと石油エーテルの交互抽出や、ク
ロロホルムーメタノールー水の一層系の溶媒を用いた抽
出によっても良好な結果を得ることができる。抽出物か
ら減圧下で有機溶媒を留去することにより、高濃度のア
ラキドン酸を含有した脂質が得られる。
また、上記の方法に代えて湿菌体を用いて抽出を行うこ
とができる。この場合にはメタノール、エタノール等の
水に対して相溶性の溶媒、又はこれらと水及び／又は他
の溶媒とから成る水に対して相溶性の混合溶媒を使用す
る。その他の手順は上記と同様である。
とができる。この場合にはメタノール、エタノール等の
水に対して相溶性の溶媒、又はこれらと水及び／又は他
の溶媒とから成る水に対して相溶性の混合溶媒を使用す
る。その他の手順は上記と同様である。
上記のようにして得られた脂質中には、アラキドン酸が
脂質化合物、例えば脂肪の構成成分として含まれてい
る。これらを、直接分離することもできるが、低級アル
コールとのエステル、例えばアラキドン酸メチルとして
分離するのが好ましい。このようなエステルにすること
により、他の脂質成分から容易に分離することができ、
また、培養中に生成する他の脂肪酸、例えばパルミチン
酸、オレイン酸、リノール酸等（これらも、アラキドン
酸のエステル化に際してエステル化される）から容易に
分離することができる。例えば、アラキドン酸のメチル
エステルを得るには、前記の抽出脂質を無水メタノール
−塩酸５％〜10％、BF3ーメタノール10％〜50％等によ
り、室温にて１〜24時間処理するのが好ましい。
脂質化合物、例えば脂肪の構成成分として含まれてい
る。これらを、直接分離することもできるが、低級アル
コールとのエステル、例えばアラキドン酸メチルとして
分離するのが好ましい。このようなエステルにすること
により、他の脂質成分から容易に分離することができ、
また、培養中に生成する他の脂肪酸、例えばパルミチン
酸、オレイン酸、リノール酸等（これらも、アラキドン
酸のエステル化に際してエステル化される）から容易に
分離することができる。例えば、アラキドン酸のメチル
エステルを得るには、前記の抽出脂質を無水メタノール
−塩酸５％〜10％、BF3ーメタノール10％〜50％等によ
り、室温にて１〜24時間処理するのが好ましい。
前記の処理液からアラキドン酸メチルエステルを回収す
るにはヘキサン、エーテル、酢酸エチル等の有機溶剤で
抽出するのが好ましい。次に、この抽出液を無水硫酸ナ
トリウム等により乾燥し、有機溶媒を好ましくは減圧下
で留去することにより主として脂肪酸エステルから成る
混合物が得られる。この混合物中には、目的とするアラ
キドン酸メチルエステルの他に、パルミチン酸メチルエ
ステル、ステアリン酸メチルエステル、オレイン酸メチ
ルエステル等が含まれている。これらの脂肪酸メチルエ
ステル混合物からアラキドン酸メチルエステルを単離す
るには、カラムクロマトグラフィー、低温結晶化法、尿
素包接体法等を、単独で、又は組み合わせて使用するこ
とができる。
るにはヘキサン、エーテル、酢酸エチル等の有機溶剤で
抽出するのが好ましい。次に、この抽出液を無水硫酸ナ
トリウム等により乾燥し、有機溶媒を好ましくは減圧下
で留去することにより主として脂肪酸エステルから成る
混合物が得られる。この混合物中には、目的とするアラ
キドン酸メチルエステルの他に、パルミチン酸メチルエ
ステル、ステアリン酸メチルエステル、オレイン酸メチ
ルエステル等が含まれている。これらの脂肪酸メチルエ
ステル混合物からアラキドン酸メチルエステルを単離す
るには、カラムクロマトグラフィー、低温結晶化法、尿
素包接体法等を、単独で、又は組み合わせて使用するこ
とができる。
こうして単離されたアラキドン酸メチルからアラキドン
酸を得るには、アルカリで加水分解した後、エーテル、
酢酸エチル等の有機溶媒で抽出すればよい。
酸を得るには、アルカリで加水分解した後、エーテル、
酢酸エチル等の有機溶媒で抽出すればよい。
また、アラキドン酸をそのメチルエステルを経ないで採
取するには、前記の抽出脂質をアルカリ分解（例えば５
％水酸化ナトリウムにより室温にて２〜３時間）した
後、この分液から、脂肪酸の抽出・精製に常用されてい
る方法により抽出・精製することができる。
取するには、前記の抽出脂質をアルカリ分解（例えば５
％水酸化ナトリウムにより室温にて２〜３時間）した
後、この分液から、脂肪酸の抽出・精製に常用されてい
る方法により抽出・精製することができる。
次に、実施例により、この発明をさらに具体的に説明す
る。
る。
実施例1. グルコース５％、ペプトン0.5％、酵母エキス0.3％及び
表芽エキス0.3％を含む培地（pH6.0）50mlを500ml容坂
口フラスコに入れ、120℃で20分間殺菌した。モルティ
エレラ・エロンガタSAM 0219（FERM BP−1239）１白金
耳を接種し、レシプロシェーカー（110rpm）により28℃
で５日間振盪培養した。培養後、濾過にて菌体を回収
し、十分水洗した後、凍結乾燥した。これにより、1.3g
の乾燥菌体を得た。この菌体より、クロロホルム−メタ
ノールー水の一層系の溶媒を用いるBligh ＆ Dyerの抽
出法によって総脂質を抽出したところ、320mgの脂質が
得られた。この脂質を無水メタノールー塩酸（95:5）を
用いて20℃にて３時間処理してアラキドン酸のメチルエ
ステル化を行なった。これをエーテルで抽出して200mg
の脂肪酸メチルを得た。この脂肪酸メチルの組成はガス
クロマトグラフィーによる分析で、パルミチン酸メチル
９％、ステアリン酸メチル２％、オレイン酸メチル32
％、リノール酸メチル９％、γ−リノレン酸メチル10
％、アラキドン酸メチル20％、その他17％であることが
認められた。この混合脂肪酸メチルをカラムクロマトグ
ラフィーによって分離し、アラキドン酸メチル画分を分
取し、ロータリーエバポレーターによって溶媒を留去し
た結果、25mgの精製されたアラキドン酸メチルを得た。
本標品と市販のアラキドン酸メチル標準サンプルについ
て、ガスクロマトグラフィー分析、高速液体クロマトグ
ラフィー分析及び質量分析によって比較を行なったとこ
ろ、両者は、いずれの分析においても一致した。精製前
及び精製後の「アラキドン酸メチル」量は培地当り、そ
れぞれ0.84mg/ml、0.50mg/ml,乾燥菌体当り、それぞれ3
2mg/g、19mg/gであった。
表芽エキス0.3％を含む培地（pH6.0）50mlを500ml容坂
口フラスコに入れ、120℃で20分間殺菌した。モルティ
エレラ・エロンガタSAM 0219（FERM BP−1239）１白金
耳を接種し、レシプロシェーカー（110rpm）により28℃
で５日間振盪培養した。培養後、濾過にて菌体を回収
し、十分水洗した後、凍結乾燥した。これにより、1.3g
の乾燥菌体を得た。この菌体より、クロロホルム−メタ
ノールー水の一層系の溶媒を用いるBligh ＆ Dyerの抽
出法によって総脂質を抽出したところ、320mgの脂質が
得られた。この脂質を無水メタノールー塩酸（95:5）を
用いて20℃にて３時間処理してアラキドン酸のメチルエ
ステル化を行なった。これをエーテルで抽出して200mg
の脂肪酸メチルを得た。この脂肪酸メチルの組成はガス
クロマトグラフィーによる分析で、パルミチン酸メチル
９％、ステアリン酸メチル２％、オレイン酸メチル32
％、リノール酸メチル９％、γ−リノレン酸メチル10
％、アラキドン酸メチル20％、その他17％であることが
認められた。この混合脂肪酸メチルをカラムクロマトグ
ラフィーによって分離し、アラキドン酸メチル画分を分
取し、ロータリーエバポレーターによって溶媒を留去し
た結果、25mgの精製されたアラキドン酸メチルを得た。
本標品と市販のアラキドン酸メチル標準サンプルについ
て、ガスクロマトグラフィー分析、高速液体クロマトグ
ラフィー分析及び質量分析によって比較を行なったとこ
ろ、両者は、いずれの分析においても一致した。精製前
及び精製後の「アラキドン酸メチル」量は培地当り、そ
れぞれ0.84mg/ml、0.50mg/ml,乾燥菌体当り、それぞれ3
2mg/g、19mg/gであった。
実施例２ 実施例１と同じ組成の培地５を15ジャーファーメン
ターに仕込み、120℃で40分間殺菌後、モルティエレラ
・エロンガタSAM 0129（FERM EP−1239）の前培養液2
00mlを接種した。30℃、通気量0.5v.v.m.で３日間通気
撹拌培養を行ない、得られた湿菌体360g（乾燥重量110
g）について、実施例１と同様に抽出、加水分解、メチ
ルエステル化を行なったところ、総脂質29g、混合脂肪
酸メチル18gを得た。このものの組成は、パルミチン酸
メチル８％、スチアリン酸メチル１％、オレイン酸メチ
ル29％、リノール酸メチル12％、γ−リノレン酸メチル
11％、アラキドン酸メチル22％、その他17％であること
が認められた。アラキドン酸メチルの生成量は培地当
り、0.79g/、乾燥菌体当り36mg/gであった。
ターに仕込み、120℃で40分間殺菌後、モルティエレラ
・エロンガタSAM 0129（FERM EP−1239）の前培養液2
00mlを接種した。30℃、通気量0.5v.v.m.で３日間通気
撹拌培養を行ない、得られた湿菌体360g（乾燥重量110
g）について、実施例１と同様に抽出、加水分解、メチ
ルエステル化を行なったところ、総脂質29g、混合脂肪
酸メチル18gを得た。このものの組成は、パルミチン酸
メチル８％、スチアリン酸メチル１％、オレイン酸メチ
ル29％、リノール酸メチル12％、γ−リノレン酸メチル
11％、アラキドン酸メチル22％、その他17％であること
が認められた。アラキドン酸メチルの生成量は培地当
り、0.79g/、乾燥菌体当り36mg/gであった。
又、培養終了後、濾過によって得られた培養濾液4,350m
lを乾燥後、実施例１と同様に抽出、加水分解、メチル
エステル化を行なったところ、25％のアラキドン酸メチ
ルを含む混合脂肪酸メチル156mgを得た。
lを乾燥後、実施例１と同様に抽出、加水分解、メチル
エステル化を行なったところ、25％のアラキドン酸メチ
ルを含む混合脂肪酸メチル156mgを得た。
実施例３ モルティエレラ エキシグア（Mortierella exigua,IFO
8571）、及びモルティエレラ ヒグロフィラMortiere
lla hygrophila,IFO 5941）について実施例１と同様な
操作を行なったところ、それぞれ72mg、95mgの脂肪酸メ
チルを得た。
8571）、及びモルティエレラ ヒグロフィラMortiere
lla hygrophila,IFO 5941）について実施例１と同様な
操作を行なったところ、それぞれ72mg、95mgの脂肪酸メ
チルを得た。
これらの脂肪酸メチル中に含まれるアラキドン酸メチル
を単離・精製したところ、それぞれ12mg、及び20mgであ
った。
を単離・精製したところ、それぞれ12mg、及び20mgであ
った。
実施例４ グルコース２％、酵母エキス１％、Tween 20 0.2％、及
び種々の炭化水素、脂肪酸ナトリウム、又は油脂0.5％
を含む培地（pH6.0）20mlを100ml容マイヤーに入れ、12
0℃で20分間殺菌した。モルティエレラ・エロンガタ S
AM 0129（FERM BP−1239）１白金耳を接種し、ロータ
リーシェーカー（200rpm）により28℃で５日間培養し
た。得られた菌体について、実施例１と同様に抽出、加
水分解、及びメチルエステル化を行なった。培地に添加
した種々の炭化水素、脂肪酸ナトリウム、及び油脂それ
ぞれについて、得られた乾燥菌体重量、総脂質量、総脂
肪酸メチル量、アラキドン酸メチル含量、及び培地当り
のアラキドン酸メチル生成量は下表のようになった。
び種々の炭化水素、脂肪酸ナトリウム、又は油脂0.5％
を含む培地（pH6.0）20mlを100ml容マイヤーに入れ、12
0℃で20分間殺菌した。モルティエレラ・エロンガタ S
AM 0129（FERM BP−1239）１白金耳を接種し、ロータ
リーシェーカー（200rpm）により28℃で５日間培養し
た。得られた菌体について、実施例１と同様に抽出、加
水分解、及びメチルエステル化を行なった。培地に添加
した種々の炭化水素、脂肪酸ナトリウム、及び油脂それ
ぞれについて、得られた乾燥菌体重量、総脂質量、総脂
肪酸メチル量、アラキドン酸メチル含量、及び培地当り
のアラキドン酸メチル生成量は下表のようになった。
頻準培地に炭化水素、脂肪酸、油脂類などを添加するこ
とにより、対照無添加区よりも、アラキドン酸生成量は
10〜80％上昇した。
とにより、対照無添加区よりも、アラキドン酸生成量は
10〜80％上昇した。
実施例５ グルコース２％、及び酵母エキス１％を含む培地（pH6.
0）20mlを100ml容マイヤーに入れ、120℃で20分間殺菌
した。モルティエレラ・エロンガタ SAM 0219（FERM
BP−1239）１白金耳を接種し、ロータリーシェーカー
（200rpm）により28℃で４日間培養後、種々の脂肪酸ナ
トリウム又は油脂100mgを120℃で15分間殺菌後、添加
し、さらに同様にして２日間培養し。得られた菌体につ
いて、実施例１と同様に抽出、加水分解、及びメチルエ
ステル化を行なった。培地に添加した種々の、脂肪酸ナ
トリウム、及び油脂それぞれについて、得られた乾燥菌
体当り、及び培地当りのアラキドン酸メチル生成量は下
表のようになった。
0）20mlを100ml容マイヤーに入れ、120℃で20分間殺菌
した。モルティエレラ・エロンガタ SAM 0219（FERM
BP−1239）１白金耳を接種し、ロータリーシェーカー
（200rpm）により28℃で４日間培養後、種々の脂肪酸ナ
トリウム又は油脂100mgを120℃で15分間殺菌後、添加
し、さらに同様にして２日間培養し。得られた菌体につ
いて、実施例１と同様に抽出、加水分解、及びメチルエ
ステル化を行なった。培地に添加した種々の、脂肪酸ナ
トリウム、及び油脂それぞれについて、得られた乾燥菌
体当り、及び培地当りのアラキドン酸メチル生成量は下
表のようになった。
培養途中（培養４日後）に、脂肪酸、油脂類などを添加
することにより、対照無添加区よりも、アラキドン酸生
成量は10〜60％上昇した。
することにより、対照無添加区よりも、アラキドン酸生
成量は10〜60％上昇した。
Claims (6)
- 【請求項１】モルティエレラ（Mortierella）属に属し
アラキドン酸生産能を有する微生物を培養してアラキド
ン酸、又はアラキドン酸を含有する脂質を生成せしめ、
そしてアラキドン酸を採取することを特徴とするアラキ
ドン酸の製造方法。 - 【請求項２】培養開始前の培地に炭化水素、脂肪酸もし
くは脂肪酸塩、または油脂を添加することを特徴とする
特許請求の範囲第１項記載の方法。 - 【請求項３】培養中の培養液に脂肪酸もしくは脂肪酸
塩、または油脂を添加することを特徴とする特許請求の
範囲第１項記載の方法。 - 【請求項４】モルティエレラ（Mortierella）属に属し
アラキドン酸生産能を有する微生物を培養してアラキド
ン酸を含有する脂質を採取することを特徴とするアラキ
ドン酸を含有する脂質の製造方法。 - 【請求項５】培養開始前の培地に炭化水素、脂肪酸もし
くは脂肪酸塩、または油脂を添加することを特徴とする
特許請求の範囲第４項記載の方法。 - 【請求項６】培養中の培養液に脂肪酸もしくは脂肪酸
塩、または油脂を添加することを特徴ととする特許請求
の範囲第４項記載の方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62015920A JPH0734752B2 (ja) | 1986-03-31 | 1987-01-28 | アラキドン酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
| CA 531638 CA1340433C (en) | 1986-03-31 | 1987-03-10 | Process for production of arachidonic acid |
| AT87308690T ATE87332T1 (de) | 1987-01-28 | 1987-09-30 | Verfahren zur herstellung von arachidonsaeure. |
| DE3785023T DE3785023T3 (de) | 1987-01-28 | 1987-09-30 | Verfahren zur Herstellung von Arachidonsäure. |
| EP87308690A EP0276541B2 (en) | 1987-01-28 | 1987-09-30 | Process for production of arachidonic acid |
| ES87308690T ES2039451T5 (es) | 1987-01-28 | 1987-09-30 | Procedimiento para la produccion de acido araquidonico. |
| US07/588,473 US5204250A (en) | 1986-03-31 | 1990-09-26 | Process for production of arachidonic acid |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7127086 | 1986-03-31 | ||
| JP61-71270 | 1986-03-31 | ||
| JP62015920A JPH0734752B2 (ja) | 1986-03-31 | 1987-01-28 | アラキドン酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8140299A Division JP2848810B2 (ja) | 1986-03-31 | 1996-06-03 | アラキドン酸高含有脂肪の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6344891A JPS6344891A (ja) | 1988-02-25 |
| JPH0734752B2 true JPH0734752B2 (ja) | 1995-04-19 |
Family
ID=26352155
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62015920A Expired - Lifetime JPH0734752B2 (ja) | 1986-03-31 | 1987-01-28 | アラキドン酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0734752B2 (ja) |
| CA (1) | CA1340433C (ja) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02142486A (ja) * | 1988-11-25 | 1990-05-31 | Lion Corp | 不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法 |
| JP3792309B2 (ja) | 1996-08-30 | 2006-07-05 | サントリー株式会社 | 不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法 |
| JP4633204B2 (ja) * | 1996-10-11 | 2011-02-16 | サントリーホールディングス株式会社 | アラキドン酸含有食用油脂およびそれを含有する食品 |
| US6071963A (en) * | 1996-11-06 | 2000-06-06 | Roche Vitamins Inc. | Water dispersible compositions |
| JP4197744B2 (ja) | 1996-12-27 | 2008-12-17 | サントリー株式会社 | 微生物培養用培地、並びに不飽和脂肪酸またはこれを含有する脂質の製造方法 |
| WO2001012780A1 (en) | 1999-08-13 | 2001-02-22 | Suntory Limited | Microorganism secreting out lipid and process for producing the lipid and lipid balls having the lipid encapsulating therein by using the microorganism |
| JP4088097B2 (ja) | 2002-04-26 | 2008-05-21 | サントリー株式会社 | 高度不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法 |
| US7998712B2 (en) | 2002-09-13 | 2011-08-16 | Suntory Holdings Limited | Process for production of transesterified oils/fats or triglycerides |
| AU2003272095B2 (en) | 2002-10-11 | 2010-04-08 | Nippon Suisan Kaisha, Ltd. | Process for producing microbial fat or oil having lowered unsaponifiable matter content and said fat or oil |
| DK1776450T3 (da) | 2004-08-12 | 2010-06-21 | Nippon Suisan Kaisha Ltd | Fremgangsmåde til polyumættet fedtsyreproduktion under anvendelse af hidtil ukendt cellepræservationsteknik |
| US8241868B2 (en) | 2005-02-08 | 2012-08-14 | Nippon Suisan Kaisha, Ltd. | Production of polyunsaturated fatty acids using cell treatment method |
| JP4849806B2 (ja) | 2005-02-08 | 2012-01-11 | 日本水産株式会社 | 新規な菌体処理方法を用いた高度不飽和脂肪酸の製造方法 |
| JP5649785B2 (ja) | 2007-01-26 | 2015-01-07 | 国立大学法人 宮崎大学 | 油脂含有物あるいは油脂中のドコサヘキサエン酸含有率を増加する方法 |
| JP6199580B2 (ja) * | 2013-03-04 | 2017-09-20 | ミヨシ油脂株式会社 | ネルボン酸を含む油脂組成物の製造方法、及びネルボン酸生産微生物をスクリーニングする方法 |
| US9765345B2 (en) | 2013-03-27 | 2017-09-19 | Suntory Holdings Limited | Promoter exhibiting high expression activity in Mortierella microorganisms |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5264484A (en) * | 1975-11-22 | 1977-05-27 | Hiroshi Iizuka | Production of arachidonic aczd |
| JPS5264483A (en) * | 1975-11-22 | 1977-05-27 | Hiroshi Iizuka | Production of arachidonic aczd |
| JPS5264482A (en) * | 1975-11-22 | 1977-05-27 | Hiroshi Iizuka | Production of arachidonic aczd |
| JPS60218558A (ja) * | 1984-04-14 | 1985-11-01 | Natl House Ind Co Ltd | 家屋の空調構造 |
| JPH0716424B2 (ja) * | 1985-10-01 | 1995-03-01 | ライオン株式会社 | アラキドン酸含有脂質の製造方法 |
| JP3068371B2 (ja) * | 1993-06-23 | 2000-07-24 | 三菱重工業株式会社 | 高濃度亜硫酸ガス含有ガスの脱硫方法及び装置 |
-
1987
- 1987-01-28 JP JP62015920A patent/JPH0734752B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-03-10 CA CA 531638 patent/CA1340433C/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6344891A (ja) | 1988-02-25 |
| CA1340433C (en) | 1999-03-16 |
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