JPH0771517B2

JPH0771517B2 - アスパラギン酸アミノトランスフエラ−ゼアイソザイムの分別定量法

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Publication number: JPH0771517B2
Application number: JP11701586A
Authority: JP
Inventors: 誠一谷口; 直人松山
Original assignee: 日本商事株式会社
Priority date: 1986-05-20
Filing date: 1986-05-20
Publication date: 1995-08-02
Anticipated expiration: 2010-08-02
Also published as: JPS62272998A

Description

【発明の詳細な説明】発明の分野本発明は臨床検査において有用な、血清中のアスパラギ
ン酸アミノトランスフェラーゼ（系統名Ｌ−Aspartate:
2−oxoglutarate aminotransferase（EC2.6.1.1.）、同
義語Gletamic Oxaloacetic Transamirase（GOT）、以
下、ASTと称す）のアイソザイムと分別定量法に関し、
さらに詳しくは、特定の阻害剤の存在下に検体血清を特
定の基質と反応させ、得られた生成物を測定することに
よりミトコンドリア性ASTを分別定量する方法に関す
る。

発明の背景 ASTは、哺乳動物のほとんど全ての臓器に存在してお
り、細胞質に局在する分画である細胞質性AST（以下、
ｓ−ASTと称す）とミトコンドリアに局在する分画であ
るミトコンドリア性AST（以下、ｍ−ASTと称す）の２種
類のアイソザイムがあり、検体、特に血清中の総AST
量、ｓ−AST量、ｍ−AST量の定量はいずれも臨床診断を
行なう上で非常に有用である。

ことに、ｍ−ASTの分別定量は、ミトコンドリアの機
能、肝炎、心筋梗塞、細胞障害の重篤度などの臨床診断
法として有用であり、近年、その簡便かつ特異的な定量
法の必要性が益々高まっている。

従来技術従来、ASTアイソザイムの測定は陰イオン交換クロマト
グラフィー法（臨床化学、５,163（1979））、免疫化学
的方法（特開昭50−19918号）および電気泳動法（ロバ
ート・レイ、クリニカル・ケミストリー（Robert Rej,c
lin.chem.），24,1971（1978））などを用いて行なわれ
ているが、これらは時間のかかる煩雑な操作を要し、充
分な精度が得られないなどの種々の欠点を有している。

さらに、複数の異なるpHで活性を測定し、アイソザイム
の比を求める方法および同様に２つの異なるpHで活性を
測定し、さらに、ｓ−AST阻害剤の影響をも調べてアイ
ソザイムの比を計算する方法（ロバート・レイ、クリニ
カル・ケミストリー（Robert Rej,Clin.Chem.），27,53
5（1981））が報告されているが、いずれも操作が煩雑
であり、迅速性および精度に欠ける。

また、ｓ−AST活性を阻害する酵素を用いて前処理した
後、ｍ−ASTを測定する方法（特開昭60−149399号）も
提案されている。しかし、この方法は、多量の精製酵素
を必要とし、経済性に問題があり、また、前処理に比較
的長時間を要し、自動分析に適していない。

発明の目的本発明者らは、このような問題点がなく、迅速で、精度
の高い、かつ、自動分析にも適したｍ−ASTの分別定量
法を見出すべく、鋭意研究を重ねた。その結果、ジカル
ボン酸化合物およびプロテアーゼから選ばれる１種また
は２種以上のｓ−AST阻害剤の存在下、従来ASTの基質と
して知られるＬ−アスパラギン酸と異なる新たな基質を
作用させることにより、ｍ−ASTのみを特異的に、迅
速、かつ、高精度で分別定量でき、自動分析にも適用で
きることを見出し、本発明を完成するに至った。

発明の開示すなわち、本発明はジカルボン酸化合物およびプロテア
ーゼから選ばれる１種または２種以上のｓ−AST阻害剤
の存在下、検体中のｍ−ASTにＬ−システイン酸および
２−オキソグルタル酸を基質として作用させ、式：で示される反応に従って生成したＬ−グルタミン酸およ
びβ−スルホニルピルビン酸のいずれかを測定すること
によりｍ−ASTを特異的に定量するASTアイソザイムの分
別定量法を提供するものである。

システイン酸および２−オキソグルタル酸を基質とし、
これらからグルタミン酸およびβ−スルホニルピルビン
酸を誘導する酵素として、従来、システイン酸トランス
アミナーゼが知られているが（エス・ダーリング、ネイ
チャー（S.Darling,Nature），170,749〜750（195
2））、これはASTと異なるものであり、ASTアイソザイ
ムの分別定量にシステイン酸と２−オキソグルタル酸を
基質として用いた例は見当らない。

本発明の方法において、ｓ−AST阻害剤として用いるジ
カルボン酸化合物としては、例えば、グルタル酸、アジ
ピン酸、こはく酸、マレイン酸およびそれらの無水物が
挙げられ、入手しやすさ等からグルタル酸が特に好まし
い。プロテアーゼとしては、アクチナーゼ（科研化学社
製）、パパイン、プロテアーゼ・タイプVII、プロテア
ーゼ・タイプVIII、プロテアーゼ・タイプX VIII、プロ
メライン（いずれもシグマ社製）などが挙げられる。こ
れらのｓ−AST阻害剤は単独でも、２種以上併用しても
よい。

検体は、代表的には血清であるが、これに限定するもの
ではなく、ｍ−ASTの定量が所望される、測定に供する
ことのできるものいずれでもよい。

基質として用いるＬ−システイン酸および２−オキソグ
ルタル酸は通常入手しうる定量試薬グレードのものでよ
い。

式〔Ｉ〕に従って生成したＬ−グルタミン酸またはβ−
スルホニルピルビン酸の測定法は、特に限定するもので
はなく、これらの化合物の定量法として公知のいずれの
方法も採用することができる。

例えば、Ｌ−グルタミン酸は、NADの存在下、Ｌ−グル
タミン酸脱水素酵素（GlDH）を作用させ、ジアホラーゼ
（DI）、フェナジンメトサルフェート（PMS）のような
電子キャリアと、ニトロテトラゾリウムブルー（NT
B）、３−（4,5−ジメチル−２−チアゾリル）−2,5−
ジフェニル−2H−テトラゾリウムブロマイド（MTT）の
ようなテトラゾリウム塩を加えて発色させ、可視部の波
長で測定するような方法が好適に採用できる。

意外にも、本発明者らによれば、式：で示される反応に従い、NADHの存在下、従来、オキザロ
酢酸を基質とすると考えられているMDHをβ−スルホニ
ルピルビン酸に作用させ、NADHの有する紫外部（340n
m）での特異吸収を利用し、そのNAD（紫外部で吸収を示
さない）への変化、すなわち、NADHの紫外部における光
学的密度の減少を測定してβ−スルホニルピルビン酸を
定量することにより、ｍ−ASTアイソザイムの分別定量
がきわめて高精度で迅速に行なえることが判明した。し
たがって、本発明の方法において、β−スルホニルピル
ビン酸を測定する場合は、式〔Ｉ〕の反応後、式〔II〕
の反応を行なって定量操作を行なうことが好ましく、か
くして、本発明はまた、ジカルボン酸化合物およびプロ
テアーゼからなる群から選ばれる１種または２種以上の
ｓ−AST阻害剤の存在下、検体中のｍ−ASTにＬ−システ
イン酸および２−オキソグルタル酸を基質として作用さ
せ、生成したβ−スルホニルピルビン酸をNADHの存在
下、MDHと作用させることからなるｍ−ASTアイソザイム
の分別定量法を提供するものである。

なお、本発明においては、式〔Ｉ〕の反応と、式〔II〕
の反応を含め、生成したＬ−グルタミン酸およびβ−ス
ルホニルピルビン酸の測定は同一系内で行なうことがで
きる。

本発明の方法は、例えば、検体を要すれば適宜希釈し、
これに、ｓ−AST阻害剤、Ｌ−システイン酸、２−オキ
ソグルタル酸および、Ｌ−グルタミン酸またはβ−スル
ホニルピルビン酸測定用試薬を水性溶液状態で同時に、
または順次添加し、所定の温度で所定時間保持した後、
精製水や盲検を対照として、所定の波長における光学的
密度や、その単位時間当たりの変化を測定し、ｍ−AST
標準を用いた測定値や、それにより作成した検量線か
ら、検体中のｍ−AST量を定量することにより実施でき
る。実施に際しては、MDHの反応系の場合、ｍ−ASTの至
適pHであるpH6.0〜8.0、好ましくは、pH7.0〜7.5に保存
することが望ましく、そのために公知の緩衝剤、例え
ば、ビス−トリスやトリスが、通常、10〜100mM程度の
濃度で好適に使用される。通常、反応系中には、ｓ−AS
T阻害剤を100〜300mM（ジカルボン酸化合物の場合）ま
たは1000〜3000チロジン単位/ml（アクチナーゼの場
合）、Ｌ−システイン酸を100〜250mM、２−オキソグル
タル酸を５〜20mM程度の割合で存在させ、反応系を37℃
前後で１〜30分間程度保持した後、光学的密度の測定を
行なう。また、GlDHの反応系の場合、好ましくは、pH7.
5〜8.5に保持するため、同様な緩衝剤10〜200mMを使用
し、２−オキソグルタル酸の濃度を0.5〜5mMとする意外
は前記と同様にして測定を行う。例えば、GlDH、NAD、P
MSおよびNTBを用いてＬ−グルタミン酸を測定する場合
は盲検を対照として560nmの光学的密度を測定する。ま
た、NADHおよびMDHを用いてβ−スルホニルピルビン酸
を測定する場合は、精製水を対照とし、340nmにおける
光学的密度の単位時間当たりの変化を測定する。

特に、本発明の方法においては、ｓ−AST阻害剤、Ｌ−
システイン酸およびＬ−グルタミン酸またはβ−スルホ
ニルピルビン酸測定用試薬を反応系に添加し、例えば、
37℃で１〜10分間保持後、２−オキソグルタル酸を添加
し、再度、37℃で１〜10分間保持することにより、高精
度でｍ−ASTアイソザイムの分別定量が行なえることが
判明した。

本発明は、また、本発明の方法を簡便、かつ、迅速に行
なうための、ｍ−ASTアイソザイム分別定量用試薬キッ
トも提供するものである。

かかる試薬キットは、前記のｓ−AST阻害剤、Ｌ−シス
テイン酸、２−オキソグルタル酸およびＬ−グルタミン
酸またはβ−スルホニルピルビン酸測定用試薬からなる
群から選ばれる少なくとも１種の試薬で構成され、所望
により、ｍ−AST標準品、緩衝剤等の他の薬剤を組合せ
てもよい。各試薬は、凍結乾燥品、粉末、顆粒等の固体
状、濃縮液、希釈液状等の液体でよく、通常の製剤化技
術に従い、要すれば所定の割合で適宜混合し、適宜に包
装して製造できる。

前記のごとく、本発明においては、式〔Ｉ〕および〔I
I〕の反応に従い、β−スルホニルピルビン酸を測定す
ることが好ましく、また、２−オキソグルタル酸を他の
試薬と分けて反応系に添加することが望ましい。したが
って、本発明においては、該試薬キットを、ｓ−AST阻
害剤、Ｌ−システイン酸、NADHおよびMDHを含有する第
１試薬および２−オキソグルタル酸を含有する第２試薬
を組合せたものとすることが好ましい。

例えば、第１試薬は、使用時、精製水に溶解して、Ｌ−
システイン酸100〜300mM、好ましくは、約200mM、グル
タル酸100〜400mM、MDH5〜50単位、好ましくは、20単位
/ml、NADH0.08〜0.23mg/mlの濃度となるように、各試薬
を混合した粉末または溶液とすることができる。この第
１試薬には、使用時、反応系をpH6.5〜8.0に保持するた
め、10〜100mMの濃度となる程度のビス−トリスやトリ
スのような緩衝剤を添加することができる。

また、第２試薬は、使用時、精製水に溶解して、用手法
の場合は濃度150〜630mM、自動分析法の場合は濃度20〜
110mMとなるように２−オキソグルタル酸を含有する粉
末または溶液とすることができる。

このキットを用いて血清中のｍ−ASTアイソザイムを分
別定量するには、検体血清に第１試薬を作用させ、約37
℃で１〜10分間、好ましくは、２〜６分間予備加温した
後、第２試薬を加え、同温度で１〜10分間、好ましく
は、２〜６分間反応させ、精製水を対照にして340nmに
おける吸光度の１分間当たりの減少を測定し、これらの
データに基づいて下式により検体血清中のｍ−AST活性
値（U/）を算出する。

式中、ΔEsa:検体血清の吸光度の１分間当りの差 ΔEstd:標準ｍ−ASTの吸光度の１分間当りの差 x:標準ｍ−ASTの活性値（U/）このように、本発明によれば、血清中のｍ−ASTのみを
特異的に定量でき、しかも何ら特別の装置を要すること
なく、極めて簡便かつ迅速に実施できるため、本発明の
分別定量法およびその試薬は、血清中のｍ−ASTの臨床
検査にきわめて有用である。

つぎに本発明によるｍ−AST分別定量効果を調べるため
に以下に示す実験を行なった。

なお、以下、β−スルホニルピルビン酸を測定する本発
明の方法を本発明法（１）、Ｌ−グルタミン酸を測定す
る方法を本発明法（２）と称する。

実験実験１基質として、Ｌ−アスパラギン酸を用いる従来法および
Ｌ−システイン酸を用いる本発明方法における各種ｓ−
AST阻害剤の効果（１）試料の調製ｓ−AST試料：免疫沈澱法、電気泳動法等によりｍ−AST
を含有しないことを確認したブタ心臓由来のｓ−AST
（ベーリンガー社製）を1mg/ml牛血清アルブミン含有ビ
ス−トリス緩衝液（pH7.5）で希釈して活性値130.6U/
のｓ−AST試料を調製する。

ｍ−AST試料：免疫沈澱法、電気泳動法等によりｓ−AST
を含有しないことを確認したブタ心臓由来の標準ｍ−AS
T（栄研化学社製）を前記緩衝液で希釈して活性値154.8
U/のｍ−AST試料を調製する。

本発明法（１）（１）試薬の調製第１試薬:L−システイン酸（東京化成社製）4.40g、リ
ンゴ酸脱水素酵素（天野製薬社製）2500単位、β−NADH
（オリエンタル酵母社製）16.0mg、ｓ−AST阻害剤（後
記第１表および第２表参照）およびビス・トリス（同仁
化学社製）0.54gを精製水に溶解し全量を100mlとする
（pH7.5）。

第２試薬:2−オキソグルタル酸（東京化成社製）0.46g
を精製水に溶解し全量を50mlとする（pH6.5）。

（２）方法前記試料0.020mlに第１試薬0.40mlを加え、37℃で５分
間予備加温した後、第２試薬0.10mlを加え同温度で反応
させ、その間精製水を対照にして340nmにおける吸光度
の１分間当たりの減少を日立705自動分析装置を用いて
測定し、それらのデータから前記式（Ａ）により、ｍ−
ASTの活性値および相対活性を算出した。

従来法（１）試薬の調製第１試薬:L−アスパラギン酸（半井化学社製）3.46g、
リンゴ酸脱水素酵素100単位、β−NADH16.0mg、ｓ−AST
阻害剤（後記第１表および第２表参照）およびトリス0.
31gを精製水に溶解し全量を100mlとする（pH8.0）。

第２試薬:2−オキソグルタル酸0.46gを精製水に溶解し
全量を50mlとする（pH6.5）。

（２）方法前記本発明法（１）の方法と同様にして行なう。

結果を第１表および第２表に示す。

第１表および第２表の結果から明らかなように、基質と
してＬ−アスパラギン酸を用いる従来法にジカルボン酸
化合物またはプロテアーゼを添加してもｓ−ASTの活性
は阻害されなかったがＬ−システイン酸を用いる本発明
法によればグルタル酸、無水マレイン酸およびアクチナ
ーゼを用いた場合に特に顕著なｓ−AST活性阻害効果が
得られた。

実験２Ｌ−システイン酸基質に対するASTアイソザイムの活性（１）試料の調製ｓ−AST試料：前記実験１と同様にして活性値352U/の
ｓ−AST試料を調製する。

ｍ−AST試料：前記実験１と同様にして活性値155U/の
ｍ−AST試料を調製する。

本発明法（１）（１）試薬の調製第１試薬:L−システイン酸3.63g、リンゴ酸脱水素酵素
（天野製薬社製）2000単位、β−NADH13.0mg、グルタル
酸2.84gおよびビス−トリス0.45gを精製水に溶解し全量
を100mlとする（pH7.5）。

第２試薬:2−オキソグルタル酸2.74gを精製水に溶解し
全量を50mlとする（pH6.5）。

（２）方法前記試料0.12mlに第１試薬2.9mlを加え、37℃で５分間
予備加温した後、第２試薬0.10mlを加え同温度で反応さ
せ、その間精製水を対照にして340nmにおける光学的密
度の１分間当たりの減少を島津UV210A分光光度計を用い
て測定し、それらのデータから前記式（Ａ）により、ｍ
−ASTの活性値および相対活性を算出した。

本発明法（２）（１）試薬の調製基質検出酵素溶液の調製:L−システイン酸1.69g、２−
オキソグルタル酸7.3mg、Ｌ−グルタミン酸脱水素酵素
（オリエンタル酵母社製）1500単位、NAD＋（オリエン
タル酵母社製）0.15g、オキサロ酢酸デカルボキシラー
ゼ（東洋醸造社製）500単位、グルタル酸1.32g、ｍ−フ
ェナジンメトサルフェート5.0mg、ニトロテトラゾリウ
ムブルー30mgおよびトリス（ヒドロキシメチル）アミノ
メタン0.61gを精製水に溶解して全量を50mlとする（pH
7.8）。

（２）方法前記試料0.2mlに基質検出酵素溶液0.5mlを加え、37℃で
20分間加温した後0.1N塩酸5.0mlを加えて反応を停止さ
せ、精製水からなる盲検を対照にして560nmにおける吸
光度を島津UV210A分光光度計を用いて測定し、予め作成
したｍ−ASTの検量線を用い、ｍ−ASTの活性値および相
対活性を算出した。

従来法（１）方法前記試料を用い、カルメン法によるAST活性の測定に従
来一般に使用されている試薬であるネスコートGOTV₃（S
SCC）（日本商事社製）を用いて常法により測定し、各A
STアイソザイムの活性値および相対活性を算出した、結
果を第３表に示す。

第３表より明らかなように、ｍ−AST活性に関しては、
本発明法（１）および（２）はともに従来法と同様の値
を示し、一方、ｓ−AST活性に関しては、本発明法
（１）は相対活性0.6％、本発明法（２）は相対活性0.0
％の値を示し、本発明法によりASTアイソザイムの分別
定量が可能なことが判明した。

実験３ｓ−AST活性に対するグルタル酸の影響（１）試料の調製試料I:免疫沈澱法、電気泳動法等によりｍ−ASTを含有
しないことを確認したブタ心臓由来のｓ−AST（ベーリ
ンガー社製）を1mg/ml牛血清アルブミン含有ビス−トリ
ス緩衝液（pH7.5）で希釈して活性値251U/のｓ−AST
試料を調製する。

試料II:前記と同様にして活性値507U/のｓ−AST試料
を調製する。

試料III:前記と同様にして活性値760U/のｓ−AST試料
を調製する。

（２）試薬の調製前記実験１と同様にして調製する。

（３）方法前記実験１および２と同様にしてｓ−ASTの活性値およ
び相対活性を測定した。結果を第４表に示す。

第４表より明らかなように、グルタル酸を使用する本発
明法（１）および（２）によりｓ−ASTの活性は完全に
阻害された。

実験４ｓ−AST共存下におけるｍ−ASTの活性活性値が155U/のｍ−AST試料に活性値がそれぞれ０、
151、316および456U/のｓ−AST試料を添加し、ｓ−AS
Tおよび実験１の本発明法（１）と同様にしてｍ−ASTの
活性値を算出した、結果を第５表に示す。

第５表より明らかなように、ｓ−AST共存下においても
ｍ−AST活性値はほとんど影響されない。

したがって、本発明法（１）はｍ−ASTを特異的に分別
定量できる。

以下に本発明を実施例によりさらに詳しく説明する。

実施例１本発明法（１）による検量線の作成（１）試薬の調製第１試薬:L−システイン酸3.63g、リンゴ酸脱水素酵素2
000単位、β−NADH13.0mg、グルタル酸2.84gおよびビス
−トリス0.45gを精製水に溶解し全量を100mlとする（pH
7.5）。

（２）標準血清の調製ｍ−AST活性値が約340U/の血清を生理食塩水で1/5、2
/5、3/5、4/5、5/5に希釈して調製する。

（３）測定操作および結果試験管５本に前記各濃度の標準血清各0.12mlをとり、こ
れに前記第１試薬2.9mlを加え、37℃で５分間予備加温
したのち前記第２試薬0.1mlを加え、37℃で反応させ、
精製水を対照にして340nmにおける吸光度の１分間当た
りの減少を測定し、それらのデータから前記式（１）に
より、ｍ−ASTの活性値を求め検量線を作成した。これ
を第１図に示す。図より明らかなように原点を通る直線
が得られ、本発明法（１）の定量性が確認された。

実施例２（１）試薬の調製前記実施例１と同様にして調製した。

（２）測定操作および結果実施例１で用いた第１、第２試薬および標準血清を用
い、16血清検体につき実施例１と同様の操作を行なって
ｍ−AST活性値を求めた。一方、同じ血清検体につき、
公知の免疫化学的方法によるｍ−AST活性測定に一般に
使用されているｍ−AST試薬「栄研」（栄研化学社製）
を用いて常法によりｍ−AST活性値を求めた。これらよ
り、本発明法（１）と従来法の間の相関図を作成した。
これを第２図に示す。

これから相関係数ｒ＝0.989であり、従来法の測定値を
ｘ、本発明法（１）による測定値をｙとすると回帰直線
の式はｙ＝1.058x＋2.1と良好な相関を示し、本発明法
（１）の正確度が確認された。

実施例３本発明法（２）による検量線の作成（１）試薬の調製基質検出酵素溶液:L−システイン酸1.69g、２−オキソ
グルタル酸7.3mg、Ｌ−グルタミン酸脱水素酵素1500単
位、NAD＋0.15g、オキサロ酢酸デカルボキシラーゼ500
単位、グルタル酸1.32g、ｍ−フェナジンメトサルフェ
ート5.0mg、ニトロテトラゾリウムブルー30mgおよびト
リス（ヒドロキシメチル）アミノメタン0.61gを精製水
に溶解し全量を50mlとする（pH7.8）。

（２）標準血清の調製前記実施例１と同様にして調製する。

（３）測定操作および結果試験管５本に前記各濃度の標準血清各0.12mlをとり、こ
れに前記基質検出酵素溶液0.5mlを加え、37℃で30分間
加温した後0.1N塩酸5.0mlを加えて反応を停止させ、精
製水からなる盲検を対照にして560nmにおける吸光度を
測定し、それらのデータから前記式（２）によりｍ−AS
Tの活性値を求め、検量線を作成した。これを第３図に
示す。図より明らかなように原点を通る直線が得られ、
本発明法（２）の定量性が確認された。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明法（１）における検量線を示すグラフ、
第２図は本発明法（１）と免疫化学的方法の間の相関関
係を示すグラフ、第３図は本発明法（２）における検量
線を示すグラフである。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ジカルボン酸化合物およびプロテアーゼか
らなる群から選ばれる１種または２種以上の細胞質性ア
スパラギン酸アミノトランスフェラーゼ阻害剤の存在
下、検体中のミトコンドリア性アスパラギン酸アミノト
ランスフェラーゼにＬ−システイン酸および２−オキソ
グルタル酸を基質として作用させ、生成したＬ−グルタ
ミン酸およびβ−スルホニルピルビン酸のいずれかを測
定することによりミトコンドリア性アスパラギン酸アミ
ノトランスフェラーゼを特異的に定量することを特徴と
するアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼアイソザ
イムの分別定量法。
【請求項２】該ジカルボン酸化合物がグルタル酸である
前記第（１）項の分別定量法。
【請求項３】ジカルボン酸化合物およびプロテアーゼか
らなる群から選ばれる１種または２種以上の細胞質性ア
スパラギン酸アミノトランスフェラーゼ阻害剤の存在
下、検体中のミトコンドリア性アスパラギン酸アミノト
ランスフェラーゼにＬ−システイン酸および２−オキソ
グルタル酸を基質として作用させ、生成したβ−スルホ
ニルピルビン酸をNADHの存在下にリンゴ酸脱水素酵素と
作用させることによりミトコンドリア性アスパラギン酸
アミノトランスフェラーゼを特異的に定量することを特
徴とするアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼアイ
ソザイムの分別定量法。
【請求項４】ジカルボン酸化合物およびプロテアーゼか
らなる群から選ばれる１種または２種以上の細胞質性ア
スパラギン酸アミノトランスフェラーゼ阻害剤、Ｌ−シ
ステイン酸、２−オキソグルタル酸、およびＬ−グルタ
ミン酸またはβ−スルホニルピルビン酸測定用試薬から
なる群から選ばれる少なくとも１種の試薬からなること
を特徴とするミトコンドリア性アスパラギン酸アミノト
ランスフェラーゼアイソザイムの分別定量用試薬キッ
ト。
【請求項５】ジカルボン酸化合物およびプロテアーゼか
ら選ばれる１種または２種以上の細胞質性アスパラギン
酸アミノトランスフェラーゼ阻害剤、Ｌ−システイン
酸、NADHおよびリンゴ酸脱水素酵素を含有する第１試薬
および２−オキソグルタル酸を含有する第２試薬を組合
せてなる前記第（４）項のミトコンドリア性アスパラギ
ン酸アミノトランスフェラーゼアイソザイムの分別定量
用試薬キット。