RS57850B1 - Stabilizovane formulacije koje sadrže antitela protiv interleukin-4 receptora (il-4r) - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Ovaj se pronalazak odnosi na oblast formulacija terapijskog antitela. Preciznije, ovaj se pronalazak odnosi na oblast farmaceutskih formulacija koje obuhvataju humano antitelo koje se specifično veže na humani interleukin-4 receptor.

STANJE TEHNIKE

[0002] Terapijski makromolekuli (npr., antitela) moraju biti formulisana na način koji ne samo da čini te molekule pogodnim za isporuku pacijentima, već takođe zadržava njihovu stabilnost tokom skladištenja i naknadne upotrebe. Na primer, terapijska antitela utečnom rastvoru su sklona razgradnji, agregraciji ili neželjenim hemijskim modifikacijama osim ako rastvor nije propisno formulisan. Stabilnost antitela u tečnoj formulaciji zavisi ne samo od vrste ekscipijenata korišćenih u toj formulaciji, već takođe od količina i proporcija ekscipijenata jednu u odnosu na drugu. Pored toga, druga razmatranja nezavisno od stabilnosti moraju biti uzeta u obzir prilikom pripremanja tečne formulacije antitela. Primeri takvih dodatnih razmatranja obuhvataju viskoznost rastvora i koncentraciju antitela koje je moguće smestiti putem date formulacije, i viezuelni kvalitet ili privlačnost formulacije. Dakle, kada se formuliše terapijsko antitelo, neophodno je posvetiti veliku pažnju da se dođe do formulacije koja ostaje stabilna, sadrži odgovarajuću koncentraciju antitela, i poseduje pogodnu viskoznost kao i druga svojstva koja omogućavaju da ta formulacija bude praktično isporučena pacijentima.

[0003] Antitela za humani interleukin-4 receptor alfa (hIL-4Rα) su jedan primer terapijski relevantnog makromolekula koji zahteva propisnu formulaciju. Anti-hIL-4Rα antitela su hemijski korisna za lečenje ili sprečvanje bolesti kao što je atopični dermatitis i alergijska astma, i druga stanja. Primeri anti-IL-4Rα antitela su opisani, inter alia, u US patentima br. 7,605,237; 7,608,693; 7,465,450; i 7,186,809; i US prijavama patenata br. 2010-0047254 i 2010-0021476. Wang et al, J Pharm Sci, 2007, 96:1-26, pregleda strukturu antitela, nestabilnost i formulaciju. Iako su anti-hIL-4Rα antitela poznata, ostaje potreba u ovoj oblasti za novim farmaceutskim formulacijama koje obuhvataju anti-hIL-4Rα antitela koja su dovoljno stabilna i pogodna za isporuku pacijentima.

Kratak opis

[0004] Ovaj pronalazak zadovoljava gore pomenutu potrebu da se dobiju farmaceutske formulacije koje sadrže humano antitelo koje se specifično veže na humani interleukin-4 receptor alfa (hIL-4Rα).

[0005] U jednom varijantnom rešenju, data je stabilna tečna farmaceutska formulacija koja obuhvata:

(i) humano antitelo koje se specifično veže na humani interleukin-4 receptor alfa (hIL-4Rα) u koncentraciji od najviše 200 mg/ml, pri čemu pomenuto humano antitelo koje se specifično veže na hIL-4R obuhvata dva teška lanca i dva laka lanca, svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR: 1 i konstantan region teškog lanca koji sadrže domene CH1, CH2 i CH3, i svaki laki lanac koji obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR:5 i konstantni region lakog lanca;

(ii) acetat u koncentraciji od 12,5 mM ± 2 mM;

(iii) histidin u koncentraciji od 20 mM ± 3 mM;

(iv) saharoza u koncentraciji od 5% w/v ± 0,75% w/v;

(v) polisorbat 20 ili polisorbat 80 u koncentraciji od 0,2% w/v ± 0,03% w/v; i

(vi) arginin u koncentraciji od 25 mM ± 3,75 mM ili u koncentraciji od 50 mM ± 7,5 mM;

pri čemu ta formulacija ima pH od 5,6 do 6,2, i

pri čemu se barem 90% prirodnog oblika antitela oporavlja posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

[0006] Kod jednog izvođenja, antitelo ima koncentraciju od oko 150 mg/ml ± 50 mg/ml. Kod drugog izvođenja, antitelo je dobijeno u koncentraciji od oko 150 mg/ml ± 15 mg/ml. U specifičnom izvođenju, antitelo je obezbeđeno u koncentraciji od oko 150 mg/ml.

[0007] Kod tog antitela (a) svaki teški lanac antitela obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) koji obuhvata regione 1, 2 i 3 za određivanje komplementarnosti teškog lanca (HCDR1-HCDR2-HCDR3) svaki obuhvata sekvencu SEK ID BR:2, SEK ID BR:3 i SEK ID BR:4, prema opisanom redosledu; i (b) svaki laki lanac tog antitela obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) koji obuhvata regione 1, 2 i 3 za određivanje komplementarnosti lakog lanca (LCDR1-LCDR2-LCDR3) svaki obuhvata sekvencu SEK ID BR:6, SEK ID BR:7 and SEK ID BR:8, prema opisanom redosledu. Kod tog antitela svaki teški lanac obuhvata HCVR koji obuhvata sekvencu amino kisleine iz SEK ID BR:1 i svaki laki lanac obuhvvata SEK ID BR:5, prema opisanom redosledu.

[0008] Kod jednog izvođenja, pH tečne formulacije je oko pH 5,9 ± 0,5. U specifičnom izvođenju, pH tečne formulacije je oko pH 5,9 ± 0,1. U jednom izvođenju, tečno farmaceutsko pufersko sredstvo obuhvata jedan ili više puferskih sredstava, koja mogu da puferuju oko pH 5,6 do oko pH 6,2.

[0009] Tečna farmaceutska formulacija obuhvata puferski sistem koji obuhvata barem dva puferska sredstva. Prvi pufer je acetatni pufer i drugi pufer je histidin pufer. Acetat je u koncentraciji od 12,5 mM ± 1,9 mM i histidin je u koncentraciji od 20 mM ± 3 mM.

[0010] Stabilna tečna farmaceutska formulacija koja se dobje obuhvata polisorbat 20 ili polisorbat 80 u koncentraciji od oko 0,2% ± 0,03% w/v (težine prema zapremini).

[0011] Stabilna tečna farmaceutska formulacija obuhvata saharozu kao toplotni stabilizator formulacije sa saharozom u koncentraciji od 5% w/v ± 0,75% w/v.

[0012] U jednom izvođenju, reduktor viskoznosti je arginin hidrohlorid. U specifičnom izvođenju, reduktor viskoznosti je L-arginin hidrohlorid.

[0013] Arginin je prisutan u stabilnoj tečnoj farmaceutskoj formulaciji u koncentraciji od 25 mM ± 3,75 mM ili u koncentraciji od 50 mM ± 7,5 mM. U specifičnom izvođenju, reduktor viskoznosti je L-arginin hidrohlorid.

[0014] U jednom izvođenju, viskoznost tečne farmaceutske formulacije je manje od ili jednako sa oko 35 ± 3,5 cPoaza. U jednom izvođenju, viskoznost je oko 21,5 ± 13,5 cPoaza, oko 11 ± 1,1 cPoaza ili oko 8,5 ± 0,85 cPoaza. U specifičnom izvođenju, viskoznost tečne farmaceutske formulacije je oko 8,5 ± 0,85 cPoaza.

[0015] U jednom izvođenju, osmolalnost tečne farmaceutske formulacije je manja od oko 450 mOsm/kg. U jednom izvođenju, osmolalnost tečne farmaceutske formulacije je oko 290 ± 20 mOsm/kg.

[0016] Barem 90% ili barem 95% prirodnog oblika od anti-hIL-4Rα antitela je oporavljena od tečne farmaceutske formulacije posle šest meseci skladištenja tečne farmaceutske formulacije na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini. U specifičnom izvođenju, barem 98% prirodnog oblika antitela je oporavljeno posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

[0017] U jednom izvođenju, barem 90% prirodni oblik antitela je oporavljen od tečne farmaceutske formulacije posle osam nedelja skladištenja na 45°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

[0018] U jednom izvođenju, manje od 45% antitela, koje se oporavlja iz tečne farmaceutske formulacije posle osam nedelja skladištenja na 45°C, je u kiselom obliku, kako je određeno katjonizmenjivačkom hromatografijom.

[0019] U jednom izvođenju, manje od oko 4% antitela, koliko je oporavljeno iz tečne farmaceutske formulacije posle šest meseci skladištenja na 25°C, je agregirano, kako je određeno izmenjivačkom hromatografijom sa ekskluzijom prema veličini.

[0020] U jednom varijantom rešenju, tečna farmaceutska formulacja je obezbeđena, obuhvata:

(i) 150 mg/ml ± 50 mg/ml humanog antitela koje se specifično veže na hIL-4Rα, pri čemu pomenuto antitelo obuhvata dva teška lanca i dva laka lanca, svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR: 1 i konstantni region testresg lanca koji obuhvata domene CH1, CH2 i CH3, i svaki laki lanac koji obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR:5 i konstantni region lakog lanca; (ii) 12,5 mM ± 2 mM acetat; (iii) 20 mM ± 3 mM histidin; (iv) 5% ± 0,75% saharoza; (v) 0,2% ± 0,03% polisorbat 20; i (vi) 25 mM ± 3,75 mM arginin, na pH od 5,9 ± 0,5, i

pri čemu barem 98% prirodnog oblika pomenutog antitela se oporavlja posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

[0021] U jednom izvođenju, tečna farmaceutska formulacija ima viskoznost od oko 8,5 ± 0,85 cPoaza do oko 11 ± 1,1 cPoaza. U specifičnom izvođenju, viskoznost tečne farmaceutske formulacije je oko 8,5 ± 0,85 cPoaza.

[0022] U jednom izvođenju, tečna farmaceutska formulacija je fiziološki izotonik. U jednom izvođenju, osmolalnost tečne farmaceutske formulacije je oko 290 ± 20 mOsm/kg.

[0023] Barem oko 98% od prirodnog oblika od anti-hIL4-Rα antitela je oporavljeno od tečne farmaceutske formulacije posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

[0024] U jednom izvođenju, barem oko 90% prirodnog oblika od anti-hIL4-Rα antitela je oporavljeno iz tečne farmaceutske formulacije posle osam nedelja skladištenja na 45°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

[0025] U jednom izvođenju, manje od oko 45% antitela, koje je oporavljeno od tečne farmaceutske formulacije posle osam nedelja skladištenja na 45°C, je kiselinski oblik, kako je određeno katjonizmenjivačkom hromatografijom.

[0026] U jednom izvođenju, manje od 4% antitela, koje se oporavlja iz tečne farmaceutske formulacije posle šest meseci skladištenja na 25°C, se agregira, kako je određeno izmenjivačkom hromatografijom sa ekskluzijom prema veličini.

[0027] U jednom varijantnom rešenju obezbeđena je stabilna tečna farmaceutska supstanca:

(i) 150 mg/ml ± 50 mg/ml humanog antitela koje se specifično veže na hIL-4Rα, pri čemu pomenuto antitelo obuhvata dva teška lanca i dva laka lanca, svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR: 1 i konstantni region teškog lanca koji obuhvata CH1, CH2 i CH3, i svaki laki lanac obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR:5 i konstantni region lakog lanca; (ii) 12,5 mM ± 2 mM acetat; (iii) 20 mM 63 mM histidin; (iv) 5% ± 0,75% saharoza; (v) 0,2% ± 0,03% polisorbat 80; i (vi) 25 mM ± 3,75 mM arginin, na pH od 5,9 ± 0,5, i

pri čemu barem 98% prirodnog oblika pomenutog antitela se oporavlja posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

[0028] U jednom varijantnom rešenju obezbeđena je stabilna farmaceutska supstanca:

(i) 175 mg/ml humanog antitela koje se specifično veže na hIL-4Rα, pri čemu pomenuto antitelo obuhvata dva teška lanca i dva laka lanca, svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR: 1 i konstantni region teškog lanca obuhvata domene CH1, CH2 i CH3, i svaki laki lanac obuhvata promenljivi region laki lanac (LCVR) obuhvataju sekvencu amino kiseline SEK ID BR:5 i konstantni region lakog lanca; (ii) 12,5 mM ± 2 mM acetat; (iii) 20 mM ± 3 mM histidin; (iv) 5% ± 0,75% saharoza; (v) 0,2% ± 0,03% polisorbat 20; i (vi) 50 mM ± 3,75 mM arginin, na pH od 5,9 ± 0,5, i

pri čemu barem 98% prirodnog oblika pomenutog antitela je oporavljeno posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

[0029] U jednom varijantnom rešenju obezbeđena je stabilna farmaceutska supstanca:

(i) 175 mg/ml humanog antitela koje se specifično veže na hIL-4Rα, pri čemu pomenuto antitelo obuhvata dva teška lanca i dva laka lanca, svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) obuhvata sekvencu amino kiseline iz SEK ID BR: 1 i konstantni region teškog lanca obuhvata domene CH1, CH2 i CH3, i svaki laki lanac obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR:5 i konstanti region lakog lanca; (ii) 12,5 mM ± 2 mM acetata; (iii) 20 mM ± 3 mM histidina; (iv) 5% ± 0,75% saharoze; (v) 0.2% ± 0,03% polisorbata 80; i (vi) 50 mM ± 3,75 mM arginina, na pH od 5,9 ± 0,5, i

pri čemu barem 98% prirodnog oblika pomenutog antitela je oporavljeno posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hormatografijom prema veličini.

[0030] Takođe je opisana dobijena stabilna izotonična tečna farmaceutska formulacija niske viskoznosti, koja sadrži barem 100 mg/ml stabilnog anti-hIL4-Rα antitela. U jednom izvođenju, antitelo je u koncentraciji od oko 150 mg/ml ± 50 mg/ml. U specifičnom izvođenju, ta koncentracija antitela je oko 150 mg/ml ± 15 mg/ml.

[0031] Antitelo obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR:1 i 2. Antitelo obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) i promenljivi region lakog lanca (LCVR), pri čemu kombinacija HCVR / LCVR obuhvata regione za određivanje komplementarnosti teškog i lakog lanca (HCDR1-HCDR2-HCDR3 / LCDR1-LCDR2-LCDR3), koji obuhvataju sekvence amino kiseline SEK ID BR:2 - 3 - 4 / SEK ID BR6 - 7 - 8, prema opisanom redosledu. To antitelo obuhvata HCVR i LCVR, od kojih svaki obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR:1 i SEK ID BR:5, prema opisanom redosledu.

[0032] U nekim primerima, ta formulacija ima viskoznost manju od 35 ± 3,.5 cPoaza, manju od 20 ± 2 cPoaza, manju od 15 ± 1.5 cPoaza, ili manju od 10 ± 1 cPoaza. U specifičnom primeru, tečna formulacija ima viskoznost od oko 8,5 ± 2,5 cPoaza.

[0033] U jednom primeru, formulacija ima osmolarnost koja je fiziološki kompatibilna. U specifičnom primeru, ta formulacija obuhvata osmolalnost od 290 ± 20 mOsm/kg.

[0034] U jednom primeru, to antitelo je stabilno tokom barem oko šest meseci na oko 5°C. U specifičnom primeru, barem oko 98% antitela zadržava prirodnu konformaciju na oko šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

[0035] U jednom primeru, antitelo je stabilno tokom barem oko osam nedelja skladištenja na oko 45°C. U specifičnom primeru, barem oko 90% tog antitela zadržava svoju prirodnu konformaciju na oko osam nedelja skladištenja na 45°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini. U specifičnom primeru, manje od oko 45% tog antitela obuhvata oblik koji ima pH vrednost kiseline na oko osam nedelja skladištenja na 45°C, kako je određeno katjonizmenjivačkom hromatografijom.

[0036] U jednom primeru, to antitelo je stabilno tokom barem oko šest meseci skladitšenja na oko 25°C. U specifičnom primeru, manje od oko 4% antitela obuhvata agregirani oblik na oko šest meseci skladištenja na 25°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

[0037] U jednom primeru ta formulacija obuhvata pufersko sredstvo i pH od oko pH 5,9 ± 0,5. U jednom primeru, pufersko srestvo obuhvata acetatno pufersko sredstvo i histidin pufersko sredstvo. U specifičnom izvođenju, acetat je u koncentraciji od 12,5 mM ± 1,9 mM i taj histidin je u koncentraciji od 20 mM ± 3 mM.

[0038] U jednom primeru, formulacija obuhvata organski korastvrarač u koncentraciji od oko 0,2% ± 0,03% do oko 1% ±0,15% w/v. U jednom primeru, organski korsatvarač je nejonski polimer koji obuhvata deo polioksietilena. U nekom primeru, organski korastvarač je bilo koji jedan ili više od korastvarača kao što je polisorbat 20, poloksamer 181 i polietilen glikol 3350. U specifičnom primeru, organski korastvarač je polisorbat 20 u koncentraciji od oko 0,2% ± 0,03% w/v.

[0039] U jednom primeru, ta formulacija obuhvata toplotni stabilizator u koncentraciji od oko 0,9% ± 0,135% w/v do oko 10% ± 1,5% w/v. U jednom primeru, toplotni stabilizator je šećer. U jednom primeru, taj šećer se bira iz grupe koja obuhvata saharozu, manitol i trehalozu. U specifičnom primeru, toplotni stabilizator je saharoza u koncentraciji od oko 5% ± 0,75% w/v.

[0040] U jednom primeru, ta formulacija obuhvata reduktor viskoznosti u koncentraciji koja nije veća od oko 100 mM. U jednom primeru, taj reduktor viskoznosti je arginin. U jednom specifičnom primeru, taj reduktor viskoznosti je L-arginin hidrohlorid na 25 mM ±3,75 mM.

[0041] U jednom specifičnom primeru, stabilna maloviskozna izotonična tečna farmaceutska formulacija ima viskoznost od oko 8,5 ± 2,5 cPoaza i osmolalnost od oko 290 ± 20 mOsm/kg, i obuhvata: (i) 150 mg/ml ± 15 mg/ml anti- hIL4-Rα antitela, pri čemu to antitelo obuhvata HCVR i LCVR, od kojih svaki obuhvata sekvencu amino kiseline iz SEK ID BR:1 i SEK ID BR:5, prema opisanom redosledu; (ii) 12,5 mM ± 1,9 mM acetat; (iii) 20 mM ± 3 mM histidin; (iv) 0,2% ± 0,03% w/v od polisorbata 20; (v) 5% ± 0,75% w/v saharoze; i (vi) 25 mM ± 3,75 mM L-arginin hidrohlorida. Prema ovom primeru, (i) barem oko 98% antitela zadržava svoju prirodnu konformaciju, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini, kada se čuva na 5°C tokom barem oko šest meseci, (ii) barem oko 90% antitela zadržava svoju prirodnu konformaciju, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini, kada se čuva na 45°C tokom barem oko osam nedelja, (iii) manje od oko 45% antitela obuhvata kiselinski oblik, kako je utvrđeno katjonizmenjivačkom hromatografijom, kada se čuva na 45°C tokom oko osam nedelja, i (iv) manje od oko 4% antitela obuhvata agregirani oblik, kako je utvrđeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini, kada se čuva na 25°C tokom šest meseci.

[0042] U jednom varijantom rešenju, tečna farmaceutska formulacija iz ovog pronalaska je data u nekoj posudi. U jednom izvođenju, ta posuda je staklena bočica. U drugom izvođenju, ta posuda je mikroinfuzor. U još jednom drugom izvođenju, ta posuda je špric. U jednom specifičnom izvođenju, taj špric obuhvata fluorokarbonom obložen potiskivač. U jednom specifičnom izvođenju, taj špric je špric sa malom količinom volframa.

[0043] Druga izvođenja ovog pronalaska će postati očigledna iz pregleda koji daje detaljan opis.

DETALJAN OPIS

[0044] Treba imati u vidu da je ovde korišćena terminologija samo u svrhu opisa određenih izvođenja, i nije predviđena da bude ograničavajuća, jer će obim ovog pronalaska biti ograničen samo pomoću priloženih patentnih zahteva.

[0045] Osim ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni pojmovi koji se ovde koriste imaju isto značenje kako se to obično razume prosečan stručnjak u ovoj oblasti kojoj ovaj pronalazak pripada. Kako se ovde koristi, pojam "oko", kada se koristi u vezi sa određenom navedenom brojčanom vrednošću ili opsegom vrednosti, znači da vrednost može da varira od navedene vrednosti za ne više od 1%. Na primer, kako se ovde koristi, pojam "oko 100" obuhvata 99 i 101 i sve vrednosti između (npr., 99,1, 99,2, 99,3, 99,4, itd.).

[0046] Iako svi postupci i materijali slični ili ekvivalentni onima koji su ovde opisani mogu da se koriste u praksi ili testiranju ovog pronalaska, preporučeni postupci i materijali su opisani ovde u daljem tekstu.

Farmaceutske formulacije

[0047] Kako ovde koristi, izraz "farmaceutska formulacija" znači kombinaciju barem jednog aktivnog sastojka (npr., mali molekul, makromolekul, jedinjenje, itd. koje može da ispolji biološko dejstvo kod humane ili nehumane životinje), i barem jedan aktivni sastojak koji, kada se kombinuje sa aktivnim sastojkom ili jednim ili više dodatnih neaktivnih sastojaka, je pogodan za terapijsku isporuku humanoj ili nehumanoj životinji. Pojam "formulacija", kako je ovde korišćen, znači "farmaceutsku formulaciju" osim ako nije drugačije precizirano drugačije. Ovaj se pronalazak odnosi na farmaceutske formulacije koje obuhvataju barem jedan terapijski polipeptid. Terapijski polipeptid je humano antitelo koje se specifično veže na humani interleukin-4 receptor alfa (hIL-4Rα) pri koncentraciji od najviše 200 mg/ml, pri čemu pomenuto humano antitelo koje se specifično veže na hIL-4R obuhvata dva dva teška lanca i dva laka lanca, svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR: 1 i konstantni region teškog lanca sa domenima CH1, CH2 i CH3, i svaki laki lanac obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) sa sekvencom amino kiseline SEK ID BR:5 i konstantnim regionom lakog lanca. Farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska obuhvataju: (i) humano antitelo koje se specifično veže na hIL-4Rα; (ii) acetat/histidin puferski sistem; (iii) organski korastvarač koji je nejonski surfaktant; (iv) toplotni stabilizator koji je karbohidrat; i (v) reduktor viskoznosti. Specifične komponente uzete kao primer i formulacije obuhvaćene ovim pronalaskom su sada opisane do detalja dole u tekstu.

Antitela koja se vezuju specifično na hIL-4R

[0048] Farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska obuhvataju humano antitelo koje specifično veže na humani interleukin-4 receptor alfa (hIL-4Rα) pri koncentraciji od najviše do 200 mg/ml, pri čemu pomenuto humano antitelo koje se specifično veže na hIL-4R obuhvata dva teška lanca i dva laka lanca, svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR: 1 i konstantni region teškog lanca sa domenima CH1, CH2 i CH3, i svaki laki lanac obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) sa sekvencom amino kiseline SEK ID BR:5 i konstantni region lakog lanca. Kako se ovde koristi, pojam "hIL-4Rα" znači humani receptor citokina koji specifično vezuje interleukin-4 (IL-4). Kod izvesnih izvođenja, antitelo sadržano unutar farmaceutskiih formulacija iz ovog pronalaska se veže specifično na vanćelijski domen hIL-4Rα. Primer sekvence amino kiseline sa humanim IL-4 receptorom alfa (hIL-4Rα) je opisan u SEK ID BR:25. Antitela na hIL-4Rα su opisana u U.S. Pat. br. 7,605,237 i 7,608,693. Vanćelijski domen hIL-4Rα je predstavljen sekvencom amino kiseline iz SEK ID BR:26.

[0049] Pojam "antitelo", kako se ovde koristi, se odnosi na molekule imunoglobulina koji obuhvataju četiri lanca polipeptida, dva teška (H) lanca i dva laka (L) lanca međusobno povezana disulfidnim vezama. Svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (ovde skraćeno kao HCVR ili V) i konstantni region teškog lanca. Konstantni region teškog lanca obuhvata tri domena, CH1, CH2 i CH3. Svaki laki lanac obuhvata promenljivi region lakog lanca (ovde je skraćen kao LCVR ili VL) i konstantni region lakog lanca. Konstantni region lakog lanca obuhvata jedan domen (CL1). Regioni VH i VL mogu još biti podpodeljeni u regione hiperpromenljivosti, pod pojmom regioni određivanja komplementarnosti (CDRs), prošarani regionima koji su konzervativniji, pod pojmom okvirni regioni (FR). Svaki promenljivi teški (VH) i promenljivi laki (VL) se sastoji od tri regiona za određivanje komplementarnosti (CDR) i četiri okvirna regiona (FR), raspoređena od amino-terminusa do karboksi terminusa u sledećem redosledu: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.

[0050] Osim ako nije specifično drugačije navedeno, pojam "antitelo", kako se ovde koristi, treba razumeti da obuhvata kompletne molekule antitela.

[0051] "Izolovano antitelo", kako se ovde koristi, je predviđeno da se odnosi na antitelo koje je pretežno bez drugih antitela koja imaju različite antigenske specifičnosti (npr., izolovano antitelo koje specifično veže hIL-4Rα je pretežno bez antitela koja specifično vežu antigene koji nisu hIL-4Rα).

[0052] Pojam "specifično veže", i,li sličan, znači da antitelo ili njegov fragment vezivanja antigena formira kompleks sa antigenom koji je relativno stabilan pod fiziološkim uslovima. Specifično vezivanje može da karakteriše konstanta razdruživanja od barem oko 1x10<-6>M ili više. Postupci za određivanje da li se dva molekula specifično vezuju su dobro poznati u ovoj oblasti i obuhvataju, na primer, dijalizu ravnoteže, površinsku rezonancu plazmona, i slične. Izolovano antitelo koje specifično veže hIL-4Rα može, međutim, da ima unakrsnu reaktivnost sa drugim antigenima, kao to su IL - 4R molekuli od drugih vrsta (ortologa). Pored toga, izolovano antitelo može biti pretežno bez drugog ćelijskog materijala i/ili hemikalija.

[0053] Primeri anti-hIL-4Rα antitela koji mogu biti obuhvaćeni u farmaceutskim formulacijama su izneti u US 7,605,237 i US 7,608,693, za koje su opisi ugrađeni u potpunosti u vidu reference.

[0054] Anti-hIL-4Rα antitelo obuhvata region za određivanje komplementarnosti teškog lanca (HCDR) 1 od SEK ID BR: 2, HCDR2 od SEK ID BR:3, i HCDR3 od SEK ID BR: 4. Antitelo antihIL-4Rα obuhvata HCVD od SEK ID BR:1.

[0055] Prema izvesnim izvođenjima ovog pronalaska, anti-hIL-4Rα obuhvata region za određivanje kompolementarnosti lakog (kappa) lanca (LCDR) 1 od SEK ID BR: 6, LCDR2 od SEK ID BR: 7, i LCDR3 od SEK ID BR: 8. Antitelo anti-hIL-4Rα obuhvata LCVD od SEK ID BR:5.

[0056] Antitelo korišćeno u ovim Primerima se pominje kao "mAb1". Ovo antitelo se takođe pominje u US 7,608,693 kao H4H098P. mAb1 (H4H098P) obuhvata HCVR/LCVR par sekvence amino kiseline sa SEK ID BR:1/5, i HCDR1-HCDR2-HCDR3 / LCDR1-LCDR2-LCDR3 domene predstavljene putem SEK ID BR:2 - 3 - 4 / SEK ID BR:6 - 7 - 8.

[0057] Takođe je opisano antitelo koje se pominje kao "mAb2". Ovo antitelo se takođe pominje u US 7,608,693 kao H4H083P. mAb2 (H4H083P) obuhvata HCVR/LCVR par sekvence amino kiseline sa SEK ID BR:9/13, i HCDR1-HCDR2-HCDR3 / LCDR1-LCDR2-LCDR3 domene predstavljene putem SEK ID BR:10 - 11 - 12 / SEK ID BR:14 - 15 - 16.

[0058] Takođe je opisano antitelo koje se pominje kao "mAb3". Ovo antitelo se takođe pominje u US 7,608,693 kao H4H095P. mAb3 (H4H095P) obuhvata HCVR/LCVR par sekvence amino kiseline sa SEK ID BR:17/21, i HCDR1-HCDR2-HCDR3 / LCDR1-LCDR2-LCDR3 domene predstavljene SEK ID BR:18 - 19 - 20 / SEK ID BR:22 - 23 - 24.

[0059] Količina antItela koju sadže farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska može da varira zavisno od specifičnih svojstava željenih za te formulacije, kao i specifičnih okolnosti i svrha za koje je upotreba tih formulacija predviđena. Stabilna tečna farmaceutska formulacija iz ovog pronalaska obuhvata antitelo pri koncentraciji od najviše 200 mg/ml. Kod izvesnih izvođenja, te farmaceutske formulacije su tečne formulacije koje mogu obuhvatiti oko 120 ±12 mg/mL do oko 180 ± 18 mg/mL antitela; oko 130 ± 13 mg/mL do oko 170 ± 17 mg/mL antitela; oko 140 ± 14 mg/mL do oko 160 ± 16 mg/mL antitela; ili oko 150 ± 15 mg/mL antitela. Na primer, formulacije iz ovog pronalaska mogu da obuhvate oko 90 mg/mL; oko 95 mg/mL; oko 100 mg/mL; oko 105 mg/mL; oko 110 mg/mL; oko 115 mg/mL; oko 120 mg/mL; oko 125 mg/mL; oko130 mg/mL; oko 131 mg/mL; oko 132 mg/mL; oko 133 mg/mL; oko 134 mg/mL; oko 135 mg/mL; oko 140 mg/mL; oko 145 mg/mL; oko 150 mg/mL; oko 155 mg/mL; oko 160 mg/mL; oko 165 mg/mL; oko 170 mg/mL; oko 175 mg/mL; oko 180 mg/mL; oko 185 mg/mL; oko 190 mg/mL; oko 195 mg/mL; or oko 200 mg/mL antitela koje se veže specifično na hIL-4R α.

Ekscipijenti i pH

[0060] Farmaceutske formulacije iz ovog opisa obuhvataju jedan ili više ekscipijenata. Pojam "ekscipijent", kako se ovde koristi znači bilo koji neterapijski agens dodat u formulaciju da se dobije željena konzistencija, viskoznost ili stabilizacioni efekat.

[0061] Kod izvesnih izvođenja, farmaceutska formulacija iz ovog pronalaska obuhvata barem jedan organski korastvarač u tipu i količini koji stabilizuje hIL-4Rα antitelo pod uslovima grubog rukovanja, kao što je, npr., vrtloženje. Kod nekih izvođenja, ono što se podrazumeva pod "stabilizuje" je sprečavanje formiranja više od 2% agregiranog antitela ukupne količine antitela (na molarnoj bazi) tokom grubog rukovanja. Kod nekih izvođenja, grubo rukovanje je vrtloženje rastvora koji obuhvata antitelo i organskog rastvarača tokom oko 120 minuta.

[0062] Stabilna tečna farmaceutska formulacija koja je data obuhvata polisorbat 20 ili polisorbat 80 pri koncentraciji od 0,2% w/v ± 0,03% w/v kao organski rastvarač.

[0063] Količina organskog korastvarača sadržanog unutar farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska može da varira zavisno od specifičnih svojstava željenih za te formulacije, kao i specifičnih okolnosti i svrha za koje je upotreba tih formulacija predivđena. Formulacija će ipak obuhvatiti polisorbat 20 ili polisorbat 80 u koncentraciji od 0,2% w/v ±0,03% w/v. Kod izvesnih izvođenja, te formulacije iz ovog pronalaska mogu obuhvatiti oko 0,17%; oko 0,18%; oko 0,19%; oko 0,20%; oko 0,21%; oko 0,22%; oko 0,23%; polisorbat 20 ili poloksamer 181.

[0064] Primeri organskih korastvarača koji stabilizuju hIL-4Rα antitelo obuhvataju 0,2% ± 0,02% polisorbat 20.

[0065] Farmaceutske formulacije iz ovog pronalasa takođe obuhvataju jedan ili više toplotnih stabilizatora u tipu i količni koji stabilizuje hIL-4Rα antitelo pod uslovima toplotnog naprezanja. Data formulacija je ona kod koje se barem 90% prirodnog oblika tog antitela oporavlja posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini. Kod nekih izvođenja, pod "stabilizuje" se misli na zadržavanje veće od oko 92% od antitela u prirodnom obliku kada se rastvor koji sadrži to antitelo i toplotni stabilizator čuva na oko 45°C najduže tokom oko 28 dana. Kod nekih izvođenja, pod "stabilizuje'' je da se manje od oko 5% antitela agregira kada se rastvor koji obuhvata antitelo i toplotni stabilizator čuva na oko 45°C tokom najduže do oko 28 dana.

[0066] Stabilna tečna farmaceutska formulacija iz ovog pronalaska obuhvata saharozu kao toplotni stabilizator. Može još da obuhvata trehalozu i/ili manitol. Ta formulacija iz ovog pronalaska obuhvata saharozu u koncentraciji od 5% w/v ± 0,75 w/v. Na primer, te farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska mogu obuhvatiti oko 2,5% ± 0,375%; oko 3% ± 0,45%; oko 3,5% ± 0,525%; oko 4,0% ± 0,6%; oko 4,5% ± 0,675%; oko 5,0% ± 0,75% saharoze.

[0067] Te farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska mogu takođe obuhvatiti pufer ili puferski sistem, koji služi da održi stabilan pH i da pomogne da se stabilizuje hIL-4Rα antitelo. Formulacija iz ovog pronalaska je takva da se pritom barem 90% prirodnog oblika tog antitela oporavlja posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini. Kod nekih izvođenja, pod "stabilizuje'' je da se manje od oko 3,0% ± 0,5% antitela agregira kada se rastvor koji obuhvata antitelo i pufersko sredstvo čuva na oko 45°C tokom najduže do oko 14 dana. Kod nekih izvođenja, pod "stabilizuje'' se podrazumeva da se manje od oko 3,7% ± 0,5% antitela agregira kada se rastvor koji obuhvata antitelo i pufersko sredstvo čuva na oko 25°C tokom najduže do oko 6 meseci. Kod nekih izvođenja, ono što se podrazumeva pod "stabilizuje" je da je barem 95% ± 0,5% antitela u prirodnoj konformaciji kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini kada se rastvor koji sadrži antitelo i pufersko sredstvo čuva na oko 45°C tokom najduže oko 14 dana. Kod nekih izvođenja, ono što se podrazumeva pod "stabilizuje" je gde barem 96% ± 0,5% antitela u prirodnoj konformaciji kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini kada se rastvor koji sadrži antitelo i pufersko sredstvo čuva na oko 25°C tokom najduže oko 6 meseci. Kod nekih izvođenja, ono što se podrazumeva pod "stabilizuje" je da je barem 62% ± 0,5% antitela u neutralnoj konformaciji kako je određeno katjonizmenjivačkom hromatografijom kada se rastvor koji sadrži antitelo i pufersko sredstvo čuva na oko 45°C tokom najduže oko 14 dana. Kod nekih izvođenja, pod "stabilizuje" se podrazumeva da je barem 54% ± 0,5% antitela u njegovoj neutralnoj konformaciji kako je određeno katjonizmenjivačkom hromatografijom kada se taj rastvor koji obuhvata antitelo i pufersko sredstvo čuva na oko 25°C tokom najviše oko 6 meseci. Pod "neutralno naelektrisanje" se misli na frakciju antitela koja se eluira iz jonizmenjivačke smole pri glavnoj vršnoj vrednosti, koja generalno ima više bočnh "baznih" vršnih vrednosti na jednoj stranih i više "kiselih" vršnih vrednosti na drugoj strani.

[0068] Farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska mogu imati pH od 5,6 do 6,2. Na primer, te formulacije iz ovog pronalaska mogu imati pH od oko 5,2; oko 5,3; oko 5,4; oko 5,5; oko 5,6; oko 5,7; oko 5,8; oko 5,9; oko 6,0; oko 6,1; oko 6,2. Kod nekih izvođenja, ta pH je oko 5,3 ± 0,2; oko 5,9 ± 0,2; ili oko 6,0 ± 0,2.

[0069] Kod nekih izvođenja, pufer ili sistem puferskog sredstva obuhvata barem jedno pufersko sredstvo koje ima opseg puferisanja koji preklapa potpuno ili delimično opseg od pH 5,2 - 6,4. Kod jednog izvođenja, pufer ili puferski sistem obuhvata dva pufera, od njih prvi ima delotvorni opseg pH unutar 3,6 - 5,6 i drugi ima delotvorni opseg pH vrednosti unutar 5,5 - 7,4. Kod jednog izvođenja, prvi pufer ima pKa od oko 4,8 ± 0,3 i drugi pufer ima pKa od oko 6,0 ± 0,3. Puferski sistem prisutan u formulaciji iz ovog pronalaska obuhvata acetat pufer i histidin pufer. Kod izvesnih izvođenja, histidin je prisutan sa oko 1,3 - 1,9 delova po 1 delu acetata prema molu. Formulacija iz ovog pronalaska obuhvata acetat u koncentraciji od 12,5 mM ± 2 mM i histidin u koncentraciji od 20 mM ± 3 mM. Kod izvesnih izvođenja taj histidin je prisutan na oko 1,6 ± 0,25 delova prema 1 delu acetata putem mola. Kod izvesnih izvođenja, acetat je prisutan u koncentraciji od 10,5 mM do oko 14,5 mM; oko 12,5 mM ± 1,875 mM; oko 11,0 mM do oko 14,0 mM; oko 11,5 mM do oko 13,5 mM; ili oko 12,0 mM do oko 13,0 mM. Kod izvesnih izvođenja, taj histidin je prisutan u koncentraciji od oko 17 mM do oko 23 mM; oko 18 mM do oko 22 mM; ili oko 19 mM do oko 21 mM. Kod izvesnih izvođenja, puferski sistem obuhvata acetat na oko 12,5 mM i histidin na oko 20 mM, pri pH od oko 5,9.

[0070] Farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska takođe obuhvataju ekscipijente, koji služe da održe smanjenu viskoznost ili da spuste viskoznost formulacija koje sadrže visoku koncentraciju proteina (npr., generalno > 100 mg/ml proteina). Kod nekih izvođenja, ta formulacija obuhvata arginin u količini dovoljnoj da održi viskoznost tečne formulacije na manje od oko 35 cPoaza, manje od oko 30 cPoaza, manje od oko 25 cPoaza, manje od oko 20 cPoaza, manje od oko 15 cPoaza, manje od oko 14 cPoaza, manje od oko 13 cPoaza, manje od oko 12 cPoaza, manje od oko 10 cPoaza, ili manje od oko 9 cPoaza.

[0071] Farmaceutska formulacija iz ovog pronalaska obuhvata arginine, poželjno kao L-arginin hidrohlorid, u koncentraciji od oko 25 mM ± 3.75 mM, oko 50 mM ± 7,5 mM, ili oko 100 mM ± 15 mM. Kod izvesnih izvođenja, arginin je na oko 20 mM do oko 30 mM, oko 21 mM do oko 29 mM, oko 21,25 mM do oko 28,75 mM, oko 22 mM do oko 28 mM, oko 23 mM do oko 27 mM ili oko 24 mM do oko 26 mM.

Formulacije

[0072] Stabilna tečna formulacija iz ovog pronalaska je ona koja obuhvata

(i) humano antitelo koje se specifično veže na humani interleukin-4 receptor alfa (hlL-4Rα) u koncentraciji od najviše do 200 mg/ml, pri čemu pomenuto humano antitelo koje se specifično veže na hIL-4R obuhvata dva teška lanca i dva laka lanca, svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline iz SEK ID BR: 1 i konstantan region teškog lanca koji sadrže domene CH1, CH2 i CH3, i svaki laki lanac koji obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR:5 i konstantni region lakog lanca;

(ii) acetat u koncentraciji od 12,5 mM ± 2 mM;

(iii) histidin u koncentraciji od 20 mM ± 3 mM;

(iv) saharoza u koncentraciji od 5% w/v ± 0,75% w/v;

(v) polisorbat 20 ili polisorbat 80 u koncentraciji od 0,2% w/v ± 0,03% w/v; i

(vi) arginin u koncentraciji od 25 mM ± 3,75 mM ili u koncentraciji od 50 mM ± 7.5 mM;

pri čemu ta formulacija ima pH od 5,6 do 6,2, i

pri čemu se barem 90% prirodnog oblika antitela oporavlja posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

[0073] Takođe se opisuje farmaceutska formulacija koja ima malu viskoznost, generalno fiziološki izotonična tečna formulacija, koja obuhvata: (i) humano antitelo koje se specifično veže na hIL-4Rα (npr., mAb1, mAb2 ili mAb3 [supra]), u koncentraciji od oko 100 mg/ml ili više; (ii) puferski sistem koji obezbeđuje dovoljo puferisanje na oko 5,9 ± 0,6; (iii) šećer koji služi inter alia kao toplotni stabilizator; (iv) organski korastvarač, koji štiti strukturni integritet, ako to antitelo; i (v) amino kiselina, koja služi da se čuva viskoznost tako da bude upotrebljiva za potkožno ubrizgavanje.

[0074] Takođe se opisuje farmaceutska formulacija koja obuhvata: (i) humano IgG1 antitelo koje se specifično veže na hIL-4Rα i koje obuhvata supstituisan IGLV2-28 tip promenljivog regiona lakog lanca (npr., mAb1) u koncentraciji od oko 100 mg/ml do oko 200 mg/ml; (ii) puferski sistem koji obuhvata acetat i histidin, koji puferuje efikasno na oko pH 5,9 ± 0,6; (iii) saharozu kao stabilizator toplote; (iv) polisorbat kao organski korastvarač; i (v) arginin kao reduktor viskoznosti.

[0075] Takođe se opisuje farmaceutska formulacija koja obuhvata: (i) humano IgG1 antitelo koje se specifično veže na hIL-4Rα, i koje obuhvata neki HCDR1 iz SEK ID BR:2, HCDR2 iz SEK ID BR:3, HCDR3 iz SEK ID BR:4, LCDR1 iz SEK ID BR:6, LCDR2 iz SEK ID BR:7, i LCDR3 iz SEK ID BR:8, u koncentraciji od oko 150 mg/ml ± 25 mg/ml; (ii) acetat na oko 12,5 mM ± 1,9 mM i histidin na oko 20 mM ± 3 mM, koji se puferuje efikasno na oko pH 5,9 ± 0,3; (iii) saharoza na oko 5% w/v ± 0,75% w/v; (iv) polisorbat 20 na oko 0,2% w/v ± 0,03% w/v; i (v) arginin kao L-arginin hidrohlorid na oko 25 mM ± 3,75 mM.

[0076] Dodatni neograničavajući primeri farmaceutskih formulacija koje su obuhvaćene ovim pronalaskom su iznete ovde na drugom mestu, uključujući radne Primere predstavljene dole.

Stabilnost i viskoznost farmaceutskih formulacija

[0077] Farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska obično ispoljavaju visoke nivoe stabilnosti. Pojam "stabilno", kako se ovde koristi u vezi sa farmaceutskim formulacijama, znači da ta antitela unutar farmaceutskih formulacija zadržavaju prihvatjiv nivo hemijske strukture ili biološke funkcije posle skladištenja pod definisanim uslovima. Formulacija može biti stabilna iako antitelo sadržano ovde ne zadržava 100% svoje hemijske strukture ili biološke funkcije posle skladištenja tokom definisanog perioda vremena. Pod neizvesnim okolnostima, održavanje na oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% strukture ili funkcije antitela posle skladištenja tokom definisanog perioda vremena može biti posmatrano kao "stabilno".

[0078] Stabilnost je moguće izmeriti, inter alia, određivanjem procenta prirodnog antitela koje ostaje u toj formulaciji posle skladištenja tokom definisane količine vremena na definisanoj temperaturi. Procenat prirodnog antitela moguće je odrediti, inter alia, ekskluzionom hromatografijom prema veličini (tečnom hromatografijom visokih performansi sa ekskluzijom prema veličini [SE-HPLC]). "Prihvatljiv stepen stabilnosti", jer se ta fraza koristi ovde, znači da je barem 90% prirodnog oblika tog antitela moguće detektovati u toj formulaciji posle skladištenja tokom definisane količine vremenana na datoj temperaturi. Kod izvesnih izvođenja, barem oko 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100% prirodnog oblika antitela koje je moguće detektovati u formulaciji posle skladištenja tokom definisanog perioda vremena na datoj temperaturi. Definisana količina vrmena posle koje se stabilnost meri je barem 6 meseci, barem 7 meseci, barem 8 meseci, barem 9 meseci, barem 10 meseci, barem 11 meseci, barem 12 meseci, barem 18 meseci, barem 24 meseca, ili više. Definisana temperatura na kojoj je moguće čuvati farmaceutsku formulaciju kada se procenjuje stabilnost je 5°C.

[0079] Formulacija iz ovog pronalaska je ona kod koje se barem 90% prirodnog oblika antitela oporavi iz antitela oporavljenog posle šest meseci na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini. Farmaceutsku formulaciju je moguće smatrati stabilnom ako se posle šest meseci skladitšenja na 5°C, više od oko 90%, 95%, 96%, 97% ili 98% prirodnog antitela detektuje pomoću SE-HPLC. Farmaceutsku formulaciju je takođe moguće smatrati stabilnom ako je posle 9 meseci skladištenja na 5°C, više od oko 90%, 95%, 96%, 97% ili 98% prirodnog antitela detektovano pomoću SE-HPLC.

[0080] Stabilnost je moguće izmeriti, inter alia, određivanjem procenta antitela koji se formira u agregatu unutar formulacije posle skladištenja tokom definisanog perioda vremena na definisanoj temperaturi, pri čemu je stabilnost inverzno proporcionalna procentu agregata koji se formira. Procenat agregiranog antitela moguće je odrediti putem, inter alia, ekskluzione hromatografije prema veličini (npr., tečna hromatografija visokih performansi sa ekskluzijom prema veličini [SE-HPLC]). "Prihvatljiv stepen stabilnosti", kako se ovde koristi ta fraza, znači da je većina od 5% antitela koje je u agregatnom obliku detektovano u formulaciji posle skladištenja tokom definisane količine vremena na datoj temperaturi. Kod izvesnih izvođenja prihvatljiv stepen stabilnosti znači da najviše oko 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, ili 0,1% antitela moguće detektovati u agregatu u formulaciji posle skladištenja tokom definisane količine vremena na datoj temperaturi. Definisana količina vremena posle koje se meri stabilnosti je barem 6 meseci, barem 7 meseci, barem 8 meseci, barem 9 meseci, barem 10 meseci, barem 11 meseci, barem 12 meseci, barem 18 meseci, barem 24 meseca, ili više. Temperatura na kojoj je moguće čuvati farmaceutsku formulaciju kada se procenjuje stabilnost je 5°C. Farmaceutsku formulaciju je moguće takođe smatrati stabilnom ako posle 6 meseci skladištenja na 5°C, manje od oko 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, ili 0,1% antitela se detektuje u agregatnom obliku. Farmaceutsku formulaciju je takođe moguće smatrati stabilnom ako posle 9 meseci skladištenja na 5°C, manje od oko 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, ili 0,1% antitela se detektuje u agregatnom obliku.

[0081] Stabilnost je moguće izmeriti, inter alia, određivanjem procenta antitela koje se slije u mnogo kiseliju frakciju tokom jonske izmene ("kiseliji oblik") nego u glavnoj frakciji antitela ("neutralna konfromacija"), pri čemu je stabilnost inverzno proporcionalna frakciji antiela u kiselinskom obliku. Bez želje da se ograničimo na teoriju, deamidacija antitela može prouzrokovati da to antitelo postane negativnije naelektrisano i tako mnogo kiselije u odnosu na nedeamidovano antitelo (videti, npr., Robinson, N., Protein Deamidation, PNAS, April 16, 2002, 99(8):5283-5288). Procenat "acidifikovanog" ili "deamidovanog" antitela moguće je odrediti putem, inter alia, jonizmenjivačke hromatografije (npr., katjonizmenjivačke tečne hromatografije visokih performansi [CEX-HPLC]). "Prihvatljiv stepen stabilnosti", kako se ta fraza ovde koristi, znači da je najviše 45% antitela u kiselijem obliku detektovano u formulaciji posle skladištenja tokom definisane količine vremena na definisanoj temperaturi. Kod izvesnih izvođenja prihvatljiv stepen stabilnosti znači da je najviše oko 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, ili 0,1% antitela moguće detektovati u kiselinskom boliku u formulaciji posle skladištenja tokom definisane količine vremena na datoj temperaturi. Definisana količina vremena posle koje se meri stabilnost je barem 6 meseci, barem 7 meseci, barem 8 meseci, barem 9 meseci, barem 10 meseci, barem 11 meseci, barem 12 meseci, barem 18 meseci, barem 24 meseca, ili više. Temperatura na kojoj je ta farmaceutska formulacija je 5°C.

[0082] Druge postupke je moguće koristiti da se proceni stabilnost formulacija iz ovog pronalaska kao što je, npr., diferencijalna skenirajuća kalorimetrija (DSC) da bi se odredila toplotna stabilnost, kontrolisalo mešanje da bi se odredila mehanička stabilnost, i apsorpcija na oko 350 nm ili oko 405 nm da bi se odredila zamućenosti rastvora. Na primer, formulaciju je moguće smatrati stabilnom ako, posle 6 ili više meseci skladištenja na oko 5°C do oko 25°C, promena u OD405te formulacije jeste manja od oko 0,05 (npr., 0,04, 0,03, 0,02, 0,01, ili manje) od OD405formulacije u nultom trenutku.

[0083] Stabilnost je takođe moguće proceniti merenjem biološke aktivnosti ili afiniteta vezivanja antitela na njegov cilj. Na primer, formulaciju je moguće posmatrati kao stabilnu ako, posle skladištenja na 5°C itd. tokom definisane količine vremena od barem šest meseci (npr., 6 do 12 meseci), anti-IL-4Rα antitelo sadržano unutar formulacije se veže na IL-4Rα sa afinitetom koji je barem 90%, 95%, ili više od afiniteta vezivanja antitela pre pomenutog skladišenja. Afinitet vezivanja može da bude utvrđen npr., ELISA ili plazmonskom rezonancom. Biološku aktivnost je moguće odrediti testom IL-4Rα aktivnosti, kao što je npr., dovođenje u kontakt ćelije koja ispoljava IL-4Rα sa formulacijom koja obuhvata anti IL-4Rα antitelo. Vezivanje antitela na takvu ćeliju moguće je izmeriti, direktno, kao što je npr., via FACS analize. Alternativno, aktivnost smanjenja IL-4Rα sistema moguće je izmeriti u prisustvu antitela i IL-4Rα agonista, i uporediti sa aktivnošću IL-4Rα sistema u odsustvu antitela. Kod nekih izvođenja, taj IL-4Rα može da bude unutar (endogen) ćelije. Kod drugih izvođenja, taj IL-4Rα može da bude izvan (ektopično) ćelije.

[0084] Dodatni postupci za procenu stabilnosti antitela u formulaciji su pokazane u primerima prikazanim dole.

[0085] Tečne farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska mogu, u izvesnim izvođenjima, da ispolje niske do umerene nivoe viskoznosti. "Viskoznost" kako se ovde koristi može biti korišćena kao "kinematička viskoznost" ili "apsolutna viskoznost". "Kinematička viskoznost" je mera otpora protoka fluida pod uticajem gravitacije. Kada se dva fluida jednake zapremine postave u identične kapilarne viskometre i omogući im se protok pomoću gravitacije, za viskozni fluid je potrebno više vremena nego za manje viskozni fluid da proteče kroz kapilarnu cev. Na primer, ako jednom fluidu treba 200 sekundi da završi svoj protok i drugom fluidu treba 400 sekundi, na kinematičkoj skali viskoznosti, drugi fluid je dvostruko viskozniji od prvog. "Apsolutna viskoznost", ponekad se ponekad zove dinamička ili prosta viskoznost, je proizvod kinematičke viskoznosti i gustine fluida (apsolutna viskoznost = kinematička viskoznost x gustina). Dimenzija kinematičke viskoznosti je L<2>/T pri čemu je L dužina i T je vreme. Uobičajeno je da se kinematička viskoznost izrazi u centristocima (cSt). SI jedinica kinematičke viskoznosti je mm<2>/s, koja je 1 cSt. Apsolutna viskoznost je izražena u jedinicama centipoaza (cP). SI jedinica apsolutne viskoznosti je milliPaskal-sekund (mPa-s), pri čemu je 1 cP = 1 mPa-s.

[0086] Kako se ovde koristi, nizak nivo viskoznosti, kao referenca na formulaciju fluida iz ovog opisa, će ispoljiti apsolutnu viskoznost manju od oko 15 cPoaza (cP). Na primer, formulacija fluida iz ovog pronalaska će biti smatrana da ima "malu viskoznost", ako, kada se izmeri korišćenjem standardnih tehnika za merenje viskoznosti, ta formulacija ispoljava apsolutnu viskoznost od oko 15 cP, oko 14 cP, oko 13 cP, oko 12 cP, oko 11 cP, oko 10 cP, oko 9 cP, oko 8 cP, ili manje. Kako se ovde koristi, umereni nivo viskoznosti, u vezi sa formulacijom fluida iz ovog pronalaska će ispoljiti apsolutnu viskoznost od između oko 35 cP i oko 15 cP. Na primer, smatraće se da formulacija fluida iz ovog pronalaska ima "umerenu viskoznost", ako kada se izmeri korišćenjem standardnih tehnika merenja, ta formulacija ispoljava apsolutnu viskoznost od oko 34 cP, oko 33 cP, oko 32 cP, oko 31 cP, oko 30 cP, oko 29 cP, oko 28 cP, oko 27 cP, oko 26 cP, oko 25 cP, oko 24 cP, oko 23 cP, oko 22 cP, oko 21 cP, oko 20 cP, oko 19 cP, 18 cP, oko 17 cP, oko 16 cP, ili oko 15,1 cP.

[0087] Kako je ilustrovano na donjim primerima, ovi pronalazači su neočekivano otkrili da je niska do umerena viskoznost tečnih formulacija koje obuhvataju visoke koncentracije anti-hIL-4Rα antitela (npr., od oko 100 mg/ml sve do 200 mg/mL) moguće je dobiti formulisanjem antitela sa argininom od oko 25 mM do oko 100 mM. Pored toga, još je otkriveno da je viskoznost te formulacije moguće smanjiti na čak veći nivo podešavanjem sadržaja saharoze na manje od oko 10%.

Posude za farmaceutske formulacije i postupci isporuke te supstance

[0088] Faraceutske formulacije iz ovog pronalaska moguće je držati unutar bilo koje posude pogodne za skladištenje lekova i drugih terapijskih supstanci. Na primer, farmaceutske formulacije je moguće držati unutar zaptivene i sterilizovane plastične ili staklene posude koja ima definisanu zapreminu kao što je bočica, ampula, špric, patrona ili boca. Različite tipove bočica je moguće koristiti da se čuvaju formulacije iz ovog pronalaska uključujući, npr., providna i neprovidna (npr., ćilibar) staklo ili plastične bočice. Slično tome, bilo koji tip šprica je moguće koristiti da sadrži ili isporuči farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska.

[0089] Farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska moguće je držati u špricevima koji su napravljeni od "normalne količine volframa" ili špricevima od "male količine volframa". Kao što će prosečni stručnjaci u ovoj oblasti razumeti, postupak pravljenja staklenih špriceva generalno obuhvata upotrebu vruće šipke od volframa koji funkcioniše da probije staklo čime stvara rupa iz koje je tečnosti moguće izvući i isprazniti iz šprica. Ovaj postupak daje kao rezultat taloženje u tragovima tungstena na unutrašnjoj površini šprica. Naknadno pranje i drugi procesni koraci mogu biti korišćeni da bi se smanjila količina volframa u špricu. Kako se ovde koristi, pojam "normalna količina volframa" znači špric koji sadrži više od 500 delova po milijardi (ppb) volframa. Pojam "mala količina volframa" znači da špric sadrži manje od 500 ppb volframa. Na primer, špric od male količine volframa prema ovom pronalasku, može da sadrži manje od oko 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 390, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 ili manje ppb volframa.

[0090] Gumeni potiskivači koji se koriste u špricevima, i gumeni čepovi koji se koriste da se zatvore otvori bočica, mogu biti obloženi da bi se sprečilo zagađivanje medicinskih sadržaja šprica ili bočice, ili da se sačuva njihova stabilnost. Dakle, farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska, prema izvesnim izvođenjima, mogu da budu sadržane unutar šprica koji obuhvata potiskivač kao zaptivnom oblogom, ili unutar bočice koja je zaptivena sa gumenim čepom kao zaptivnom oblogom. Na primer, taj potiskivač ili čep mogu biti obloženi tankim fluorokarbonskim slojem. Primeri obloženih čepova ili potiskivača pogodnih za upotrebu sa bočicama i špricevima koji sadrže farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska su pomenuti u, npr., U.S. brojeve patenata.4,997,423; 5,908,686; 6,286,699; 6,645,635; i 7,226,554. Specifičan primer čepova ili potiskivača sa gumenim slojem obloge koje je moguće koristiti u kontekstu ovog pronalaska su komercijalno dostupni pod nazivom robne marke "FluroTec®", dostupni su kod kompanije West Pharmaceutical Services, Inc. (Lionville, PA).

[0091] Prema izvesnim izvođenjima iz ovog pronalaska, farmaceutske formulacije je moguće sadržati u špricu sa malom količinom volframa koji obuhvata potiskivač sa slojem obloge od fluorokarbona.

[0092] Farmaceutske formulacije je moguće isporučiti pacijentu parenteralnim rutama isporuke kao što je injekcija (npr., potkožno, intravenozno, intramuskularno, intraperitonealno, itd.) ili perkutanom, mukoznom, nazalnom, pulmonarnom ili oralnom isporukom. Moguće je koristiti brojne uređaje za višekratnu isporuku farmaceutskih formulacija kao što je olovka i/ili automatski brizgač. Primeri obuhvataju, ali se ne ograničavaju na AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONIC™ olovka (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25™ olovka, HUMA- LOG™ olovka, HUMALIN 70/30™ olovka (Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II i III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BD™ olovka (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™, olovka OPTICLIK™ (sanofi-aventis, Frankfurt, Germany). Primeri uređaja za isporuku kao što su olovke ili automatski brizgači koji imaju primenu u potkožnoj isporuci farmaceutske supstance iz ovog opisa obuhvataju, ali se ne ograničavaju na SOLOSTAR™ olovku (sanofi-aventis), FLEXPEN™ (Novo Nordisk), i KWIKPEN™ (Eli Lilly), SURECLICK™ Autoinjector (Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN (Dey, L.P.), i HUMIRA™ Pen (Abbott Labs, Abbott Park, IL).

[0093] Upotreba mikroinfuzora da bi se isporučile farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska se takođe ovde razmatra. Kako se ovde koristi, pojam "mikroinfuzor" znači uređaj za potkožnu isporuku projektovan da se polako isporuče velike količine (npr., najviše do oko 2,5 mL ili više) terapijske formulacije tokom produženog perioda vremena (npr., oko 10, 15, 20, 25, 30 ili više minuta). Videti, npr., U.S. 6,629,949; US 6,659,982; i Meehan et al., J. Controlled Release 46:107-116 (1996). Mikroinfuzori su posebno korisni za isporuku velikih doza terapijskih proteina sadržanih unutar visoke koncentracije (npr., oko 100, 125, 150, 175, 200 mg/mL) ili viskoznih rastvora.

[0094] U jednom izvođenju, tečna farmaceutska formulacija koja sadrži oko 150 mg/ml ± 15 mg/ml anti-IL-4Rα antitela se isporučuje potkožno u količini od približno 1 ml ± 0,15 ml iz unapred napunjenog šprica u automatskom brizgaču. Kod drugog izvođenja, ta formulacija se isporučuje u količini od između oko 1 ml i 2,5 ml iz uređaja mikroinfuzora. Tu formulaciju je moguće unapred napuniti u kesu ili patronu za uporebu u mikroinfuzoru.

Terapijske upotrebe farmaceutskih formulacija

[0095] Farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska su korisne, inter alia, za lečenje, sprečavanje ili poboljšanje bilo koje bolesti ili poremećaja povezanog sa IL-4 aktivnošću, uključujući bolesti ili poremećaje posredovane aktivacijom IL-4Rα. Primeri, neograničavajućih bolesti i poremećaja koje je moguće lečiti ili sprečiti isporukom farmaceutskih formulacija iz ovog pronalaska obuhvataju različite atopične bolesti kao što je, npr., atopični dermatitis, alergijski konjunktivitis, alergijski rinitis, astma i druge IgE/Th2 posredovane bolesti.

[0096] Ovde su takođe opisani postupci za lečenje, sprečavanje, ili poboljšanje bilo koje bolesti ili poremećaja povezanog sa IL-4 aktivnošću ili IL-4Rα aktivacijom (uključujući bilo koje gore pomenute primere bolesti, poremećaja i stanja). Therapijski postupci obuhvataju isporuku koja podleže bilo kojoj formulaciji koja obuhvata anti-hIL-4Rα antitelo kako je ovde opisano. Subjekt kom se isporučuje farmaceutska formulacija može biti, npr., bilo koja humana ili nehumana životinja kojoj je potrebna takva terapija, sprečavanje ili poboljšanje, ili koje bi inače imalo korist od suzbijanja ili ublažavanja IL-4 ili IL-4Rα posredovane aktivnosti. Na primer, taj subjekat može da bude pojedinac kom je dijagnostikovano, ili za kog se smatra da postoji rizik od uticaja bilo koje od gore pomenutih bolesti ili poremećaja. Ovaj opis još obuhvata upotrebu bilo koje od farmaceutskih formulacija opisanih ovde za proizvodnju leka za lečenje, sprečavanje i/ili poboljšanje bilo koje bolesti ili poremećaja povezanog sa aktivnošću IL-4 ili aktivacijom IL-4Rα (uključujući bilo koju od gore pomenutih, kao primer navedenih, bolesti, poremećaja i stanja).

PRIMERI

[0097] Sledeći primeri su prikazani tako da obezbede prosečnom stručnjaku u ovoj oblasti potpuno objašnjenje i opis načina za dobijanje i upotrebe postupaka i supstanci iz ovog pronalaska. Nastojalo se da se osigura preciznost u pogledu korišćenih brojeva (npr,. količine, temperatura, itd.) ali neke eksperimentalne greške i odstupanja treba uzeti u obzir. Osim ako nije drugačije navedeno, delovi su delovi prema težini, molekularna težina je prosečna molekularna težina, temperatura se smatra da je u stepenima Celzijusove skale, i pritisak je na ili blizu atmosferskog.

[0098] Početne aktivnosti razvoja formulacije obuhvatile su proveru organskih korastvarača, toplotnih stabilizatora, i puferskih sredstava u tečnim formulacijama mAb1 (anti-IL-4Rα antitela iz ovog pronalaska) da bi se utvrdili ekscipijenti koji su kompatibilni sa proteinom i pospešuju njegovu stabilnost, pri čemu održavaju osmolalnost i viskoznost potkožne injekcije. Uslovi puferskog sredstva su takođe ispitani da bi se odredila optimalna pH za maksimalnu stabilnost proteina.

Primer 1. Organski korastvarač

[0099] Primećeno je da je mAb1 nestabilno kada se podvrgne stresu mešanjem. Analiza tečne hromatografije visokih performansi na reverznoj fazi (RP-HPLC) i tečne hromatografije visokih performansi sa ekskluzijom prema veličini (SE-HPLC) je pokazala gubitak proteina i povećanje agregata proteina kada je mAb1 vrtložen na sobnoj temperaturi (Tabela 1, videti podatke "Nema korastvarača"). Dodavanje organskih korastvarača u mAb1 rastvor je sprečilo protein od raspadanja, kako je izmereno putem SE-HPLC i RP-HPLC (Tabela 1). Međutim, primećeno je da je dodavanje nekih od organskih korastvarača smanjilo toplotnu stabilnost mAb1 (Tabela 2). Gubitak oporavka proteina je primećen u formulacijama koje su sadržale PEG 3350 (3%) i PEG 300 (10% i 20%) kako je utvrđeno RP-HPLC posle toplotnog stresa (Tabela 2). Pored toga, postojalo je veće formiranje agregata u formulacijama koje obuhvataju PLURONIC F68 (poloksamer 181) (0,2%), PEG 300 (10% i 20%), i propilen glikol (20%) nego u formulaciji bez korastvarača kako je utvrđeno SE-HPLC. Polisorbat 20 (0.2%) i polisorbat 80 (0,2%) su dali uporedivu stabilnost sa stresom na mešanje i toplotnim stresom

[0100] Prema Tabeli 1, 0,3 ml od 15 mg/ml od mAb1 u 10 mM fosfata, pH 6,0, i različiti organski korastvarači u 2 ml staklenoj bočici su podvrgnuti vrtloženju tokom oko 120 minuta. Zamućenost je procenjena preko optičke gustine (OD) pri 405 nm i prijavljena kao relativna promena u OD na 405 nm u poređenju sa početnim materijalom. Procenat ukupnog mAb1 je oporavljen kako je određeno preko reverzne fazne HPLC (RP-HPLC). Procenat prirodnog i nataloženog mAb1 je odrežen preko HPLC sa ekskluzijom prema veličini (SE-HPLC). Rezultati SE-HPLC su predstavljeni u rezulattima "Početni materijali" su prosečne vrednosti za svaku od formulacija u odsustvu vrtloženja.

Tabela 1

(nastavak)

[0101] Prema Tabeli 2, 0,3 ml od 15 mg/ml od mAb1 u 10 mM fosfata, pH 6,0, i različitih organskih korastvarača u staklenoj bočici od 2 ml su čuvani na oko 45°C tokom oko 28 dana. Zamućenost je procenjena preko optičke gustine (OD) pri 405 nm i prijavljena kao relativna promena u OD na 405 nm u poređenju sa početnim materijalom. Procenat ukupnog oporavljenog mAb1 je određen preko reverzne fazne HPLC (RP-HPLC). Procenat prirodnog i agregiranog mAb1 je određen putem ekskluzione HPLC prema veličini (SE-HPLC). Rezultati SE-HPLC prikazani u rezultatima "Početni materijal" su prosečne vrednosti svake od formulacija u odsustvu toplotnog stresa.

Tabela 2

Primer 2. Toplotni stabilizatori

[0102] Različiti toplotni stabilizatori, kao što su šećeri, amino kiseline, i organske soli, su ispitani za njihovu sposobnost da se suzbije razgradnja mAb1 kada se čuva na oko 45°C. Sažet pregled toplotnih stabilizatora koji su ispitivani je prikazan u Tabeli 3. Formulacije koje su sadržale bilo saharozu ili trehalozu su imale najveći efekat stabilizacije za mAb1 u rastvoru kada su inkubirane na povišenoj temperaturi (kako je određeno SE-HPLC). Saharoza je odabrana kao stabilizator jer ima bezbedniju istoriju upotrebe u formulacijama monoklonskog antitela.

[0103] Prema Tabeli 3, 0,3 ml od 25 mg/ml od mAb1 u 10 mM acetata, pH 5,3, i različitih organskih stabilizatora u staklenoj bočici od 2 ml je čuvano na oko 45°C tokom oko 28 dana. Zamućenost je procenjena preko optičke gustine (OD) pri 405 nm i prijavljena kao relativna promena u OD na 405 nm u poređenju sa početnim materijalom. Zamućenost je bila zanemarljiva za sve uzorke. Procenat ukupnog mAb1 je oporavljen kako je određeno preko reverzne fazne HPLC (RP-HPLC). Procenat prirodnog i agregiranog mAb1 je određen putem ekskluzione HPLC prema veličini (SE-HPLC). Kiselinske ili bazne vrste su definisane kao zbir mAb1 vršnih vrednosti koje se eluiraju iz kolone za katjonsku izmenu (CEX-HPLC) sa ranijim ili kasnijim vremenima zadržavanja nego glavna vršna vrednost, prema opisanom redosledu. Rezultati SE-HPLC su predstavljeni u rezulattima "Početni materijli" su prosečne vrednosti za svaku od formulacija u odsustvu toplotnog stresa.

Tabela 3

Primer 3. Puferska sredstva i pH vrednost

[0104] Dejstvo pH vrednost i puferskih vrsta na stabilnosti mAb1 je takođe ispitana. 15 mg/mL mAb1 je inkubirano u različitim puferskim sredstvima na različitim pH vrednostima koje se kreću u oposegu od pH 4,5 do 7,0. Stabilnost proteina je nadgledana putem SE-HPLC i katjonskom izmenom HPLC (CEX-HPLC). Primećena je maksimalna stabilnost proteina, kako je utvrđeno putem i SE-HPLC i CEX-HPLC, kada je mAb1 formulisano na pH 6,0 u histidinskom puferu ili na pH 5,3 u acetatnom puferu (Tabela 4 i Tabela 5). Acetatni puferski sistem je obezbedio širi opseg pH stabilnosti i nižu stopu formiranja varijante naelektrisanja u odnosu na formulaciju koja obuhvata histidinski pufer (Tabela 5). Samim tim, acetatni pufer, na pH 5,3, je izabran u delu za formulaciju mAb1 supstance leka.

[0105] Prema Tabeli 4, 0,3 ml od 15 mg/ml od mAb1, 0,2% polisorbata 20, kombinovano sa 10 mM različitim puferima u 2 ml staklenoj bočici su držani na oko 45°C tokom oko 14 dana. Zamućenost je procenjena preko optičke gustine (OD) pri 405 nm i prijavljena kao relativna promena u OD na 405 nm u poređenju sa početnim materijalom. Zamućenost je bila zanemarljiva za sve uzorke. Procenat ukupnog mAb1 je oporavljen kako je određeno preko reverzne fazne HPLC (RP-HPLC). Procenat prirodnog i agregiranog mAb1 je određen putem ekskluzione HPLC prema veličini (SE-HPLC). Vrste sa pH vrednostima kiseline ili baza se definišu kao zbir vršnih vrednosti tog mAb1 koje se eluiraju iz (CEX-HPLC) kolone sa katjonskom izmenom sa ranijim ili kasnijim vremenima zadržavanja nego što je glavna vršna vrednost, prema opisanom redosledu. Rezultati SE-HPLC su predstavljeni u rezulattima "Početni materijli" su prosečne vrednosti za svaku od formulacija u odsustvu toplotnog stresa.

Tabela 4

[0106] Prema Tabeli 5, 0,3 ml od 15 mg/ml od mAb1, 0,2% polisorbata 20, kombinovano sa 10 mM različitih pufera u 2 ml staklenoj bočici su držani na oko 45°C tokom oko 14 dana. Zamućenost je procenjena preko optičke gustine (OD) pri 405 nm i prijavljena kao relativna romena u OD na 405 nm u poređenju sa početnim materijalom. Zamućenost je bila zanemarljiva za sve uzorke. Procenat ukupnog mAb1 je oporavljena kako je određeno preko reverzne fazne HPLC (RP-HPLC). Procenat prirodnog i agregiranog mAb1 je određen putem ekskluzione HPLC prema veličini (SE-HPLC). Vrste sa pH vrednošću kiseline ili baze se definišu kao zbir vršnih vrednosti tog mAb1 koje se eluiraju iz stuba sa katjonskom izmenom (CEX-HPLC) sa ranijim ili kasnijim vremenima zadržavanja nego što je to slučaj sa glavnim vršnim vrednostima, prema opisanom redosledu. Rezultati SE-HPLC su predstavljeni u rezulattima "Početni materijli" su prosečne vrednosti za svaku od formulacija u odsustvu toplotnog stresa.

[0107] Studije razvoja formulacije su ukazale da pri uslovima pH vrednosti za baze (pH ≥ 6,5), mAb1 u rastvoru može da se deamiduje. Nasuprot tome, ispod pH 5,0, primećeno je da se povećava stopa formiranja varijanti molekularne težine mAb1. Na osnovu ovih podataka, pH te formulacije mAb1 je održavana između pH 5,6 i pH 6,2. mAb1 je primećeno da je stabilno u ovom pH opsegu.

Tabela 5

[0108] Dejstvo pH i puferskih vrsta na stabilnost mAb1 je dodatno procenjena u formulacijama koje su sadržale bilo 20 mM histidin pH 6, 12,5 mM acetat pH 5,3, ili kombinaciju 20 mM histidina i 12,5 acetata pH 5,9 (Tabela 6). U poređenju sa pojedinačnim puferskim sistemom, mAb1 je bio najstabilniji u formulaciji koja obuhvata i histidin i acetat na približno pH 5,9. Najsporija stopa nagomilavanja je primećena kada je mAb1 formulisan u ovom kombinovanom puferskom sistemu kombinovanom puferskom sistemu (SE-HPLC) (Tabela 6).

Tabela 6

[0109] Prema Tabeli 6, 0,4 ml od 150 mg/ml od mAb1, 10% saharoze, 0,2 % polisorbata 20, kombinovano sa različitim puferima u 2 ml staklenoj bočici su držani na oko 45°C tokom oko 14 dana. Zamućenost je procenjena preko optičke gustine (OD) pri 405 nm i prijavljena kao relativna promena u OD na 405 nm u poređenju sa početnim materijalom. Zamućenost je bila zanemarljiva za sve uzorke. Procenat ukupnog mAb1 je oporavljen kako je određeno preko reverzne fazne HPLC (RP-HPLC). Procenat prirodnog i agregiranog mAb1 je određen putem ekskluzione HPLC prema veličini (SE-HPLC). Vrste sa pH vrednošću kiseline ili baze se definišu kao zbir mAb1 vršnih vrednosti koje se eluiraju iz kolone za katjonsku izmenu (CEX-HPLC) sa ranijim ili kasnijim vremenima zadržavanja nego glavna vršna vrednost, prema opisanom redosledu. Rezultati SE-HPLC predstavljeni u rezulattima "Početni materijli" su prosečne vrednosti za svaku od formulacija u odsustvu toplotnog stresa.

Primer 4. Upravljanje viskoznošću i toničnošću

[0110] Kombinacije različitih ekscipijenata sa visokim koncentracijama mAb1 (t.j., 150 mg/ml, 175 mg/ml i 200 mg/ml) su procenjene za viskoznost i toničnost (kako je izraženo u osmolalnosti). Nivoi saharoze, natrijum hlorida i L-arginin hidrohlorida su podešeni da bi se razvila formulacija koja obuhvata visoku koncentraciju mAb1 pri niskoj viskoznosti i visokoj fiziološkoj toničnosti da bi se omogućilo laka, udobna i brza potkožna isporuka velike količine mAb1 (Tabela 7). Tečna formulacija koja obuhvata 25 mM arginina, 20 mM histidina, 12,5 mM acetata, 5% (w/v) saharoze, 0,2% (w/v) polisorbata 20, i 150 mg/mL mAb1, pri pH 5,9 (Formulacija A) predstavlja optimizovanu formulaciju koja ima malu viskoznost (oko 8,5 cPoaza) i fiziološki je izotonična (oko 293 mOsm/kg), pri čemu se održava stabilnost mAb1.

Tabela 7

(nastavak)

Primer 5. Karakterizacija Formulacije A

[0111] Glavne putanje razgradnje identifikovane tokom razvoja te mAb1 tečne formulacije su bile formiranje agregata, proizvoda deljenja, i varijanti naelektrisanja. Formiranje ovih proizvoda razgradnje je bilo svedeno na minimum formulisanjem mAb1 u formulaciji koja obuhvata 20 mM histidina, 12,5 mM acetata, 0,2% polisorbata 20, 5% saharoze i 25 mM L-arginin hidrohlorida na vrednosti pH 5,9. Formulisano je 150 mg/mL mAb1 primećeno je da je bistar do blago opalescentan tečni rastvor, u suštini bez vidljivih čestica.

[0112] Formulisano mAb1 je bilo fizički i hemijski stabilno kada je podvrgnuto različitom naprezanju (25°C i 45°C inkubacije) i uslovima čuvanja u realnom vremenu (5°C) (Tabela 8). Izgled je bio nepromenjen kada je mAb1 bilo inkubirano na 25°C (3 meseca) ili skladišten na 5°C tokom 6 meseci. Pored toga, nije bilo primećeno da je postojao bilo kakave promene kada je reč o pH rastvora, zamućenost, ili količine oporavljenog mAb1. Posle inkubacije formulisanog mAb1 tokom 3 meseca na 25°C, to antitelo nije bilo značajno razgrađeno kao što je utvrđeno putem SE-HPLC i bilo je 3,3% još razgrađenije kako je određeno pomoću CEX-HPLC. Primećena je povećana razgradnja posle inkubacije na 45°C tokom 8 nedelja kako je utvrđeno pomoću SE-HPLC i CEX-HPLC što je ukazalo da formiranje agregata i varijante naelektrisanja jesu glavne putanje razgradnje za molekul mAb1 antitela. Nije primećena nikakva razgradnja kada je formulisano mAb1 antitelo čuvano tokom 6 meseci na 5°C.

Tabla 8

[0113] Prema Tabeli 8, OD = Optička gustina; RP-HPLC = tečna hromatografija visokih performansi na reveznoj fazi; SE-HPLC = tečna hromatografija visokih performansi sa ekskluzijom prema veličini; i CEX-HPLC = katjon izmenjivačka tečna hromatografija visokih performansi. Vrste koje imaju pH vrednost kiseline ili baze se definišu kao zbir mAb1 vršnih vrednosti koje se eluiraju iz CEX-HPLC kolone sa ranijim ili kasnijim vremenima zadržavanja manjim od glavne vršne vrednosti, prema opisanom redosledu.

Primer 6. Posude

[0114] Formulacije koje obuhvataju mAb1 su određene kao stabilne kada su sterilisane filtriranjem. Uređaj za filtraciju Millipore MILLIPAK je korišćen za proizvodnju kliničkih zaliha dok je filter identičnog sastava korišćen u istraživačkim studijama (Millipore MILLEX DURAPORE).

[0115] Staklena bočica od 5-mL je napunjena sa najmanje 2,5 mL 150 mg/mL mAb1, 5% (w/v) saharoze, 25 mM L-arginin hidrohlorida, 0,2% (w/v) polisorbata 20, 12,5 mM acetata, 20 mM histidina, pH 5,9. Prekomernih 0,5 mL formulacije je stavljeo u 5-mL bočicu da bi se osiguralo da 2,0 mL te formulacije može da se povuče. Ova količina nije predviđena da nadoknadi gubitke tokom proizvodnje mAb1 ili formulacije koja obuhvata mAb1, razgradnju tokom proizvodnje, razgradnje tokom skladištenja (vek upotrebe na polici), ili da se produži istekli datirani period.

[0116] U poređenju sa čuvanjem u staklenim bočicama, stabilnost formulisanog mAb1 (Formulacija A) nije pretrpela promenukada se čuva u bilo polipropilen epruveti, polistiren epruveti, polikarbonat epruveti, ili u staklenoj bočici koja obuhvata delove od nerđajućeg čelika (Tabela 9).

Tabela 9

[0117] Prema Tabeli 9, 150 mg/mL mAb1, 5% Saharoze, 25 mM arginin hidrohlorida, 0,2% PS-20, 20 mM histidin, 12,5 mM acetata, pH 5,9 je inkubirano sa/u različitim materijalima na 40°C tokom 14 dana. OD = optička gustina; RP-HPLC = tečna hromatografija visokih performansi na reverznoj fazi; SE-HPLC = tečna hromatografija visokih performansi sa ekskluzijom prema veličini; i CEX-HPLC = katjon izmenjivačka tečna hromatografija visokih performansi. Zamućenost je prijavljena kao relativna promena u OD na 405 nm u poređenju sa početnim materijalom. Vrste koje imaju pH vrednost kiseline ili baze se definišu kao zbir mAb1 vršnih vrednosti koje se eluiraju iz CEX-HPLC kolone sa ranijim ili kasnijim vremenima zadržavanja manjim od glavne vršne vrednosti, prema opisanom redosledu.

Claims (16)

Patentni zahtevi

1. Stabilna tečna farmaceuska formulacija koja obuhvata:

(i) Humano antitelo koje se specifično veže na humani interleukin-4 receptor alfa (hIL-4Rα) u koncentraciji od najviše 200 mg/ml, pri čemu pomenuto humano antitelo koje se specifiično veže na hIL-4R obuhvata dva teška lanca i dva laka lanca, svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) sa sekvencom amino kiseline od SEK ID BR: 1 i konstantnim regionom teškog lanca sa domenima CH1, CH2 i CH3, i svaki laki lanac obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) sa sekvencom amino kiseline SEK ID BR:5 i konstantnim regionom lakog lanca;

(ii) acetat u koncentraciji od 12,5 mM ± 2 mM;

(iii) histidin u koncentraciji od 20 mM ± 3 mM;

(iv) saharoza u koncentraciji od 5% w/v ± 0,75% w/v;

(v) polisorbat 20 ili polisorbat 80 u koncentraciji od 0,2% w/v ± 0,03% w/v; i (vi) arginin u koncentraciji od 25 mM ± 3,75 mM ili u koncentraciji od 50 mM ± 7,5 mM;

pri čemu ta formulacija ima pH od 5,6 do 6,2, i

pri čemu se barem 90% prirodnog oblika tog antitela oporavlja posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

2. Tečna farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je:

(a) to antitelo u koncentraciji od 150 mg/ml ± 50 mg/ml;

(b) to antitelo u koncentraciji od 100 mg/ml;

(c) to antitelo u koncentraciji od 150 mg/ml ± 15 mg/ml; ili

(d) to antitelo u koncentraciji od 175 mg/ml.

3. Stabilna tečna farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, obuhvata polisorbat 20 u koncentraciji od 0,2% ± 0,03% w/v.

4. Stabilna tečna farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, obuhvata polisorbat 80 u koncentraciji od 0,2% ± 0,03% w/v.

5. Stabilna tečna farmaceutska formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, koja obuhvata arginin u koncentraciji od 25 mM ± 3,75 mM.

6. Stabilna tečna farmaceutska formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, obuhvata arginin u koncentraciji od 50 mM ± 7,5 mM.

7. Stabilna farmaceutska formulacija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je:

(a) viskoznost te tečnosti manja od ili jednaka 35 ± 3,5 cPoaza;

(b) viskoznost te tečnosti 21,5 ± 13,5 cPoaza;

(c) viskoznost te tečnosti 11 ± 1,1 cPoaza ili 8,5 ± 0,85 cPoaza; i/ili

(d) osmolalnost te tečnosti 290 ± 20 mOsm/kg.

8. Stabilna farmaceutska formulacija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu se:

(a) barem 95% prirodnog oblika tog antitela oporavlja posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini;

(b) barem 98% prirodnog oblika pomenutog antitela oporavlja posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini; (c) barem 90% prirodnog oblika pomenutog antitela oporavlja posle osam nedelja skladištenja na 45°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini; (d) manje od 45% antitela oporavljenog posle osam nedelja skladištenja na 45°C poprima kiselinski oblik, kako je određeno katjon-izmenjivačkom hromatografijom; ili

(e) manje od 4% antitela oporavljenog posle šest meseci skladištenja na 25°C agregira, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

9. Stabilna tečna farmaceutska formulacija iz bilo kog od prethodnih patentnih zahteva sadržanih u:

(a) staklenoj bočici;

(b) špricu; ili

(c) mikroinfuzoru.

10. Stabilna tečna farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 9, smeštena u špric pri čemu:

(a) Pomenuti špric obuhvata fluorokarbonom zaštićen potiskivač; i/ili

(b) Pomenuti špric je špric od male količine volframa.

11. Stabilna tečna farmaceutska formulacija obuhvata:

(i) 150 mg/ml ± 50 mg/ml humanog antitela koje se specifično veže na hIL-4Rα, pri čemu pomenuto antitelo obuhvata dva teška lanca i dva laka lanca, svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR: 1 i konstantni region teškog lanca koji obuhvata domene CH1, CH2 i CH3, i svaki laki lanac koji obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR:5 i konstantni region lakog lanca; (ii) 12,5 mM ± 2 mM acetata; (iii) 20 mM ± 3 mM histidina; (iv) 5% ± 0,75% saharoze; (v) 0,2% ± 0,03% polisorbata 20; i (vi) 25 mM ± 3,75 mM arginina, na pH od 5,9 ± 0,5, i

pri čemu se barem 98% prirodnog oblika pomenutog antitela oporavlja posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

12. Stabilna tečna farmaceutska formulacija koja obuhvata: (i) 150 mg/ml ± 50 mg/ml humanog antitela koje se specifično veže na hIL-4Rα, pri čemu pomenuto antitelo obuvata dva teška lanca i dva laka lanca, pri čemu svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline od SEK ID BR: 1 i konstantni region teškog lanca koji obuhvata domene CH1, CH2 i CH3, i svaki laki lanac obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR: 5 i konstantni region lakog lanca; (ii) 12,5 mM ± 2 mM acetata; (iii) 20 mM ± 3 mM histidina; (iv) 5% ± 0,75% saharoze; (v) 0,2% ± 0,03% polisorbata 80; i (vi) 25 mM ± 3,75 mM arginina, pri vrednosti PH od 5,9 ± 0,5, i pri čemu barem 98% prirodnog oblika pomenutog antitela se oporavlja posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

13. Stabilna tečna farmaceutska formulacija koja obuhvata: (i) 175 mg/ml humanog antitela koje se specifično veže na hIL-4Rα, pri čemu pomenuto antitelo obuhvata dva teška lanca i dva laka lanca, svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR: 1 i konstantni region teškog lanca obuhvata domene CH1, CH2 i CH3, i svaki laki lanac obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR:5 i konstantni region lakog lanca; (ii) 12,5 Mm ± 2 mM acetata; (iii) 20 mM ± 3 mM histidina; (iv) 5% ± 0,75% saharoze; (v) 0,2% ± 0,03% polisorbata 20; i (vi) 50 mM ± 3.75 mM arginina, pri vrednosti pH od 5,9 ± 0,5, i pri čemu se barem 98% prirodnog oblika pomenutog antitela oporavlja posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

14. Stabilna tečna farmaceutska formulacija koja obuhvata: (i) 175 mg/ml humanog antitela koje se specifično veže na hIL-4Rα, pri čemu pomenuto antitelo obuhvata dva teška lanca i dva laka lanca, svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR: 1 i konstantni region teškog lanca obuhvata domene CH1, CH2 i CH3, i svaki laki lanac obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) koji obuhvata sekvencu amino kiseline SEK ID BR:5 i konstantni region lakog lanca; (ii) 12,5 mM ± 2 mM acetata; (iii) 20 mM ± 3 mM histidina; (iv) 5% ± 0,75% saharoze; (v) 0,2% ± 0,03% polisorbata 80; i 50 mM ± 3,75 mM arginina, pri vrednosti pH od 5,9 ± 0,5, i

pri čemu se barem 98% prirodnog oblika pomenutog antitela oporavlja posle šest meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini.

15. Stabilna tečna farmaceutska formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 11 do 14, pri čemu:

(a) viskoznost tečnosti jeste 11 ± 1,1 cPoaza ili 8,5 ± 0,85 cPoaza; ili

(b) ta osmolalnost te tečnosti je 290 ± 20 mOsm/kg.

16. Stabilna tečna farmaceutska formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 11 do 15, pri čemu:

(a) barem 90% prirodnog oblika pomenutog antitela se oporavlja posle osam nedelja skladištenja na 45°C, kako je određeno ekskluzionom hromatografijom prema veličini;

(b) manje od 45% antitela je oporavljeno posle osam nedelja skladitšenja na 45°C je kiselinski oblik, kako je utvrđeno katjonizmenjivačkm hromatografijom; ili

(c) manje od 4% antitela je oporavljeno posle šest meseci skladištenja na 25°C se agregira, kako je utvrđeno izmenjivačkom hromatografijom sa ekskluzijom prema veličini.

Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5