RS62517B1 - Derivati imidazopiridina i njihova upotreba kao leka - Google Patents

Description

Ovaj pronalazak se odnosi na imidazopiridine sa opštom formulom A

, O

1

na postupke za njihovu pripremu, farmaceutske sas Otave koji ih R sadrže i njihovu upotrebu u terapiji, posebno u lečenju ili prevenciji stanja koja su povezana sa NR2B negativnim alosteričkim modulirajućim svojstvima.

Jedinjenja iz pronalaska prema opštoj formuli A pokazuju NR2B negativna alosterična modulirajuća svojstva.

Opsežna istraživanja u proteklih dvadeset godina su pokazala da N-metil-D-aspartat receptori (NMDA) igraju značajnu ulogu u Alchajmerovoj bolesti, Parkinsonovoj bolesti, diskineziji, moždanom udaru, bolesti motornih neurona, psihozi, epilepsiji, anksioznosti, šizofreniji i bolu.

Neselektivni antagonist NMDA receptora, ketamin, (racemski kao i S enantiomer), lek koji se uglavnom koristi za početak i održavanje anestezije, pokazao je tokom poslednjih godina kliničku efikasnost u lečenju velikog depresivnog poremećaja (MDD) u subanestetskim dozama (Murrough et al.2013, Am J Psychiatry.170: 1134; Singh et al. 2016, Biol Psychiatry.80: 424). Tačnije, ketamin izaziva brzi početak efikasnosti koji traje nekoliko dana kod pacijenata sa MDD koji nedovoljno reaguju na standardnu terapiju lekovima. (Berman et al.2000. Biol Psychiatry 47:351, Serafini et al.2014. Curr. Neuropharmacol.12:444). Međutim, neselektivni antagonisti NMDA receptora imaju niz neželjenih efekata koji ograničavaju njihovu primenu. Posebno su istaknuti disocijativni i psihogeni neželjeni efekti za neselektivne antagoniste NMDA receptora kao što je ketamin (Krystal et al.1994. Arch. Gen. Psychiatry 51:199). Početkom 1990-ih, otkriveno je da postoji više podtipova NMDA receptora, koji sadrže različite NR2(A-D) podjedinice (Paoletti et al., 2013 Nat Rev. Neurosci 14:383). Nedavno su NR2B podtipovi selektivnih NMDA receptora negativnih alosterični modulatora (NR2B NAM) podigli interesovanje i pokazali potencijal u širokom spektru kliničkih indikacija, kao što su pažnja, emocije, raspoloženje i bol, kao i učešće u brojnim različitim poremećajima kod ljudi (Mony et. al.2009. Br. J. Pharmacol.157:1301; Chaffey et al., Current Anaesthesia & Critical Care 19, 183). Konkretno, NR2B NAM je takođe pokazao antidepresivnu efikasnost u ranoj fazi kliničkih ispitivanja (Preskorn et al.2008. J Clin Psychopharmacol 70:58). Pretkliničke studije korišćenjem NR2B NAM kao i primenom različitih sojeva transgenih miševa su pokazale da NMDA-receptori koji sadrže NR2B posreduju pozitivno dejstvo ketamina u npr. testu prisilnog plivanja (Miller et al.2014 eLife 3:e03581; Kiselycznyk et al.2015, Behav Brain Res, 287:89). Štaviše, selektivni NR2B NAM ima prednosti u odnosu na neselektivne antagoniste NMDA receptora, kao što je ketamin, zbog znatno smanjenih disocijativnih i psihomimetičkih nuspojava (Jimenez-Sanchez et al.2014. Neuropsychopharmacology 39:2673). NR2B NAM opisani do danas su pokazali nedostatke u pogledu farmakologije receptora i/ili drugih svojstava leka koja imaju ograničenu potencijalnu upotrebu u terapiji lekovima kod ljudi (Taylor, et al., 2006, Clin Pharmacokinet.45: 989; Addy et al. 2009 J of Clinical Pharmacology 49:856)).

WO2016/29146 otkriva jedinjenja sa formulom (I)

koji su inhibitori metionil-tRNK sintetaze (MetRS) koji su bili korisni kao antibiotici. Formula (I) u WO2016/29146 obuhvata specifične primere 1734, 1744, 1745, 1757, 1758, 1785 i 1790 koji pokazuju benzimidazolsku ili imidazopiridinsku supstrukturu.

Iznenađujuće je pronađeno da su jedinjenja iz ovog pronalaska potentni NR2B negativni alosterični modulatori (videti tabelu 1), dok specifični primeri 1734, 1744, 1745, 1757, 1758, 1785 i 1790 iz WO2016/29146 pokazuju prilično negativnu alosteričnu modulaciju kod NR2B jonskog kanala ili uopšte nemaju aktivnosti (videti tabelu 2).

US2002/055519 otkriva 1H-imidazo[4,5-b]piridin-2-il jedinjenja koja su efikasna kao NMDA NR2B antagonisti korisni za ublažavanje bola.

Dalje, jedinjenja iz ovog pronalaska pokazuju dobru permeabilnost membrane i nizak do umeren in vitro efluks (videti tabelu 3 za MDCK test MDR1 (p-GP) i tabelu 4 za MDCK test BCRP). Stoga se očekuje da jedinjenja iz ovog pronalaska pokazuju povoljan prodor u mozak koji je neophodan za efikasne CNS lekove.

MDCK testovi pružaju informacije o potencijalu jedinjenje da prođe krvno-moždanu barijeru. Merenja propustljivosti kroz polarizovane, konfluentne MDCK-MDR1 jednoslojne ćelije uzgojene na propustljivim nosačima filtera koriste se kao in vitro apsorpcioni model: mere se prividni koeficijenti propustljivosti (PE) jedinjenja preko monosloja ćelija MDCK-MDR1 (pH 7,4, 37°C) u apikalno-bazalnom (AB) i bazalnoapikalnom (BA) transportnom smeru. AB permeabilnost (PEAB) predstavlja apsorpciju leka iz krvi u mozak i BA permeabilnost (PEBA) efluksa leka iz mozga nazad u krv putem i pasivne permeabilnosti, kao i putem mehanizama aktivnog transporta koji su posredovani transporterima efluksa i ponovnog preuzimanja koji su eksprimirani na MDCK-MDR1 ćelijama, pretežno pomoću prekomerne eksprimiranih humanih MDR1. Identične ili slične permeabilnosti u oba transportna pravca ukazuju na pasivnu permeaciju, tačke vektorske permeabilnosti na dodatne mehanizme aktivnog transporta. Viši PEBA od PEAB (PEBA/PEAB >5) ukazuje na uključenost aktivnog efluksa posredovanog sa MDR1, što može ugroziti cilj da se postigne dovoljna izloženost mozga. Stoga, ovaj test pruža dragocenu podršku za izbor jedinjenja primenljivih za dalje in vivo testiranje. Visoka permeabilnost koja nije ograničena efluksom na krvno-moždanoj barijeri je povoljna karakteristika za jedinjenja koja se koriste kao lekovi koji deluju prvenstveno u CNS. Slični koncepti su primenljivi na MDCK BCRP test i njegovu interpretaciju; shodno tome, da bi se obezbedila visoka propustljivost na krvno-moždanoj barijeri, veoma je poželjno minimizirati efluks (efluks <5) i na MDR1 i na BCRP transporterima.

Dalje, jedinjenja iz ovog pronalaska su metabolički stabilna u mikrozomima ljudske jetre (videti tabelu 5, metabolička stabilnost). Stoga se očekuje da jedinjenja iz ovog pronalaska imaju povoljan in vivo klirens, a time i željeno trajanje delovanja kod ljudi. Stabilnost mikrozoma ljudske jetre odnosi se na osetljivost jedinjenja na biotransformaciju u kontekstu odabira i/ili dizajniranja lekova sa povoljnim farmakokinetičkim svojstvima. Primarno mesto metabolizma mnogih lekova je jetra.

Mikrozomi ljudske jetre sadrže citohrom P450s (CIPs), pa predstavljaju modelni sistem za proučavanje metabolizma leka in vitro. Povećana stabilnost u mikrozomima ljudske jetre povezana je sa nekoliko prednosti, uključujući povećanu bioraspoloživost i adekvatan poluživot, što može omogućiti niže i ređe doziranje kod pacijenata. Zbog toga, povećana stabilnost u mikrozomima ljudske jetre je povoljna karakteristika za jedinjenja koja će se koristiti za lekove.

Shodno tome, jedinjenja iz ovog pronalaska moraju biti više vijabilna za ljudsku upotrebu.

Objektivni tehnički problem je stoga obezbediti potentne NR2B negativne alosterične modulatore.

Ovaj pronalazak obezbeđuje imidazopiridine sa formulom A

O

u kojima O R1

R<1>predstavlja fenil koji je opciono supstituisan sa 1 do 3 supstituenta odabranih iz grupe koja se sastoji od fluor, hlor, metil, etil, ciklopropil, F2HC–, FH2C–, F3C–; R<2>predstavlja vodonik, metil;

R<3>predstavlja vodonik, fluor;

ili njihove soli, naročito njihove farmaceutski prihvatljive soli.

U drugom rešenju, u opštoj formuli A, R<1>ima isto značenje kao što je definisano u bilo kom od prethodnih rešenja, i

R<2>predstavlja vodonik;

R<3>predstavlja fluor.

U drugom rešenju, u opštoj formuli A, R<1>ima isto značenje kao što je definisano u bilo kom od prethodnih rešenja, i

R<2>predstavlja metil;

R<3>predstavlja vodonik.

U drugom rešenju, u opštoj formuli A, R<1>ima isto značenje kao što je definisano u bilo kom od prethodnih rešenja, i

R<2>i R<3>predstavljaju vodonik.

U drugom rešenju, u opštoj formuli A, R<2>i R<3>imaju isto značenje kao što je definisano u bilo kom od prethodnih rešenja, i

R<1>predstavlja fenil koji je opciono supstituisan sa 1 ili 2 supstituenta odabranih iz grupe koja se sastoji od fluor, hlor, metil, F2HC–.

U drugom rešenju, u opštoj formuli A, R<2>i R<3>imaju isto značenje kao što je definisano u bilo kom od prethodnih rešenja, i

R<1>predstavlja

* * * Cl

F

* Cl * *

Ovaj pronalazak obezbeđuje imidazopirid Fine sa opštom formulom A koji su neočekivano potentni NR2B negativni alosterični modulatori.

Drugi aspekt pronalaska se odnosi na jedinjenja prema formuli A kao NR2B negativne alosterične modulatore koji imaju odgovarajuću permeabilnost membrane i nizak do umeren in vitro efluks.

Još jedan aspekt pronalaska se odnosi na jedinjenja prema formuli A kao NR2B negativne alosterične modulatore koji imaju visoku metaboličku stabilnost u mikrozomima ljudske jetre.

Još jedan aspekt pronalaska se odnosi na jedinjenja prema formuli A kao NR2B negativne alosterične modulatore koji imaju odgovarajuću membransku propustljivost, nizak do umeren in vitro efluks i visoku metaboličku stabilnost u mikrozomima ljudske jetre.

Još jedan aspekt pronalaska se odnosi na farmaceutske kompozicije, koje sadrže najmanje jedno jedinjenje prema formuli A opciono zajedno sa jednim ili više inertnih nosača i/ili razblaživača.

Dalji aspekt ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja prema formuli A, za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju poremećaja povezanih sa NR2B negativnim alosteričnim modulatorima.

Još jedan aspekt pronalaska se odnosi na procese proizvodnje jedinjenja iz ovog pronalaska.

Priprema

Sledeće šeme će uopšteno ilustrovati kako da se proizvedu jedinjenja prema opštoj formuli A i odgovarajuća intermedijerna jedinjenja kao primer. Skraćenice supstituenta mogu biti kao što je gore definisano ako nije drugačije definisano u kontekstu šema.

Šema 1

Šema 2

Alternativno, sinteza prema šemama 1 i 2 može se izvesti korišćenjem racemskog morfolin-2,4-dikarboksilna kiselina 4-terc-butil estra kao početnog materijala.

Obe šeme, 1 i 2 mogu se uspešno koristiti za sintezu konačnih jedinjenja u gramima počevši od 40 mmola željenog supstituisanog morfolina (racemskog ili S enantiomera; Primeri 3b, 3d, 3e prema eksperimentalnom delu), koristeći višak željenog supstituisanog benzil alkohola, DIPEA (3 ekvivalenta), potrebnog sredstva za spajanje kao što je CDI i DMF kao rastvarač.

Alternativna sinteza u gramima može se izvršiti korišćenjem odgovarajućeg morfolina (racemični ili S enantiomer; 40 mmol), TEA (2,5 ekvivalenta), blagi višak potrebnog imidoilkarbonata i 1/1 smešu CH3CN/THF kao rastvarač .

U šemama 1 i 2 svi supstituenti R1, R2 i R3 imaju značenje kao što je definisano za opštu formulu A, sva rešenja pronalaska koje se direktno odnose na njih i specifično značenje kao što je definisano u zahtevima.

OPŠTE DEFINICIJE

Terminima koji ovde nisu posebno definisani treba dati značenja koja bi im dao stručnjak u ovoj oblasti u svetlu otkrivanja i konteksta.

U slučaju da je jedinjenje ovog pronalaska prikazano u obliku hemijskog imena kao i formule, formula će preovladati u slučaju bilo kakvog neslaganja.

Zvezdica se može koristiti u podformulama da označi vezu koja je povezana sa jezgrom molekula ili sa supstituentom za koji je vezana kao što je definisano.

Termin "supstituisan" kako se ovde koristi znači da je bilo jedan ili više vodonika na naznačenom atomu zamenjeno sa izborom iz naznačene grupe, pod uslovom da nije prekoračen vitalni valentni broj označenog atoma, odnosno da supstitucija rezultira stabilnim jedinjenjem .

Stereohemija:

Osim ako nije posebno naznačeno, u celoj specifikaciji i priloženim zahtevima, data hemijska formula ili naziv će obuhvatati rotamere, tautomere i sve stereo, optičke i geometrijske izomere (na pr. enantiomere, dijastereoizomere, E/Z izomere itd.) i njihove racemate, kao i smeše u različitim proporcijama zasebnih enantiomera, smeše dijastereoizomera, ili smeše bilo kog od prethodnih oblika gde takvi izomeri i enantiomeri postoje, kao i njihove soli, uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli.

Opšta formula A

O O R1

sadrži oba tautomera A-1 i A-2:

O R1 O R1 Sva jedinjenja iz ovog pronalaska postoje u svojim tautomernim oblicima A1 i/ili A2.

Soli:

Izraz "farmaceutski prihvatljiv" se ovde koristi da se odnosi na ona jedinjenja, materijale, kompozicije, i/ili oblike doziranja koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, ili drugih problema ili komplikacija, srazmerno razumnom odnosu koristi i rizika.

Kako se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljive soli" se odnose na derivate otkrivenih jedinjenja u kojima matično jedinjenje formira so ili kompleks sa kiselinom ili bazom. Primeri kiselina koje formiraju farmaceutski prihvatljivu so sa matičnim jedinjenjem koje sadrži bazni ostatak uključuju mineralne ili organske kiseline kao što su benzensulfonska kiselina, benzojeva kiselina, limunska kiselina, etansulfonska kiselina, fumarna kiselina, gentizinska kiselina, bromovodonična kiselina, hlorovodonična kiselina, maleinska kiselina, jabučna kiselina, malonska kiselina, bademova kiselina, metansulfonska kiselina, 4-metil-benzensulfonska kiselina, fosforna kiselina, salicilna kiselina, sukcinilna kiselina, sumporna kiselina ili vinska kiselina.

Primeri katjona i baza koje formiraju farmaceutski prihvatljivu so sa matičnim jedinjenjem koje sadrži kiseli ostatak uključuju Na<+>, K<+>, Ca<2+>, Mg<2+>, NH4<+>, L-arginin, 2,2'-iminobisetanol, L-lizin, N-metil-D- glukamin ili tris(hidroksimetil)-aminometan.

Farmaceutski prihvatljive soli iz ovog pronalaska mogu se sintetizovati iz matičnog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli ostatak konvencionalnim hemijskim metodama. Generalno, takve soli se mogu pripremiti reakcijom slobodnih kiselinskih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa dovoljnom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču kao što je etar, etil acetat, etanol, izopropanol, ili acetonitril, ili njihovoj smeši. Soli drugih kiselina osim onih koje su gore pomenute, koje su na primer korisne za prečišćavanje ili izolovanje jedinjenja iz ovog pronalaska (npr. trifluoracetatne soli) takođe čine deo pronalaska.

BIOLOŠKE ANALIZE I PODACI

Spisak skraćenica

BCRP Protein rezistencije raka dojke

DMEM Dulbekoov modifikovani orlovski medijum

FBS fetalni goveđi serum

FLIPR čitač ploča sa fluorometrijskim slikama

HEK293 ćelijska linija izvedena iz embrionalnih ćelija bubrega čoveka HEPES pufer hidroksietil-piperazin-etansulfonske kiseline

MDCK Madin-Darby pseći bubreg

MDR1 Protein rezistencije 1 na više lekova

p-GP p-glikoprotein

In-vitro efekat:

Određivanje in vitro farmakološke aktivnosti

Aktivnost jedinjenja iz pronalaska može se pokazati korišćenjem sledećih in vitro NMDA NR1/NR2b ćelijskih testova:

Metod:

Humana ćelijska linija HEK293 sa tetraciklin-inducibilnom ekspresijom NMDA NR1/NR2B receptora korišćena je kao sistem za ispitivanje efikasnosti i potencije jedinjenja. Ćelijska linija je nabavljena od ChanTest-a, kataloški broj #CT6121.

Aktivnost jedinjenja je određena merenjem efekta jedinjenja na intracelularnu koncentraciju kalcijuma koji je indukovan glicin/glutamat agonizmom u sistemu FLIPRtetra (Molekularni Uređaji).

Ćelijska kultura:

Ćelije su dobijene kao zamrznute ćelije u krio-bočicama koje su čuvane na -150 ° C do upotrebe.

Ćelije su uzgajane u medijumu za kultivaciju (DMEM/F12, 10% FBS, 5 µg/mL blasticidina, 150 µg/mL zeozina, 500 µg/mL geneticina). Važno je da gustina ne prelazi 80% sastava. Za subkultivisanje, ćelije su odvojene od boca pomoću Versene-a. Za test, ćelije su odvojene, isprane dva puta indukcionim medijumom (DMEM/F12 bez glutamina, 10% FBS, 2 µg/mL tetraciklina, 2 mM ketamina) i zasejane u 384 bunarčića čiste obložene aminske ploče (BD 359324, 50000 ćelija po bunarčiću u 50 µl) 48 h pre analize u indukcionom medijumu.

Priprema jedinjenja

Testirana jedinjenja su rastvorena u 100% DMSO u koncentraciji od 10 mM i u prvom koraku razblaženom u DMSO do koncentracije od 5 mM, nakon čega su usledili koraci serijskog razblaživanja u 100% DMSO. Faktor razblaženja i broj koraka razblaživanja može da varira u zavisnosti od potreba. Obično je 8 različitih koncentracija sa razblaženjima 1:5 pripremljeno u duplikatu, dalja intermedijarna razblaženja (1:37,5) supstanci su sprovedena sa vodenim puferom za analizu (137mM NaCl, 4mM KCl, 1,8mM CaCl, 10mM HEPES, 10mM glukoze, pH 7,4) što rezultira jedinjenjem koncentracije 3 puta iznad konačne ispitivane koncentracije i DMSO na 2,7% što rezultira 0,9% konačne koncentracije DMSO u testu.

FLIPR analiza:

Na dan analize, ćelije su isprane 3x puferom za ispitivanje, 10 µL pufera je ostalo u bunarčićima nakon ispiranja.10 µL Ca pufera za punjenje iz kompleta (AAT Bioquest) je dodat u ćelije i ploče su inkubirane sa poklopcem 60 minuta na s.t.20 µl pufera za ispitivanje koji sadrži 60 µM glicina (20 µM konačno) i 3 µM glutamata (1 µM konačno) dodato je u kolonu 1-23. Fluorescencija (što ukazuje na priliv kalcijuma kao rezultat aktivacije jonskih kanala NR1/NR2B) je očitana na FLIPRtetra uređaju tokom 60 sekundi da bi se pratili efekti izazvani glutamatom. Posle 2 minuta 20 µL jedinjenja ili kontrola (red 1-22) u puferu za ispitivanje je pažljivo dodato u bunarčiće.

Fluorescencija je očitana na FLIPR tetra uređaju u toku dodatnih 6 minuta da bi se pratili efekti izazvani jedinjenjem nakon aktivacije pomoću agonista. Prosek od 2 merenja na 5 minuta i 5 minuta 10 sekundi nakon dodavanja jedinjenja se izračunava i dalje koristi za proračune IC50. Svaka mikrotitarska ploča za test je sadržavala bunarčiće (u koloni 23 ili 24) sa DMSO kontrolama umesto jedinjenja kao kontrole za fluorescenciju izazvanu glicinom/glutamatom (visoke kontrole) i bunarčiće sa 1 µM referentnog NR2b NAM kao niske kontrole (Compound 22; reference: Layton, Mark E et al, ACS Chemical Neuroscience 2011, 2(7), 352-362).

Procena podataka i proračun:

Izlazna datoteka čitača sadrži izmerene prosečne jedinice fluorescencije i broja bunara. Za procenu podataka i proračun, merenje niske kontrole je postavljeno kao 0% kontrole i merenje visoke kontrole je postavljeno kao 100% kontrole. Vrednosti IC50 su izračunate korišćenjem standardne formule logističke regresije sa 4 parametra. Obračun:

[y=(a-d)/(1+(x/c)^b)+d], a = niska vrednost, d = visoka vrednost; x = konc M; c=IC50 M; b = nagib.

Poželjni su NR2B negativni alosterični modulatori pokriveni opštom strukturom A i koji pokazuju nisku vrednost IC50.

Tabela 1 In vitro afinitet jedinjenja iz ovog pronalaska kako je dobijen u FLIPR testu

Tabela 2 In vitro afinitet najbližih jedinjenja prethodnog stanja tehnike (primeri 1734, 1744, 1745, 1757, 1758, 1785 i 1790 u WO2016/29146) dobijen u istom FLIPR testu kao jedinjenja u tabeli 1

MDCK analiza MDR-1 (p-GP)

Koeficijenti prividne permeabilnosti (Papp) jedinjenja preko MDCK-MDR1 monoslojeva (MDCKII ćelije transfektovane humanim MDR1 cDNK ekspresionim plazmidom) merene su u smeru apikalno-bazalno (AB) i bazalno-apikalno (BA).

Ćelije MDCK-MDR1 (6 x 10<5>ćelija/cm<2>) su zasejane na filterske umetke (Corning, Transwell, polikarbonat, veličina pora 0,4 μm) i kultivisane 9 do 10 dana. Jedinjenja rastvorena u osnovnom rastvoru DMSO (1 - 20 mM) su razblažena sa HTP-4 vodenim puferom (128.13 mM NaCl, 5.36 mM KCl, 1 mM MgSO4, 1.8 mM CaCl2, 4.17 mM NaHCO3, 1.19 mM Na2HPO4, 0.41 mM NaH2PO4, 15 mM HEPES, 20 mM glukoze, pH 7.4) sa dodatkom 0,25% BSA za pripremu transportnih rastvora (konačna koncentracija: 1 ili 10 μM, konačni DMSO <= 0,5 %). Transportni rastvor se nanosi na apikalnu ili bazolateralnu stranu donora radi merenja A-B ili B-A permeabilnosti, respektivno. Strana prijemnika sadrži HTP-4 pufer dopunjen sa 0,25% BSA. Uzorci se sakupljaju na početku i kraju eksperimenta od donora i u različitim vremenskim intervalima do 2 sata takođe sa strane prijemnika za merenje koncentracije pomoću HPLC-MS/MS. Uzorkovane zapremine prijemnika se zamenjuju svežim rastvorom prijemnika. Odnos efluksa se izračunava deljenjem vrednosti Papp (b-a) sa vrednostima Papp (a-b). Rezultati su prikazani u tabeli 3.

Tabela 3

Eksperimentalni rezultati iznad pokazuju da su jedinjenja iz ovog pronalaska potentni NR2B NAM-ovi koji imaju dobru permeabilnost membrane i nizak do umeren in vitro efluks.

MDCK analiza BCRP

Koeficijenti prividne permeabilnosti (Papp) jedinjenja preko MDCK-BCRP monoslojeva (MDCKII ćelije transfektovane humanim BCRP cDNK ekspresionim plazmidom) merene su u pravcu apikalno-bazalnom (AB) i bazalno-apikalnom (BA).

Ćelije MDCK-MDR1 (6 x 10<5>ćelija/cm<2>) su zasejane na filterske umetke (Corning, Transwell, polikarbonat, veličina pora 0,4 μm) i kultivisane 9 do 10 dana. Jedinjenja rastvorena u osnovnom rastvoru DMSO (1 - 20 mM) su razblažena sa HTP-4 vodenim puferom (128.13 mM NaCl, 5.36 mM KCl, 1 mM MgSO4, 1.8 mM CaCl2, 4.17 mM NaHCO3, 1.19 mM Na2HPO4, 0.41 mM NaH2PO4, 15 mM HEPES, 20 mM glukoze, pH 7.4) sa dodatkom 0,25% BSA za pripremu transportnih rastvora (konačna koncentracija: 1 ili 10 μM, konačni DMSO <= 0,5 %). Transportni rastvor se nanosi na apikalnu ili bazolateralnu stranu donora radi merenja A-B ili B-A permeabilnosti, respektivno. Strana prijemnika sadrži HTP-4 pufer dopunjen sa 0,25% BSA. Uzorci se sakupljaju na početku i kraju eksperimenta od donora i u različitim vremenskim intervalima do 2 sata takođe sa strane prijemnika za merenje koncentracije pomoću HPLC-MS/MS. Uzorkovane zapremine prijemnika se zamenjuju svežim rastvorom prijemnika. Odnos efluksa se izračunava deljenjem vrednosti Papp (b-a) sa vrednostima Papp (a-b). Rezultati su prikazani u Tabeli 4.

Tabela 4

Metabolička stabilnost

Metabolička degradacija testiranih jedinjenja je analizirana na 37 °C sa skupljenim mikrozomima ljudske jetre. Konačna inkubaciona zapremina od 60 μl po vremenskoj tački sadrži TRIS pufer pH 7,6 na sobnoj temperaturi (0,1 M), magnezijum hlorid (5 mM vodeni rastvor), mikrozomalni protein (1 mg/mL za čoveka) i testirano jedinjenje u konačnoj koncentraciji od 1 μM. Posle kratkog preinkubacionog perioda na 37°C, reakcije su započete dodatkom betanikotinamid adenin dinukleotid fosfata, redukovanog oblika (NADPH, 1 mM), i prekinute uz pomoć prenošenja alikvota u rastvarač nakon različitih vremenskih tačaka. Posle centrifugiranja (10000 g, 5 min), alikvot supernatanta je analiziran pomoću LC-MS/MS za količinu matičnog jedinjenja. Period poluraspada je određen nagibom polulogaritamskog grafika profila koncentracijavreme. Rezultati su prikazani u Tabeli 5.

Tabela 5

Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja prema formuli A koja neočekivano rezultiraju povoljnom kombinacijom sledećih ključnih parametara:

1) NR2B negativna alosterična modulacija,

2) povoljna stabilnost u mikrozomima ljudske jetre, i

3) umeren do nizak in vitro efluks na oba MDR1 i BCRP transportera.

Farmaceutska kompozicija

Pogodni preparati za primenu jedinjenja iz ovog pronalaska će biti očigledni onima sa uobičajenim veštinama u ovoj oblasti i uključuju na primer tablete, pilule, kapsule, supozitorije, lozenge, pastile, rastvore, sirupe, eliksire, kesice, injekcije, inhalative, praškove, itd. Sadržaj farmaceutski aktivnog(ih) jedinjenja može da varira u opsegu od 0,1 do 95 tež.-%, poželjno 5.0 do 90 tež.% kompozicije u celini.

Pogodne tablete se mogu dobiti, na primer, mešanjem jedinjenja iz ovog pronalaska sa poznatim ekscipijentima, na primer inertnim razblaživačima, nosačima, dezintegrantima, adjuvansima, surfaktantima, vezivnim sredstvima i/ili lubrikantima i presovanjem dobijene smeše da se formiraju tablete.

Upotreba u lečenju/način upotrebe

Terapijske primene NR2B NAM kod ljudi su sažete u pregledima od strane Traynelis et al. (Traynelis et al., Pharmacology Reviews, 2010, 62:405), Beinat et al. (Beinat et al., Current Medicinal Chemistry, 2010, 17:4166) i Mony et al. (Mony et al., British J.

Pharmacology, 2009, 157:1301).

Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja koja su korisna u lečenju psihijatrijskih poremećaja, bolesti i stanja u kojima negativna alosterična modulacija NR2B ima terapeutsku korist, uključujući: (1) poremećaje raspoloženja i afektivne poremećaje raspoloženja; (2) spektar šizofrenih poremećaja; (3) neurotične poremećaje povezane sa stresom i somatoformne poremećaje uključujući poremećaje anksioznosti; (4) poremećaje psihičkog razvoja; (5) bihevioralne sindrome koji su povezani sa fiziološkim poremećajima i fizičkim faktorima; (6) poremećaje zavisnosti u poremećaje u vezi sa supstancama; (7) bolest koja je povezana sa simptomima negativne i pozitivne valencije.

S obzirom na njihov farmakološki efekat, jedinjenja iz ovog pronalaska su pogodna za upotrebu u lečenju poremećaja, bolesti ili odabranih stanja sa liste koja se sastoji od (1) lečenje poremećaja raspoloženja i afektivnih poremećaja raspoloženja uključujući bipolarni poremećaj I, depresivni, hipomanični, manični i mešoviti oblik; bipolarni poremećaj II; depresivni poremećaji, kao što su pojedinačna depresivna epizoda ili rekurentni veliki depresivni poremećaj, manji depresivni poremećaj, depresivni poremećaj sa početkom nakon porođaja, depresivni poremećaji sa psihotičnim simptomima; veliki depresivni poremećaj sa ili bez pratećeg anksioznog distresa, mešovite osobine, melanholične karakteristike, atipične osobine, psihotične karakteristike koje su usklađene sa raspoloženjem, psihotične karakteristike koje nisu usklađene sa raspoloženjem, katatonija.

(2) lečenje poremećaja raspoloženja koji pripadaju spektru šizofrenije i drugih psihotičnih poremećaja uključujući šizofreniju i šizoafektivni poremećaj sa povezanim negativnim i kognitivnim simptomima.

(3) lečenje poremećaja koji pripadaju neurotičnim, stresom povezanim i somatoformnim poremećajima uključujući anksiozne poremećaje, opšti anksiozni poremećaj, panični poremećaj sa ili bez agorafobije, specifičnu fobiju, socijalnu fobiju, hronične anksiozne poremećaje; opsesivno kompulzivni poremećaj; reakcija na ozbiljne poremećaje stresa I prilagođavanja, kao što je posttraumatski stresni poremećaj; drugi neurotični poremećaji kao što je sindrom depersonalizacije-derealizacije.

(4) lečenje poremećaja psihičkog razvoja uključujući pervazivne razvojne poremećaje, uključujući Aspergerov sindrom i Retov sindrom, autistični poremećaji, dečiji autizam i hiperaktivni poremećaj povezan sa mentalnom retardacijom i stereotipnim pokretima, specifični razvojni poremećaj motoričke funkcije, specifični razvojni poremećaji sholastičnih veština, poremećaj nedostatka pažnje/hiperaktivnost.

(5) lečenje sindroma ponašanja povezanih sa fiziološkim poremećajima i fizičkim faktorima uključujući mentalne i poremećaje ponašanja povezane sa puerperijumom, uključujući postnatalnu i postpartalnu depresiju; poremećaji u ishrani, uključujući anoreksiju nervozu i bulimiju nervozu i druge poremećaje kontrole impulsa.

(6) lečenje poremećaja povezanih sa supstancama i bolesti zavisnosti, koji su poremećaji upotrebe supstanci, izazvanih alkoholom, kanabisom, halucinogenom, stimulansom, hipnotikom, duvanom.

(7) lečenje bolesti povezanih sa simptomima negativne i pozitivne valencije uključujući anhedoniju, trajnu pretnju i gubitak, samoubilačke ideje.

Kako se ovde koristi, osim ako nije drugačije naznačeno, termini „lečenje“, „tretman“ treba da obuhvataju upravljanje i brigu o ljudskom subjektu ili ljudskom pacijentu u svrhu borbe protiv bolesti, stanja, ili poremećaja i uključuju primenu jedinjenja iz ovog pronalaska da spreči pojavu simptoma ili komplikacija, ublaži simptome ili komplikacije, ili eliminiše bolest, stanje, ili poremećaj.

Kako se ovde koristi, osim ako nije drugačije naznačeno, termin „prevencija“ treba da uključuje (a) smanjenje učestalosti jednog ili više simptoma; (b) smanjenje težine jednog ili više simptoma; (c) odlaganje ili izbegavanje razvoja dodatnih simptoma; i/ili (d) odlaganje ili izbegavanje razvoja poremećaja ili stanja.

Prema drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom A ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u lečenju i/ili prevenciji gore navedenih stanja.

Prema drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom A prema bilo kom od prethodnih aspekata, koji se karakteriše time što se jedinjenje sa formulom A koristi kao dodatak bihejvioralne terapije, TMS (transkranijalne magnetne stimulacije), ECT (elektrokonvulzivne terapije) i drugih terapija.

Kombinovana terapija

Jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu se kombinovati sa drugim opcijama lečenja za koje je poznato da se koriste u tehnici u vezi sa lečenjem bilo koje od indikacija čiji je tretman u fokusu ovog pronalaska.

Prema drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom A prema bilo kom od prethodnih aspekata, koji se karakteriše time što se jedinjenje sa formulom A primenjuje kao dodatak tretmanu sa jednim ili više odabranih antidepresiva sa liste koja se sastoji od duloksetin, escitalopram, bupropion, venlafaksin, desvenlafaksin, sertralin, parokstin, fluoksetin, vortioksetin, mirtazapin, citalopram, vilazodon, trazodon, amitriptilin, klomipramin, agomelatin, levomilnacipran, litijum, deksepin, nortriptilin. Termin „antidepresiv“ treba da označava bilo koji farmaceutski agens ili lek koji se može koristiti za lečenje depresije ili bolesti povezanih sa simptomima depresije. Prema drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom A prema bilo kom od prethodnih aspekata, koji se karakteriše time što se jedinjenje sa formulom A primenjuje kao dodatak tretmanu sa jednim ili više antipsihotika odabranih sa liste koja se sastoji od sledećih, aripiprazol, paliperidon palmitat, lurasidon, kvetiapin, risperidon, olanzapin, paliperidon, brekspiprazol, klozapin, asenapin, hlorpromazin, haloperidol, kariprazin, ziprasidon, amisulprid, iloperidon, flufenazin, blonanserin, aripiprazol lauroksil. Termin "antipsihotik" treba da označava bilo koji farmaceutski agens ili lek koji se može koristiti za lečenje bolesti povezanih sa psihotičnim ili depresivnim simptomima.

Prema još jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom A prema bilo kom od prethodnih aspekata, koji se karakteriše time što se jedinjenje sa formulom A primenjuje kao dodatak tretmanu sa jednim ili više psihostimulansa odabranih sa liste koja se sastoji od sledećih, lisdeksamfetamin, metilfenidat, amfetamin, deksamfetamin, deksmetilfenidat, armodafinil, modafinil. Izraz "psihostimulator" treba da označava bilo koji farmaceutski agens ili lek koji se može koristiti za lečenje bolesti kao što su poremećaji raspoloženja, ili poremećaji kontrole impulsa.

Prema još jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom A prema bilo kom od prethodnih aspekata, koji se karakteriše time što se jedinjenje sa formulom A primenjuje kao dodatak tretmanu sa nootropima odabranim sa liste koja se sastoji od oksiracetama, piracetama, ili prirodnog proizvoda kantariona.

Prema još jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa formulom A koje se primenjuje kao dodatak tretmanu sa jednim ili više antidepresiva, antipsihotika, psihostimulansa, nootropa ili prirodnim proizvodom prema bilo kom od prethodnih aspekata, koji se karakteriše time što kombinacija jedinjenja sa formulom A i jednog ili više antidepresiva, antipsihotika, psihostimulansa, nootropika ili prirodnog proizvoda se koristi kao dodatak bihejvioralne terapije, TMS (transkranijalna magnetna stimulacija), ECT (elektrokonvulzivna terapija) i drugih terapija.

EKSPERIMENTALNI DEO

Skraćenice:

ACN acetonitril

APCI Hemijska jonizacija pod atmosferskim pritiskom

Boc terc-butiloksikarbonil

CDI 1,1’-karbonildiimidazol

CO2 Ugljen dioksid

d dan

DCM dihlormetan

DIPE diizopropiletar

DIPEA diizopropiletilamin

DMF dimetilformamid

ESI elektrosprejna jonizacija (u MS)

EtOAc etilacetat

EtOH etanol

Pr. primer

h sat(i)

HATU O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N′,N′-tetrametiluronijumheksafluorfosfat

HPLC tečna hromatografija visokih performansi

HPLC-MS kuplovana tečna hromatografija visokih performansi-masena spektrometrija

M molarni (mol/L)

MeOH metanol

min minut(i)

MS masena spektrometrija

MW molekulska masa

NH3 amonijak

PSI Funta po kvadratnom inču

st sobna temperatura

Rtretenciono vreme

scCO2 superkritični CO2

solv rastvarač

TBTU O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N′,N′-tetrametiluronijum tetrafluorborat TEA trietilamin

TFA trifluorosirćetna kiselina

THF tetrahidrofuran

TLC hromatografija na tankom sloju

SFC Superkritična tečna hromatografija

Skraćenice unutar spektralnih podataka:

1H- NMR Protonska nuklearna magnetna rezonanca

br širok

δ hemijski pomak

d dublet

dd dublet dubleta

dt dublet tripleta

DMSO-d6heksa-deutero-dimetilsulfoksid

H proton

Hz Herc (=1/sekund)

J konstanta kuplovanja

m multiplet

ppm delova na milion

q kvartet

s singlet

t triplet

td triplet dubleta

Opšta analitika

Sve reakcije su sprovedene korišćenjem komercijalnih reagenasa i rastvarača. NMR spektri su snimljeni na Bruker AVANCE IIIHD 400 MHz instrumentu korišćenjem softvera TopSpin 3.2 pl6. Hemijski pomaci su dati u delovima na milion (ppm) na nižem polju od unutrašnjeg referentnog trimetilsilana u δ jedinicama. Odabrani podaci se izveštavaju na sledeći način: hemijski pomak, multiplicitet, konstante kuplovanja (J), integracija. Analitička tankoslojna hromatografija (TLC) je izvedena korišćenjem Merck ploča sa silika gelom 60 F254. Sva jedinjenja su vizuelizovana kao pojedinačne tačke korišćenjem kratkotalasne UV svetlosti. Maseni spektri niske rezolucije su dobijeni korišćenjem kuplovane tečne hromatografije sa masenim spektrometrom (LCMS) koji se sastojao od Agilent serije 1100 LC kuplovanog sa Agilent 6130 kvadrupolnim masenim spektrometrom (elektrosprejna pozitivna jonizacija).

Metode:

HPLC-MS metode:

Metod 1

Metod 2

Metod 3

Metod 4

Hiralne SFC analitičke metode:

Metod 5: I_C2_20_MeOH_NH3_001

Metod 6: I_C4_20_MeOH_NH3_001

Metod 7: I_C4_30_MEOH_NH3_001

Metod 8: I_IA_35_MEOH_NH3_001

Metod 9: I_C4_30_ETOH_NH3_001

Metod 10: I_IG_40_MEOH_NH3_001

Metod 11: I_SA_15_MEOH_NH3_001

Priprema intermedijera:

Primer 1a

S-morfolin-2,4-dikarboksilne kiseline 4-tercbutilestar (10 g, 43.2 mmola) je rastvoren u DMF (120 ml) i temperatura je snižena do 0°C; TBTU je zatim dodat i smeša je mešana u toku 15 min. pre dodavanja TEA (12,05 ml) i 2,3 diamino piridina (4.7 g; 43.2 mmola). Reakciona smeša je mešana u toku 20 sati na sobnoj temperaturi pre rada: DMF je uklonjen pod sniženim pritiskom; sirov proizvod je razblažen sa EtOAc (300 ml) i vodom (100 ml) i zatim filtriran kroz stakleni filter. Organska faza je odvojena i isprana sa 5% vodenim rastvorom natrijum hidrogenkarbonata (50 ml). Rastvor natrijum hidrogenkarbonata je ponovo ekstrahovan sa 100 ml EtOAc, organske faze su kombinovane zajedno i osušene preko Na2SO4. Ostatak dobijen nakon isparavanja rastvarača je prečišćen uz pomoć fleš hromatografije korišćenjem EtOAc/MeOH/NH4OH (97/3/0.3).

Dobijeno je 11.5 g

HPLC-MS; Metod : Z011_S03; Rt [min] : 0.82 MS:323 (M+H)<+>

Primer 1b

Primer 1b je pripremljen po analogiji sa Primerom 1a. Polazni materijali: morfolin-2,4 dikarboksilne kiseline 4-tercbutilester (550 mg, 2.4 mmol), 2,3 diamino-5-fluor-piridin (340 mg; 2.7 mmol), TBTU (850 mg, 2.6 mmol) i TEA (1.0 mL, 7.2 mmol) u DMF (5mL).

Dobijeno je 580 mg

Primer 2a

Primer 1a (11.5g, 35.67 mmola) je rastvoren u DMF (100 ml), CsF (7g, 50 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana u toku 28 sati na 100°C. Temperatura je spuštena na sobnu temperaturu i DMF je uklonjen pod sniženim pritiskom; sirovi proizvod je parcionisan sa EtOAc (250 ml) i vodom (50 ml), organska faza je odvojena i osušena preko Na2SO4. Sirovi proizvod dobijen, nakon isparavanja rastvarača je prečišćen uz pomoć fleš hromatografije (DCM 95/MeOH 5/NH4OH 0.5) kako bi se dobilo 5.2g željenog jedinjenja.

Analitički SFC je pokazao da je došlo do delimične racemizacije (tj.63,5%); 5,2 g je podvrgnuto hiralnoj preparativnoj SFC hromatografiji.

Preparativni SFC uslovi:

Primer 2d

Primer 1b (580 mg; 1.7 mmol) i K2CO3 (300 mg; 2.2 mmol) u 2-propanolu (10 mL) su mešani na 80°C u toku 6h, na sobnoj temperaturi u toku 3 dana i na refluksu u toku 5h. Zatim, dodatni K2CO3 (300 mg; 2.2 mmol) je dodat i smeša je refluksovana u toku 16h. Nakon hlađenja do sobne temperature, dodatka ACN, i filtracije, polazna tečnost je uparena i ostatak je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (C-18 X-Bridge; 50°C; H2O+0.15% amonijak : acetonitril = 85:15 -> 65:35) kako bi se dobilo 440 mg željenog proizvoda.

Primer 2e

Smeša iz 2,3-diamino-4-metil-piridina (85 mg; 0.69 mmol), [(terc.-butoksi)karbonil]morfolin-2-karboksilna kiselina (150 mg; 0.65 mmol), TBTU (220 mg; 0.69 mmol) i TEA (300 µl; 2.2 mmol) u DMF ( 2mL) je mešana u toku 30min na sobnoj temperaturi. Zatim, sirćetna kiselina (2 mL) je dodata i smeša je mešana u toku 16 h na 100°C. Nakon dodatka dioksana, ona je osušena smrzavanjem, ostatak je unet u metanol, dodato je nekoliko kapi konc. amonijaka, filtrirana i prečišćena uz pomoć preparativne HPLC (C-18 X-Bridge; 50°C; H2O+0.15% amonijak : acetonitril = 82:18 -> 62:38) kako bi se dobilo 120 mg (58%) željenog proizvoda.

Primer 3b

Primer 2b (1.3 g; 4.27 mmol) je rastvoren u DCM (20 ml) i reakciona smeša je ohlađena na 0°C; HCl (5.34 ml; 4N rastvor u dioksanu) je dodata i nakon 15 min temperatura je podignuta do st. Reakciona smeša je mešana u toku 15 sati; DCM je uparen pod sniženim pritiskom na temperaturi od 35° C.

Dobijeno je 1.15 g željenog proizvoda (Primer 3b).

Primer 3d

Primer 3d je pripremljen po analogiji sa Primerom 3b. Polazni materijali: Primer 2d (440 mg, 1.4 mmol) i HCl (8 mL 1N rastvor u dioksan) u dioksanu (4 mL).

Dobijeno je: 400 mg

Primer 3e

Primer 2e (120 mg; 0.69 mmol) je pomešan sa hlorovodonikom u dioksanu (4N; 10mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 16h. Smeša je koncentrovana u vakuumu i ostatak (110 mg ) se koristi bez daljeg prečišćavanja.

Primer 4a

Smeša sa (4-fluor-fenil)-metanolom (3.0g, 23.8 mmol) i N,N’-disukcinimidil karbonatom (6.1g, 23.8 mmol) sa 4-dimetilamino-piridinom (1.1g, 9.0 mmol) u DCM (30 mL) i acetonitrilom (30 mL) je mešana u toku 16h na sobnoj temperaturi. Nakon dodatka dodatnog DCM, smeša je ekstrahovana sa vodom, hlorovodoničnom kiselinom (0.5 N) i vodenim Na2CO3rastvorom (1 N), vodene faze su ekstrahovane sa DCM, i organske faze su osušene preko MgSO4. Nakon isparavanja u vakuumu, ostatak je mešan sa dietiletrom i koncentrovan. Dobijeni čvrsti proizvod je ponovo mešan sa dietiletromr, filtriran, osušen u vakuumu i koristi se bez daljeg prečišćavanja. Količina koja je dobijena: 4.7 g.

Primer 4b

Primer 4b je pripremljen po analogiji sa Primerom 4a. Polazni materijali: p-tolilmetanol (10.0 g, 81.9 mmol), N,N’-disukcinimidil karbonat (21.0g, 81.6 mmol), 4-dimetilaminopiridin (1.5g, 12,3 mmol) u DCM (100 mL) sa ACN (100 mL).

Dobijeno je: 17.1 g

PRIMERNA IZVOĐENJA

Primer 1

(3-fluor-fenil)-metanol (95.5 mg; 0.76 mmol) i CDI (123 mg; 0.76 mmol) su mešani zajedno u DMF (3 ml); reakciona smeša je zagrejana na 50° C u toku 30 minuta; Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol) i DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol) su zatim dodati u nizu i reakciona smeša je mešana 17 sati na 50°C. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i ostatak je razblažen sa 1 ml smeše MeOH/voda (1/1) pre nego je filtrirana i odvojena putem semipreparativne HPLC. Dobijeno je 45 mg željenog jedinjenja.

Primer 2

Primer 2 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (4-fluor-fenil)-metanol (82.3 μl; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC.

Dobijeno je: 50 mg

Primer 4

Primer 4 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (4-fluor-2-metil-fenil)-metanol (106 mg; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC.

Dobijeno je: 35 mg

Primer 5

Smeša od proizvoda iz primera 3e (50 mg; 0.17 mmol), primera 4a (50 mg; 0.19mmol), i TEA (100 µl; 0.72 mmol) u THF (4 mL) i acetonitril (4 mL) su zagrevani do refluksa i mešani na sobnoj temperaturi bez daljeg zagrevanja u toku 30min. Smeša je koncentrovana u vakuumu i ostatak je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC kako bi se dobilo 35.7 mg željenog proizvoda.

Uzorak proizvoda iz primera 5 (34 mg) je odvojen uz pomoć hiralne hromatogrfije (SFC) da bi se pristupilo Pr.6.

Preparativni uslovi:

Primer 6

Dobijeno je: 16 mg

Primer 8

Primer 8 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), o-tolil-metanol (92.6 mg; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC. Dobijeno je: 38 mg.

Primer 9

Primer 9 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), m-tolil-metanol (91.2 μl; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC. Dobijeno je 49 mg.

Primer 10

Primer 10 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (2-fluor-6-metil-fenil)-metanol (106 mg; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC. Dobijeno je: 25 mg.

Primer 11

Primer 11 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (2-fluor-4-metil-fenil)-metanol (106 mg; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC. Dobijeno je: 49 mg.

Primer 12

Primer 12 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (3-fluor-4-metil-fenil)-metanol (106 mg; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC. Dobijeno je 38 mg.

Primer 13

Primer 13 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (2-hlor-4-fluor-fenil)-metanol (121.7 mg; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC. Dobijeno je: 52 mg.

Primer 14

Primer 14 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (2-hlor-fenil)-metanol (108 mg; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC. Dobijeno je: 54 mg.

Primer 15

Primer 15 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (2,3-difluor-fenil)-metanol (85.2 μl mg; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC. Dobijeno je: 50 mg.

Primer 16

Primer 16 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (2,6-difluor-fenil)-metanol (84 μl; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC. Dobijeno je: 56 mg.

Primer 17

Primer 17 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), fenil-metanol (78 μl; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC. Dobijeno je: 26 mg.

Primer 18

Primer 18 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), p-tolil-metanol (92.6 mg; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC.

Dobijeno je 25 mg.

Primer 19

Primer 19 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (2,4-difluor-fenil)-metanol (84,6 μl; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC.

Dobijeno je: 65 mg.

Primer 24

Primer 24 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (3,4-difluor-fenil)-metanol (86.53 μl; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC.

Dobijeno je:56 mg

Primer 25

Primer 25 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (4-hlor-3-fluor-fenil)-metanol (90.5 μl; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC. Dobijeno je: 39 mg

Primer 26

Primer 26 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), [4-(difluormetil)fenil]-metanol (79.9 mg; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC. Dobijeno je: 74 mg

Primer 27

Primer 27 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (2-fluor-fenil)-metanol (81.5 μl; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC.

Dobijeno je: 40 mg

Primer 28

Primer 28 je pripremljen po analogiji sa Primerom 1. Polazni materijali: Primer 3b (70 mg; 0.25 mmol), (4-hlor-fenil)-metanol (108 mg; 0.76 mmol); 1-1’-CDI (123 mg; 0.76 mmol); DIPEA (0.13 ml; 0.76 mmol). Rastvarač: DMF (3 ml).

Sirovi proizvod koji je dobijen nakon izrade je prečišćen uz pomoć semipreparativne HPLC.

Dobijeno je: 44 mg

Primer 30

Smeša sa primerom 3d (200 mg, 0.68 mmol), primerom 4b (180 mg, 0.68 mmol) i TEA (300µL, 2.2mmol) u ACN (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5h. Nakon dodatka vodenog amonijaka (konc.) i isparavanja, ostatak je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (C-18 X-Bridge; 50°C; H2O+0.15% amonijak : acetonitril = 80:20 -> 60:40) kako bi se dobilo 225 mg željenog proizvoda.

Uzorak proizvoda iz primera 30 (225mg) je odvojen uz pomoć hiralne hromatogrfije (SFC) da bi se pristupilo Pr.31.

Preparativni uslovi:

Primer 31

Dobijeno je: 103 mg

Claims (1)

1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje sa formulom A

   O O R1 u kome R<1>predstavlja fenil koji je opciono supstituisan sa 1 do 3 supstituenta izabrana iz grupe koju čine fluor, hlor, metil, etil, ciklopropil, F2HC–, FH2C–, F3C–; R<2>predstavlja vodonik, metil; R<3>predstavlja vodonik, fluor. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, u kome R<2>predstavlja vodonik; R<3>predstavlja vodonik. 3. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 2, u kome R<1>predstavlja fenil koji je opciono supstituisan sa 1 ili 2 supstituenta odabranih iz grupe koja se sastoji od fluor, hlor, metil, F2HC–. 4. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 3, u kome R<1>predstavlja

   * * Cl * * 5. (S)-enantiomer prema bilo kom od zahteva 1 do 4, naime je Fdinjenje odabrano iz grupe koja se sastoji od

   ,

   6. (S)-enantiomer prema bilo kom od zahteva 1 do 5 koji ima strukturu:

   F. 7. (S)-enantiomer prema bilo kom od zahteva 1 do 5 koji ima strukturu:

   . 8. (S)-enantiomer prema bilo kom od zahteva 1 do 5 koji ima strukturu:

   . 9. (S)-enantiomer prema bilo kom od zahteva 1 do 5 koji ima strukturu:

   F. 10. (S)-enantiomer prema bilo kom od zahteva 1 do 5 koji ima strukturu:

   . 11. (S)-enantiomer prema bilo kom od zahteva 1 do 5 koji ima strukturu:

   . 12. (S)-enantiomer prema bilo kom od zahteva 1 do 5 koji ima strukturu:

   . 13. (S)-enantiomer prema bilo kom od zahteva 1 do 5 koji ima strukturu:

   . 14. (S)-enantiomer prema bilo kom od zahteva 1 do 5 koji ima strukturu:

   F . 15. (S)-enantiomer prema bilo kom od zahteva 1 do 5 koji ima strukturu:

   16. (S)-enantiomer prema bilo kom od zahteva 1 do 5 koji ima strukturu:

   . 17. (S)-enantiomer prema bilo kom od zahteva 1 do 5 koji ima strukturu:

   Cl. 18. So, posebno farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja prema bilo kom od zahteva 1 do 17. 19. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 18 za upotrebu kao lek. 20. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 18 za upotrebu u lečenju i/ili prevenciji bipolarnog poremećaja I u depresivnom, hipomaničnom, maničnom i mešovitom obliku; bipolarni poremećaj II; depresivni poremećaji; veliki depresivni poremećaj sa ili bez pratećih anksioznih tegoba, mešovitih karakteristika, melanholičnih osobina, atipičnih karakteristika, raspoloženja koja su podudarna psihotičnim karakteristikama, raspoloženja koja nisu u skladu sa psihotičnim karakteristikama, katatonije. 21. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 20 u kome je depresivni poremećaj odabran iz grupe koja se sastoji od pojedinačne depresivne epizode ili rekurentnog velikog depresivnog poremećaja, manjeg depresivnog poremećaja, depresivnog poremećaja sa postporođajnim početkom, depresivnih poremećaja sa psihotičnim simptomima. 22. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od zahteva 19 do 21 naznačeno vreme što se jedinjenje primenjuje pored tretmana sa drugim antidepresivnim lekom. 23. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od zahteva 19 do 22 naznačen vreme vreme što se jedinjenje daje uz bihejvioralnu terapiju. 24. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 18 u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem i/ili nosačem. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5