JP3679682B2 - Syphilis antibody standard - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、梅毒抗体検査に用いる一定な品質を有する梅毒抗体標準品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
臨床検査の分野では、血液を用いて梅毒抗体の検査を行っており、種々の測定法が開発され利用されている。これらの測定法の代表的方法としては、酵素反応を利用する生化学測定法や、抗原抗体反応を利用する免疫測定法が挙げられる。近年においては血液中の梅毒抗体を精度良く測定することが望まれ、特異性の高い遺伝子組み替え抗原を利用した免疫測定法が盛んに用いられている。
【０００３】
特開平８−１０５８９７号公報においては梅毒トレポネーマ抗原より作製した試薬を用いて、梅毒抗体を検出する方法が開示されている。
また、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．２７ Ｎｏ．５においては、北橋、巽らが、ラテックス法及びＥＩＡ法による梅毒抗体測定試薬についての評価を行っている。
【０００４】
これらのいずれの記載においても、梅毒抗体測定において検量線をあらかじめ作成するという方法がとられている。その際に、標準品と呼ばれる既知の一定量の梅毒抗原に対する抗体を含んだサンプルを測定することが行われている。
この標準品は、ヒト等の梅毒抗体陽性血清から調製され、あらかじめ一定値の抗体価を有することが確認されているサンプルであり、この標準品を稀釈する等して測定の際に用いる検量線が作製される。
【０００５】
しかしながら、このように梅毒トレポネーマ抗原に対する抗体は、ヒト由来の物が多いので、安定して供給することが難しい。また、梅毒トレポネーマ抗原に対する抗体は、その感染時期により、梅毒トレポネーマ抗原の各部位に対する抗体のでき方が違っている。これは梅毒トレポネーマ抗原が詳細にはＴｐＮ４７ｋＤａと呼ばれる部分や、ＴｐＮ１７ｋＤａ、又は、ＴｐＮ１５ｋＤａと呼ばれる部分に免疫学的に別れており、それぞれに対する抗体のでき方がちがうために起こる問題である。
【０００６】
現に、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．２７ Ｎｏ．５において、北橋、巽らは、各試薬メーカーごとに同じ検体を測定しても、計測される抗体価に差がでることを指摘している。これは、各社とも上記の３抗原に対する抗体の管理がうまくできておらず、ロットやメーカーごとに３抗体の調整が行われていないために起こっていることである。
【０００７】
例えば、感染初期では、ＴｐＮ４７ｋＤａに対する抗体価が高く、ＴｐＮ１５ｋＤａに対する抗体価が低くなり、逆に回復期ではその逆になるが、従来は３抗体を含めた総抗体価を梅毒抗体価として表現していた。したがって、検出試薬に用いられているそれぞれの抗原の組成比が一定であっても、標準品中のそれぞれの抗原に対する抗体組成が違うので、メーカーやロットが変わると、同じ１００Ｔ．Ｕ．の標準品でも、試薬の反応性が変化してしまうことになる。
そのため、定量する際に、検量線が一定でないので定量性に支障が出てしまうという問題があった。
【０００８】
なお、ＴｐＮとはＴｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ Ｎｉｃｈｏｌｓの略であり、それぞれの梅毒抗原の部位については、ＴｐＮ１５ｋＤａは、Ｐｕｒｃｅｌｌ ＢＫ，Ｓｗａｎｃｕｔｔ ＭＡ，Ｒａｄｏｌｆ ＪＤらの「Ｌｉｐｉｄａｊｏｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ ｏｆ Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｐａｌｌｉｄｕｍ」（Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９０ Ａｕｇ；４（８）：１３７１−１３７９）に報告され、ＴｐＮ１７ｋＤａは、Ａｋｉｎｓ ＤＲ，Ｐｕｒｃｅｌｌ ＢＫ，Ｍｉｔｒａ ＭＭ，Ｎｏｒｇａｒｄ ＭＶ，Ｒａｄｏｌｆ ＪＤらの「Ｌｉｐｉｄ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ １７−Ｋｉｌｏｄａｌｔｏｎ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ ｏｆ Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ Ｐａｌｌｉｄｕｍ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｓ Ｗｅｌｌ ａｓ Ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃｉｔｙ」（Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．１９９３ Ａｐｒ；６１（４）：１２０２−１２１０）に報告され、ＴｐＮ４７ｋＤａは、Ｗｅｉｇｅｌ ＬＭ， Ｂｒａｎｄｔ ＭＥ，Ｎｏｒｇａｒｄ ＭＶらの「Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅＮ−Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ４７−Ｋｉｌｏｄａｌｔｏｎ Ｉｎｔｅｇｒａｌ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆＴｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ」（Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．１９９２ Ａｐｒ；６０（４）：１５６８−１５７６）に報告されている。
【０００９】
先の北橋、巽らは、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．２７ Ｎｏ．５において、メディエースＴＰＬＡ（積水化学工業社製）、セラテスタム梅毒（カイノス社製）、ＬＰＩＡ・ＴＰテスト（ダイアヤトロン社製）、ランリームＴＰ（シスメックス社製）の試薬で同一検体を測定したところ、こうした標準品の違いから、その値に３倍以上の違いがあることを指摘している。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記現状に鑑み、メーカーやロットごとに検量線の値に乖離が出ず、同時に製造工程を安定化することにより、感度が良好で常に一定の品質を有する梅毒抗体標準品を提供することを目的とする。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明は、梅毒抗体の抗体価を測定する際に、検量線の作成に用いる梅毒抗体標準品であって、梅毒抗原ＴｐＮ１５ｋＤａ、梅毒抗原ＴｐＮ１７ｋＤａ及び梅毒抗原ＴｐＮ４７ｋＤａからなる群より選ばれる少なくとも１種の抗原に反応する抗体を含有する２種以上の原料を、所定の抗体価になるよう混合してなる梅毒抗体標準品である。
以下に本発明を詳述する。
【００１２】
本発明の梅毒抗体標準品は、梅毒抗体の抗体価を測定する際に、検量線の作成に用いるものである。
上述のとおり、梅毒抗体の抗体価を測定する際には、あらかじめ、標準品と呼ばれる梅毒抗原に対する抗体を一定量含んだサンプルを測定し検量線を作成する。本発明の梅毒抗体標準品は、このような梅毒抗原に対する抗体を一定量含んだサンプルである。本発明の梅毒抗体標準品は、梅毒抗体の抗体価を測定する際に、稀釈する等して検量線の作成に用いられる。
【００１３】
本発明の梅毒抗体標準品に含まれる梅毒抗原に対する抗体としては特に限定されず、例えば、血清中や腹水中に存在する抗体、遺伝子組み換え等の手段を用いて産生された抗体、モノクローナル抗体等が挙げられる。これらの抗体は、ヒト由来のものであっても良いし、ウサギやウシ、ヤギ等に由来するものであっても良い。
【００１４】
本発明の梅毒抗体標準品を調製するには、梅毒抗原ＴｐＮ１５ｋＤａ、梅毒抗原ＴｐＮ１７ｋＤａ及び梅毒抗原ＴｐＮ４７ｋＤａからなる群より選ばれる少なくとも１種の抗原に反応する抗体を含有する２種以上の原料を、所定の抗体価になるよう混合する。
上記原料としては、梅毒陽性のヒト血清、上記の抗原で免疫したウサギ、ウシ、ヤギ等の血清や腹水、組み換え体やモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを培養した培地、組み替え体の粉砕物、市販されている抗体試薬等が挙げられる。
【００１５】
上記原料の混合は、得られた梅毒抗体標準品が所定の抗体価を有するように行う。得られた梅毒抗体標準品の抗体価が所定の値となるように調整するには、それぞれの原料中の各抗体の含有量、抗体活性値、抗体価等に基づいて、３種の梅毒抗原に反応する各抗体の抗体価が常に一定値であるように、上記原料の混合を行う。それぞれの原料中の各抗体の含有量、抗体活性値、抗体価等が明らかでない場合は、あらかじめ上記の各抗体の含有量、抗体活性値、抗体価等を測定することが必要である。
【００１６】
上記各抗体の含有量の測定方法としては特に限定されず、例えば、用いる血清や腹水を常法に従い精製した後、２８０ｎｍの吸収波長を利用してタンパク量を測定する方法、ビゥレット法等の化学的定量法を用いてタンパク量を測定する方法等が挙げられる。
【００１７】
上記の各抗体の抗体価の測定方法としては特に限定されず、例えば、下記のような方法が挙げられる。
まず、メディエースＴＰＬＡ（積水化学工業社製）等の梅毒抗体測定用の市販のキットに、上記原料を反応させ原料中に存在する梅毒抗体の総抗体価を定量する。
しかるのち、梅毒抗原ＴｐＮ１５ｋＤａを上記原料に大過剰となるように投入し、いわゆる中和反応を起こして検体中から梅毒抗原ＴｐＮ１５ｋＤａに対する抗体を吸収除去した後、再度上記キットで抗体価を測定する。
そうすると、梅毒抗原ＴｐＮ１５ｋＤａに対する抗体は先の梅毒抗原ＴｐＮ１５ｋＤａと反応し吸収されるので、先に測定した総抗体価から後の抗体価の差をとれば、梅毒抗原ＴｐＮ１５ｋＤａに反応する抗体量が定量できる。同様に梅毒抗原ＴｐＮ１７ｋＤａに対する抗体量、梅毒抗原ＴｐＮ４７ｋＤａに対する抗体価を測定する。
【００１８】
本発明２は、梅毒抗体の抗体価を測定する際に、検量線の作成に用いる梅毒抗体標準品であって、梅毒抗原ＴｐＮ１５ｋＤａのみに反応する抗体、梅毒抗原ＴｐＮ１７ｋＤａのみに反応する抗体、及び、梅毒抗原ＴｐＮ４７ｋＤａのみに反応する抗体からなる群より選ばれる少なくとも２種の抗体を、所定の抗体価になるよう混合してなる梅毒抗体標準品である。
【００１９】
本発明２は、本発明１と同様に、梅毒抗体の抗体価を測定する際に、検量線の作成に用いる梅毒抗体標準品である。
本発明２の梅毒抗体標準品は、梅毒抗原ＴｐＮ１５ｋＤａのみに反応する抗体、梅毒抗原ＴｐＮ１７ｋＤａのみに反応する抗体、及び、梅毒抗原ＴｐＮ４７ｋＤａのみに反応する抗体からなる群より選ばれる少なくとも２種の抗体を、所定の抗体価になるよう混合してなる。
【００２０】
上記の各抗体としては、本発明１の梅毒抗体標準品に含まれる抗体と同様のものが挙げられる。
上記の各抗体を、所定の抗体価になるよう混合するには、上記の各抗体の抗体価があらかじめ明らかな場合は、その値に従い、上記の各抗体の抗体価が不明な場合は、上記の各抗体を精製後、タンパク量の濃度、抗体活性等を測定し、又は、それぞれ個別にメディエースＴＰＬＡ（積水化学工業社製）等の試薬を用いて抗体価測定を行った後、所定の抗体価となるよう混合すればよい。
【００２１】
本発明１及び本発明２の梅毒抗体標準品は、緩衝液に稀釈して製品とすることができるが、安定性等を勘案し適宜ショ糖等を加えても良く、更に他の添加剤を加えても良い。
【００２２】
上記緩衝液としては特に限定されず、例えば、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、グリシン緩衝液、Ｇｏｏｄ緩衝液等が挙げられる。
本発明１及び本発明２の梅毒抗体標準品の形態としては特に限定されず、例えば、溶液、凍結品、凍結乾燥品等が挙げられる。
【００２３】
【実施例】
以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。
【００２４】
（実施例１）
（原料）
メディエースＴＰＬＡ（積水化学工業社製）１セット（１００回分）を用意した。
梅毒抗体原料としては、日本ＴＳＩ社製の３種類の梅毒抗体陽性ヒト血清、ＬｏｔＡ、ＬｏｔＢ、ＬｏｔＣを１００ｍＬずつ用意した。
【００２５】
（ヒト血清の抗体価測定）
以下に示した条件に従い、メディエースＴＰＬＡ（積水化学工業社製）を用いて生化学自動分析装置「日立７０５０形」により、上記の各血清中の抗梅毒トレポネーマ抗体の総抗体価を測定した。結果を表１に示した。
測定モード：Ｏｒｉｇｉｎａｌ ＡＢＳ
パラメーター：検体量２０μＬ、ラテックス試薬（第１試薬）量５０μＬ、検体希釈液（第２試薬）量３５０μＬ
測定波長：５７０ｎｍ
測定時間：検体分注後、直ちに検体希釈液を添加・混合し、その後、ラテックス試薬を添加・混合した。ラテックス試薬の添加８０秒後から３２０秒後までの吸光度変化量を求め、これを反応量とした。
【００２６】
【表１】
次に上記の各血清を１００μＬずつ３本用意し、遺伝子組換ＴＰ抗原ＴｐＮ１５ｋＤａ、ＴｐＮ１７ｋＤａ、ＴｐＮ４７ｋＤａ（各Ｂｉｏ ｋｉｔ社製）の１ｍｇ／ｍＬ溶液を１００μＬずつ加えて中和した。しかるのち各抗原を加えた後の抗体価からそれぞれの抗体量を計算した。結果を表２に示した。
【００２８】
【表２】
同様にメディエースＴＰＬＡ（積水化学工業社製）に付属の標準品について、上記の各抗原に対する抗体の抗体価を測定した。結果を表３に示した。
【００３０】
【表３】
メディエースＴＰＬＡ（積水化学工業社製）に付属の標準品と同じ組成にするため、ＬｏｔＡ ＬｏｔＢ ＬｏｔＣを２：２：１の比で混合し、梅毒抗体標準品を調製した。
【００３２】
（実施例２）
（原料）
メディエースＴＰＬＡ（積水化学工業社製）１セット（１００回分）を用意した。
梅毒抗体として、Ａｂ１５（Ｌｅｅ社製、抗梅毒抗原ＴｐＮ１５ｋＤａモノクローナル抗体）、Ａｂ１７（Ｌｅｅ社製、抗梅毒抗原ＴｐＮ１７ｋＤａモノクローナル抗体）、Ａｂ４７（シバヤギ社製、抗梅毒抗原ＴｐＮ４７ｋＤａウサギポリクローナル抗体）を用い、それぞれの抗体について１０ｍｇ／ｍＬ濃度の抗体液を１００ｍＬずつ用意した。
【００３３】
（抗体の抗体価測定）
以下に示した条件に従い、メディエースＴＰＬＡ（積水化学工業社製）を用いて生化学自動分析装置「日立７０５０形」により、上記の各抗体液中の抗梅毒トレポネーマ抗体の抗体価を測定した。結果を表４に示した。
測定モード ：Ｏｒｉｇｉｎａｌ ＡＢＳ
パラメーター：検体量２０μＬ、ラテックス試薬（第１試薬）量５０μＬ、検体希釈液（第２試薬）量３５０μＬ
測定波長：５７０ｎｍ
測定時間：検体分注後、直ちに検体希釈液を添加・混合し、その後、ラテックス試薬を添加・混合した。ラテックス試薬の添加８０秒後から３２０秒後までの吸光度変化量を求め、これを反応量とした。
【００３４】
【表４】
同様にして、メディエースＴＰＬＡ（積水化学工業社製）に付属の標準品について、上記の各抗原に対する抗体の抗体価を測定した。結果を表５に示した。
【００３６】
【表５】
メディエースＴＰＬＡ（積水化学工業社製）に付属の標準品と同じ組成にするため、Ａｂ１５、Ａｂ１７、Ａｂ４７の抗体を１：２：２の比で混合し、梅毒抗体標準品を調製した。
【００３８】
【発明の効果】
本発明は、上記のような構成を有することより、常に安定した組成で梅毒抗原ＴｐＮ１５ｋＤａ、梅毒抗原ＴｐＮ１７ｋＤａ、梅毒抗原ＴｐＮ４７ｋＤａに対する抗体を含有する梅毒抗体標準品を作ることができ、これにより試薬のロットやメーカーごとの測定値の乖離をなくすことが可能となる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a syphilis antibody standard product having a certain quality used for syphilis antibody testing.
[0002]
[Prior art]
In the field of clinical examination, syphilis antibodies are examined using blood, and various measuring methods have been developed and used. Typical examples of these measurement methods include biochemical measurement methods using enzyme reactions and immunoassay methods using antigen-antibody reactions. In recent years, it has been desired to accurately measure syphilis antibodies in the blood, and immunoassays using gene recombinant antigens with high specificity are actively used.
[0003]
JP-A-8-105897 discloses a method for detecting syphilis antibodies using a reagent prepared from syphilis treponema antigen.
In addition, Medical Technology Vol. 27 No. In No. 5, Kitahashi and Sakai et al. Have evaluated syphilis antibody measurement reagents by the latex method and the EIA method.
[0004]
In any of these descriptions, a method of preparing a calibration curve in advance in syphilis antibody measurement is taken. At that time, a sample containing an antibody against a known fixed amount of syphilis antigen called a standard product is measured.
This standard is a sample prepared from a human or other syphilis antibody-positive serum and has been confirmed to have a certain antibody titer in advance. A calibration curve used for measurement by diluting this standard, etc. Is produced.
[0005]
However, since there are many human-derived antibodies against syphilis treponema antigens in this way, it is difficult to supply them stably. In addition, antibodies to syphilis treponema antigens differ in the manner of antibodies against each site of syphilis treponema antigen depending on the time of infection. This is a problem that arises because the syphilis treponema antigen is immunologically divided into a part specifically called TpN47 kDa, a part called TpN17 kDa, or TpN15 kDa, and the antibodies against each of them are different.
[0006]
In fact, Medical Technology Vol. 27 No. 5 pointed out that even if the same specimen is measured for each reagent maker, there is a difference in the measured antibody titer. This is because each company does not manage the antibodies against the above three antigens well, and the adjustment of the three antibodies is not performed for each lot or manufacturer.
[0007]
For example, the antibody titer against TpN47 kDa is high in the early stage of infection, the antibody titer against TpN15 kDa is low, and vice versa in the recovery period. Conventionally, the total antibody titer including 3 antibodies is expressed as syphilis antibody titer. It was. Therefore, even if the composition ratio of each antigen used in the detection reagent is constant, the antibody composition for each antigen in the standard product is different. U. Even with the standard product, the reactivity of the reagent will change.
Therefore, when quantifying, the calibration curve is not constant, so that there is a problem that the quantitativeness is hindered.
[0008]
Note that TpN is an abbreviation for Treponema pallidum Nichols, and for each syphilis antigen site, TpN15 kDa is Purcell BK, Swancut MA, Radolfol Molneol M. 4 (8): 1371-1379), and TpN17 kDa is the “Lipid Modification of the 17th-Kildalton MembraneDone of the Akins DR, Purcell BK, Mitra MM, Norgard MV, Radolf JD et al. s Macrophage Activation as Well as Amphicity "(Infect. Immun. 1993 Apr; 61 (4): 1202-1210), TpN47 kDa is from Weigel LM, Brandt ME, Norgard MV, N. the 47-Kilodalton Integral Membrane Lipoprotein of Treponema pallidum (Infect. Immun. 1992 Apr; 60 (4): 1568-1576).
[0009]
The previous Kitahashi, Tsuji et al., Medical Technology Vol. 27 No. 5, the same specimen was measured with the reagents of Mediace TPLA (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd.), Serestastam syphilis (manufactured by Kainos), LPIA • TP test (manufactured by Diatron), and Ranlime TP (manufactured by Sysmex Corporation). It is pointed out that there is a difference of more than three times due to the difference between these standard products.
[0010]
[Problems to be solved by the invention]
In view of the above situation, the present invention provides a standard product of syphilis antibody that has good sensitivity and always has a certain quality by stabilizing the manufacturing process at the same time with no deviation in the value of the calibration curve for each manufacturer or lot. The purpose is to do.
[0011]
[Means for Solving the Problems]
The present invention is a standard product of syphilis antibody used to prepare a calibration curve when measuring the antibody titer of syphilis antibody, and is at least one selected from the group consisting of syphilis antigen TpN15 kDa, syphilis antigen TpN17 kDa and syphilis antigen TpN47 kDa. It is a syphilis antibody standard product obtained by mixing two or more raw materials containing an antibody that reacts with an antigen so as to have a predetermined antibody titer.
The present invention is described in detail below.
[0012]
The standard product of syphilis antibody of the present invention is used for preparing a calibration curve when measuring the antibody titer of syphilis antibody.
As described above, when measuring the antibody titer of a syphilis antibody, a standard curve is prepared by measuring a sample containing a certain amount of an antibody against a syphilis antigen called a standard product in advance. The syphilis antibody standard of the present invention is a sample containing a certain amount of an antibody against such a syphilis antigen. The standard product of syphilis antibody of the present invention is used for preparing a calibration curve by diluting or the like when measuring the antibody titer of syphilis antibody.
[0013]
The antibody against the syphilis antigen contained in the standard product of syphilis antibody of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include antibodies present in serum and ascites, antibodies produced using means such as genetic recombination, and monoclonal antibodies. Can be mentioned. These antibodies may be derived from humans or may be derived from rabbits, cows, goats and the like.
[0014]
In order to prepare the syphilis antibody standard product of the present invention, two or more raw materials containing an antibody that reacts with at least one antigen selected from the group consisting of syphilis antigen TpN15 kDa, syphilis antigen TpN17 kDa, and syphilis antigen TpN47 kDa, The antibody titer is mixed.
Examples of the raw materials include human serum positive for syphilis, serum and ascites of rabbits, cows, goats, etc. immunized with the above antigens, culture medium in which recombinant or monoclonal antibody-producing hybridomas are cultured, recombinant pulverized product, and commercially available An antibody reagent etc. are mentioned.
[0015]
The above raw materials are mixed so that the obtained syphilis antibody standard has a predetermined antibody titer. In order to adjust the antibody titer of the obtained syphilis antibody standard product to a predetermined value, based on the content of each antibody in each raw material, antibody activity value, antibody titer, etc., three kinds of syphilis antigens The above raw materials are mixed so that the antibody titer of each antibody reacting with the above is always a constant value. When the content, antibody activity value, antibody titer, etc. of each antibody in each raw material are not clear, it is necessary to measure the content, antibody activity value, antibody titer, etc. of each antibody described above in advance.
[0016]
The method for measuring the content of each antibody is not particularly limited. For example, after purifying serum or ascites to be used according to a conventional method, a method for measuring the amount of protein using an absorption wavelength of 280 nm, a chemistry such as a violet method, etc. And a method for measuring the amount of protein using a quantitative method.
[0017]
The method for measuring the antibody titer of each antibody is not particularly limited, and examples thereof include the following methods.
First, the above raw materials are reacted with a commercially available kit for measuring syphilis antibodies such as Mediace TPLA (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd.), and the total antibody titer of syphilis antibodies present in the raw materials is quantified.
Thereafter, the syphilis antigen TpN15 kDa is introduced into the raw material so as to be in a large excess, so-called neutralization reaction is caused to absorb and remove the antibody against the syphilis antigen TpN15 kDa from the sample, and then the antibody titer is measured again with the kit.
Then, since the antibody against the syphilis antigen TpN15 kDa reacts with the previous syphilis antigen TpN15 kDa and is absorbed, the amount of the antibody that reacts with the syphilis antigen TpN15 kDa can be quantified by taking the difference between the total antibody titer measured earlier and the subsequent antibody titer. . Similarly, the antibody amount against syphilis antigen TpN17 kDa and the antibody titer against syphilis antigen TpN47 kDa are measured.
[0018]
The present invention 2 is a standard syphilis antibody used for preparing a calibration curve when measuring the antibody titer of a syphilis antibody, an antibody that reacts only with the syphilis antigen TpN15 kDa, an antibody that reacts only with the syphilis antigen TpN17 kDa, and It is a syphilis antibody standard product obtained by mixing at least two antibodies selected from the group consisting of antibodies that react only with the syphilis antigen TpN47 kDa so as to have a predetermined antibody titer.
[0019]
The present invention 2 is a syphilis antibody standard used for preparing a calibration curve when measuring the antibody titer of the syphilis antibody, as in the first invention.
The syphilis antibody standard of the present invention 2 comprises at least two antibodies selected from the group consisting of an antibody that reacts only with the syphilis antigen TpN15 kDa, an antibody that reacts only with the syphilis antigen TpN17 kDa, and an antibody that reacts only with the syphilis antigen TpN47 kDa. , Mixed so as to have a predetermined antibody titer.
[0020]
Examples of each antibody include the same antibodies as those contained in the syphilis antibody standard of the first invention.
In order to mix each of the above antibodies so as to have a predetermined antibody titer, when the antibody titer of each of the above antibodies is known in advance, according to the value, when the antibody titer of each of the above antibodies is unknown, After purifying each antibody, the concentration of the protein, the antibody activity, etc. are measured, or the antibody titer is measured individually using a reagent such as Mediace TPLA (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd.) What is necessary is just to mix so that it may become an antibody titer.
[0021]
The syphilis antibody standard product of the present invention 1 and the present invention 2 can be diluted into a buffer solution to obtain a product, but sucrose or the like may be added as appropriate in consideration of stability and the like, and other additives may be added. May be added.
[0022]
The buffer solution is not particularly limited, and examples thereof include a phosphate buffer solution, a Tris buffer solution, a glycine buffer solution, and a Good buffer solution.
It does not specifically limit as a form of the syphilis antibody standard goods of this invention 1 and this invention 2, For example, a solution, a frozen product, a freeze-dried product etc. are mentioned.
[0023]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. However, the present invention is not limited to these examples.
[0024]
(Example 1)
(material)
One set (100 times) of Mediace TPLA (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd.) was prepared.
As syphilis antibody raw materials, 100 mL each of three types of syphilis antibody-positive human sera, Lot A, Lot B, and Lot C, manufactured by Japan TSI, were prepared.
[0025]
(Measure antibody titer of human serum)
Under the conditions shown below, the total antibody titer of the anti-syphilis treponema antibody in each serum was measured with a biochemical automatic analyzer “Hitachi 7050” using Mediace TPLA (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd.). The results are shown in Table 1.
Measurement mode: Original ABS
Parameters: Sample volume 20 μL, Latex reagent (first reagent) volume 50 μL, Sample diluent (second reagent) volume 350 μL
Measurement wavelength: 570 nm
Measurement time: Immediately after sample dispensing, the sample diluent was added and mixed, and then the latex reagent was added and mixed. The amount of change in absorbance from 80 seconds to 320 seconds after the addition of the latex reagent was determined and used as the reaction amount.
[0026]
[Table 1]
Next, three 100 μL of each of the above-mentioned sera was prepared, and neutralized by adding 100 μL of 1 mg / mL solutions of genetically modified TP antigens TpN15 kDa, TpN17 kDa, and TpN47 kDa (manufactured by each Bio kit). Thereafter, the amount of each antibody was calculated from the antibody titer after each antigen was added. The results are shown in Table 2.
[0028]
[Table 2]
Similarly, the antibody titer of the antibody against each of the above antigens was measured for a standard product attached to Mediace TPLA (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd.). The results are shown in Table 3.
[0030]
[Table 3]
In order to obtain the same composition as the standard product attached to Mediace TPLA (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd.), LotA LotB LotC was mixed at a ratio of 2: 2: 1 to prepare a syphilis antibody standard product.
[0032]
(Example 2)
(material)
One set (100 times) of Mediace TPLA (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd.) was prepared.
As the syphilis antibody, Ab15 (manufactured by Lee, anti-syphilis antigen TpN15 kDa monoclonal antibody), Ab17 (manufactured by Lee, anti-syphilis antigen TpN17 kDa monoclonal antibody), Ab47 (manufactured by Shibayagi, anti-syphilis antigen TpN47 kDa rabbit polyclonal antibody) were used, respectively. For each antibody, 100 mL of an antibody solution having a concentration of 10 mg / mL was prepared.
[0033]
(Measurement of antibody titer of antibody)
Under the conditions shown below, the antibody titer of the anti-syphilis treponema antibody in each of the above antibody solutions was measured with a biochemical automatic analyzer “Hitachi 7050” using Mediace TPLA (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd.). The results are shown in Table 4.
Measurement mode: Original ABS
Parameters: Sample volume 20 μL, Latex reagent (first reagent) volume 50 μL, Sample diluent (second reagent) volume 350 μL
Measurement wavelength: 570 nm
Measurement time: Immediately after sample dispensing, the sample diluent was added and mixed, and then the latex reagent was added and mixed. The amount of change in absorbance from 80 seconds to 320 seconds after the addition of the latex reagent was determined and used as the reaction amount.
[0034]
[Table 4]
Similarly, the antibody titer of the antibody against each of the above antigens was measured for a standard product attached to Mediace TPLA (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd.). The results are shown in Table 5.
[0036]
[Table 5]
In order to obtain the same composition as the standard product attached to Mediace TPLA (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd.), Ab15, Ab17, and Ab47 antibodies were mixed at a ratio of 1: 2: 2 to prepare a syphilis antibody standard product.
[0038]
【The invention's effect】
Since the present invention has the above-described configuration, a syphilis antibody standard product containing antibodies against syphilis antigen TpN15 kDa, syphilis antigen TpN17 kDa, and syphilis antigen TpN47 kDa can be produced with a stable composition. It is possible to eliminate the deviation of measured values for each manufacturer.
Claims (2)
梅毒抗原ＴｐＮ１５ｋＤａ、梅毒抗原ＴｐＮ１７ｋＤａ及び梅毒抗原ＴｐＮ４７ｋＤａからなる群より選ばれる少なくとも１種の抗原に反応する抗体を含有する２種以上の原料を、所定の抗体価になるよう混合してなることを特徴とする梅毒抗体標準品。When measuring the antibody titer of syphilis antibody, it is a standard product of syphilis antibody used to create a calibration curve,
Two or more kinds of raw materials containing an antibody that reacts with at least one antigen selected from the group consisting of syphilis antigen TpN15 kDa, syphilis antigen TpN17 kDa and syphilis antigen TpN47 kDa are mixed so as to have a predetermined antibody titer. Syphilis antibody standard product.
梅毒抗原ＴｐＮ１５ｋＤａのみに反応する抗体、梅毒抗原ＴｐＮ１７ｋＤａのみに反応する抗体、及び、梅毒抗原ＴｐＮ４７ｋＤａのみに反応する抗体からなる群より選ばれる少なくとも２種の抗体を、所定の抗体価になるよう混合してなることを特徴とする梅毒抗体標準品。When measuring the antibody titer of syphilis antibody, it is a standard product of syphilis antibody used to create a calibration curve,
At least two antibodies selected from the group consisting of an antibody that reacts only with the syphilis antigen TpN15 kDa, an antibody that reacts only with the syphilis antigen TpN17 kDa, and an antibody that reacts only with the syphilis antigen TpN47 kDa are mixed so as to have a predetermined antibody titer. A standard product of syphilis antibody characterized by
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