JP4782393B2 - シアル酸誘導体の製造方法およびシアル酸誘導体 - Google Patents

Description

本発明は、シアル酸誘導体の製造方法およびシアル酸誘導体に関する。

糖が鎖状に連なった分子である糖鎖は生体内で重要な働きを持ち、細胞間の認識や相互作用に関わっている。特に糖鎖末端にシアル酸という特異な構造の糖残基を有するシアリル糖鎖は、インフルエンザウイルスのレセプターであり、また血管内皮細胞で炎症が起きた際に発現するセレクチンというレクチン（糖結合性タンパク質）によって特異的に認識される。さらに赤血球造血因子であるエリスロポエチン（ＥＰＯ）という糖タンパク質は、その糖鎖からシアル酸が除去されると急速に代謝される。

糖鎖の生合成は、糖転移酵素によって糖供与体である糖ヌクレオチドから糖受容体に対し糖転移反応が繰り返されることで行われる。糖ヌクレオチドとは単糖を、リン酸を有するヌクレオチドでエネルギー的に活性化したもので、そのヌクレオチドが脱離基として作用することで糖転移反応が起こる。また、糖転移酵素は糖供与体、糖受容体を厳密に認識し立体選択的、位置特異的に糖受容体へ糖残基を転移させる。シアル酸の場合、生体内で用いられている糖ヌクレオチドは哺乳類では主にシチジン−５’−モノリン酸−シアル酸（ＣＭＰ−シアル酸）である。

このようにＣＭＰ−シアル酸は、糖鎖にシアル酸を酵素的に結合させるために必要不可欠な化合物であり、大量に合成することができる化学的合成方法を開発することは極めて有用である。
従来、ＣＭＰ−シアル酸の製造方法としては下記のような方法が報告されている。その方法は、まず２位のみフリーな水酸基を有するシアル酸に、リン酸化したシチジン誘導体を縮合した後に、３価のリン酸を５価に酸化するものである。また、この方法では縮合の際に用いるシチジン誘導体としてはアミダイト法が最も良い方法として利用されている（例えば、特許文献１参照）。
国際公開番号 ＷＯ９５／２５１１５号

この特許文献１では、リン酸化したシチジン誘導体の調製に多くの工程数が必要であった。そのため、工程数がより少なく、簡便なシアル酸誘導体の製造方法が望まれている。
本発明の課題は、シアル酸誘導体のより工業的生産に適した製造方法および新規なシアル酸誘導体を提供することにある。

本発明は以下のシアル酸誘導体の製造方法および新規なシアル酸誘導体に係る。
１．式（４）で示される化合物を酸化することを特徴とする式（３）で示される化合物の製造方法。

（式中、Ｒ^１は、アルキル基、アリル基、ベンジル基、ベンゾイル基、トリチル基、トシル基、ピバロイル基を示す。Ｒ^２は、アシル基、シリル基、アリル基、ベンジル基、トリチル基、アセタール基を示す。Ｒ^３は、アルキル基、アリル基、ベンジル基、トリチル基を示す。）

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は上記と同じ。）

２．式（３）で示される化合物を還元することを特徴とする式（２）で示される化合物の製造方法。

（式中、Ｒ^２は、アシル基、シリル基、アリル基、ベンジル基、トリチル基、アセタール基を示す。Ｘ^＋、Ｙ^＋は、同一又は異なるカチオンを示す。）

３．式（４）で示される化合物を酸化し、式（３）で示される化合物を製造し、次いで、還元することを特徴とする式（２）で示される化合物の製造方法。
４．式（２）で示される化合物とシチジンを反応させることを特徴とする式（１）で示されるシアル酸誘導体の製造方法。

５．式（３）で示される化合物を還元し、式（２）で示される化合物を製造し、次いで、シチジンを反応させることを特徴とする式（１）で示されるシアル酸誘導体の製造方法。
６．式（４）で示される化合物を酸化し、式（３）で示される化合物を製造し、次いで、還元し、式（２）で示される化合物を製造し、次いで、シチジンを反応させることを特徴とする式（１）で示されるシアル酸誘導体の製造方法。
７．式（３）で示される化合物。
８．式（２）で示される化合物。

本発明によれば、シチジンを無保護で利用でき、大幅な工程数が削減できる、より工業的生産に適した簡便なシアル酸誘導体の製造方法を提供することができる。

本発明は、シアル酸誘導体の製造方法および新規なシアル酸誘導体を提供する。
本発明のシアル酸誘導体の製造方法において、出発原料は、シアル酸である。シアル酸は、合成したものでも、市販されているものでも良い。

まず、シアル酸のカルボキシル基と２位以外の水酸基を保護する。カルボキシル基の保護基Ｒ^１は、塩基処理により脱離されるものであれば良く、アルキル基、アリル基、ベンジル基、ベンゾイル基、トリチル基、トシル基、ピバロイル基を示す。アルキル基としては、例えばメチル、エチル、ブチル等のアルキル基、ベンジル基としては、例えばベンジル基、シリルベンジル基、ｐ−アセトキシベンジル基等のベンジル基を例示することができる。この中でも、特にアリル基、ベンジル基が良い。
水酸基の保護基Ｒ^２は、カルボキシル基と同様、塩基処理により脱離されるもので、先に利用したカルボン酸の保護基と脱保護反応時に反応性に差があるものであれば良く、アシル基、シリル基、アリル基、ベンジル基、トリチル基、アセタール基を示す。アシル基としては、例えば、アセチル、モノクロロアセチル、ベンゾイル、ピバロイル、レブノイル等の非置換または置換のアシル基、シリル基としては、例えばトリメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリエチルシリル等のシリル基、ベンジル基としては、例えばベンジル基、シリルベンジル基、ｐ−アセトキシベンジル基等のベンジル基、アセタール基としては、例えば２個の水酸基を保護するベンジリデン基等の環状アセタール基を例示することができる。好ましくは、アシル基が良い。より好ましくは、アセチル基が良い。
リン酸の保護基Ｒ^３は、アルキル基、アリル基、ベンジル基、トリチル基を示す。アルキル基、ベンジル基としては、上記Ｒ^１と同じ基を例示することができる。

カルボキシル基および水酸基への保護基の導入は、公知の方法により行うことができる。例えば、長谷川らの方法（Ｈａｓｅｇａｗａ，Ａ．；Ｉｓｈｉｄａ，Ｈ．；Ｋｉｓｏ，Ｍ．Ｊ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍ．１９９３，１２（３），３７１−３７６）やＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ ＩＮＣ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９９１，ＩＳＢＮ ０−４７１−６２３０１−６等によって、保護基を導入することができる。
得られる化合物５は、式（５）で示すことができる。

（式中、Ｒ^１およびＲ^２は上記と同じ。）
具体的に１例を示せば下記のように、シアル酸を炭酸セシウム塩にした後、ベンジルブロマイドあるいはベンジルジアゾメタンを用いてベンジルエステル化し、続いて無水酢酸、触媒量の６０％過塩素酸を用いて４,７,８,９位の水酸基をアセチル化し化合物５ａを得ることができる。エステル化反応は通常０℃〜１００℃の温度範囲で、１〜２４時間程度で行うのが好ましい。アセチル化等の水酸基の保護反応は通常０℃〜１００℃の温度範囲で、１〜２４時間程度で行うのが好ましい。

次に、得られた化合物５の２位の水酸基を、保護されたリン酸と反応させる。このリン酸化反応は、アセトニトリル、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ベンゼン、ジメチルホルムアミド等の有機溶媒、好ましくは、極性有機溶媒中で、低温、好ましくは−４０℃〜２５℃の温度範囲で、酸触媒の存在下行われる。反応は通常１〜１０時間程度で行うのが好ましい。例えば、酸触媒を加えるときは低温、好ましくは−４０℃〜−１０℃とし、徐々に昇温しながら反応を進行させる。反応は通常１〜６時間程度で行うのが好ましい。ここで使用できる酸触媒は、有機酸が好ましく、例えば、１Ｈ−テトラゾール、ＤＬカンファースルホン酸、ピリジウム−ｐ−トルエンスルフォネート、ｐ−トルエンスルホニル酸（トシル酸）等を用いることができる。好ましくは１Ｈ−テトラゾールが良い。
得られる化合物４は、式（４）で示すことができる。

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は上記と同じ。）

具体的に１例を示せば下記のように、化合物５ａの２位の水酸基に対し、ジベンジルＮ,Ｎ−ジエチルフォスフォロアミダイトと１Ｈ−テトラゾールを用いてリン酸化し化合物４ａを得ることができる。

続いて、得られた化合物４の３価のリン酸を酸化する。この酸化反応は、アセトニトリル、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ベンゼン、ジメチルホルムアミド等の有機溶媒、好ましくは、極性有機溶媒中で、低温、好ましくは−４０℃〜２５℃の温度範囲で、酸化剤の存在下行われる。ここで使用できる酸化剤は、過酸化水素、ｍ−クロロ過安息香酸、ｔ−ブチルヒドロキシパーオキシド、ヨウ素／ピリジン等を用いることができる。好ましくは、ｔ−ブチルヒドロキシパーオキシドが良い。
得られる化合物３は、式（３）で示すことができる。

Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は上記と同じである。

具体的に１例を示せば下記のように、化合物４ａを、ｔ−ブチルヒドロキシパーオキシドを用いて３価のリン酸を酸化し５価のリン酸の化合物３ａを得ることができる。

そして、得られた化合物３のリン酸とカルボン酸の保護基を脱保護を行う。この脱保護反応は、２−プロパノール、酢酸エチル等の有機溶媒中、０℃〜１００℃の温度範囲で、還元が行われる。反応は通常１〜６時間程度で行うのが好ましい。ここで使用できる還元方法としては、パラジウム／カーボン等を触媒とする水添反応等の接触還元があり、化合物２のその他の官能基を還元しない方法であれば一般的な還元方法を使用することができる。
得られる化合物２は、式（２）で示すことができる。

（式中、Ｒ^２は上記と同じである。Ｘ^＋、Ｙ^＋は、同一又は異なるカチオンを示す。）

Ｘ^＋およびＹ^＋としては、例えば、リチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン等のアルカリ金属イオン、カルシウムイオン等のアルカリ土類金属イオン、銅イオン、銀イオン、金イオン、マグネシウムイオン、アルミニウムイオン等の金属イオン、アンモニア、メチルアミン、エチルアミン、ブチルアミン等のアルキルアミンのアンモニウムイオン、アニリン等のアンモニウムイオン等を挙げることができる。アンモニウムイオンの場合は、ジメチルアミンやジエチルアミン等の２級のアンモニウムイオンやトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン等の３級のアンモニウムイオンやテトラメチルアミン、テトラエチルアミン等の４級のアンモニウムイオンでもよい。カチオン性のイオンであれば金属、鉱物、アミン類の種別やイオンの価数に関係なくどのようなカチオン性イオンでもよい。

具体的には、化合物３ａを接触還元してリン酸とカルボン酸のベンジル基を脱保護して化合物２ａへ変換することができる。また、化合物２は化合物５の２位水酸基をリン酸トリス（トリアゾリド）やリン酸トリスイミダゾリドでリン酸化後、水添反応等の触媒還元により脱ベンジルエステル化をおこない調製することもできる。

最後に、化合物２は、この合成ルートの鍵反応となるシチジンとの縮合反応を行う。この縮合反応は、アセトニトリル、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ベンゼン、ジメチルホルムアミド等の有機溶媒、好ましくは、極性有機溶媒中、０℃〜１００℃の温度範囲で、縮合剤の存在下行われる。反応は通常１０分〜６時間程度で行うのが好ましい。ここで使用できる縮合剤としては、例えば、ＰｙＢｏｐ、ＨＡＴＵ、ＨＢＴＵ、ジイソプロピルカルボジイミド等と、ＨＯＢｔを組合せて行うことができる。好ましくはＨＯＢｔ、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）が良い。縮合反応の後、続いて保護基の脱保護を行う。この脱保護反応は、塩基化合物の存在下行われる。ここで使用できる塩基化合物としては、好ましくは、水酸化ナトリウム水溶液が良い。

具体的には、反応条件としては前述のように反応にはヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を用いて無水物を形成させそしてシチジンの５’位のアルコールを効率よく攻撃させるために１〜１０等量のシチジンを加え０℃〜６０℃、好ましくは室温で反応を行った。化合物２ａとシチジンの存在化、ＨＯＢｔとジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）を加えた。詳細に反応の状況を追跡するために、^３１Ｐ−ＮＭＲでも反応を追跡する。

すると反応開始直後に原料の−３.２ｐｐｍのシグナル（ａ）以外に−２.５ｐｐｍに新しいシグナルが観測されはじめた。そして一時間後にはそのシグナル（ｂ）が最も強くなった。そして反応をさらに追跡すると続いて目的のＣＭＰ−シアル酸のアセチル誘導体のシグナル（ｃ）が−４.２ｐｐｍに観測されはじめた。目的のピーク強度が最も高くなる時間（^３１ＰのＮＭＲ比約５０％）（３時間から４時間）で反応を止め、続いてシアル酸のアセチル基を脱保護するために水酸化ナトリウム水溶液を加えた。そして室温で１５時間放置した後凍結乾燥し、ＨＰＬＣ（ｍｏｎｏＱ）で精製し、目的物であるＣＭＰ−シアル酸１を得た。また、脱アセチル化後に観測された−０.７ｐｐｍのシグナル（ｄ）はシアル酸の２位リン酸体である。また反応直後に出現するシグナルは、原料でも目的物でもなく、単離することもできないため、原料が活性化された無水物のシグナルではないかと考えている。得られた化合物は標品のＣＭＰ−シアル酸のＮＭＲシグナルと良い一致をした。また、合成したＣＭＰ−シアル酸を用いてシアル酸転移酵素反応を行い、活性があることを確認した。

しかしこの場合カルボン酸とリン酸の無水物を介さずに、ＨＯＢｔが直接リン酸を活性化しＣＭＰ−シアル酸を与えている可能性が残っている。そこでカルボン酸をメチルエステルで保護したシアル酸の２位リン酸誘導体を用いて同じ縮合を行ってみることにした。しかしこの場合では無水物だと思われるシグナルもＣＭＰ−シアル酸も結果的に得られなかった。

このことから、シチジンが直接リン酸と結合を形成することはなく、カルボン酸とリン酸の無水物を形成した後にシチジンが攻撃することが分かった。以上の結果から、ＣＭＰ−シアル酸の新規合成法を検討したことでこれまでに推定してきた隣接するカルボン酸とリン酸は相互作用、つまりカルボン酸リン酸無水物を形成し、そして酸性条件では水酸基はリンに攻撃することが確認できた。

シアル酸のリン酸誘導体とシチジンの縮合を行うことで、これまでとは全く異なるＣＭＰ−シアル酸の合成法を確立することができた。またカルボン酸を保護した原料を用いるとＣＭＰ−シアル酸は生成しないことからも、これはシアル酸のカルボン酸と２位のリン酸が結合し無水物を形成するということの証明にもなった。また、このことからもやはりＣＭＰ−シアル酸分子内でもこの無水物が形成されることを強く示唆している。

以下、本発明を実施例に基づいて具体的に説明するが何らこれらに限定されるものではない。

合成例１
Ｂｅｎｚｙｌ５−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−４,７,８,９−ｔｅｔｒａ−Ｏ−ａｃｅｔｙｌ−３,５−ｄｉｄｅｏｘｙ−β−Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏ−２−ｎｏｎｕｌｏｐｙｒａｎｏｓｏｎａｔｅ （５）の合成
５−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−３,５−ｄｉｄｅｏｘｙ−β−Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏ−２−ｎｏｎｕｌｏｐｙｒａｎｏｓｏｎａｔｅ（５２６ｍｇ、１.７ｍｍｏｌ）をメタノール−水＝９：１（１２ｍｌ）に溶かし、炭酸セシウム（３０５ｍｇ、０.８５ｍｍｏｌ）を加え、ｐＨ＝７以下にした。減圧濃縮した後、ジメチルホルムアミドで３度共沸し、真空デシケータで乾燥させた。残渣をジメチルホルムアミド（６.０ｍｌ）に溶かし、アルゴン気流下室温でベンジルブロマイド（２４５μｌ、２０.４ｍｍｏｌ）を加え、一晩撹拌した。原料消失を確認後、飽和食塩水、続いて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で抽出後、硫酸マグネシウム（無水）を加えた。濃縮後、残渣をシリカゲルカラム（酢酸エチル：メタノール＝３：２）で精製してベンジルエステル誘導体（収量６８０ｍｇ、収率９９％）を得た。
続いて得られた化合物（１００.２ｍｇ、２５１μｍｏｌ）を無水酢酸（４５０μｌ）に溶かし、−２０℃、アルゴン気流下で無水酢酸：過塩素酸＝４５０：１（４５０μｌ）を加え、２０℃で２時間攪拌した。反応終了を確認後、酢酸エチルで抽出し、飽和重層水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥させ、ろ過後減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）で精製して化合物（５）（収量８４.５ｍｇ、収率６０％）を得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）
δ ７.４０−７.３０（ｍ，５Ｈ，ＣＨ_２ Ｐｈ），６.０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ_ＮＨ，５＝１０.５Ｈｚ，ＮＨ），５.３９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_７，６＝２.２Ｈｚ，Ｊ_７，８＝４.３Ｈｚ，Ｈ−７），５.３１−５.１３（ｍ，５Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−８，ＣＨ _２ Ｐｈ），４.５４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_９ａ，８＝２.５Ｈｚ，Ｊ_ｇｅｍ＝１２.４Ｈｚ，Ｈ−９ａ），４.２６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_６，５＝１０.６Ｈｚ，Ｊ_６，７＝２.２Ｈｚ，ＮＨ），４.１５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ_５，４＝Ｊ_５，６＝Ｊ_５，ＮＨ＝１０.０Ｈｚ，Ｈ−５），４.０１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_９ｂ，８＝８.２，Ｊ_ｇｅｍ＝１２.３Ｈｚ，Ｈ−９ｂ），２.３０−２.２０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３_ａｘ，Ｈ−３_ｅｑ），２.１３，２.０７，１.９９，１.９７，１.８９（５ｓ，１５Ｈ，Ａｃ×５）

合成例２
Ｂｅｎｚｙｌ５−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−４,７,８,９−ｔｅｔｒａ−Ｏ−ａｃｅｔｙｌ−２−Ｏ−（ｄｉｂｅｎｚｙｌｐｈｏｓｐｈｉｔｙｌ）−３,５−ｄｉｄｅｏｘｙ−β−Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏ−２−ｎｏｎｕｌｏｐｙｒａｎｏｓｏｎａｔｅ （４）の合成
化合物（５）（５７０ｍｇ、１.０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１１ｍｌ）に溶解し、−２０℃、アルゴン気流下でＮ,Ｎ−ｄｉｅｔｈｙｌｄｉｂｅｎｚｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｍｉｄｉｔｅ（９００ｍｌ、２.６ｍｍｏｌ）と１Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｅ（２１０ｍｇ、３.０ｍｍｏｌ）を加え、３０分撹拌した。原料消失を確認後、飽和食塩水、続いて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で抽出後、硫酸マグネシウム（無水）を加えた。濃縮後、残渣をシリカゲルカラム（酢酸エチル：ヘキサン＝２：１）で精製して化合物（４）（収量６１５ｍｇ、収率７６％）を得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）
δ ７.５１−７.２８（ｍ，１５Ｈ，ＣＨ_２Ｐｈ×３），５.６−５.１（ｍ，５Ｈ，Ｈ−７，Ｈ−８，ＣＨ _２ Ｐｈ×３），４.９４−４.８３（ｍ，４Ｈ，Ｈ−４，ＣＨ _２ Ｐｈ×３），４.５５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_８，９ａ＝２.５Ｈｚ，Ｊ_{９ａ，９ｂ}＝１２.４Ｈｚ，Ｈ−９ａ），４.３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ_５，ＮＨ＝１０.４Ｈｚ，ＮＨ），４.１９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_８，９ｂ＝６.８Ｈｚ，Ｊ_{９ａ，９ｂ}＝１２.４Ｈｚ，Ｈ−９ｂ），４.０３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ_４，５＝Ｊ_５，６＝１０.７Ｈｚ，Ｈ−５），３.７５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_５，６＝１０.７Ｈｚ，Ｊ_６，７＝１.９Ｈｚ，Ｈ−６），２.４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{３ｅｑ，３ａｘ}＝１３.０Ｈｚ，Ｊ_{３ｅｑ，４}＝４.９Ｈｚ，Ｈ−３ｅｑ），２.１０，２.０９，２.０２，２.００，１.８２（５ｓ，１５Ｈ，Ａｃ×５），２.０５−２.０２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３ａｘ）
^３１Ｐ−ＮＭＲ
δ −１３８（ｓ）

実施例１
Ｂｅｎｚｙｌ５−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−４,７,８,９−ｔｅｔｒａ−Ｏ−ａｃｅｔｙｌ−２−Ｏ−（ｄｉｂｅｎｚｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ）−３,５−ｄｉｄｅｏｘｙ−β−Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏ−２−ｎｏｎｕｌｏｐｙｒａｎｏｓｏｎａｔｅ（３）の合成
化合物（４）（８００ｍｇ、０.９９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１１.２ｍｌ）に溶かし、−２０℃、アルゴン気流下でｔ−ブチルヒドロキシパーオキシド（Ａｌｄｒｉｃｈ製）３.１ｍｌを加えて撹拌した。３０分後、硫化ジメチル（２.２ｍｌ、３０ｍｍｏｌ）を加え、濃縮した。残渣をシリカゲルカラム（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）で精製して化合物（３）（収量７４０ｍｇ、収率９０％）を得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）
δ ７.３６−７.２６（ｍ，１５Ｈ，ＣＨ _２ Ｐｈ×３），５.３５−５.２９（ｍ，３Ｈ，ＣＨ _２ Ｐｈ×３），５.１２−４.８９（ｍ，７Ｈ，Ｈ−７，Ｈ−８，Ｈ−４，ＮＨＣＨ _２ Ｐｈ×３），４.５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_８，９ａ＝２.５Ｈｚ，Ｊ_{９ａ，９ｂ}＝１２.４Ｈｚ，４.２９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_８，９ｂ＝７.４Ｈｚ，Ｈ−９ｂ），４.１６−４.１１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−６），２.５９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{３ｅｑ，３ａｘ}＝１３.６Ｈｚ，Ｊ_{３ｅｑ，３ａｘ}＝４.８Ｈｚ，Ｈ−３ｅｑ），２.１１，２.０２，１.９９，１.９７，１.８６（５ｓ，１５Ｈ，Ａｃ×５），２.０６−２.００（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３ａｘ）

実施例２
５−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−４,７,８,９−ｔｅｔｒａ−Ｏ−ａｃｅｔｙｌ−３,５−ｄｉｄｅｏｘｙ−β−Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏ−２−ｎｏｎｕｌｏｐｙｒａｎｏｓｏｎａｔｅ２−Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（２）の合成
化合物（３）（１５０ｍｇ，０.１５ｍｍｏｌ）を２−プロパノールに溶かし、ｎ−ブチルアミン（１４０μｌ、０.４５ｍｍｏｌ）を加えた。アルゴン気流下でパラジウム／チャコール（１５ｍｇ）を加え、その後水素気流下で３時間反応させた。パラジウムを活性炭ろ過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラム（酢酸エチル：メタノール：水＝１０：５：１）で精製して化合物（２）(収量８７ｍｇ、収率７０％)を得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）
δ ５.３９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_６，７＝２.０Ｈｚ，Ｊ_７，８＝５.７Ｈｚ，Ｈ−７），５.３０−５.２２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−８），４.４８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_８，９ａ＝２.７Ｈｚ，Ｊ_{９ａ，９ｂ}＝１２.５Ｈｚ，Ｈ−９ａ），４.３７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_５，６＝１０.６Ｈｚ，Ｊ_６，７＝２.０Ｈｚ，Ｈ−６），４.２８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_８，９ｂ＝５.７Ｈｚ，Ｊ_{９ａ，９ｂ}＝１２.５Ｈｚ，Ｈ−９ｂ），３.８６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ_５，４＝Ｊ_５，６＝１０.６Ｈｚ，Ｈ−５），２.５７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{３ｅｑ，３ａｘ}＝１３.３０Ｈｚ，Ｊ_{３ｅｑ，４}＝５.１Ｈｚ，Ｈ−３ｅｑ），２.１１，２.０６，２.０２，１.９７，１.８５（５ｓ，１５Ｈ，Ａｃ×５），２.０４−２.０１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３ａｘ）
^３１Ｐ−ＮＭＲ
δ −４.４７（ｓ）

実施例３
Ｃｙｔｉｄｉｎｅ−５'−ｙｌ ５−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−３,５−ｄｉｄｅｏｘｙ−Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏ−２−ｎｏｎｕｌｏｐｙｒａｎｏｓｉｄ−２''−ｙｌ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ （ＣＭＰ−ＮｅｕＡｃ）（１）の合成
化合物（２）（２５ｍｇ、３０μｍｏｌ）とシチジン（７２.５ｍｇ、３００μｍｏｌ）の混合物を、蒸留したＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）でそれぞれ５回共沸し、デシケーターで一晩乾燥させた。混合物を蒸留したＤＭＦ（３５０μｌ）に溶かし、室温、アルゴン気流下でヒドロキシベンゾトリアゾール（８.１ｍｇ、６０μｍｏｌ）とジイソプロピルカルボジイミド（９.２μｌ、６０μｍｏｌ）を加えて撹拌した。４.５時間後、０.２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（６.０ｍｌ、１.２ｍｍｏｌ）を加えた。１５時間後、凍結乾燥した。残渣をゲルろ過カラムで精製し、化合物（１）を得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）
δ ７.９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ_５，６＝７.６Ｈｚ，Ｈ−６），６.０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ_６，５＝７.６Ｈｚ，Ｈ−５），５.９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ_{１’，２’}＝４.５Ｈｚ，Ｈ−１'），４.２９−４.１８（ｍ，５Ｈ，Ｈ'−２，Ｈ−３’，Ｈ−４’，Ｈ−５’ａ，Ｈ−５'ｂ），４.０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ_{７”，８”}＝９.７Ｈｚ，Ｈ−７”），４.０２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{４”，３”ｅｑ}＝４.７Ｈｚ，Ｊ_{４”，３”ａｘ}＝１１.４Ｈｚ，Ｊ_４，５＝１０.５Ｈｚ，Ｈ−４”），３.９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{５”，４”}＝Ｊ_{５”，６”}＝１０.５Ｈｚ，Ｈ−５”），３.８７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{８”，７”}＝９.７Ｈｚ，Ｊ_{８”，９”ａ}＝６.６Ｈｚ，Ｊ_{８”，９”ｂ}＝２.４Ｈｚ，Ｈ−８”），３.８２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{９”ｂ，９”ａ}＝１１.７Ｈｚ，Ｊ_{９ｂ”，８”}＝２.４Ｈｚ，Ｈ−９”ｂ），３.５７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{９”ａ，９”ｂ}＝１１.７Ｈｚ，Ｊ_{９”ａ，８”}＝６.６Ｈｚ，Ｈ−９”ａ），３.３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ_{７”，８”}＝９.７Ｈｚ，Ｈ−７），２.４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{３”ｅｑ，４”}＝４.７Ｈｚ，Ｊ_ｇｅｍ＝１３.４Ｈｚ，Ｈ−３”ｅｑ），２.００（ｓ，３Ｈ，Ａｃ），１.６０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ_{３”ａｘ，４”}＝１１.４Ｈｚ，Ｊ_ｇｅｍ＝１３.４Ｈｚ，Ｊ_{３”ａｘ，Ｐ}＝５.６Ｈｚ，Ｈ−３”ａｘ）
^３１Ｐ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ_２Ｏ）
δ −４.４６

Claims (8)

1. 式（４）で示される化合物を酸化することを特徴とする式（３）で示される化合物の製造方法。
   

   

   （式中、Ｒ^１は、アリル基、ベンジル基、又は、トリチル基を示す。Ｒ^２は、アシル基又はシリル基を示す。Ｒ^３は、アリル基、ベンジル基、又は、トリチル基を示す。）
   

   

   （式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は上記と同じ。）
2. 式（３）で示される化合物を還元することを特徴とする式（２）で示される化合物の製造方法。
   

   

   （式中、Ｒ^１は、アリル基、ベンジル基、又は、トリチル基を示す。Ｒ^２は、アシル基又はシリル基を示す。Ｒ^３は、アリル基、ベンジル基、又は、トリチル基を示す。）
   

   

   （式中、Ｒ^２は上記と同じ。Ｘ^＋、Ｙ^＋は、同一又は異なるカチオンを示す。）
3. 式（４）で示される化合物を酸化し、式（３）で示される化合物を製造し、次いで、還元することを特徴とする式（２）で示される化合物の製造方法。
   

   

   （式中、Ｒ^１は、アリル基、ベンジル基、又は、トリチル基を示す。Ｒ^２は、アシル基又はシリル基を示す。Ｒ^３は、アリル基、ベンジル基、又は、トリチル基を示す。）
   

   

   （式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は上記と同じ。）
   

   

   （式中、Ｒ^２は上記と同じ。Ｘ^＋、Ｙ^＋は、同一又は異なるカチオンを示す。）
4. 式（２）で示される化合物とシチジンを反応させることを特徴とする式（１）で示されるシアル酸誘導体の製造方法。
   

   

   （式中、Ｒ^２は、アシル基又はシリル基を示す。Ｘ^＋、Ｙ^＋は、同一又は異なるカチオンを示す。）
   

   
5. 式（３）で示される化合物を還元し、式（２）で示される化合物を製造し、次いで、シチジンを反応させることを特徴とする式（１）で示されるシアル酸誘導体の製造方法。
   

   

   （式中、Ｒ^１は、アリル基、ベンジル基、又は、トリチル基を示す。Ｒ^２は、アシル基又はシリル基を示す。Ｒ^３は、アリル基、ベンジル基、又は、トリチル基を示す。）
   

   

   （式中、Ｒ^２は上記と同じ。Ｘ^＋、Ｙ^＋は、同一又は異なるカチオンを示す。）
   

   
6. 式（４）で示される化合物を酸化し、式（３）で示される化合物を製造し、次いで、還元し、式（２）で示される化合物を製造し、次いで、シチジンを反応させることを特徴とする式（１）で示されるシアル酸誘導体の製造方法。
   

   

   （式中、Ｒ^１は、アリル基、ベンジル基、又は、トリチル基を示す。Ｒ^２は、アシル基又はシリル基を示す。Ｒ^３は、アリル基、ベンジル基、又は、トリチル基を示す。）
   

   

   （式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は上記と同じ。）
   

   

   （式中、Ｒ^２は上記と同じ。Ｘ^＋、Ｙ^＋は、同一又は異なるカチオンを示す。）
   

   
7. 式（３）で示される化合物。
   

   

   （式中、Ｒ^１は、アリル基、ベンジル基、又は、トリチル基を示す。Ｒ^２は、アシル基又はシリル基を示す。Ｒ^３は、アリル基、ベンジル基、又は、トリチル基を示す。）
8. 式（２）で示される化合物。
   

   

   （式中、Ｒ^２は、アシル基又はシリル基を示す。Ｘ^＋、Ｙ^＋は、同一又は異なるカチオンを示す。）