JPH11322615A - 創傷患部の治癒を促進する組織シーラント - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】皮膚や内蔵の傷の止血、および傷の治癒、血管
プロテアーゼの内皮形成、およびインビトロでの内皮細
胞や線維目細胞等、動物細胞接着活性および血小板の粘
着、凝集を促進し得る組織シーラントを提供することを
目的とする。 【解決手段】フィブリンを含むシーラントに、セルロー
スの多価カルボキシメチルエーテルであるカルボキシメ
チルセルロース（ＣＭＣ）を加えてなる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本願発明は、創傷患部の治癒
を促進する組織シーラントに係り、詳しくは、傷をシー
ルし、血液の損失を減じ、止血を維持するとともに、皮
膚や臓器等創傷患部の治癒を促進する組織シーラントに
関する。

【０００２】

【発明の背景】傷の治癒、即ち病巣の回復は傷の発生の
ほぼ直後から血小板の創部への粘着、凝集を契機として
始まり、様々な細胞の連続的な共同機能および分解およ
び再生工程の緊密な制御が必要である。それにはフィブ
リン血餅の形成、血餅の吸収および上皮形成が含まれ
る。そして、傷の治癒には夥しい数の毛細血管、多くの
活性な線維芽細胞、および豊富なコラーゲン原繊維の形
成が含まれるが、特定の皮膚構造の形成は伴わない。

【０００３】傷治癒の工程は損傷組織への血小板の粘着
凝集、ほぼ同時に傷細胞から流出するトロンボプラスチ
ンによって開始される。トロンボプラスチンは血漿の凝
固因子を活性化し、最終的にプロトロンビンをトロンビ
ンに変換する。トロンビンの触媒作用でフィブリノーゲ
ンからフィブリノペプチドＡとＢが放出されてフィブリ
ンモノマーが形成され、それらが凝集してフィブリンフ
ィラメントを形成する。トロンビンはまた、XIII因子を
活性化し、それはフィブリンフィラメントを共有結合的
にクロスリンクするためのイソペプチド形成を触媒す
る。次いで、アルファーアンチプラスミンが活性型XIII
因子によってフィブリンフィラメントに結合し、それに
より血漿成分によるフィブリンフィラメントの分解を防
御する。

【０００４】創傷部に粘着、凝集した血小板はＰＤＧＦ
類を放出する。ＰＤＧＦ類には、ＰＤＧＦ、血小板誘導
脈菅形成因子（ＰＤＡＦ）、ＴＧＦ−βおよびＰＦ−４
が含まれる。

【０００５】ＰＤＧＦはマイトゲンであり、線維芽細胞
および平滑筋細胞を含む間葉起源の細胞における蛋白質
合成の刺激因子である。また、ＰＤＧＦは内皮細胞のた
めの非有糸分裂性科学的誘引物質である。

【０００６】ＴＧＦ−βはマクロファージ及び単球類の
化学的誘引物質である。他の成長因子の存在または不在
に依存して、ＴＧＦ−βは多くの細胞型を刺激または阻
害する。例えば、インビボで適用されるとＴＧＦ−βは
治癒−皮膚傷の張力強度を増す。また、ＴＧＦ−βは線
維芽細胞によるコラーゲンおよびグルコサミングリカン
の合成を刺激する。

【０００７】血小板から放出される成長因子は傷の治療
および組織の修復を特異的に促進するのに潜在的に有用
である。外因性成長因子を傷に与えることにより傷の閉
鎖速度、血管の成長等を早めることは実験的にも証明さ
れている。従って、創傷部に粘着、凝集した血小板が放
出する成長因子を利用することが最も生体に危険の無い
方法である。

【０００８】

【従来の技術】傷をシールし、血液の損失を減じ、止血
を維持する組成物としては、血漿蛋白質を含有する外科
的接着剤および組織シーラントが知られており、内部お
よび外部の傷のシーリングに用いられている。そのよう
なシーラント類は通常血液凝固因子と他の血漿蛋白質を
含む。例えば、欧州特許０．０６８．０４７には、フィ
ブリノーゲン、繊維素溶解阻害物質、およびトロンビン
またはプロトロンビンを含有する濃縮血漿画分から導か
れた無水粉末が記載されている。これは、水を加えるや
否や血餅が形成されるので、粉末状態でのみ適用可能で
ある。また、オーストラリア特許ＡＵ−Ａ７５０９７／
８７には、フィブリノーゲン、XIII因子、抗トロンビン
III等のトロンビン阻害物質、プロトロンビン因子、カ
ルシウムイオン及び所望によりプラスミン阻害物質を含
有する１成分接着剤が記載されている。また、米国特許
４，４２７，６５０および４，４２７，６５１には、フ
ィブリノーゲン、トロンビンおよび／またはプラスミ
ン、および繊維素溶解阻害物質を含有する（さらに他の
成分たとえば血小板抽出物をも含有していてもよい）豊
富化血漿誘導体が記載されている。さらに、米国特許
４，６２７，８７９および４，９２８，６０３には、フ
ィブリノーゲンとXIII因子とを含有する低温沈殿懸濁液
と、それのフィブリン（繊維素）接着剤の製造における
使用が記載されている。

【０００９】フィブリン接着剤はフィブリンシーラント
とも呼ばれるが、最初に臨床用局所適用のために製剤化
され出血の抑制、および創治療の促進のために用いられ
た。フィブリン接着剤は血漿から生成され、各フィブリ
ン接着剤の正確な成分は、出発物質として用いられた特
定の血漿画分の関数である。一般に、フィブリン接着剤
はトロンビンとの混合に際して血餅を形成するタンパク
質の混合物を含有する。例えば、フィブリン接着剤は血
漿から、低温沈殿の後、分画化して、トロンビンまたは
トロンビン活性化物質と混合したとき、シーラントまた
は血餅を精製する組成物を得ることで調製せれる。血漿
成分の分画は、エタノール、ポリエチレングルコールま
たは硫酸アンモニウムによる沈殿、およびイオン交換、
およびゲルろ過クロマトグラフィー等の標準的なタンパ
ク質精製法に従って行うことができる。

【００１０】フィブリン接着剤は通常、フィブロネクチ
ン、XIII因子、ｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子を含む
フィブリノーゲン濃縮物および乾燥ヒトまたはウシトロ
ンビンを含有する。それは凍結乾燥した形で調製され、
使用直前に塩化カルシウムと混合する。混合すると、成
分が組織表面で凝集し、交差結合したフィブリンを含む
血餅を形成する。XIII因子はフィブリノーゲン濃縮物に
含まれ、交差結合を触媒する。フィブリン接着剤は、組
織の面と面とをシールし、空気または液体のもれること
を防ぎ、そのことにより止血を誘導する。止血と血液の
流出を阻止する能力により、フィブリン接着剤は傷の治
療を促進する。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、それは
真の意味での傷治癒特性をもっていない。フィブリン接
着剤は、内部および外部の損傷の両方に使用でき、かつ
止血の維持に有用なので、その傷治癒特性を向上するこ
とが望ましい。

【００１２】従って本発明は、皮膚や内蔵の傷の止血、
および傷の治癒、血管プロテアーゼの内皮形成、および
インビトロでの内皮細胞や線維目細胞等、動物細胞接着
活性および血小板の粘着、凝集を促進し得る組織シーラ
ントを提供することを目的とするものである。

【００１３】すなわち、本発明は、成長因子（類）を傷
ついた組織、血管プロテアーゼ、およびインビトロで培
養された動物細胞（内皮細胞や線維芽細胞等）に投与
し、血小板に誘導される成長因子と傷ついた組織、血管
プロテアーゼおよび動物細胞と長時間接触させ、そのこ
とにより傷の治癒、内皮形成または動物細胞の細胞接着
を促進する組織シーラントを提供することを目的とする
ものである。

【００１４】

【課題を解決するための手段】本願発明は、フィブリン
を含むシーラントに、セルロースの多価カルボキシメチ
ルエーテルであるカルボキシメチルセルロース（ＣＭ
Ｃ）を加えてなるものであり、これを目的に応じた形態
にして創傷患部におけるフィブリン接着剤のような組織
シーラントとして使用するものである。すなわち、従来
カルボキシメチルセルロースは日本薬局方解読書（第十
三改正、１９９^＊ 、８ページ 廣川書店）に記述され
ているごとく、水分を吸収して膨張性下剤として奏効
し、また粘滑性の薄膜を作って粘膜面、潰瘍面を保護
し、さらに緩衝作用並びに胃酸中和作用等の膨張剤及び
保護剤として利用されているものであるが、本願発明者
らは、鋭意研究の結果、カルボキシメチルセルロースに
止血作用及び細胞接着促進作用があり、これをフィブリ
ンを含むシーラントに加え創傷患部に施用すると、血小
板に誘導される成長因子と傷ついた組織、血管プロテア
ーゼおよび動物細胞とが長時間接触し、傷の治癒、内皮
形成または動物細胞の細胞接着を促進する新しい組織シ
ーラントとして機能することを見出したのである。

【００１５】このような組織シーラントは、実質的は改
変ないしは血小板放出成長因子または成長因子混合物を
創傷部位に到達させるための担体ベクヒル（媒体）とし
て作用し得、そして、その接着性または吸着特性の故に
カルボキシメチルセルロース補充組織シーラントが傷の
治癒を促進するのに十分な期間、該部位への接触を維持
することができる。

【００１６】この組織シーラントは、ヒト身体の細胞成
分を移動させ骨誘導の生起が必要なギャップを埋めるマ
トリックスを与える。従って、タンパク質（フィブリノ
ーゲンおよび因子XIII等）、酵素（トロンビンおよびプ
ラスミン等）、カルボキシメチルセルロースをこの一時
的な足場構造を最も長命にするのに適したように製剤化
する。全混合物成分は生物分解的であるが、骨形成の間
は新しく形成される骨の形を決定し得るよう非破壊性の
足場を提供する。かくして骨の再構築手術における問題
である、骨の非結合性欠損内への軟組織の崩壊は避ける
ことができる。

【００１７】この際、カルボキシメチルセルロースに加
えて、薬物、ポリクローナルおよびモノクローナル抗
体、および他の化合物、例えば、傷の治癒を加速する化
合物、組織シーラント内の血小板由来の成長因子の生物
学的活性を強化、刺激または仲介する化合物、またはシ
ーラント内の血小板由来の成長因子（類）の生物学的活
性を阻害または破壊するかもしれない、カルボキシメチ
ルセルロースの活性を阻害する組織シーラント成分を阻
害または干渉する化合物、類を組織シーラントに加えて
良い。特定の阻害活性成分（類）の選択は、組織シーラ
ント中の血小板由来の成長因子（類）の生物学的活性を
評価する方法を用いて実験的に決定されるであろう。

【００１８】本願発明におけるシーラントの全タンパク
質濃度は、溶液の５−１５０ｍｇ／ｍｌが良く、好まし
くは７−３５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１７−２８ｍ
ｇ／ｍｌである。また、シーラントのフィブリノーゲン
濃度は、４−１３５ｍｇ／ｍｌが良く、好ましく６−３
０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１５−２５ｍｇ／ｍｌで
ある。さらに、カルボキシメチルセルロースの濃度は、
用いるカルボキシメチルセルロースによって変化する
が、シーラントの１μｇ／ｍｌ−１００ｍｇ／ｍｌが良
く、好ましくは１００μｇ／ｍｌ−１ｍｇ／ｍｌ、より
好ましくは５ｍｇ／ｍｌ−２０ｍｇ／ｍｌである。

【００１９】また、本願発明において、傷とは、生きて
いる生物におけるあらゆる損傷組織を包含する。また、
組織は胃内面または骨折等の内部組織、あるいは皮膚の
ような外部組織であってよい。そして、それは脾臓のよ
うに軟い組織、あるいは骨のように硬い組織であってよ
い。さらに、傷は外傷、感染または外科的処置など任意
の原因によるものであってもよい。

【００２０】また、組織シーラントとは、血漿タンパク
質から調製され、傷に適用されたとき、血餅を生成し、
その結果、傷をシールし、血液の損失を減じ、止血を維
持する組成物のことを言う。

【００２１】

【本発明の実施の形態】本願発明は、フィブリンを含む
シーラントに、セルロースの多価カルボキシメチルエー
テルであるカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を加
えてなるものであり、その際、フィブリンはそのまま、
もしくは、使用時にトロンビンとフィブリノーゲンとが
作用することにより形成されてなるものを含むものであ
る。

【００２２】また、本願発明におけるカルボキシメチル
セルロース（ＣＭＣ）は、そのナトリウム塩を含むもの
が好ましく、その含有ナトリウムの重量百分率は５．１
〜１２．８％が好ましい。

【００２３】また、本願発明におけるカルボキシメチル
セルロースは、カルボキシル基の置換度（エーテル化
度）が０．６〜１．５であると好ましく、置換度１．０
のもので、第一アルコール基のみがエーテル化されたと
すると、以下の［化１］のような構造となる。この際、
ナトリウム塩の重量百分率が８．５％であると最も好ま
しい。また、第一アルコール基の他に第二アルコール基
がエーテル化されても、また第二アルコール基だけがエ
ーテル化されても止血材としての機能は消失しない。

【００２４】

【化１】

【００２５】また、本願発明におけるカルボキシメチル
セルロースは、電子線照射によって滅菌し、より低分子
量化したものでもある。電子線照射によって低分子量化
したカルボキシメチルセルロースの分子量は２００ｋ〜
２０００ｋＤ（ダルトン）とすると良い。

【００２６】

【実施例】本願発明の実施に際して、まず、組織シーラ
ント及びカルボキシメチルセルロースを選択しなければ
ならないが、それは以下のようにして成し得ることが出
来る。

【００２７】本願発明における組織シーラントは、フィ
ブリン接着剤のようなあらゆる組織シーラントに用いる
ことができる。フィブリン接着剤は、ＩＭＭＵＮＯ Ａ
Ｇ（オーストリア）またはＢＥＨＲＩＮＧＷＥＲＫＥ
ＡＧ（ドイツ）のような供給者等から購入することも出
来るが、本実施例においては、血漿または血漿成分から
調製したものを用いることとした。選択した組織シーラ
ントの特定組成は、それが、インビボで組織シーラント
として機能し、カルボキシメチルセルロースと傷を負っ
た組織または血管移植片との接触のための媒体として作
用することができ、それにより傷の治癒又は内皮形成が
促進される限り、臨界的なものではない。そして、成長
因子のためのビヒクルとして用いたフィブリン接着剤の
成分には、フィブリノーゲン、フィブリンネクチンXIII
因子およびｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子が含まれ
る。

【００２８】加える成長因子（類）の量は、様々な濃度
を試験し、どれが意図する目的、および適用部位に有効
であるものかを選択することにより、実験的に決定する
ことができる。

【００２９】また、本願発明におけるカルボキシメチル
セルロースは、市販品を購入することで得ることがで
き、本実施例においては、この市販品を用いることとし
た。

【００３０】組織シーラントには、カルボキシメチルセ
ルロースを補充する他、薬物、他の化学物質、およびタ
ンパク質等の他の成分を含有していてもよい。これらに
は、抗生物質、活性化プロテインＣ、ヘパリン、プロス
トラサイクリン(ＰＧＩ３）、抗トロンビンIII、ＡＤＰ
ａｓｅ、およびプラスミノーゲン活性化因子のような抗
凝固剤、デキサメタンのような抗炎症性ステロイド類、
カルシウムチャンネルブロッカーのような心臓血管製
剤、科学誘引物質、およびブピバカイン（ｂｕｐｉｖａ
ｃａｉｎｅ)のような局所麻酔剤が含まれるがこれらに
限定されない。

【００３１】また、これらの補充成分には、ポリクロー
ナル抗体、モノクローナル抗体またはキメラ抗体、また
はその機能的な誘導体またはフラグメントが含まれる。
それらは、例えば、ＰＤＧＦ、および／またはＴＧＦー
βに対する抗体のような平滑筋の増殖、または組織シー
ラントによる処置の領域内またはその付近の他の好まし
くない細胞型の増殖、を阻害する抗体であってもよい。
これらの抗体は抗がん、抗血小板、または抗炎症性活性
性が必要な状況下でも有用である。一般に、その効果ま
たは経済性が、部位特異的なデリバリーにより改善され
るような抗体であれば、どれでもこのフィブリン接着剤
デリバリーシステムを享受する。

【００３２】まず、参考例１として、カルボキシメチル
セルロースの分子量が電子線照射することにより低分子
量化されることを確認するために、電子線照射したカル
ボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）の
分子量の測定をサースII型線型加速器（ＣＧＲ−ＭｃＶ
社製）を用いて行った。分子量の測定は、カルボキシメ
チルセルロースナトリウムあるいは１０ＭｅＶで２０ｋ
Ｇｙ、４０ｋＧｙ、６０ｋＧｙ、８０ｋＧｙ、１００ｋ
Ｇｙの各電子線を照射したカルボキシメチルセルロース
ナトリウムを０．１５Ｍ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を
含む５０ｍＭトリス−塩酸バッファアーに溶解し、同じ
バッファアーで平衡化したセファロースＣＬ−６Ｂのカ
ラムにそれぞれ充填し、分子篩クロマトグラフィーによ
り行った。そして、各フラクションのカルボキシメチル
セルロースナトリウムはフェノール硫酸法で検出した。
測定した結果を、［表１］に示す。

【００３３】

【表１】

【００３４】上記［表１］に示す結果より、カルボキシ
メチルセルロースは電子線照射することにより低分子量
化されることが分かる。

【００３５】また、参考例２として、電子線未照射及び
電子線照射のカルボキシメチルセルロースナトリウムの
フィブリンモノマー凝集活性を確認するために、３５０
ｎｍでの吸光度の測定を紫外可視分光光度計Ｕ−３２１
０（日立製作所社製）を用いて行った。吸光度の測定
は、カルボキシメチルセルロースナトリウムの非存在下
あるいは電子線照射カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム１０ｍｇ／ｍｌ存在下の０．１５Ｍ塩化ナトリウム
（ＮａＣｌ）を含む２０ｍＭイミダゾール緩衝液に、２
０ｍＭ酢酸に溶解したフィブリンモノマー（Ａ２８０ｎ
ｍ＝６）を２０μｌ添加し、５秒間混合する。次いで、
この混合液を行光路１ｃｍの石英セルに移し、フィブリ
ンモノマー添加後２０秒後から３０秒毎に２０分間３５
０ｎｍの吸光度を測定することにより行った。測定した
結果を、［図１］に示す。なお、カルボキシメチルセル
ロースナトリウムは、図中「ＣＭＣ−Ｎａ」と略記し
た。

【００３６ 】［図１］に示す結果より、電子線未照射、
照射にかかわらずカルボキシメチルセルロースナトリウ
ムはすべてフィブリンモノマーの凝集を著しく促進する
ことが分かる。

【００３７】 次に、カルボキシメチルセルロースを加え
た組織シーラントを調整し、以下の各実施例によりカル
ボキシメチルセルロース補充組織シーラントが傷の治癒
を高めるか否かを確認した。カルボキシメチルセルロー
スを加えた組織シーラントの調整は、血漿の低温沈殿画
分から調整したフィブリン接着剤を用い、これに電子線
照射して低分子量化した市販のカルボキシメチルセルロ
ースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）（和光純薬工業社製）
を１０ｍｇ／ｍｌの濃度となるよう加えることにより行
った。血漿は、ヒト血液を遠心して赤血球をペレット化
し、血小板を除去することで調整し、低温沈殿物を集め
画分してフィブリン接着剤の製造に使用した。

【００３８】 なお、実施例を行うに先立ち、組織シーラ
ント、またはカルボキシメチルセルロースを補充した組
織シーラントを滅菌するか、あるいはウイルス等のあら
ゆる病原性混在物を不活化するために処置を行う。混在
物を不活化する方法は当業者に周知であり、例えば、溶
媒ー洗剤処理および熱処理があるが、これらに限定され
ない。

【００３９】 まず、実施例１として、ヒト臍静脈内皮細
胞のカルボキシメチルセルロース補充フィブリン接着剤
中での増殖の確認を行った。該細胞の増殖の確認は、１
ｍｌあたり１０^６ またはそれ以上の細胞を、カルボキ
シメチルセルロースナトリウムを１０ｍｇ／ｍｌの濃度
になるように加えたタンパク質濃度０．１ｍｇ／ｍｌの
フィブリン接着剤中に包理することにより行った。な
お、フィブリン接着剤中のトロンビン濃度は、０．０２
ＮＩＨ単位／ｍｌに調節し、培養培地は１０％ウシ胎児
血清、１０μｇ／ｍｌストレプレスマイシン、１００Ｕ
／ｍｌペニシリン、１ｍｇ／ｍｌ酸性線維芽細胞成長因
子、および１０Ｕ／ｍｌヘパリンを含有するＭ１９９
（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製) を用いた。

【００４０】 その結果、６時間以内にカルボキシメチル
セルロースナトリウム補充フィブリン接着剤中の細胞は
長く、多足（ｍｕｌｔｉｐｏｄｉａｌ）となり、それら
が相互に接触すると細胞ネットワークを形成した。この
成長は少なくとも３日間持続した。また、対照として、
同様の実験をカルボキシメチルセルロースナトリウム無
添加のフィブリン接着剤で行った。対照細胞は丸石形と
なりこの形態をすくなくとも３日間維持した。

【００４１】 次に、実施例２として、カルボキシメチル
セルロースナトリウム補充フィブリン接着剤のインビボ
での傷の治療への効果を確認するために、 糖尿病マウ
スの傷の回復へのカルボキシメチルセルロースナトリウ
ム補充フィブリン接着剤の効果を評価した。評価は、６
匹の各試験マウスの背部分から得た２個の全厚み６ｍｍ
の生検（バイオプシー）を、カルボキシメチルセルロー
スナトリウム（１０ｍｇ／ｍｌ）を加えたフィブリン接
着剤で満たすこととしたもの、同じ生検を無処理のまま
で放置したもの、及びカルボキシメチルセルロースナト
リウムが補充されていないフィブリン接着剤に満たした
ものを、９日後、各傷部位および周囲の皮膚から厚さ５
ミクロンの切片の病理学的標本を調製し、ヘマトキシリ
ンおよびネオシンで染色して各試料の傷修復の程度を３
人の訓練された分析者による「盲目」試験により、コラ
ーゲン沈着、上皮細胞再形成、粒状組織の厚みおよび炎
症細胞の密度、線維芽細胞および毛細血管等を、否から
完全な修復に至る０から１５までの評点を課すことによ
り行い、その結果を［表２］に示す。なお、表中カルボ
キシメチルセルロースナトリウムを加えたフィブリン接
着剤は、ＣＭＣ補充フィブリン接着剤と記す。

【００４２】

【表２】

【００４３】上記［表２］に示す結果より、カルボキシ
メチルセルロースナトリウムが補充されないフィブリン
接着剤で処理した傷の由来の試料は一貫して最も評点が
低く、無処理の傷及びカルボキシメチルセルロースナト
リウムで補充したフィブリン接着剤で処理した傷から得
た試料は最高の評定を与えたことが分かる。

【００４４】 次に、実施例３として、カルボキシメチル
セルロースナトリウム補充フィブリン接着剤の創傷治癒
効果を確認するために、１ヶ月後の創傷の治癒度を観察
した。創傷治癒効果の確認は、１０匹のラットの肝臓を
それぞれ１ｃｍ×１ｃｍ四方で切除し、創部をカルボキ
シメチルセルロースナトリウム（１０ｍｇ／ｍｌ）を補
充したフィブリン接着剤でおおい、１ヶ月後開腹して創
傷の治癒度を病理切片を調製して調べた。また、対照と
して同様の実験をカルボキシメチルセルロースナトリウ
ムを補充していないフィブリン接着剤を使用して行っ
た。

【００４５】 その結果、カルボキシメチルセルロースナ
トリウムを補充したフィブリン接着剤で処置した創傷部
は、ほとんど完全に治癒しており全く炎症等も生じてい
なかった。一方、カルボキシメチルセルロースナトリウ
ムを補充していないフィブリン接着剤で処置した創傷部
は、多核白血球が多くみられかなり重度の炎症を生じて
いた。

【００４６】 さらに、実施例４として、カルボキシメチ
ルセルロースナトリウム補充フィブリン接着剤への血小
板の粘着と凝集を確認するために、カルボキシメチルセ
ルロースナトリウム補充フィブリン接着剤（カルボキシ
メチルセルロースナトリウム濃度１０ｍｇ／ｍｌ、フィ
ブリノーゲン濃度４ｍｇ／ｍｌ）シートと、カルボキシ
メチルセルロースナトリウムを補充していないフィブリ
ン接着剤（フィブリノーゲン濃度４ｍｇ／ｍｌ）シート
上への血小板の粘着と凝集反応を比較した。粘着の測定
は、ＨａｖｅｒｓｔｗｉｃｋＤＭらの方法（Ｂｌｏｏｄ
６６：９４６，１９８５)を用いて行い、９６ウェルの
タイタープレートを用いて実験を行った。

【００４７】 その結果、カルボキシメチルセルロースナ
トリウムを補充していないフィブリン接着剤は血小板の
粘着、凝集はほとんど生じなかったが、カルボキシメチ
ルセルロースナトリウム補充フィブリン接着剤は夥しい
数の血小板の粘着と凝集がみられた。３７℃で２４時間
放置後の上清には、血小板由来の成長因子群（ＰＤＧ
Ｆ、ＴＧＦ−β等）が検出された。

【００４８】

【発明の効果】以上のように本発明のカルボキシメチル
セルロース補充組織シーラントは、傷及びインビトロで
培養されている細胞との長期的な接触を維持し、血小板
との短期的な接触を促進することが出来るものである。

【００４９】 また、本願発明によるカルボキシメチルセ
ルロースを補充した組織シーラントは、外部の傷にはそ
れを傷の上から塗布することを含め、任意の手段で傷組
織に直接適用することができ、また、手術中に内部の傷
にも直接適用することもでき、さらに、それを骨等に適
用することもできるものである。

【００５０】 また、糖尿病患者の傷のように容易に治癒
しない傷の治癒促進および創傷部に血小板粘着凝集を介
して血小板の放出する成長因子を内部の創傷部位に到達
させ、内部創傷部位と成長因子類とを長時間接触させる
ための媒体として特に有用であり、例えば、骨折部位ま
たは胃潰瘍その他の内部の傷の治癒を加速または促進す
るために適用し得るものである。

【００５１】 また、本願発明のカルボキシメチルセルロ
ース補充シーラントは、生物分解性であり体組織に再吸
収され得るとともに、成長因子とその受容体との長時間
の接触が起きることを可能にし、協力な生物学的効果の
生成を可能にする。

【００５２】 また、本願発明のカルボキシメチルセルロ
ース補充シーラントは、全タンパク質およびフィブリノ
ーゲン濃度が従来用いられていたものよりも薄く、この
低濃度性により、動物細胞は本発明のカルボキシメチル
セルロース補充フィブリン接着剤内に移動し、中を通
り、中へ増殖することができることとなり、近隣の組織
およびプロテアーゼへの細胞強化を助ける。

【００５３】 さらに、本願発明のカルボキシメチルセル
ロース補充シーラントは、その液性により、従来利用可
能なデリバリーシステムに比較して、表面をより十分か
つ完全に覆うことができ、これによりカルボキシメチル
セルロース補充フィブリン接着剤は血管プロテアーゼの
内部、外部および孔を覆うので、その血栓形成性および
抗原性の発達を減少する。

【図面の簡単な説明】

【図１】フィブリンモノマーの凝集反応に対するカルボ
キシメチルセルロースの効果を示す吸光度を測定した吸
光度と時間の関係を示す図。

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【手続補正書】

【提出日】平成１０年９月１１日

【手続補正２】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】全図

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１】 ─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成１１年４月２３日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１４

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１４】

【課題を解決するための手段】本願発明は、トロンビン
とフィブリノーゲンを含み使用時にフィブリンが形成さ
れてなるシーラントに、セルロースの多価カルボキシメ
チルエーテルであるカルボキシメチルセルロース（ＣＭ
Ｃ）を加えてなるものであり、これを目的に応じた形態
にして創傷患部におけるフィブリン接着剤のような組織
シーラントとして使用するものである。すなわち、従来
カルボキシメチルセルロースは日本薬局方解読書（第十
三改正、１９９^＊ 、８ページ 廣川書店）に記述され
ているごとく、水分を吸収して膨張性下剤として奏効
し、また粘滑性の薄膜を作って粘膜面、潰瘍面を保護
し、さらに緩衝作用並びに胃酸中和作用等の膨張剤及び
保護剤として利用されているものであるが、本願発明者
らは、鋭意研究の結果、カルボキシメチルセルロースの
ナトリウム塩に止血作用及び細胞接着促進作用があり、
これをトロンビンとフィブリノーゲンを含み使用時にフ
ィブリンが形成されてなるシーラントに加え創傷患部に
施用すると、血小板に誘導される成長因子と傷ついた組
織、血管プロテアーゼおよび動物細胞とが長時間接触
し、傷の治癒、内皮形成または動物細胞の細胞接着を促
進する新しい組織シーラントとして機能することを見出
したのである。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２１】

【本発明の実施の形態】本願発明は、トロンビンとフィ
ブリノーゲンを含み、使用時にトロンビンとフィブリノ
ーゲンとが作用することによりフィブリンを形成してな
るシーラントに、セルロースの多価カルボキシメチルエ
ーテルであるカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を
加えてなるものであり、また、カルボキシメチルセルロ
ースは、 そのナトリウム塩を含むものを意味するもので
ある。そして、その含有ナトリウムの重量百分率は５．
１〜１２．８％が望ましい。

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２２

【補正方法】削除

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 フィブリンを含むシーラントに、セルロ
   ースの多価カルボキシメチルエーテルであるカルボキシ
   メチルセルロースを加えてなることを特徴とする組織シ
   ーラント。
2. 【請求項２】 フィブリンは使用時にトロンビンとフィ
   ブリノーゲンとが作用することにより形成されてなるも
   のであることを特徴とする請求項１に記載の組織シーラ
   ント。
3. 【請求項３】 カルボキシメチルセルロースはそのナト
   リウム塩を含むものであることを特徴とする請求項１又
   は２に記載の組織シーラント。
4. 【請求項４】 カルボキシメチルセルロースはカルボキ
   シル基の置換度が１．０であり、ナトリウム塩の重量百
   分率が８．５％であることを特徴とする請求項３に記載
   の組織シーラント。
5. 【請求項５】 カルボキシメチルセルロースは電子線照
   射によって低分子量化したものであることを特徴とする
   請求項１乃至４の何れかに記載の組織シーラント。
6. 【請求項６】 電子線照射によって低分子量化したカル
   ボキシメチルセルロースの分子量は２００ｋ〜２０００
   ｋダルトン以下であることを特徴とする請求項５に記載
   の組織シーラント。