JP4540872B2 - Inhibitor or repair agent for skin damage caused by drying - Google Patents

Description

【００１１】
で表され、ある種の細菌が浸透圧を調節するために蓄積する化合物として既知のものである。本発明の目的に沿う限り、エクトインは起源、製造法または純度を問うことなく使用できる。
【００１２】
本発明の調製剤には、上記エクトインの他に、化粧料および／または皮膚科用製剤に使用される有効成分または賦形剤を含めてもよい。本発明の目的に沿う、他の有効成分としては、エクトイン以外のベタイン類やポリオール類が挙げられる。かようなベタイン類は、エクトインに対して悪影響を及ぼさない限り、如何なる化合物であってもよく、ベタイン（また、グリシンベタインとも称されている）およびその誘導体、ならびに対応するスルテイン（ベタインのカルボキシルがスルホにいれ替わっている）の双性イオン化合物を挙げることができる。かような誘導体の代表的なものとしてはベタインのＮ−メチル基の１ないし３個が他の分枝していてもよい飽和もしくは不飽和炭化水素鎖または下記式で示されるアミド結合で中断された該炭化水素鎖（式中、ｍおよびｎは独立して１〜３０の整数である）
【００１３】
【化２】

【００１４】
で入れ替わっているか、または、第四級アンモニウム基とカルボキシル基もしくはスルホ基との間の炭化水素鎖の長さが変動（例えば、炭素原子数２〜６）しているか、あるいはベタイン残基をペンダント基として複数有する重合体が挙げられる。限定されるものでないが、このような誘導体の具体例としては、上記したものの他、γ−ブチロベタイン、デシルベタイン、ラウリルベタイン、ミリスチルベタイン、セチルベタイン、ステアリルベタイン、ベヘニルベタイン、ラウラミドプロピルベタイン、オレアミドプロピルベタイン、パルミタミドプロピルベタイン、γ−ブチロベタイン、ラウリルスルタイン、ココースルタイン、ポリ（メタクリロイルオキシエチルベタイン）、ポリ（メタクリロイルオキシエチルベタインーコ−２−ヒドロキシエチルメタクリル酸）等を挙げることができる。
【００１５】
他方、ポリオール類は、１分子当たり２個以上の水酸基を有する化合物およびそれらの誘導体、例えば、ポリオールのエチレンオキシド付加物等を挙げることができる。かかるポリオールの具体的なものとしては、グリセリン、１,３−プロパンジオール、２−メチル−１,３−プロパンジオール、１,４−ブタンジオール、１,５−ペンタンジオール、ジグリセリン、エリスリト−ル、グルコン酸、１,２,６−ヘキサントリオール、イノシトール、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、キシリトール等を挙げることができる。
【００１６】
本発明の調製剤では、エクトインを、調製剤の総重量あたり、０.０００１〜２０重量％、好ましくは０.００１〜０.１重量％とすることができる。いずれにしても、それぞれ特有の使用態様について後述する試験方法または評価方法に従って得られる結果をもとに、さらには試験的にボランティア等で実使用した結果等を勘案すれば、皮膚科学分野の専門家は上記有効成分が効能を発揮するのに最適の使用量を容易に決定できるであろう。
【００１７】
本発明の調製剤は、化粧料、医薬品、医薬部外品、外皮に適用されるものをさし、従ってその剤型も水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、ゲル系、軟膏系、クリーム、水−油２層系、水−油−粉末３層系など、幅広い形態をとり得る。すなわち基礎化粧品であれば、洗顔料、化粧水、乳液、クリーム、ジェル、エッセンス（美容液）、パック、マスクなどの形態に、上記の多様な剤型において広く適用可能である。メーキャップ化粧品であれば、ファンデーション 等の形態に広く適用可能である。さらに、医薬品または医薬部外品であれば、各種の軟膏等の形態に広く適用可能である。そして、これらの剤型および形態に本発明皮膚外用剤のとり得る形態が限定されるものでは無い。
【００１８】
調製剤を製造するのに用いる成分は、これらの剤型および形態に応じて、選ぶことができ、そしてかような成分もしくは添加剤としては、液体油脂、固体油脂、ロウ類、エステル油、炭化水素油、シリコーン樹脂、シリコーン、陰イオン性界面活性剤、アニオン系界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、低級アルコール、ステロール類、水溶性高分子、金属イオン封鎖剤、中和剤、ｐＨ調整剤、抗菌剤、香料、色素等を挙げることができる。
【００１９】
以上に述べた調製剤は、直接ボランティアに適用して効能を確認することができるが、それに先立って、もう一つの態様の本発明である、乾燥による皮膚傷害を抑制するか否かについての物質の評価方法によって確認することもできる。
【００２０】
かかる評価方法で用いるヒトケラチノサイトは、被験物の存在下と不存在下で、それぞれ培養することにより、フィラグリンタンパク質の量および遺伝子発現量の変動が有意に識別できるものであれば、いかなる細胞であってもよい。しかし、好適にはヒト包皮由来の正常細胞とフィーダーレイヤー（支持細胞）としてマウス由来の３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１６５８）からなる培養細胞系を都合よく用いることができる。これらの細胞系は例えば、Rheinwald et al., Cell ６, ３３１−３４４（１９７５）に記載の方法に従って、３Ｔ３細胞を適当なシャーレにて培養し、マイトマイシンＣ処理を行ない、こうして支持細胞層を形成した後に、該層上にヒト正常ケラチノサイトを播種し、例えば、９５％空気−５％炭素ガス環境下で、３７℃にてコンフルエントになるまで培養することで、作成できる。
【００２１】
通常、調製剤の不存在下で培養する系（対照）は、調製剤の存在下で培養する（評価系）と平行して処理されるのが好ましい。
【００２２】
【実施例】
以下、具体例を挙げて本発明をさらに説明するが、これらの例は本発明を限定することを意図するものでは無い。説明中に用いるパーセンテージは、特記しない限り重量基準である。
フィラグリン遺伝子発現量の測定試験：
（１）培養細胞
ヒト包皮由来の正常ケラチノサイトとマウス由来の３Ｔ３細胞を用いた。
（２）培養細胞用培地
培地はＤＭＥＭ−Ｈａｍ'ｓＦ１２（３：１）に、ヒドロコルチゾン、コレラエンテロトキシン、上皮増殖因子、インスリンおよび１０％ＦＢＳを含む。
（３）培養
Rheinwald et al., Cell ６, ３３１−３４４（１９７５）の方法に従って培養する。
【００２３】
概要を以下に示す。３Ｔ３細胞をマイトマイシンＣによって処理し、フィーダーレイヤー（支持細胞）として使用した。ヒト正常ケラチノサイト１×１０⁵個細胞をマイトマイシンＣで処理した３Ｔ３細胞上に播種し、９５％空気−５％炭素ガス環境下で、３７℃にてコンフルエントになるまで培養した。次いで、培養上清を除去することにより気相暴露を行なった。なお、各試料は気相暴露３０分前に添加し、３７℃にて培養を行なった。試料を添加しないものを対照とした。気相暴露は３７℃にて０−１０時間行なった。
（４）フィラグリンタンパク質量の測定
上記培養系に、試料を添加後、一定時間気相暴露した細胞からタンパク質を抽出した。常法に従いウエスタンブロッティングにてフィラグリンタンパク質またはフィラグリンタンパク質前駆体（プロフィラグリン）を定量した。概要を以下に示す。抽出したタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥで泳動させた後に、ＰＤＶＦ膜に転写し、一次抗体としてフィラグリンに特異的なマウスモノクローナル抗体（anti-HUMAN Filaggrin MAb）を用いて抗原−抗体反応を行なった。その後、二次抗体に Horseradish peroxidase か Alkaline phosphatase で標識した抗体を用いて抗原−抗体反応を行なった。反応後、標識酵素に対応する色素原基質を用いて酵素反応を行う発色法または化学発色法を用いて、測定を行なった。バンドの定量はＮＩＨイメージ（解析プログラム）を用いて行なった。
（５）フィラグリン遺伝子発現量の測定
上記培養系に、各被験物を添加後、一定時間気相暴露した細胞からＡＧＰＣ法を用いてＲＮＡを抽出した。これらのＲＮＡに対して下記のようにＲＴ−ＰＣＲを行なった。フィラグリンに特異的なプライマーを McKinley-Grant L.J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., ８６，４８４８−４８５２（１９８９）が報告しているフィラグリンの塩基配列に基づき作成した。ＲＴ−ＰＣＲは、ｍＲＮＡを一度逆転写酵素でｃＤＮＡにし、それを鋳型にして、上記プライマーを用いてポリメラーゼ反応（公知の反応）を行ない、フィラグリンのｍＲＮＡを測定した。ＰＣＲ産物はアガロ-スゲルにて電気泳動し、電気泳動後のゲルをエチジウムブロマイド溶液に浸漬したのちに、ＤＮＡを測定した。ＤＮＡバンドの定量はＮＩＨイメージ（解析プログラム）を用いて行なった。補正はアルデヒドグリセル−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ３ＰＤＨ）を用いて行なった。
（６）結果
（６−１）ヒトケラチノサイトを気相暴露したときのフィラグリンタンパク質量の経時的な変動を図1に示す。図より、乾燥によりヒトケラチノサイトのフィラグリンタンパク質は有意に低下することが明らかである。
（６−２）上記気相暴露によりヒトケラチノサイトのフィラグリン遺伝子発現量の経時的な変動を図2に示す。図より、乾燥によりヒトケラチノサイトのフィラグリン遺伝子発現は有意に低下することが明らかである。また、その低下は比較的短時間のうちに生じている。
（６−３）ヒトケラチノサイトにおける気相暴露（乾燥刺激）によるフィラグリンタンパク質量への傷害を抑制する作用を、培養系へ添加する試料としてエクトインを用いた場合と未使用の場合によるフィラグリンタンパク質量で評価した。結果を図３に示す。
（６−４）ヒトケラチノサイトにおける気相暴露（乾燥刺激）によるフィラグリン遺伝子発現を低下させる傷害を抑制する作用を、培養系へのエクトインの添加の有無によるフィラグリン遺伝子発現量で評価した。結果を図４に示す。
【００２４】
これらの図から、本発明に従う調製剤は、ヒトケラチノサイトが乾燥によりうける角層水分量の低下を、角層水分を保持するために必須なアミノ酸の原材料となるフィラグリンのタンパク質量と遺伝子発現の低下を有意に抑制できることが確認される。こうして、本発明の調製剤を皮膚に施用した場合には、仮りに乾燥環境下であっても健康な肌状態が保持される。
【００２５】
以下、本発明に従う調製剤の処方例を示す。
処方例１
ベヘニルアルコール １.０％
ステアリルアルコール ２.０％
スクワラン １０.０％
テトラオクタン酸ペンタエリスチル ５.０％
ラノリン ５.０％
パラベン ０.３％
ポリオキシエチレンベヘニルアルコール １.０％
グリセリン １０.０％
エクトイン ０.１％
アセチルヒアルロン酸ナトリウム ０.１％
精製水 残部
処方例２
流動パラフィン １０.０％
オクタメチルシクロテトラシロキサン ５.０％
１,３−ブチルグリコール １０.０％
グリセリン ３.０％
アスコルビン酸誘導体 ３.０％
エクトイン ０.５％
カルボキシルビニルポリマー ０.１５％
キサンタンガム ０.２５％
ステアリン酸 １.５％
セチルアルコール ０.５％
ポリオキシエチレン(10)モノオレイン酸エステル １.０％
ステアリン酸モノグリセリド １.０％
エタノール ３.０％
香料 適量
精製水 残部
処方例３
セトステアリルアルコール ３.５％
スクワラン ２０.０％
ミツロウ ３.０％
ラノリン ５.０％
パラベン ０.３％
ポリオキシエチレン(20)ソノビタンモノパルミチン酸エステル ２.０％
ステアリン酸モノグリセリド ２.０％
エクトイン ０.２％
ビタミンＡ ２.０％
香料 適量
精製水 残部
処方例４
タルク ３.０％
二酸化チタン ５.０％
ベンガラ ０.５％
黄酸化鉄 １.４％
黒酸化鉄 １.０％
モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン ０.９％
トリエタノールアミン １.０％
プロピレングリコール ５.０％
エクトイン ０.５％
ステアリン酸 ２.２％
イソヘキサデシルアルコール ７.０％
ステアリン酸モノグリセリド ２.０％
ラノリン ２.０％
パラフィン ８.０％
パラベン 適量
香料 適量
【図面の簡単な説明】
【図１】培養ヒトケラチノサイトの乾燥（気相暴露）によるフィラグリンタンパク質レベルの経時的変化を示すグラフである。試行ｎ＝４〜５における平均±ＳＥＭ値で表示している。なお**はｐ＜０.０１を意味する。
【図２】培養ヒトケラチノサイトの乾燥（気相暴露）によるフィラグリン遺伝子の経時的な発現レベルの変化を示すグラフである。試行ｎ＝４〜６における、平均±ＳＥＭ値で表示している。なお、**はｐ＜０.０１を、*はｐ＜０.０５を意味する。
【図３】培養ヒトケラチノサイトの乾燥によるフィラグリン遺伝子発現低下に対するエクトインの効果を示すグラフである。試行ｎ＝３における、平均±ＳＥＭ値により表示している。なお、**はｐ＜０.０１である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a cosmetic and a dermatological preparation, and more specifically to a cosmetic and a preparation for suppressing or repairing skin damage caused by drying.
[0002]
[Prior art]
Natural moisturizing factor (NMF) plays an important role in maintaining the stratum corneum moisture content (Blank IHJI. Dermatol., 18, 433 (1952), Blank IHJI. Dermatol., 21, 259 (1953)). The amino acid that is the main component of NMF has been reported to be produced by the degradation of filaggrin protein derived from keratohyalin granules (Scott IR et al. Biochem Biophys. Acta., 719, 110-117 (1982), Horii. I. et al., J. Dermatol., 10, 25-33 (1983)). Filaggrin is a protein composed of 317 amino acids. Since it has become clear that the amino acid that is the main component of NMF is derived from filaggrin, research on the relationship between fibrin and the pathological condition exhibiting dry skin has been underway. In recent years, amino acids in the stratum corneum have decreased in dry skin such as senile xeroderma and atopic disease (Horii I. et al., Br. J. Dermatol., 121, 587-592 (1989). , Tanaka M. et al., Br. J. Dermatol., 139, 618-621 (1998)) and reduced expression of filaggrin (Tezuka T. et al., Dermatology, 188, 21-24). (1994), Seguchi T, et al., Arch. Dermatol. Res. 288, 442-446, (1996)). In addition, it is well known that skin troubles such as rough skin are caused by a dry environment.
[0003]
Against this background, FR2 777 185-A1 proposes a composition for treating wrinkles in which a substance that stimulates filaggrin synthesis, which advantageously acts to regulate water retention capacity, is combined with other active substances. Yes. However, there is no description as to what kind of substance specifically stimulates filaggrin synthesis. Japanese Patent Laid-Open No. 2000-26272 discloses that a proteolytic product derived from white lupine [or Lupinus albus ] seed powder increases human keratinocyte filaggrin mRNA and increases the thickness of the stratum corneum. There is a description that there is an effect of increasing the. Furthermore, in WO99 / 47117, a composition containing a vitamin B3 compound acts as a humectant and increases the level of skin protein selected from filaggrin, keratin and invocrine, and has the ability to adsorb or absorb moisture into the stratum corneum. It is described to increase.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
As described above, substances that increase the production of filaggrin and increase the thickness of the stratum corneum or increase the ability of water to be absorbed into the stratum corneum have been proposed. However, it would still be desirable to provide substances or compounds that are involved in the production of filaggrin and that are effective from a broader perspective of maintaining a healthy skin condition.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
As a result of examining factors involved in drying and stratum corneum water content in human keratinocytes, the present inventors have found that the level of filaggrin protein and the expression of the gene are reduced by drying.
[0006]
Furthermore, when a specific cultured human keratinocyte was exposed to a gas phase, the expression level of filaggrin gene was significantly decreased, and this phenomenon was found to correlate with the above-mentioned skin damage caused by drying. On the other hand, ectoin, a specific substance that can prevent the decrease in the expression level of filaggrin gene due to gas-phase exposure in a culture system using the cultured human keratinocytes, can actually suppress or repair the above-mentioned skin damage caused by drying. I found it.
[0007]
The present invention is based on such knowledge.
[0008]
Therefore, according to the present invention, a preparation for suppressing or repairing the decrease in the expression of the filaggrin gene containing ectoine as an active ingredient is provided.
[0009]
DESCRIPTION OF PREFERRED EMBODIMENTS OF THE INVENTION
Ectoine, which is an active ingredient of the preparation of the present invention, has the following formula:
[0010]
[Chemical 1]

[0011]
And are known as compounds that accumulate in certain bacteria to regulate osmotic pressure. As long as the purpose of the present invention is met, ectoine can be used regardless of origin, production method or purity.
[0012]
In addition to the above ectoine, the preparation of the present invention may contain an active ingredient or excipient used in cosmetics and / or dermatological preparations. Other active ingredients that meet the object of the present invention include betaines other than ectoine and polyols. Such betaines may be any compound as long as they do not adversely affect ectoine, betaine (also referred to as glycine betaine) and its derivatives, and the corresponding sultaine (the betaine carboxyl And zwitterionic compounds (which are replaced by sulfo). Typical of such derivatives are one to three of the betaine N-methyl groups interrupted by other branched or saturated hydrocarbon chains or amide bonds represented by the following formula: The hydrocarbon chain (wherein m and n are each independently an integer of 1 to 30)
[0013]
[Chemical 2]

[0014]
Or the length of the hydrocarbon chain between the quaternary ammonium group and the carboxyl group or sulfo group varies (for example, 2 to 6 carbon atoms), or a betaine residue is pendant. A polymer having a plurality of groups may be mentioned. Specific examples of such derivatives include, but are not limited to, γ-butyrobetaine, decylbetaine, laurylbetaine, myristylbetaine, cetylbetaine, stearylbetaine, behenylbetaine, lauramidopropylbetaine, Examples include amidopropyl betaine, palmitamidopropyl betaine, γ-butyrobetaine, lauryl sultain, cocoyl lutein, poly (methacryloyloxyethyl betaine), poly (methacryloyloxyethyl betaine-co-2-hydroxyethyl methacrylic acid), etc. be able to.
[0015]
On the other hand, examples of polyols include compounds having two or more hydroxyl groups per molecule and derivatives thereof, such as ethylene oxide adducts of polyols. Specific examples of such polyols include glycerin, 1,3-propanediol, 2-methyl-1,3-propanediol, 1,4-butanediol, 1,5-pentanediol, diglycerin, erythritol. , Gluconic acid, 1,2,6-hexanetriol, inositol, lactitol, maltitol, mannitol, xylitol and the like.
[0016]
In the preparation of the present invention, ectoine can be 0.0001 to 20% by weight, preferably 0.001 to 0.1% by weight, based on the total weight of the preparation. In any case, based on the results obtained according to the test method or evaluation method described below for each specific usage mode, and further considering the results of actual use by volunteers etc. on a trial basis, specialized in the field of dermatology The home will be able to easily determine the optimal amount of use for the active ingredient to be effective.
[0017]
The preparation of the present invention refers to those applied to cosmetics, pharmaceuticals, quasi-drugs, and outer skins, and therefore the dosage forms are aqueous solutions, solubilization systems, emulsification systems, powder systems, gel systems, ointment systems. , Cream, water-oil two-layer system, water-oil-powder three-layer system, and the like. That is, if it is a basic cosmetic, it can be widely applied to the forms of face wash, lotion, milky lotion, cream, gel, essence (beauty liquid), pack, mask and the like in the above various dosage forms. If it is makeup cosmetics, it can be widely applied to forms such as foundations. Furthermore, if it is a pharmaceutical or a quasi-drug, it can be widely applied to various forms such as an ointment. And the form which this invention external preparation can take is not limited to these dosage forms and forms.
[0018]
The components used to produce the preparation can be selected according to these dosage forms and forms, and such components or additives include liquid fats, solid fats, waxes, ester oils, carbonized Hydrogen oil, silicone resin, silicone, anionic surfactant, anionic surfactant, cationic surfactant, amphoteric surfactant, nonionic surfactant, lower alcohol, sterols, water-soluble polymer , Sequestering agents, neutralizing agents, pH adjusting agents, antibacterial agents, fragrances, pigments and the like.
[0019]
The preparations described above can be directly applied to volunteers to confirm their efficacy, but prior to that, another aspect of the present invention is a substance on whether to suppress skin damage caused by drying. It can also be confirmed by the evaluation method.
[0020]
The human keratinocytes used in this evaluation method are any cells as long as they can significantly distinguish the fluctuations in the amount of filaggrin protein and gene expression by culturing in the presence and absence of the test substance, respectively. May be. However, preferably, a cultured cell line consisting of normal cells derived from human foreskin and mouse-derived 3T3 cells (ATCC CRL-1658) as feeder layers (supporting cells) can be conveniently used. In these cell lines, for example, 3T3 cells are cultured in an appropriate petri dish according to the method described in Rheinwald et al., Cell 6, 331-344 (1975), and treated with mitomycin C, thus forming a feeder cell layer. Then, human normal keratinocytes are seeded on the layer and cultured by culturing at 37 ° C. in a 95% air-5% carbon gas environment, for example.
[0021]
In general, it is preferable that the system (control) cultured in the absence of the preparation is treated in parallel with the culture in the presence of the preparation (evaluation system).
[0022]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be further described with reference to specific examples, but these examples are not intended to limit the present invention. The percentages used in the description are by weight unless otherwise specified.
Measurement test of filaggrin gene expression:
(1) Cultured cells Normal keratinocytes derived from human foreskin and 3T3 cells derived from mice were used.
(2) The culture medium for cultured cells contains DMEM-Ham'sF12 (3: 1), hydrocortisone, cholera enterotoxin, epidermal growth factor, insulin and 10% FBS.
(3) Culture
Culturing is carried out according to the method of Rheinwald et al., Cell 6, 331-344 (1975).
[0023]
The outline is shown below. 3T3 cells were treated with mitomycin C and used as a feeder layer (supporting cells). 1 × 10 ⁵ human normal keratinocytes were seeded on 3T3 cells treated with mitomycin C, and cultured in a 95% air-5% carbon gas environment at 37 ° C. until confluent. Next, gas phase exposure was performed by removing the culture supernatant. Each sample was added 30 minutes before the gas phase exposure and cultured at 37 ° C. A sample to which no sample was added was used as a control. Gas phase exposure was performed at 37 ° C. for 0-10 hours.
(4) Measurement of filaggrin protein amount After adding a sample to the above culture system, protein was extracted from cells exposed to gas phase for a certain period of time. The filaggrin protein or filaggrin protein precursor (profilaggrin) was quantified by Western blotting according to a conventional method. The outline is shown below. The extracted protein was electrophoresed on SDS-PAGE, transferred to a PDVF membrane, and an antigen-antibody reaction was performed using a mouse monoclonal antibody (anti-HUMAN Filaggrin MAb) specific for filaggrin as a primary antibody. Thereafter, an antigen-antibody reaction was performed using an antibody labeled with Horseradish peroxidase or Alkaline phosphatase as the secondary antibody. After the reaction, the measurement was performed using a color development method or a chemical color development method in which an enzyme reaction is performed using a chromogenic substrate corresponding to the labeled enzyme. Bands were quantified using NIH images (analysis program).
(5) Measurement of filaggrin gene expression level RNA was extracted using AGPC from cells exposed to the gas phase for a certain period of time after each test substance was added to the culture system. RT-PCR was performed on these RNAs as follows. Primers specific for filaggrin were prepared based on the base sequence of filaggrin reported by McKinley-Grant LJ et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 4848-4852 (1989). In RT-PCR, mRNA was converted to cDNA once with reverse transcriptase, and was used as a template for polymerase reaction (known reaction) using the above primers, and filaggrin mRNA was measured. The PCR product was electrophoresed on an agarose gel, and after the gel was immersed in an ethidium bromide solution, DNA was measured. The DNA band was quantified using an NIH image (analysis program). Correction was performed using aldehyde glycerin-3-phosphate dehydrogenase (G3PDH).
(6) Results (6-1) FIG. 1 shows the change over time in the amount of filaggrin protein when human keratinocytes are exposed to the gas phase. From the figure, it is clear that human keratinocyte filaggrin protein is significantly reduced by drying.
(6-2) FIG. 2 shows temporal changes in the expression level of filaggrin gene in human keratinocytes due to the gas phase exposure. From the figure, it is clear that filaggrin gene expression in human keratinocytes is significantly reduced by drying. Further, the decrease occurs in a relatively short time.
(6-3) The effect of suppressing damage to the amount of filaggrin protein due to gas phase exposure (dry stimulation) in human keratinocytes is based on the amount of filaggrin protein depending on whether ectoine is used or not used as a sample to be added to the culture system. evaluated. The results are shown in FIG.
(6-4) The effect of suppressing injury that reduces filaggrin gene expression due to gas phase exposure (dry stimulation) in human keratinocytes was evaluated by the filaggrin gene expression level depending on whether or not ectoine was added to the culture system. The results are shown in FIG.
[0024]
From these figures, the preparation according to the present invention shows the decrease in the amount of stratum corneum moisture that human keratinocytes undergo due to drying, the decrease in the amount of filaggrin protein and the gene expression that are the raw materials of amino acids essential for retaining stratum corneum moisture. It is confirmed that can be significantly suppressed. Thus, when the preparation of the present invention is applied to the skin, a healthy skin state is maintained even in a dry environment.
[0025]
Hereafter, the formulation example of the preparation agent according to this invention is shown.
Formulation Example 1
Behenyl alcohol 1.0%
Stearyl alcohol 2.0%
Squalane 10.0%
Pentaerystyl tetraoctanoate 5.0%
Lanolin 5.0%
Paraben 0.3%
Polyoxyethylene behenyl alcohol 1.0%
Glycerin 10.0%
Ectoin 0.1%
Sodium acetyl hyaluronate 0.1%
Purified water balance example 2
Liquid paraffin 10.0%
Octamethylcyclotetrasiloxane 5.0%
1,3-butyl glycol 10.0%
Glycerol 3.0%
Ascorbic acid derivative 3.0%
Ectoin 0.5%
Carboxy vinyl polymer 0.15%
Xanthan gum 0.25%
Stearic acid 1.5%
Cetyl alcohol 0.5%
Polyoxyethylene (10) monooleate 1.0%
Stearic acid monoglyceride 1.0%
Ethanol 3.0%
Fragrance Appropriate amount of purified water The remaining formulation example 3
Cetostearyl alcohol 3.5%
Squalane 20.0%
Beeslow 3.0%
Lanolin 5.0%
Paraben 0.3%
Polyoxyethylene (20) sonobitan monopalmitate 2.0%
Stearic acid monoglyceride 2.0%
Ectoin 0.2%
Vitamin A 2.0%
Fragrance Appropriate amount of purified water The remaining formulation example 4
Talc 3.0%
Titanium dioxide 5.0%
Bengala 0.5%
Yellow iron oxide 1.4%
Black iron oxide 1.0%
Polyoxyethylene sorbitan monostearate 0.9%
Triethanolamine 1.0%
Propylene glycol 5.0%
Ectoin 0.5%
Stearic acid 2.2%
Isohexadecyl alcohol 7.0%
Stearic acid monoglyceride 2.0%
Lanolin 2.0%
Paraffin 8.0%
Paraben appropriate amount perfume appropriate amount [Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a graph showing changes in filaggrin protein level over time due to drying (gas phase exposure) of cultured human keratinocytes. The average ± SEM value in trial n = 4-5 is displayed. ** means p <0.01.
FIG. 2 is a graph showing changes in the expression level of filaggrin gene over time due to drying (gas phase exposure) of cultured human keratinocytes. The average ± SEM value in trial n = 4-6 is displayed. In addition, ** means p <0.01, and * means p <0.05.
FIG. 3 is a graph showing the effect of ectoine on the decrease in filaggrin gene expression due to drying of cultured human keratinocytes. Displayed by mean ± SEM value in trial n = 3. Note that ** is p <0.01.

Claims (2)

A preparation comprising ectoine as an active ingredient for suppressing or repairing a decrease in filaggrin gene expression caused by dry skin .   The preparation according to claim 1, wherein the expression of the filaggrin gene is an event in human keratinocytes.

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