JP4748707B2

JP4748707B2 - New saponin compounds

Info

Publication number: JP4748707B2
Application number: JP2005055341A
Authority: JP
Inventors: 謡子小林; 秀樹増田; 英夫木越; 俊明照屋; 啓子小林
Original assignee: Ogawa and Co Ltd
Current assignee: Ogawa and Co Ltd
Priority date: 2005-03-01
Filing date: 2005-03-01
Publication date: 2011-08-17
Anticipated expiration: 2025-03-01
Also published as: JP2006241008A

Description

本発明は新規サポニン化合物に関し、より詳しくは茶葉に含まれるサポニン化合物に関する。 The present invention relates to a novel saponin compound, and more particularly to a saponin compound contained in tea leaves.

茶のサポニンに関しては、その種子については「テアサポニン（ｔｈｅａｓａｐｏｎｉｎ）Ｅ１、Ｅ２」（非特許文献１参照）および「アッサムサポニン（ａｓｓａｍｓａｐｏｎｉｎ）Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ」（非特許文献２、非特許文献３参照）が報告されている。
また、茶の根については、「ＴＲ−サポニン（ＴＲ−Ｓａｐｏｎｉｎ）Ａ、Ｂ、Ｃ」が報告されている（非特許文献４参照）。 Regarding tea saponins, the seeds are “theasaponins E1, E2” (see Non-Patent Document 1) and “assamsaponins A, B, C, D, E, F, G, H, I. (See Non-Patent Document 2 and Non-Patent Document 3).
As for tea roots, "TR-Saponin A, B, C" has been reported (see Non-Patent Document 4).

茶葉サポニンは、茶葉中の量が極微量であることから、以前は、正確な化学分析が困難であったため詳しいことは知られていなかったが、分析手法の向上とあいまって最近は盛んに研究が進められ、「テアサポニン（ｔｈｅａｓａｐｏｎｉｎ）Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４」（特許文献１および非特許文献５参照）、および「アッサムサポニン（ａｓｓａｍｓａｐｏｎｉｎ）Ｊ」（非特許文献３参照）が、それぞれ報告されている。
茶葉サポニンの有用性についても研究が進められ、茶葉抽出サポニン類の抗炎症作用および抗アレルギー作用、さらに抗肥満作用が確認されている（それぞれ特許文献２、特許文献３参照）。
特許第３４４１４８８号公報特開平７−６１９９３号公報特開平８−５９４９４号公報Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，４６，１９０１（１９９８）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，４７，１７５９（１９９９）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，４８，１７２０（２０００）Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５３，９４１（２０００）日本生薬学会第４２回年会講演要旨集、Ｐ１２６（１９９５） The amount of tea saponin in tea leaves was extremely small, so it was not known in detail before because accurate chemical analysis was difficult. "Theasaponin B1, B2, B3, B4" (refer to Patent Document 1 and Non-patent Document 5) and "assamsaponin J" (refer to Non-Patent Document 3) are reported respectively. ing.
Studies have also been conducted on the usefulness of tea leaf saponins, and anti-inflammatory and anti-allergic effects and further anti-obesity effects of tea leaf extract saponins have been confirmed (see Patent Document 2 and Patent Document 3 respectively).
Japanese Patent No. 3441488 Japanese Patent Application Laid-Open No. 7-61993 JP-A-8-59494 Chem. Pharm. Bull. 46, 1901 (1998) Chem. Pharm. Bull. 47, 1759 (1999) Chem. Pharm. Bull. 48, 1720 (2000) Phytochemistry, 53, 941 (2000) Abstracts of the 42nd Annual Meeting of the Japanese Biopharmaceutical Society, P126 (1995)

本発明の目的は、新規サポニン化合物の提供、すなわち茶葉より単離される新規サポニン化合物を提供することにある。本発明の他の目的は、抗炎症、抗アレルギー、抗肥満作用を有し、医薬品として有用な新規サポニン化合物を提供することにある。本発明のさらに他の目的および利点は以下の説明から明らかになろう。 An object of the present invention is to provide a novel saponin compound, that is, to provide a novel saponin compound isolated from tea leaves. Another object of the present invention is to provide a novel saponin compound having anti-inflammatory, anti-allergic and anti-obesity effects and useful as a pharmaceutical product. Still other objects and advantages of the present invention will become apparent from the following description.

本発明によれば、本発明の上記目的および利点は、下記の構造式（１）〜（３）で表される新規サポニン化合物によって達成される。 According to the present invention, the above objects and advantages of the present invention are achieved by the novel saponin compounds represented by the following structural formulas (1) to (3).

上記構造式（１）で表される本発明の新規サポニン化合物（以下「化合物１」という）
は、分子式がＣ₆₃Ｈ₉₂Ｏ₂₆、分子量が１２６４であり、以下の物性を示す。
１）比旋光度[α]_D ²⁵＝＋９.０°（Ｃ＝０.３５，ＭｅＯＨ）
２）赤外吸収スペクトル〔ＩＲ（ｎｅａｔ）〕３４２２，２９６１，１６８５，１６３６，１３８８，１２０４，１０７８，１０４７ｃｍ^-1
３）紫外線吸収スペクトル〔ＵＶ（ＭｅＯＨ）〕２０３ｎｍ（ｌｏｇε＝４.３），２１６ｎｍ（ショルダー），２７６ｎｍ（ｌｏｇε＝４.３）
４）エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩＭＳ）［ｍ／ｚ１２８７．５７６０(Ｍ＋Ｎａ)⁺，Δ−１.４ｍｍｕ］ The novel saponin compound of the present invention represented by the structural formula (1) (hereinafter referred to as “compound 1”)
Has a molecular formula of C ₆₃ H ₉₂ O ₂₆ and a molecular weight of 1264, and exhibits the following physical properties.
1) Specific rotation [α] _D ²⁵ = + 9.0 ° (C = 0.35, MeOH)
2) Infrared absorption spectrum [IR (neat)] 3422, 2961, 1685, 1636, 1388, 1204, 1078, 1047 cm ⁻¹
3) Ultraviolet absorption spectrum [UV (MeOH)] 203 nm (log ε = 4.3), 216 nm (shoulder), 276 nm (log ε = 4.3)
4) Electrospray ionization mass spectrometry (ESIMS) [m / z 1287.5760 (M + Na) ⁺ , Δ-1.4 mmu]

５）核磁気共鳴スペクトル〔ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）〕
¹Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ）
δ：７.７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６.０Ｈｚ，Ｃｉｎ−γ），７.６１（２Ｈ，ｍ，Ｃｉｎ−２’，６’），７.４０（３Ｈ，ｍ，Ｃｉｎ−３’，４’，５’），６.５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６.０Ｈｚ，Ｃｉｎ−β），５.６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０.０Ｈｚ，Ｈ−２１），５.３２（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−１２），５.０３（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｇａｌ−１），４.９２（１Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄｗｉｔｈｗａｔｅｒ，Ａｒａ−１），４.５４（１Ｈ，ｂｒｄ，ＧｌｃＡ−１），４.５０（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｘｙｌ−１），４.１２（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−１６），４.００−３.１５（ｓｕｇａｒｓ），３.９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０.０Ｈｚ，Ｈ−２２），３.９０（１Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄｗｉｔｈｓｕｇａｒｓ，Ｈ−２８ａ），３.７５（１Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄｗｉｔｈｓｕｇａｒｓ，Ｈ−２８ｂ），３.１９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３），２.６５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３.５，１３.９Ｈｚ，Ｈ−１９ａ），２.５２（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｈ−１８），２.０７（３Ｈ，ｓ，２８−ＣＨ ₃），１.９１（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１１），１.８２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２ａ），１.７９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５ａ），１.７３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２ｂ），１.６６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−９），１.６４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１ａ），１.６２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７ａ），１.５８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６ａ），１.４６（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２７），１.４２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６ｂ），１.４２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５ｂ），１.３７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７ｂ），１.１８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１９ｂ），１.０８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２３），１.０８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３０），１.０１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１ｂ），０.９７（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２５），０.９３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６），０.８８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２４），０.８８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２９），０.７８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５）． 5) Nuclear magnetic resonance spectrum [NMR (CD ₃ OD)]
¹ H-NMR (600 MHz)
δ: 7.70 (1H, d, J = 16.0 Hz, Cin−γ), 7.61 (2H, m, Cin-2 ′, 6 ′), 7.40 (3H, m, Cin−3 ′) , 4 ′, 5 ′), 6.59 (1H, d, J = 16.0 Hz, Cin−β), 5.66 (1H, d, J = 10.0 Hz, H-21), 5.32 ( 1H, brs, H-12), 5.03 (1H, brd, Gal-1), 4.92 (1H, overlapped with water, Ara-1), 4.54 (1H, brd, GlcA- 1), 4.50 (1H, br d, Xyl-1), 4.12 (1H, br s, H-16), 4.00-3.15 (sugars), 3.98 (1H, d, J = 10.0 Hz, H-22), 3.90 (1H, overlapped with sugars, H-28a), 3.75 (1H, overlaplap) ed with sugars, H-28b), 3.19 (1H, m, H-3), 2.65 (1H, dd, J = 13.5, 13.9 Hz, H-19a), 2.52 (1H) , br d, H-18) , 2.07 (3H, s, 28-C H 3), 1.91 (2H, m, H-11), 1.82 (1H, m, H-2a), 1.79 (1H, m, H-15a), 1.73 (1H, m, H-2b), 1.66 (1H, m, H-9), 1.64 (1H, m, H-1a) ), 1.62 (1H, m, H-7a), 1.58 (1H, m, H-6a), 1.46 (3H, s, H-27), 1.42 (1H, m, H -6b), 1.42 (1H, m, H-15b), 1.37 (1H, m, H-7b), 1.18 (1H, m, H-19b), 1.08 (3H, s) , H-23), 1.08 (3H, s, H-30), 1 0.01 (1H, m, H-1b), 0.97 (3H, s, H-25), 0.93 (3H, s, H-26), 0.88 (3H, s, H-24) , 0.88 (3H, s, H-29), 0.78 (1H, m, H-5).

¹³Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）
δ：１７３.０（２８−Ａｃ），１６９.８（Ｃｉｎ−α），１４６.３（Ｃｉｎ−γ），１３６.３（Ｃ−１’），１３１.８（Ｃ−４’），１３０.４（Ｃ−３’，５’），１２９.６（Ｃ−２’，６’），１２０.１（Ｃｉｎ−β），２１.２（２８−ＣＨ ₃）． ¹³ C-NMR (100 MHz)
δ: 173.0 (28-Ac), 169.8 (Cin-α), 146.3 (Cin-γ), 136.3 (C-1 ′), 131.8 (C-4 ′), 130 .4 (C-3 ′, 5 ′), 129.6 (C-2 ′, 6 ′), 120.1 (Cin-β), 21.2 (28-C H ₃ ).

上記構造式（２）で表される本発明の新規サポニン化合物（以下「化合物２」という）は、分子式がＣ₆₃Ｈ₉₂Ｏ₂₆、分子量が１２６４であり、以下の物性を示す。
１）比旋光度[α]_D ²⁵＝−７.４°（Ｃ＝０.５０，ＭｅＯＨ）
２）赤外吸収スペクトル〔ＩＲ（ｎｅａｔ）〕３４１９，２９５１，１４５８，１７１７，１６３５，１３７４，１２５７，１０７８，１０４６ｃｍ^-1
３）紫外線吸収スペクトル〔ＵＶ（ＭｅＯＨ）〕２０３ｎｍ（ｌｏｇε＝４.３），２１６ｎｍ（ショルダー），２７８ｎｍ（ｌｏｇε＝４.３）
４）エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩＭＳ）［ｍ／ｚ１２８７．５７４９(Ｍ＋Ｎａ)⁺，Δ−２.５ｍｍｕ］ The novel saponin compound of the present invention represented by the structural formula (2) (hereinafter referred to as “compound 2”) has a molecular formula of C ₆₃ H ₉₂ O ₂₆ and a molecular weight of 1264, and exhibits the following physical properties.
1) Specific rotation [α] _D ²⁵ = −7.4 ° (C = 0.50, MeOH)
2) Infrared absorption spectrum [IR (neat)] 3419, 2951, 1458, 1717, 1635, 1374, 1257, 1078, 1046 cm ⁻¹
3) Ultraviolet absorption spectrum [UV (MeOH)] 203 nm (log ε = 4.3), 216 nm (shoulder), 278 nm (log ε = 4.3)
4) Electrospray ionization mass spectrometry (ESIMS) [m / z 1287.5749 (M + Na) ⁺ , Δ−2.5 mmu]

５）核磁気共鳴スペクトル〔ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）〕
¹Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）
δ：７.７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６.０Ｈｚ，Ｃｉｎ−γ），７.５９（２Ｈ，ｍ，Ｃｉｎ−２’，６’），７.４０（３Ｈ，ｍ，Ｃｉｎ−３’，４’，５’），６.５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６.０Ｈｚ，Ｃｉｎ−β），５.８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０.１Ｈｚ，Ｈ−２１），５.５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０.１Ｈｚ，Ｈ−２２），５.３８（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−１２），５.０３（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｇａｌ−１），４.９３（１Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄｗｉｔｈｗａｔｅｒ，Ａｒａ−１），４.５４（１Ｈ，ｂｒｄ，ＧｌｃＡ−１），４.５１（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｘｙｌ−１），４.０２（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−１６），４.００−３.１５（ｓｕｇａｒｓ），３.２８（１Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄｗｉｔｈｓｏｌｖｅｎｔ，Ｈ−２８ａ），３.１８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３），２.９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１.２Ｈｚ，Ｈ−２８ｂ），２.６７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１９ａ），２.６４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１８），１.９２（３Ｈ，ｓ，２１−ＣＨ ₃），１.９１（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１１），１.７９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２ａ），１.７１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２ｂ），１.７０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５ａ），１.６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−９），１.６４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１ａ），１.６４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７ａ），１.５８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６ａ），１.４８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２７），１.４０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６ｂ），１.３５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５ｂ），１.３４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７ｂ），１.１９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１９ｂ），１.０８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２３），１.０６（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３０），１.０１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１ｂ），０.９７（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２５），０.９３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６），０.８８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２４），０.８７（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２９），０.７９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５）． 5) Nuclear magnetic resonance spectrum [NMR (CD ₃ OD)]
¹ H-NMR (500 MHz)
δ: 7.73 (1H, d, J = 16.0 Hz, Cin−γ), 7.59 (2H, m, Cin−2 ′, 6 ′), 7.40 (3H, m, Cin−3 ′) , 4 ′, 5 ′), 6.50 (1H, d, J = 16.0 Hz, Cin−β), 5.89 (1H, d, J = 10.1 Hz, H-21), 5.54 ( 1H, d, J = 10.1 Hz, H-22), 5.38 (1H, brs, H-12), 5.03 (1H, brd, Gal-1), 4.93 (1H, overwrapped) with water, Ara-1), 4.54 (1H, brd, GlcA-1), 4.51 (1H, brd, Xyl-1), 4.02 (1H, brs, H-16), 4.00-3.15 (sugars), 3.28 (1H, overlapped with solvent, H-28a), 3.18 (1H, m, H-3), 2.98 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-28b), 2.67 (1H, m, H-19a), 2.64 (1H, m, H-18), 1.92 (3H , S, 21-C H ₃ ), 1.91 (2H, m, H-11), 1.79 (1H, m, H-2a), 1.71 (1H, m, H-2b), 1 .70 (1H, m, H-15a), 1.68 (1H, m, H-9), 1.64 (1H, m, H-1a), 1.64 (1H, m, H-7a) , 1.58 (1H, m, H-6a), 1.48 (3H, s, H-27), 1.40 (1H, m, H-6b), 1.35 (1H, m, H- 15b), 1.34 (1H, m, H-7b), 1.19 (1H, m, H-19b), 1.08 (3H, s, H-23), 1.06 (3H, s, H-30), 1.01 (1H, m, H-1b), 0.97 (3H, s, H- 5), 0.93 (3H, s, H-26), 0.88 (3H, s, H-24), 0.87 (3H, s, H-29), 0.79 (1H, m, H-5).

¹³Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）
δ：１７３.５（２１−Ａｃ），１６９.４（Ｃｉｎ−α），１４７.２（Ｃｉｎ−γ），１３６.２（Ｃ−１’），１３２.０（Ｃ−４’），１３０.４（Ｃ−３’，５’），１２９.７（Ｃ−２’，６’），１１９.２（Ｃｉｎ−β），２１.４（２１−ＣＨ ₃）． ¹³ C-NMR (100 MHz)
δ: 173.5 (21-Ac), 169.4 (Cin-α), 147.2 (Cin-γ), 136.2 (C-1 ′), 132.0 (C-4 ′), 130 .4 (C-3 ′, 5 ′), 129.7 (C-2 ′, 6 ′), 119.2 (Cin-β), 21.4 (21-C H ₃ ).

上記式（３）で表される本発明の新規サポニン化合物（以下「化合物３」という）は、分子式がＣ₆₆Ｈ₉₆Ｏ₂₆、分子量が１３０４であり、以下の物性を示す。
１）比旋光度[α]_D ²⁵＝−９.１°（Ｃ＝０.３９，ＭｅＯＨ）
２）赤外吸収スペクトル〔ＩＲ（ｎｅａｔ）〕３４１１，２９２７，１６８３，１６３４，１３７７，１１６０，１０７９，１０４６ｃｍ^-1
３）紫外線吸収スペクトル〔ＵＶ（ＭｅＯＨ）〕２０３ｎｍ（ｌｏｇε＝４.４），２１６ｎｍ（ショルダー），２７９ｎｍ（ｌｏｇε＝４.３）
４）エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩＭＳ）［ｍ／ｚ１３２７．６０９６(Ｍ＋Ｎａ）⁺，Δ＋０.８ｍｍｕ］ The novel saponin compound of the present invention represented by the above formula (3) (hereinafter referred to as “compound 3”) has a molecular formula of C ₆₆ H ₉₆ O ₂₆ and a molecular weight of 1304, and exhibits the following physical properties.
1) Specific rotation [α] _D ²⁵ = −9.1 ° (C = 0.39, MeOH)
2) Infrared absorption spectrum [IR (neat)] 3411, 2927, 1683, 1634, 1377, 1160, 1079, 1046 cm ⁻¹
3) Ultraviolet absorption spectrum [UV (MeOH)] 203 nm (log ε = 4.4), 216 nm (shoulder), 279 nm (log ε = 4.3)
4) Electrospray ionization mass spectrometry (ESIMS) [m / z 1322.7609 (M + Na) ⁺ , Δ + 0.8 mmu]

５）核磁気共鳴スペクトル〔ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）〕
¹Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）
δ：７.６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６.０Ｈｚ，Ｃｉｎ−γ），７.５６（２Ｈ，ｍ，Ｃｉｎ−２’，６’），７.３９（３Ｈ，ｍ，Ｃｉｎ−３’，４’，５’），６.４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６.０Ｈｚ，Ｃｉｎ−β），６.００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０.１Ｈｚ，Ｈ−２１），５.９８（１Ｈ，ｑｑ，Ｊ＝１.４，７.２Ｈｚ，Ｈ−３”），５.５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０.１Ｈｚ，Ｈ−２２），５.３９（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−１２），５.０２（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｇａｌ−１），４.９２（１Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄｗｉｔｈｗａｔｅｒ，Ａｒａ−１），４.５４（１Ｈ，ｂｒｄ，ＧｌｃＡ−１），４.５１（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｘｙｌ−１），４.０３（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−１６），４.００−３.１５（ｓｕｇａｒｓ），３.２９（１Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄｗｉｔｈｓｏｌｖｅｎｔ，Ｈ−２８ａ），３.１８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３），２.９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１.２Ｈｚ，Ｈ−２８ｂ），２.６７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１８），２.６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１９ａ），１.９４（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１１），１.８１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２ａ），１.８１（３Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝１.４，７.２Ｈｚ，Ｈ−４”），１.７８（３Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−５”），１.７３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２ｂ），１.７１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５ａ），１.６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−９），１.６４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１ａ），１.６０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７ａ），１.５７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６ａ），１.５０（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２７），１.４１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６ｂ），１.３９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５ｂ），１.３４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７ｂ），１.２３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１９ｂ），１.０９（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３０），１.０８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２３），１.０１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１），０.９７（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２５），０.９４（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６），０.８９（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２９），０.８８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２４），０.７９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５）． 5) Nuclear magnetic resonance spectrum [NMR (CD ₃ OD)]
¹ H-NMR (500 MHz)
δ: 7.69 (1H, d, J = 16.0 Hz, Cin−γ), 7.56 (2H, m, Cin-2 ′, 6 ′), 7.39 (3H, m, Cin−3 ′) , 4 ′, 5 ′), 6.45 (1H, d, J = 16.0 Hz, Cin−β), 6.00 (1H, d, J = 10.1 Hz, H-21), 5.98 ( 1H, qq, J = 1.4, 7.2 Hz, H-3 ″), 5.58 (1H, d, J = 10.1 Hz, H-22), 5.39 (1H, br s, H− 12), 5.02 (1H, brd, Gal-1), 4.92 (1H, overwrapped with water, Ara-1), 4.54 (1H, brd, GlcA-1), 4.51 ( 1H, brd, Xyl-1), 4.03 (1H, brs, H-16), 4.00-3.15 (sugars), 3.29 (1H, overwrapped with so Vent, H-28a), 3.18 (1H, m, H-3), 2.99 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-28b), 2.67 (1H, m, H-18) ), 2.68 (1H, m, H-19a), 1.94 (2H, m, H-11), 1.81 (1H, m, H-2a), 1.81 (3H, dq, J = 1.4, 7.2 Hz, H-4 "), 1.78 (3H, brs, H-5"), 1.73 (1H, m, H-2b), 1.71 (1H, m , H-15a), 1.68 (1H, m, H-9), 1.64 (1H, m, H-1a), 1.60 (1H, m, H-7a), 1.57 (1H , M, H-6a), 1.50 (3H, s, H-27), 1.41 (1H, m, H-6b), 1.39 (1H, m, H-15b), 1.34 (1H, m, H-7b), 1.23 (1H, m, H-19b), 1.09 3H, s, H-30), 1.08 (3H, s, H-23), 1.01 (1H, m, H-1), 0.97 (3H, s, H-25), 0.9. 94 (3H, s, H-26), 0.89 (3H, s, H-29), 0.88 (3H, s, H-24), 0.79 (1H, m, H-5).

¹³Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）
δ：１６９．９（Ｃ−１”），１６９.４（Ｃｉｎ−α），１４７.２（Ｃｉｎ−γ），１３９.０（Ｃ−３”），１３６.２（Ｃ−１’），１３１.９（Ｃ−４’），１３０.４（Ｃ−３’，５’），１２９.８（Ｃ−２”），１２９.６（Ｃ−２’，６’），１１９.２（Ｃｉｎ−β），２１.２（Ｃ−５”），１６.４（Ｃ−４”）． ¹³ C-NMR (100 MHz)
δ: 169.9 (C-1 ″), 169.4 (Cin-α), 147.2 (Cin-γ), 139.0 (C-3 ″), 136.2 (C-1 ′), 131.9 (C-4 ′), 130.4 (C-3 ′, 5 ′), 129.8 (C-2 ″), 129.6 (C-2 ′, 6 ′), 119.2 ( Cin-β), 21.2 (C-5 ″), 16.4 (C-4 ″).

本発明の新規サポニン化合物１〜３は、古来より日常的に飲用されている茶葉から抽出するものであり人体にとって安全性が高い。
従来の茶葉サポニン類を含有する茶葉抽出物と同様に、抗炎症、抗アレルギー、抗肥満効果を有するので健康食品や医薬品などその適用分野は大きい。
また、同一分子内に親水基（水に馴染む糖の部分）と疎水基（水を嫌うアグリコン）の部分を持つため界面活性作用を有し、食品添加剤としても使用できる。 The novel saponin compounds 1 to 3 of the present invention are extracted from tea leaves that have been drunk daily since ancient times, and are highly safe for the human body.
Similar to the tea leaf extract containing conventional tea leaf saponins, it has anti-inflammatory, anti-allergic and anti-obesity effects, so its application fields such as health foods and pharmaceuticals are large.
In addition, since it has a hydrophilic group (a sugar part that conforms to water) and a hydrophobic group (aglycone that dislikes water) in the same molecule, it has a surface active action and can be used as a food additive.

本発明の新規サポニン化合物１〜３は、生または蒸熱した茶あるいは飲用に加工した茶葉（煎茶など）を、低級アルコール類あるいは含水低級アルコールを用いて抽出し、抽出エキスを各種クロマトグラフィーに付し、次いで高速液体クロマトグラフィーにより分離精製することにより得ることができる。
低級アルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールが挙げられる。 The novel saponin compounds 1 to 3 of the present invention are obtained by extracting fresh or steamed tea or tea leaves (such as sencha) processed for drinking using lower alcohols or hydrous lower alcohols, and subjecting the extract to various chromatography. Then, it can be obtained by separation and purification by high performance liquid chromatography.
Examples of the lower alcohol include methanol, ethanol, propanol, and butanol.

茶葉サポニンの製造法に係る特開平８−３３３３８０号公報記載の方法に準じて、以下のとおり茶葉サポニン粗抽出物を調製した。
茶葉１００ｇに対し９０℃熱湯を１０倍量加え、１５分間抽出した。この操作を３回繰り返した後、茶葉にエタノール５００ｍｌと蒸留水を加え５０％エタノール濃度になるように調製した。
このまま室温で約１日間抽出し、ろ過した後、抽出液に水不溶性ポリビニルポリピロリドン（ＢＡＳＦ社製「ダイバガンＦ」（商品名））を１６ｇ加え１４時間攪拌処理した。
ポリビニルポリピロリドンをろ過除去後、処理液を減圧濃縮し、さらに凍結乾燥にかけ薄緑色の粉末１.１ｇを得た。この粉末１ｇを浸水型逆相系充填剤ＯＤＳ（ナカライテスク株式会社製「Ｃｏｓｍｏｓｉｌ７５Ｃ１８−ＯＰＮ」）を用いて４０％メタノール画分と８０％メタノール画分とに分け、８０％メタノール画分を濃縮して茶葉サポニン粗抽出物０.４３ｇを得た。 According to the method described in JP-A-8-333380 relating to the method for producing tea leaf saponin, a tea leaf saponin crude extract was prepared as follows.
Ten times the amount of 90 ° C. hot water was added to 100 g of tea leaves and extracted for 15 minutes. After repeating this operation three times, 500 ml of ethanol and distilled water were added to the tea leaves to prepare a 50% ethanol concentration.
The mixture was extracted at room temperature for about 1 day and filtered, and then 16 g of water-insoluble polyvinylpolypyrrolidone (“Daibagan F” (trade name) manufactured by BASF) was added to the extract and stirred for 14 hours.
After removing the polyvinyl polypyrrolidone by filtration, the treatment solution was concentrated under reduced pressure and further freeze-dried to obtain 1.1 g of a light green powder. 1 g of this powder was divided into a 40% methanol fraction and an 80% methanol fraction using a submerged reverse phase filler ODS (“Cosmosil 75 C18-OPN” manufactured by Nacalai Tesque Co., Ltd.). Concentration gave 0.43 g of a crude extract of tea leaf saponin.

この茶葉サポニン粗抽出物から、分取ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）を用いて下記に示す方法で化合物１〜３を精製・単離した。
ここで用いたＨＰＬＣカラムのサイズは全て内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍである。また、分離時のカラム温度は室温、移動相の流速は５.０ｍｌ／ｍｉｎである。 From this tea leaf saponin crude extract, compounds 1 to 3 were purified and isolated by preparative HPLC (high performance liquid chromatography) by the method shown below.
The HPLC columns used here all have an inner diameter of 20 mm and a length of 250 mm. The column temperature during separation is room temperature, and the mobile phase flow rate is 5.0 ml / min.

１）化合物１の精製・単離
茶葉サポニン粗抽出物２００ｍｇをＨＰＬＣ（カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＨＧ−５、移動相５０％アセトニトリル＋０.０５％トリフルオロ酢酸）を用いて分離・分取した。次いでＨＰＬＣ（カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＨＧ−５、移動相７５％メタノール＋０.０５％トリフルオロ酢酸）で分離・分取を行い、さらにＨＰＬＣ（カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＨＧ−５、移動相４６％アセトニトリル＋０.０５％トリフルオロ酢酸）で分離し、保持時間４〜５１分のフラクションを分取することで精製された化合物１を２ｍｇ得た。 1) Purification / Isolation of Compound 1 200 mg of tea leaf saponin crude extract was separated and fractionated using HPLC (column: Develosil ODS-HG-5, mobile phase 50% acetonitrile + 0.05% trifluoroacetic acid). Subsequently, separation and fractionation were performed by HPLC (column: Develosil ODS-HG-5, mobile phase 75% methanol + 0.05% trifluoroacetic acid), and HPLC (column: Develosil ODS-HG-5, mobile phase 46% acetonitrile). + 0.05% trifluoroacetic acid), and fractions having a retention time of 4 to 51 minutes were collected to obtain 2 mg of purified Compound 1.

２）化合物２および化合物３の精製・単離
茶葉サポニン粗抽出物２００ｍｇをＨＰＬＣ（カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＨＧ−５、移動相５５％アセトニトリル＋０.０５％トリフルオロ酢酸）で分離し、化合物２を含むフラクションと化合物３を含むフラクションを分取した。
化合物２を含むフラクションよりＨＰＬＣ（カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＰｈ−ＵＧ−５、移動相７０％メタノール＋０.０５％トリフルオロ酢酸）を用いて分離・分取を行い、これをさらにＨＰＬＣ（カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＨＧ−５、移動相４５％アセトニトリル＋０.０５％トリフルオロ酢酸）で分離し、保持時間４９〜５２分のフラクションを分取することで精製された化合物２を４ｍｇ得た。 2) Purification and isolation of compound 2 and compound 3 200 mg of the crude tea leaf saponin extract was separated by HPLC (column: Develosil ODS-HG-5, mobile phase 55% acetonitrile + 0.05% trifluoroacetic acid). The fraction containing and the fraction containing Compound 3 were separated.
Separation and fractionation were carried out from the fraction containing compound 2 using HPLC (column: Develosil Ph-UG-5, mobile phase 70% methanol + 0.05% trifluoroacetic acid), and this was further separated by HPLC (column: Develosil ODS- HG-5, mobile phase 45% acetonitrile + 0.05% trifluoroacetic acid), and fractions having a retention time of 49 to 52 minutes were collected to obtain 4 mg of purified compound 2.

一方、化合物３を含むフラクションよりＨＰＬＣ（カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＰｈ−ＵＧ−５、移動相７５％メタノール＋０.０５％トリフルオロ酢酸）を用いて分離・分取を行い、これをさらにＨＰＬＣ（カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＨＧ−５、移動相５５％アセトニトリル＋０.０５％トリフルオロ酢酸）で分離し、保持時間３８〜４１分のフラクションを分取することで精製された化合物３を２ｍｇ得た。 On the other hand, the fraction containing compound 3 was separated and fractionated using HPLC (column: Develosil Ph-UG-5, mobile phase 75% methanol + 0.05% trifluoroacetic acid), and this was further separated by HPLC (column: Develosil). ODS-HG-5, mobile phase 55% acetonitrile + 0.05% trifluoroacetic acid), and fractions having a retention time of 38 to 41 minutes were collected to obtain 2 mg of purified compound 3.

Claims

A saponin compound represented by the following structural formula (1).

A saponin compound represented by the following structural formula (2).

A saponin compound represented by the following structural formula (3).