JPH088864B2 - ルシフェラーゼ - Google Patents
ルシフェラーゼInfo
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、酸素分子によるルシフェリンの酸化触媒す
る、純化されたルシフェラーゼに関する。
る、純化されたルシフェラーゼに関する。
従来、ヘイケボタル（Luciola lateralis）由来のル
シフェラーゼは、不安定であるために精製に成功してい
ないのが実情である〔蛋白質、核酸、酸素、第32巻、第
10号、第44〜59頁、特に第47頁（第1234〜1249頁、特に
1237頁）（1987）〕。
シフェラーゼは、不安定であるために精製に成功してい
ないのが実情である〔蛋白質、核酸、酸素、第32巻、第
10号、第44〜59頁、特に第47頁（第1234〜1249頁、特に
1237頁）（1987）〕。
ルシフェラーゼは、ATPの定量等に極めて有効に用い
ることができる。
ることができる。
本発明はヘイケボタル由来のルシフェラーゼを提供す
ることを目的とする。
ることを目的とする。
そこで、本発明者等は、このような実情に鑑み鋭意検
討した結果、ヘイケボタル尾部からルシフェラーゼを単
離し、純化することに成功し、本発明を完成した。
討した結果、ヘイケボタル尾部からルシフェラーゼを単
離し、純化することに成功し、本発明を完成した。
すなわち本発明は、ヘイケボタル（Luciola laterali
s）から純化されたルシフェラーゼであって、下記の理
化学的性質： 作 用： 下記の酵素反応式で示されるように酸素分子によるル
シフェリンの酸化を触媒する酵素である。
s）から純化されたルシフェラーゼであって、下記の理
化学的性質： 作 用： 下記の酵素反応式で示されるように酸素分子によるル
シフェリンの酸化を触媒する酵素である。
ルシフェリン＋ATP＋O2→ オキシルシフェリン＋AMP＋ピロリン酸＋CO2＋光 基質特異性： ADP、CTP、UTP及びGTPには作用しない。
至適pH及び安定pH範囲： 至適pHは、ルシフェリンを基質とした場合、pH7.5〜
9.5である（第１図参照）。
9.5である（第１図参照）。
安定pH範囲は、pH6.0〜10.5である（第２図参照）。
作用適温の範囲： ０〜50℃である。
pH、温度等による失活の条件： pH5.0以下及びpH12.0以上で４時間後完全に失活す
る。
る。
pH7.8において、温度55℃、15分間の熱処理により完
全に失活する。
全に失活する。
熱安定性： 温度40℃、15分間の処理で78.3％の残存酵素活性を有
し、温度50℃、８分間の処理でも６％の残存酵素活性を
有する。
し、温度50℃、８分間の処理でも６％の残存酵素活性を
有する。
を有し、かつ以下の精製工程： a.ヘイケボタルルシフェラーゼの粗酵素溶液から30〜70
％の硫酸アンモニウム飽和で形成した沈殿を、1mMエチ
レンジアミン４酢酸２ナトリウム及び硫酸アンモニウム
を10％飽和となるように25mMトリス（ヒドロキシ）アミ
ノメタン−塩酸緩衝液,pH＝7.8に添加することによって
調製した溶液中に溶解すること； b.該溶解した沈殿溶液をゲル濾過クロマトグラフィーに
供し、活性区分を回収すること； c.該活性区分を0.1M塩化ナトリウムおよび10％（V/V）
エチレングリコールを、10mMリン酸１水素ナトリウム−
リン酸２水素ナトリウム溶液に添加することによって調
製した緩衝液に対して透析すること； d.10mMリン酸緩衝液で平衡化したヒドロキシ−アパタイ
トカラム上に該透析物質を吸着すること； e.該ヒドロキシ−アパタイトカラムから10mM〜100mMの
リン酸緩衝液,pH7.5によるリニアグラジエントによって
溶出されたルシフェラーゼ活性を有する区分を採取する
こと； を行うことにより得られる。
％の硫酸アンモニウム飽和で形成した沈殿を、1mMエチ
レンジアミン４酢酸２ナトリウム及び硫酸アンモニウム
を10％飽和となるように25mMトリス（ヒドロキシ）アミ
ノメタン−塩酸緩衝液,pH＝7.8に添加することによって
調製した溶液中に溶解すること； b.該溶解した沈殿溶液をゲル濾過クロマトグラフィーに
供し、活性区分を回収すること； c.該活性区分を0.1M塩化ナトリウムおよび10％（V/V）
エチレングリコールを、10mMリン酸１水素ナトリウム−
リン酸２水素ナトリウム溶液に添加することによって調
製した緩衝液に対して透析すること； d.10mMリン酸緩衝液で平衡化したヒドロキシ−アパタイ
トカラム上に該透析物質を吸着すること； e.該ヒドロキシ−アパタイトカラムから10mM〜100mMの
リン酸緩衝液,pH7.5によるリニアグラジエントによって
溶出されたルシフェラーゼ活性を有する区分を採取する
こと； を行うことにより得られる。
以下、本発明を詳細に説明する。
先ず、本酵素の理化学的性質を以下に記載する。
作 用： 下記の酵素反応式で示されるように酸素分子によるル
シフェリンの酸化を触媒する酵素である。
シフェリンの酸化を触媒する酵素である。
基質特異性： ADP、CTP、UTP及びGTPには作用しない。
至適pH及び安定pH範囲： 至適pHは、ルシフェリンを基質とし、25mMグリシルグ
リシンのpHをpH6.5〜11.5迄変化させ、温度30℃で反応
させ、20秒間発光量（フォトン数）を測定した場合、第
１図に示す如くpH7.5〜9.5であり、また安定pH範囲は、
ルシフェリンを含有する緩衝液（pH4.6〜8.0:25mMリン
酸緩衝液、pH8.0〜11.5:25mMグリシン・塩化ナトリウム
−水酸化ナトリウム緩衝液をそれぞれ使用。なお、それ
ぞれの緩衝液には10％飽和となる如く硫酸アンモニウム
を添加したものである。）に酵素を添加し、温度０℃で
４時間作用させた場合、第２図に示す如く、6.0〜10.5
である。なお、第２図において、 それぞれ25mMリン酸緩衝液、及び25mMグリシン・塩化ナ
トリウム−水酸化ナトリウム緩衝液を使用した場合の活
性を示す。
リシンのpHをpH6.5〜11.5迄変化させ、温度30℃で反応
させ、20秒間発光量（フォトン数）を測定した場合、第
１図に示す如くpH7.5〜9.5であり、また安定pH範囲は、
ルシフェリンを含有する緩衝液（pH4.6〜8.0:25mMリン
酸緩衝液、pH8.0〜11.5:25mMグリシン・塩化ナトリウム
−水酸化ナトリウム緩衝液をそれぞれ使用。なお、それ
ぞれの緩衝液には10％飽和となる如く硫酸アンモニウム
を添加したものである。）に酵素を添加し、温度０℃で
４時間作用させた場合、第２図に示す如く、6.0〜10.5
である。なお、第２図において、 それぞれ25mMリン酸緩衝液、及び25mMグリシン・塩化ナ
トリウム−水酸化ナトリウム緩衝液を使用した場合の活
性を示す。
力価の測定法： 25mMグリシルグリシン（pH7.8）8ml、硫酸マグネシウ
ム溶液〔25mMグリシルグリシン（pH7.8）に硫酸マグネ
シウムを0.1Mとなる如く添加した溶液〕0.5ml及びルシ
フェリン溶液〔25mMグリシルグリシン（pH7.8）にルシ
フェリンを1mMとなる如く添加した溶液〕0.8mlを混合し
てルシフェリン混合液を調製する。
ム溶液〔25mMグリシルグリシン（pH7.8）に硫酸マグネ
シウムを0.1Mとなる如く添加した溶液〕0.5ml及びルシ
フェリン溶液〔25mMグリシルグリシン（pH7.8）にルシ
フェリンを1mMとなる如く添加した溶液〕0.8mlを混合し
てルシフェリン混合液を調製する。
このようにして得たルシフェリン混合液400μ及び
測定するルシフェラーゼ10μを混合したものに、ATP
溶液〔25mMグリシルグリシン（pH7.8）にATPを10mMとな
る如く添加したもの。〕80μを注入すると同時に、ル
ミノメーター（アロカ社製、ルミネッセンスリーダ BL
R−201）により発生するフォトン数を20秒間積算して求
める。
測定するルシフェラーゼ10μを混合したものに、ATP
溶液〔25mMグリシルグリシン（pH7.8）にATPを10mMとな
る如く添加したもの。〕80μを注入すると同時に、ル
ミノメーター（アロカ社製、ルミネッセンスリーダ BL
R−201）により発生するフォトン数を20秒間積算して求
める。
作用適温の範囲： pH7.8のもとに、各温度で反応させ20秒間発光量（フ
ォトン数）を測定した場合、０〜50℃の範囲内にある。
ォトン数）を測定した場合、０〜50℃の範囲内にある。
pH、温度等による失活の条件： （イ）pHによる失活の条件 pH5.0以下及びpH12.0以上で４時間後完全に失活す
る。
る。
（ロ）温度による失活の条件 pH7.8において、温度55℃、15分間の熱処理により完
全に失活する。
全に失活する。
耐熱性： 精製した本酵素100キロカウント（Kcount）含有する
酵素液100μ〔10％（V/V）エチレングリコール、0.1M
NaCl及び0.2％（W/V）アルブミンを含有する60mMリン
酸緩衝液（pH7.5）〕を、温度40℃で15、30及び60分間
保持して残存する酵素活性を測定した結果を、第１表に
示した。
酵素液100μ〔10％（V/V）エチレングリコール、0.1M
NaCl及び0.2％（W/V）アルブミンを含有する60mMリン
酸緩衝液（pH7.5）〕を、温度40℃で15、30及び60分間
保持して残存する酵素活性を測定した結果を、第１表に
示した。
なお、対照としてゲンジボタル及びアメリカホタルの
ルシフェラーゼについても上記と同様にして残存酵素活
性を測定した結果を合せて第１表に示した。
ルシフェラーゼについても上記と同様にして残存酵素活
性を測定した結果を合せて第１表に示した。
上表より明らかな如く、本発明は、対照に比し著しく
耐熱性を有するルシフェラーゼであることが判る。
耐熱性を有するルシフェラーゼであることが判る。
次に、本酵素を製造するための具体的手段を以下に述
べる。
べる。
本酵素を製造する方法としては、如何なる方法でも良
く、例えば、以下の方法が挙げられる。
く、例えば、以下の方法が挙げられる。
本発明に用いられるヘイケボタルとしては、自然界よ
り採集したもの、あるいは人工的に養殖したもの等如何
なるものでもよく、そして、ヘイケボタル尾部には、ル
シフェラーゼが多量に存在するためにヘイケボタル尾部
はルシフェラーゼ分離源として好適である。
り採集したもの、あるいは人工的に養殖したもの等如何
なるものでもよく、そして、ヘイケボタル尾部には、ル
シフェラーゼが多量に存在するためにヘイケボタル尾部
はルシフェラーゼ分離源として好適である。
そして、緩衝液に、ヘイケボタルを添加して粉砕し、
粉砕物を得る。
粉砕物を得る。
緩衝液としては、ルシフェラーゼを失活させるもので
なければ、如何なるものでもよく、例えば、トリス（ヒ
ドロキシ）アミノメタン−塩酸緩衝液、グリシン・塩化
ナトリウム−水酸化ナトリウム緩衝液、リン酸緩衝液等
にそれぞれ10％飽和となる如く硫酸アンモニウムを添加
したもの等が挙げられる。
なければ、如何なるものでもよく、例えば、トリス（ヒ
ドロキシ）アミノメタン−塩酸緩衝液、グリシン・塩化
ナトリウム−水酸化ナトリウム緩衝液、リン酸緩衝液等
にそれぞれ10％飽和となる如く硫酸アンモニウムを添加
したもの等が挙げられる。
粉砕手段としては、乳鉢及び乳棒を用いる方法、ホモ
ゲナイザー、ワーリングブレンダー、フレンチプレス等
を用いる方法等が挙げられる。
ゲナイザー、ワーリングブレンダー、フレンチプレス等
を用いる方法等が挙げられる。
次いで、粉砕物より通常の遠心分離あるいは濾過処理
等により残渣を除去して、粗酵素液を得るか、これに必
要により凍結乾燥法、アルコール沈澱法、アセトン沈澱
法などを適宜選択して実施することにより粗酵素粉末を
得る。
等により残渣を除去して、粗酵素液を得るか、これに必
要により凍結乾燥法、アルコール沈澱法、アセトン沈澱
法などを適宜選択して実施することにより粗酵素粉末を
得る。
上記粗酵素液もしくは粗酵素粉末よりさらに精製酵素
標品を得るには、例えばセファデックス、ウルトロゲル
もしくはバイオゲル等を用いるゲル濾過法、イオン交換
体を用いる吸着溶出法、ポリアクリルアミドゲル等を用
いる電気泳動法、ヒドロキシアパタイトを用いる吸着溶
出法、蔗糖密度勾配遠心法等の沈降法、アフィニティク
ロマト法、分子ふるい膜もしくは中空糸膜等を用いる分
画法等を適宜選択し、組合わせて実施することにより、
精製された酵素標品を得ることが出来る。
標品を得るには、例えばセファデックス、ウルトロゲル
もしくはバイオゲル等を用いるゲル濾過法、イオン交換
体を用いる吸着溶出法、ポリアクリルアミドゲル等を用
いる電気泳動法、ヒドロキシアパタイトを用いる吸着溶
出法、蔗糖密度勾配遠心法等の沈降法、アフィニティク
ロマト法、分子ふるい膜もしくは中空糸膜等を用いる分
画法等を適宜選択し、組合わせて実施することにより、
精製された酵素標品を得ることが出来る。
次に、本発明を実施例を挙げて更に詳細に説明する。
実施例 25mMトリス（ヒドロキシ）アミノメタン−塩酸緩衝液
に、1mMエチレンジアミン４酢酸２ナトリウム及び2mMフ
ェニルメチルスルフォニルフルオリドを添加し、更に硫
酸アンモニウムを10％飽和となる如く添加して得た混液
（pH7.8）15mlに、ヘイケボタル〔（株）西武百貨店よ
り購入〕の尾部200匹分を添加し、ヒスコトロン
〔（株）日音医理科器械製作所製〕を用いて破壊したも
のを、12,000r.p.m.で20分間遠心分離処理し、上清（粗
酵素溶液）14.5mlを得た。
に、1mMエチレンジアミン４酢酸２ナトリウム及び2mMフ
ェニルメチルスルフォニルフルオリドを添加し、更に硫
酸アンモニウムを10％飽和となる如く添加して得た混液
（pH7.8）15mlに、ヘイケボタル〔（株）西武百貨店よ
り購入〕の尾部200匹分を添加し、ヒスコトロン
〔（株）日音医理科器械製作所製〕を用いて破壊したも
のを、12,000r.p.m.で20分間遠心分離処理し、上清（粗
酵素溶液）14.5mlを得た。
このようにして得た粗酵素溶液を常法により硫化アン
モニウムを用いて塩析し、30％〜70％飽和で生成した沈
澱を30,000r.p.m.で10分間遠心分離処理し、その沈澱を
25mM混合液〔少量の25mMトリス（ヒドロキシ）アミノメ
タン−塩酸緩衝液に、1mMエチレンジアミン４酢酸２ナ
トリウム及び10％飽和となる如く硫酸アンモニウムを添
加して得た溶液（pH7.8）〕に溶解させて溶液を得た。
モニウムを用いて塩析し、30％〜70％飽和で生成した沈
澱を30,000r.p.m.で10分間遠心分離処理し、その沈澱を
25mM混合液〔少量の25mMトリス（ヒドロキシ）アミノメ
タン−塩酸緩衝液に、1mMエチレンジアミン４酢酸２ナ
トリウム及び10％飽和となる如く硫酸アンモニウムを添
加して得た溶液（pH7.8）〕に溶解させて溶液を得た。
次いで、この溶液を、上記25mM混合液で平衡化された
ウルトロゲル（Ultrogel）AcA34（LKB社製）カラム中を
通過させてゲル濾過クロマトグラフィーを行い活性区分
を得た。
ウルトロゲル（Ultrogel）AcA34（LKB社製）カラム中を
通過させてゲル濾過クロマトグラフィーを行い活性区分
を得た。
このようにして得た区分を、リン酸緩衝液〔10mMリン
酸１水素ナトリウム−リン酸２水素ナトリウム溶液に、
0.1M塩化ナトリウム及びエチレングリコール10％（V/
V）を添加した緩衝液〕を用いて透析を行い、得られた
溶液を、10mMリン酸緩衝液で平衡化されたヒドロキシ−
アパタイトHPLC（東洋曹達工業社製、TSKgel HA−100
0）カラムに吸着させ、10〜100mM迄のリン酸緩衝液（pH
7.5）によるリニアグラジエント（Liner Gradient）溶
出を行うことにより純化されたヘイケボタル由来のルシ
フェラーゼ活性区分180μ〔酵素活性:2.4×102キロカ
ウント〕を得た。
酸１水素ナトリウム−リン酸２水素ナトリウム溶液に、
0.1M塩化ナトリウム及びエチレングリコール10％（V/
V）を添加した緩衝液〕を用いて透析を行い、得られた
溶液を、10mMリン酸緩衝液で平衡化されたヒドロキシ−
アパタイトHPLC（東洋曹達工業社製、TSKgel HA−100
0）カラムに吸着させ、10〜100mM迄のリン酸緩衝液（pH
7.5）によるリニアグラジエント（Liner Gradient）溶
出を行うことにより純化されたヘイケボタル由来のルシ
フェラーゼ活性区分180μ〔酵素活性:2.4×102キロカ
ウント〕を得た。
第１図は、本発明酵素の至適pH域を示す図であり、また
第２図は、本発明酵素の安定pH範囲を示す図である。
第２図は、本発明酵素の安定pH範囲を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 中野 衛一 埼玉県岩槻市木曽良２―86 (56)参考文献 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ ｉ．ＵＳＡ，74（４），1977，Ｐ．2799− 2802
Claims (1)
- 【請求項１】ヘイケボタル（Luciola lateralis）から
純化されたルシフェラーゼであって、下記の理化学的性
質： 作用； 下記の酵素反応式で示されるように酸素分子によるルシ
フェリンの酸化を触媒する酵素である。 ルシフェリン＋ATP＋O2→ オキシルシフェリン＋AMP＋ピロリン酸＋CO2＋光 基質特異性； ADP、CTP、UTP及びGTPには作用しない。 至適pH及び安定pH範囲； 至適pHは、ルシフェリンを基質とした場合、pH7.5〜9.5
である。 安定pH範囲は、pH6.0〜10.5である。 作用適温の範囲； ０〜50℃である。 pH、温度等による失活の条件； pH5.0以下及び12.0以上で４時間後完全に失活する。 pH7.8において、温度55℃、15分間の熱処理により完全
に失活する。 熱安定性； 温度40℃、15分間の処理で78.3％の残存酵素活性を有
し、温度50℃、８分間の処理でも６％の残存酵素活性を
有する。 を有し、かつ以下の精製工程： a.ヘイケボタルルシフェラーゼの粗酵素溶液から30〜70
％の硫酸アンモニウム飽和で形成した沈殿を、1mMエチ
レンジアミン４酢酸２ナトリウム及び硫酸アンモニウム
を10％飽和となるように25mMトリス（ヒドロキシ）アミ
ノメタン−塩酸緩衝液,pH＝7.8に添加することによって
調製した溶液中に溶解すること； b.該溶解した沈殿溶液をゲル濾過クロマトグラフィーに
供し、活性区分を回収すること； c.該活性区分を0.1M塩化ナトリウムおよび10％（V/V）
エチレングリコールを、10mMリン酸１水素ナトリウム−
リン酸２水素ナトリウム溶液に添加することによって調
製した緩衝液に対して透析すること； d.10mMリン酸緩衝液で平衡化したヒドロキシ−アパタイ
トカラム上に該透析物質を吸着すること； e.該ヒドロキシ−アパタイトカラムから10mM〜100mMの
リン酸緩衝液,pH7.5によるリニアグラジエントによって
溶出されたルシフェラーゼ活性を有する区分を採取する
こと； を行うことにより得られる純化された該ルシフェラー
ゼ。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63088246A JPH088864B2 (ja) | 1988-04-12 | 1988-04-12 | ルシフェラーゼ |
| EP89106306A EP0337349B1 (en) | 1988-04-12 | 1989-04-10 | Luciferase |
| DE68911726T DE68911726T2 (de) | 1988-04-12 | 1989-04-10 | Luciferase. |
| US07/759,814 US5352598A (en) | 1988-04-12 | 1991-08-29 | Purified luciferase from luciola lateralis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63088246A JPH088864B2 (ja) | 1988-04-12 | 1988-04-12 | ルシフェラーゼ |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18564295A Division JPH0898681A (ja) | 1995-07-21 | 1995-07-21 | ルシフェラーゼの製造方法 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01262791A JPH01262791A (ja) | 1989-10-19 |
| JPH088864B2 true JPH088864B2 (ja) | 1996-01-31 |
Family
ID=13937496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63088246A Expired - Fee Related JPH088864B2 (ja) | 1988-04-12 | 1988-04-12 | ルシフェラーゼ |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5352598A (ja) |
| EP (1) | EP0337349B1 (ja) |
| JP (1) | JPH088864B2 (ja) |
| DE (1) | DE68911726T2 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| US6247995B1 (en) | 1996-02-06 | 2001-06-19 | Bruce Bryan | Bioluminescent novelty items |
| US5876995A (en) | 1996-02-06 | 1999-03-02 | Bryan; Bruce | Bioluminescent novelty items |
| US6416960B1 (en) | 1996-08-08 | 2002-07-09 | Prolume, Ltd. | Detection and visualization of neoplastic tissues and other tissues |
| IL129767A0 (en) | 1996-12-12 | 2000-02-29 | Prolume Ltd | Apparatus and method for detecting and identifying infectious agents |
| US6060261A (en) * | 1997-09-01 | 2000-05-09 | Toyo Ink Mfg. Co., Ltd. | Luminescence method for luciferin/luciferase system and luminescent reagent |
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| EP1925320A3 (en) | 1998-03-27 | 2008-09-03 | Prolume, Ltd. | Luciferases, fluorescent proteins, nucleic acids encoding the luciferases and fluorescent proteins and the use thereof in diagnostics |
| JP2002507410A (ja) | 1998-03-27 | 2002-03-12 | プロルーム・リミテッド | ルシフェラーゼ、蛍光タンパク質、ルシフェラーゼおよび蛍光タンパク質をコードする核酸および、診断、高処理スクリーニングおよび新規アイテムにおけるその使用 |
| GB9823468D0 (en) | 1998-10-28 | 1998-12-23 | Secr Defence | Novel enzyme |
| GB9925161D0 (en) | 1999-10-26 | 1999-12-22 | Secr Defence | Novel enzyme |
| US6502774B1 (en) * | 2000-03-08 | 2003-01-07 | J + L Fiber Services, Inc. | Refiner disk sensor and sensor refiner disk |
| US7109315B2 (en) | 2000-03-15 | 2006-09-19 | Bruce J. Bryan | Renilla reniformis fluorescent proteins, nucleic acids encoding the fluorescent proteins and the use thereof in diagnostics, high throughput screening and novelty items |
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| US7879540B1 (en) | 2000-08-24 | 2011-02-01 | Promega Corporation | Synthetic nucleic acid molecule compositions and methods of preparation |
| AU2003272174A1 (en) * | 2002-10-21 | 2004-05-04 | Biotage Ab | Use of osmolytes to heat stabilise luciferase and/or apyrase |
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| US7728118B2 (en) | 2004-09-17 | 2010-06-01 | Promega Corporation | Synthetic nucleic acid molecule compositions and methods of preparation |
| US20080248511A1 (en) * | 2007-03-26 | 2008-10-09 | Promega Corporation | Methods to quench light from optical reactions |
| US9732373B2 (en) | 2014-09-11 | 2017-08-15 | Promega Corporation | Luciferase sequences utilizing infrared-emitting substrates to produce enhanced luminescence |
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|---|---|---|---|---|
| US4581335A (en) * | 1982-12-01 | 1986-04-08 | Texas A&M University System | Process for producing a cloned luciferase-synthesizing microorganism |
| EP0247193A1 (en) * | 1985-12-02 | 1987-12-02 | The Regents Of The University Of California | Isolation of dna sequences encoding luciferase activity and applications of the same |
| AU7751687A (en) * | 1986-07-22 | 1988-02-10 | Boyce Thompson Institute For Plant Research Inc. | Use of bacterial luciferase structural genes for cloning and monitoring gene expression in microorganisms and for tagging and identification of genetically engineered organisms |
| SE8605621D0 (sv) * | 1986-12-30 | 1986-12-30 | Biokonsult Ab | Heteromultimeric proteins and their manufacture |
| US4968613A (en) * | 1987-07-29 | 1990-11-06 | Kikkoman Corporation | Luciferase gene and novel recombinant DNA as well as a method of producing luciferase |
| JPH088863B2 (ja) * | 1987-11-30 | 1996-01-31 | キッコーマン株式会社 | ルシフェラーゼ |
-
1988
- 1988-04-12 JP JP63088246A patent/JPH088864B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1989
- 1989-04-10 DE DE68911726T patent/DE68911726T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-04-10 EP EP89106306A patent/EP0337349B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1991
- 1991-08-29 US US07/759,814 patent/US5352598A/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７４（４），１９７７，Ｐ．２７９９−２８０２ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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| EP0337349B1 (en) | 1993-12-29 |
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| US5352598A (en) | 1994-10-04 |
| DE68911726T2 (de) | 1994-06-09 |
| EP0337349A3 (en) | 1990-06-27 |
| JPH01262791A (ja) | 1989-10-19 |
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|---|---|---|---|
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