JPH0737479B2

JPH0737479B2 - ムラミルジペプチド誘導体

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Publication number: JPH0737479B2
Application number: JP2172513A
Authority: JP
Inventors: ルイ・シュディド; ペーター・デュコル; ピエール・ルフランシェ; ペーター・シュエツ
Original assignee: サンド・アクチエンゲゼルシャフト
Priority date: 1989-06-29
Filing date: 1990-06-28
Publication date: 1995-04-26
Anticipated expiration: 2010-04-26
Also published as: IE902345A1; IL94885A; JPH03135998A; EP0406175A2; DE69023559D1; ATE130313T1; PT94517A; NZ234270A; ES2079464T3; PL163888B1; HU903880D0; AU5787590A; HUT54180A; EP0406175A3; KR910000775A; EP0406175B1; FI903232A0; DE69023559T2; AU636150B2; CA2019922A1

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］この発明は、式（Ｉ）［式中、アステリスク＊を付した炭素原子（以後、簡略
的に「Ｃ＊」と称す）は、ＲまたはＳ立体配置を有す
る］で示される３−Ｏ−［Ｎ−アセチルムラミル−Ｄ−イソ
グルタミニル］−1,2−ジ−Ｏ−パルミトイル−sn−グ
リセリン誘導体の形態に関するものである。以後、この
誘導体を簡略的に「本発明化合物」と称す。

［従来の技術および発明の構成］Ｃ＊がＲ立体配置を有する場合、対応するアミノ酸残基
はＬ−トレオニルである。Ｓ立体配置を有する場合、そ
れはＬ−アロトレオニルである。本発明化合物は、Ｃ＊
がＲ立体配置を有する場合が好ましい。上式から明らか
なように、この化合物は２種のアノマー形態を有する。

似た構造および関連活性を有する化合物は、例えばANVA
R EP165123により公知である。その中の４頁に記載され
た式は、本発明化合物を包含している。しかしながら、
本発明化合物については、上記文献において具体的な開
示も示唆も為されていない。本発明化合物は、上記文献
に記載された化合物よりも非常に有益な特性を有する。

また本発明化合物は、Ｌ−トレオニル−MDP-GDPおよび
Ｌ−アロトレオニル−MDP-GDPとも呼ばれ得る。

さらに、この発明は、式（II）［式中、Ｃ＊は前記の意味であり、R₁〜R₄は、独立して
ヒドロキシ−保護基である］の対応する化合物の脱保護を含む、式（Ｉ）で示される
化合物の製造方法を含む。

この発明の方法は、ヒドロキシ保護基脱離に関する常法
により行なわれ得る。出発物質は、α−またはβ−グリ
コシドアノマーまたはその混合物であり得る。脱保護は
１つまたは幾つかの反応段階により行なわれ得る。式
（Ｉ）で示される化合物は、通常両アノマー形態の混合
物として得られる。所望ならば、これらは慣用的方法に
より分離され得る。この方法は、例えば溶媒として酢酸
を用いて、例えば、好ましくはパラジウム炭素触媒中水
素により還元的に行なわれ得る。水素化を被りやすい任
意の慣用的ヒドロキシ保護基、例えばベンジルオキシカ
ルボニルまたはベンジルが使用され得る。R₁およびR₂は
また、一緒になって共通の保護基、例えばベンジリデン
を形成し得る。脱保護はまた、例えば酸性条件下で行な
われ得る。酸性条件下での脱保護に好ましい保護基は、
ｔ−ブトキシカルボニル（BOC）である。

出発物質はまた、慣用的方法、例えば下記反応式に従い
製造され得る。

上式中、Ｃ＊およびR₁〜R₄は、前記の意味であり、Ｒ′は、アミノ保護基であり、Ｘは、活性化カルボン酸形態であり、 BOPは、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス−
（ジメチルアミノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホス
フェート基であり、 BOCは、ｔ−ブトキシカルボニルである。

Ｒ′の脱離は、好ましくは酸性条件下で行なわれる。
Ｒ′は、好ましくはベンジルオキシカルボニルである。
Ｘは、好ましくは−OC（＝Ｏ）−Ｏアルキル、例えば−
OC（＝Ｏ）−OCH₂CH(CH₃)₂である。

以下、実施例によりこの発明を説明する。温度は全て摂
氏である。使用されている省略形は次の意味を有する。

BOC＝ｔ−ブトキシカルボニル。

Bz1＝ベンジル。

アロThr＝Ｌ−アロトレオニル。

Thr＝Ｌ−トレオニル。

Ｚ−Ｄ−iGln＝カルボベンズオキシ−Ｄ−イソグルタミ
ン。

Pd/C＝パラジウム炭素。

tBDMS＝ｔ−ブチルジメチルシリル。

［実施例］実施例１３−Ｏ−［Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ
−イソグルタミニル］−1,2−ジ−Ｏ−パルミトイル−s
n−グリセリン。

（Ｃ＊はＲ立体配置を有する） 120mgの３−Ｏ−［１−α−Ｏ−ベンジル−4,6−Ｏ−ベ
ンジリデン−Ｎ−アセチルムラミル−Ｏ−ベンジル−Ｌ
−トレオニル−Ｄ−イソグルタミニル］−1,2−ジ−Ｏ
−パルミトイル−sn−グリセリンを、20mlの100％酢酸
に溶かし、あらかじめ水素化した触媒［100％酢酸20ml
中、90mg10％Pd/C、15mg塩化パラジウム（PdCl₂）、水
素により45分間水素化］と反応させる。混合物を水素気
流下で２時間撹はんし、触媒をろ過し、溶液を濃縮し、
トルエンにより３回蒸発乾固する。溶離剤としてジクロ
ロメタン／メタノール／ジイソプロピルエーテル（4:1:
1）を用いて、残留物をシリカゲル・クロマトグラフィ
ーにかける。生成物を、溶離剤としてジクロロメタン／
メタノール（1:1）を用いたセファデックスLH-20による
クロマトグラフィーにかける。溶液を濃縮乾固し、酢酸
から凍結乾燥させる。標記化合物（両アノマーの混合
物）が得られる。¹ H-NMR:0.90（t,J＝7.6H）、1.22（d,J＝7.3H）、1.25
（s,48H）、1.41（d,J＝7.3H）、1.64（m,4H）、2.00
（m,3H）、2.22（m,1H）、2.34（m,4H）、2.48（m,2
H）、3.40-3.98（m,6H）、4.12-4.60（m,8H）、5.20
（d,J＝3,1H）、5.26（m,1H）。

出発物質は、次の要領で得られる。

ａ） 740mgのＺ−Ｄ−iGlnを乾燥ジメチルホルムアミ
ド／テトラヒドロフラン（1:1）から成る混合物6mlに溶
かし、暗所で1.46gのベンゾトリアゾール−１−イルオ
キシトリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウム・ヘキサ
フルオロホスフェートおよび365μｌのＮ−メチルモル
ホリンと反応させる。30分後、1.14gの1,2−ジパルミト
イル−sn−グリセリンおよび270mgのイミダゾールを加
え、反応混合物をさらに暗所で４日間撹はんする。溶媒
混合物を濃縮後、残留物を、溶離剤としてジクロロメタ
ン／メタノール（20:1）を用いたシリカゲル・クロマト
グラフィーにかける。３−Ｏ−［ベンジルオキシカルボ
ニル−Ｄ−イソグルタミニル］−1,2−ジ−Ｏ−パルミ
トイル−sn−グリセリンが得られる。¹ H-NMR:0.80（t,J＝7,6H）、1.28（s,48H）、1.62（m,4
H）、1.95（m,1H）、2.15（m,1H）、2.34（m,4H）、2.4
6（m,2H）、4.25（m,5H）、5.12（s,2H）、5.27（m,1
H）、7.35（s,5H）。

ｂ）上記ａ）項で得られた化合物400mgを20mlの100％
酢酸に溶かし、40mgPd/C10％と反応させる。水素雰囲気
下で撹はんを２時間続行し、触媒をろ過し、残留物をト
ルエンで３回濃縮乾固する。60μｌのＮ−メチルモルホ
リン（＝溶液Ａ）を加えながら残留物を8mlのジクロロ
メタンに溶かす。

160mgのBOC-Thr(Bzl)-OHを、233μｌのＮ−メチルモル
ホリンおよび73μｌのクロロ蟻酸イソブチルエステルと
一緒に8mlのジクロロメタンに溶かし、混合物を室温で4
5分間撹はんする（＝溶液Ｂ）。

溶液Ｂを＋４°に冷却し、溶液Ａをそこに加える。混合
物を室温で18時間撹はんし、溶媒を濃縮し、溶離剤とし
てジクロロメタン／メタノール（100:1〜100:3）を用い
たシリカゲル・クロマトグラフィーにより精製する。３
−Ｏ−［ｔ−ブトキシカルボニル−Ｏ−ベンジル−Ｌ−
トレオニル−Ｄ−イソグルタミニル］−1,2−ジ−Ｏ−
パルミトイル−sn−グリセリンが得られる。¹ H-NMR:0.88（t,J＝7,6H）、1.26（s,48H）、1.47（s,9
H）、1.60（m,4H）、1.94（m,1H）、2.14-2.58（m,7
H）、4.10-4.34（m,6H）、4.45（m,2H）、4.60（d,2
H）、5.15（m,1H）、5.23（m,1H）、5.40（m,1H）、6.3
5（m,1H）、7.13（m,1H）、7.30（m,5H）。

ｃ）上記ｂ）項で得られた化合物580mgを＋４°で20m
lのトリフルオロ酢酸と反応させ、混合物を30分間撹は
んする。溶液を濃縮し、トルエンにより２回蒸発乾固す
る。残留物を10mlのジクロロメタンおよび65μｌのＮ−
メチルモルホリンと反応させる（＝溶液Ａ）。

278mgのα−Ｏ−ベンジル−4,6−ベンジリデン−Ｎ−ア
セチルムラミン酸を、259μｌのＮ−メチルモルホリン
および81μｌのクロロ蟻酸イソブチルエステルと一緒に
10mlのジクロロメタンに溶かし、混合物を室温で35分間
撹はんする（＝溶液Ｂ）。

溶液Ａを＋４°で溶液Ｂに滴下し、混合物を室温で２日
間放置する。溶媒濃縮後、溶離剤としてジクロロメタン
／メタノール（100:1〜10:1）を用いて、残留物をシリ
カゲル・クロマトグラフィーにかける。３−Ｏ−［１−
α−Ｏ−ベンジル−4,6−Ｏ−ベンジリデン−Ｎ−アセ
チルムラミル−Ｏ−ベンジル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イ
ソグルタミニル］−1,2−ジ−Ｏ−パルミトイル−sn−
グリセリンが得られる。¹ H-NMR:0.88（t,J＝7.6H）、1.22（d,J＝7.3H）、1.37
（d,J＝7,3H）、1.60（m,4H）、1.98（s,3H）、2.02
（m,1H）、2.30（m,4H）、2.44（m,4H）、3.66-3.94
（m,4H）、4.06-4.46（m,10H）、4.90（d,J＝4,1H）、
5.25（m,1H）、5.60（s,1H）、6.78（d,1H）、7.10（d,
1H）、7.40（m,10H）、7.60（d,1H）。

実施例２３−Ｏ−［Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アロトレオニル
−Ｄ−イソグルタミニル］−1,2−ジ−Ｏ−パルミトイ
ル−sn−グリセリン。

（Ｃ＊はＳ立体配置を有する）標記化合物は、対応するＬ−アロトレオニル化合物から
出発して実施例１と似た方法で得られる。¹ H-NMR:0.88（t,J＝7,6H）、1.25（s,48H）、1.40（d,J
＝7,3H）、1.64（m,4H）、2.00（m,3H）、2.24（m,1
H）、2.35（m,4H）、2.48（m,2H）、3.40-3.98（m,6
H）、4.10-4.60（m,8H）、5.23（d,J＝3,1H）、5.26
（m,1H）。

出発物質として使用されるＬ−アロトレオニル化合物
は、次の要領で得られる。

ａ）３−Ｏ−［ベンジルオキシカルボニル−Ｄ−イソ
グルタミニル］−1,2−ジ−Ｏ−パルミトイル−sn−グ
リセリンは、実施例1a）段階記載の方法と同様にして製
造される。

ｂ）３−Ｏ−［ベンジルオキシカルボニル−Ｏ−ｔ−
ブチルジメチルシリル−Ｌ−アロトレオニル−Ｄ−イソ
グルタミニル］−1,2−ジ−Ｏ−パルミトイル−sn−グ
リセリンは、BOC-Thr(Bzl)-OHの代わりにBzl−アロThr
(tBDMS)-OHを用いることにより、実施例1b）段階記載の
方法と同様にして製造される。¹ H-NMR:0.02（s,3H）、0.04（s,3H）、0.93（m,15H）、
1.16（d,J＝7,3H）、1.25（m,48H）、1.67（m,4H）、1.
90（m,1H）、2.07（m,1H）、2.28（m,4H）、2.42（m,2
H）、4.03-4.40（m,7H）、5.08（m,2H）、5.13（m,1
H）、7.30（m,5H）、7.46（d,1H）。

ｃ）３−Ｏ−［１−α−Ｏ−ベンジル−4,6,−Ｏ−ベ
ンジリデン−Ｎ−アセチルムラミル−Ｏ−ｔ−ブチルジ
メチルシリル−Ｌ−アロトレオニル−Ｄ−イソグルタミ
ニル］−1,2−ジ−Ｏ−パルミトイル−sn−グリセリン
は、実施例1c）段階と同様にして製造される。¹ H-NMR:0.08（s,3H）、0.10（s,3H）、0.88（m,15H）、
1.17（d,J＝7,3H）、1.25（m,48H）、1.37（d,J＝,3
H）、1.64（m,4H）、1.95（m,1H）、1.97（s,3H）、2.1
3（m,1H）、2.34（m,4H）、2.46（m,2H）、3.65（m,4
H）、3.98-4.40（m,10H）、4.66（dd,J＝13.40,1H）、
5.15（d,J＝3,1H）、5.25（m,1H）、5.60（s,1H）、7.2
5-7.53（m,10H）、8.23（d,1H）。

本発明化合物は、優れた薬理活性を有する。従って、医
薬としての使用に適している。

特に、それは、明白な免疫調節活性を有することが見出
された。この活性は、下記でさらに詳しく説明されてい
る様々な試験方法を用いて立証され得る。

使用されている略語は、次の意味を有する。

物質A:実施例１の化合物形態。

物質B:実施例２の化合物形態。

ABC:ハプテン−特異抗体−構築細胞。

BPO-BSA:ベンジルペニシロイル−牛血清アルブミン。

BPO-KLH:ベンジルペニシロイル−キーホール・リンペッ
ト・ヘモシアニン。

BSA:牛血清アルブミン。

CMI:細胞性免疫。

ConA:コンカナバリンＡ。

CSF:コロニー刺激因子。

CY:シクロホスファミド。

DTH:遅延型過敏症。

ELISA:固相酵素免疫測定法。

FIA:フロインド不完全アジュバント。

HI:体液免疫。

IFN−γ：ガンマ・インターフェロン。

IL−１（IL−１β）：インターロイキン−１（インター
ロイキン−１β）。

LAF:リンパ球活性化因子。

LPS:リポ多糖類。

MDP:ムラミルジペプチド。

MDP-GDP:3−Ｏ−［Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニ
ル−Ｄ−イソグルタミニル］−1,2−ジ−Ｏ−パルミト
イル−sn−グリセリン（ANVAR EP165123における実施例
１の化合物）。

NBT:ニトロ・ブルー・テトラゾリウム。

PBL:末梢血白血球。

PEC:腹膜しん出（excsudate）細胞。

PHA:フィトヘマグルチニン。

PMA:ホルボール・ミリステート・アセテート。

PMN:多核細胞。

TNF:腫よう壊死因子。

Ａ）本発明化合物は、類似構造の化合物、例えばMDP-
GDPと比べて副作用がかなり少ないという特徴を有する
ことが見出された。従って、それは耐容性が優れてい
る。この特に有益な特性は、例えば下記の検定において
証明され得る。

１）うさぎにおける発熱性。

この試験方法は、文献、例えばアメリカ合衆国薬局方に
記載されているものである。得られた結果は次の通りで
ある（第１表）。

２） LPSとの毒性相乗作用。

この検定では、スイス・マウスに、LPSおよびMDP-GDPま
たは物質Ａを下記に示す用量で静脈内投与する（第１表
−２）。

全マウスに、25μｇのエス・エンテリディス（S.enteri
dis）LPS（静脈内）を単独またはMDP-GDPまたは物質Ａ
と一緒に与えた。結果は、６マウス／群を用いた３回の
同一検定で得られたものである。

上記２検定において得られた結果（発熱性および毒性相
乗作用、第１表および第１表−２）は、MDP-GDPとの比
較における副作用の著しい改善を示す。

さらに別の試験方法は、例えば次の要領で行なわれる。

ａ）マウス骨髄培養、ウサギPBL（IFN−γによる前活
性化は行わず）およびヒトPBLにおけるTNF−誘導。

この検定は、セイヤーズ等、「ジャーナル・オブ・イミ
ュノロジー」（J.Immunol.）136（1986）2935-2940にお
いて詳述されている。L929細胞に対する溶菌活性からTN
F活性を測定する。結果を第２表に要約する。これらの
結果は、本発明化合物のＡおよびＢ両形態が、TNFの非
常に弱い誘発剤であるため、基準化合物よりも著しく低
い内毒性潜在能力を有することを示す。これらの結果は
また、フィコルにより分離された末梢ヒトまたはウサギ
単核血液細胞を用いることにより物質Ａに関して得られ
た結果と一致する（第３および４表）。

ｂ） IL−１の誘導：ゲリー等、「ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メディシン」（J.Exp.Med.）、136（1972）128-142頁お
よびオッペンハイム等、「セルラー・イミュノロジー」
（Cellular Immunol.）50（1980）71-81頁の方法に従
い、IL−１βまたはLAFの活性を検定した。結果（第５
表）は、溶媒単独と比べた場合、50μg/mlの最高濃度で
のみ増殖が顕著に増加していることを示す。

ｃ）腫よう細胞（P815）に対するマクロファージ毒性
（マウスPRC）の誘導：マウスに対し、15mlの2.9％チオグリコレート・ブイヨ
ン（メルク−ダルムスタット、西ドイツ）の腹腔内投与
により前処理を行う。４日後、マクロファージを腹腔内
へしん出させ、洗浄により採取する。これらの誘導さ
れ、付着したマウス・マクロファージを腫よう細胞、LP
Sまたは免疫刺激物質と共培養すると、それらはマクロ
ファージを活性化し得、腫よう細胞の溶菌または成長阻
害が行なわれる。さらに、IFN−γを加えると、この活
性化は促進され得る。培養の24時間後に生存している細
胞の数を、［³H］−チミジン取り込みの測定により測定
する。陰性対照およびLPS陽性対照と比較すると、所定
濃度の試験物質に対する溶菌または細胞毒性活性の尺度
が％で得られる（第６表）。

ｄ） 24時間インキュベーション後のマウスPECにおけ
るLAF活性の誘導（胸腺細胞検定、PHA1:50による共刺
激）：この検定（「ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メディシン（J.Exp.Med.）136［1972］128-155）では、
物質ＡおよびＢは、MDP-GDPの場合と似た活性プロフィ
ールを呈する。

ｅ）シクロホスファミドまたはＸ線照射により前処理
されたネズミを用いて、本発明化合物が有することが見
出された腫よう治療における非常に重要なさらに別の活
性は、骨髄における成熟リンパ球への骨髄芽球の増殖お
よび分化の用量依存刺激性である。

ｆ）シクロホスファミドにより処理されたマウスから
の骨髄細胞の増殖性応答： MDP-GDPまたは物質Ａによる処理の１日後、マウスに5mg
のシクロホスファミドを腹腔内投与した。シクロホスフ
ァミド処理の４日目に細胞を採取し、CSF−１を含むL92
9細胞（「Ｌ」）［スタンレーおよびギルバート、「ジ
ャーナル・オブ・イミュノロジカル・メソッズ」（J.Im
munol.Methods）42（1981）253］、またはシェリダンお
よびメットカーフにより「ジャーナル・オブ・セル・フ
ィジオロジー」（J.Cell Physiology）81（1973）11頁
に記載されたLPS処理マウスの肺（「肺」GM-CSF）から
得られた様々な希釈率の条件培地の存在下でインキュベ
ーションした。対照と比較した³H−チミジン取り込みに
よりCSFまたはGM-CSFに対する細胞の応答を測定する。
結果は、MDP-GDPとは反対に、物質ＡはCSF処理に対する
細胞の増殖性応答を回復させ得ることを示す（図面参
照）。

（図面の説明）０日目にCYおよび−１日目にMDP-GDP（300μｇ）または
物質Ａ（300μｇ）により処理したマウスから得られた
骨髄細胞の増殖性応答。

（▽：対照＋CSF含有Ｌ細胞、または対照＋肺GM-CSF、 ◆:MDP-GDP＋CSF含有Ｌ細胞、またはMDP-GDP＋肺GM-CS
F、 ●：物質Ａ＋CSF含有Ｌ細胞または、物質Ａ＋肺GM-CS
F）。

ｇ）感染に対するマウスの非特異的抵抗力の増強：マウスの細菌感染モデルにおいて、感染に対するマウス
の抵抗力を増強する物質Ａの能力を評価した。スイス・
マウスをMDP-GDPまたは物質Ａにより静脈内処理する。2
4時間後、それらにクレブシエラ・ニューモニアエ（Kle
bsiella pneumoniae）の致死的攻撃（８×10⁴微生物）
を与える（第７表）。

第−１日目、スイス・マウスに化合物を静脈内経路によ
り投与する。８×10⁴細菌により同じ経路でそれらに攻
撃を行う。攻撃後３週間死亡を記録する。

第７表から明らかな通り、未処理対照と比較すると、MD
P-GDPおよび物質Ａは、感染に対するマウスの非特異的
抵抗性を劇的に増加させる。

ｈ）アジュバント活性：抗原に対する細胞性および体液特異的応答を誘導および
増強する物質Ａの能力を評価した。対照および実験用ハ
ートレイ雄モルモット（体重300g）に対し、後足に油中
水エマルジョン0.2ml中1mgの卵アルブミン（フロインド
不完全アジュバント、FIA）の合計用量を投与した。実
験群については、アジュバントを0.1mgの用量でエマル
ジョンに加えた。

それらの細胞性免疫（CMI）を評価するために、21日目
に動物に対し、食塩水中0.1mgの卵アルブミンの皮内注
射による皮膚試験を行った。６、24および48時間後皮膚
反応をチェックし、結果を48時間後における硬化の直径
として表した。それらの体液免疫（HI）を評価するため
に、24日目に動物から心臓穿刺により採血した。標準条
件下、ELISAにより抗卵アルブミン抗体力価を測定し
た。個々の力価および平均が与えられる。第８表では、
物質Ａは、MDP-GDPよりもCMIおよびHIの両特異的応答を
刺激することが示されている。

ｉ）ミトゲンに対するウサギ末梢血液リンパ球の応答
に対する影響：物質Ａを100μｇの用量でウサギに静脈内注射した。こ
の投与の前および３時間後に血液試料を集めた。ConAま
たはPHAとインキュベーションした単核細胞を用いて、
リンパ芽球変換検定を行った。³H−チミジン取り込みの
増加によりミトゲンの作用を測定し、１分当たりのカウ
ント数（cpm）として表す。結果を第９表に示す。

第９表から明らかな通り、未処理ウサギの細胞と比較し
て、物質Ａによるインビボ処理は、最適下限用量のミト
ゲンに対するリンパ球のインビトロ応答能力を著しく増
加させる。

ｊ）インビトロまたはインビボ処理後の血液多核細胞
（PMN）の応答：酸化応答およびカンジダ殺菌効力を古典的方法に従い評
価した。ヒトまたはモルモット血液から得られた精製PM
Nを、１時間以内におけるPMAまたはカンジダ・アルビカ
ンス（C.albicans）細胞に応じた酸化バーストまたは18
時間のカンジタ・アルビカンス（C.albicans）の成長の
測定前に物質Ａの存在下で培養した。結果（第10表）
は、供給源（ヒトまたはモルモット）とは無関係であ
る、これらの細胞に対する物資Ａの刺激作用を示す。

ａ）１時間プレインキュベーション。

ｂ） PMAまたはカンジダ・アルビカンス細胞を加えた
１時間後におけるNBT縮小細胞のパーセンテージとして
表現。

ｃ）酵母細胞における³H−グルコール取り込みの減少
により測定されたカンジダ・アルビカンス成長の阻害パ
ーセント。

ｋ）心臓穿刺による血液採取の３または18時間前に皮
下経路（500μg/kg）により物質Ａを与えられたモルモ
ットにおいてエクスビボ（生体外）検定を行った。PMA
またはカンジダ・アルビカンス細胞を加えた後、精製血
液PMNの応答をインビトロで直接測定した。第11表に示
されている通り、18時間前にモルモットを前処理した場
合、続いてPMAまたはカンジダ・アルビカンス細胞に暴
露すると、PMNのさらに強い応答が誘発されるが、細胞
を集める３時間前に動物を前処理した場合、効果は無か
った。

すなわち、上記Ａ）項記載の試験結果に基づくと、本発
明化合物は全て、構造が類似した化合物、例えばMDP-GD
Pよりも非常に有益な薬理活性を有するという結論に達
し得る。

本発明化合物は、免疫応答および非特異的免疫の全身的
増強を目的とする非特異的抗微生物抵抗の調整剤として
の使用に適している。

すなわち、本発明化合物は、例えば免疫応答が低下した
状態、特に細胞性および体液免疫応答が低下した状態お
よび遅延型の過剰刺激反応性が低下した状態の治療的処
置または支持療法（すなわち、さらに別の特異的または
支持形態の療法と一緒に行う）、並びに一般的に免疫応
答の調節が望まれる状態の処置において適応性を示す。

本発明化合物は、特に、特発性免疫不全、または老人病
患者または重症の火傷もしくは全身性化した感染症の患
者において見出されるタイプの免疫不全に関連した病的
状態の治療または支持的処置における使用に適応性を示
す。

さらに本発明化合物は、ウイルス感染、例えば散在性ヘ
ルペスおよび散在性水痘感染症およびホジキン病および
さらに別の悪性腫ようの治療的または支持的処置におけ
る使用に適応性を示す。

上記適応症の場合、使用される用量は、勿論処置される
病気の性質および重症度、投与方法および使用される化
合物形態により異なる。大型対象の場合、適当な非経口
用量は約0.1mg〜約70mgであり、例えば支持療法におい
てアジュバント効果の達成用に１回または毎日投与され
る。反復投与は、好都合には１日２〜４回または特効性
形態で実施され得る。指示単位用量形態は、反復投与の
状況では約0.025mg〜約35mgおよびアジュバント処置用
に１回投与が望まれる場合には約70mg以下の本発明化合
物を含む。

Ｂ）さらに本発明化合物は、免疫調節活性を有するこ
とから、ワクチン中のアジュバントとしての使用に適し
ている。この使用方法の場合、支持１日用量として、約
0.1mg〜約50mg、好ましくは約0.5mg〜約10mg、特に約7m
gの用量を接種当日に投与する。好都合には、同用量で
の２次投与をその２〜４週間後に行う。

Ｃ）さらに、本発明化合物は、マウスにおけるハプテ
ン特異的免疫グロブリン・アイソタイプ応答を調節する
ことが見出された。この活性は、ハプテン特異的抗体形
成細胞（ABC）の量を測定する検定により立証される。
免疫化の概要は、次の通りである。Balb/cマウスに対
し、０、21および42日目に0.2mlの水酸化アルミニウム
・ゲル中10μgBPO-KLHの腹腔内注射を行う。次いで、マ
ウスを２群に分ける。第１群には、44および45日目に10
μg/マウスの本発明化合物（物質Ａ）を経口投与し、第
２（対照）群には食塩水を与える。46、51および70日目
に動物を殺し、それらのパイエル・プラーク、腸間膜リ
ンパ節およびひ臓からリンパ球を抽出する。６マウスか
ら得られた細胞をプールし、BPO-BSAにより層をなした
プラークを用いたエリスポット検定においてエクスビボ
ABCの数を測定する。得られた結果を第12表に示す。

PP＝パイエル・プラーク、ML＝腸間膜リンパ節、SP＝ひ
臓、Co＝対照（生理食塩水）。

上記結果は、指示された方法によるマウスの免疫後、全
ての種類のIgアイソタイプのABCが腸間膜リンパ節およ
びひ臓から見出され得ることを示す。IgM−およびIgG−
形成細胞の数は、腸間膜リンパ節よりもひ臓細胞の方が
明らかに多かったが、IgAおよびIgE ABCについては、両
器官とも概ね似た数が見出された。上記概要に従った本
発明化合物（物質Ａ）による処理の結果、両器官ではIg
G ABC含有量は増加したが、IgG−形成ABCの数は減少し
ていた。この効果は一時的なものであると思われる。

46日目には、IgE−形成ABCは２つの器官からは一切見出
され得ず、51日目には含有量はまだ非常に低かった。70
日目には、対照との差異は測定され得なかった。

これは、アレルギー疾患における本発明化合物の調節機
能の指標である。

44日目に試験物質を投与し、45、46、58および70日目に
動物を殺すことにより、上記検定を上記と同じ要領で反
復すると、次の結果が得られる（第13表）。

上記活性を考慮すると、さらに本発明化合物は、Ｉ型ア
レルギーおよびアトピー性皮膚炎の処置を目的とするIg
G形成抑制剤としての使用に適応性を示す。

これらの適応症の場合、指示一日非経口用量は約３μg/
kg〜約20μg/kgであり、好都合には、一日２〜４回また
は好ましくは２日もしくはそれ以上の間隔で持効性形態
として投与される。単位用量形態は、約2mg〜約15mgを
含有する。総一日用量は、約4mg〜約60mgである。

Ｄ）さらに、物質ＡおよびLPSの同時投与によるマウ
スにおけるCSF−誘発検定では、MDP-GDPとは対照的に、
本発明化合物は、LPSとのある程度の相乗的活性を発揮
することが見出された。

上記適応症には、実施例１の化合物形態、すなわち物質
Ａ、すなわち式（Ｉ）（ただし、Ｃ＊はＲ立体配置を有
する）で示される化合物、すなわち３−Ｏ−［Ｎ−アセ
チルムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミニ
ル］−1,2−ジ−Ｏ−パルミトイル−sn−グリセリンが
好ましい。

少なくとも１種の医薬的に許容し得る担体または希釈剤
と一緒に本発明化合物を含有する医薬組成物もまた、こ
の発明の一部である。それらは、慣用的方法、例えば前
述の本発明化合物、すなわち式（Ｉ）（ただし、Ｃ＊は
ＲまたはＳ立体配置を有する）で示される化合物を医薬
的に許容し得る担体または希釈剤と混合することを含む
方法に従って製造され得る。

適応性を示すさらに別の医薬組成物は、リポソームおよ
び例えばリソホスファチジルコリン、ｎ−オクチルグル
コースまたはデオキシコーレートとの混合ミセル形態の
ものである。それらの組成物は、慣用的方法で製造され
得、例えば注射可能溶液形態であり得る。それらもまた
この発明の一部である。

さらにこの発明は、処置を必要とする対象に本発明化合
物の治療有効量を投与することを含む、上記状態の治療
的または支持的処置方法を包含する。

さらにこの発明は、上記適応症において使用される、特
に免疫調節剤、抗ウイルス剤および抗アレルギー剤とし
て使用される本発明化合物を包含する。

この発明によって下記の各事項が可能となる。

（１）式（Ｉ）［式中、アステリスク＊を付した炭素原子は、Ｒまたは
Ｓ立体配置を有する］で示される化合物の種々の形態。

（２）アステリスク＊を付した炭素原子がＲ立体配置
を有するものである、１記載の化合物。

（３）アステリスク＊を付した炭素原子がＳ立体配置
を有するものである、１記載の化合物。

（４）式（II）［式中、アステリスク＊を付した炭素原子は１記載の意
味であり、R₁〜R₄は、独立してヒドロキシ−保護基であ
る］の対応する化合物を脱保護することを含む、１記載の化
合物の製造方法。

（５）水素化による脱保護を含む、４記載の方法。

（６）式（II）において、R₁およびR₂が一緒になって
ベンジリデンを形成し、R₃がベンジルであり、R₄がベン
ジルまたはｔ−ブチルジメチルシリルである、４記載の
方法。

（７）少なくとも１種の医薬的に許容し得る担体また
は希釈剤と一緒に１〜３のいずれか１項記載の化合物を
含有する医薬組成物。

（８）リポソーム形態である、７記載の医薬組成物。

（９）混合ミセル形態である、７記載の医薬組成物。

（10）１記載の化合物がワクチン中アジュバント形態
である、７記載の医薬組成物。

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図は、それぞれ、「Ｌ」細胞条件培地
またはLPS処理マウスの「肺」条件培地の存在下におけ
る、CYおよびMDP-GDPまたは物質Ａ処理マウス骨髄細胞
の増殖性応答を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ペーター・シュエツオーストリア国アー‐1130 ヴィーン、ネシュトルベルゲルガッセ 15番

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式（Ｉ）［式中、アステリスク＊を付した炭素原子は、Ｒまたは
Ｓ立体配置を有する］で示される化合物。
【請求項２】アステリスク＊を付した炭素原子がＲ立体
配置を有するものである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】式（II）［式中、アステリスク＊を付した炭素原子は請求項１記
載の意味であり、R₁〜R₄は、独立してヒドロキシ−保護
基である］の対応する化合物を脱保護することを含む、請求項１記
載の化合物の製造方法。
【請求項４】少なくとも１種の医薬的に許容し得る担体
または希釈剤と一緒に請求項１または２記載の化合物を
含有する、免疫反応増強剤として使用する医薬組成物。
【請求項５】リポソーム形態である、請求項４記載の医
薬組成物。
【請求項６】混合ミセル形態である、請求項４記載の医
薬組成物。
【請求項７】少なくとも１種の医薬的に許容し得る担体
または希釈剤と一緒に請求項１または２記載の化合物を
含有する、抗アレルギー剤として使用する医薬組成物。
【請求項８】リポソーム形態である、請求項７記載の医
薬組成物。
【請求項９】混合ミセル形態である、請求項７記載の医
薬組成物。
【請求項１０】請求項１記載の化合物から成るワクチン
用アジュバント。