JP2852656B2 - ヒト免疫不全ウイルス２型抗原の製造方法及びそれを用いた該抗体の検出用試薬 - Google Patents
ヒト免疫不全ウイルス２型抗原の製造方法及びそれを用いた該抗体の検出用試薬Info
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 後天性免疫不全症候群 （Acquired Immunodeficiency Syndrome,以下「AID
S」と呼ぶ）は、1981年に初めて報告された病気であ
る。その後の研究により、AIDSの原因ウイルスが究明さ
れ、ヒト免疫不全ウイルス（Human Immunodeficiency V
irus、以下「HIV」と呼ぶ）と名付けられた。HIVはヒト
とヒトの性的接触や輸血等により感染し、潜ぷく期間を
経てAIDSを発症する。AIDSの予防のために、HIVに対す
る特異抗体を検出する種々の試薬が開発され、献血のス
クリーニング等に利用されている。
S」と呼ぶ）は、1981年に初めて報告された病気であ
る。その後の研究により、AIDSの原因ウイルスが究明さ
れ、ヒト免疫不全ウイルス（Human Immunodeficiency V
irus、以下「HIV」と呼ぶ）と名付けられた。HIVはヒト
とヒトの性的接触や輸血等により感染し、潜ぷく期間を
経てAIDSを発症する。AIDSの予防のために、HIVに対す
る特異抗体を検出する種々の試薬が開発され、献血のス
クリーニング等に利用されている。
ところが最近、西アフリカでHIVとは明らかに異なる
新しいヒトレトロウイルスがAIDS患者より分離され〔F.
Clovel et al,Science,233,343（1981）〕ヒト免疫不全
ウイルス２型（Human Immunodeficiency Virus type2,
以下「HIV−２」と呼ぶ）と名付けられた〔F.Clovel et
al,Nature,324,691（1986）〕。HIV−２の遺伝子の核
酸配列も完全に解析され、HIVの核酸配列とは差がある
ことが示された〔M.Guyoder et al,Nature,326,662（19
87）〕。更に蛋白質レベルにおいても蛋白質の分子量に
差があり、血清学的な交差反応性は分子量24000のコア
蛋白質のみに限られ、特に外被糖蛋白質は全く交差反応
性を示さないことがわかった〔F.Clovel et al,Nature,
324,691（1986）〕。
新しいヒトレトロウイルスがAIDS患者より分離され〔F.
Clovel et al,Science,233,343（1981）〕ヒト免疫不全
ウイルス２型（Human Immunodeficiency Virus type2,
以下「HIV−２」と呼ぶ）と名付けられた〔F.Clovel et
al,Nature,324,691（1986）〕。HIV−２の遺伝子の核
酸配列も完全に解析され、HIVの核酸配列とは差がある
ことが示された〔M.Guyoder et al,Nature,326,662（19
87）〕。更に蛋白質レベルにおいても蛋白質の分子量に
差があり、血清学的な交差反応性は分子量24000のコア
蛋白質のみに限られ、特に外被糖蛋白質は全く交差反応
性を示さないことがわかった〔F.Clovel et al,Nature,
324,691（1986）〕。
このためHIVに対する特異抗体のみを検出する試薬で
は、AIDSのもう一方の起因因子であるHIV−２に対する
特異抗体を検出できないため、HIV−２に対する特異抗
体を検出できる試薬が必要となる。
は、AIDSのもう一方の起因因子であるHIV−２に対する
特異抗体を検出できないため、HIV−２に対する特異抗
体を検出できる試薬が必要となる。
本発明はAIDSのもう一つの起因因子であるHIV−２の
抗原の製造方法及びそれを利用してHIV−２に対する特
異抗体を検出するのに用いる試薬に関するものである。
抗原の製造方法及びそれを利用してHIV−２に対する特
異抗体を検出するのに用いる試薬に関するものである。
HIV−２が分離されて、すぐにHIV−２抗原を取得する
ための持続産生細胞が樹立され、その抗原を用いてHIV
−２に対する特異抗体を検出するための酵素免疫測定
法、ウエスタンブロット法が開発された。
ための持続産生細胞が樹立され、その抗原を用いてHIV
−２に対する特異抗体を検出するための酵素免疫測定
法、ウエスタンブロット法が開発された。
HIV−２の持続感染細胞株としては、ヒト癌化Ｔ細胞
株であるHUT−78およびCEMにHIV−２が感染し、HIV−２
の持続感染細胞株になることが報告されている〔F.Clov
el et al,Science,233,343（1986）〕。
株であるHUT−78およびCEMにHIV−２が感染し、HIV−２
の持続感染細胞株になることが報告されている〔F.Clov
el et al,Science,233,343（1986）〕。
また上記HIV−２持続感染細胞株を培養し、得られた
精製HIV−２を“0.1％Triton X−100"で処理してHIV−
２抗原を取得し、このHIV−２抗原を用いて酵素免疫測
定法およびウエスタンブロット法を組み立てたことが報
告されている〔F.Brunvezinet et al,Lancet,i,128（19
87）〕酵素免疫測定法はHIV−２抗原を固定化し、これ
に被検血清を反応させたのち、未反応の血清成分を除
き、更に反応したヒトの抗体に特異的な酵素標識抗体を
反応させる。反応後、未反応の酵素標識抗体を除き、酵
素に特異的な基質を加え、その発色の度合によってHIV
−２に対する抗体の有無を検査する方法である。ウエス
タンブロット法は、HIV−２抗原を電気泳動し、ニトロ
セルロース膜に転写した後、被検血清と反応させ、反応
した抗体を酵素免疫測定法と同様の方法で発色させ、バ
ンドとして検出する方法である。
精製HIV−２を“0.1％Triton X−100"で処理してHIV−
２抗原を取得し、このHIV−２抗原を用いて酵素免疫測
定法およびウエスタンブロット法を組み立てたことが報
告されている〔F.Brunvezinet et al,Lancet,i,128（19
87）〕酵素免疫測定法はHIV−２抗原を固定化し、これ
に被検血清を反応させたのち、未反応の血清成分を除
き、更に反応したヒトの抗体に特異的な酵素標識抗体を
反応させる。反応後、未反応の酵素標識抗体を除き、酵
素に特異的な基質を加え、その発色の度合によってHIV
−２に対する抗体の有無を検査する方法である。ウエス
タンブロット法は、HIV−２抗原を電気泳動し、ニトロ
セルロース膜に転写した後、被検血清と反応させ、反応
した抗体を酵素免疫測定法と同様の方法で発色させ、バ
ンドとして検出する方法である。
上述したように、HIV−２抗体検出法はそれぞれに感
度、特異性に工夫がこらされているが、尚、実用上問題
が残されている。第一に、反応操作が三段階、四段階と
繁雑である。第二に、反応測定に特殊な器材を必要とす
る。以上の問題点は、多数の被検血清について測定を行
う場合、解決されるべき重要な課題である。
度、特異性に工夫がこらされているが、尚、実用上問題
が残されている。第一に、反応操作が三段階、四段階と
繁雑である。第二に、反応測定に特殊な器材を必要とす
る。以上の問題点は、多数の被検血清について測定を行
う場合、解決されるべき重要な課題である。
〔問題点を解決するための手段〕 本発明は、上記HIV−２抗体検出方法に見られる諸問
題を解決する新しいHIV−２抗体検出用試薬を提供する
ものであって、HIV−２抗体検出方法として間接凝集反
応を利用したことを特徴としている。すなわち、本発明
は、HIV−２産生細胞を培養し得られたHIV−２を陰イオ
ン性界面活性剤で処理することによるHIV−２抗原の製
造方法、および当該抗原を感作させた担体粒子を主剤と
するHIV−２抗体検出用間接凝集反応試薬に関するもの
である。
題を解決する新しいHIV−２抗体検出用試薬を提供する
ものであって、HIV−２抗体検出方法として間接凝集反
応を利用したことを特徴としている。すなわち、本発明
は、HIV−２産生細胞を培養し得られたHIV−２を陰イオ
ン性界面活性剤で処理することによるHIV−２抗原の製
造方法、および当該抗原を感作させた担体粒子を主剤と
するHIV−２抗体検出用間接凝集反応試薬に関するもの
である。
HIV−２抗原は、次の方法に従って取得できる。すな
わち、HIV−２産生細胞を培養し、培養上清液からHIV−
２を分離した後、HIV−２を陰イオン性界面活性剤で処
理することにより、HIV−２抗原を取得できる。
わち、HIV−２産生細胞を培養し、培養上清液からHIV−
２を分離した後、HIV−２を陰イオン性界面活性剤で処
理することにより、HIV−２抗原を取得できる。
上記HIV−２産生細胞には、HIV−２を産生する細胞株
の全てが包含される。例えば、HIVと同様にHIV−２もヒ
トＴ細胞の表面抗原であるT4抗原を有する細胞に感染す
ることが知られているので〔F.Clovel et al,Science,2
33,343（1986）〕この表面抗原を有する細胞にHIV−２
を感染させることによりHIV−２産生細胞を得ることが
できる。特に、公知の株化細胞であるHUT78およびCEMに
HIV−２を感染させると、これらのHIV−２感染細胞は永
久に継代培養することが可能なHIV−２産生細胞となる
ことが知られておりこれらの細胞株は、本発明に使用す
ることができる。
の全てが包含される。例えば、HIVと同様にHIV−２もヒ
トＴ細胞の表面抗原であるT4抗原を有する細胞に感染す
ることが知られているので〔F.Clovel et al,Science,2
33,343（1986）〕この表面抗原を有する細胞にHIV−２
を感染させることによりHIV−２産生細胞を得ることが
できる。特に、公知の株化細胞であるHUT78およびCEMに
HIV−２を感染させると、これらのHIV−２感染細胞は永
久に継代培養することが可能なHIV−２産生細胞となる
ことが知られておりこれらの細胞株は、本発明に使用す
ることができる。
〔F.Clovel et al,Science,233,343（1986）〕。上記HI
V−２産生細胞の培養は、通常の方法により行うことが
できる。
V−２産生細胞の培養は、通常の方法により行うことが
できる。
培地としては通常の細胞培養に用いられる各種の栄養
培地をいずれも使用できる。好ましい培地としては、RP
MI 1640培地、イーグル最低必須培地（MEM培地）等をウ
シ胎児血清（FCS）、子ウシ血清等の血清補液を用いて
改質した培地等を例示できる。培養条件は通常の細胞培
養に利用される条件と特に異なるものではなく、一般に
は約36〜38℃の温度及び6.4〜7.6のpHを採用できる。培
養は通常３〜５日毎に液交換を行うことにより実施さ
れ、これにより所望の細胞を良好に増殖させ得る。
培地をいずれも使用できる。好ましい培地としては、RP
MI 1640培地、イーグル最低必須培地（MEM培地）等をウ
シ胎児血清（FCS）、子ウシ血清等の血清補液を用いて
改質した培地等を例示できる。培養条件は通常の細胞培
養に利用される条件と特に異なるものではなく、一般に
は約36〜38℃の温度及び6.4〜7.6のpHを採用できる。培
養は通常３〜５日毎に液交換を行うことにより実施さ
れ、これにより所望の細胞を良好に増殖させ得る。
本発明においてHIV−２の抗原成分の原料として利用
されるHIV−２としては、上記HIV−２産生細胞の培養上
清液から常法により分離したものを使用する。HIV−２
の分離は通常の遠心分離法等により行われ、特に超遠心
密度勾配法等を用いるとHIV−２を高純度で取得出来る
ので好都合である。
されるHIV−２としては、上記HIV−２産生細胞の培養上
清液から常法により分離したものを使用する。HIV−２
の分離は通常の遠心分離法等により行われ、特に超遠心
密度勾配法等を用いるとHIV−２を高純度で取得出来る
ので好都合である。
HIV−２抗原は、上記HIV−２を陰イオン性界面活性剤
で処理することにより取得することができる。
で処理することにより取得することができる。
陰イオン性界面活性剤としては、例えば硫酸アルキル
ナトリウム、胆汁酸ナトリウムが使用できる。
ナトリウム、胆汁酸ナトリウムが使用できる。
硫酸アルキルナトリウムを使用する場合においてその
アルキル鎖は10〜20個のものが好適に使用される。陰イ
オン性界面活性剤のうち高い凝集力価の可溶化抗原が得
られる点で硫酸アルキルナトリウムの使用が好ましい。
アルキル鎖は10〜20個のものが好適に使用される。陰イ
オン性界面活性剤のうち高い凝集力価の可溶化抗原が得
られる点で硫酸アルキルナトリウムの使用が好ましい。
抗原の取得方法としては、陰イオン性界面活性剤0.01
〜3.0％含む緩衝液をHIV−２の沈殿物に加え、約25〜10
0℃の温度下に、３分〜60分間処理する。この可溶化液
を遠心分離して得られる上清液をHIV−２抗原として使
用する。
〜3.0％含む緩衝液をHIV−２の沈殿物に加え、約25〜10
0℃の温度下に、３分〜60分間処理する。この可溶化液
を遠心分離して得られる上清液をHIV−２抗原として使
用する。
次に、本発明HIV−２抗体検出用間接凝集反応試薬に
ついて説明する。
ついて説明する。
本発明における担体粒子は間接凝集反応に使用可能な
ものであれば如何なる担体でも良く、ヒト、羊、ニワト
リ等の動物の赤血球、及びゼラチン粒子（特開昭57−15
3658号明細書参照）等の人工担体を例示することが出来
る。特にゼラチン粒子は非特異反応が少なく、用途に応
じた性質を付加できる等、HIV−２抗体検出のための間
接凝集反応用担体として優れた長所を有している。
ものであれば如何なる担体でも良く、ヒト、羊、ニワト
リ等の動物の赤血球、及びゼラチン粒子（特開昭57−15
3658号明細書参照）等の人工担体を例示することが出来
る。特にゼラチン粒子は非特異反応が少なく、用途に応
じた性質を付加できる等、HIV−２抗体検出のための間
接凝集反応用担体として優れた長所を有している。
HIV−２の抗原成分を担体粒子に感作する方法は、一
般の抗原を感作する公知の方法によればよい。例えばタ
ンニン酸、グルタールアルデヒド、ビスジアゾベンジジ
ン、トリレンジイソシアネート、ジフロロジニトロベン
ゼン、カルボジイミド類、キノン類、及び塩化クロム等
のいわゆるカップリング剤を使用する方法あるいは物理
吸着させる方法などによって行うことが出来る。
般の抗原を感作する公知の方法によればよい。例えばタ
ンニン酸、グルタールアルデヒド、ビスジアゾベンジジ
ン、トリレンジイソシアネート、ジフロロジニトロベン
ゼン、カルボジイミド類、キノン類、及び塩化クロム等
のいわゆるカップリング剤を使用する方法あるいは物理
吸着させる方法などによって行うことが出来る。
こうして得られたHIV−２抗原感作粒子は通常は常法
により凍結乾燥し、復元後、被験試料（通常は血清）希
釈溶液、標準血清、未感作担体などと組み合わせてHIV
−２抗体検出用間接凝集反応試薬としてHIV−２抗体の
検出、測定に供される。
により凍結乾燥し、復元後、被験試料（通常は血清）希
釈溶液、標準血清、未感作担体などと組み合わせてHIV
−２抗体検出用間接凝集反応試薬としてHIV−２抗体の
検出、測定に供される。
キットの調製は通常の方法に従って行えばよく例えば
感作粒子、未感作担体、標準血清（対照用陽性血清）
に、被験血清の希釈用溶液及び必要に応じて感作粒子の
凍結乾燥品溶解用溶液等を組み合わせることによりキッ
ト化することができる。
感作粒子、未感作担体、標準血清（対照用陽性血清）
に、被験血清の希釈用溶液及び必要に応じて感作粒子の
凍結乾燥品溶解用溶液等を組み合わせることによりキッ
ト化することができる。
HIV−２抗原感作粒子浮遊液とAIDS患者血清の二倍段
階希釈液を96穴マイクロプレートのウェルに等量ずつ加
え、混合し、室温に静置する。１〜３時間後、各穴を観
察すると、希釈倍数の低い穴にはHIV−２抗原感作粒子
が底一面に広がって、凝集像が見られ、希釈倍数の高い
所では、ボタン状となり凝集像が認められない。HIV−
２抗原を感作していない粒子は低希釈から高希釈の血清
中いずれにも凝集像は見られない。また、健康なヒト血
清について同様に検査した場合には、HIV−２抗原感作
粒子及び未感作粒子にも凝集像は見られない。このこと
は、HIV−２抗原感作粒子上にある抗原と、AIDS患者血
清中に存在するHIV−２抗体が特異的に反応しているこ
とを示している。
階希釈液を96穴マイクロプレートのウェルに等量ずつ加
え、混合し、室温に静置する。１〜３時間後、各穴を観
察すると、希釈倍数の低い穴にはHIV−２抗原感作粒子
が底一面に広がって、凝集像が見られ、希釈倍数の高い
所では、ボタン状となり凝集像が認められない。HIV−
２抗原を感作していない粒子は低希釈から高希釈の血清
中いずれにも凝集像は見られない。また、健康なヒト血
清について同様に検査した場合には、HIV−２抗原感作
粒子及び未感作粒子にも凝集像は見られない。このこと
は、HIV−２抗原感作粒子上にある抗原と、AIDS患者血
清中に存在するHIV−２抗体が特異的に反応しているこ
とを示している。
以下に記載する実施例をもって本発明の効果を説明す
る。
る。
〔実験例１〕界面活性剤の選択 試料 下記試料〜を用意した。
試料 ５×107PFUのHIV−２ウイルスペレットに0.5％
ポリオキシエチレン（10）オクチルフェニールエーテル
3mlを加えて37℃で30分間撹拌し、10,000×ｇで30分間
遠心分離し、その上清を試料とした。
ポリオキシエチレン（10）オクチルフェニールエーテル
3mlを加えて37℃で30分間撹拌し、10,000×ｇで30分間
遠心分離し、その上清を試料とした。
試料 0.5％ポリオキシエチレン（10）オクチルフェ
ニールエーテルの代わりに0.5％ポリオキシエチレン
（９）オクチルフェニールエーテルを使用した点を除い
て試料における記載と同様におこない、試料とし
た。
ニールエーテルの代わりに0.5％ポリオキシエチレン
（９）オクチルフェニールエーテルを使用した点を除い
て試料における記載と同様におこない、試料とし
た。
試料 0.5％ポリオキシエチレン（10）オクチルフェ
ニールエーテルの代わりに0.075％ｎ−ドデシル硫酸ナ
トリウムを使用した点を除いて試料における記載と同
様におこない、試料とした。
ニールエーテルの代わりに0.075％ｎ−ドデシル硫酸ナ
トリウムを使用した点を除いて試料における記載と同
様におこない、試料とした。
試料 0.5％ポリオキシエチレン（10）オクチルフェ
ニールエーテルの代わりに0.075％ｎ−テトラデシル硫
酸ナトリウムを使用した点を除いて試料における記載
と同様におこない、試料とした。
ニールエーテルの代わりに0.075％ｎ−テトラデシル硫
酸ナトリウムを使用した点を除いて試料における記載
と同様におこない、試料とした。
試料 0.5％ポリオキシエチレン（10）オクチルフェ
ニールエーテルの代わりに0.5％デオキシコール酸ナト
リウムを使用した点を除いて試料における記載と同様
におこない、試料とした。
ニールエーテルの代わりに0.5％デオキシコール酸ナト
リウムを使用した点を除いて試料における記載と同様
におこない、試料とした。
方法 各試料を用いて、製造例で述べる方法に従って、HIV
−２抗原感作ゼラチン粒子を製作した。HIV−２に対す
る抗体を有するHIV−２感染者血清を用いて、凝集反応
試験を行った。
−２抗原感作ゼラチン粒子を製作した。HIV−２に対す
る抗体を有するHIV−２感染者血清を用いて、凝集反応
試験を行った。
結果 結果を表１に示す。
表中凝集反応において、陰性は明確な凝集像が認めら
れなかったこと、陽性は凝集像が認められたことを示
し、凝集力価は凝集像から認められた最終血清希釈倍数
を示す。表１より、陰イオン性界面活性剤により凝集反
応に適したHIV−２抗原が可溶化されていることがわか
る。特に、硫酸アルキルナトリウムによって可溶化抗原
は高い凝集力価を示し、HIV−２抗原の製造に適してい
ることが判明する。
れなかったこと、陽性は凝集像が認められたことを示
し、凝集力価は凝集像から認められた最終血清希釈倍数
を示す。表１より、陰イオン性界面活性剤により凝集反
応に適したHIV−２抗原が可溶化されていることがわか
る。特に、硫酸アルキルナトリウムによって可溶化抗原
は高い凝集力価を示し、HIV−２抗原の製造に適してい
ることが判明する。
製造例１ （１） HIV−２抗原の調製 HIV−２をMolt−４細胞に感染させ、HIV−２産生細胞
として株化した細胞を、ウシ胎児血清を10％含有するRP
MI−1640培地に接種し、５％炭酸ガスを含む空気中で37
℃で４日間培養した。
として株化した細胞を、ウシ胎児血清を10％含有するRP
MI−1640培地に接種し、５％炭酸ガスを含む空気中で37
℃で４日間培養した。
この培養液20リットルを3000rpmで10分間遠心して細
胞を除去して上清を得た。この上清をあらかじめ連続ゾ
ーナルローター内に作成した０〜50％のショ糖密度勾配
に重層し、循環しながら30000rpmで超遠心分離を行っ
た。
胞を除去して上清を得た。この上清をあらかじめ連続ゾ
ーナルローター内に作成した０〜50％のショ糖密度勾配
に重層し、循環しながら30000rpmで超遠心分離を行っ
た。
得られたウイルス画分を再び遠心用チューブ内に作製
した20〜55％のショ糖連続密度勾配に重層し、スイング
ローターにより25000rpmにて４時間超遠心分離を行っ
た。得られたウイルス画分を45000rpmにて60分間遠心し
てウイルスを沈殿させて、この沈殿に0.075％ｎ−ドデ
シル硫酸ナトリウム含有リン酸緩衝生理食塩液を加え
た。沈殿を浮遊させ、37℃で30分間撹拌して溶解させ、
13000rpmにて30分間遠心分離して得られた上清をHIV−
２抗原とした。
した20〜55％のショ糖連続密度勾配に重層し、スイング
ローターにより25000rpmにて４時間超遠心分離を行っ
た。得られたウイルス画分を45000rpmにて60分間遠心し
てウイルスを沈殿させて、この沈殿に0.075％ｎ−ドデ
シル硫酸ナトリウム含有リン酸緩衝生理食塩液を加え
た。沈殿を浮遊させ、37℃で30分間撹拌して溶解させ、
13000rpmにて30分間遠心分離して得られた上清をHIV−
２抗原とした。
（２） 感作粒子の調製 特開昭58−113754号公報の実施例１に記載された方法
で製造したゼラチン粒子を5ppmのタンニン酸を含むpH6.
0の0.15Mリン酸緩衝生理食塩液（以下0.15M PBS（pH6.
0）と略す）0.15M PBS（pH7.2）中に粒子濃度が2.5％に
なるように分散させ、37℃で10分間加温した。この粒子
を遠心分離して回収し、生理食塩液で３回遠心分離法で
洗浄してから0.15M PBS（pH6.0）に５％になるように分
散させた。一方、（１）で調製したHIV−２抗原を0.15M
PBS（pH6.0）で50倍に希釈し、前記のタンニン酸処理
粒子分散液に等容のこの希釈液を混合して37℃で40分間
加温し、粒子にHIV−２抗原を感作させた。この感作粒
子生理食塩液で３回遠心洗浄してから浮遊分散液（リン
酸水素二ナトリウム・12水塩1920g、リン酸二水素カリ
ウム0.291g、塩化ナトリウム0.438g、アラビアゴム0.25
gグリシン1.5g、チメロサール30.01g及び正常家兎血清
1.0mlを全量100mlになるように、精製水に溶解した液）
に分散させた。この分散液を凍結乾燥し、HIV−２抗原
感作ゼラチン粒子の凍結乾燥品を得た。
で製造したゼラチン粒子を5ppmのタンニン酸を含むpH6.
0の0.15Mリン酸緩衝生理食塩液（以下0.15M PBS（pH6.
0）と略す）0.15M PBS（pH7.2）中に粒子濃度が2.5％に
なるように分散させ、37℃で10分間加温した。この粒子
を遠心分離して回収し、生理食塩液で３回遠心分離法で
洗浄してから0.15M PBS（pH6.0）に５％になるように分
散させた。一方、（１）で調製したHIV−２抗原を0.15M
PBS（pH6.0）で50倍に希釈し、前記のタンニン酸処理
粒子分散液に等容のこの希釈液を混合して37℃で40分間
加温し、粒子にHIV−２抗原を感作させた。この感作粒
子生理食塩液で３回遠心洗浄してから浮遊分散液（リン
酸水素二ナトリウム・12水塩1920g、リン酸二水素カリ
ウム0.291g、塩化ナトリウム0.438g、アラビアゴム0.25
gグリシン1.5g、チメロサール30.01g及び正常家兎血清
1.0mlを全量100mlになるように、精製水に溶解した液）
に分散させた。この分散液を凍結乾燥し、HIV−２抗原
感作ゼラチン粒子の凍結乾燥品を得た。
（３） 被験血清希釈用溶液の調製 リン酸水素二ナトリウム・12水塩1920g、リン酸二水
素カリウム0.291g、塩化ナトリウム0.438g、アラビアゴ
ム0.25g、アジ化ナトリウム0.15gを全量100mlになるよ
うに精製水に溶解して血清希釈溶液とした。
素カリウム0.291g、塩化ナトリウム0.438g、アラビアゴ
ム0.25g、アジ化ナトリウム0.15gを全量100mlになるよ
うに精製水に溶解して血清希釈溶液とした。
（４） キットの調製 感作粒子の凍結乾燥品のほかに抗原未感作粒子の凍結
乾燥品及び対照用陽性血清の凍結乾燥品も別途に調製
し、感作粒子溶解用溶液及び被験血清希釈用溶液を組み
合わせて、HIV−２抗体検出用試薬キットとした。
乾燥品及び対照用陽性血清の凍結乾燥品も別途に調製
し、感作粒子溶解用溶液及び被験血清希釈用溶液を組み
合わせて、HIV−２抗体検出用試薬キットとした。
製造例２ 常法に従ってホルマリンで固定した羊赤血球を5V/V％
になるように0.15M PBS（pH6.0）に浮遊させた液に等量
の0.001W/V％タンニン酸の0.15M PBS（pH6.0）溶液を加
え、ときどき撹拌しながら37℃で15分間反応させた。こ
の血球を生理食塩液で洗浄後、0.15M PBS（pH6.0）で5V
/V％になるように浮遊させてタンニン酸処理血球液を得
た。
になるように0.15M PBS（pH6.0）に浮遊させた液に等量
の0.001W/V％タンニン酸の0.15M PBS（pH6.0）溶液を加
え、ときどき撹拌しながら37℃で15分間反応させた。こ
の血球を生理食塩液で洗浄後、0.15M PBS（pH6.0）で5V
/V％になるように浮遊させてタンニン酸処理血球液を得
た。
製造例１の（１）で調製したHIV−２抗原に0.15M PBS
（pH6.0）を加えて50倍に希釈し、前記のタンニン酸処
理血球液に等量のこの希釈液を加えて37℃で30分間加温
した。血球を遠心分離して0.15M PBS（7.2）で２回洗浄
し、浮遊分散液に浮遊させて凍結乾燥し、感作血球の凍
結乾燥品を得た。
（pH6.0）を加えて50倍に希釈し、前記のタンニン酸処
理血球液に等量のこの希釈液を加えて37℃で30分間加温
した。血球を遠心分離して0.15M PBS（7.2）で２回洗浄
し、浮遊分散液に浮遊させて凍結乾燥し、感作血球の凍
結乾燥品を得た。
リン酸水素二ナリウム・12水塩1920g、リン酸二水素
カリウム0.291g、塩化ナトリウム0.438g、アラビアゴム
0.25g、アジ化ナトリウム0.15g、正常家兎血清1.0mlを1
00mlになるように精製水に溶解して血清希釈用液とし
た。
カリウム0.291g、塩化ナトリウム0.438g、アラビアゴム
0.25g、アジ化ナトリウム0.15g、正常家兎血清1.0mlを1
00mlになるように精製水に溶解して血清希釈用液とし
た。
感作血球凍結乾燥品に未感作血球の乾燥品、対照用陽
性血清及び上記血清希釈用液を組み合わせ、HIV−２抗
体検出用試薬キットとした。
性血清及び上記血清希釈用液を組み合わせ、HIV−２抗
体検出用試薬キットとした。
各製造例で得られた試薬キットを用い、各種被検血清
について間接凝集反応テストを行った。得られた結果を
第２表に示す。
について間接凝集反応テストを行った。得られた結果を
第２表に示す。
この結果より、HIV−２抗体の検出において、間接凝集
法は螢光抗体法と全く同等の検出感度及び特異性を有す
ることが分る。
法は螢光抗体法と全く同等の検出感度及び特異性を有す
ることが分る。
本発明の試薬によって、多数の検体を簡便な操作で迅
速に測定出来る。例えば、螢光抗体法あるいは酵素抗体
法の場合、検査開始から結果を得るまで、洗浄も加え数
回の操作を必要とされるが、本発明の試薬を用いた場
合、希釈血清に加えるだけで、結果がでるまで静置して
おけばよく、非常に簡便である。また、結果の判定には
特殊な器材を必要とせず肉眼で判定出来る。しかも試薬
調製に用いたHIV−２抗原は界面活性剤処理によって、
感染性をなくしてあるため安全性も高い。これらの点
は、多数の検体の検査に適している。
速に測定出来る。例えば、螢光抗体法あるいは酵素抗体
法の場合、検査開始から結果を得るまで、洗浄も加え数
回の操作を必要とされるが、本発明の試薬を用いた場
合、希釈血清に加えるだけで、結果がでるまで静置して
おけばよく、非常に簡便である。また、結果の判定には
特殊な器材を必要とせず肉眼で判定出来る。しかも試薬
調製に用いたHIV−２抗原は界面活性剤処理によって、
感染性をなくしてあるため安全性も高い。これらの点
は、多数の検体の検査に適している。
HIV−２抗体が検出された場合、HIV−２を体内に保有
していると考えられるので、本発明試薬を用い、HIV−
２抗体の有無を検査することにより、接触及び輸血など
による感染を防止しうるので臨床上非常に有用である。
していると考えられるので、本発明試薬を用い、HIV−
２抗体の有無を検査することにより、接触及び輸血など
による感染を防止しうるので臨床上非常に有用である。
フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭62−182662（ＪＰ，Ａ) 特開 昭64−468（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−160998（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−163198（ＪＰ，Ａ) 特表 昭63−502242（ＪＰ，Ａ) 特表 平１−503462（ＪＰ，Ａ) 実表 平１−502119（ＪＰ，Ｕ) Ｌａｎｃｅｔ １［8525］（1987）, Ｐ128〜132
Claims (4)
- 【請求項１】ヒト免疫不全ウイルス２型産生細胞を培養
し得られたヒト免疫不全ウイルス２型を陰イオン性界面
活性剤で処理することを特徴とするヒト免疫不全ウイル
ス２型抗原の製造方法。 - 【請求項２】陰イオン性界面活性剤が硫酸アルキルナト
リウムである特許請求の範囲第１項のヒト免疫不全ウイ
ルス２型抗原の製造方法。 - 【請求項３】ヒト免疫不全ウイルス２型産生細胞を培養
し、得られたヒト免疫不全ウイルス２型を陰イオン性界
面活性剤で処理することにより得られたヒト免疫不全ウ
イルス２型抗原を担体粒子に感作させた感作粒子を主剤
とするヒト免疫不全ウイルス２型抗体検出用間接凝集反
応試薬。 - 【請求項４】陰イオン性界面活性剤が硫酸アルキルナト
リウムである特許請求の範囲第３項の試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1684788A JP2852656B2 (ja) | 1988-01-29 | 1988-01-29 | ヒト免疫不全ウイルス２型抗原の製造方法及びそれを用いた該抗体の検出用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1684788A JP2852656B2 (ja) | 1988-01-29 | 1988-01-29 | ヒト免疫不全ウイルス２型抗原の製造方法及びそれを用いた該抗体の検出用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01193648A JPH01193648A (ja) | 1989-08-03 |
| JP2852656B2 true JP2852656B2 (ja) | 1999-02-03 |
Family
ID=11927602
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1684788A Expired - Lifetime JP2852656B2 (ja) | 1988-01-29 | 1988-01-29 | ヒト免疫不全ウイルス２型抗原の製造方法及びそれを用いた該抗体の検出用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2852656B2 (ja) |
-
1988
- 1988-01-29 JP JP1684788A patent/JP2852656B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｌａｎｃｅｔ １［８５２５］（１９８７），Ｐ１２８〜１３２ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01193648A (ja) | 1989-08-03 |
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