JPH0771477B2 - 有機ｃ−ｓ結合の開裂に有用な突然変異体微生物 - Google Patents
有機ｃ−ｓ結合の開裂に有用な突然変異体微生物Info
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- JPH0771477B2 JPH0771477B2 JP3000028A JP2891A JPH0771477B2 JP H0771477 B2 JPH0771477 B2 JP H0771477B2 JP 3000028 A JP3000028 A JP 3000028A JP 2891 A JP2891 A JP 2891A JP H0771477 B2 JPH0771477 B2 JP H0771477B2
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- C07K1/113—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides without change of the primary structure
- C07K1/1133—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides without change of the primary structure by redox-reactions involving cystein/cystin side chains
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- C10G32/00—Refining of hydrocarbon oils by electric or magnetic means, by irradiation, or by using microorganisms
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
- C10L—FUELS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NATURAL GAS; SYNTHETIC NATURAL GAS OBTAINED BY PROCESSES NOT COVERED BY SUBCLASSES C10G OR C10K; LIQUIFIED PETROLEUM GAS; USE OF ADDITIVES TO FUELS OR FIRES; FIRE-LIGHTERS
- C10L9/00—Treating solid fuels to improve their combustion
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は有機的に結合した硫黄を
炭質物質からその炭質物質の発熱量を保持しながら選択
的に除去することが可能なバチルス・スフェリクスの突
然変異体菌株に関する。本発明の微生物は硫黄含有石炭
および硫黄含有石油のような化石燃料からの有機硫黄の
除去に特に有用である。
炭質物質からその炭質物質の発熱量を保持しながら選択
的に除去することが可能なバチルス・スフェリクスの突
然変異体菌株に関する。本発明の微生物は硫黄含有石炭
および硫黄含有石油のような化石燃料からの有機硫黄の
除去に特に有用である。
【０００２】
【従来の技術】石炭および石油のような炭質燃料の硫黄
含有量は環境への有害な影響のためにこのような物質の
相当な量の利用の妨げとなっている。無機黄鉄鉱性硫黄
および有機的に結合した硫黄はそれぞれ石炭の約３．５
重量％程度含まれていることがある。黄鉄鉱性硫黄は重
液選鉱、選択的凝集、浮遊選鉱、ジグ選鉱、磁力選鉱、
浸出および水流化などの方法によって比較的容易に除去
されることが見出された。硫黄細菌（Ｔｈｉｏｂａｃｉ
ｌｌｕｓ）種およびスルホロバス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕ
ｓ）種のような細菌を用いて無機黄鉄鉱性硫黄を酸化す
ることによるその微生物代謝が知られている。エリグー
・シー・エイ（Ｅｌｉｇｗｅ，Ｃ．Ａ．）、「石炭の微
生物による脱酸化（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｄｅｓｕｌｆ
ｕｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏａｌ）」，Ｆｕｅｌ，
６７，４５１〜４５８（１９８８）。これらの化学無機
栄養生物は無機黄鉄鉱性硫黄化合物をエネルギー源とし
て用いることができ、しかも石炭から数日間で９０％以
上の無機黄鉄鉱性硫黄を除去することができる。チオバ
チルス・フェロオキシダンス（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ｆｅｒｒｏｏｘｉｄａｎｓ）は石炭から黄鉄鉱性硫
黄を除去するのに適当なものとして米国特許第４，２０
６，２８８号明細書に示されている。
含有量は環境への有害な影響のためにこのような物質の
相当な量の利用の妨げとなっている。無機黄鉄鉱性硫黄
および有機的に結合した硫黄はそれぞれ石炭の約３．５
重量％程度含まれていることがある。黄鉄鉱性硫黄は重
液選鉱、選択的凝集、浮遊選鉱、ジグ選鉱、磁力選鉱、
浸出および水流化などの方法によって比較的容易に除去
されることが見出された。硫黄細菌（Ｔｈｉｏｂａｃｉ
ｌｌｕｓ）種およびスルホロバス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕ
ｓ）種のような細菌を用いて無機黄鉄鉱性硫黄を酸化す
ることによるその微生物代謝が知られている。エリグー
・シー・エイ（Ｅｌｉｇｗｅ，Ｃ．Ａ．）、「石炭の微
生物による脱酸化（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｄｅｓｕｌｆ
ｕｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏａｌ）」，Ｆｕｅｌ，
６７，４５１〜４５８（１９８８）。これらの化学無機
栄養生物は無機黄鉄鉱性硫黄化合物をエネルギー源とし
て用いることができ、しかも石炭から数日間で９０％以
上の無機黄鉄鉱性硫黄を除去することができる。チオバ
チルス・フェロオキシダンス（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ｆｅｒｒｏｏｘｉｄａｎｓ）は石炭から黄鉄鉱性硫
黄を除去するのに適当なものとして米国特許第４，２０
６，２８８号明細書に示されている。
【０００３】バチルス・スルファスポルター（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ｓｕｌｆａｓｐｏｒｔａｒｅ）ＡＴＣＣ３９
９０９は黄鉄鉱性硫黄と有機硫黄との区別なく石炭から
硫黄を除去することが可能であることが米国特許第４，
６３２，９０６号明細書に示された。硫黄化合物に富む
現場での増殖によって調製され、続いて石炭存在下で増
殖させた７種類のグラ陰性桿菌（ＡＴＣＣ３９３２７）
の未同定の混合培養物は米国特許第４，６５９，６７０
号明細書に示されたように石炭の硫黄含有量を約２０％
／日で減少させ、大部分は有機硫黄の減少であることが
分かった。
ｌｌｕｓ ｓｕｌｆａｓｐｏｒｔａｒｅ）ＡＴＣＣ３９
９０９は黄鉄鉱性硫黄と有機硫黄との区別なく石炭から
硫黄を除去することが可能であることが米国特許第４，
６３２，９０６号明細書に示された。硫黄化合物に富む
現場での増殖によって調製され、続いて石炭存在下で増
殖させた７種類のグラ陰性桿菌（ＡＴＣＣ３９３２７）
の未同定の混合培養物は米国特許第４，６５９，６７０
号明細書に示されたように石炭の硫黄含有量を約２０％
／日で減少させ、大部分は有機硫黄の減少であることが
分かった。
【０００４】ヒドロゲナーゼ産生微生物である硫酸塩還
元菌（Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｄｅｓｕｌｆｒｉｃ
ａｎｓ）およびスポロビブリオ属（Ｓｐｏｒｏｖｉｂｒ
ｉｏ）の存在下、水素と接触させさせることによって石
油炭化水素から硫黄を除去し、続いて気体生成物の形態
で硫黄を除去することは米国特許第２，６４１，５６４
号明細書に示されている。シュードモナス属（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ）による石油からの硫黄の除去はＣ−Ｃ
開裂によるものであることがハートデジェン・エフ・ジ
ェイ（Ｈａｒｔｄｅｇｅｎ，Ｆ．Ｊ．），コバーン・ジ
ェイ・エム（Ｃｏｂｕｒｎ，Ｊ．Ｍ．），およびロバー
ツ・アール・エル（Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｌ．）、「微
生物による石油の脱硫化（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｄｅｓ
ｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｅｔｒｏｌｅｕ
ｍ）」、ケム・エング・プログレス（Ｃｈｅｍ．Ｅｎ
ｇ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ），８０巻，第５号，６３〜６７
頁（１９８４）に示されている。石油から硫黄を除去す
るための種々のシュードモナスについての一般的な内容
はエッカート・ヴイ（Ｅｃｋａｒｔ，Ｖ．），ヒーク・
ダブリュー（Ｈｉｅｋｅ，Ｗ．），バオフ・ジェイ（Ｂ
ａｕｃｈ，Ｊ．）およびゲンチュ・エイチ（Ｇｅｎｔｚ
ｓｃｈ，Ｈ．），「微生物による石油および重質石油留
分の脱硫化。１．ロマシュキノ原油の微生物による好気
的脱硫化の研究（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｄｅｓｕｌｆｕ
ｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ａｎｄ
Ｈｅａｖｙ Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ Ｆｒａｃｔｉｏｎ
ｓ．１．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ
Ａｅｒｏｂｉｃ Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ ｏ
ｆ Ｒｏｍａｓｈｋｉｎｏ Ｃｒｕｄｅ Ｏｉｌ）」，
ケミカル・アブストラクツ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓ
ｔｒａｃｔｓ），９４巻，第１４２２３０ｑ号（１９８
１）；エッカート・ヴイ，ヒーク・ダブリュー，バオフ
・ジェイおよびゲンチュ・エイチ，「微生物による石油
および重質石油留分の脱硫化。３．微生物の好気的脱硫
化による燃料−Ｄ−油の化学的組成の変化（Ｍｉｃｒｏ
ｂｉａｌ Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐ
ｅｔｒｏｌｅｕｍ ａｎｄ Ｈｅａｖｙ Ｐｅｔｒｏｌ
ｅｕｍ Ｆｒａｃｔｉｏｎｓ．３．Ｃｈａｎｇｅ ｉｎ
ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ
ｏｆＦｕｅｌ−Ｄ−Ｏｉｌ ｂｙ Ｍｉｃｒｏｂｉａ
ｌ Ａｅｒｏｂｉｃ Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏ
ｎ）」，ケミカル・アブストラクツ，９７巻，第１４７
２５９ｃ号（１９８２）；リー・ミン・ジャイ（Ｌｅ
ｅ，Ｍｉｎ Ｊａｉ）およびオー・ミュン・ソー（Ｏ
ｈ，Ｍｙｕｎｇ Ｓｏｏ），「硫黄還元微生物の単離、
同定、および生理学的性質（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，Ｉｄ
ｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆ Ｓ
ｏｍｅ Ｓｕｌｆｕｒ−Ｒｅｄｕｃｉｎｇ Ｍｉｃｒｏ
ｂｅｓ）」，ケミカル・アブストラクツ，７８巻，第９
４６０５ｍ号（１９７３）；バオフ・ジェイ，ゲンチュ
・エイチ，ヒーク・ダブリュー，エーカット・ヴイ，ケ
ーラー・エム（Ｋｏｅｈｌｅｒ，Ｍ．），およびバベン
ツィン・エイチ・ビー（Ｂａｂｅｎｚｉｎ，Ｈ．
Ｂ．），「重質石油留分の微生物による酸化脱硫化（Ｏ
ｘｉｄａｔｉｖｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ Ｈｅａｖｙ Ｐ
ｅｔｒｏｌｅｕｍ Ｆｒａｃｔｉｏｎｓ）」，ケミカル
・アブストラクツ，８３巻，第８２５３０ｙ号（１９７
５）；およびユダ・サダユキ（Ｙｕｄａ，Ｓａｄａｙｕ
ｋｉ），「シュードモナス・ハコネンシスによる石油の
脱硫化（Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａ
ｔｉｏｎ ｂｙ Ｐｓｅｄｏｍｏｎａｓ ｈａｃｏｎｅ
ｎｓｉｓ）」，ケミカル・アブストラクツ，８４巻，第
４６９８３ｊ号（１９７６）に示されている。微生物に
よって石油から硫黄を除去する場合、チオバチルス・チ
オオキシダンス（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｉｏ
ｏｘｉｄａｎｓ）は最も効果的なＳ−酸化剤として、そ
してシュードモナス・プトレファシエンス（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ）および硫酸
塩還元菌（Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ ｄｅｓｕｌｆ
ｒｉｃａｎｓ）は最も効果的なＳ−還元剤として同定さ
れた。リー・エム・ジェイ（Ｌｅｅ，Ｍ．Ｊ．），ハー
・ワイ・シー（Ｈａｈ，Ｙ．Ｃ．）およびリー・ケイ・
ダブリュー（Ｌｅｅ，Ｋ．Ｗ．），「微生物による石油
の脱硫化。Ｉ．硫黄酸化細菌および硫黄還元細菌の単離
および同定（Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｂｙ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓ
ｍｓ．Ｉ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉ
ｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｕｌｆｕｒ−Ｏｘｉｄｉｚ
ｉｎｇ ａｎｄ −Ｐｅｄｕｃｉｎｇ Ｂａｃｔｅｒｉ
ａ）」，ケミカル・アブストラクツ，８５巻，第１５６
４１４ｄ号（１９７６）；リー・エム・ジェイ，ハー・
ワイ・シーおよびリー・ケイ・ダブリュー，「微生物に
よる石油の脱硫化。III.脱硫化細菌との接触反応による
石油の脱硫化（Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｂｙ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉ
ｓｍｓ．III.Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ Ｐ
ｅｔｒｏｌｅｕｍ ｂｙ Ｃｏｎｔａｃｔ Ｒｅａｃｔ
ｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚｉｎｇ Ｂｅ
ｃｔｅｒｉａ）」，ケミカル・アブストラクツ，８５
巻，第１４５４４８ｓ号（１９７６）。
元菌（Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｄｅｓｕｌｆｒｉｃ
ａｎｓ）およびスポロビブリオ属（Ｓｐｏｒｏｖｉｂｒ
ｉｏ）の存在下、水素と接触させさせることによって石
油炭化水素から硫黄を除去し、続いて気体生成物の形態
で硫黄を除去することは米国特許第２，６４１，５６４
号明細書に示されている。シュードモナス属（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ）による石油からの硫黄の除去はＣ−Ｃ
開裂によるものであることがハートデジェン・エフ・ジ
ェイ（Ｈａｒｔｄｅｇｅｎ，Ｆ．Ｊ．），コバーン・ジ
ェイ・エム（Ｃｏｂｕｒｎ，Ｊ．Ｍ．），およびロバー
ツ・アール・エル（Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｌ．）、「微
生物による石油の脱硫化（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｄｅｓ
ｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｅｔｒｏｌｅｕ
ｍ）」、ケム・エング・プログレス（Ｃｈｅｍ．Ｅｎ
ｇ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ），８０巻，第５号，６３〜６７
頁（１９８４）に示されている。石油から硫黄を除去す
るための種々のシュードモナスについての一般的な内容
はエッカート・ヴイ（Ｅｃｋａｒｔ，Ｖ．），ヒーク・
ダブリュー（Ｈｉｅｋｅ，Ｗ．），バオフ・ジェイ（Ｂ
ａｕｃｈ，Ｊ．）およびゲンチュ・エイチ（Ｇｅｎｔｚ
ｓｃｈ，Ｈ．），「微生物による石油および重質石油留
分の脱硫化。１．ロマシュキノ原油の微生物による好気
的脱硫化の研究（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｄｅｓｕｌｆｕ
ｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ａｎｄ
Ｈｅａｖｙ Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ Ｆｒａｃｔｉｏｎ
ｓ．１．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ
Ａｅｒｏｂｉｃ Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ ｏ
ｆ Ｒｏｍａｓｈｋｉｎｏ Ｃｒｕｄｅ Ｏｉｌ）」，
ケミカル・アブストラクツ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓ
ｔｒａｃｔｓ），９４巻，第１４２２３０ｑ号（１９８
１）；エッカート・ヴイ，ヒーク・ダブリュー，バオフ
・ジェイおよびゲンチュ・エイチ，「微生物による石油
および重質石油留分の脱硫化。３．微生物の好気的脱硫
化による燃料−Ｄ−油の化学的組成の変化（Ｍｉｃｒｏ
ｂｉａｌ Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐ
ｅｔｒｏｌｅｕｍ ａｎｄ Ｈｅａｖｙ Ｐｅｔｒｏｌ
ｅｕｍ Ｆｒａｃｔｉｏｎｓ．３．Ｃｈａｎｇｅ ｉｎ
ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ
ｏｆＦｕｅｌ−Ｄ−Ｏｉｌ ｂｙ Ｍｉｃｒｏｂｉａ
ｌ Ａｅｒｏｂｉｃ Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏ
ｎ）」，ケミカル・アブストラクツ，９７巻，第１４７
２５９ｃ号（１９８２）；リー・ミン・ジャイ（Ｌｅ
ｅ，Ｍｉｎ Ｊａｉ）およびオー・ミュン・ソー（Ｏ
ｈ，Ｍｙｕｎｇ Ｓｏｏ），「硫黄還元微生物の単離、
同定、および生理学的性質（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，Ｉｄ
ｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆ Ｓ
ｏｍｅ Ｓｕｌｆｕｒ−Ｒｅｄｕｃｉｎｇ Ｍｉｃｒｏ
ｂｅｓ）」，ケミカル・アブストラクツ，７８巻，第９
４６０５ｍ号（１９７３）；バオフ・ジェイ，ゲンチュ
・エイチ，ヒーク・ダブリュー，エーカット・ヴイ，ケ
ーラー・エム（Ｋｏｅｈｌｅｒ，Ｍ．），およびバベン
ツィン・エイチ・ビー（Ｂａｂｅｎｚｉｎ，Ｈ．
Ｂ．），「重質石油留分の微生物による酸化脱硫化（Ｏ
ｘｉｄａｔｉｖｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ Ｈｅａｖｙ Ｐ
ｅｔｒｏｌｅｕｍ Ｆｒａｃｔｉｏｎｓ）」，ケミカル
・アブストラクツ，８３巻，第８２５３０ｙ号（１９７
５）；およびユダ・サダユキ（Ｙｕｄａ，Ｓａｄａｙｕ
ｋｉ），「シュードモナス・ハコネンシスによる石油の
脱硫化（Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａ
ｔｉｏｎ ｂｙ Ｐｓｅｄｏｍｏｎａｓ ｈａｃｏｎｅ
ｎｓｉｓ）」，ケミカル・アブストラクツ，８４巻，第
４６９８３ｊ号（１９７６）に示されている。微生物に
よって石油から硫黄を除去する場合、チオバチルス・チ
オオキシダンス（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｉｏ
ｏｘｉｄａｎｓ）は最も効果的なＳ−酸化剤として、そ
してシュードモナス・プトレファシエンス（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ）および硫酸
塩還元菌（Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ ｄｅｓｕｌｆ
ｒｉｃａｎｓ）は最も効果的なＳ−還元剤として同定さ
れた。リー・エム・ジェイ（Ｌｅｅ，Ｍ．Ｊ．），ハー
・ワイ・シー（Ｈａｈ，Ｙ．Ｃ．）およびリー・ケイ・
ダブリュー（Ｌｅｅ，Ｋ．Ｗ．），「微生物による石油
の脱硫化。Ｉ．硫黄酸化細菌および硫黄還元細菌の単離
および同定（Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｂｙ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓ
ｍｓ．Ｉ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉ
ｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｕｌｆｕｒ−Ｏｘｉｄｉｚ
ｉｎｇ ａｎｄ −Ｐｅｄｕｃｉｎｇ Ｂａｃｔｅｒｉ
ａ）」，ケミカル・アブストラクツ，８５巻，第１５６
４１４ｄ号（１９７６）；リー・エム・ジェイ，ハー・
ワイ・シーおよびリー・ケイ・ダブリュー，「微生物に
よる石油の脱硫化。III.脱硫化細菌との接触反応による
石油の脱硫化（Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｂｙ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉ
ｓｍｓ．III.Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ Ｐ
ｅｔｒｏｌｅｕｍ ｂｙ Ｃｏｎｔａｃｔ Ｒｅａｃｔ
ｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚｉｎｇ Ｂｅ
ｃｔｅｒｉａ）」，ケミカル・アブストラクツ，８５
巻，第１４５４４８ｓ号（１９７６）。
【０００５】炭質分子内で化学的に結合している有機硫
黄は化学的かまたは生物学的手段によって除去する必要
がある。ジベンゾチオフェン（ＤＢＴ）は、有機硫黄が
石炭および石油のような天然に存在する有機炭質燃料に
存在している代表的な形態であると大多数の者に認めら
れる有機硫黄化合物であり、しかも有機硫黄化合物の微
生物による代謝の中心となる化合物である。ＤＢＴの代
謝についての研究は、ＤＢＴを代謝することが可能な微
生物を単離した若干の研究者によって進められており、
例えば、アシネトバクター属（Ａｃｉｎｅｔｂａｃｔｅ
ｒ），マリク・ケイ・エイ（Ｍａｌｉｋ，Ｋ．Ａ．），
「原油およびその環境からの微生物による有機硫黄の除
去。新しい展望（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｒｅｍｏｖａｌ
ｏｆＯｒｇａｎｉｃ Ｓｕｌｆｕｒ ｆｒｏｍ Ｃｒ
ｕｄｅ Ｏｉｌ ａｎｄ ｔｈｅ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅ
ｎｔ：Ｓｏｍｅ Ｎｅｗ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ
ｓ）」、プロセス・バイオケム（Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．），１３（９），１０〜１３（１９７
８）；アルトロバクター属（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅ
ｒ），ネクト・エイ・ティー，２世（Ｋｎｅｃｈｔ，
Ａ．Ｔ．，Ｊｒ．），ルイジアナ州立大学学位請求論
文，整理番号６２１２３５（１９６１）；バイジェリン
キア属（Ｂｅｉｊｅｒｉｎｃｋｉａ），ラボアデ・エイ
・エル（Ｌａｂｏｒｄｅ，Ａ．Ｌ．）およびギブソン・
ディー・ティー（Ｇｉｂｓｏｎ，Ｄ．Ｔ．），「バイジ
ェリンキア種によるジベンゾチオフェンの代謝（Ｍｅｔ
ａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ Ｄｉｂｅｎｚｏｔｈｉｏｐｈｅ
ｎｅ ｂｙ ａ ＢｅｉｊｅｒｉｎｃｋｉａＳｐｅｃｉ
ｅｓ）」，アプル・エンバイロン・ミクロバイオル（Ａ
ｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．），３
４、７８３〜７９０（１９７７）；根粒菌（Ｒｈｉｚｏ
ｂｉｕｍ），マリク・ケイ・エイ（上記）；シュードモ
ナス属，ホー・シー・ティー（Ｈｏｕ，Ｃ．Ｔ．）およ
びラスキン・エイ・アイ（Ｌａｓｋｉｎ，Ａ．Ｉ．），
「ジベンゾチオフェンの微生物による変換（Ｍｉｃｒｏ
ｂｉａｌ Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｂｅｎｚ
ｏｔｈｉｏｐｈｅｎｅ）」，デヴ・インド・ミクロバイ
オル（Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．），１
７，３５１〜３６２（１９７６）；イズビスター・ジェ
イ・ディー（Ｉｓｂｉｓｔｅｒ，Ｊ．Ｄ．）およびコビ
リンスキー・イー・エイ（Ｋｏｂｙｌｉｎｓｋｉ，Ｅ．
Ａ．），「高硫黄石炭の処理および利用における微生物
による石炭の脱硫化（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｄｅｓｕｌ
ｆｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏａｌｉｎ Ｐｒｏｃｅ
ｓｓｉｎｇ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆＨ
ｉｇｈ Ｓｕｌｆｕｒ Ｃｏａｌｓ）」，コール・サイ
エンス・アンド・テクノロジー・シリーズ（Ｃｏａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｓｅ
ｒｉｅｓ），第９号，６２７，アッティア・ワイ・エイ
（Ａｔｔｉａ，Ｙ．Ａ．）監修，アムステルダム，エル
セビア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）（１９８５）；ネクト・エ
イ・ティー，２世，（上記）；コダマ・ケイ（Ｋｏｄａ
ｍａ，Ｋ），ナカタニ・エス（Ｎａｋａｔａｎｉ，
Ｓ），ウメハラ・ケイ（Ｕｍｅｈａｒａ，Ｋ．），シミ
ズ・ケイ（Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｋ．），ミノダ・ワイ（Ｍ
ｉｎｏｄａ，Ｙ．）およびヤマダ・ケイ（Ｙａｍａｄ
ａ，Ｋ．），「石油硫黄化合物の微生物による変換。ジ
ベンゾチオフェンからの生成物の単離および同定（Ｍｉ
ｃｒｏｂｉａｌ Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ Ｐｅｔ
ｒｏｓｕｌｆｕｒ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ：Ｉｓｏｌａｔ
ｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｒｏｍ Ｄｉｂｅｎｚｏｔｈｉｏ
ｐｈｅｎｅ）」，アグル・バイオログ・ケム（Ａｇｒ．
Ｂｉｏｌｏｇ．Ｃｈｅｍ．）、３４、１３２０〜１３２
４（１９７０）；モンティセロ・ディー・ジェイ（Ｍｏ
ｎｔｉｃｅｌｌｏ，Ｄ．Ｊ．）、バッカー・ディー（Ｂ
ａｋｋｅｒ，Ｄ．）およびフィナティー・ダブリュー・
アール（Ｆｉｎｎｅｒｔｙ，Ｗ．Ｒ．），「シュードモ
ナス種によるジベンゾチオフェンのプラスミド仲介分解
（Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｄｅｇｒａｄａ
ｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｂｅｎｚｏｔｈｉｏｐｈｅｎｅ
ｂｙＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｓｐｅｃｉｅｓ）」，ア
プル・エンバイロン・ミクロバイオル、４９，７５６〜
７６０（１９８５）；スルホロバス属（Ｓｕｌｆｏｌｏ
ｂｕｓ），カルギ・エフ（Ｋａｒｇｉ，Ｆ．）およびロ
ビンソン・ジェイ・エム（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｊ．
Ｍ．），「高温生物スルホロバス・アシドカルダリウス
によるジベンゾチオフェンの微生物酸化（Ｍｉｃｒｏｂ
ｉａｌ Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｂｅｎｚｏｔ
ｈｉｏｐｈｅｎｅ ｂｙ ｔｈｅ Ｔｈｅｒｍｏｐｈｉ
ｌｉｃ Ｏｒｇａｎｉｓｍｓ Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ
ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）」，バイオテク・アン
ド・バイオエング（Ｂｉｏｔｅｃｈ．ａｎｄ Ｂｉｏｅ
ｎｇ．），１２６，６８７〜６９０（１９８４）が挙げ
られる。イズビスターら（上記）の場合を除く前記のそ
れぞれの場合の微生物によるＤＢＴ分解経路は、コダマ
ら（上記）によって最初に確証されたＤＢＴの微生物分
解経路によるＣ−Ｃ結合の開裂によるものである。Ｃ−
Ｃ結合開裂による有機硫黄含有炭質物質の微生物分解に
より、炭質燃料の発熱量が多量に損なわれる。コダマら
（上記）のＤＢＴのＣ−Ｃ結合開裂微生物分解によれ
ば、硫黄含有最終生成物は３−ヒドロキシベンゾチオフ
ェンスルホキシド、２−ホルミルベンゾチオフェンまた
はベンゾチオフェンである。したがって、分子から炭素
を除去することなく、その分子から硫黄を除去する微生
物分解経路を辿ることが望ましく、それによって炭素分
解経路で可能であるよりも更に大きく燃料の発熱量が保
持される。このような有機基質の硫黄特異的代謝は有機
硫黄含有分子中の炭素−硫黄結合の開裂を必要とする。
ジベンゾチオフェンについての硫黄特異的代謝の場合、
最終生成物は２−ヒドロキシビフェニルおよび式１
黄は化学的かまたは生物学的手段によって除去する必要
がある。ジベンゾチオフェン（ＤＢＴ）は、有機硫黄が
石炭および石油のような天然に存在する有機炭質燃料に
存在している代表的な形態であると大多数の者に認めら
れる有機硫黄化合物であり、しかも有機硫黄化合物の微
生物による代謝の中心となる化合物である。ＤＢＴの代
謝についての研究は、ＤＢＴを代謝することが可能な微
生物を単離した若干の研究者によって進められており、
例えば、アシネトバクター属（Ａｃｉｎｅｔｂａｃｔｅ
ｒ），マリク・ケイ・エイ（Ｍａｌｉｋ，Ｋ．Ａ．），
「原油およびその環境からの微生物による有機硫黄の除
去。新しい展望（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｒｅｍｏｖａｌ
ｏｆＯｒｇａｎｉｃ Ｓｕｌｆｕｒ ｆｒｏｍ Ｃｒ
ｕｄｅ Ｏｉｌ ａｎｄ ｔｈｅ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅ
ｎｔ：Ｓｏｍｅ Ｎｅｗ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ
ｓ）」、プロセス・バイオケム（Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．），１３（９），１０〜１３（１９７
８）；アルトロバクター属（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅ
ｒ），ネクト・エイ・ティー，２世（Ｋｎｅｃｈｔ，
Ａ．Ｔ．，Ｊｒ．），ルイジアナ州立大学学位請求論
文，整理番号６２１２３５（１９６１）；バイジェリン
キア属（Ｂｅｉｊｅｒｉｎｃｋｉａ），ラボアデ・エイ
・エル（Ｌａｂｏｒｄｅ，Ａ．Ｌ．）およびギブソン・
ディー・ティー（Ｇｉｂｓｏｎ，Ｄ．Ｔ．），「バイジ
ェリンキア種によるジベンゾチオフェンの代謝（Ｍｅｔ
ａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ Ｄｉｂｅｎｚｏｔｈｉｏｐｈｅ
ｎｅ ｂｙ ａ ＢｅｉｊｅｒｉｎｃｋｉａＳｐｅｃｉ
ｅｓ）」，アプル・エンバイロン・ミクロバイオル（Ａ
ｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．），３
４、７８３〜７９０（１９７７）；根粒菌（Ｒｈｉｚｏ
ｂｉｕｍ），マリク・ケイ・エイ（上記）；シュードモ
ナス属，ホー・シー・ティー（Ｈｏｕ，Ｃ．Ｔ．）およ
びラスキン・エイ・アイ（Ｌａｓｋｉｎ，Ａ．Ｉ．），
「ジベンゾチオフェンの微生物による変換（Ｍｉｃｒｏ
ｂｉａｌ Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｂｅｎｚ
ｏｔｈｉｏｐｈｅｎｅ）」，デヴ・インド・ミクロバイ
オル（Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．），１
７，３５１〜３６２（１９７６）；イズビスター・ジェ
イ・ディー（Ｉｓｂｉｓｔｅｒ，Ｊ．Ｄ．）およびコビ
リンスキー・イー・エイ（Ｋｏｂｙｌｉｎｓｋｉ，Ｅ．
Ａ．），「高硫黄石炭の処理および利用における微生物
による石炭の脱硫化（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｄｅｓｕｌ
ｆｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏａｌｉｎ Ｐｒｏｃｅ
ｓｓｉｎｇ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆＨ
ｉｇｈ Ｓｕｌｆｕｒ Ｃｏａｌｓ）」，コール・サイ
エンス・アンド・テクノロジー・シリーズ（Ｃｏａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｓｅ
ｒｉｅｓ），第９号，６２７，アッティア・ワイ・エイ
（Ａｔｔｉａ，Ｙ．Ａ．）監修，アムステルダム，エル
セビア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）（１９８５）；ネクト・エ
イ・ティー，２世，（上記）；コダマ・ケイ（Ｋｏｄａ
ｍａ，Ｋ），ナカタニ・エス（Ｎａｋａｔａｎｉ，
Ｓ），ウメハラ・ケイ（Ｕｍｅｈａｒａ，Ｋ．），シミ
ズ・ケイ（Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｋ．），ミノダ・ワイ（Ｍ
ｉｎｏｄａ，Ｙ．）およびヤマダ・ケイ（Ｙａｍａｄ
ａ，Ｋ．），「石油硫黄化合物の微生物による変換。ジ
ベンゾチオフェンからの生成物の単離および同定（Ｍｉ
ｃｒｏｂｉａｌ Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ Ｐｅｔ
ｒｏｓｕｌｆｕｒ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ：Ｉｓｏｌａｔ
ｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｒｏｍ Ｄｉｂｅｎｚｏｔｈｉｏ
ｐｈｅｎｅ）」，アグル・バイオログ・ケム（Ａｇｒ．
Ｂｉｏｌｏｇ．Ｃｈｅｍ．）、３４、１３２０〜１３２
４（１９７０）；モンティセロ・ディー・ジェイ（Ｍｏ
ｎｔｉｃｅｌｌｏ，Ｄ．Ｊ．）、バッカー・ディー（Ｂ
ａｋｋｅｒ，Ｄ．）およびフィナティー・ダブリュー・
アール（Ｆｉｎｎｅｒｔｙ，Ｗ．Ｒ．），「シュードモ
ナス種によるジベンゾチオフェンのプラスミド仲介分解
（Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｄｅｇｒａｄａ
ｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｂｅｎｚｏｔｈｉｏｐｈｅｎｅ
ｂｙＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｓｐｅｃｉｅｓ）」，ア
プル・エンバイロン・ミクロバイオル、４９，７５６〜
７６０（１９８５）；スルホロバス属（Ｓｕｌｆｏｌｏ
ｂｕｓ），カルギ・エフ（Ｋａｒｇｉ，Ｆ．）およびロ
ビンソン・ジェイ・エム（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｊ．
Ｍ．），「高温生物スルホロバス・アシドカルダリウス
によるジベンゾチオフェンの微生物酸化（Ｍｉｃｒｏｂ
ｉａｌ Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｂｅｎｚｏｔ
ｈｉｏｐｈｅｎｅ ｂｙ ｔｈｅ Ｔｈｅｒｍｏｐｈｉ
ｌｉｃ Ｏｒｇａｎｉｓｍｓ Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ
ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）」，バイオテク・アン
ド・バイオエング（Ｂｉｏｔｅｃｈ．ａｎｄ Ｂｉｏｅ
ｎｇ．），１２６，６８７〜６９０（１９８４）が挙げ
られる。イズビスターら（上記）の場合を除く前記のそ
れぞれの場合の微生物によるＤＢＴ分解経路は、コダマ
ら（上記）によって最初に確証されたＤＢＴの微生物分
解経路によるＣ−Ｃ結合の開裂によるものである。Ｃ−
Ｃ結合開裂による有機硫黄含有炭質物質の微生物分解に
より、炭質燃料の発熱量が多量に損なわれる。コダマら
（上記）のＤＢＴのＣ−Ｃ結合開裂微生物分解によれ
ば、硫黄含有最終生成物は３−ヒドロキシベンゾチオフ
ェンスルホキシド、２−ホルミルベンゾチオフェンまた
はベンゾチオフェンである。したがって、分子から炭素
を除去することなく、その分子から硫黄を除去する微生
物分解経路を辿ることが望ましく、それによって炭素分
解経路で可能であるよりも更に大きく燃料の発熱量が保
持される。このような有機基質の硫黄特異的代謝は有機
硫黄含有分子中の炭素−硫黄結合の開裂を必要とする。
ジベンゾチオフェンについての硫黄特異的代謝の場合、
最終生成物は２−ヒドロキシビフェニルおよび式１
【０００６】
【化１】
【０００７】である。このＣ−Ｓ開裂経路はジベンゾチ
オフェン→ジベンゾチオフェンスルホキシド→ジベンゾ
チオフェンスルホン→スルホン酸ジベンゾチオフェン→
２−ヒドロキシビフェニル＋無機硫酸塩にしたがって進
行すると思われる。このＣ−Ｓ開裂経路からのジヒドロ
キシ生成物により、その経路はかなりの量のビヒドロキ
シビフェニルを導く経路と区別される。
オフェン→ジベンゾチオフェンスルホキシド→ジベンゾ
チオフェンスルホン→スルホン酸ジベンゾチオフェン→
２−ヒドロキシビフェニル＋無機硫酸塩にしたがって進
行すると思われる。このＣ−Ｓ開裂経路からのジヒドロ
キシ生成物により、その経路はかなりの量のビヒドロキ
シビフェニルを導く経路と区別される。
【０００８】今日の発明者に既知のＣ−Ｓ開裂によるＤ
ＢＴの分解が可能な唯一の先行微生物はイズビスター
（上記）によって記載されたシュードモナス種であり、
米国特許第４，５６２，１５６号明細書に記載のシュー
ドモナス属ＡＴＣＣ３９３８１である。寄託されている
ＡＴＣＣ３９３８１培養物にはＣ−Ｓ開裂特性がなく、
その培養物の寄託者は寄託中の培養物が寄託者の知る限
りのＣ−Ｓ開裂特性を有するような培養物が存在しない
ので、置き換えられることはないということを記載した
〔第４回エネルギー省調製、利用および環境管理契約者
会議（４ｔｈ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｅｒ
ｇｙ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏ
ｎ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｃｏｎｔｒ
ｏｌ Ｃｏｎｔｒａｔｏｒｓ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃ
ｅ）、米国エネルギー省、ピッツバーグ・エナジー・テ
クノロジー・センター（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ Ｅｎｅ
ｒｇｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ），米国，
ペンシルバニア州１５２３６，ピッツバーグ，１９８
８〕。硫黄が制限された条件下で増殖させることによっ
て得られる混合培養物はＤＢＴからの硫黄の選択的除去
が可能であった。キルバン・ジョン・ジェイ（Ｋｉｌｂ
ａｎｅ，Ｊｏｈｎ Ｊ．），「有機化合物の硫黄特異的
微生物代謝（Ｓｕｌｆｕｒ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｉｃ
ｒｏｂｉａｌ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｆ Ｏｒｇａ
ｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）」，バイオプロセッシン
グ・オブ・コールズ・ワークショップ（Ｂｉｏｐｒｏｃ
ｅｓｓｉｎｇｏｆ Ｃｏａｌｓ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ），
タイソンズ・コーナー（ＴｙｓｏｎｓＣｏｒｎｅｒ），
バージニア州，１９８８年８月１６日〜１８日。
ＢＴの分解が可能な唯一の先行微生物はイズビスター
（上記）によって記載されたシュードモナス種であり、
米国特許第４，５６２，１５６号明細書に記載のシュー
ドモナス属ＡＴＣＣ３９３８１である。寄託されている
ＡＴＣＣ３９３８１培養物にはＣ−Ｓ開裂特性がなく、
その培養物の寄託者は寄託中の培養物が寄託者の知る限
りのＣ−Ｓ開裂特性を有するような培養物が存在しない
ので、置き換えられることはないということを記載した
〔第４回エネルギー省調製、利用および環境管理契約者
会議（４ｔｈ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｅｒ
ｇｙ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏ
ｎ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｃｏｎｔｒ
ｏｌ Ｃｏｎｔｒａｔｏｒｓ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃ
ｅ）、米国エネルギー省、ピッツバーグ・エナジー・テ
クノロジー・センター（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ Ｅｎｅ
ｒｇｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ），米国，
ペンシルバニア州１５２３６，ピッツバーグ，１９８
８〕。硫黄が制限された条件下で増殖させることによっ
て得られる混合培養物はＤＢＴからの硫黄の選択的除去
が可能であった。キルバン・ジョン・ジェイ（Ｋｉｌｂ
ａｎｅ，Ｊｏｈｎ Ｊ．），「有機化合物の硫黄特異的
微生物代謝（Ｓｕｌｆｕｒ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｉｃ
ｒｏｂｉａｌ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｆ Ｏｒｇａ
ｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）」，バイオプロセッシン
グ・オブ・コールズ・ワークショップ（Ｂｉｏｐｒｏｃ
ｅｓｓｉｎｇｏｆ Ｃｏａｌｓ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ），
タイソンズ・コーナー（ＴｙｓｏｎｓＣｏｒｎｅｒ），
バージニア州，１９８８年８月１６日〜１８日。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、硫黄
含有有機炭質物質から有機的に結合した硫黄を除去する
ための微生物および方法を提供することである。
含有有機炭質物質から有機的に結合した硫黄を除去する
ための微生物および方法を提供することである。
【００１０】本発明のもう一つの目的は、有機硫黄含有
化石燃料および化石由来燃料から選択的に硫黄を除去す
るための微生物および方法を提供することである。
化石燃料および化石由来燃料から選択的に硫黄を除去す
るための微生物および方法を提供することである。
【００１１】本発明の更にもう一つの目的は、有機炭質
物質の反応、例えば有機合成およびゴム製品を再循環さ
せるような再循環操作においてＣ−Ｓ結合を特異的に開
裂させることが可能な微生物および方法を提供すること
である。
物質の反応、例えば有機合成およびゴム製品を再循環さ
せるような再循環操作においてＣ−Ｓ結合を特異的に開
裂させることが可能な微生物および方法を提供すること
である。
【００１２】本発明の更に別の目的は、有機Ｃ−Ｓ結合
を開裂させるのに微生物を用いる処理条件下で安定であ
り且つその硫黄特異性を保持する微生物を提供すること
である。
を開裂させるのに微生物を用いる処理条件下で安定であ
り且つその硫黄特異性を保持する微生物を提供すること
である。
【００１３】本発明のもう一つの目的は、ジベンゾチオ
フェンから特異的に硫黄を除去して無機硫酸塩および２
−ヒドロキシビフェニルから成る実質的な単独生成物を
生じるための微生物および方法を提供することである。
フェンから特異的に硫黄を除去して無機硫酸塩および２
−ヒドロキシビフェニルから成る実質的な単独生成物を
生じるための微生物および方法を提供することである。
【００１４】
【課題を解決するための手段】この説明を読むことによ
って明らかになる前記のおよび他の目的および利点は突
然変異体微生物を生成し、同定し、そして更に詳細に記
載した処理を行なったその微生物の生物学的に純粋な培
養物によって得られ、そしてバチルス・スフェリクスと
同定された。その培養物はアメリカン・タイプ・カルチ
ャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃ
ｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）に寄託され、Ａ
ＴＣＣ第５３９６９番と指定された。
って明らかになる前記のおよび他の目的および利点は突
然変異体微生物を生成し、同定し、そして更に詳細に記
載した処理を行なったその微生物の生物学的に純粋な培
養物によって得られ、そしてバチルス・スフェリクスと
同定された。その培養物はアメリカン・タイプ・カルチ
ャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃ
ｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）に寄託され、Ａ
ＴＣＣ第５３９６９番と指定された。
【００１５】バチルス・スフェリクスＡＴＣＣ第５３９
６９番は、開裂するのが所望とされるＣ−Ｓ結合を有す
る物質が存在している部分から誘導される混合細菌を、
無機養素と同化可能な炭素源を含んで成り、開裂するの
が所望とされる種類のＣ−Ｓ結合にのみ硫黄が存在する
化学物以外の硫黄含有化合物が実質的に不在の増殖培地
に接種し；その細菌培養物を、バチルス・スフェリクス
ＡＴＣＣ第５３９６９番の増殖に必要な栄養素を備えて
いる介助培養物および酸素の存在下約２０℃〜約３４℃
の温度で、しかも開裂するのが所望とされる種類のＣ−
Ｓ結合にのみ硫黄が存在する化合物以外の硫黄含有化合
物が実質的に不在で、有機炭質物質中のＣ−Ｓ結合の選
択的開裂による硫黄代謝特性を有するバチルス・スフェ
リクスＡＴＣＣ第５３９６９番を選択的に生じるのに十
分な時間増殖させることによって調製することができ
る。
６９番は、開裂するのが所望とされるＣ−Ｓ結合を有す
る物質が存在している部分から誘導される混合細菌を、
無機養素と同化可能な炭素源を含んで成り、開裂するの
が所望とされる種類のＣ−Ｓ結合にのみ硫黄が存在する
化学物以外の硫黄含有化合物が実質的に不在の増殖培地
に接種し；その細菌培養物を、バチルス・スフェリクス
ＡＴＣＣ第５３９６９番の増殖に必要な栄養素を備えて
いる介助培養物および酸素の存在下約２０℃〜約３４℃
の温度で、しかも開裂するのが所望とされる種類のＣ−
Ｓ結合にのみ硫黄が存在する化合物以外の硫黄含有化合
物が実質的に不在で、有機炭質物質中のＣ−Ｓ結合の選
択的開裂による硫黄代謝特性を有するバチルス・スフェ
リクスＡＴＣＣ第５３９６９番を選択的に生じるのに十
分な時間増殖させることによって調製することができ
る。
【００１６】硫黄含有有機炭質物質の硫黄含有量は、前
記の硫黄含有有機炭質物質を微生物バチルス・スフェリ
クス菌株ＡＴＣＣ第５３９６９番と接触させることによ
って減少させることができる。その方法は硫黄含有炭質
物質が石炭または炭化水素油である場合に用いるのに特
に適当である。硫黄含有石炭の存在下のバチルス・スフ
ェリクスＡＴＣＣ第５３９６９番の連続的増殖により、
有機的に結合した硫黄が８０％を上回って、好ましくは
９０％を上回って除去される。硫黄含有有機炭質物質の
硫黄含有量を減少させる方法は、微生物バチルス・スフ
ェリクス菌株ＡＴＣＣ第５３９６９番による有機Ｃ−Ｓ
結合の開裂によって行われる。有機硫黄選択性突然変異
体微生物であるバチルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３９
６９は、細菌用栄養素介助培養物と、無機養素と、同化
可能な炭素源とを含んで成る増殖培地で、硫黄含有有機
炭質物質以外の硫黄含有化合物が実質的に不在で、しか
も酸素存在下約２０℃〜約３４℃の温度で増殖させた場
合に、無機硫酸塩の産生を引き起こす有機Ｃ−Ｓ結合の
開裂によって硫黄含有有機炭質物質の硫黄含有量を選択
的に減少させる能力を有する。バチルス・スフェリクス
ＡＴＣＣ５３９６９からの派生微生物も、同様に有機Ｃ
−Ｓ結合の開裂によって硫黄含有有機炭質物質の硫黄含
有量を選択的に減少させる能力を有する。
記の硫黄含有有機炭質物質を微生物バチルス・スフェリ
クス菌株ＡＴＣＣ第５３９６９番と接触させることによ
って減少させることができる。その方法は硫黄含有炭質
物質が石炭または炭化水素油である場合に用いるのに特
に適当である。硫黄含有石炭の存在下のバチルス・スフ
ェリクスＡＴＣＣ第５３９６９番の連続的増殖により、
有機的に結合した硫黄が８０％を上回って、好ましくは
９０％を上回って除去される。硫黄含有有機炭質物質の
硫黄含有量を減少させる方法は、微生物バチルス・スフ
ェリクス菌株ＡＴＣＣ第５３９６９番による有機Ｃ−Ｓ
結合の開裂によって行われる。有機硫黄選択性突然変異
体微生物であるバチルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３９
６９は、細菌用栄養素介助培養物と、無機養素と、同化
可能な炭素源とを含んで成る増殖培地で、硫黄含有有機
炭質物質以外の硫黄含有化合物が実質的に不在で、しか
も酸素存在下約２０℃〜約３４℃の温度で増殖させた場
合に、無機硫酸塩の産生を引き起こす有機Ｃ−Ｓ結合の
開裂によって硫黄含有有機炭質物質の硫黄含有量を選択
的に減少させる能力を有する。バチルス・スフェリクス
ＡＴＣＣ５３９６９からの派生微生物も、同様に有機Ｃ
−Ｓ結合の開裂によって硫黄含有有機炭質物質の硫黄含
有量を選択的に減少させる能力を有する。
【００１７】有機硫黄化合物にさらされた既知の履歴を
有する環境による培養も、炭素源として酢酸塩、ベンゼ
ン、安息香酸、エタノール、グルコース、グリセロー
ル、普通ブイヨン、コハク酸塩およびトルエン、および
有機硫黄化合物であるベンゾチオフェン、ジベンゾチオ
フェン、チオフェン、トリチアンを用いる集積培養も、
用いられるそれぞれの有機硫黄化合物を代謝することが
可能な細菌培養物を生じた。試験を行なった環境による
単離物および集積培養物はいずれも、混合培養物がその
単独の硫黄源としてチオフェンに富み、その生成物の約
２０％については炭素−硫黄結合開裂が可能であり、残
りの８０％は炭素−炭素結合開裂の結果であることが示
されたものを除いて、炭素−炭素結合で生分解を開始す
ることによって有機硫黄化合物を代謝することが見出さ
れた。有機硫黄化合物からの硫黄の利用に最も成功した
微生物は、単独の硫黄源としてＤＢＴを用いる集積培養
物から単離されたシュードモナス属であった。このシュ
ードモナス種は有機的に結合した硫黄を利用することが
可能であるが、炭素−硫黄結合の酸化に特異性を示すこ
とはなかった。このことは有機Ｃ−Ｓ結合の酸化に特異
性を示す天然に存在する微生物について集積培養での発
現に失敗したことを示す。したがって、人為的選択的突
然変異処理を用いてこのように選択的に硫黄を代謝する
微生物を発現させる必要がある。
有する環境による培養も、炭素源として酢酸塩、ベンゼ
ン、安息香酸、エタノール、グルコース、グリセロー
ル、普通ブイヨン、コハク酸塩およびトルエン、および
有機硫黄化合物であるベンゾチオフェン、ジベンゾチオ
フェン、チオフェン、トリチアンを用いる集積培養も、
用いられるそれぞれの有機硫黄化合物を代謝することが
可能な細菌培養物を生じた。試験を行なった環境による
単離物および集積培養物はいずれも、混合培養物がその
単独の硫黄源としてチオフェンに富み、その生成物の約
２０％については炭素−硫黄結合開裂が可能であり、残
りの８０％は炭素−炭素結合開裂の結果であることが示
されたものを除いて、炭素−炭素結合で生分解を開始す
ることによって有機硫黄化合物を代謝することが見出さ
れた。有機硫黄化合物からの硫黄の利用に最も成功した
微生物は、単独の硫黄源としてＤＢＴを用いる集積培養
物から単離されたシュードモナス属であった。このシュ
ードモナス種は有機的に結合した硫黄を利用することが
可能であるが、炭素−硫黄結合の酸化に特異性を示すこ
とはなかった。このことは有機Ｃ−Ｓ結合の酸化に特異
性を示す天然に存在する微生物について集積培養での発
現に失敗したことを示す。したがって、人為的選択的突
然変異処理を用いてこのように選択的に硫黄を代謝する
微生物を発現させる必要がある。
【００１８】有機基質に関して硫黄特異的代謝能を有す
る微生物は、栄養素と、生体組織中に通常見出されない
有機的に結合した硫黄とを他の有効な硫黄、例えば硫酸
塩、ビタミン、アミノ酸等が実質的に不在で供給するこ
とができる連続培養石炭バイオリアクター／セレクトス
タット（ｓｅｌｅｃｔｏｓｔａｔ）を介する選択によっ
て発現された。増殖培地は十分に微生物を増殖させるた
めに有機および無機栄養素を供給しなければならない
が、突然変異体微生物によって代謝されるのが所望とさ
れる有機硫黄含有化合物以外の無機および有機硫黄含有
化合物は欠けている必要がある。有機硫黄条件下での微
生物の増殖に適当な培地は無機養素の組成物、例えば蒸
留した脱イオン水のリットル当りＫ2 ＨＰＯ4 を４ｇ、
Ｎａ2 ＨＰＯ4 を４ｇ、ＮＨ4 Ｃｌを２ｇ、ＭｇＣｌ2
・６Ｈ2 Ｏを０．２ｇ、ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏを０．０
０１ｇおよびＦｅＣｌ3・６Ｈ2 Ｏを０．００１ｇであ
るのが適当であることができる。硫黄を欠いた同化可能
な炭素源は所望の微生物増殖を支持する量で用いること
ができる。適当な同化可能炭素源としては約２０ミリモ
ルの濃度でのグルコース、グリセロール、酢酸ナトリウ
ム、安息香酸ナトリウム、コハク酸ナトリウムおよびス
クロースが挙げられ、ベンゼン、エタノール、イソブタ
ノールおよびトルエンは細菌増殖バイオリアクターのヘ
ッドスペースで蒸気として用いることができる。有機Ｃ
−Ｓ結合を有する有機硫黄化合物は適当であり、例えば
ベンゾチオフェン、二硫化ベンジル、ジベンゾチオフェ
ン、ジベンゾチオフェンスルホン、二硫化フェニル、チ
アントレン、チオキサンテン〔アルドリッチ・ケミカル
・カンパニー（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ
ｏｍｐａｎｙ），ウイスコンシン州，ミルウォーキ
ー〕，ジベンゾチオフェンスルホキシド〔アイシーエヌ
・バイオメディカルズ（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ
ｓ），ケイ・アンド・ケイ・ラブズ（Ｋ＆Ｋ Ｌａｂ
ｓ），ニュー・ジャージー州，プレーンビュー〕および
トリチアン〔フェアフィールド・ケミカル・カンパニー
（Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａ
ｎｙ），サウス・カロライナ州，クリスウッド，私書箱
２０〕を微生物の増殖を支持する約２０ミリモル程度の
濃度範囲で用いることができ、チオフェン（アルドリッ
チ・ケミカル・カンパニー）を蒸気として用いることも
できる。普通ブイヨン〔ディフコ・ラボラトリーズ（Ｄ
ｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ），ミシガン州，
デトロイト〕または前記の増殖培地を寒天（ディフコ）
約１５ｇ／リットルで凝固させたものを細菌培養物を画
線培養しまたは平板培養するのに用いることができる。
細菌の増殖はクレット・ソマーソン（Ｋｌｅｔｔ−Ｓｏ
ｍｍｅｒｓｏｎ）比色計を用いる比濁によってまたは適
当な寒天上のコロニー形成単位を計数することによって
監視することができる。
る微生物は、栄養素と、生体組織中に通常見出されない
有機的に結合した硫黄とを他の有効な硫黄、例えば硫酸
塩、ビタミン、アミノ酸等が実質的に不在で供給するこ
とができる連続培養石炭バイオリアクター／セレクトス
タット（ｓｅｌｅｃｔｏｓｔａｔ）を介する選択によっ
て発現された。増殖培地は十分に微生物を増殖させるた
めに有機および無機栄養素を供給しなければならない
が、突然変異体微生物によって代謝されるのが所望とさ
れる有機硫黄含有化合物以外の無機および有機硫黄含有
化合物は欠けている必要がある。有機硫黄条件下での微
生物の増殖に適当な培地は無機養素の組成物、例えば蒸
留した脱イオン水のリットル当りＫ2 ＨＰＯ4 を４ｇ、
Ｎａ2 ＨＰＯ4 を４ｇ、ＮＨ4 Ｃｌを２ｇ、ＭｇＣｌ2
・６Ｈ2 Ｏを０．２ｇ、ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏを０．０
０１ｇおよびＦｅＣｌ3・６Ｈ2 Ｏを０．００１ｇであ
るのが適当であることができる。硫黄を欠いた同化可能
な炭素源は所望の微生物増殖を支持する量で用いること
ができる。適当な同化可能炭素源としては約２０ミリモ
ルの濃度でのグルコース、グリセロール、酢酸ナトリウ
ム、安息香酸ナトリウム、コハク酸ナトリウムおよびス
クロースが挙げられ、ベンゼン、エタノール、イソブタ
ノールおよびトルエンは細菌増殖バイオリアクターのヘ
ッドスペースで蒸気として用いることができる。有機Ｃ
−Ｓ結合を有する有機硫黄化合物は適当であり、例えば
ベンゾチオフェン、二硫化ベンジル、ジベンゾチオフェ
ン、ジベンゾチオフェンスルホン、二硫化フェニル、チ
アントレン、チオキサンテン〔アルドリッチ・ケミカル
・カンパニー（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ
ｏｍｐａｎｙ），ウイスコンシン州，ミルウォーキ
ー〕，ジベンゾチオフェンスルホキシド〔アイシーエヌ
・バイオメディカルズ（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ
ｓ），ケイ・アンド・ケイ・ラブズ（Ｋ＆Ｋ Ｌａｂ
ｓ），ニュー・ジャージー州，プレーンビュー〕および
トリチアン〔フェアフィールド・ケミカル・カンパニー
（Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａ
ｎｙ），サウス・カロライナ州，クリスウッド，私書箱
２０〕を微生物の増殖を支持する約２０ミリモル程度の
濃度範囲で用いることができ、チオフェン（アルドリッ
チ・ケミカル・カンパニー）を蒸気として用いることも
できる。普通ブイヨン〔ディフコ・ラボラトリーズ（Ｄ
ｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ），ミシガン州，
デトロイト〕または前記の増殖培地を寒天（ディフコ）
約１５ｇ／リットルで凝固させたものを細菌培養物を画
線培養しまたは平板培養するのに用いることができる。
細菌の増殖はクレット・ソマーソン（Ｋｌｅｔｔ−Ｓｏ
ｍｍｅｒｓｏｎ）比色計を用いる比濁によってまたは適
当な寒天上のコロニー形成単位を計数することによって
監視することができる。
【００１９】接種剤は、石炭貯蔵所からおよび石油精製
所から得られる土壌試料５ｇを前記の増殖培地１０ｍｌ
に加え、６０秒間撹拌し（ｖｏｒｔｅｘ）、そして３０
分間静置させることによって調整することができる。上
澄みをパスツールピペットを用いて除去し、直接用いる
かまたは同量の普通ブイヨンで稀釈し、室温で約２４〜
４８時間インキュベートした後用いてバイオリアクター
に接種してもよい。
所から得られる土壌試料５ｇを前記の増殖培地１０ｍｌ
に加え、６０秒間撹拌し（ｖｏｒｔｅｘ）、そして３０
分間静置させることによって調整することができる。上
澄みをパスツールピペットを用いて除去し、直接用いる
かまたは同量の普通ブイヨンで稀釈し、室温で約２４〜
４８時間インキュベートした後用いてバイオリアクター
に接種してもよい。
【００２０】バイオリアクター／セレクトスタットは石
炭または有機硫黄固形物を保持しながら液体栄養素の流
れを連続的に与えるように特別に設計されたものであっ
た。同一バッチの石炭または有機硫黄化合物をその操作
期間の間バイオリアクター内部に保持するが、水性相培
地はバイオリアクターに連続的に供給することができ
る。バイオリアクター内に長期間の間石炭を保持するこ
とは、比較的大きな、典型的には−９＋１２メッシュの
石炭粒子を用い、そして若干の堰／じゃま板を有してそ
こからのバイオリアクター流出液を比較的遅い流速で回
収することができる傾瀉した非混合沈降管の利用によっ
て行なうことができる。流出液回収速度は硫黄制限試験
に反応する微生物の能力によって調整することができ、
液圧保持時間は７２時間程度であることができる。
炭または有機硫黄固形物を保持しながら液体栄養素の流
れを連続的に与えるように特別に設計されたものであっ
た。同一バッチの石炭または有機硫黄化合物をその操作
期間の間バイオリアクター内部に保持するが、水性相培
地はバイオリアクターに連続的に供給することができ
る。バイオリアクター内に長期間の間石炭を保持するこ
とは、比較的大きな、典型的には−９＋１２メッシュの
石炭粒子を用い、そして若干の堰／じゃま板を有してそ
こからのバイオリアクター流出液を比較的遅い流速で回
収することができる傾瀉した非混合沈降管の利用によっ
て行なうことができる。流出液回収速度は硫黄制限試験
に反応する微生物の能力によって調整することができ、
液圧保持時間は７２時間程度であることができる。
【００２１】セレクトスタットは適当な炭素源供給量を
測定し且つ流出液中の生物学的に利用可能な硫黄の存在
を分析するのに頻繁に監視することができる。これは新
鮮なバイオリアクター流出液を遠心分離して有機硫黄基
質および細菌から石炭微粉および粒子を除去し、続いて
細菌増殖試験でその上澄みを用いることによって行なう
ことができる。４種類の培養物、すなわち上澄み；１５
ミリモルのＳＯ4 を含む上澄み；２０ミリモルの炭素源
を含む上澄み；および１５ミリモルのＳＯ4 および２０
ミリモルの炭素源を含む上澄みを調整し、それぞれに微
生物培養物を微生物１０5 ／ｍｌで接種して試験を行な
う微生物の増殖温度で２〜５日間振とうしながらインキ
ュベートする。細菌の増殖は比濁によってまたはコロニ
ー形成単位を測定することによって監視される。炭素源
試料は流出液上澄み中の生物学的に利用可能な硫黄の存
在を示すのに役立つが、硫酸塩を加えられた試料は流出
液上澄み中の炭素源の存在を示すのに役立ち、そして炭
素および加えられた硫酸塩の双方を含む試料は流出液上
澄み中の阻害物質の存在を示すのに役立つ。
測定し且つ流出液中の生物学的に利用可能な硫黄の存在
を分析するのに頻繁に監視することができる。これは新
鮮なバイオリアクター流出液を遠心分離して有機硫黄基
質および細菌から石炭微粉および粒子を除去し、続いて
細菌増殖試験でその上澄みを用いることによって行なう
ことができる。４種類の培養物、すなわち上澄み；１５
ミリモルのＳＯ4 を含む上澄み；２０ミリモルの炭素源
を含む上澄み；および１５ミリモルのＳＯ4 および２０
ミリモルの炭素源を含む上澄みを調整し、それぞれに微
生物培養物を微生物１０5 ／ｍｌで接種して試験を行な
う微生物の増殖温度で２〜５日間振とうしながらインキ
ュベートする。細菌の増殖は比濁によってまたはコロニ
ー形成単位を測定することによって監視される。炭素源
試料は流出液上澄み中の生物学的に利用可能な硫黄の存
在を示すのに役立つが、硫酸塩を加えられた試料は流出
液上澄み中の炭素源の存在を示すのに役立ち、そして炭
素および加えられた硫酸塩の双方を含む試料は流出液上
澄み中の阻害物質の存在を示すのに役立つ。
【００２２】有機硫黄化合物を増殖に利用する細菌の能
力は硫黄の生物利用可能性検定法（Ｓｕｌｆｕｒ Ｂｉ
ｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ）によって測
定することができる。この検定法は生物はいずれも成長
するのにある種の硫黄を必要とするという事実に基づく
ものであり、したがって、細菌増殖を定量化することに
より硫黄源として任意の有機化合物または無機化合物を
利用する一つの尺度が得られる一定の状況を作ることが
できる。実際に、炭素源２０ミリモルを含む増殖培地
は、未修正で、Ｎａ2 ＳＯ4 ２０ミリモルで修正して、
および有機硫黄化合物または無機硫黄化合物２０ミリモ
ルで修正して用いられる。次に、３種類の条件それぞれ
に微生物培養物を微生物１０5 ／ｍｌで接種し、試験を
行なう微生物に適当な温度で２〜５日間振とうしながら
インキュベートする。細菌の増殖は比濁によってまたは
コロニー形成単位を測定することによって監視される。
未修正試料は負の調節として役立つが、硫酸塩で修正さ
れた試料は正の調節として役立ち、そして双方の調節を
用いて、細菌増殖が有機硫黄試験化合物から得られる硫
黄を消費して起こるものであるかを推定する。
力は硫黄の生物利用可能性検定法（Ｓｕｌｆｕｒ Ｂｉ
ｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ）によって測
定することができる。この検定法は生物はいずれも成長
するのにある種の硫黄を必要とするという事実に基づく
ものであり、したがって、細菌増殖を定量化することに
より硫黄源として任意の有機化合物または無機化合物を
利用する一つの尺度が得られる一定の状況を作ることが
できる。実際に、炭素源２０ミリモルを含む増殖培地
は、未修正で、Ｎａ2 ＳＯ4 ２０ミリモルで修正して、
および有機硫黄化合物または無機硫黄化合物２０ミリモ
ルで修正して用いられる。次に、３種類の条件それぞれ
に微生物培養物を微生物１０5 ／ｍｌで接種し、試験を
行なう微生物に適当な温度で２〜５日間振とうしながら
インキュベートする。細菌の増殖は比濁によってまたは
コロニー形成単位を測定することによって監視される。
未修正試料は負の調節として役立つが、硫酸塩で修正さ
れた試料は正の調節として役立ち、そして双方の調節を
用いて、細菌増殖が有機硫黄試験化合物から得られる硫
黄を消費して起こるものであるかを推定する。
【００２３】硫黄特異性培養物の発現は、１−メチル−
３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）または
紫外線照射への曝露による突然変異誘発によって促進す
ることができる。ＮＴＧによる突然変異誘発は細菌の溶
液を寒天プレート上に広げ、プレートの中心部にＮＴＧ
の結晶を置くことによって行なうことができる。インキ
ュベーション中に、ＮＹＧ結晶を寒天に溶解して拡散濃
度勾配を形成し、その結果中心部では細菌が増殖せず、
プレートの外部周辺では正常に増殖する。これらの両極
端の間の中程度の増殖の狹い部分は容易に観察可能であ
り、突然変異を誘発された細菌はこの部分から得られ
る。紫外線による突然変異誘発のための細菌は遠心分離
によって液体培養物からペレット化し、前記の増殖培地
で洗淨し、そして一定量の前記の増殖培地に再懸濁させ
てもよい。その一部分３ｍｌを蓋なしの滅菌ペトリ皿に
入れ、死滅対数２、典型的には１０Ｊ／ｍ2 を引き起こ
すのに十分な紫外線照射線量に暴露する。
３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）または
紫外線照射への曝露による突然変異誘発によって促進す
ることができる。ＮＴＧによる突然変異誘発は細菌の溶
液を寒天プレート上に広げ、プレートの中心部にＮＴＧ
の結晶を置くことによって行なうことができる。インキ
ュベーション中に、ＮＹＧ結晶を寒天に溶解して拡散濃
度勾配を形成し、その結果中心部では細菌が増殖せず、
プレートの外部周辺では正常に増殖する。これらの両極
端の間の中程度の増殖の狹い部分は容易に観察可能であ
り、突然変異を誘発された細菌はこの部分から得られ
る。紫外線による突然変異誘発のための細菌は遠心分離
によって液体培養物からペレット化し、前記の増殖培地
で洗淨し、そして一定量の前記の増殖培地に再懸濁させ
てもよい。その一部分３ｍｌを蓋なしの滅菌ペトリ皿に
入れ、死滅対数２、典型的には１０Ｊ／ｍ2 を引き起こ
すのに十分な紫外線照射線量に暴露する。
【００２４】数か月の操作後にセレクトスタットから得
られる混合細菌培養物を前記に記載の硫黄の生物利用可
能性検定法によって測定したところ、単独の硫黄源とし
て一定の範囲の有機硫黄化合物を利用することが可能で
あることが分かった。この混合培養物によるジベンゾチ
オフェンでの特異的Ｃ−Ｓ結合開裂はガスクロマトグラ
フィー分析／質量分析によって証明された。標準的な微
生物学的方法を用いて混合培養物中に存在するそれぞれ
の細菌種を代表する純粋培養物が得られた。それぞれの
純粋培養物は、単独の硫黄源として有機硫黄化合物を利
用するその能力について硫黄の生物利用可能性検定法に
よって別個に試験を行なった。栄養交差供給介助培養物
（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｃｒｏｓｓｆｅｅｄｉｎｇ
ｈｅｌｐｅｒ ｃｕｌｔｕｒｅ）存在下で単独の硫黄
源として有機硫黄化合物を利用する能力を示した単離さ
れた培養物は突然変異体有機硫黄選択性微生物であり、
バチルス・スフェリクスとして同定された。このバチル
ス・スフェリクス菌株はアメリカン・タイプ・カルチャ
ー・コレクションに寄託され、ＡＴＣＣ５３９６９の番
号で指定された。その菌株は長さ約０．５μのグラム陰
性短桿菌であり、普通寒天上にベージュ色／白色のコロ
ニーを生じ、そしてＣ−Ｓ結合の開裂による有機硫黄特
性が高いことを特徴とする。
られる混合細菌培養物を前記に記載の硫黄の生物利用可
能性検定法によって測定したところ、単独の硫黄源とし
て一定の範囲の有機硫黄化合物を利用することが可能で
あることが分かった。この混合培養物によるジベンゾチ
オフェンでの特異的Ｃ−Ｓ結合開裂はガスクロマトグラ
フィー分析／質量分析によって証明された。標準的な微
生物学的方法を用いて混合培養物中に存在するそれぞれ
の細菌種を代表する純粋培養物が得られた。それぞれの
純粋培養物は、単独の硫黄源として有機硫黄化合物を利
用するその能力について硫黄の生物利用可能性検定法に
よって別個に試験を行なった。栄養交差供給介助培養物
（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｃｒｏｓｓｆｅｅｄｉｎｇ
ｈｅｌｐｅｒ ｃｕｌｔｕｒｅ）存在下で単独の硫黄
源として有機硫黄化合物を利用する能力を示した単離さ
れた培養物は突然変異体有機硫黄選択性微生物であり、
バチルス・スフェリクスとして同定された。このバチル
ス・スフェリクス菌株はアメリカン・タイプ・カルチャ
ー・コレクションに寄託され、ＡＴＣＣ５３９６９の番
号で指定された。その菌株は長さ約０．５μのグラム陰
性短桿菌であり、普通寒天上にベージュ色／白色のコロ
ニーを生じ、そしてＣ−Ｓ結合の開裂による有機硫黄特
性が高いことを特徴とする。
【００２５】バチルス・スフェリクスＡＴＣＣ第５３９
６９番は、化学的に規定された無機塩類培地で、同化可
能炭素およびＣ−Ｓ結合にのみ硫黄が存在する有機硫黄
化合物存在下、増殖に必要な交差供給を与える栄養介助
培養物不在では増殖しない。前記の条件下での増殖のた
めの栄養素を与える細菌はいずれも十分適している。バ
チルス・スフェリクスＡＴＣＣ第５３９６９番の増殖に
完全な栄養素を与える適当な栄養介助培養物は当該技術
者によって容易に確認されることができる。現在知られ
ている適当な介助培養物としてはイー・アエロゲネス
（Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、イー・アグロメランス
（Ｅ．ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）およびイー・クロアセ
ー（Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ）のような若干のエンテロバク
ター種、およびクレブシエラ種が挙げられる。介助培養
物には有機硫黄化合物を特異的に脱硫化する能力はな
い。
６９番は、化学的に規定された無機塩類培地で、同化可
能炭素およびＣ−Ｓ結合にのみ硫黄が存在する有機硫黄
化合物存在下、増殖に必要な交差供給を与える栄養介助
培養物不在では増殖しない。前記の条件下での増殖のた
めの栄養素を与える細菌はいずれも十分適している。バ
チルス・スフェリクスＡＴＣＣ第５３９６９番の増殖に
完全な栄養素を与える適当な栄養介助培養物は当該技術
者によって容易に確認されることができる。現在知られ
ている適当な介助培養物としてはイー・アエロゲネス
（Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、イー・アグロメランス
（Ｅ．ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）およびイー・クロアセ
ー（Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ）のような若干のエンテロバク
ター種、およびクレブシエラ種が挙げられる。介助培養
物には有機硫黄化合物を特異的に脱硫化する能力はな
い。
【００２６】種の同一性を確認するために、バチルス・
スフェリクスＡＴＣＣ５３９６９の膜脂質を溶剤抽出
し、誘導体化し、そしてガスクロマトグラフィーによっ
て分析を行なった。そのクロマトグラムは、ミクロチェ
ック・インク（Ｍｉｃｒｏｃｈｅｃｋ，Ｉｎｋ．）（バ
ーモント州、ノースフィールド）によって供給されるコ
ンピューターライブラリーに記録された既知のバチルス
属培養物の脂質分析と比較された。これらの試験によ
り、抽出液中に見出される脂肪酸がいずれも左の縦列に
溶出順で記載したライブラリー項目に匹敵することを示
す表１で示されるように、ＡＴＣＣ５３９６９はバチル
ス・スフェリクスと同定される。「Ｘ」はそれぞれの酸
についてその酸の量を示す脂肪酸名に対して線上に記さ
れ、その酸についてのライブラリー項目平均値は「＋」
とする。ライブラリーの平均百分率と抽出液中の実際の
百分率が同じである場合は「※」と記している。破線は
ライブラリー項目についての平均値付近に＋２または−
２の標準偏差の窓を与える。表１の検査はバチルス・ス
フェリクスの同定において高い確実性を示す。
スフェリクスＡＴＣＣ５３９６９の膜脂質を溶剤抽出
し、誘導体化し、そしてガスクロマトグラフィーによっ
て分析を行なった。そのクロマトグラムは、ミクロチェ
ック・インク（Ｍｉｃｒｏｃｈｅｃｋ，Ｉｎｋ．）（バ
ーモント州、ノースフィールド）によって供給されるコ
ンピューターライブラリーに記録された既知のバチルス
属培養物の脂質分析と比較された。これらの試験によ
り、抽出液中に見出される脂肪酸がいずれも左の縦列に
溶出順で記載したライブラリー項目に匹敵することを示
す表１で示されるように、ＡＴＣＣ５３９６９はバチル
ス・スフェリクスと同定される。「Ｘ」はそれぞれの酸
についてその酸の量を示す脂肪酸名に対して線上に記さ
れ、その酸についてのライブラリー項目平均値は「＋」
とする。ライブラリーの平均百分率と抽出液中の実際の
百分率が同じである場合は「※」と記している。破線は
ライブラリー項目についての平均値付近に＋２または−
２の標準偏差の窓を与える。表１の検査はバチルス・ス
フェリクスの同定において高い確実性を示す。
【００２７】
【表１】
【００２８】バチルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３９６
９は、これらの培養物の増殖を支持するものである炭素
源に関してアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシ
ョンから得られる他のバチルス種と比較された。培養物
を表示した炭素源を含む規定の寒天プレート上に画線し
および／または液体培地中に接種し、そしてその培養物
を３０℃で９６時間インキュベートした後評価を行なっ
た。種々のバチルス属菌株を用いる炭素源利用研究の結
果を表２に示す。バチルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３
９６９によって得られた炭素源利用データはバチルス・
スフェリクスＡＴＣＣ１４５７７によって得られたデー
タと同じである。しかしながら、バチルス・スフェリク
スＡＴＣＣ５３９６９が純粋培養物として増殖する化学
的に規定された増殖培地は発見されなかった。別の微生
物学的試験、例えば普通寒天での増殖、顕微鏡的観察お
よび増殖温度の研究はビー・スフェリクス（Ｂ．ｓｐｈ
ａｅｒｉｃｕｓ）１４５７７およびビー・スフェリクス
５３９６９の双方によって同じ結果を生じている。これ
らのデータは膜脂質分析データと共に微生物ＡＴＣＣ５
３９６９が微生物バチルス・スフェリクスであることを
示す。
９は、これらの培養物の増殖を支持するものである炭素
源に関してアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシ
ョンから得られる他のバチルス種と比較された。培養物
を表示した炭素源を含む規定の寒天プレート上に画線し
および／または液体培地中に接種し、そしてその培養物
を３０℃で９６時間インキュベートした後評価を行なっ
た。種々のバチルス属菌株を用いる炭素源利用研究の結
果を表２に示す。バチルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３
９６９によって得られた炭素源利用データはバチルス・
スフェリクスＡＴＣＣ１４５７７によって得られたデー
タと同じである。しかしながら、バチルス・スフェリク
スＡＴＣＣ５３９６９が純粋培養物として増殖する化学
的に規定された増殖培地は発見されなかった。別の微生
物学的試験、例えば普通寒天での増殖、顕微鏡的観察お
よび増殖温度の研究はビー・スフェリクス（Ｂ．ｓｐｈ
ａｅｒｉｃｕｓ）１４５７７およびビー・スフェリクス
５３９６９の双方によって同じ結果を生じている。これ
らのデータは膜脂質分析データと共に微生物ＡＴＣＣ５
３９６９が微生物バチルス・スフェリクスであることを
示す。
【００２９】
【表２】
【００３０】表２に記載したバチルス種を前記に記載し
た硫黄の生物利用可能性検定法を用いてそのＤＢＴ中の
有機的に結合した硫黄を利用する能力を測定して評価し
た。大部分の菌株について種々の基質を用いて数回試験
を行なった。ＡＴＣＣ５３９６９菌株は試験を行なった
バチルス種で唯一Ｃ−Ｓ結合開裂特性を有するものであ
った。バチルス・スフェリクスＡＴＣＣ第５３９６９番
を栄養素介助培養物としてエンテロバクター・アエロゲ
ネスまたはエンテロバクー・アグロメランス存在下で増
殖させた。バチルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３９６９
でのこの脱硫化特性は選択培地および非選択培地双方で
の多数の継代培養結果の全体を通して安定性であること
が観察された。
た硫黄の生物利用可能性検定法を用いてそのＤＢＴ中の
有機的に結合した硫黄を利用する能力を測定して評価し
た。大部分の菌株について種々の基質を用いて数回試験
を行なった。ＡＴＣＣ５３９６９菌株は試験を行なった
バチルス種で唯一Ｃ−Ｓ結合開裂特性を有するものであ
った。バチルス・スフェリクスＡＴＣＣ第５３９６９番
を栄養素介助培養物としてエンテロバクター・アエロゲ
ネスまたはエンテロバクー・アグロメランス存在下で増
殖させた。バチルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３９６９
でのこの脱硫化特性は選択培地および非選択培地双方で
の多数の継代培養結果の全体を通して安定性であること
が観察された。
【００３１】バチルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３９６
９は、ＤＢＴが単独の硫黄源として役立つ化学的に規定
された無機塩類培地で介助培養物と一緒に増殖させた場
合、培地中に検出される２−ヒドロキシビフェニル約
０．２ミリモルを生じる。２−ヒドロキシビフェニルは
ＤＢＴの唯一の代謝産物であり、これらの条件下で検出
されている。
９は、ＤＢＴが単独の硫黄源として役立つ化学的に規定
された無機塩類培地で介助培養物と一緒に増殖させた場
合、培地中に検出される２−ヒドロキシビフェニル約
０．２ミリモルを生じる。２−ヒドロキシビフェニルは
ＤＢＴの唯一の代謝産物であり、これらの条件下で検出
されている。
【００３２】バチルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３９６
９派生物はＡＴＣＣ５３９６９菌株の選択的脱硫化特性
と同じかまたはそれを上回る特性を保持する。選択的脱
硫化特性が同じであるバチルス・スフェリクスＡＴＣＣ
５３９６９派生物は記載された脱硫化処理のいずれかで
用いるのにも適当であり、このような利用に必要とされ
ることを意図しているものである。
９派生物はＡＴＣＣ５３９６９菌株の選択的脱硫化特性
と同じかまたはそれを上回る特性を保持する。選択的脱
硫化特性が同じであるバチルス・スフェリクスＡＴＣＣ
５３９６９派生物は記載された脱硫化処理のいずれかで
用いるのにも適当であり、このような利用に必要とされ
ることを意図しているものである。
【００３３】バチルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３９６
９の脱硫化特性は明らかにこの微生物の外部表面と関係
がある。このことは純培養物としての介助培養物にはＤ
ＢＴが単独硫黄源として役立つ化学的に規定された無機
塩類培地で増殖する能力がないという観察によって支持
される。しかしながら、脱硫化に適した微生物、特にバ
チルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３９６９が同時に存在
する場合、この介助培養物は豊富に増殖する。この介助
培養物の豊富な増殖は、バチルス・スフェリクスＡＴＣ
Ｃ５３９６９によってＤＢＴから遊離された硫黄を介助
培養物によって利用するのに有効にさせた場合にしか生
じない。
９の脱硫化特性は明らかにこの微生物の外部表面と関係
がある。このことは純培養物としての介助培養物にはＤ
ＢＴが単独硫黄源として役立つ化学的に規定された無機
塩類培地で増殖する能力がないという観察によって支持
される。しかしながら、脱硫化に適した微生物、特にバ
チルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３９６９が同時に存在
する場合、この介助培養物は豊富に増殖する。この介助
培養物の豊富な増殖は、バチルス・スフェリクスＡＴＣ
Ｃ５３９６９によってＤＢＴから遊離された硫黄を介助
培養物によって利用するのに有効にさせた場合にしか生
じない。
【００３４】バチルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３９６
９およびその派生物は、有機硫黄含有炭質物質、特に天
然に存在する化石燃料、例えば石炭、石油、シェール、
油、亜炭、およびそれらから誘導される合成燃料から有
機硫黄を極めて効果的に除去するのに用いることができ
る。有機硫黄はバチルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３９
６９および／またはその派生物と水性培地中で最高約４
２℃までの温度で接触させることによってこのような物
質から選択的に除去することができる。このような物質
からの有機硫黄の除去は、バチルス・スフェリクスＡＴ
ＣＣ５３９６９および／またはその派生物を用いて適当
な無機養素、同化可能な炭素源およびバチルス・スフェ
リクスの増殖のための必要な栄養素を与える栄養介助培
養物を含んで成る水性増殖培地中で固体有機硫黄含有化
合物から有機硫黄を選択的に代謝させることによって行
なうことができる。その代謝は酸素を必要とする好気条
件下であり、水性増殖培地のｐＨは約５〜８のｐＨ、好
ましくは約６〜７に保持され、温度は約１５℃〜３４
℃、好ましくは約２８℃〜３２℃である。温度が高いほ
ど代謝は速くなるが、その微生物は４２℃程度の温度に
耐性でないことが知られている。水性培地は、所望の時
間間隔内で所望の選択的硫黄除去を行うために適当な濃
度の微生物を含んでいなければならない。
９およびその派生物は、有機硫黄含有炭質物質、特に天
然に存在する化石燃料、例えば石炭、石油、シェール、
油、亜炭、およびそれらから誘導される合成燃料から有
機硫黄を極めて効果的に除去するのに用いることができ
る。有機硫黄はバチルス・スフェリクスＡＴＣＣ５３９
６９および／またはその派生物と水性培地中で最高約４
２℃までの温度で接触させることによってこのような物
質から選択的に除去することができる。このような物質
からの有機硫黄の除去は、バチルス・スフェリクスＡＴ
ＣＣ５３９６９および／またはその派生物を用いて適当
な無機養素、同化可能な炭素源およびバチルス・スフェ
リクスの増殖のための必要な栄養素を与える栄養介助培
養物を含んで成る水性増殖培地中で固体有機硫黄含有化
合物から有機硫黄を選択的に代謝させることによって行
なうことができる。その代謝は酸素を必要とする好気条
件下であり、水性増殖培地のｐＨは約５〜８のｐＨ、好
ましくは約６〜７に保持され、温度は約１５℃〜３４
℃、好ましくは約２８℃〜３２℃である。温度が高いほ
ど代謝は速くなるが、その微生物は４２℃程度の温度に
耐性でないことが知られている。水性培地は、所望の時
間間隔内で所望の選択的硫黄除去を行うために適当な濃
度の微生物を含んでいなければならない。
【００３５】本発明者はバチルス・スフェリクスＡＴＣ
Ｃ５３９６９およびその派生物が有機炭質物質中のＣ−
Ｓ結合の開裂によって硫黄を特異的に代謝することを発
見した。例えばジベンゾチオフェンの代謝での単独生成
物は２−ヒドロキシビフェニルおよび無機硫酸塩であ
る。これらの微生物代謝特性はバチルス・スフェリクス
ＡＴＣＣ５３９６９およびその派生物に有機Ｃ−Ｓ結合
を開裂するのに有機的化学合成で用いるための特異的な
原因物質を与え、それは種々の有機的処理合成系で用い
ることができる。同様に、バチルス・スフェリクスＡＴ
ＣＣ５３９６９およびその派生物の特異的な性質は、再
循環操作での有機Ｃ−Ｓ結合の開裂による種々の有機物
質の脱硫化分解、例えばゴム製品の場合のような硫黄含
有有機分子の分解で用いることができる。
Ｃ５３９６９およびその派生物が有機炭質物質中のＣ−
Ｓ結合の開裂によって硫黄を特異的に代謝することを発
見した。例えばジベンゾチオフェンの代謝での単独生成
物は２−ヒドロキシビフェニルおよび無機硫酸塩であ
る。これらの微生物代謝特性はバチルス・スフェリクス
ＡＴＣＣ５３９６９およびその派生物に有機Ｃ−Ｓ結合
を開裂するのに有機的化学合成で用いるための特異的な
原因物質を与え、それは種々の有機的処理合成系で用い
ることができる。同様に、バチルス・スフェリクスＡＴ
ＣＣ５３９６９およびその派生物の特異的な性質は、再
循環操作での有機Ｃ−Ｓ結合の開裂による種々の有機物
質の脱硫化分解、例えばゴム製品の場合のような硫黄含
有有機分子の分解で用いることができる。
【００３６】本発明の微生物処理により、有機硫黄の無
機硫酸塩への変換が生じる。有機的に結合した硫黄の形
態の硫黄は分離するのが極めて困難であるが、この処理
によって生成された無機硫酸塩は、当該技術分野におい
て普通に熟練した者には容易に明らかな種々の方法によ
って容易に除去することができる。
機硫酸塩への変換が生じる。有機的に結合した硫黄の形
態の硫黄は分離するのが極めて困難であるが、この処理
によって生成された無機硫酸塩は、当該技術分野におい
て普通に熟練した者には容易に明らかな種々の方法によ
って容易に除去することができる。
【００３７】前記の明細書で本発明をその若干の好まし
い態様に関して記載し且つ多くの詳細を例証のために記
載したが、本発明に更に別の態様が可能であり、しかも
本文中に記載した若干の詳細は本発明の基本的な原理か
ら逸脱することなくかなり変更することができるという
ことは当該技術者に当然のことである。
い態様に関して記載し且つ多くの詳細を例証のために記
載したが、本発明に更に別の態様が可能であり、しかも
本文中に記載した若干の詳細は本発明の基本的な原理か
ら逸脱することなくかなり変更することができるという
ことは当該技術者に当然のことである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｓ 1/02 8931−4Ｂ // Ｃ１０Ｌ 1/14 6958−4Ｈ (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:07）
Claims (32)
- 【請求項１】 有機炭質物質中のＣ−Ｓ結合を選択的に
開裂する能力を有する、突然変異体バチルス・スフェリ
クス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）菌株
ＡＴＣＣ第５３９６９番の生物学的純粋培養物。 - 【請求項２】 バチルス・スフェリクス菌株ＡＴＣＣ第
５３９６９番の選択的調製方法にして；開裂することが
所望とされるＣ−Ｓ結合を有する物質が存在する部分か
ら誘導された混合細菌を、無機養素および同化可能な炭
素源を含んで成り、しかも開裂することが所望とされる
種類のＣ−Ｓ結合にのみ硫黄が存在する化合物以外の硫
黄含有化合物が実質的に不在の増殖培地に接種し；その
細菌培養物を前記のバチルス・スフェリクスの増殖のた
めの完全な栄養素を与える栄養介助培養物存在下および
酸素存在下、約２０℃〜約３４℃の温度で、ｐＨ約５〜
約８において、しかも開裂することが所望とされる種類
のＣ−Ｓ結合にのみ硫黄が存在する化合物以外の硫黄含
有化合物が実質的に不在で、有機炭質物質中のＣ−Ｓ結
合の選択的開裂による硫黄代謝特性を有するバチルス・
スフェリクス菌株ＡＴＣＣ第５３９６９番を選択的に産
生するのに十分な時間増殖させることを含んで成る前記
方法。 - 【請求項３】 ｐＨを約６〜約７に保持する請求項２記
載の方法。 - 【請求項４】 温度を約３０℃〜約３２℃に保持する請
求項３記載の方法。 - 【請求項５】 温度を約３０℃〜約３２℃に保持する請
求項２記載の方法。 - 【請求項６】 前記の栄養介助培養物がエンテロバクタ
ー属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｏｒ）およびクレブシエラ
属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）から成る種より選択される
細菌である請求項２記載の方法。 - 【請求項７】 硫黄含有有機炭質物質を微生物バチルス
・スフェリクス菌株ＡＴＣＣ第５３９６９番と接触させ
ることを含んで成る硫黄含有有機炭質物質の硫黄含有量
を減少させる方法。 - 【請求項８】 前記の炭質物質が石炭である請求項７記
載の方法。 - 【請求項９】 前記の炭質物質が炭化水素油である請求
項７記載の方法。 - 【請求項１０】 前記の微生物が、無機養素および同化
可能な炭素源を含んで成る増殖培地で、前記の硫黄含有
有機炭質物質以外の硫黄含有化合物が実質的に不在で、
しかも前記のバチルス・スフェリクスの増殖のための完
全な栄養素を与える栄養介助培養物存在下および酸素存
在下約２０℃〜約３４℃の温度で増殖させた場合に、有
機Ｃ−Ｓ結合の開裂および無機硫酸塩の産生によって前
記の硫黄含有有機炭質物質を代謝する請求項７記載の方
法。 - 【請求項１１】 ｐＨを約６〜約７に保持する請求項１
０記載の方法。 - 【請求項１２】 温度を約３０℃〜約３２℃に保持する
請求項１１記載の方法。 - 【請求項１３】 温度を約３０℃〜約３２℃に保持する
請求項１０記載の方法。 - 【請求項１４】 前記の栄養介助培養物がエンテロバク
ター属およびクレブシエラ属から成る種より選択される
細菌である請求項１０記載の方法。 - 【請求項１５】 前記の炭質物質が石炭である請求項１
０記載の方法。 - 【請求項１６】 前記の炭質物質が炭化水素油である請
求項１０記載の方法。 - 【請求項１７】 Ｃ−Ｓ結合を有する有機炭質物質を微
生物バチルス・スフェリクス菌株ＡＴＣＣ第５３９６９
番と接触させることを含んで成る有機Ｃ−Ｓ結合の開裂
方法。 - 【請求項１８】 前記の有機炭質物質が有機的合成処理
での成分である請求項１７記載の方法。 - 【請求項１９】 前記の有機物質が再循環処理での成分
である請求項１７記載の方法。 - 【請求項２０】 前記の微生物が、無機養素および同化
可能な炭素源を含んで成る増殖培地で、前記の硫黄含有
有機炭質物質以外の硫黄含有化合物が実質的に不在で、
しかも前記のバチルス・スフェリクスの増殖のための完
全な栄養素を与える栄養介助培養物存在下および酸素存
在下約２０℃〜約３４℃の温度で増殖させた場合に、有
機Ｃ−Ｓ結合の開裂および無機硫酸塩の産生によって前
記の硫黄含有有機炭質物質を代謝する請求項１７記載の
方法。 - 【請求項２１】 ｐＨを約６〜約７に保持する請求項２
０記載の方法。 - 【請求項２２】 温度を約３０℃〜約３２℃に保持する
請求項２１記載の方法。 - 【請求項２３】 温度を約３０℃〜約３２℃に保持する
請求項２０記載の方法。 - 【請求項２４】 前記の栄養介助培養物がエンテロバク
ター属およびクレブシエラ属から成る種より選択される
細菌である請求項２０記載の方法。 - 【請求項２５】 前記の炭質物質が石炭である請求項２
０記載の方法。 - 【請求項２６】 前記の炭質物質が炭化水素油である請
求項２０記載の方法。 - 【請求項２７】 無機養素および同化可能な炭素源を含
んで成る増殖培地で、硫黄含有有機炭質物質以外の硫黄
含有化合物が実質的に不在で、しかも有機硫黄選択性突
然変異体微生物であるバチルス・スフェリクスＡＴＣＣ
第５３９６９番の増殖のための完全な栄養素を与える栄
養介助培養物存在下および酸素存在下約２０℃〜約３４
℃の温度で増殖させた場合に、有機Ｃ−Ｓ結合の開裂お
よび無機硫酸塩の産生によって硫黄含有有機炭質物質の
硫黄含有量を選択的に減少させる能力を有する前記バチ
ルス・スフェリクスの生物学的純粋培養物。 - 【請求項２８】 前記の栄養介助培養物がエンテロバク
ター属およびクレブシエラ属から成る種より選択される
細菌である請求項２７記載の生物学的純粋培養物。 - 【請求項２９】 無機養素および同化可能な炭素源を含
んで成る増殖培地で、ジベンゾチオフェン以外の硫黄含
有化合物が実質的に不在で、しかも有機硫黄選択性突然
変異体微生物であるバチルス・スフェリクスＡＴＣＣ第
５３９６９番の増殖のための完全な栄養素を与える栄養
介助培養物存在下および酸素存在下、約２０℃〜約３４
℃の温度で増殖させた場合に、有機Ｃ−Ｓ結合の開裂に
よって前記のジベンゾチオフェンを代謝し、且つ実質的
に２−ヒドロキシビフェニルおよび無機硫酸塩だけを産
生する能力を有する前記バチルス・スフェリクスの生物
学的純粋培養物。 - 【請求項３０】 前記の栄養介助培養物がエンテロバク
ター属およびクレブシエラ属から成る種より選択される
細菌である請求項２９記載の生物学的純粋培養物。 - 【請求項３１】 無機養素および同化可能な炭素源を含
んで成る増殖培地で硫黄含有有機炭質物質以外の硫黄含
有化合物が実質的に不在で、しかもバチルス・スフェリ
クスＡＴＣＣ第５３９６９番の増殖のための完全な栄養
素を与える栄養介助培養物存在下および酸素存在下約２
０℃〜約３４℃の温度で増殖させた場合に、有機Ｃ−Ｓ
結合の開裂および無機硫酸塩の産生によって硫黄含有有
機炭質物質の硫黄含有量を選択的に減少させる能力を有
する前記バチルス・スフェリクスの有機硫黄選択性派生
微生物の生物学的純粋培養物。 - 【請求項３２】 前記の栄養介助培養物がエンテロバク
ター属およびクレブシエラ属から成る種より選択される
細菌である請求項３１記載の生物学的純粋培養物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/461,265 US5002888A (en) | 1990-01-05 | 1990-01-05 | Mutant microorganisms useful for cleavage of organic C-S bonds |
| US461265 | 1995-06-05 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04311383A JPH04311383A (ja) | 1992-11-04 |
| JPH0771477B2 true JPH0771477B2 (ja) | 1995-08-02 |
Family
ID=23831854
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3000028A Expired - Lifetime JPH0771477B2 (ja) | 1990-01-05 | 1991-01-04 | 有機ｃ−ｓ結合の開裂に有用な突然変異体微生物 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5002888A (ja) |
| EP (1) | EP0436508A3 (ja) |
| JP (1) | JPH0771477B2 (ja) |
| CA (1) | CA2032937A1 (ja) |
| MX (1) | MX9300846A (ja) |
Families Citing this family (54)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH680223A5 (ja) * | 1989-07-17 | 1992-07-15 | Pier Luigi Prof Dr Luisi | |
| US5002888A (en) * | 1990-01-05 | 1991-03-26 | Institute Of Gas Technology | Mutant microorganisms useful for cleavage of organic C-S bonds |
| US5198341A (en) * | 1990-01-05 | 1993-03-30 | Institute Of Gas Technology | Useful for cleavage of organic C-S bonds Bacillus sphaericus microorganism |
| US5358870A (en) * | 1990-02-28 | 1994-10-25 | Institute Of Gas Technology | Microemulsion process for direct biocatalytic desulfurization of organosulfur molecules |
| US5344778A (en) * | 1990-02-28 | 1994-09-06 | Institute Of Gas Technology | Process for enzymatic cleavage of C-S bonds and process for reducing the sulfur content of sulfur-containing organic carbonaceous material |
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| US5885825A (en) * | 1990-08-24 | 1999-03-23 | Brookhaven Science Associates | Biochemical transformation of coals |
| US5858766A (en) * | 1990-08-24 | 1999-01-12 | Brookhaven Science Associates | Biochemical upgrading of oils |
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