JPH0747599B2 - 新規酸性多環式エーテル抗生物質およびその製造に有用な微生物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は新規酸性多環式エーテル抗生物質およびその医
薬として適当なカチオン塩に関する。本発明はまた新規
アクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomadura roseoruf
a)微生物にも関する。さらに、本発明は新規酸性多環式
エーテル抗生物質および既知の酸性多環式エーテル抗生
物質UK-58,852を製造する方法に関する。さらにまた本
発明の新規抗生物質を動物へ投与することによる。家禽
類のコクシジア感染、家畜の腸炎および豚の赤痢の制御
のための方法に関する。本発明はまた本発明の新規抗生
物質を含む栄養飼料成分および本発明の新規抗生物質を
投与することによる、反芻動物または単胃動物における
生育の促進および／または飼料利用の効率の改良にも関
する。

従来の技術 酸性多環式エーテル抗生物質はミトコンドリアにおける
陽イオン移送に対する効果により特徴付けられる一群の
化合物である。この抗生物質の群にはモネンジン；ニゲ
リシン；グリソリキシン；ディアネマイシン；サリノマ
イシン；ムタロマイシン；イオノマイシンおよびロイセ
ラマイシンのごとき良く知られた薬剤が含まれる。この
課題についてはWestleyにより総括されている“ポリエ
ーテル抗生物質”、Adv.Appl.Microbiol.,22,177,197
7。

すぐ前にリストした多環式エーテルはグラム陽性細菌、
菌類および原虫に対して活性がある。特にこれらの抗生
物質は強力な抗−コクシジア活性を示す。それ故これら
は種々の動物感染の処理において種々の成功度で用いら
れてきた。

本発明の解決しようとする問題点 良く知られた原中疾患であるコクシジウム症は引き続き
重大な問題であり、その制御は獣医科学特に家禽産業に
とって経済的に重要である。コクシジウム症は１つまた
はそれ以上のエイメリアまたはイソスポラの種の感染の
結果である（要約としてLundおよびFarr“飼料類の疾
病”第５版、BiesterおよびSchwarte編集、アイオア州
立大学出版、エームス、Ia、1965pp.1056-1096を参照さ
れたい）。感染ニワトリに容易に認識できる病的状態を
つくり出すコクシジアの６つの種がある。アイメリア
テネラ(Eimeria tenella)，Ｅ．ネカトリス(necatri
x)、Ｅ．ブルネッティ(brunetti)、Ｅ．アセルブリナ(a
cervulina)、Ｅ．マキシマ(maxima)およびＥ．ミヴァテ
ィ(mivati)は消化器の上皮細胞の分解により直接的にま
たは毒素の産生を通して間接的に障害を生み出す。同一
の属に属してる３つの他の原中の種は相対的には無害で
ある；しかしながらＥ．ミティス(mitis)、Ｅ．ハガニ
(hagani)およびＥ．プラエコックス(praecox)は体重増
加を減少させ、飼料効率を低下させ、卵生産に悪影響を
及ぼす。

コクシジウム症による多大な経済的損失および存在する
抗−コクシジア剤の既知の欠点などを考えるとより良い
抗−コクシジア剤のための研究を続けなければならな
い。

腸炎は家畜生産者に重大な経済的損失を与えることがで
きる別の疾病である。腸炎はニワトリ、ブタ、ウシおよ
びヒツジに発生し、主として嫌気的細菌特にクロストリ
ジウム パーフリンジェンス(Clostridium perfringen
s)およびウイルスにより起こされる。腸管毒血症（その
例としてはヒツジにおける“過食症”）はＣ．パーフリ
ンジェンス(perfringens)感染により引き起こされる状
態である。

ブタ赤痢は米国において診断される最も普通のブタ疾患
の１つである。さらにこの疾患は多くの他の国でも流行
しており、毎年世界中のブタ育成者に対し財産のかなり
の損失を起こさせている。最大大きなスピロヘータがこ
の疾病の原因微生物であることが発見された。この微生
物、トレポネマ ヒオディセンテリエ(Treponema hyod
ysenterriae)は現在分離されており、この疾病を起こす
ことができることが示されている〔Harris,D.L.ら、
“ブタ−赤痢−１、トレポネマ ヒオディセンテリエ(T
reponema hyodysenterriae)（新種）のブタへの接種お
よび疾病の再現"Vet.Med/SAC.67,61-64,1972〕。Ｔ．ヒ
オディセンテリエ(hyodysenterriae)がブタ赤痢の唯一
の原因微生物かどうかは知られていないことは注意され
たい。しかしながら入手可能なデータからはそれが主と
した感染源であることは結論できるであろう。畜牛のご
とき反芻動物およびブタのごとき単一胃動物における成
果促進（成長の速度の増加および／または飼料利用効率
の増加）は獣医科学の別の経済的に望ましい目的であ
る。特に興味があることは飼料利用の効率の増加により
改良された成果が達成されることである。反芻動物の主
栄養部分の利用の機構はよく知られている。動物の第一
胃中の微生物が炭水化物を分解して単糖類を産生し、そ
の後これらの単糖類をピルビン酸化合物へ変換する。ピ
ルビン酸類は微生物学的過程により代謝され酢酸、酪
酸、プロピオン酸（集合的に揮発性脂肪酸として知られ
ている）を生成する。より詳細な議論はLengによる“反
芻動物における消化および代謝の生理学"Phillipsonら
編、オリエール出版、ニューキャッスル−アポン−タイ
ン、英国,1970、pp.408-410、を参照されたい。

揮発性脂肪酸利用の相対的効率はMcCulloughによる“飼
料"6月19日、1971、ページ19;EskclaudらによるJ.An.Sc
i.,33,282,1971;およびChurchらによる“反芻動物の消
化生理学および栄養”第２巻、1971,pp.622および625に
記載されている。酢酸および酪酸はもちろん利用される
が、プロピオン酸はより著しい効率で利用されている。
さらにプロピオン酸がほとんどない場合、動物はケトー
シスを起こす。それ故有益な化合物は動物の炭水化物か
らのより高い比率でのプロピオン酸の産生を刺激し、そ
れにより炭水化物利用効率を増加させるとともにケトー
シスの発生率を低下させている。

家畜生産者に経済的損失を起こさせるさらに別の疾病は
原中寄生体タイレリア パルバ(Theileria parva)によ
り起こされるものである。その病気、タイレリア症、は
また“東海岸熱”、“海岸熱”または“ローデシアだに
熱”としても知られている。タイレリア(Theileria)寄
生体は赤血球に侵入するがそれを破壊しないため、急性
または慢性熱性感染を起こす。畜牛においてこの病気
は、高熱、リンパ節腫張、痩せ、および高死亡率により
特徴付けられている。この病気は西および中央にアフリ
カにおいては非常に重大な問題である。さらには“メル
ク獣医学ニュアル"Siegmundら編、メルク＆Co、ラーウ
ェー、N.J.,第５版、pp431-433（1979）を参照された
い。

問題を解決するための手段 米国特許第4,746,650号は沈水好気条件下水性栄養培地
中でのアクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomadura r
oseorufa)Huang Sp.nov.,ATCC39697の培養によるUK-58,
852の製造について記載している。そこに記載されてい
るUK-58,852は式 の新規酸性多環式エーテルとして記載されている。また
前記アクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomadura ros
eorufa)Huang Sp.nov.,ATCC3969の発酵で２つの関連し
た少量成分も産生され、それらの各々はコクシジア症の
制御に抗生物質として有効である。２つの微少成分は下
記の式（II）の構造であり、各々、式中ＲはＨであり、
R¹はCH₃であり；およびＲおよびR¹は両方ともCH₃であ
る。

本発明は式 の構造を持つ、CP-91,243およびCP-91244とここで称さ
れる２つの新規酸性多環式エーテルに関し、式中抗生物
質CP-91243においてＲはＨであり、抗生物質CP-91,244
においてはＲはCH₃である。前記抗生物質の医薬として
適当なカチオン塩もまた本発明の範囲内に含まれる。さ
らに本発明はATCC53666の同定特性を持つアクチノマヅ
ラ ロゼオルファ(Actinomadura roseorufa)から得ら
れる突然変異体であるある種の新規微生物にも関する。

本発明の新規微生物は培養によりCP-91,243および／ま
たはCP-91,244を産生することができる。２つのそのよ
うな新規微生物はATCC53869およびATCC53870の同定特性
を持つアクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomadura r
oseorufa)である。本発明はまた培養によりCP-91,243お
よび／またはCP-91,244を産生できる前記新規微生物の
さらなる突然変異体、形質転換体および組換え体にも関
する。さらにまだ、本発明はATCC53666の同定特性を持
つアクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomadura roseo
rufa)から得られる突然変異体、そのさらなる突然変異
体、形質転換体および組換え体である新規微生物に関
し、それらすべてが培養によりCP-91,243および／また
はCP-91,244の産生に加えてUK-58,852もまた産生する。
まだ、さらに本発明は本発明の新規微生物の培養による
CP-91,243、CP-91,244および既知の酸性多環式エーテル
抗生物質UK-58,852を製造する方法にも関している。本
発明はまた、動物にCP-91,243および／またはCP-91,244
を単独で、またはUK-58,852と組合わせて投与すること
による飼鳥類のコクシジア感染、ニワトリ、豚、畜牛お
よび羊のごとき家畜の腸炎および豚赤痢を押えるための
方法に関する。動物にCP-91,243および／またはCP-91,2
44を個々に、または各々お互いとおよび／またはUK-58,
852と組合わせて投与し、反芻動物および単一胃動物に
おける生育および／または飼料利用を促進するための方
法も本発明の範囲内である。さらにまた、本発明はCP-9
1,243および／またはCP-91,244単独またはUK-58,852と
の組合せからなる栄養飼料組成物も請求の範囲に含んで
いる。

ここでおよび付随する特許請求の範囲で使用されている
術語“‥‥同定特性を持つアクチノマヅラ ロゼオルフ
ァ(Actinomadura roseorufa)”にはそのような述語が
示す実際のATCC寄託培養物のみならず、そのような述語
で示される寄託培養物として同一の同定特性を持つアク
チノマヅラ ロゼオルファ（Actinomadura roseorufa）
の任意の他の微生物も同様に含まれるであろう。

新規酸性多環エーテル抗生物質CP-91,243およびCP-91,2
44は、以下に記載するごとくATCC53666の同定特性を持
つアクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomadura roseo
rufa)Huang Sp.nov.の株の突然変異により得られる微生
物により産生される。アクチノマヅラ ロゼオルファ(A
ctinomadura roseorufa)ATCC53666は1987年10月26日に
出願され、これについての譲渡人に譲渡された出願人の
係属中の米国特許出願第113,563号に関連してブタペス
ト条約の条項のもとアメリカン タイプ カリチャー
コレクション、ロックビル、メリーランドに寄託されて
いる。微生物の一般への利用に対するすべての制限は特
許の付与により永久に除去されるであろう。Ｎ−メチル
−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（NTG）が突
然変異誘発剤として使用された。処理された微生物の単
一コロニーをその生産プロフィールで試験する。一般的
方法は水性栄養培地中、沈水好気条件下28℃の温度で振
とうしてATCC53666を増殖することを含んでいる。増殖
のための培地の選択は決定的ではない。

適した培地はセレロース（10.0g）、コーンスターチ
（5.0g）コーン浸液（5.0g）、Ｎ−ＺアミンYTT（5.0
g）（カゼインの酵素的消化物の登録商標、ヒュムコ
シェフィールド ケミカル Co.Inc.），および塩化コ
バルト（0.002g）からなり、それを１リットルの水に懸
濁し、水酸化ナトリウムでpHを7.0に調製し、フェルン
バッハ フラスコに分配する（800ml）。オートクレー
ブを行って無菌化後、フラスコに斜面増殖懸濁物または
凍結された成長力のある菌糸を接種し、その後、振とう
機上約200rev/分でかきまぜながら28℃の温度で７〜８
日間インキュベートする。一部50mlを取り、菌糸をテフ
ロン乳棒を持つ組織粉砕機で、続いて超音波細片化によ
り均質化する。細片化した菌糸を遠心分離し、培地を洗
浄し、300mlのエルレンマイヤーフラスコ中50mlの新し
い培地に再懸濁し、32℃にて振とうしながら２時間イン
キュベートする。その後細胞を再び遠心分離し、洗浄し
て培地を除き、50mlのトリス（ヒドロキシメチル）−ア
ミノメタン−リンゴ酸緩衝液、pH9.0に懸濁する。この
懸濁液の一部を750mcg/mlから1500mcg/mlの濃度のNTGと
１時間250から300rev/minで回転水浴振とう機上、34℃
の温度にて処理する。処理後、細胞を遠心分離し、突然
変異誘発剤を洗浄して除き、一部を連続的に希釈し、固
体栄養培地上に置き、プレートはコロニー形成単位が斜
面培養に移すのに十分な大きさになるまで28℃でインキ
ュベートする。プレートおよび斜面培養に適した培地は
Ｎ−ＺアミンＡ型（ヒュムコ シェフィールド ケミカ
ル Co.Inc.）を1.0g/lに感じたATCC培地第172号であ
る。接種された斜面培養物は28℃にて10から14日間放置
して増殖させるとその時間の後はすぐ試験できる。これ
は25mlの適した培地（そのような培地の１つはセレロー
ス、45.0g;大豆粉,10.0g;コーン浸出液,15.0g;MnSo₄・H
₂O,0.1g;MgSO₄・7H₂O,0.1g;塩化コバルト,0.002g;およ
び炭酸カルシウム,3.0g;1リットルの水および培地のpH
は7.0に調製）を含む300mlのエルレンマイヤーフラスコ
に接触することにより実施された。121℃にて30分間オ
ートクレープして無菌化後、フラスコに個々の斜面培養
増殖懸濁液を接種し、回転振とう機上28℃にて７日間振
とうしながらインキュベートする。突然変異体培養物は
採取した全ブイヨンのメチルイソブチルケトン抽出液を
薄層クロマロトグラフィープレート（シリカゲル）で展
開し、バニリン試薬をスプレーした後100℃に５分間加
熱して試験することにより検出する。展開系は９部のク
ロロホルムに対し１部のメタノールから成り、Rf値はCP
-91,243は約0.2,CP-91,244は約0.4およびUK-58,852に対
しては約0.7であった。そのようにして２つの突然変異
培養物をた得、それはCP-91,243,CP-91,244およびUK-5
8,852を産生する。これらの突然変異体はファイザーIn
c.の培養物収集物においてFD28455およびFD28518と同定
されている。このようにして得られた突然変異体の形態
学的および培養的特性はＡ．ロゼロルファ(roseorufa)A
TCC53666に記載されているものと本質的に同じである。
これらの突然変異体の区別特性はそれらのCP-91,243お
よびCP-91,244の混合物を産生する能力である。

突然変異体の培養および抗生物質CP-91,243およびCP-9
1,244の単離は従前の多環式エーテル抗生物質を得る発
酵に用いられたものと類似の条件下実施されるであろ
う。例えば米国特許第4,361,649号を参照された。培養
は好適には水性栄養培地中好適には沈水好気条件下かき
まぜながら24℃から36℃の温度で行われる。培養に有用
な栄養培地には糖、デンプンおよびグリセロールのごと
き吸収可能な炭素源；カゼイン、カゼイン酵素的消化
物、大豆ミール、綿実ミール、ピーナッツミール、小麦
グルテン、大豆粉、血液ミール、肉ミールおよび魚ミー
ルのごとき有機窒素源を含んでいる。塩化ナトリウムお
よび炭酸カルシウムのごとき鉱物塩および鉄、マグネシ
ウム、銅、亜鉛、コバルトおよびマンガンのごとき微量
元素同様に、穀物可溶化物、魚ミール綿実ミールおよび
酵母抽出物のごとき増殖物質源もまた有利な結果では利
用されるであろう。発酵の間に過剰の泡立ちが起こった
ら、野菜油またはシリコンのごとき消泡剤が発酵培地に
添加される。沈水増殖のための容器中の培地の通気は好
適には１分当り発酵ブロスの容量当り1/2から２容量の
無菌空気の速度でブイヨン内へ噴霧器を通して強制的に
行う。かきまぜは発酵分野の者には一般的ななじみのか
きまぜ機により維持される。かき混ぜの速度は用いられ
るかき混ぜ機の型に依存する。発酵器は通常分当り300
から1700回転で動いているがフラスコの振とうは通常分
当り300から700の周期で行われる。もちろん、微生物の
移動およびその増殖を通して無菌条件は維持されなけれ
ばならない。

本発明に従った抗生物質の製造のための接種材料は本発
明の所望の微生物培養物の斜面培養物からの、または前
記培養物または前記培養物の解凍菌糸懸濁液を接種した
ルー瓶からの増殖物を用いて得られるであろう。斜面お
よびルー瓶上の微生物の初期の増殖に適した固体培地は
ATCC培地第172号である。突然変異研究で前に説明した
液体培地は凍結に先立った生長力のある菌糸の調製に適
している。得られた増殖物は振とうフラスコまたは接種
物容器へ接種するために使用されるが、接種物容器は振
とうフラスコから種を得てもよい。振とうフラスコ中の
最大増殖には通常４から８日で達するが、一方接種物容
器に沈水した接種材料では通常最も好適な期間である４
から５日であろう。

発酵の間の抗生物質産生の進行は前に記載したごとくバ
ニリン試薬でスプレーすることにより可視化された薄層
クロマロトグラフィーまたは展開プレートに枯草菌をま
いた脳心臓浸出液寒天を層積し、37℃で16時間インキュ
ベートして抗生物質を可視化することにより定性的にモ
ニターできる。薄層クロマロトグラフィーは発酵ブイヨ
ンから抽出された粗および精製物質の成分の分析にも有
用な手段である。

前記突然変異体の発酵により産生される抗生物質CP-91,
243,CP-91,244およびUK-58,852は菌糸中、およびブイヨ
ン中に蓄積され、採取された全未濾過発酵ブイヨン、即
ち全ブイヨンを自然のままのpHでクロロホルム、酢酸エ
チル、メチルイソブチルケトンまたはブタノールのごと
き有機溶媒で抽出することにより分離および回収でき
る。もしくは容易ならないエマルジョンの問題を避ける
ため菌糸体を分離し、それと清澄化ブイヨンは個々に有
機溶媒で抽出される。溶媒抽出液を濃縮すると水っぽい
シロップとなり、カラムクロマトグラフィーにより純粋
なCP-91,243,CP-91,244およびUK-58,852を得る。

本発明の抗生物質の分離および回収の典型的方法は以下
のごとくである：突然変異体の発酵による全ブイヨンが
メチルイソブチルケトンで抽出された。真空下抽出液を
蒸発させると赤っぽい油状物を与え、それはシリカゲル
のカラム上に注入された。シリカゲルカラムは次にクロ
ロホルム／メタノール（19:1）で溶出され、溶出液は薄
層クロマロトグラフィーにより試験された。CP-91,243,
CP-91,244およびUK-58,852に富む分画が合併され、濃縮
または蒸発乾固された。蒸発乾固された各々の抗生物質
含有分画を酢酸エチルに溶解し、これらの分画は個々の
シリカゲルカラム上へ注入された。シリカゲルカラムは
次に酢酸エチルで溶出され再び溶出液は薄層クロマロト
グラフィーにより試験された。CP-91,243およびCP-91,2
44を含む分画は酢酸エチルから結晶化し、一方UK-58,85
2はヘキサンから結晶化した。

本発明の抗生物質は菌糸体に関連した発酵物から、噴霧
乾燥を含む既知の方法による全ブイヨンの蒸発により、
または濾過または遠心分離によりブイヨンからの菌糸体
の分離により回収できる。そのようにして得られる菌糸
体生成物は菌糸体の表面およびその隙間に抗生物質を含
み、菌糸体は有用な担体となっている。

ファイザーInc.の培養収集物においてFD28455およびFD2
8518と同定された突然変異体はブタペスト条約の条項の
もと、寄託物の永続性を提供する公認受託機関であるア
メリカン タイプカルチャーコレクション、ロックビ
ル、メリーランドに寄託されており、もし本出願に特許
が付与されたら公衆においても容易にそれが手に入るで
あろう。培養物FD28455はアクチノマヅラ ロゼオルフ
ァ(Actinomadura roseorufa)ATCC 53869という呼称が
与えられている。培養物FD28518はアクチノマヅラ ロ
ゼオルファ(Actinomadura roseorufa)ATCC 53870とい
う呼称が与えられている。本出願が係属中の間は37C.F.
1.14および35U.S.C.122のもと、および本出願が出願さ
れている国の外国特許法に従って米国特許商標庁の長官
により寄託物が入手可能かどうか決定される。寄託され
た微生物の公衆への入手のすべての制限はそれについて
の特許の付与により永久に除去されるであろう。アクチノマヅラ ロゼロルファ(Actinomadura roseoru
fa)ATCC 53869およびATCC 53870の培養特性はアクチノ
マヅラ ロゼオルファ(Actinomadura roseorufa)のそ
れと本質的に同一であるが、ATCC 53869およびATCC 538
70はさらにCP-91,243およびCP-91,244を生産する。アクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomadura roseoru
fa)ATCC 53666の分類学上の調査が。L.H.Huangにより実
施され、以下の記述がなされている。

培養物は斜面培地からATCC第172号ブイヨンに植付けら
れ振とう機上28℃にて４日間増殖させる。20分遠心分離
し、無菌蒸留水で３回洗浄し、放射菌の構成菌の同定に
普通に使用される培地上に植付ける。

培養物は20℃でインキュベートされ、結果は種々の時間
に、しかし最も普通には14日目に読み取る。色は普通の
用語で記載されているが、正確な色はカラー ハーモニ
ー マニュアル第４版からの色チップと比較することに
より決定された。全細胞アミノ酸分析の方法はBeckerに
よる Appl．Microbiol．12,421-423,1964に記載されて
いる方法である。全細胞の糖はLechevalier,J．Lab．Cl
in．Med．71,934-944,1968;およびStaneckおよびRobert
s,Appl．Microbiol.,28,226-231,1974,に記載されてい
る方法で分析した。比較のためにアクチノマヅラ ロゼ
オルファ(Actinomadura roseorufa)ATCC 39,697のタイ
プ培養物が使用された。

培養物の特性付けのために使用された同定培地およびそ
の組成のための参照文献は以下のごとくである。： 1.トリプトン−酵母抽出物ブイヨン−（ISP＃１培地、
ディフコ）。

2.酵母抽出物−麦芽抽出物寒天−（ISP＃２培地、ディ
フコ）。

3.オートミール寒天−（（ISP＃３培地、ディフコ）。

4.無機塩−デンプン寒天−（ISP＃４培地、ディフ
コ）。

5.グリセロール−アスパラギン寒天−（ISP＃５培地、
ディフコ）。

6.ペプトン−酵母抽出物鉄寒天−（ISP＃６培地、ディ
フコ）。

7.ツァペック−ショ糖寒天−S.A.Waksman、放射菌、第
２巻、培地番号１、p.328,1961。

8.グルコース−アスパラギン寒天−上記文献、培地番号
２、p328。

9.ベネットの寒天−上記文献、培地番号30,p331。

10.エマーソン寒天−上記文献、培地番号28、p331。

11.栄養寒天−上記文献、培地番号14、p330。

12.ゴードン、スミスのチロシン寒天−R.E.Gordonおよ
びM.M.Smith、J. Bacteriol. 69:147-150,1955。

13.カゼイン寒天−上記文献。

14.リンゴ酸カルシウム寒天−S.A.Waksman,Bacteriol.
Rev. 21:1−29,1957。

15.ゼラチン−R.E.GordonおよびJ.M.Mihm,J.Bacterio
l.,73:15-27,1957。

16.デンプン−上記文献。

17.有機硝酸ブイヨン−上記文献。

18.デキストロース硝酸ブイヨン−S.A.Waksman,放射
菌、第２巻、培地番号１、p328,1961,30gのショ糖が3g
のデキストロースに置換され、寒天が除かれている。

19.ポテトニンジン寒天−M.P.Lechevalier,J. Lab. a
nd Clinical Med.，71:934-944,1978;しかし、30gの
ポテト、2.5gのニンジンおよび20gの寒天のみを使用す
る。

20.2％水道水寒天 21.ゴーズの＃１鉱物寒天−G.F.Gauzeら、アンタゴニス
ト様放射菌の分類における問題点、英語版、p13,1957。

22.ゴーズの＃２有機寒天−上記文献。

23.スキムミルク−ディフコ 24.セルロース利用− ａ） H.L.Jensen,Proc.Linn.Soc.N.S.W.55:231-248,19
30。

ｂ） M.LevineおよびH.W.Schoenlein,培養培地編集、
培地培地2511,1930。

25.有機酸の利用−R.E.Gordonら、Int. J. Syst. Ba
cteriol. 24:54-63,1974。

26.淡水化物からの酸産生−上記文献。

27.馬尿酸エステルおよびエスキュリンの加水分解−上
記文献。

28.アデニン、ピポキサンチン、キサンチンおよび尿素
−上記文献。

29.リゾチームへの抵抗−上記文献。

30.炭水化物利用−Ｃ−２培地、H.NonomuraおよびY.Oha
ra,J. Ferment. Technol.，49:887-894,1971。

31.温度範囲−ATCC培地172、ATCC培養物収集カタログ、
15版、p.608,1982。

培養物アクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomadura r
oseorufa) ATCC53666の説明 酵母抽出物−麦芽抽出物寒天−増殖良、ピンク−赤から
赤色（6 1/2ia,7ia,6ia）、盛り上り、しわがよる、白
色空中菌糸体；背面赤色（7ia）；可溶性色素なし。

オートミール寒天−増殖中程度、クリーム色（2ca），
わずかに盛り上り、平滑、または分離されたコロニーと
して出現；空中菌糸無からわずか、白色；背面クリーム
色（2ca）；可溶性色素なし。

無機塩−デンプン寒天−増殖不良から中程度、無色から
クリーム色（2ca）、希薄、平滑；空中菌糸体、無から
わずか白色；背面は表面と同じ；可溶性色素なし。

グリセロール−アスパラギン寒天−増殖、不良から中程
度；クリーム色（2ca）、ピンク色から赤色の点（6ea,6
1/2ga）；空中菌糸体無からわずか、白色；背面無色か
らクリーム色（2ca）、赤色の点；可溶性色素なし。

ツァペック−ショ糖寒天−増殖不良から中程度、クリー
ム色（2ca）、ピンク色から赤色の点あり（5ea,6 1/2i
a）；空中菌糸体無からわずか、白色；背面無色からク
リーム色（2ca）；可溶性色素なし。

グルコース−アスパラギン寒天−増殖中程度から良、ピ
ンク色から赤色（6 1/2ga,6 1/2ha）、盛り上がり；平
滑、粒状からしわ状；空中菌糸体白色から淡いピンク色
（6ea）；背面赤色（6 1/2ga,6 1/2ia）；可溶性色素、
淡い黄色かかった（3ca）。

ゴードン、スミスのチロシン寒天−増殖中程度から良、
ピンク−オレンジ色（5ea）、中程度の盛り上がり、し
わがよる；空中菌糸体無からわずか、白色；背面は表面
と同じ；可溶性色素、黄色がかった色（21c）。

リンゴ酸カルシウム寒天−増殖わずか、無色、希薄、平
滑、空中菌糸体なし；背面無色；可溶性色素なし。

カゼイン寒天−増殖中程度から良、ピンク−オレンジか
らオレンジ色（4ia,5ia）、中程度の盛り上がり、しわ
があり、空中菌糸体なし；背面は黄色がかった淡いピン
ク色（3ga,5ea）；褐色（31c）の可溶性色素。

ベネットの寒天−増殖良、赤色から暗赤色（6 1/2ne,6
1/2ng）、盛り上がり、しわがある；空中菌糸体は白色
からピンク色（6ea）；背面は赤色（6 1/2lc）；褐色
（3ne）の可溶性色素。

エマーソンの寒天−増殖良から秀、オレンジ色（5la,5n
a），盛り上がり、しわがあり、白色空中菌糸体があ
る；背面はオレンジ色（5ic）；可溶性色素なし。

栄養寒天−増殖中程度、淡いオレンジ色（5ea,5ga），
わずかに盛り上がり、平滑、または分離されたコロニー
として出現し、空中菌糸体なし；背面は淡いオレンジ色
（ga）；可溶性色素なし。

ゼラチン寒天−増殖中程度から良、淡いオレンジ色（4g
a）、中程度に盛り上がり、平滑からしわがあるもの
も；空中菌糸体はわずかで白色；背面は淡いオレンジ色
（4ga）；可溶性色素なし。

デンプン寒天−増殖中程度から良、淡いオレンジ色（5g
a）、中程度に盛り上がり、平滑からしわがあるもの
も；空中菌糸体はわずかで白色；背面は表面と同じ；可
溶性色素なし。

ポテト ニンジン寒天−増殖不良から中程度、クリーム
から淡いピンク色（2ca,4ca）、希薄からわずかな盛り
上がり；空中菌糸体はわずかで白色；背面クリームから
淡いピンク色（4ca）；可溶性色素なし。

水道水寒天−増殖不良、無色からクリーム色（1 1/2c
a），希薄、平滑；空中菌糸体はわずかで白色；背面は
表面と同じ；可溶性色素なし。

ゴーズの鉱物培地１−増殖中程度、ピンクから赤色（5c
a,6la）、わずかに盛り上がり平滑；空中菌糸体無から
わずか、白色；背面は表面と同じ；可溶性色素なし。

ゴーズの鉱物培地２−増殖中程度から良、ピンク−オレ
ンジ色（5ga）、中程度に盛り上がり、わずかにしわが
ある；空中菌糸体はわずかで白色；背面は表面と同じ；
可溶性色素なし。

形態的性質−インキュベーション７週間後でも使用され
たどの培地上に胞子は観察されなかった。しかしながら
ポテト ニンジン寒天上、菌糸の膨潤が終期に、側面ま
たは層間で起こり；それらは単一でなめらかであった。
それらは球体（卵形から楕円）であり直径1.2-2.5mまた
は1.2-2.2×0.9-1.8mと測定された。類似の構造体は酵
母抽出物−麦芽抽出物−オートミール寒天、水道水寒
天、ゼラチン寒天、ツァペック−ショ糖寒天、およびゴ
ーズの鉱物培地１上にも観察された。

生化学的性質−メラニンは産生されない；硫化水素は産
生されない；ゼラチンは液化した；デンプンは加水分解
されない；硝酸は亜硝酸に還元された；ジェンセンのセ
ルロースブイヨン上でわずかに増殖するが、レバノン、
シェーンラインのセルロースブイヨン上では増植しな
い；両方のセルロースブイヨン上で崩壊しない；ミルク
上で凝固およびペプトン化；リンゴ酸カルシウムの消
化、陰性；チロシン消化陽性；カゼイン消化陽性。

炭化水素利用；グルコース、ラムノースおよびスクロー
スは利用された；アラビノース、フルクトース、イノシ
トール、マンニトール、ラフィノースおよびキシロース
は利用されない。

陽性テストとしては、酢酸、プロピオン酸およびピルビ
ン酸の利用；グルコース、ラムノース、マルトースおよ
びトレハロースからの酸産生が含まれる。

以下の試験は陰性であった：アデニン、キサンチン、ピ
ホキサンチンおよび尿素の分解；エスキュリンおよび馬
尿酸エステルの加水分解；リゾチームへの抵抗性；安息
香酸、クエン酸、デキストリン、乳酸、リンゴ酸、ムチ
ン酸、シュウ酸、石炭酸およびコハク酸の利用；アラビ
ノース、フルクトース、イノシトール、セロビオース、
ズルシトール、エリスリトール、ガラクトース、グリセ
ロール、ラクトース、マンノース、リボースサリシン、
ソルビトール、ソルボースおよびデンプンからの酸産
生。

全細胞分解−全細胞加水分解物はメソジアミノピメリン
酸、ガラクトース、グルコース、マジロース、リボース
およびラムノースを含んでいる。

温度との関係−21℃ 28℃ 37℃ 45℃ 中程度の増殖 良好な増殖 中程度の増殖 増殖しない
アクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomadura roseoru
fa)ATCC 53666はメラニンを産生できないこと；ピン
ク、ピンク−オレンジ、オレンジから赤色の基体の菌糸
体；および全細胞成分としてのメソージアミノピメリン
酸およびマズロースの存在で特徴付けられる。７週間に
ものぼる長期のインキュベーションにもかかわらず、培
養物は胞子を作らなかったが、いくつかの培地において
菌糸の膨潤がおこった。アクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomadura roseoru
fa)ATCC 53666はほとんどの培養特性およびほとんどす
べての生化学的性質がアクチノマヅラ ロゼオルファ(A
ctinomadura roseorufa)Huang ATCC39,697と同一であ
る。ゼラチン寒天およびデンプン寒天上、ATCC53666の
コロニーは淡いクリーム色というより淡いオレンジ色で
あった。チオシン寒天およびエマーソンの寒天上、それ
らは褐色というよりいくらかの濃淡あるオレンジ色であ
った。ATCC53666はＡ．ロゼオルファ(roseorufa)に似あ
わずミルクを凝固させる。これらの相異はささいなこと
であり、それ故培養物ATCC53666はＡ．ロゼオルファ(ro
seorufa)の新株と考えられる。

微生物アクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomadura r
oseorufa)のさらなる突然変異体、形質転換および突然
変異体の組換え体もまた本発明の範囲内であり、その微
生物はATCC53666の同定特性を持ち、および前記微生物
の突然変異体はATCC53869またはATCC53870の同定特性を
持つものを含んでいる。そのようなさらなる突然変異体
は自発的にも現われ、また当業者には既知の方法により
誘導できる。同様に、微生物の形質転換体および組換え
体は当業者にはよく知られた種々の古典的およびバイオ
テクノロジー技術により得ることができる。すべてのそ
のような突然変異体、形質転換体および組換え体は、も
しそれらが抗生物質CP-91,243およびCP-91,244の一つま
たは両方を産生するならば本発明の範囲に含まれる。培
養により、抗生物質CP-91,243およびCP-91,244の産生に
加え、UK-58,852もまた産生するような前記さらなる突
然変異体、形質転換体および組換え体も本発明の範囲に
含まれる。

本発明の新規酸性多環式エーテル抗生物質のイン ビト
ロでの抗菌活性が常法により試験され、１つまたはそれ
以上の微生物に対するmcg/mlでの最小阻害濃度（MIC）
が測定された。１つのそのような方法は抗生物質感度試
験における国際共同研究により推奨されている方法（Er
iccssonおよびSherris,Acta Pathologica et Micobi
ologia Scandinav,増刊、217、セクションＢ、64-68
［1971］）であり、脳心臓浸出液（BHI）寒天、および
接種反復装置を用いる。一夜増殖させたチューブを標準
接種物として使用するために100倍に希釈する（約0.002
ml中20,000-100,000の細胞を寒天表面に植付ける:20ml
のBHI寒天／皿）。12の試験加水分解の２倍希釈液を用
いる（試験薬剤の初期濃度は200mcg/mlである）。37℃
で18時間後にプレートを読み取る時単一コロニーは無視
する。試験微生物の感受率（MIC）は肉眼で判断して増
殖を完全に阻害することができる最も低い化合物濃度と
して受入れる。

ニワトリにおけるコクシジア感染に対するCP-91,243,CP
-91,244およびその塩の効力データは以下の方法により
得られた。３つの群の生まれて10日目の病原体を持たな
い白色レグホンのオスのひよこに研究する化合物または
そのナトリウムおよび／またはカリウム塩を均一に分散
させたマッシュ規定食を与える。この飼料にして24時間
後各々ひよこに経口で試験するアイメリア(Eimeria)の
特定の種の卵母細胞を接種する。他の生後10日のひよこ
の３つの群には問題化合物またはその塩なしの同一のマ
ッシュ規定食を与える。それらもまた24時間後感染させ
て感染対照物とする。さらに別の生後10日目のひよこ３
つの群に抗生物質を含まない同一のマッシュ規定食を与
え、それらはコクシジアに感染させない。これらは正常
対照物として働く。処置の結果は６日後に評価する。

抗コクシジア活性の測定に使用された判定基準はJ.E.Ly
nchによる“抗コクシジア活性の第一次評価の新しい方
法”Am．J. Vet. Res.，22,324-326,1961に従った０か
ら４の病変評点を用いる活性は各々の処置群の病変評点
を感染対照物の病変評点で割ることにより測定られる。

動物飼料の評価は一般に直接動物に飼料を与えることに
より決定されてきた。英国特許出願第1,197,826号はイ
ン ビトロでの第一胃技術について詳述しており、それ
により微生物により引き起こされる飼料におきる変化が
より容易に測定され、動物飼料の評価が非常に正確にな
った。この技術は器具の使用を含んでおり、その中で動
物の消化過程が行われ、イン ビトロで研究される。動
物飼料、第一胃接種物および種々の発育促進剤をその中
へ導入し、注意深く制御された条件下実験室ユニットか
ら引き出し、微生物による飼料の消費の間起こった変化
を批判的におよび累進的に研究する。胃液のプロピオン
酸含量の増加は、飼料組成物中の発育促進剤により引き
起こされた全体の反芻動物の望ましい応答を示してい
る。プロピオン酸含量の変化は対照胃液に観察されるプ
ロピオン酸のパーセントとして表現される。長期にイン
ビボで飼料を与える研究が、胃液中のプロピオン酸増
加と改良された動物動作の間の信頼できる相関を示すた
めに使用された。

市販の肥畜飼料に加えて干し草で飼料を与えた孔形成済
のメス中から胃液を集める。胃液は直ちにチーズ布を通
して濾過し、40mlを400mgの標準基質（68％コンスター
チ＋17％セルロース＋15％抽出された大豆ミール）、10
mlのpH6.8の緩衝液および試験する化合物を含む50mlの
コニカルフラスコに添加する。フラスコに酸素を除いた
窒素を約２分通し、振とう水溶中39℃にて約16時間イン
キュベートする。すべての試験は３回繰り返す。

インキュベーション後、飼料の5mlを1mlの25％メタリン
酸と混合する。10分後0.25mlのギ酸を添加し、混合物は
1500rpmで10分間遠心分離する。飼料はD.W.Kellog、J.D
airy.Science, 52,1690,1969の方法によりガスクロマ
トグラフィーにより分析する。未処置および処置インキ
ュベーションフラスコからの飼料の酢酸、プロピオン酸
および酪酸のピーク高を決定する。

飼鳥類におけるコクシジア症、ニワトリ、豚、畜牛およ
び羊のごとき家畜の腸炎および豚赤痢の処置に使用する
ためには、本発明の化合物は適した担体中経口で投与さ
れる。都合の良いのは、薬物治療は単に飲料水または飼
鳥類の飼料中で実施され、そのため薬物の治療量は日常
の飲料水または飼鳥類飼料と供に摂取される。薬剤は好
適には液体、水可溶性濃縮物（水可溶生塩の水性溶液の
ごとき）の形で飲料水の中へ直接測り込むことができ、
また前もって混合物または濃縮物の形でのごとく飼料中
へ直接混合できる。担体中の治療薬の混合物または濃縮
物が飼料中に薬剤を包含させるために使用される。適し
た担体は必要に応じ、水、種々のミールのごとき液体ま
たは固体である；例えば通常に飼鳥類の飼料として用い
られているごとき大豆油ミール、亜麻仁油ミール、トウ
モロコシ穂軸ミールおよび鉱物混合物。特に有効な担体
はそれぞれの動物飼料それ自身である；即ちそのような
飼料の一部。さらに菌糸体を担体として使用できる。担
体は前もっての混合物がブレンドされる仕上りの飼料中
の活性物質の均一な分布を容易にする。本強力薬剤のほ
んの少しの比率が必要とされるのでこのことは重要であ
る。本化合物が前もっての混合物へ、続いて飼料内へ十
分混ぜ合わされることは重要である。この点で、本薬剤
は大豆油、コーン油、綿実油等のごとき適した油状媒質
または揮発性有機溶媒に分散または溶解され、次に担体
と混ぜ合わされる。仕上りの飼料中の薬剤量は適当な比
率を前もっての混合物と飼料を混ぜ合わせて治療薬の望
ましいレベルを得るので、濃縮物中の活性物質の比率は
広い範囲に変化できる。

高度に強力な濃縮物は製造者により大豆油ミールおよび
前記の他のミールのごときタンパク質系担体と混ぜ合わ
され、動物へ直接与えるのに適した濃縮補充物が産生さ
れる。そのような例においては動物は通常の規定食を消
費することになる。もしくは、そのような濃縮補充物は
直接飼料に添加され、本発明の化合物の治療有効量を含
む栄養的に均高のとれた仕上りの飼料が製造される。混
合物はツインシェルブレンダーのごとき常法により十分
に混ぜ合わされ均一性を確かにする。

もちろん、当業者にとってここに説明された化合物の使
用量が異った環境では変化することは明らかであろう。
例えば、発育期の間の飼鳥類のコクシジア症の処置にお
いては（即ちひよこの最初の６から12週の間）低レベル
の薬物治療が効果的予防分量である。確立された感染の
処置においては感染を打ち負かせるためより高いレベル
が必要であろう。飼料中の使用レベルは一般的に15から
120ppmの範囲であろう。飲料水で投与する場合、その濃
度は、薬物治療の同じ日用量（即ち15から120ppm）を提
供するものであろうし、飼料の平均一日消費量の水の平
均一日消費量に対する重要比により係数がかけられるで
あろう。

本発明の抗生物質は遊離酸としてもまたはその陽イオン
塩としても投与できる。例えば本抗生物質のナトリウム
またはカリウム塩を持いることができる。そのような塩
は当業者にはよく知られた方法により形成される。抗生
物質CP-91,243およびCP-91244は個々にまた互いおよび
／またはUK-58,852と組合わせて投与できる。抗生物質C
P-91,243、CP-91,244およびUK-58,852は粗生成物の形ま
たは所望の効能濃度で抗生物質を含む乾燥発酵ブイヨン
として使用できる。

本発明は以下の実施例により例示される。しかしながら
本発明がこれらの実施例の特定の細部に制限されるわけ
ではないことに注意されたい。

実施例１ アクチノマヅラ ロゼオルファ（Actinomadura roseoru
fa）FD28455(ATCC53869)の発酵および抗生物質の回収 A.接種材料の調製 下記の組成を持つ無菌水性培地を準備する。 成分 グラム／リットル セルロース 10.0 コーンスターチ 5.0 コーン浸出液 5.0 MZアミンYTT^＊ 5.0 塩化コバルト 0.002 ＊カゼインの酵素消化物のための登録商標、ヒュムコ
シェフィルド ケミカル Co,Inc.pHを17.0に調整後、
培地を2800mlのフェルンバッハフラスコに分配し（800m
l）、綿栓／紙栓をして121℃（15p.s.i.）で60分間オー
トクレーブし無菌化する。冷後培地にFD28455の斜面培
養物からの生きている細胞懸濁液を接種する。フラスコ
は28℃にて回転振とう機上、1 1/2から2 1/2インチの変
位および分当り150から200の周期で６日間振とうする。

B.発酵およびCP-91,243、CP-91,244およびUK-58,852の
単離 800mlの増殖した培養物を含むフェルンバッハフラスコ
を下記の組成の８リットルの無菌培地を含む14リットル
の発酵容器に接種する（それには4mlの消泡剤が添加さ
れている）； 成分 グラム／リットル セルロース 55.0 大豆粉 10.0 コーン浸出液 15.0 血液ミール 10.0 MnSO₄・H₂O 0.1 MgSO₄・7H₂O 0.1 CoCl₂・6H₂O 0.002 炭酸カルシウム 3.0 pHを6.9-7.0に調整 発酵は30°にて１分当り500回転で攪拌しながら、１分
当りブイヨン容量当り0.75容量の空気を通気しながら、
かなりの活性が産生されるまで実施した。ブイヨン中の
CP-91,243/CP-91,244/UK-58,852および回収の流れは9:1
クロロホルム：メタノールから成る系で展開するシリカ
ゲル薄層クロマトグラフィープレートを用いることによ
り視覚化された。プレートはバニリン試薬（３％濃硫酸
を含む100mlのエタノールに6gのバニリンを溶解）でス
プレーされ、100℃にて５分間加熱された。抗生物質は
赤色がかった青いスポットとして現れる。もしくは0.4m
lの2,3,5−トリフェニル−2H−テトラドリウムクロリド
５％溶液が添加してあり、枯草菌を植付けた寒天をプロ
ートに層積し、16時間37℃でインキュベートすると赤の
背景に対し無色の領域として抗生物質が可視化される。

２つの14リットル発酵容器の発酵ブイヨンを合併するこ
とにより得られる全ブイヨン（15リットル）を等量のメ
ルチイメブチルケトンと20分間攪拌する。水相および溶
媒相を分離し、水相は捨て溶媒を濃縮すると油状物（24
g）を得た。この濃縮物は5.5cm×8cmガラスカラム中の7
00gのシリカゲル（70-230メッシュ、ユニバーサル、ア
ブソーバンツ）上、クロロホルム：メタノール（19:1）
を溶出液として用いるクロマトグラフィーを行った。流
速は10ml/minで１分に付き１分画を取った。これらの分
画はクロロホルム：メタノール（9:1）の系で展開する
薄層クロマトグラフィー（アナルテク シリカゲルCFプ
レート）により試験し、前記のごとくバニリン試薬とス
プレー／加熱することにより視覚化された。ほとんどCP
-91,243,CP-91,244またはUK-58,852を含む分画を抗生物
質ごときに合併し濃縮すると0.7gのCP-91,243,4.9）ｇ
のCP-91,244および3.6gのUK-58,852を得た。

CP-91,244を含む濃縮物は2.5cm×100cmガラスカラム中2
00gのシリカゲル（70-230メッシュ、ユニバーサル、ア
ブソーバンツ）上、酢酸エチルを溶出液として使用する
クロマロトグラフィーを再び行った。流速は10ml/minで
あり、１分毎に１つの分画とした。分画は前記のごとく
薄層クロマロトグラフィーにより試験し、CP-91,244に
富んだ分画を濃縮し、酢酸エチルから結晶化し850mgのC
P-91,244を得た。

CP-91,243およびUK-58,852分画も同様の方法でクロマロ
トグラフィーを行い280mgのCP-91,243（酢酸エチルから
結晶化）および1.5gのUK-58,852（ヘキサンから結晶化
された）を得た。

CP-91,243およびCP-91,244の構造同定は抗生物質のナト
リウム塩のＣ−13NMR、元素分析およびFAB/MSに基づ
き、既知の抗生物質UK-58,852およびUK-61,689と比較し
て行った。

CP-91,243は以下のデータを与えた:mp178-180℃、 ▲〔α〕²⁵ _D▼＝−7.6°（ｃ＝1,CH₃OH）およびFAB/MS9
96(M+Na)⁺； 元素分析：C₅₀H₈₃O₁₈Na H₂Oとして 計算値:C,59.22; H,8.47 実測値:C,59.22: H,8.23 Ｃ−13nmr〔CDCl₃（２滴のCD₃ODを含む）中の化学シフ
ト（ppm）で水素の数を括弧内に示してある〕： 179.3（０）,107.6（０）,103.3（１）,102.5（１）,9
8.0（１）,97.0（０）,87.1（１）,84.8（０）,84.3
（０）,82.6（１）,82.4（１）,81.8（１）,81.0
（１）,80.2（１）,76.0（１）,75.8（１）,73.4
（１）,71.4（１）,70.9（１）,70.2（１）,67.9
（１）,67.6（１）,59.6（３）,45.4（２）,44.7
（１）,39.9（１）,39.0（２）,36.6（２）,33.8
（１）,33.8（２）,33.5（１）,33.5（２）,33.1
（１）,32.5（２）,32.5（２）,32.3（２）,32.3
（２）,31.4（２）,31.0（２）,27.5（３）,26.9
（２）,26.1（３）,23.2（３）,18.1（３）,17.9
（３）,17.4（３）,16.8（３）,12.3（３）,10.9（３）
および10.3（３） CP-91,244は以下のデータを与えた:mp154-157℃▲
〔α〕²⁵ _D▼＝−4.8°（ｃ＝1,CH₃OH）およびFAB/MS101
0(M+Na)⁺； 元素分析：C₅₁H₈₅O₁₈Naとして 計算値:C,60.65; H,8.59 実測値:C,60.41: H,8.58 Ｃ−13nmr〔CDCl₃中の化学シフト（ppm）で括弧内に水
素原子の数を示してある〕： 179.3（０）,107.6（０）,103.2（１）,102.5（１）,9
8.0（０）,97.0（０）,87.1（１）,84.7（０）,84.3
（０）,82.6（１）,82.4（１）,81.8（１）,80.9
（１）,80.3（１）,80.0（１）,75.8（１）,74.7
（１）,73.1（１）,71.7（１）,70.2（１）,67.8
（１）,67.5（１）,59.6（３）,56.8（３）,45.7
（２）,44.8（１）,40.0（１）,39.0（２）,36.6
（２）,33.9（２）,33.7（１）,33.6（１）,33.6
（２）,33.2（１）,32.6（２）,32.4（２）,31.7
（２）,31.5（２）,30.7（２）,27.7（３）,27.0
（２）,26.9（２）,26.1（３）,23.3（３）,18.4
（３）,18.1（３）,17.5（３）,17.0（３）,12.4
（３）,11.1（３）および10.4（３） それ故CP-91,243およびCP-91,244の構造式は （式中CP-91,243においてはＲはＨでありCP-91244にお
いてはＲはCH₃である）と決定された。

実施例２ アクチノマヅラ ロゼオルファ（Actinomadura roseoru
fa）FD28518（ATCC53870）の発酵および抗生物質の回収 実施例１に記載した方法に従ってアクチノマヅラ ロゼ
オルファ(Actinomadura roseorufa)ATCC53870が発酵さ
れ、ブイヨン（15リトル）が抽出され、溶媒相が濃縮さ
れ油状物（17g）を得た。濃縮物は実施例１に記載した
方法に従ってクロマロトグラフィーが行われた。ほとん
どCP-91,243,CP-91,244またはUK-58,852を含む分画を抗
生物質ごとに合併し、濃縮すると5gのCP-91,243,3.5gの
CP-91,244および2.5gのUK-58,852を得た。濃縮物は実施
例１に記載した方法に従ってさらにクロマロトグラフィ
ーを行い結晶化し、その濃縮液から1.2gのCP-91,243,48
0mgのCP-91,244および190mgのUK-58,852を得た。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 19/58 7432−4Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:03） (Ｃ１２Ｐ 19/58 Ｃ１２Ｒ 1:03）

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式 （式中、ＲはＨまたはCH₃） の抗生物質および医薬として適当なカチオン塩。
2. 【請求項２】アクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomad
   ura roseorufa)のATCC53869またはATCC53870の同定特
   性を有する突然変異体である微生物、またはそのさらな
   る突然変異体、形質転換体または組換え体であってATCC
   53869またはATCC53870の同定特性を保持する微生物であ
   って、培養により請求項１の抗生物質、または、請求項
   １の抗生物質および式 の抗生物質（以下、「UK58,852」という）を生産する能
   力を有する、前記微生物。
3. 【請求項３】アクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomad
   ura roseorufa)のATCC53869またはATCC53870の同定特
   性を有する突然変異体である微生物、またはそのさらな
   る突然変異体、形質転換体または組換え体であってATCC
   53869またはATCC53870の同定特性を保持する微生物であ
   って、請求項１記載の抗生物質を生産する能力を有する
   前記微生物を、沈水好気発酵条件下、同化可能な炭素、
   窒素および無機塩源を含む水性栄養培地中で発酵させる
   ことからなる、請求項１に記載した抗生物質の製造方
   法。
4. 【請求項４】アクチノマヅラ ロゼオルファ(Actinomad
   ura roseorufa)のATCC53869またはATCC53870の同定特
   性を有する突然変異体である微生物、またはそのさらな
   る突然変異体、形質転換体または組換え体であってATCC
   53869またはATCC53870の同定特性を保持する微生物であ
   って、請求項１記載の抗生物質およびUK58,852を生産す
   る能力を有する前記微生物を、沈水好気発酵条件下、同
   化可能な炭素、窒素および無機塩源を含む水性栄養培地
   中で発酵させることからなる、請求項１記載の抗生物質
   およびUK58,852の製造方法。
5. 【請求項５】さらに、前記抗生物質を単離することより
   なる請求項３に記載の方法。
6. 【請求項６】さらに、前記抗生物質を単離することより
   なる請求項４に記載の方法。
7. 【請求項７】家禽類におけるコクシジア感染を制御する
   方法であって抗コクシジア有効量の： （ａ）請求項１記載の抗生物質の少なくとも１種：また
   は （ｂ）請求項１記載の抗生物質の少なくとも１種および
   UK58,852を前記家禽類に投与することからなる方法。
8. 【請求項８】家禽類のための栄養飼料組成物であって； （ａ）請求項１記載の抗生物質の少なくとも１種：また
   は （ｂ）請求項１記載の抗生物質の少なくとも１種および
   UK58,852の前記家禽類のコクシジア感染の制御に有効な
   量からなる組成物。
9. 【請求項９】家畜における腸炎の治療方法であり、前記
   家畜に対して腸炎治療量の：（ａ）請求項１記載の抗生
   物質の少なくとも１種：または （ｂ）請求項１記載の抗生物質の少なくとも１種および
   UK58,852を投与することからなる方法。
10. 【請求項１０】家畜のための栄養飼料組成物であり； （ａ）請求項１記載の抗生物質の少なくとも１種：また
    は （ｂ）請求項１記載の抗生物質の少なくとも１種および
    UK58,852の前記家畜の腸炎治療に有効な量からなる組成
    物。
11. 【請求項１１】豚赤痢の治療のための方法で豚に： （ａ）請求項１記載の抗生物質の少なくとも１種：また
    は （ｂ）請求項１記載の抗生物質の少なくとも１種および
    UK58,852を投与することからなる方法。
12. 【請求項１２】反芻動物または単一胃動物における発育
    促進および／または飼料利用の効率促進の方法で、前記
    動物に発育促進および／または飼料利用の効率促進量
    の： （ａ）請求項１記載の抗生物質の少なくとも１種：また
    は （ｂ）請求項１記載の抗生物質の少なくとも１種および
    UK58,852を投与することからなる方法。