JPH0740930B2

JPH0740930B2 - アスナロ属植物の組織培養方法

Info

Publication number: JPH0740930B2
Application number: JP1236360A
Authority: JP
Inventors: 慶文狩集; 光司長田
Original assignee: Matsushita Electric Works Ltd
Current assignee: Panasonic Electric Works Co Ltd
Priority date: 1989-09-11
Filing date: 1989-09-11
Publication date: 1995-05-10
Anticipated expiration: 2010-05-10
Also published as: JPH0398579A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕この発明は、抗微生物剤や芳香剤等の原料となるアスナ
ロ属植物の組織培養方法に関する。

〔従来の技術〕

常緑高木針葉樹目ヒノキ科アスナロ属植物は、抗微生物
作用を有するヒノキチオール等のトロポロン化合物およ
びカルバクロール等のフェノール化合物や、芳香を有す
るツヨプセンなどを含有している。したがって、アスナ
ロ属植物のカルス組織を培養することができれば、その
カルス組織は、抗微生物剤や芳香剤等の原料に供するこ
とができる。

しかしながら、イネ、ニンジンなどの草本性植物や、ポ
プラなど一部の木本性植物の組織培養技術は、現在まで
に多数報告されているが、アスナロ属植物のカルス組織
を培養または継代培養した先行技術、培地組成について
は、最近まで報告されていなかった。

このような事情から、発明者らは、アスナロ属植物のカ
ルス組織を培養する方法を検討した結果、最近になっ
て、炭素源、無機成分および植物ホルモンを必須成分と
する培地上でアスナロ属植物のカルス組織を効率良く培
養または継代培養することができることを見出し、すで
に特許出願を行っている（特願昭63−327087号）。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかし、上記方法では、初期細胞密度を低くした場合、
増殖効率が非常に悪いため、さらなる改善が求められて
いた。

以上の事情に鑑み、この発明は、アスナロ属植物のカル
ス組織を、従来法よりもさらに効率良く培養できるとと
もに、初期細胞密度が低い場合でも上記組織を効率良く
培養できる方法を提供することを課題とする。

〔課題を解決するための手段〕

上記課題を解決するため、この発明は、炭素源、無機成
分および植物ホルモンを必須成分とする培地上でアスナ
ロ属植物の組織を培養する方法であって、上記培地中の
炭素源の10重量％以上がブドウ糖であることを特徴とす
る。

この発明にかかるアスナロ属植物の組織培養方法に適用
されるアスナロ属植物としては、ヒノキアスナロが好適
であるが、特にこれに限定されるものではない。

この発明にかかるアスナロ属植物の組織培養方法におい
て使用される培地（以下、単に「培地」と称する）の炭
素源としては、特に限定されないが、ショ糖等の炭水化
物とその誘導体、脂肪酸等の有機酸およびエタノール等
の１級アルコールなどを例示できる。ただし、この発明
にかかるアスナロ属植物の組織培養方法においては、こ
れらの炭素源の10重量％以上がブドウ糖であることが必
要であり、特に30重量％以上がブドウ糖であることが好
ましい。

培地の無機成分としては、特に限定されないが、たとえ
ば、窒素、リン、カリウム、ナトリウム、カルシウム、
マグネシウム、鉄、マンガン、亜鉛、モリブデン、銅、
コバルト、硫黄、ホウ素、塩素、ヨウ素等の元素を含む
無機塩を挙げることができる。その具体例としては、硝
酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、塩化
カリウム、塩化カルシウム、リン酸２水素カリウム、リ
ン酸２水素ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸アンモ
ニウム、硫酸ナトリウム、硫酸第１鉄、硫酸第２鉄、硫
酸マンガン、硫酸銅、硝酸亜鉛、モリブデン酸ナトリウ
ム、ヨウ化カリウム、ホウ酸、塩化コバルト等の化合物
などを挙げることができる。

この発明にかかるアスナロ属植物の組織培養方法におい
ては、培地に、植物ホルモンとして、オーキシン類およ
びサイトカイニン類のうち少なくともオーキシン類が含
有されていることが必要である。そして、オーキシン類
の濃度が10^-6〜10^-4モル／の範囲、必要に応じ、サイ
トカイニン類の濃度が10^-5モル／以下、好ましくは10
^-6モル／以下の範囲で培地中に含まれるようにする。
オーキシン類の濃度が10^-5モル／、サイトカイニン類
の濃度が10^-7モル／である培地を用いると、特に効率
良く組織培養が行えるが、特にこれに限定されない。

前記オーキシン類としては、たとえば、α−ナフタレン
酢酸（NAA）、インドール酢酸（IAA）、2,4−ジクロロ
フェノキシ酢酸（2,4−Ｄ）、インドール酪酸（IBA）お
よびこれらの誘導体などを、また、前記サイトカイニン
類としては、たとえば、カイネチン、ベンジルアデニン
（BA）、ゼアチンなどがそれぞれ挙げられるが、特にこ
れらに限定されるものではない。これらのうち、オーキ
シン類がα−ナフタレン酢酸または2,4−ジクロロフェ
ノキシ酢酸であり、サイトカイニン類がカイネチンまた
はベンジルアデニンであると、特に効率良くアスナロ属
植物の組織培養が行える。

なお、培地には、炭素源、無機成分および植物ホルモン
の必須成分の他に、必要に応じて、ビタミン類やアミン
酸類等が含有されていてもよい。

上記ビタミン類としては、ビオチン、チアミン、ピリド
キシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、パントテン
酸カルシウム、アスコルビン酸、イノシトール、ニコチ
ン酸、ニコチン酸アミドなどが例示できるが、特にこれ
らに限定されるものではない。

また、前記アミノ酸類としては、たとえば、グリシン、
アラニン、グルタミン酸、システインおよびフェニルア
ラニンなどが挙げられるが、特にこれらに限定されるも
のではない。

培地に含まれる前記各成分の濃度は、通常、炭素源が10
ないし50g/、無機成分が10^-6ないし0.1モル／、植
物ホルモンが前記所定濃度、ビタミン類が0.1ないし150
mg/、アミノ酸類が０ないし1g/程度であることが望
ましいが、炭素源および植物ホルモン以外の成分の濃度
は、特にこれらに限定されない。

培地の調製法としては、従来より植物の組織培養に用い
られている培地、たとえば、ムラシゲ・スクーグ培地、
リンスマイヤー・スクーグ培地、ホワイト培地、ガンボ
ルグＢ−５培地、ニッチ・ニッチ培地などを基本培地と
して、炭素源、および植物ホルモンの他、必要に応じ
て、ビタミン類やアミノ酸類等の前記各成分を添加して
調製する方法が例示できるが、特に限定されない。な
お、前記基本培地には元々前記無機成分が含まれている
が、必要に応じて、さらに無機成分を適宜添加するよう
にしてもよい。前記基本培地のうち、この発明で特に望
ましいものは、ムラシゲ・スクーグ培地およびガンボル
グＢ−５培地である。

このように調製される培地は、液体培地として用いても
良いし、寒天などの多糖類を含有させた固体培地として
使用しても良い。多糖類は、通常、培地中に0.1〜１重
量％程度含有されるようにするが、特にこれに限定され
るものではない。

組織培養は、上記のように調製された培地上で、アスナ
ロ属植物より切り取った外植片、特に葉柄部位や側芽か
ら良好に誘導されたカルス片を培養または継代培養する
ことによって行われる。前記のような培地上では、カル
ス組織を、壊死させることなく安定に増殖させて育成す
ることができる。継代培養も同様である。

〔作用〕

この発明にかかるアスナロ属植物の組織培養方法におい
ては、炭素源、無機物および植物ホルモン必須成分とす
る培地上でアスナロ属植物のカルス組織を培養するにあ
たり、前記炭素源の10重量％以上がブドウ糖であるよう
にしているため、この方法によれば、前記アスナロ属植
物のカルス組織を、従来法に比べてさらに効率良く培養
することができるとともに、従来法では非常に増殖効率
の悪かった低い細胞密度からの培養を効率良く行うこと
ができる。

〔実施例〕

以下に、この発明の具体例的な実施例および比較例を示
すが、この発明は、以下の実施例に限定されない。

以下の実施例および比較例における培養は、下記のよう
にして行った。すなわち、炭素源の濃度が３重量％、α
−ナフタレン酢酸の濃度が10^-5モル／になるようにそ
れぞれをムラシゲ・スクーグの培地に添加して調製した
液体培地20mlと、ヒノキアスナロのカルス片を細かく砕
いたものを入れた100ml容の三角フラスコを回転振盪
（しんとう）機に設置し、100rpm、25℃、暗の条件下で
培養を行った。

−実施例１〜４− 炭素源として、後記第１表記載の量のブドウ糖およびシ
ョ糖を含有する培地にヒノキアスナロのカルス片約0.4g
を入れ、７日間培養を行い、カルス組織の増殖率を調べ
た。

−比較例１− 炭素源として、後記第１表記載の量のショ糖のみを含有
する培地にヒノキアスナロのカルス片約0.4gを入れ、７
日間培養を行い、カルス組織の増殖率を調べた。

−実施例５〜８− 炭素源として、後記第１表記載の量のブドウ糖およびシ
ョ糖を含有する培地にヒノキアスナロのカルス片約0.4g
を入れ、14日間培養を行い、カルス組織の増殖率を調べ
た。

−比較例２− 炭素源として、後記第１表記載の量のショ糖のみを含有
する培地にヒノキアスナロのカルス片約0.4gを入れ、14
日間培養を行い、カルス組織の増殖率を調べた。

−実施例９〜12− 炭素源として、後記第１表記載の量のブドウ糖およびシ
ョ糖を含有する培地にヒノキアスナロのカルス片約0.2g
を入れ、７日間培養を行い、カルス組織の増殖率を調べ
た。

−比較例３− 炭素源として、後記第１表記載の量のショ糖のみを含有
する培地にヒノキアスナロのカルス片約0.2gを入れ、７
日間培養を行い、カルス組織の増殖率を調べた。

それぞれの結果を第１表に示した。

第１表にみるように、10重量％以上がブドウ糖である炭
素源を含有する培地上で培養されたヒノキアスナロのカ
ルス組織は、100％がショ糖である炭素源を含有する培
地上で培養されたものよりも効率良く増殖している。ま
た、カルス組織の初期細胞密度が低い（10g/）場合、
10重量％以上がブドウ糖である炭素源を含有する培地上
で培養されたヒノキアスナロのカルス組織は、100％が
ショ糖である炭素源を含有する培地上で培養されたもの
に比べて非常に効率良く増殖している。

〔発明の効果〕

この発明にかかるアスナロ属植物の組織培養方法によれ
ば、抗微生物剤や芳香剤等の原料に供されるアスナロ属
植物のカルス組織を従来法に比べてさらに効率良く培養
することができる。また、従来法では非常に培養効率が
悪かった、低い細胞密度からのアスナロ属植物のカルス
組織の培養を効率良く行うことができる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】炭素源、無機成分および植物ホルモンを必
須成分とする培地上でアスナロ属植物の組織を培養する
方法であって、上記培地中の炭素源の10重量％以上がブ
ドウ糖であることを特徴とするアスナロ属植物の組織培
養方法。
【請求項２】アスナロ属植物がヒノキアスナロである請
求項１記載のアスナロ属植物の組織培養方法。