JPH0786088B2

JPH0786088B2 - アセトン可溶性脂質フラクションを含む製薬学的組成物

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Publication number: JPH0786088B2
Application number: JP57153788A
Authority: JP
Inventors: マイヤ−・シニツキ−; デイビツド・ヘロン; デイビツド・サミユエル
Original assignee: イエダ・リサ−チ・アンド・デイブロプメント・カンパニ−・リミテッド
Priority date: 1981-09-04
Filing date: 1982-09-03
Publication date: 1995-09-20
Anticipated expiration: 2010-09-20
Also published as: EP0074251B2; FI75270B; JPS58126812A; AU8778282A; FI75270C; IL63734A; EP0074251A1; EP0074251B1; FI823013L; IL63734A0; US4474773A; NO822995L; FI823013A0; AU555915B2; DE3262884D1

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕卵黄から分別され、選択された脂質フラクションは、他
の脂質調製物と比較したとき、流動化ならびに生物学的
膜の損傷した機能の回復に対する潜在力が実質的に増大
したものである。本発明は、このように分離したアセト
ン可溶性脂質フラクションを含む製薬学的組成物に関す
る。さらに、本発明は、老化におけるような膜の構造お
よび動力学の異常、免疫系の異機能、精神および神経学
的障害、薬剤耽溺およびアルコール中毒、高血圧、アテ
ローム性動脈硬化症、胆石のような高脂血障害に関連す
る種々の障害の処置に関する。生体内処置は、アセトン
可溶性脂質フラクションの有効量を投与することからな
る。他の異機能、例えば精子不妊症の処置は生体外でも
実施できる。

〔従来の技術〕

生理学的膜の脂質流動性（微量粘度（）の逆数）は、
膜の構造および化学的組成、特にコレステロール対リン
脂質のモル比（C/PL）、スフインゴミエリン対レシチン
のモル比（S/L）およびリン脂質のアシル鎖の不飽和度
によって決定される（shinitzky and Henkart,Int.Rev.
Cytol.60,121（1979）;Cooper,J.,Supramol.Struct.8,4
13（1978））。

また、膜脂質の流動性は脳や他の組織の膜に結合する以
下の物質の多くの生理学的性質を決定する；受容体（Muller and Shinitzky,Brit.J.Haematol.42,35
5（1979）;Heron,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77,7
463（1980）;Heron,et al.「受容体と神経伝達物質」Li
ttauer et al.編,John Wiley,London（1980）;Heron,et
al.,Eur.J.Pharmacol.（印刷中））、抗原（Shinitzky and Sourojon,Proc.Natl.Acad.Sci.US
A,76,4438（1979））、酵素（Sandermann,Biochim.Biophys.Acta,515,209（197
9）;Rimon et al.,Nature,270,267（1977））、伝達担体（Kimelberg,Biochim.Biophys.Acta,413（197
5）、イオン通路（Stephens and Shinitzky,Nature,270,267
（1977））、リボゾーム（Tower et al.,Biochim.Biophys.Acta,287,
301（1972））。この主題は最近さかんに検討されてい
る（Shinitzky,Physiol.Rev.印刷中）。

ターゲット細胞の最終の応答は、膜の構造および動力学
的性質によって決定する。従って、ターゲット細胞の最
大の応答には最適な脂質流動性を要する（Heron et a
l.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.77,7463（1980）;Heron et
al.,「受容体と神経伝達物質」Littauer et al.編,Joh
n Wiley,Londoy（1980）;Yuli et al.,Biochemistry,2
0,4250（1980）;Shinitzky,Physiol.Rev.,印刷中）。

多くの障害の病因には膜脂質の組成または脂質の代謝の
変化がある（Cooper,N.Engl.J.Med.,279,371（197
7））。これらの変化は、多くの場合、C/PLもしくはS/L
の増加またはリン脂質のアシル鎖の不飽和度またはこれ
らの３つの組み合わせのために、種々の組織の膜脂質の
微量粘度の増加に相関関係する。脂質の過酸化もまた細
胞膜のタンパク質の動力学に影響を及ぼし、その結果生
理学的機能に影響を及ぼす（Sagai and Ichinose,Life
Sci.,27,731（1980））。

脂質のアンバランスに起因し、脂質の取り扱いに敏感に
反応する障害を以下に示す：（１）老化および老衰（Yamamoto,Lipids,3,284（196
8）;Rivnay et al.,Mech.Age.Dev.10,71（1979）;Heron
et al.,Eur.J.Pharm.,刊行予定;Araki and Rifkind,Li
fe Sci.26,2223（1989）;Hershkowitz et al.,Progress
in Brain Research,Elsevier-North Holl and（印刷
中）;Ronser et al.,Adv.Lipid Red.10,262（197
2））。

（２）薬物およびアルコールの耽溺の禁断症候（John
son et al., Mol.Pharmacol.,15,739（1979）;Chin and
Goldstein,Science,196,684（1979）;Littleton and J
ohn,J.Pharm.Pharmac.,29,579（1977）;Heron et al.,B
iochem,Pharmacol,印刷中（1982））。

（３）高脂血障害、例えば、高血圧、アテローム性動
脈硬化症、胆石、硬変症および肥満症など（Montenay e
t al.,Biochem.Biophy.Res.Comm.100,660（1981）;Coop
er,N.,Engl.J.Med.,279,371（1977）;Miettinen et a
l.,Lancet 2,835（1972））。

（４）精子不妊症（Davis et al.,Biochim.Biophys.A
cta,558,257（1979）;Davis,Proc.Soc.Exp.Biol.Med.,1
52,257（1976））。

（５）損傷された免疫機能、例えば、老化、肥満症お
よびある場合のアレルギー（Rivnay et al.,Mech.Age.D
ev.,12,119（1980）;Rivnay et al.,Mech.Age.dev.10,7
1（1979））。

シナプス膜の微量粘度は、脳中の特別の通路の外科的ま
たは化学的損傷の結果として増加することを、またわれ
われは発見した（Heron et al.,Biochem.Pharmacol.,印
刷中（1982））。

これらの発見は、他の変性的または有機的損傷、例え
ば、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、晩発性運
動障害、ハンチングトン舞踏病、しんせん、運動失調お
よびてんかん、およびある場合の遅鈍に適用できる。そ
れらの損傷および遅鈍は、原理的に、脂質の取り扱いに
よって処理することができる。

ある種の精神障害は、例えば、そう病、うつ病および分
裂言語症は、脳中の神経伝達物質の転換速度における化
学的不釣り合いに関係することも一般に受け入れられて
いる。生物由来アミン類（ドパミン、ノレフィンフリン
およびセロトニン）が主として関与することを示唆する
証拠がある。これらの伝達物質の転換に関係する受容体
および膜結合酵素は、膜の流動性の変化によって変化す
る（Hershkowitz et al.,Progress in Brain Research
（脳研究の発展）、Eleeviar-North Holland,印刷中;He
ron et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77,7463（1980）;
Heron et al.,「受容体と神経伝達物質」Littauer et a
l.編,John Wiley,London（1980）;Heron et al.,Eur.J.
Phamacol.,72,361（1981））。したがって脂質の取り扱
いに反応する障害のカテゴリーの範囲内に入る。

脂質の取り扱いによる機能の調節は、生体外で実施する
こともできる。これはワクチン注射に使用するためのウ
イルスの伝染性（Pal et al.,Biochemistry 20,530（19
81））、および抗原性（Shinitzky and Souroujon,Pro
c.Natl.Acad.Sci.,USA 76,4438（1979））の調節に応用
することができ、そして組織の拒絶反応を減少しかつ移
植を促進することができるであろう。

脂質のアンバランスに起因する悪い作用の幾つかは、天
然源からの脂質の活性フラクションを使用して、“膜工
学”の形によって矯正することができる。このフラクシ
ョン（レシチンを相当に含有する）は、幾つかの考えら
れる機構を介して作用することができる；（１）受動的移動による過剰のコレステロールの抽出
（Cooper,J.Supramol.Struct.,8,413（1978）;Miettini
n et al.,Lancet,2，835（1972）;Morrison,Geriatrics
13,12（1958）;Cooper et al.,J.Clin.Invest.55.115
（1975））。

（２）より高い微量粘度の膜脂質との交換（Wirtz an
d Zilversmit,Biochim.Biophys.Acta 193,105（196
9）。

（３）損傷した（例、過酸化された）脂質への混入ま
たは交換（Bakardjieva et al.,Biochemistry 18,3016
（1979））。これにより変性した膜の構造および機能を
回復することができる。

（４）種々の代謝経路の前駆物質（例、プロスタグラ
ンジン類、ビタミンＤおよびアセチルコリン）。

しかしながら、種々の障害に対してしばしばすすめられ
る、レシチン含量が高い食事（Cobb et al.,Nutr.Meta
b.,24,228（1980）;Blass（Cornall-Burke Rehabilitat
ion Center）;Gershon（Lafayette Clinic,Detroit）;H
eyman（Duke University Med.Center）;Sullivan et a
l.,（M.I.T and Tufts Univ.），“Proceedings of the
International Study Group on tha Pharmacology of
Memory Disorders Associated with Aging"（老化に関
連する記憶障害の薬理学に関する国際研究グループの報
告）Zurich（1981））は、脂質の不釣り合いに関連する
症候を軽減すること、および膜脂質の流動性を正常に回
復することにおいて非常に効果があるというわけではな
い。この理由はまだ明らかでない。このレシチンの処置
について、アセチルコリン前駆物質の役割または高度の
不飽和に基づき提案された従来の論理的根拠は、このア
プローチの小さな部分しか説明しないようである（Herr
ing et al.,Biochim.Biophys.Acta 602,1（1980）,Shin
itzky and Henkart,Int.Rev.Cytol.60,121（1979））。

脂質の取り扱いにおいては、次のような幾つかの前提条
件がある：（１）脂質の一定の部分により流動化がなされ、残り
の部分は膜の中への移送と吸収を促進する必須の担体と
して機能する。

（２）活性成分と担体成分の組合体は、所定の物理化
学的特性、例えば、表面密度や電荷の分布、を有する。

（３）これらの特性は、移送、解体、解放（荷下し）
または交換に最適である。移送は細胞表面に、解体、荷
下しまたは交換は相互作用部位に関連する。

（４）種々の脂質成分は相乗的に作用でき、上記の機
能を発揮する。

（５）不飽和度は最適である。すなわち、必要な流動
特性を有し（完全な飽和からモノ不飽和への変化は流動
化能力にとって最も重要であり、モノ不飽和からポリ不
飽和への変化は流動化能力をたいして変化させない（Hu
bbel and McConnell,J.Am.Chem.Soc.93,314（1971）;st
ubbs et al.,Biochemistry 20,4257（1981））、しかも
不飽和過ぎず酸化されにくい。

〔発明が解決しようとする課題〕

膜脂質のアンバランスにより種々の障害が引き起こされ
るなどの問題点があった。

この発明は上記の問題点を解決するためになされたもの
で、膜流動化により種々の障害を改善する製薬学的組成
物を提供することを目的とする。

本発明の他の目的は以下の説明により明らかとなるであ
ろう。

〔課題を解決するための手段〕

本発明は、卵黄から誘導され、本質的に脂質からなりか
つ膜流動化の高い潜在能力によって特徴づけられ、免疫
応答改善作用、禁断症候軽減作用、脳細胞の若がえり作
用、サイコシス症候の軽減作用および血圧低下作用を有
する生理用活性なアセトン可溶性脂質フラクション（A
L）であって、40〜80重量％のグリセリド類、３〜５重
量％のコレステロース、10〜30重量％のレシチン（ホス
フアチジルコリン）、５〜15重量％のホスフアチジルエ
タノールアミンおよび２〜５重量％の負に帯電したリン
脂質を含有し、不飽和脂肪酸対飽和脂肪酸の比が少なく
とも1:1であるアセトン可溶性脂質フラクションを活性
成分として製薬学的に有効量含む製薬学的組成物であ
る。

本発明によれば、卵黄から、脂質および好ましくは脂質
抽出物を、少なくとも２つのフラクションに分別するこ
とからなり、これらのフラクションの１つは、本発明の
目的に使用し、他の調製物より実質的に高い膜流動化の
潜在能力を有する。このフラクションは、以後“アセト
ン可溶性活性脂質”（AL）と呼び、そして膜流動化の高
い潜在能力によって特徴づけられる新規な組成物であ
る。

本発明は、哺乳動物およびまたは人間における種々の病
気および異常状態におけるALの使用、およびこのような
処置のための製薬学的組成物に関する。

本発明の組成物による治療に有効な疾患には次のものが
ある：（１）老化および老衰の種々の症候（例、精神機能お
よびリビドの損失、細菌汚染に対する発病性の増大な
ど）、（２）免疫系の異機能、（３）アレルギー、（４）精神障害、例えば、躁鬱および精神分裂病な
ど、（５）遅鈍（６）神経学的障害、例えば、アルツハイマー病、パ
ーキンソン症候群、晩発性運動障害、ハンチングトン舞
踏病、しんせん、運動失調、てんかんなど、（７）高脂血状態、例えば、高血圧、アテローム性動
脈硬化症、胆石、硬変症など、（８）アルコールおよび他の薬物の禁断症候および肥
満症など、（９）薬物に対する耐性の予防。

さらに本発明のALは、不妊症、ウイルスおよび微生物の
汚染の処置、および組織の抗原性を低下させ拒絶反応を
抑え移植を促進するために、使用できる。

さらに、他の脂質調製物に比べて、膜の流動化能力が実
質的に増大したALの有効量を投与する（生体内または生
体外に）ことにより、前述の障害を処置できる。

分別は、卵黄からの脂質抽出物を適当な溶媒中に溶か
し、溶媒を蒸発してほとんど完全に乾固し、そして有機
溶媒の添加により溶けた脂質のあるフラクションを沈殿
させ、そして所望のフラクションを上澄み液から溶媒の
蒸発により回収することによって実施する。このフラク
ションに0.5重量％のトコフェロールまたは他の適当な
酸化防止剤を補充する。あるいは、分別は、卵黄を適当
な溶媒で処理し、沈殿を取り出し、次いでそれを再び適
当な溶媒中に溶かし、そして上澄み液を回収することに
よって実施する。次いで、所望のフラクションは、溶媒
を蒸発することにより、あるいは冷時沈殿させ、次いで
微量の溶媒を蒸発することにより、上澄み液から回収す
る。このフラクションにも、0.5重量％のトコフェロー
ルまたは他の適当な酸化防止剤を補充する。

本発明の３つの好ましい実施態様は、次のとおりであ
る。

（１）卵黄からの脂質抽出物（例、粗製レシチン）を
クロロホルムに溶かし、蒸発してほとんど乾固し、アセ
トンを加えて脂質のある部分を沈殿させ、そして上澄み
を取り出し、蒸発し、そして溶媒を除去して完全に乾固
し、未処理の卵黄の初期量の約５重量％のフラクション
を残し、これが所望のフラクションALである。トコフェ
ロールのような酸化防止剤を、約0.5％（W/W）の最終濃
度に加える。このフラクション（製造１）の脂質の組成
分析を、表１に記載する。

（２）卵黄を、まずアセトンと混合して過剰の望まし
くない脂質を除去する。次いで、沈殿をアセトンで再び
処理し、上澄み液を集め、蒸発して完全に乾固し、未処
理の卵黄の初期量の約10〜15重量％のフラクションを残
し、これが所望のフラクションALである。トコフェロー
ルのような酸化防止剤を、約0.5重量％の最終濃度に加
える。このフラクション（製造２）の脂質の組成分析
を、同様に表１に記載する。使用できる他の溶媒の例
は、次のとおりである：クロロホルム−メタノール1:1V
/V、ヘキサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、
エタノール、メタノール、ジエチルエーテルおよびジエ
チルケトン。

（３）卵黄を、まずアセトンと混合し、過剰の望まし
くない脂質を除去する。次いで、沈殿をアセトンで再び
処理し、上澄み液を集め０℃に冷却すると、未処理の卵
黄の初期量の約10〜15重量％の量の所望のフラクション
（AL）が沈殿し、そしてこれを集める。トコフェロール
のような酸化防止剤を、約0.5重量％の最終濃度に加え
る。このフラクション（製造３）の脂質の組成分析を、
表１および表２に記載する。使用できる溶媒の例は、次
のとおりである：クロロホルム−メタノール1:1V/V、ヘ
キサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、エタノ
ール、メタノール、ジエチルエーテルおよびジエチルケ
トン。

〔実施例〕

実施例１ 10gの量の乾燥した卵黄をまず50mlのアセトンと混合す
ることによって、脂質を抽出する。沈殿を取り出し、次
いで50mlのクロロホルムで処理し、そして脂質抽出物を
含有する溶液を集める。次いで、クロロホルムを減圧下
に除去して、ほとんど乾固する。50mlの量の冷（５〜10
℃）アセトンを加え、この結果、脂質の大部分は１〜３
時間以内に沈殿する。この沈殿を廃棄し、上澄み液を集
め、アセトンを完全に蒸発させる。0.8〜1.2gの活性脂
質（AL）の所望のフラクションが残る。このフラクショ
ンに、0.5重量％のトコフェロールを補充する。この調
製物（＃１）の組成を表１に記載する。

実施例２ ALを得る他の方法は、以下のとおりである。

10mlの新鮮な卵黄を30〜40mlのアセトンと混合し、室温
で５分間かきまぜる。沈殿を集め、30〜40mlの新しいア
セトンで40〜45℃において30〜60分間抽出する。上澄み
液を集め、蒸発して完全に乾固する。1.0〜1.5gの活性
脂質（AL）の所望のフラクションが残る。このフラクシ
ョンに、0.5％のトコフェロールを補充する。この調製
物（＃２）の組成も、表１に記載する。

実施例３ ALを得るさらに他の方法は以下のとおりである。

１体積の新鮮な卵黄を、1mg/mlのビタミンＥ（α−トコ
フェロールアセテート）を含有するアセトンの２〜３体
積と、室温において５分間混合する。固体物質を分離
し、２体積の新しいアセトンで40〜45℃において１時間
処理する。アセトン抽出液を固体残留物から、速い濾過
により分離し、−20℃に16時間冷却すると、活性脂質
（AL）が沈殿する。ALを速い濾過により分離し、エタノ
ールで洗浄し、よく乾燥する（真空下に）。この生成物
に0.5％のビタミンＥを補充する。収量は、100gの湿っ
た卵黄につき、10〜15gである。この調製物（＃３）の
組成も、表１に記載する。

さらに、調製物（＃３）（AL）とその構成成分（NL,PC,
PE）の脂肪酸組成を表２に示す。表２において、ALは活
性脂質である調製物（＃３）、NLは中性脂質、PCはホス
フアチジルコリン、PEはホスフアチジルエタノールアミ
ンである。表２は、例えば、調製物（＃３）のPCが、炭
素数16で二重結合が０の脂肪酸（16:0）を42.8％、炭素
数18で二重結合が０の脂肪酸（18:0）を13.5％、炭素数
18で二重結合が１の脂肪酸（18:1）を34.8％、炭素数18
で二重結合が２の脂肪酸（18:2）を8.9％からなること
を示している。また、ALの値は、表２に示す脂肪酸組成
の構成成分を含んだ全体の脂肪酸組成を示している。

以下に記載する試験例で使用したALは調製物（＃３）で
ある。

試験例１脂質流動化剤としてのALの活性は、次の実験により証明
される。マウスの脳膜（粗製のミトコンドリアのフラク
ション−Ｐ₂ｍ、マウスの前脳から調製した）を、3.5％
のポリビニルピロリドン（PVP）（0.2mg/ml）を含有す
る50ミリモルのトリス−HCl緩衝液pH7.4中で、脂質分散
液とともに、一定に振とうしながら室温で30分間培養し
た（Heron,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.77,7463（1
980））。脂質の最終濃度は、1mgのＰ₂ｍ膜につき0.04m
gの脂質であった。次いで、この膜をよく洗浄し、そし
て脂質の微量粘度（）をShinitzky and Barenholz,Bi
ochim.Biophys.Acta 515,367（1978）に従い測定した。
コレステロールおよびリン脂質の含量を、それぞれ、Ba
rtlett,J.Biol.Chem.234,466（1959）およびBrown et a
l.,Anal.Chem.26,367（1954）に従い測定した。

表３から明らかなように、ALは、その流動化潜在能力に
おいて、すべての他の脂質より優れる。

また、表３から明らかなように、流動化はコレステロー
ルの抽出およびリン脂質の混入により達成される。

マウスの脾細胞を用いる同様な実験を実施した。これら
の細胞（10⁶/ml）を、3.5％のPVPを含有するリン酸塩緩
衝生理的食塩水（PBS）中で、脂質分散物（0.3mg/ml）
とともに、37℃において２時間培養した。脂質の最終濃
度は上記と同様に0.04mg/mlであった。次いでよく洗浄
した（Shinitzky et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76,5
313（1979））。結果を表４に要約する。

再び明らかなように、ALはその流動化能力においてホス
フアチジルコリン（PC）よりも非常に効力がある。

結果は、各々ALの異なるバッチを用いた、少なくとも10
の実験の平均値±標準偏差を表す。

結果は、各々ALの異なるバッチを用いた、少なくとも５
実験の平均値±標準偏差を表す。

前述のように、生体外の取り扱いに有用であることに加
えて、前記ALフラクションは、膜脂質の構造および動力
学が損傷を受けている状態を処置するため、温血哺乳動
物に投与される薬物の活性成分として使用できる。

このフラクションの有効量は患者の処置すべき状態およ
び要求とともに変化するが、温血哺乳動物に対する有効
量は１〜20g/患者／日程度である。このフラクション
は、生理的食塩水中の脂質懸濁液（10〜100mg/ml）の形
で静脈内に有利に投与される。

生体外の取り扱いについて、有効量は50〜200mg/10⁶細
胞/ml媒質程度である。このような生体外取り扱いは、
精子不妊症を処置し、組織の移植を促進し、あるいはワ
クチン注射に使用するためウイルスの感染を調節するた
めに使用できる。

試験例２モルヒネ耽溺マウスにおける禁断症候の減少雄のBalf/Cマウスの４つのグループに、モルヒネを皮下
注射した（40〜200mg/Kgを１日２回、８日間）。第９日
目に、各グループに（ａ）生理的食塩水（0.3ml）、
（ｂ）ジパルミトイルレシチン（合成の完全に飽和され
た膜硬化剤）、（ｃ）ALを腹腔内注射により、または
（ｄ）ALを植物に、投与した。腹腔内注射では、75mg/m
lの生理食塩中のジパルミトイルレシチンとALを0.3ml投
与した。植物はALのアルコール溶液と十分に混合し窒素
下で乾燥した。植物のALの最終含有量は６重量％であっ
た。各動物は平均2gの植物、すなわち120mgのALを食し
た。次いで、すべての４つのグループに2.5mg/Kgのナロ
キソン、すなわち禁断症候に陥ることが知られているモ
ルヒネ拮抗薬を注射した。次いで、これらの症候を観察
室において評価し、そして結果を表５に示す。

脳の異なる領域からのシナプス膜の微量粘度を、Shinit
zky and Barenholz,Biochim.Biophs.Acta 515,367（197
8）の方法により、ジフエニルヘキサトリエン（DPH）を
プローブとして用い、蛍光偏光により測定した。結果を
表５に記載し、そして結果は膜の微量粘度（）が慢性
的にモルヒネを摂取する間増加するという示唆と適合す
る。これは多分、薬物の流動化効果を補うためにC/PLが
増大するためであろう。同様な結果は、アルコール耽溺
について他の研究者が報告している（Johnson et al.,M
ol.Pharmacol.15,739（1979）:Chin and Goldstein,Sci
ence 196,684（1977））。

表５から明らかなように、禁断症候は、ジパルミトイル
レシチンにより悪化し（膜の微量粘度の増大を誘発す
る）、そしてAL−注射したときおよび食物に与えたとき
−により減少するかあるいはほとんど完全に排除され、
同時に膜粘度は低下する。

前述のように、慢性アルコール中毒もシナプス膜中のコ
レステロールを増大してアルコールの流動化作用を補
う。従って、アルコールの禁断症候もALにより処置に有
効である。

最後に、モルヒネおよび他の薬物に対する適応（すなわ
ち、耐性）のプロセスを膜中のC/PLモル比の増加を含む
ので、モルヒネなどのような薬物と組み合わせてALを投
与すると、耐性の発生を防止し、それゆえこのような薬
物の効力の低下を防止する。このアプローチは、例え
ば、痛みをやわらげるためにモルヒネを投与される末期
癌の患者の場合において、きわめて重要である。

表５の値は、４つの別々の実験からの平均値±S.E.M.を
表す。“n"は試験した動物の合計の数である。実験に使
用されていないマウス（ｎ＝20）からの海馬状隆起およ
び尾状核の微量粘度値（）は、それぞれ5.80±0.03お
よび6.10±0.05であった。

表中の１〜４の症状の値は以下のとおりである。

1.70回より多く前足を連続的に強くしんせんした動物の
百分率である。

2.軟らかい液状の糞便を伴う下痢した動物の百分率であ
る。

3.10回より多く身もだえた動物の百分率である。

4.5回より多く陰茎射精した動物の百分率である。

他の症候、例えば、後足で立つこと、身じまいするこ
と、鼻をすることなども、生理的食塩水またはジパルミ
トイルレシチンに比べて、ALのグループにおいては目立
たない。一般に、ALのグループはほとんどの時間非常に
静かでありかつ症候がより弱く、一方、ジパルミトイル
レシチンのグループはナロキソンを注射する前でさえ奇
妙でありかつ攻撃的であり、その後すべてのグループの
うち最もひどい症候を示した。

スチューデンドｔ−テストの有意レベル：（＊）−ｐ＜0.001,（）−ｐ＜0.025, （＋）−ｐ＜0.05,（＃）−ｐ＜0.1, （n.s.）−有意でない試験例３年とった動物の脳膜の微量粘度のAL植物による逆転マウスの４つのグループを、この実験において、古典的
Ｔ定規設計において使用した。２つのグループは若いマ
ウス（２〜３か月）から成り、そして２つのグループは
年とったマウス（24〜27か月）から成り、それらをALを
加えた食物〔プリナ・チョウ（Purina Chow）と混合し
て〕で10〜20日間処置した。ここで使用したAL含有食物
は試験例２で使用したAL含有食物と同様に製造されたも
のである。プリナ・チョウのALの含有量は６重量％であ
った。各動物は１日当たり平均2gのプリナ・チョウ、す
なわち120mgのALを食した。結果を表６に示す。

データは、各グループが４〜６匹の動物を含む、４〜５
の別々の実験の平均値±標準偏差を表す。カッコ内の数
値は、２つのプールした動物の脳から調製した試料につ
いて反復実施した測定の数を表す。

＊−ｐ＜0.01 若い（対照）と比較した年とった（対
照）＋−ｐ＜0.01 年とった（対照）と比較した若い（AL） n.s.−有意でない＊＊−若い（対照）に比較した若い（AL）明らかなように、ALは年とった動物からの種々の調製
物、ことにSPM（シナプス血漿膜）およびミトコンドリ
アの過度の粘度を逆転したが、これに対し若い動物から
取ったものはALの処置によりまったく影響を受けなかっ
た。同様な“若返り”効果は、年とった動物の脳中のセ
ロチニン受容体のような受容体の結合特性およびタンパ
ク質のリン酸化（Hershkowitz et al.,Progressin Brai
n Research,（脳研究における進歩）Elsevier-North Ho
lland,印刷中）においても見出されたが、若い動物のAL
処置の効果は観察されなかった。この事実が意味するよ
うに、正常の膜微量粘度をもつ動物において、脂質の投
与（例、AL処置）は、効率よい調製プロセスのため、無
効であった。しかしながら、年とった動物においては、
“類似粘性適合”（“homeoviscous adaptation"）（Si
nensky,J.Cell.Biol.,85,166（1980））が損傷を受け
る。このことが示唆するように、過剰のALは他の脂質の
変化により除去されるので、ALの過度の投与の危険は存
在しない。この結果の臨床的意味は、明らかである。

動物の処置（食事による）のすべての場合において、認
識されうる毒性や副作用は観測されなかった。

最後に、膜結合リボソームによるタンパク質合成は年と
った動物の小脳において実質的に減少したことが測定さ
れた。これらの変化は、多分、膜の組成および構造が変
化したためであると思われる。

実験によれば、AL（食物中）による年とった動物の処置
は、これらの動物の小脳におけるタンパク質合成を非特
異的に一般に増加させた。

試験例４免疫機能へのAL効果細菌の感染に対して作用する主な免疫機構は、マクロフ
ァージによる細菌の摂取である。ALの生体外処置後、こ
のプロセスを追跡した。代表的実験の結果を表７に示
す。

年とった供給体または若い供給体からの全血（ヘパリン
添加した）へ、ALを400μg/mlの最終濃度に加えた。次
いで、血液を37℃で２時間まで培養した。次いで、供給
体からの処置したまたは処置しない全血の0.9mlを、PBS
中の黄色ブドウ球菌の0.6O.D.（620nm）懸濁液の1:1000
稀釈物の0.1mlに加えた。示した時間において、10μｌ
の上の血液混合物を、60℃に維持した5.5.3.寒天に加え
た。この寒天−血液混合物を高速度でかきまぜ、ペトリ
皿に注ぎ入れ、冷却した。これらの板を35℃で一夜培養
し、次の朝コロニーを数えた（Kensel,et al.,J.Infec
t.Dis.131,584（1975））。

コロニーの数は、生存している細菌の数を示す。明らか
なように、生存しているコロニーの数は若い供給体から
の血液の場合において非常に減少、有効な免疫応答を示
した。年とった供給体からの血液の場合において、生存
しているコロニーの数はわずかに減少しただけであり、
損傷した免疫反応を示した。ALは機能の回復を示し、免
疫システムの“若返り”効果を有していた。臨床的意義
は明らかである。

試験例５生体外におけるヒトのリンパ球へのALの効果年とった男性（70〜75歳）からの末梢血リンパ球を、古
典的な混合したリンパ球測定（MLC）において、若い人
（30〜40歳）からの照射したリンパ球と混合した。リン
パ球の感作を、³Ｈ−サイミジンの混入により評価し
た。0.2mg/mlのALの存在下に、年とった男性からのリン
パ球によるサイミジンの組み込みは70〜300％増加し、
免疫学的応答の著しい増加を示した。

試験例６高血圧のラットへのALの効果自発的に高血圧の雌のラット（SHR）を、チャールス・
リバース（Charles Rivers,N.Y.）から入手し、５か月
の年令になるまで局所的に飼育した。10匹のラットから
成る１つのグループに、５％（w/w）のALを補充した食
事を３週間与えた。照射グループ（９匹のラット）に、
同様の方法であるが、ALを補充しない食事を与えた。次
いで、平均の動脈の血圧（M.A.B.P.）を測定した。対照
グループにおいて、M.A.B.P.は125±16（mmHg）であっ
たが、これに対してALで処置した動物のそれは110±12
（mmHg）であった。ALは高血圧のラットMABPを有意に
（ｐ＜0.05）減少した。同時に、ALは小脳から採取した
Ｐ₂ｍ膜の微量粘度を6.5±0.2ポアズ（25℃）から5.5±
0.2ポアズに減少した。心搏または体重において２つの
グループ間に有意差は存在しなかった。

試験例７ ALの他の効果予備実験では、ラットにおけるアンフェタミン誘発サイ
コシス（psychosis）の種々の症候は、ALによって軽減
されるかあるいは完全に排除された（G.Ellison,Brain
Research Ins.,UCLAと共同研究）。

実施例４活性脂質の製造手順 A.材料新鮮な大きいニワトリの卵、蒸留したアセトン；エタノ
ール中の0.1g/mlのトコフェロールアセテート（ビタミ
ンＥ）、水中の0.1モルのMgCl₂、0.1モルのCaCl₂（塩溶
液）。

B.手順（１）１の卵黄（ほぼ６個の卵）を2lの蒸留したア
セトン、5mlのビタミンＥと室温において５分間混合す
る。沈殿を焼結ガラス漏斗上に集める。

（２）沈殿を、サーモスタット制御の浴中で45℃に予
熱した2lのアセトンに移す。60mlの塩溶液を加え、45℃
において１時間よく混合する。焼結ガラスの漏斗に急速
に通して濾過し、液体を集める。

（３）この液体をアセトン−ドライアイス冷却浴（−
60℃〜−70℃）へ移すと、沈殿が形成する。冷時におい
て３時間後、遠い濾過により沈殿を集める。リン脂質対
グリセリドの重量比は、約1:3であるべきである。これ
はリン酸塩分析により測定し、各生産規模についてチェ
ックしなければならない（コメント参照）。

（４）沈殿を加温により融解し、蒸発器の容器へ入
れ、5mlのビタミンＥを加える。このスラッジを減圧下
に蒸発して完全に乾固し、微量のアセトンも残らないよ
うにする。生成物を褐色容器へ移す。収量は、約1g/卵
である。

（５）リン酸塩を分析して（下記参照）26倍すると、
リン脂質の概算重量が得られる。これは総重量の25〜50
％であろう。

C.コメント説明した手順は実験規模のものであり、大規模の実施に
は多少の変更が必要であろう。主な変更は、アセトンの
体積、加えた塩の体積、冷却の装備および冷却期間であ
る。さらに、20〜30％のリン脂質が最適であることがわ
かったが、特別の目的には異なるレベルのリン脂質が必
要である。現在、最終のリン脂質の含量を５％〜75％の
間で変化させることについての技術的情報をわれわれは
有している。原理的には、リン脂質の含量が低いバッチ
と高いバッチとを混合することにより、中間濃度を得る
ことができる。

D.分析（１）リン脂質：これは、Bottcher et al.,Anal Che
m.Acta 24 203（1961）を変更したBartlett J.Biol.Che
m.234 466（1959）によるリン測定法で測定する。リン
のモルは、リン脂質のモルに対応する。リン脂質の平均
分子量は800であるので、リン脂質の重量は分析で得ら
れるリンの重量の26倍である。

（２）グリセリド：この分析は容易ではない。しか
し、ALの90％以上がリン脂質グリセリドから構成され、
そして後者はリン脂質の含量によって推定できるので、
実際には必要ではない。この方法は、Kates,Techniques
of Lipidology p 373-374に記載されている。

（３）分散性:ALの主な物理的特性は、その均質な水
分散液を形成する能力である。500mgのALを5mlの水中に
溶かし、そして超音波装備した浴中に入れ、３分間超音
波処理する。少なくとも数日間安定であるミルク状懸濁
液が形成する。このような分散液は、静脈内注射用材料
のベースとなる。

（４）生物学的効力:ALはミトゲン（例、Con A）への
白血球の応答性を増大する。これは生体内または生体外
のいずれにおいても観察できる。現在、次の生体内テス
トが最も好ましい。血液を生まれてから５〜８か月のウ
サギから抜き取り、直ちにミトゲン刺激測定に使用す
る。血液を抜き取った直後に、2mlの生理的食塩水中の2
00mgのALを超音波処理し、同じウサギへ静脈内注射す
る。24時間後、血液を抜き出し、そしてミトゲンの応答
を再び測定する。ミトゲン応答が２倍以上増加すればAL
バッチは有効である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者デイビツド・サミユエルイスラエル国レホボツト・ワイズマン・インステイチユ−ト・メオノツト・シヤイン（番地なし) (56)参考文献ＣａｎａｄｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，49 （1971）Ｐ．51−60 ＣａｎａｄｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，43 （1965）Ｐ．1677〜1686

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】卵黄から誘導され、本質的に脂質からなり
かつ膜流動化の高い潜在能力によって特徴づけられ、免
疫応答改善作用、禁断症候軽減作用、脳細胞の若がえり
作用、サイコシス症候の軽減作用および血圧低下作用を
有する生理用活性なアセトン可溶性脂質フラクション
（AL）であって、40〜80重量％のグリセリド類、３〜５
重量％のコレステロール、10〜30重量％のレシチン（ホ
スフアチジルコリン）、５〜15重量％のホスフアチジル
エタノールアミンおよび２〜５重量％の負に帯電したリ
ン脂質を含有し、不飽和脂肪酸対飽和脂肪酸の比が少な
くとも1:1であるアセトン可溶性脂質フラクションを活
性成分として製薬学的に有効量含む製薬学的組成物。
【請求項２】アセトン可溶性脂質フラクションが60〜70
重量％のグリセリド類、３〜５重量％のコレステロー
ス、15〜25重量％のレシチン（ホスフアチジルコリ
ン）、５〜10重量％のホスフアチジルエタノールアミン
および２〜３重量％の負に帯電したリン脂質を含有し、
不飽和脂肪酸対飽和脂肪酸の比が少なくとも1:1である
特許請求の範囲第１項記載の製薬学的組成物。
【請求項３】脂質の脂肪酸組成が、パルミチン酸35〜45
％、オレイン酸35〜45％、リノレイン酸５〜10％、ステ
アリン酸５〜７％、パルミトレイン酸２〜３％、アラキ
ドン酸0.2〜１％である特許請求の範囲第１項または第
２項記載の製薬学的組成物。
【請求項４】不飽和脂肪酸対飽和脂肪酸の比が、少なく
とも2:1である特許請求の範囲第１項、第２項、第３項
のいずれか１項記載の製薬学的組成物。
【請求項５】添加剤として有効量の生理学的に許容され
うる酸化防止剤を含有する特許請求の範囲第１項から第
４項のいずれか１項記載の製薬学的組成物。
【請求項６】酸化防止剤として、0.2〜２重量％のトコ
フェロールを含有する特許請求の範囲第５項記載の製薬
学的組成物。
【請求項７】静脈内注射用の生理的食塩水中の脂質懸濁
液（10〜100mg/ml）の形である特許請求の範囲第１項か
ら第６項のいずれか１項記載の製薬学的組成物。
【請求項８】アセトン可溶性脂質フラクション（AL）が
単位投与形態当たり１〜20gの量である、経口的投与の
ための特許請求の範囲第１項から第６項のいずれか１項
記載の製薬学的組成物。
【請求項９】アセトン可溶性脂質フラクション（AL）が
生体外処置のため、0.05〜2mg/mlの量である特許請求の
範囲第１項から第６項のいずれか１項記載の製薬学的組
成物。