JP2587969B2 - ウイルス抗体検出用試薬 - Google Patents
ウイルス抗体検出用試薬Info
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Description
用試薬に関し、さらに詳しくは、遺伝子組み換えHIV抗
原を用いた後天性免疫不全症候群関連ウイルス抗体検出
用間接凝集反応試薬に関する。
Syndrome−通常AIDSと呼ばれている)は、1981年に初め
て認められた新しい病気である。[M.S.Gottilb et a
l.,N.Eng,J.Med.,305、1425(1981)]。その後、フラ
ンスでリンパ節疾患症候群(Lymphadenopathy Syndrom
e)患者からLAVとなずけられたレトロウイルスが[F.Ba
rrs−Sinoussi et al.,Science、220、868(1983)]、
そして、アメリカでAIDS患者やpre−AIDS患者からTHLV
−III[M.Popovic etal.,Science、224、497(1984)]
及びARV[J.A.Levy et al.,Science、225、840(198
4)]となずけられたレトロウイルスが相次いで発見さ
れた。最近、これらのLAV、HTLV−III及びARVはその遺
伝子の塩基配列が完全に解析され、これらのレトロウイ
ルスは同じウイルスの変異株であることが明らかになっ
た[L.Ratner et al.,Nature、313、277(1985)、R.Sa
nchez Pescaoor et al.,Science、227、484(1985),S.
Wain Hobson et al.,Cell,40,(1985)]。
eficiency Virus)と総称されているが、HIVはヒトとヒ
トとの接触、輸血等により感染し、発病する。この際、
感染したヒトの血液中にAIDS関連ウイルスと特異的に反
応する抗体が生ずることも知られている。従ってこの抗
体を検出することによって、HIV感染の有無を調べれ
ば、AIDSの予防につながるものと考えられる。
た担体粒子からなるAIDS関連ウイルス抗体検出用間接凝
集反応試薬を提案した(特開昭62−182662号公報参
照)。
包む核タンパク(coreタンパク)と、さらにこれを包み
込む外殻糖タンパク(envタンパク)から構成されてい
る。
タンパクに対する抗体が産生されるが、これまでの研究
によれば、HIVには感染しているが発病していないいわ
ゆるキヤリア群とAIDSを発病した群との間で、p24に代
表されるcoreタンパクとgp41に代表されるenvタンパク
のそれぞれのタンパクに対する抗体量に差異が見られた
という報告がいくつか発表されている。そしてHIVへの
感染により通常coreタンパク及びenvタンパクの両方に
対する抗体が産生されるが、感染後ある程度の期間が経
過すると、それらの産生量に差異が生じ、coreタンパク
に対する抗体価が低下しはじめる頃からARC(AIDS rela
bed couplex)の症状がではじめ、AIDSへと移行してい
くとの報告もされている(Joepet al.,British Med.J.,
1986)。
−env(gp41あるいはp41)タンパク抗体の検出はHIVへ
の感染からキヤリアを経てARC、AIDS発症へと移行する
過程を追跡する上で臨床的意義が極めて大きいといえ
る。
V−env(gp41あるいはp41)タンパク抗体をウエスター
ン・ブロット法(Western blot法)又はEIA法で測定す
ることが提案されている[LANCET、1986年11月29日号12
33〜1237頁参照]。しかし、前者のウエスターン・ブロ
ット法はHIV抗原タンパク成分をSDS電気泳動後ニトロセ
ルロース膜に転写し、この膜を被検血清とEIA法やRIA法
で反応させるものであるが、操作が煩雑で結果が出るま
でに2日以上もの時間がかかるという欠点がある。また
後者のEIA法(Abbot社法)においても、検体との反応に
十数時間を要し、反応の工程数も多く手段的にも煩雑で
ある。
迅速に抗HIV−core(p24)タンパク抗体及び抗HIV−env
(p41)タンパク抗体を検出することのできる検出用試
薬を提供することを目的とするものであり、本発明者ら
はこれを目的に鋭意検討を行った結果、今回、HIV−cor
e(p24)タンパク及び/又はHIV−env(p41)タンパク
を成る特定のpH条件下で感作した担体粒子を用いると、
間接凝集反応により、簡便かつ迅速に検体中の抗HIV−c
ore(p24)タンパク抗体、抗HIV−env(p41)タンパク
抗体を検出しうることを見い出し本発明を完成するに至
った。
−p41をp7.3〜8.5において感作いたゼラチン粒子からな
ることを特徴とする後天性免疫不全症候群(AIDS)関連
ウイルス抗体検出用間接凝集反応試薬が提供される。
約2400のcoreタンパクの一種であり、またHIV−p41はHI
Vの包被を構成する糖タンパクの一種であるgp−41(分
子量約4100)から糖を除いた成分であり、これらタンパ
クはいずれも既知であり、例えば、ANALYTICAL BIOCHE
MISTRY 1613、370〜379(1987)に記載の方法に従い、
大腸菌等の菌を用いた遺伝子組換え法によりHIV−p24及
びHIV−p41を得ることができる。これらHIV−p24及びHI
V−p41はそれぞれ単独で用いてもよく、或いは両者を併
用してもよい。
ラチン粒子(この粒子の製造法について特開昭57−1536
58号公報参照)は非特異反応が少なく、用途に応じた性
質を付加できる等、AIDS関連ウイルス抗体検出のための
間接凝集反応用担体として優れた長所を有している。
は、それ自体既知の方法を用いて行うことができ、例え
ばタンニン酸、グリタールアルデヒド、ビスジアジベン
ジジン、トリレンジイソシアネート、ジフロロジニトロ
ベンゼン、カルボジイミド類、キノン類、塩化クロム等
のいわゆるカップリング剤を使用して化学的に結合させ
る方法或いは物理的に吸着させる方法などによって行う
ことができる。
8.0の範囲内で行うのがよく、このpH範囲外で感作した
場合には一般に検出感度に優れた試薬は得られない。例
えば、後記実施例1又は2に記載の方法でゼラチン粒子
に各種pH条件下においてHIV−gp24又は参考としてHIV−
gp41を感作させた場合の感度を試験した結果を示せば下
記第1表のとおりである。
とを、そして+は凝集反応が生じたことを示す。また、
対照試験とは、AIDS関連ウイルス抗体を全く含まない血
清希釈溶液を検体として用いた試験であり、この試験で
+の結果を示すのは偽反応である。一方、力価試験は抗
HIV−env(p41)タンパク抗体又は抗HIV−core(p24)
タンパク抗体を含む血清溶液を検体として用いた試験で
あり、十の数が多い程、の感度が高いことを示す。
−p41で感作したゼラチン粒子は通常、凍結乾燥した状
態で保存され、使用時に復元後、間接凝集反応に供せら
れる。
るAIDS関連ウイルス抗体の検出はそれ自体既知の間接凝
集反応法と全く同様にして行うことができ、例えばマイ
クロプレートのウエルに被検血清を入れてその希釈列を
作り、各ウエルに本発明の感作ゼラチン粒子を加えて混
合し、通常1〜2時間程度静置し、この感作ゼラチン粒
子の凝集像を観察して凝集の有無を判定することにより
行われる。
DS患者血清(検体)の二倍段階希釈液に96穴マイクロプ
レートのウエルに等量ずつ加え、混合し、室温に静置す
る。1〜3時間後、各穴を観察すると、希釈倍数の低い
穴には感作ゼラチン粒子が底一面に広がって、凝集像が
見られ、希釈倍数の高い所では、ボタン状となり凝集像
が認められない。一方、未感作ゼラチン粒子を用いた場
合には低希釈から高希釈の血清中いずれにも凝集像は見
られない。また、HIV抗体陰性ヒト血清について同様に
検査した場合には、感作ゼラチン粒子及び未感作ゼラチ
ン粒子のいずれを用いた場合にも凝集像は見られない。
24又はHIV−gp41あるいはp41と特異的に反応するHIV抗
体[抗HIV−core(p24)タンパク抗体、抗HIV−env(gp
41あるいはp41)タンパク抗体など]が存在することが
確認できる。
検出用試薬として、通常行なわれているように、未感作
ゼラチン粒子、標準血清(対照用陽性血清)、検体希釈
用溶液及び必要に応じて感作ゼラチン粒子の凍結乾燥品
溶解用溶液等と組合わせることによりキット化して実用
に供することができる。
したものであるが、正確にはgp41から糖の脱落したタン
パクを指すものである。
法及びそれを用いた間接凝集反応テストについてさらに
具体的に説明する。
子の調製 特開昭58−113754号公報の実施例1に記載された方法
に従って製造したゼラチン粒子を5ppmのタンニン酸を含
むpH7.2の0.15Mリン酸塩緩衝生理食塩液(以下0.15M P
BS(pH7.2)と略記する)中に粒子濃度が2.5%になるよ
うに分散させ、37℃で10分間加温した。この粒子を遠心
分離して回収し、生理食塩液で3回遠心分離法で洗浄し
てから0.15M PBS(pH8.0)に5%になるように分散さ
せた。
0)で20μg/mlになるように希釈し、前記のタンニン酸
処理粒子分散液に等容のこの希釈液を混合して37℃で90
分間加温し、粒子にHIV−env(gp41)タンパク抗原を感
作させた。この感作ゼラチン粒子を生理食塩液で3回遠
心洗浄してから浮遊分散液(リン酸水素二ナトリウム・
12水塩1.920g、リン酸二水素カリウム0.291g、塩化ナト
リウム0.438g、アラビアゴム0.25g、グリシン1.5g、ア
ジ化ナトリウム0.1g及び正常家兎血清1.0mlを全量100ml
になるように、精製水に溶解した液)に分散させた。こ
の分散液を凍結乾燥し、HIV−env(gp41)タンパク抗原
感作ゼラチン粒子の凍結乾燥品を得た。
素カリウム0.291g、塩化ナトリウム0.438g、アラビアゴ
ム0.25g、アジ化ナトリウム0.15g、を全量100mlになる
ように精製水に溶解して血清希釈溶液とした。
ラチン粒子の凍結乾燥品及び対照用陽性血清の凍結乾燥
品も別途に調製し、感作ゼラチン粒子溶解用溶液及び被
験血清希釈用溶液を組合わせ、抗HIV−env(p41)タン
パク抗体検出用試験キットとした。
の調製 実施例1で用いたHIV−env(gp41)タンパク抗原の代
わりにHIV−core(p24)タンパク抗原(セントコア社
製)を用い、同様な操作をくり返すことによりHIV−cor
e(p24)タンパク抗体抗原感作ゼラチン粒子を調製し
た。
ク抗体検出用試薬キットとした。
検血清について間接凝集反応テストを行なった。
(gp41)タンパク抗原感作ゼラチン粒子及びHIV−core
(p24)タンパク抗原感作ゼラチン粒子を用いた間接凝
集反応は、抗HIV−env(gp41)タンパク抗体及び抗HIV
−core(p24)タンパク抗体の検出において、ウエスタ
ンブロット法と比べ同等の検出感度及び特異性を有する
ことがわかる。
の検体を簡便な動作で迅速に測定することができる。例
えば、螢光抗体法あるいは酵素抗体法の場合、検査開始
から結果がでるまで洗浄も加え回数の操作を必要とする
が、本発明の試薬を用いた場合、希釈血清に加えるだけ
で、あとは結果がでるまで静置しておけばよく、非常に
簡便である。また、結果の判定には特殊な器材を何ら必
要とせず肉眼で判定することができる。これらの点は、
多数の検体の検査に適している。
イルスを体内に保有していると考えられるので、本発明
の試薬を用い、AIDS関連ウイルス抗体の有無を検査する
ことにより、接触及び輸血などによる感染を防止しうる
ので臨床上非常に有用である。
Claims (1)
- 【請求項1】HIV核タンパクP24及び/又はHIV外殻タン
パクp41をpH7.5〜8.0において感作したゼラチン粒子か
らなることを特徴とする後天性免疫不全症候群関連ウイ
ルス抗体検出用間接凝集反応試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62326774A JP2587969B2 (ja) | 1987-12-25 | 1987-12-25 | ウイルス抗体検出用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62326774A JP2587969B2 (ja) | 1987-12-25 | 1987-12-25 | ウイルス抗体検出用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01169360A JPH01169360A (ja) | 1989-07-04 |
| JP2587969B2 true JP2587969B2 (ja) | 1997-03-05 |
Family
ID=18191546
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62326774A Expired - Lifetime JP2587969B2 (ja) | 1987-12-25 | 1987-12-25 | ウイルス抗体検出用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2587969B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2512627B2 (ja) * | 1990-11-08 | 1996-07-03 | 株式会社トクヤマ | 長期保存安定性を目的とした免疫学的凝集反応試薬の製造方法及びそれに用いる免疫学的凝集反応粒子溶解用液 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4921787A (en) * | 1987-05-01 | 1990-05-01 | Cambridge Bioscience Corporation | Detection of antibodies to human immunodeficiency virus by agglutination of antigen coated latex |
-
1987
- 1987-12-25 JP JP62326774A patent/JP2587969B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01169360A (ja) | 1989-07-04 |
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