JP5040701B2 - メタン発酵処理方法 - Google Patents
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Description
また、メタン発酵槽内の菌数に着目し、これによって直接、メタン発酵槽の発酵状態を監視して発酵条件を制御する方法も知られている。
また、本発明のメタン発酵処理方法の第2は、有機性廃棄物をメタン発酵槽内に投入し、嫌気性微生物によりメタン発酵させるメタン発酵処理方法において、前記メタン発酵槽内の発酵液の一部を取り出して、該発酵液のイソプレノイドキノンの分子種組成を測定し、前記発酵液中のメナキノンMK−7の存在比が所定値を下回ったら、前記メタン発酵槽への有機物負荷を調整する、及び/又は、前記メタン発酵槽の発酵液のpHを調整して、メナキノンMK−7の存在比を所定値以上にすることを特徴とする。
また、本発明のメタン発酵処理方法の第3は、有機性廃棄物をメタン発酵槽内に投入し、嫌気性微生物によりメタン発酵させるメタン発酵処理方法において、前記メタン発酵槽内の発酵液の一部を取り出して、該発酵液のイソプレノイドキノンの分子種組成を測定し、前記発酵液中のメナキノン分子種の総量(MK total )とユビキノン分子種の総量(UQ total )との比率((MK total )/(UQ total ))が所定値を下回ったら、前記メタン発酵槽への有機物負荷を調整して、前記比率を所定値以上にすることを特徴とする。
まず、測定試料となる発酵液をメタン発酵槽内から取出し、遠心分離を行って、上澄液を取り除く。そして、上澄液を取り除いた試料を冷凍し、完全に冷凍した後、真空凍結乾燥処理を行う。
抽出工程S2では、前処理後の試料中に含まれる菌体からイソプレノイドキノンを抽出する。抽出方法としては、溶媒抽出法、超臨界流体を用いた抽出方法等が挙げられる。超臨界流体を用いた抽出方法は、比較的短時間でイソプレノイドキノンを抽出することができるので特に好ましい。超臨界流体としては、超臨界二酸化炭素が好ましく用いられる。
粗分画工程S3では、抽出工程S2後の試料をユビキノンとメナキノンとに粗分画する。微生物中のイソプレノイドキノンは、ユビキノンとメナキノンに区分され、その骨格型およびイソプレン側鎖の長さにより構造が異なり、ユビキノンUQ−n(Hx)、メナキノンMK−n(Hx)と表される(n=イソプレン側鎖数、x=水素飽和度)。
ユビキノンとメナキノンとを粗分画する方法としては、例えば、固相抽出カートリッジに抽出工程後の試料通し、固相抽出カートリッジに通液する溶媒の濃度や種類を変えて、メナキノンとユビキノンとを粗分画する方法が一例として挙げられる。具体的な一例としては、抽出処理後の試料を固相抽出カートリッジ(商品名「Sep‐Pak Plus Silica」 Watesr社製)に通し、まず2%ジエチルエーテル・ヘキサン溶液に通すことでメナキノンを溶出分離させ、次に、10%ジエチレンエーテル・ヘキサン溶液を通して、ユビキノンを溶出させて、メナキノンとユビキノンとを粗画分する方法が挙げられる。
分析工程S4では、イソプレノイドキノンの分子種組成を定性・定量解析して分析する。定性・定量解析方法としては、例えば、HPLC(High Performance Liquid Chromatography)などの液体クロマトグラフィーを用い、標準物質の保持時間とピーク面積を基準にしてイソプレノイドキノンの分子種組成を分析する方法が一例として挙げられる。なお、液体クロマトグラフィーとして、「ULPC」(商品名 Waters社製)を用いて分析を行う場合は、粗分画工程S3を省略することもできる。
(式中fkiは、発酵液iのイソプレノイドキノンの分子種kの存在比であり、fkj は、発酵液jのイソプレノイドキノンの分子種kの存在比である)
採取した試料を、50ml遠沈管に入れ、遠心分離(8000rpm、10分、20℃)した。そして、上澄液を捨てて、上澄液以外の試料を−20℃で冷凍した。完全に冷凍した試料を真空凍結乾燥機(Asahi、FZ−4.5(77500)型)を用いて、24時間真空凍結乾燥処理(真空度133×10−3mBar、−40℃)した。
次に、真空凍結乾燥処理を行った試料を、超臨界抽出装置の抽出容器内に投入し、オーブンにセットした。そして、オーブンの温度を55℃に設定し、背圧レギュレータの圧力を250atmに設定し、二酸化炭素を2.7ml/min、メタノールを0.3ml/minに設定し抽出容器に流し始め、所定の圧力に達した時を抽出開始とし、15分間抽出を行って、試料中に含まれる菌体からイソプレノイドキノンを抽出した。
次に、抽出処理後の試料を固相抽出カートリッジ(商品名「Sep‐Pak Plus Silica」 Watesr社製)に通した。そして、まず2%ジエチルエーテル・ヘキサン溶液に通すことで、メナキノンを溶出分離した。次に、10%ジエチレンエーテル・ヘキサン溶液を通すことで、ユビキノンを溶出させた。そして、各溶出液をエバポレータで蒸発濃縮させた後、アセトンで洗浄回収した。こうしてメナキノンとユビキノンとを分離精製した。
そして、分離精製したユビキノン及びメナキノンを、HPLCを用い、標準物質の保持時間とピーク面積を基準にしてイソプレノイドキノンの分子種組成を分析した。
図3に、HRT10日、8日、6日、4日、3日、2日の条件でメタン発酵処理した時の発酵液のイソプレノイドキノンの分子種組成を示し、図4に、その時のバイオガス発生量を示す。
図4に示すように、HRT2日の負荷条件のときにバイオガス発生量が急激に低下した。このときのイソプレノイドキノンの組成は、図3に示すように、ユビキノンUQ−9の存在割合が増加していた。そして、ユビキノンUQ−9の存在割合の増加を、メタン発酵の破綻の予兆としての運転指標として用い、ユビキノンUQ−9の存在割合が所定値を超えたら有機性廃棄物の供給量を減らす処理を行ったところ、メタン発酵が破綻することなく行えた。
図5に、HRT10日、8日、6日、4日、3日、2日の条件でメタン発酵処理した時の発酵液のプロピオン酸濃度を示し、図6に、同メナキノンMK−7の存在比を示し、図7に、発酵液のプロピオン酸濃度とメナキノンMK−7の存在比との関係図を示す。
図7に示すように、発酵液のプロピオン酸濃度と、メナキノンMK−7の存在比は、強い相関性を有していた。そして、メナキノンMK−7の存在比が所定値を下回ったら発酵液のpHを調整する処理を行ったところ、メタン発酵が破綻することなく行えた。
図8に、HRT10日、8日、6日、4日、3日、2日の条件でメタン発酵処理した時のイソプレノイドキノンの分子種の非類似度を示す。
図8に示すように、HRT10日〜HRT3日では、非類似度は0.05〜0.2の範囲にあり、この時の発酵槽内の微生物群集構造には、有意な変化はなかった。この時のガス化率は70%以上であった。一方、HRT2日の条件で運転した時、非類似度は0.2以上となり、このときに発酵槽の微生物群集構造には有意な変化が起きていた。また、この時のガス化率は30%以下であった。そして、非類似度が0.2を超えたら、非類似度が0.2以下になるように、有機性廃棄物の供給量と、発酵液のpHとを調整したところ、発酵槽の微生物群集構造の変化を抑えることができ、メタン発酵が破綻することなく行えた。
図9に、HRT10日、8日、6日、4日、3日、2日の条件でメタン発酵処理した時のメナキノン分子種の総量(MKtotal)とユビキノン分子種の総量(UQtotal)との比率((MKtotal)/(UQtotal))を示し、図10に、((MKtotal)/(UQtotal))とガス化率との関係図を示す。(MKtotal)/(UQtotal)が低下するにつれ、ガス化率の低下がみられ、特に(MKtotal)/(UQtotal)が0.4以下となった時、ガス化率が著しく低下した。そして、(MKtotal)/(UQtotal)が0.4以下となったら有機性廃棄物の投入量を減らす処理を行ったところ、ガス化率が正常状態に回復し、メタン発酵が破綻することなく行えた。
2:粉砕機
3:スラリー調整槽
4:スラリー投入ポンプ
5:薬液槽
6:薬中ポンプ
7:メタン発酵槽
8:攪拌器
9:廃液ポンプ
10:ガス量計
11:ガスホルダー
12:サンプリング口
15:制御装置
Claims (3)
- 有機性廃棄物をメタン発酵槽内に投入し、嫌気性微生物によりメタン発酵させるメタン発酵処理方法において、
前記メタン発酵槽内の発酵液の一部を取り出して、該発酵液のイソプレノイドキノンの分子種組成を測定し、
前記発酵液中のユビキノンUQ−9の存在比が所定値を超えたら、前記メタン発酵槽への有機物負荷を調整する、及び/又は、前記メタン発酵槽の発酵液のpHを調整して、ユビキノンUQ−9の存在比を所定値以下にすることを特徴とするメタン発酵処理方法。 - 有機性廃棄物をメタン発酵槽内に投入し、嫌気性微生物によりメタン発酵させるメタン発酵処理方法において、
前記メタン発酵槽内の発酵液の一部を取り出して、該発酵液のイソプレノイドキノンの分子種組成を測定し、
前記発酵液中のメナキノンMK−7の存在比が所定値を下回ったら、前記メタン発酵槽への有機物負荷を調整する、及び/又は、前記メタン発酵槽の発酵液のpHを調整して、メナキノンMK−7の存在比を所定値以上にすることを特徴とするメタン発酵処理方法。 - 有機性廃棄物をメタン発酵槽内に投入し、嫌気性微生物によりメタン発酵させるメタン発酵処理方法において、
前記メタン発酵槽内の発酵液の一部を取り出して、該発酵液のイソプレノイドキノンの分子種組成を測定し、
前記発酵液中のメナキノン分子種の総量(MK total )とユビキノン分子種の総量(UQ total )との比率((MK total )/(UQ total ))が所定値を下回ったら、前記メタン発酵槽への有機物負荷を調整して、前記比率を所定値以上にすることを特徴とするメタン発酵処理方法。
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