KR100615389B1 - 다래 추출물을 함유하는 알러지성 질환 및 비알러지성염증 질환의 예방 및 개선용 건강 기능 식품 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항알러지 및 항염증 활성을 갖는 다래과실 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 다래 추출물은 OVA 감작 마우스 모델과 인간세포주 및 혈청에서 IgE을 감소시키고 Th2 사이토카인을 선택적으로 감소시켰으며, 비만세포로부터 히스타민의 방출 억제 및 염증활성을 억제시키는 작용을 나타내므로, 알러지성 질환 또는 비알러지성 염증질환의 예방 및 개선을 위한 건강 기능 식품으로 사용될 수 있다.

다래 추출물, 알러지, 알러지성 질환, 염증, 염증질환, 건강 기능 식품.

Description

다래 추출물을 함유하는 알러지성 질환 및 비알러지성 염증 질환의 예방 및 개선용 건강 기능 식품{Health food comprising the extract of Actinidia arguta and related species for the prevention and improvement of allergic disease and non-allergic inflammatory disease}

도 1 은 다래 실리카겔 분획물의 TLC 사진으로, 도 1a는 추출물 및 분획물들의 TLC 결과 사진이고, 도 1b는 실리카겔 분획 1의 2D-TLC 분석결과사진이고, 도 1c는 실리카겔 분획 2의 2D-TLC 분석결과사진이며,

도 2a 는 아토피성 피부염 Nc/Nga 마우스에서의 다래추출물 투여 12주째에 관찰한 피부 가려움증상 결과도이고,

도 2b 는 아토피성 피부염 Nc/Nga 마우스에서의 다래추출물 투여 14주째에 관찰한 피부 가려움증상 결과도이다.

본 발명은 항알러지 및 항염증활성을 갖는 다래과실추출물을 함유하는 알러지성 질환 또는 비알러지성 염증질환의 예방 및 개선에 유용한 건강기능식품에 관한 것이다.

과민증(anaphylaxis), 알러지성 비염(allergic rhinitis), 천식(asthma), 아토피성 피부염(atopic dermatitis) 및 두드러기(urticaria) 같은 알러지성 질환들은 여러 나라의 인구 20 % 정도까지 발병하고 있으며 그 유병율이 점점 증가하고 있다(Wuthrich B., Int. Arch. Allergy Appl. Immunol., 90, pp3-10, 1989). 알러지성 질환은 IgE에 의해 매개되며, 이것은 타입 2 T 헬퍼(Th2) 세포, 비만세포 및 산성백혈구(eosinophil)가 이 과정에 중요한 역할을 함을 증명해준다(Maggi E., Immunoyrchnology, 3, pp233-244, 1998; Pawankar R., Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol., 1, pp3-6, 2001; Vercelli D., Clin. Allergy Immunol., 16, pp179-196, 2002).

윤충감염(helminth infection) 또는 다른 자극없이도, IgE는 사람 또는 다른 몇몇의 실험동물 종들의 혈청 내에 일반적으로 존재하는 많은 면역글로불린 이형(isotype) 중 하나이다(Coffman RL. et al., J. Immunol. 136, pp949-64, 1986). "Th2 가설"에 따르면 IgE은 Th2 세포, IL-4, IL-5 및 IL-13 같은 사이토카인에 의해 매개되는 체액성 면역이 우세한 면역학적조건에서 생성되기 쉽다(Maggi E., Immunotechnology, 3, pp233-244, 1998). 알러지 질환들의 발병과정에 대한 현재의 개념은 유전적 및 환경적 요인은 서로 상호작용을 하고, 그럼으로써 Stat6-매개신호경로를 통한 IL-4의 생성 및 T 세포에서 c-Maf, GATA3, NIP45 및 NFATc 같은 특이전사인자들의 활성화 및 결과적으로 알러지원(allergen)-특이적 T 헬퍼 2 CD4+ 세포의 발달을 야기한다. 한번 생성된 알러지원에 의해 활성화된 Th2 세포들은 IL-4, IL-5 및 IL-13을 분비한다. IL-4 및 IL-5는 B세포에 의한 IgE 및 IgGI의 생성을 유도하고, 골수에서의 산성백혈구의 발달을 자극하여, 염증이 생긴 조직으로 모이도록 유도한다(Erb KJ., Immunol. Today, 20, pp317-322, 1999; Rothenberg ME., N. Engl. Med., 338, pp1592-1600, 1998). IL-13은 IL-4와 밀접하게 관련되어 있는 사이토카인으로, IL-4 수용체 알파사슬에 결합하여 IL-4, IgE 또는 산성백혈구와 무관하게 알러지 표현형을 유도한다(Wills-Karp M., et al., Science, 282, pp2258-61, 1998; Grunig G., et al., Science, 282, pp2261-2263, 1998).

IgE는 두 개의 이소폼의 IgE 수용체와 순환하며 결합한다 : 고 친화성 IgE 수용체(FcεRI)는 비만세포 및 염기성백혈구의 표면에 존재하고, 저친화성 IgE 수용체(FcεRⅡ 또는 CD23)는 림프구, 산성 백혈구, 혈소판 및 대식세포의 표면에 존재한다. 알러지성 질환의 발병기전을 지배하는 가장 중요한 요인은 비만세포상의 IgE 수용체의 교차결합, 알러지원을 만난 후 결과적인 비만세포의 탈과립인 것으로 믿어지고 있다. 비만세포에 의해 방출된 분자는 히스타민, 헤파린, 프로테아제 및 자유 라디칼을 포함하며, 혈관확장, 장관내 및/또는 기관지 평활근 수축, 점액분비 및 국소 단백질 분비와 같은 다양한 생물학적 효과를 매개한다. 비만세포의 초기매 개 반응에 따라 산성백혈구, 염기성백혈구 및 림프구의 유입이 6-24시간 후에 발생한다. 이 후기단계의 반응은 끊임없이 항원에 노출된 조직의 만성적 염증을 유도한다. 일반적으로, 알러지성 질환의 예방을 위하여 항히스타민, 스테로이드성 또는 비스테로이드성 항염증용 의약품 및 류코트리엔 길항제와 같은 조성물이 사용된다. 이러한 조성물들은 주로 증후성의 효과에 유용한데, 과도한 체액성 면역을 완화하거나 IgE 생산을 억제하는 것과 같은 알러지성 질환의 근본적인 치유에 요구되는 예방을 제공하지는 못한다. 혈청 IgE 수치를 감소시켜 알러지성 증상을 개선할 수 있다는 가설은 키메릭 항-IgE 항체(CGP-51901)와 재조합 인간화 모노클로날 항체의 임상적 시험에 의해 증명되었다(rhuMAB-F25)(Fahy JV. et al., Am. J. Respir. Crit. Care. Med., 155, pp1828-1834,1997). IgE 합성과 분비를 저해하는 디아실 벤지미다졸 동족체와 세균성 폴리사카라이드에 관해 각각 US 특허 6,369,091호와 US 특허출원공개 20020041885호에 기술되어 있다. 몇몇 동양 의약 처방(Yang et al., 2001)과 진득찰(Siegesbeckia glabrescens)와 같은 약초(Kim HM. et al., Phytother Res., 15, pp572-576, 2001)는 IgE-감소 활성이 알려져 있다. 또한, 많은 약초들이 히스타민 방출 저해제 또는 항 염증용 의약품의 풍부한 원천인 것이 발견되어 왔다.

본 발명에서 사용한 조성물의 주성분인 다래 (Actinidia arguta) 및 취다래 (A. kolomikta)는 다래나무과(Actinidiaceae)에 속하며 시베리아, 중국 북부, 한국이 원산지이다. 다래나무과에 속하는 것으로 30종 이상이 보고되어 있고, 그 중 대표적인 것은 다래, 취다래(A. kolomikta), 개다래 (A. polygama), 섬다래(A. rupa) 등이 있으며, 일반적으로 키위로 알려진 참다래(A. chinensis or A. deliciosa) 역시 다래나무과에 속하는 식물이다. 다래는 미후도라는 한약재로 사용되는데, 다래나무 및 동속 근연식물의 과실을 포함하고, 성질이 차고 독성이 없으며 간장질환과 위장질환의 치료 또는 비뇨기결석 치료에 처방되어 왔으나(신동의약보감-전통동양약물데이타베이스, 서울대학교 천연물과학연구소, 동방미디어주식회사, 1999), 알러지 질환 및 비알러지성 염증질환의 예방 및 치료에 관해서는 사용된 바가 없다.

한국특허등록 제344147호에서는 다래수액을 주재로 한 건강음료 및 그 제조방법에 관해 개시하고 있고, 한국특허등록 제134024호에서는 참다래를 주재로 한 건강음료 및 그 제조방법에 관해 개시하고 있으며, 국내특허출원 제1996-10396호에서는 목화 다래 추출물 및 그의 간기능 보호제, 항암제로서의 용도에 관해 개시하고 있으며, 국내특허출원 제 2001-17524호에서는 다래 및 여러 생약추출물을 함유한 간기능회복을 위한 음료 및 그 제조방법에 대하여 개시한다. 그러나 지금까지 다래의 항알러지효과나 염증반응 억제효과에 대해서는 보고된 바가 없다.

따라서, 본 발명에서는 다래추출물의 항알러지 및 항염증활성을 알아보기 위해, Th2 사이토카인과 IgE의 인간 혈청내 수치 강하, 생쥐복강 비만세포로부터 히스타민의 방출저해율 및 부종에 대한 항염증효과에 대한 시험관내 실험과 생체내 실험을 실시한 결과, 본 발명에 따른 다래추출물이 Th2 사이토카인 및 IgE의 혈청내 수치를 낮춤으로써 비만세포로부터 히스타민의 방출을 저해하고 염증반응의 억제를 유도한다는 사실을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 Th2 사이토카인과 IgE의 혈청 내 수치를 낮춰 비만세포로부터 히스타민의 방출을 저해하고 염증반응을 억제하는 알러지질환 또는 비알러지성 염증질환의 예방 및 개선에 유용한 건강기능식품을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 다래과실 조추출물, 클로로포름 분획을 제외한 에틸아세테이트 가용추출물 및 식품학적으로 첨가 가능한 식품보조첨가제를 포함하는 알러지성 질환 및 비알러지성 염증질환의 예방 및 개선용 건강 기능 식품을 제공한다.

상기 다래는 다래(Actinidia arguta), 취다래(A. kolomikta), 개다래(A. polygama) 또는 동속근연식물을 포함한다.

상기 다래 조추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 탄소수를 갖는 저급 알콜 및 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 또는 70% 에탄올에 가용한 추출물을 포함한다.

또한, 상기 알러지성 질환은 과민증, 알러지성 비염, 알러지성 피부염, 알러지성 천식, 알러지성 결막염, 아토피성 피부염, 곤충알러지, 식품알러지, 약품알러지 또는 두드러기 등을 포함한다.

상기 비알러지성 염증질환은 일반적인 염증질환을 포함하며, 각종 피부염, 전신성 홍반성 낭창, 망막염, 위염, 간염, 장염, 췌장염, 신장염 등을 포함한다.

예를 들어, 본 발명의 다래 추출물의 양은 전체 조성물의 0.01 내지 80 %, 바람직하게는 1 내지 50 % 중량비를 갖는 건강 기능 식품을 제공한다.

상기 건강 기능 식품은 건강을 위한 건강식품, 건강음료 등을 포함할 수 있으며, 분말, 과립, 정제, 씹어먹는 정제, 캡슐 또는 음료 형태 등으로서 가능하다.

본 발명의 다래과실 추출물을 분리하는 방법은 하기와 같으며, 이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 알러지성 질환 및 비알러지성 염증질환의 예방 및 개선을 위한 다래 추출물은 물 또는 알콜성 수용액으로 추출하는 것을 특징으로 하는데, 좀 더 구체적으로 설명하면,

본 발명의 다래과실 조추출물은 다래를 건조시켜 분쇄화 한 후, 다래 건조 중량의 약 5 내지 25배, 바람직하게는 약 10배에 달하는 부피의 물, 메탄올, 에탄올 및 부탄올과 같은 저급 알콜 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매로, 바람직하게는 물 또는 70% 에탄올로 20 내지 100 ℃, 바람직하게는 60 내지 100 ℃의 추출 온도에서 약 0.5시간 내지 2일, 바람직하게는 1 시간 내지 1일 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법으로 1회 내지 5회, 바람직하게는 2회 내지 3회 연속 추출하여 수득한 후, 여지로 여과하고 여액을 회전진공농축기로 20 내지 100 ℃, 바람직하게는 50 내지 70 ℃에서 감압농축 한 후, 잔사를 진공동결건조 또는 열풍건조 또는 분사방식에 의한 건조법 등을 통하여 물, 저급알콜 또는 이들의 혼합용매에 가용한 다래 조추출물을 얻을 수 있으며, 수득된 다래 추출물은 -20 ℃에서 보관하면서 실험에 이용한다. 또한, 다래 추출물의 건조 분말은 증류수에 일정농도로 용해하여 사용한다.

또한 본 발명의 상기 조추출물을 물에 현탁한 후, 이를 현탁액의 약 1 내지 100배, 바람직하게는 약 1 내지 5배 부피의 에틸아세테이트를 가하여 1회 내지 10회, 바람직하게는 2회 내지 5회 분액깔때기로 분획하여 수득할 수 있다. 또한 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있다(Harborne J.B. Phytochemical methods: A guide to modern techniques of plant analysis. 3rd Ed. pp6-7, 1998).

또한, 본 발명은 다래 추출물 0.01 내지 20중량%, 아미노산류 0.001 내지 5 중량 %, 비타민류는 0.001 내지 2 중량 %, 당류 0.001 내지 20 중량 %, 유기산류 0.001 내지 10 중량 %, 적량의 감미제 및 향료 등을 첨가한 알러지성 질환 및 비알러지성 염증질환의 예방 및 개선을 위한 건강음료 조성물을 제공한다.

본 발명의 상기 생약 추출물은 알러지성 질환 및 비알러지성 염증질환의 예방 및 개선 등의 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다.

건강식품용으로 개발하기 위하여 본 발명의 상기 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어 각종 식품류, 음료류, 껌류, 비타민 복합제, 건강보조식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 씹어먹는 정제, 캡슐 또는 음료 형태로 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 추출물은 조제분유, 성장기용 조제분유, 성장기용 조제식( 이유식) 등의 소·유아용 식품에 함유되어 알러지성 질환 및 비알러지성 염증질환을 예방하거나 개선시킬 수 있다.

이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 전체 식품 중량의 0.1 내지 95 중량 %, 바람직하게는 1 내지 80 중량 %로 가할 수 있으며, 건강 기능 음료 조성물은 100㎖를 기준으로 1 ~ 30g, 바람직하게는 3 ~ 10g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 크실리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 1~20g, 바람직하게는 약 5~12g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 다래추출물의 제조

(1-1) 물 용매를 이용한 열수추출법

경동시장의 한약재상에서 건조된 다래(미후도, Actinidia arguta), 취다래(A. kolomikta), 개다래(A. polygama) 및 다래의 줄기(미후등)를 구입하여 실험에 사용하였다. 분쇄한 상태의 다래를 100 g을 1 리터의 증류수에 가하여 잘 교반한 다음 90 내지 95℃를 유지하는 추출온도에서 3시간 동안 환류 추출한 후 여액을 분리하였고 55∼65℃로 생약추출물을 감압농축한 후, 동결건조시켜 생약조성물 다래, 취다래 및 개다래 분말 엑스 15.6g, 16.2g 및 17.0g과 다래 줄기 분말 엑스 10.4g을 얻었다.

(1-2) 물-알콜 혼합용매를 이용한 열수추출법

상기 실시예 1-1과 같이 분쇄된 다래 100 g에 1 리터의 30 %, 50 %, 70 % 에탄올 수용액을 가해 잘 교반한 다음, 열을 가해 70 내지 90℃를 유지하는 추출온도에서 3시간 동안 환류 추출한 후 여액을 분리하였고 55∼65℃에서 생약추출물을 감압농축한 후, 동결건조시켜 생약조성물 분말 엑스 11g-13g을 얻었다.

실시예 2. 다래의 극성용매 및 비극성용매 가용 추출물의 제조

상기 실시예에서 제조된 열수추출물을 유기 용매를 이용하여 분획하였다.

(2-1) 클로로포름 가용성 분획 분리

상기 실시예 1의 다래 조추출물 5g을 50 ㎖의 증류수에 녹인 후에 클로로포름 50 ㎖와 함께 분별 깔때기(separatory funnel)에 넣어서 강하게 섞은 후에 클로로포름 불용성층(수층)과 클로로포름 가용성층을 분리하였다. 다시 클로로포름 불용성층(수층)에 클로로포름 50 ㎖을 가한 후, 혼합하고 분획하여 클로로포름 불용성 분획 및 가용성 분획을 수집하였다.

(2-2) 에틸아세테이트 가용성 분획 분리

상기 클로로포름 불용성 분획(수층)에 에틸아세테이트 50 ㎖을 가하여 섞은 후에 에틸아세테이트 가용성 분획 및 불용성 분획을 분리하고, 추가로 에틸아세테이트 불용성 분획(수층)에 에틸아세테이트 50 ㎖을 넣어서 혼합 후, 분획하여 에틸아세테이트 가용성 분획 및 불용성 분획(수층)을 수집하였다.

상기 클로로포름 가용성 분획, 에틸아세테이트 가용성 분획 및 남은 수층을 감압 농축한 후에 동결건조하여 클로로포름 분획 0.34 g, 에틸아세테이트 분획 0.05 g, 물 분획 4.61 g을 얻어 시료로 사용하였다.

실시예 3. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용한 다래 추출물 분획

상기 실시예 (2-2)의 에틸아세테이트 가용추출물에 대하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Daisogel IR-60-W-40:63 mm)를 수행하였는데, 전개용매로는 클로로포름:메탄올:물 혼합용매 ([1]90:11:1, [2]60:10:1, [3]60:20:2) 및 메탄올[4]을 사용하였고, 시간당 300㎖로 수행하여 4 개 추가 분획물을 얻었다.

2,784 mg의 에틸아세테이트 분획으로부터 얻어진 각 분획은 [1] 2,381 mg, [2] 135 mg, [3] 148 mg, [4] 98 mg 이었다.

상기 다래 열수추출물, 에틸아세테이트 가용추출물 및 각 분획물을 사용하여 TLC(TLC plate: Merck사, 전개용매 : 클로로포름:메탄올:물 = 9:5:1)를 실시하였다(도 1a 참조). 도 1a에서 레인 1은 다래 열수 추출물이고, 레인 2는 다래 에틸아세테이트 분획이고, 레인 3은 다래 추출물 실리카겔 분획[4], 레인 4는 다래 추출물 실리카겔 분획[3], 레인 5 는 다래 추출물 실리카겔 분획[2], 레인 6은 다래 추출물 실리카겔 분획[1] 이다.

그리고, 실리카겔 분획 [1] 및 [2]에 대하여 2D-TLC를 실시하였으며. 1차 전개용매로는 클로로포름:메탄올:물 = 9:5:1, 2차 전개용매로는 클로로포름:아세톤:물 = 3:8:0.5를 사용하여 실시하였다(도 1b 및 1c 참조).

실험예 1. 다래추출물에 의한 U266B1 세포주의 IgE 생산 억제

(1-1) 다래 추출물의 효능 비교

IgE를 생산하는 인간 B cell 세포주인 U266B1 세포(lymphoblastoma 세포주)를 사용하여 다래 추출물에 의한 IgE 생산의 억제 효능을 확인하였다. U266B1 세포(American Type Culture Collection, Manassas, VA)를 RPMI-1640 배지(15 % FBS, 2 mM L-glutamine, 10 mM HEPES, 1 mM sodium pyriuvate, 50 ㎍ streptomycin, 100 U/㎖ penicillin 첨가)가 담긴 24-웰 배양 플레이트에서 37 ℃, 5 % CO₂ 의 환경에서 배양하였다. 준비된 세포를 다시 2×10⁵ 세포/웰의 농도로 조정을 한 후, 먼저 LPS(2㎍/㎖)로 처리하고 실시예 (1-1)과 (1-2)에서 준비된 다래열수추출물을 각각 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하였고 대조군에는 덱사메타손(Dexamethasone, 2 μM) 또는 배지(RPMI-1640)를 처리하였다. 위와 동일한 배양 조건에서 7일간 배양한 후에, 배지의 IgE 농도를 ELISA 방법(PharMingen; San Diego, CA)으로 측정하였다.

표 1에서 다래, 개다래, 취다래의 열수 추출물 모두가 대조약물인 덱사메타손만큼 IgE 생산 억제효과를 보였다. 또한, 에탄올 수용액을 이용한 열수 추출물의 경우 70% 에탄올 수용액에서 가장 강한 활성을 나타내었다. 다래 줄기의 열수 추출물 또한 다래 추출물과 유사한 정도의 효능을 보였다.

LPS 자극	처리	IgE(IU/㎖)
-	배지	187.8 ±8.4
+	배지	392.9 ±3.4
+	다래 열수추출물	228.8 ±7.1
+	개다래 열수추출물	233.2 ±5.8
+	취다래 열수추출물	211.7 ±7.9
+	다래 줄기 열수추출물	241.5 ±5.8
+	30% 에탄올 열수추출물	306.2 ±16.5
+	50% 에탄올 열수추출물	266.8 ±17.0
+	70% 에탄올 열수추출물	201.9 ±27.6
+	덱사메타손	203.6 ±30.9

(1-2) 다래의 극성용매 및 비극성용매 가용 추출물의 효능 비교

상기 실시예 2에서 준비된 클로로포름 분획, 에틸아세테이트 분획과 물 분획에 의한 U266B1 세포의 IgE 생산 억제 효능을 비교하기 위하여, 상기 실험예 (1-1)과 동일한 실험을 수행하였다. 클로로포름 분획, 에틸아세테이트 분획과 물 분획은 모두 30 ㎍/㎖ 농도로 U266B1 세포주에 처리하였다. 표 2에서 다래 열수 추출물의 에틸아세테이트 분획에서 덱사메타손보다 강한 IgE 생산 억제 효능이 나타났다.

LPS 자극	처리	IgE (IU/㎖)
-	배지	117.4±7.6
+	배지	212.5 ±11.8
+	다래 열수추출물	151.7 ±11.9
+	클로로포름 분획	206.7 ±15.6
+	에틸아세테이트 분획	123.3 ±8.1
+	물 분획	218.9 ±13.3
+	덱사메타손	138.9 ±2.1

(1-3) 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용한 추출물 분획의 효능 비교

실시예 2에서 준비된 실리카겔 컬럼 크로마토그라피 분획[1] 내지 [4]에 의한 U266B1 세포부의 IgE 생산 억제 효능을 비교하기 위해서 실험예 1-1과 동일한 실험을 수행하였다. 실리카겔 컬럼 크로마토그라피 분획[1] 내지 [4]은 모두 10 ㎍/㎖ 농도로 U266B1 세포주에 처리하였다.

표 3에서 실리카겔 분획 [1]과 [2]에서 활성이 나타나고 있다.

LPS 자극	처리	IgE (IU/㎖)
-	배지	379.7 ±13.2
+	배지	540.4 ±35.1
+	에틸아세테이트 분획	298.1 ±9.7
+	실리카겔 분획 1	293.5 ±12.5
+	실리카겔 분획 2	307.6 ±24.1
+	실리카겔 분획 3	453.1 ±17.3
+	실리카겔 분획 4	396.9 ±26.8
+	덱사메타손	277.6 ±12.4

실험예 2. OVA-감작 마우스 모델에서 다래 추출물의 항알러지 효능 실험

(2-1) 흰자위알부민 감작 마우스 모델 (Ovalbumin-sensitized mouse model) 준비

흰자위알부민 감작 마우스 모델은 알러지의 동물 모델로 많이 사용되는 동물 실험 모델이다. 6 주령의 BALB/c 마우스 암컷(서울대 동물 실험 센타)을 1주일간 환경에 적응하도록 하였다. 7 주령 째에 20 ㎍의 흰자위알부민(OVA, chicken egg albumin, crude grade V; Sigma사)과 2.25 mg의 알루미늄 하이드록사이드 (ImujectAlum; Pierce사)를 함께 섞어서 100 ㎕의 에멀젼 상태로 만든 다음 마우스 에 복강 주사하고 부스팅을 위해 14일 째에 다시 한번 주사하였다.

부스팅을 한 후 30마리의 마우스를 3 군으로 나누어서 실시예(1-1)에서 준비된 다래 열수추출물(300㎍/mouse/day), 덱사메타손(10 ㎍/mouse/day), 음용수(100 ㎕/mouse/day)를 11일간 매일 구강 투여하였다. 25일째에 마우스를 희생한 다음 혈청과 비장(spleen)을 채취하였다.

(2-2) 혈청 흰자위알부민-특이 IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b 농도 분석

위에서 채취된 혈청에서 흰자위알부민 특이(ovalbumin-specific) IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b의 농도를 ELISA 방법(PharMingen사)으로 측정하였다. 표 4는 정상마우스의 각 항체 농도에 대한 흰자위알부민 감작 마우스의 각 항체의 상대적인 농도를 보여 주고 있다. 다래 열수 추출물을 복용한 마우스에서 흰자위알부민에 대한 IgE가 1/3 수준 이하로 감소되었고 알러지에 관여하는 또 다른 항체인 IgG1도 유의하게 감소하였다. 덱사메타손을 복용한 마우스에서도 비슷하게 IgE와 IgG1이 감소되었다. 하지만 세포성 면역에 관여하는 IgG2a의 경우 다래열수추출물을 복용한 마우스에서는 2배 이상 증가하였으나 덱사메타손을 복용한 마우스의 혈청에서는 증가하지 않았다.

이는 다래 추출물이 알러지를 유발하는 IgE를 감소시키는 동시에 정상적인 면역 작용에 관여하는 IgG2a를 증가시킴으로써 알러지 체질을 근원적으로 개선할 수 있음을 보여 준다.

	정상마우스	음용수	다래추출물	덱사메타손
IgE	1.0 ±0.0	7.6 ±0.2	2.2 ±0.5	2.0 ±0.6
IgG1	1.0 ±0.0	5.1 ±0.1	3.3 ±0.3	3.1 ±0.3
IgG2a	1.0 ±0.1	2.1 ±0.4	4.6 ±0.3	1.9 ±0.4
IgG2b	1.0 ±0.0	1.4 ±0.1	1.5 ±0.2	1.2 ±0.1

(2-3) 비장 세포의 사이토카인 발현 분석

다래 추출물을 복용한 마우스의 면역 세포에서 사이토카인의 발현 패턴을 분석하기 위해서 실험예(2-1)에서 준비된 비장으로부터 아래와 같이 비장세포를 준비하였다.

각각의 비장을 하나로 모은 다음 무균 상태에서 부수어 균질화시켰다. RPMI-1640 배지를 부어 헹군 다음, 나일론 망(60 ㎛ pore size)으로 큰 덩어리를 걸러내고 1500 rpm에서 5분 원심 분리하여 침전된 세포만 분리한 다음 RPMI 1640(FBS 10% 첨가) 배지에 첨가하였다. 이렇게 준비된 비장 세포를 24 웰-플레이트에 최종 농도가 5×10⁶ 세포/㎖/웰이 되도록 접종하였다. 배양액에 흰자위알부민(100 ㎍/㎖)을 첨가한 후 37℃에서 3 일간 CO₂ 인큐베이터에서 배양하였고, 배양이 끝난 후에 배양액을 채취하여 ELISA 방법으로 알러지와 관련있는 사이토카인(IL-4, IL-5, IL-12, 인터페론-감마)의 농도를 측정하였다.

표 5에서 다래 추출물을 복용한 마우스의 비장세포는 알러지를 유발하는 Th2 사이토카인인 IL-4와 IL-5를 감소시키고 알러지를 억제하는 Th1 사이토카인인 IL-12와 인터페론-감마를 현저히 증가시켰다. 덱사메타손의 경우는 Th1 및 Th2 사이 토카인 모두를 억제하는 것으로 나타났다.

이 결과는 덱사메타손은 전반적인 면역을 억제하는 반면 다래 추출물은 알러지를 유발하는 Th2 사이토카인을 선택적으로 억제하여 알러지 질환의 예방 및 개선에 도움을 줄 수 있음을 확인하였다.

	정상마우스	OVA 감작 마우스
		음용수	다래추출물	덱사메타손
IL-4	21.6 ±11.8	159.5 ±15.7	76.5 ±10.0	23.1 ±8.7
IL-5	0.5 ±0.8	2573.6 ±42.0	1638.3 ±33.3	884.1 ±80.7
IL-12	1626.0 ±58.5	906.2 ±66.0	1321.2 ±92.4	297.7 ±16.4
인터페론-감마	14.1 ±19.6	1016.0 ±25.6	1688.2 ±15.8	470.5 ±38.6
단위: pg/㎖

실험예 3. 인간 PBMC에서 Th1/Th2 사이토카인의 조절

인간 말초 혈액 단핵세포(PBMCs)는 IgE의 고 기저 혈청수치를 가진 알러지 환자의 총혈액으로부터 피콜 하이파큐를 이용하여 준비하였고, 10 % FBS를 첨가한 RPMI 배지에서 배양했다. PBMCs는 실시예(1-1)에서 준비된 다래추출물 100 ㎍/㎖와 식물성 혈구응집소(phytohemagglutinin, PHA) 5㎍/㎖와 함께 처리되었다. 이후 5 % CO₂ 농도와 37℃ 환경에서 48시간 배양 후, 세포 배양 상층액 내 IL-5, IL-13, IL-10 과 인터페론-감마의 수치를 ELISA를 사용하여 측정하였다.

표 6은 다래추출물이 Th2 사이토카인의 혈청내 수치를 유의적으로 낮춤을 보여준다. IL-5 및 IL-13의 수치는 각각 52 % 및 47 %가 낮춰졌다. 반면 인터페론-감마 즉, Th1 사이토카인의 혈청내 수치는 3.2배 증가했다. 이를 통해서 다래추출물 이 Th1 사이토카인의 생산을 증가시킬 수 있고, 동시에 Th2 사이토카인의 생산을 감소시킬 수 있음을 알 수 있었다. Th2 사이토카인의 하향조절은 IgE 합성과 알러지성 염증의 완화에 기여할 수 있다는 것이 예전에 보고된 바 있다.

PHA 자극	처리	IL-5	IL-13	IL-10	인터페론-감마
-	-	92.2 ±6.4	0 ±0	0 ±0	53.3 ±30.2
+	배지	518.1 ±120.3	667.8 ±46.5	480.3 ±15.3	334.1 ±277.7
+	다래추출물	248.5 ±62.0	355.7 ±93.1	570.2 ±56.3	1067 ±345.1
단위: pg/㎖

실험예 4. 인간 혈청내 IgE의 수치 감소

다래추출물이 인간 혈청내 IgE 수치를 감소시키는지를 관찰하기 위해서, 두 명의 알러지 환자(각각 알러지 비염과 알러지 피부염을 가진 환자 K와 E)는 다래추출물(건조중량으로 1g)을 42 일동안 매일 경구 복용했다. 그들의 IgE 혈청 수치는 매 두주마다 ELISA로 측정되었다.

실험 결과, 두 명의 환자의 IgE 혈청내 수치는 지속적으로 감소하여 42일 후에는 약 3분의 2이상 감소했으며, 시험이 진행되는 동안 환자 E의 피부염 증상도 개선된 것으로 나타났다(표 7 참조).

	1 일	14 일	28 일	42 일
알러지 환자 K	950.8 IU/㎖	855.6 IU/㎖	679.1 IU/㎖	266.1 IU/㎖
알러지 환자 E	278.3 IU/㎖	236.0 IU/㎖	189.2 IU/㎖	95.0 IU/㎖

실험예 5. 생쥐 복막 비만세포로부터 히스타민의 방출 저해

비만세포(mast cell)로부터 히스타민의 방출은 알러지 반응의 중요한 원인 중 하나이다. 그러므로 다래추출물의 비만세포로부터 히스타민 방출에 대한 효과가 관찰되었다.

각각의 생쥐는 에테르로 마취되었으며, 복막강에 0.1 % 젤라틴을 함유한 티로이드 완충용액 B(Tyrode buffer B, NaCl, glucose, NaHCO₃, KCl, NaH₂PO₄) 20 ㎖를 주입했다. 그리고 나서 복부를 약 90초 동안 부드럽게 마사지했다. 복막강을 주의깊게 개방한 후, 복막 세포를 함유하는 용액을 파스테르 피펫으로 흡입했다. 그리고나서 복막세포는 실내온도에서 10분 동안 150 x g의 속도로 침전시킨 후 티로이드 완충용액 B에 다시 재부유시켰다. 비만세포는 여트의 방법(Yurt RW. et al., J. Biol. Chem., 252, pp518-521, 1977)으로 생쥐 복막세포의 주요 구성성분으로부터 분리되었다. 1 ㎖의 티로이드 완충용액 B에 현탁된 복막 세포는 0.225 g/㎖ 메트리자마이드(metrizamide, 밀도 1.120 g/㎖)로 충진해 400 ×g 속도로 15분 동안 실온에서 원심분리했다. 완충용액-메트리자마이드 경계면에 남아있는 세포는 흡입되고 폐기되었다. 펠렛 속의 세포는 세척 후 칼슘을 함유한 티로이드 완충용액 A 1 ㎖내에 재현탁되었다. 티로이드 완충용액 B 1 ㎖ 내 현탁된 복막세포는 0.225g/㎖(밀도 1.120g/㎖)의 메트리자마이트 2 ㎖로 충진해 400 ×g 속도로 15분 동안 실온에서 원심분리했다. 펠렛 속의 세포는 세척 후 칼슘을 함유한 티로이드 완충용액 A 1 ㎖내에 재현탁되었다.

비만 세포는 24-웰 배양플레이트의 각 웰당 0.4 ㎖의 배양액에 2 × 10⁵ 세포/웰의 양으로 첨가되었다. 세포는 37 ℃에서 하룻밤동안 배양되었고, 항-DNP24-BSA IgE 0.5 ㎍/㎖로 감작화 되었다. IgE로 세포를 감작화시킨 후, 배지를 제거하고, 세포는 PIPES 완충용액 0.5 ㎖로 두 번 세척하고, PIPES 완충용액(대조군) 200 ㎕, 크로몰린(10^-4M) 또는 다래추출물(100 ㎍/㎖)을 첨가하여 37 ℃에서 10분 동안 전처리배양했다. 비만세포는 항원인 DNP24-BSA 20 ng/㎖로 30분 동안 감작화되었고 배지로 방출된 히스타민은 ELISA로 측정되었다(ALerCHEK사).

히스타민 방출 저해율은 하기 수학식으로 계산되었다:

저해율(%) = 100 ×(PIPES 완충용액 처리시 방출된 히스타민양-약제 처리시 방출된 히스타민양)/(PIPES 완충용액 처리시 방출된 히스타민양-IgE로 감작하지 않고 약제도 처리하지 않은 상태로 배양시 방출된 히스타민양)

표 8은 다래추출물이 100 ㎍/㎖에서 대략 44 %까지 히스타민 방출을 저해했음을 나타내고 있으며, 양성 대조군으로서 사용된 크로몰린만큼 효과적임을 알 수 있었다.

처리	크로몰린(대조군)	다래 추출물
저해율(%)	52 ±13	44 ±10

실험예 6. 아라키돈산으로 유도된 마우스 귀의 부종에 대한 항염증 효과

마우스(8주령 수컷 BALB/c)를 자유롭게 물을 먹을 수 있게 하여 18시간동안 절식한 후 15마리를 3개의 그룹으로 나눴다. 염증은 각 마우스의 오른쪽 귀에 아라키돈산(0.5 ㎎/20 ㎕ 아세톤)의 국소적 적용에 의해 유도되었다. 왼쪽 귀는 음성대조군으로 사용되었으며 부형제(20 ㎕ 아세톤)가 투여되었다. 다래추출물(200 ㎎/㎏ in water) 투여군에는 아라키돈산 적용 1시간전에 경구 투약했다. 양성대조군 그룹에는 아라키돈산 적용 1시간전에 인도메타신(10 ㎎/㎏, 경구투여)이 투여되었다. 염증은 1시간동안 수반되었고 그 이후 실험동물은 희생되었다. 각 귀로부터 6mm 직경의 평원반 단편을 얻어 무게를 측정했다. 어떤 처리도 받지 않은 대조군 마우스의 부종지수는 7.2 ±1.1 ㎎이었다. 그러나 실험동물이 다래추출물로 처리되었을때 부종지수는 2.7 ±0.8 ㎎으로 62.5 %가 감소했다. 인도메타신으로 처리된 양성대조군 귀는 무처리 귀와 비교해 부종 지수가 81.9 % 감소했다(표 9).

이러한 결과로, 다래추출물이 이 실험모델에서 인도메타신과 대등한 항염증 활성을 가지고 있음을 확인하였다.

처리	부종지수(㎎)	저해율(%)
대조군	7.2 ±1.1	-
다래 추출물	2.7 ±0.8	62.5
인도메타신	1.3 ±0.3	81.9

실험예 7. 아토피성 피부염 마우스 모델 실험

알러지성 질환을 가진 동물에서 항알러지 효능을 확인하기 위하여 아토피성 피부염 동물 모델로 많이 사용되고 있는 Nc/Nga 마우스를 이용하여 실험을 실시하였다. 다수의 아토피성 피부염 동물 실험에 사용되어 온 Nc/Nga 마우스는 인터페론 감마의 생산량이 적어 Th1 면역이 억제되고 Th2 사이토카인과 IgE이 과잉 생산되어 일반적인 환경에서 사육될 경우 생후 8주령부터 자연적으로 피부염이 발생하는 마우스 모델로서 인간의 아토피성 피부염 연구에 적합한 모델로 알려져 있다(Vestergaar CH. et al., J. Clin. Invest., 104, pp1097-1105, 1999).

실험을 위하여 7 주령 Nc/Nga 암컷 마우스 15마리(SLC; Shizuoka, Japan)를 세 군으로 나눈 후 1주일간 새 환경에 적응시켰다. 8주령 때부터 16주령 때까지 처치군에는 실시예(1-1)에서 준비된 다래 추출물(300㎍/mouse/day)을 매일 구강 투여하였고 대조군에는 덱사메타손(10㎍/mouse/day)과 음용수(100㎕/mouse/day)를 구강 투여 하였다. 12주째와 14주째에 피부염 증상의 진행 정도를 비교하기 위하여 마우스의 긁는 횟수(20분당 긁는 시간)를 측정하였고 16주에는 마우스를 희생하여 혈 액 내의 IgE, IgG1, IgG2a를 ELISA 방법을 이용하여 정량하였다. 또한 Th1/Th2 사이토카인의 생산량을 비교하기 위하여 각각의 마우스로부터 비장세포(splenocyte)를 일반적인 방법으로 준비한 후 24-웰 배양 플레이트(5×10⁶ cells/㎖/well)에 옮겼다. 그리고 ConA(1 ㎍/㎖)를 처리하여 3일간 배양한 후 ELISA 방법을 이용하여 배양액 속의 IL-4, IL-5, IL-12와 인터페론 감마를 정량하였다.

실험 결과 12주, 14주째에 마우스의 긁는 정도를 비교하였을 때 다래 추출물이 스테로이드성 소염제인 덱사메타손만큼 마우스의 가려움 증상을 억제하고 있음을 알 수 있었다(도 2a: 12 주째 관찰 결과, 도 2b: 14주째 관찰 결과 참조). 표 10는 다래 추출물을 투여한 마우스 혈액 내 IgE 농도가 현저하게 감소하였음을 보여 준다. 표 11에서 다래 추출물을 투여한 마우스로부터 준비된 비장세포의 IL-4와 IL-5 생산량이 현저히 감소하였고 인터페론 감마와 IL-12의 생산량은 뚜렷이 증가하였다. 다래추출물은 덱사메타손과 유사하게 가려움 증상의 개선, 혈액내 IgE 농도 저하, 비장세포의 Th2 사이토카인 생산 억제 효능을 보였으나 덱사메타손과는 달리 알러지의 억제에 기여하는 Th1 사이토카인 즉 IL-12와 인터페론 감마의 생산을 유의하게 증가시켰다.

이를 통해, 다래 추출물이 강한 면역억제제인 스테로이드성 약물과는 달리 Th2 면역을 억제하는 동시에 Th1 면역력을 증가시킴으로써 알러지 증상을 개선하고 예방할 수 있음을 확인하였다.

	IgE	IgG1	IgG2a
음용수	1572.9 ±77.4	242.2 ±14.2	177.5 ±17.2
다래열수추출물	699.0 ±348.5	263.4 ±21.1	263.5 ±16.2
덱사메타손	130.0 ±55.3	247.3 ±10.8	148.0 ±14.8
단위: pg/㎖

	IL-4	IL-5	IL-12	인터페론 감마
음용수	151.9 ±2.2	778.3 ±34.1	1925.7 ±134.5	10407.5 ±130.8
다래열수추출물	24.1 ±5.2	248.0 ±17.8	2346.2 ±98.4	15847.9 ±1693.1
덱사메타손	42.7 ±19.4	646.5 ±51.7	201.2 ±12.1	10096.4 ±192.4
단위: ng/㎖

실험예 8. 독성 실험

마우스를 사용하여 다래 추출물의 반복독성 시험을 실시하였다. 암컷 Balb/c 마우스를 열 마리씩 두 군으로 나누어서 매일 150 mg/kg 체중의 용량으로 다래추출물을 4 주간 투여하였고 대조군은 물을 투여하였다. 독성의 징후는 체중의 변화, 혈액학적 분석, 조직검사를 통해서 4 주 동안 확인하였다.

실험 결과, 다래 추출물은 그 투여 가능 용량인 150㎎/㎏에서 사망 예를 전혀 관찰할 수 없었으며, 체중 증가, 사료 섭취량, 조직검사, 혈액검사 등에서 전혀 유의한 이상을 발견할 수 없어 안전한 약물임을 확인할 수 있었다.

(1) 체중 및 육안 관찰: 어떠한 비정상적인 체중의 변화도 관찰되지 않았음.

(2) 혈액학 검사: WBC, 림프구(lymphocyte), 단핵구(monocyte), 호중구 (neutrophil), 호산구(eosinophil), 호염구(basophil), RBC, 헤모글로빈 (hemoglobin), 혈소판(platelet)의 수에 있어서 어떠한 이상 징후도 발견되지 않았 음.

(3) 혈청생화학 검사: 혈청을 이용한 생화학 검사 결과 AST, ALT, LDH, 빌리루빈(bilirubin), 크레아티닌(creatinine), 글루코즈(glucose), 콜레스테롤 (cholesterol), 미네랄(minerals), 알부민(albumin), BUN, 리파아제(lipase), 아밀라제(amylase)의 수치에 있어서 어떤 이상 징후도 보이지 않았음.

(4) 조직 검사: 신장, 비장, 간, 흉선의 조직에서 어떤 이상도 발견되지 않았음.

하기에 상기 건강 기능 식품의 제제예를 설명하나 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 건강식품의 제조

실시예 1-1의 다래 추출물..................... 1000 ㎎

비타민 혼합물 .............................. 20 g

비타민 A 아세테이트......................... 70 ㎍

비타민 E ................................... 1 ㎎

비타민 B1 .................................. 0.13 ㎎

비타민 B2 ................................. 0.15 ㎎

비타민 B6 ................................. 0.5 ㎎

비타민 B12 ................................. 0.2 ㎍

비타민 C ................................. 10 ㎎

비오틴 ................................... 10 ㎍

니코틴산아미드 ........................... 1.7 ㎎

엽산 ..................................... 50 ㎍

판토텐산 칼슘 ............................. 0.5 ㎎

무기질 혼합물 ............................. 적량

황산제1철 ................................. 1.75 ㎎

산화아연 .................................. 0.82㎎

탄산마그네슘 .............................. 25.3 ㎎

제1인산칼륨 ............................... 15 ㎎

제2인산칼슘 ............................... 55 ㎎

구연산칼륨 ................................ 90 ㎎

탄산칼슘 .................................. 100 ㎎

염화마그네슘 .............................. 24.8 ㎎

상기 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조 방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 2. 건강음료의 제조

실시예 1-2의 다래 추출물.................... 1000 ㎎

구연산...................................... 100 ㎎

올리고당 ................................... 100 g

매실농축액 ................................. 2 g

타우린 ..................................... 1g

정제수를 가하여 전체 ....................... 900㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

본 발명의 다래과실추출물은 Th2 사이토카인 및 IgE의 혈청 내 수치를 낮춰 비만세포로부터 히스타민의 방출을 저해하고 염증반응을 억제시키므로 과민증, 알러지성 비염, 천식, 아토피성 피부염, 식품알러지 및 두드러기와 같은 알러지성 질환 및 비알러지성 염증질환의 예방을 위한 건강기능식품용 조성물로 사용될 수 있다.

Claims (9)

1. 다래 (Actinidia arguta) 과실 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매 가용추출물 및 식품학적으로 첨가 가능한 식품보조첨가제를 포함하는 알러지 질환의 예방 및 개선용 건강 기능 식품.
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