JP5459710B2 - マスリン酸を有効成分とするｉ型アレルギーを抑制するための医薬組成物 - Google Patents

Description

本発明は、マスリン酸を有効成分とする抗アレルギー剤に関する。

マスリン酸は、オリーブ果肉や葉に豊富に含まれているトリテルペン類の一種であることが報告されており、基礎研究では、ガン細胞を用いた発ガン抑制作用が報告されている（例えば非特許文献１参照）。
また、難消化性デキストリンと、コロソリン酸、マスリン酸、トルメンティック酸及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも一つとを有効成分として含有する血糖値上昇抑制剤としての使用が知られている（例えば特許文献１参照）。
また、マスリン酸を含有する皮膚の美白用飲食物又は経口美白剤としての使用が知られている（例えば特許文献２参照）。

特開２００６−３４７９６７号公報 国際公開２００２ ／０４３７３６号パンフレット

「ザ ジャーナル オブ ニュートリション （Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）」、（米国）、「アメリカン ソサイエティー オブ ニュートリショナル サイエンス （Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」、２００６年、１３６号、ｐ. ２５５３−２５５７

近年、国内のアレルギー患者数は年々増加している。
現在、問題視されているアレルギー性鼻炎やアトピー性皮膚炎（通年性・花粉症）などは、体内に入り込んだ異物を除去するために働く免疫システムが異常反応を起こすもので、I型アレルギーと呼ばれ、アレルゲンが体内へ侵入後、ただちに反応を示す即時型である。
アレルギーの全貌はいまだ十分に解明されておらず、軽度の患者は一般用医薬品やサプリメントで対応するケースも多いため、アレルギー改善訴求食品素材への注目度は高まってきている。
従って、本発明の目的は日常的に安心して摂取できる抗アレルギー剤を提供することである。

本発明者らは、オリーブを処理して得られるマスリン酸化合物に着目し、鋭意研究を重ねた結果、マスリン酸が優れた抗アレルギー作用をもつことを見出し、本発明を完成させるに至った。
特にオリーブの果肉、オリーブの葉、オリーブオイル絞りかす、エキストラバージンオリーブオイルを処理して得られるマスリン酸は、植物由来であることから安全性が高い。
従って、本発明はマスリン酸を有効成分として含有することを特徴とする抗アレルギー剤である。

本発明のマスリン酸を有効成分とする抗アレルギー剤により、花粉やハウスダストなどのアレルゲンによって引き起こされるアレルギーを軽減することができる。

本発明者らは、オリーブを処理して得られるマスリン酸化合物に着目し、鋭意研究を重ねた結果、マスリン酸が優れた抗Ｉ型アレルギー作用をもつことを見出し、本発明を完成させるに至った。
特にオリーブの果肉、オリーブの葉、オリーブオイル絞りかす、エキストラバージンオリーブオイルを処理して得られるマスリン酸は、植物由来であることから安全性が高い。
従って、本発明はマスリン酸を有効成分として含有することを特徴とするＩ型アレルギーを抑制するための医薬組成物である。

以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において使用するマスリン酸は、化学式（１）で示されるトリペルテン類の１種である。

マスリン酸は、化学合成によって得ることができるほか、オリーブから公知の方法で抽出、精製して得ることができる。
例えば、乾燥したオリーブや搾油工程で発生するオリーブオイル絞りかすなどを原料として使用できる。
さらに、オリーブ乾燥物をｎ−ヘキサン等の脂溶性有機溶媒で油分を除去した脱脂物でも使用できる。
使用するオリーブの品種には特に限定はなく、国内産、外国産などの産地、栽培用、搾油用を問わず使用できる。
本発明で使用するマスリン酸は、これらの原料からマスリン酸が抽出可能な低級アルコール（例えば、エタノール、メタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールなど）又はその含水アルコールでマスリン酸を抽出し、必要であれば、ケン化処理、中和を行い、吸着剤としてオクタデシルシリカ（ＯＤＳ）、シリカゲル、合成吸着剤などを使用して、分画、精製することで得ることができる。
マスリン酸精製画分を濃縮乾固したものは、茶褐色の粉末状であり、純度が高いほど白色粉末となり、含水アルコールなどに溶解する。

Ｉ型アレルギー反応は、抗原特異的なＩｇＥとＩｇＥ特異的な高親和性Ｆｃレセプターをもつ肥満細胞や好塩基球が関わっている。
肥満細胞や好塩基球の表面に結合しているＩｇＥが抗原によって架橋されると、肥満細胞や好塩基球は活性化され、ヒスタミンやβ−ヘキソサミニダーゼなどの細胞内顆粒内容物が放出される。この現象を脱顆粒とよび、この脱顆粒を防ぐことがアレルギー発症を抑えるために必要である。
本発明のマスリン酸を有効成分とする抗アレルギー剤は、脱顆粒の際にヒスタミンなどの化学物質と共に放出されるβ−ヘキソサミニダーゼの活性を抑制し、Ｉ型アレルギーを抑制することができる。

投与量は、投与方法と患者の年齢、病状や一般状態などによって変化し得るが、大人では通常、1日当たり有効成分として０．１〜５００ｍｇ／ｋｇが適当である。

本発明のマスリン酸を有効成分とする抗アレルギー剤は、一般食品や健康食品に配合することができ、また、食品添加物の成分とすることもできる。
本発明のマスリン酸を有効成分とする抗アレルギー剤を配合する食品は特に限定されず、例えば食パン、菓子パン、パイ、デニッシュ、ドーナツ、ケーキ等のベーカリー食品、うどん、そば、中華麺、焼きそば、パスタ等の麺類、天ぷら、コロッケ等のフライ類、カレー、シチュー、ドレッシング等のソース類、ふりかけ類、かまぼこ等の練り製品、ジュース等の飲料、スナック菓子、米菓、飴、ガム等の菓子類を挙げることができる。

以下本発明を実施例により具体的に説明する。
［抽出精製］
オリーブオイル絞りかす２５０ｇを乾燥（６０℃、３時間）し、ｎ−ヘキサンにより脱脂した後、含水９０％（ｖ／ｖ）メタノールにより還流抽出（７０℃、３時間）した。
抽出液をろ過し、ろ液を濃縮後、水に分散させ吸着剤として合成吸着剤アンバーライトＸＡＤ４（オルガノ株式会社）２００ｇを使用してマスリン酸画分を精製した。
抽出物（マスリン酸の純度は、３２．６％）１．６ｇが得られた。

マスリン酸含有量は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で、分子量は、液体クロマトグラフ質量分析計（ＬＣ-ＭＳ）で確認した。
ＨＰＬＣによるマスリン酸、マスリン酸含有オリーブ抽出物の保持時間は４．９６分で確認した。
図１は、マスリン酸標準品（純度９８％）、図２はマスリン酸含有オリーブ抽出物のＨＰＬＣの測定結果である。
ＬＣ-ＭＳによるマスリン酸標準品、マスリン酸含有オリーブ抽出物の正負同時スキャン測定の結果、検出された分子量関連イオンは、マスリン酸標準品、抽出物ともに［Ｍ＋Ｎａ＋ＣＨ_３ＣＮ］^＋ ｍ／ｚ ５３６、［Ｍ−Ｈ］⁻ ｍ／ｚ ４７１であった。
図３は、ＬＣ-ＭＳによって観察されたマスリン酸の分子イオン種（正イオン）［Ｍ＋Ｎａ＋ＣＨ_３ＣＮ］^＋ ｍ／ｚ ５３６ 、図４は、ＬＣ-ＭＳによって観察されたマスリン酸の分子イオン種（負イオン）［Ｍ−Ｈ］⁻ ｍ／ｚ ４７１ のチャートである。

［実施例１］β‐ヘキソサミニダーゼアッセイ測定試験
前記マスリン酸含有オリーブ抽出物及び前記マスリン酸標準品について、β-ヘキソサミニダーゼ遊離抑制効果を、ラット由来好塩基球細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３;好塩基球細胞、独立行政法人理化学研究所 バイオリソースセンター）から遊離されるβ-ヘキソサミニダーゼを指標とする抗アレルギー作用試験法を用いて評価した。

ＲＢＬ−２Ｈ３を２４穴プレートに２．５×１０^５細胞／穴となるように細胞を播種し、２４時間培養（二酸化炭素５％、３７℃）後、Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ ｓａｌｉｎｅ（−）（ＰＢＳ（−））で１回洗浄した後、ＤＭＥＭ培地（１０％ＦＢＳ）を５００μｌ／穴となるように添加し、
抗体のＡｎｔｉＤＮＰ−ＩｇＥ溶液（２５μｇ／ｍｌ）を２０μｌ入れ、２時間培養することによって、細胞を感作させた。
これをコントロール、陽性対照及び検体用とし、Ｂｌａｎｋ用として抗体のＡｎｔｉＤＮＰ−ＩｇＥ溶液の代わりにＤＭＥＭ（１０％ＦＢＳ）培地を２０μｌ入れた。

前記ＡｎｔｉＤＮＰ−ＩｇＥ溶液及び前記ＤＭＥＭ（１０％ＦＢＳ）培地を除去し、１．５ｍｌ／穴 ＭＴ Ｂｕｆｆｅｒで２回洗浄した。
検体にはマスリン酸又はマスリン酸含有抽出物を含むＭＴ Ｂｕｆｆｅｒ溶液を５００μｌ／穴入れた。
Ｂｌａｎｋ、Ｃｏｎｔｒｏｌには、ＭＴ Ｂｕｆｆｅｒのみを５００μｌ／穴入れた。
陽性対照には、Ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ溶液（５μＭ）を５００μｌ／穴入れた。

これらを、３７℃、二酸化炭素５％インキュベータで１０分間培養した。
Ｂｌａｎｋ以外には２０μｌ／穴となるように抗原のＤＮＰ−ＨＡＳ溶液（５μｇ／ｍｌ）を加え、良く混合し、３７℃、二酸化炭素５％インキュベータで３０分間培養した。
培養上清を採り、Ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔとした。
残った細胞に５２０μl／穴 ０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００溶液を入れ、氷上で５分間静置し、溶解したものをＣｅｌｌ ｌｙｓａｔｅとした。
Ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ, Ｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅをそれぞれ８０μｌ、９６穴マイクロプレートにとり、３７℃、５分間プレインキュベーションした。

これらに、１００μｌ／穴 Ｐ−ニトロフェニル‐２‐アセトアミド‐２‐デオキシ‐β‐Ｄ‐グルコプラノシド（３．３ｍＭ）を加え、良く混合した後、３７℃、２５分インキュベーションした。
１００μｌ／穴 グリシンバッファーを加えよく混合したのち、マイクロプレートリーダーで４０５ｎｍの吸光度を測定した。
試料抽出物が４０５ｎｍに吸収を持つ可能性があるため、別でＳｕｐｅｒｎａｔａｎｔ及びＣｅｌｌ ｌｙｓａｔｅを採取しておき、反応停止溶液→基質溶液の順で加えた際の吸光度を同時に測定し、以下の計算式でβ‐ヘキソサミニダーゼ放出率（％）を算出し、コントロールを放出率１００％としたときのサンプル添加時の放出率（％）を算出した。

β‐ヘキソサミニダーゼ放出率（％）＝１００×〔（Ｓ−Ｓｃ）／｛（Ｓ−Ｓｃ）＋（ＣＬ−ＣＬｃ）｝〕
ＣＬ:Ｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅの吸光度
ＣＬｃ:反応停止溶液→基質溶液の順で加えた際のＣｅｌｌ
ｌｙｓａｔｅの吸光度
Ｓ:Ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔの吸光度
Ｓｃ:反応停止溶液→基質溶液の順で加えた際のＳｕｐｅｒｎａｔａｎｔの吸光度

結果を図５に示す。
平均値は、Ｂｌａｎｋ ４７．４％、Ｃｏｎｔｒｏｌ １００．０％、Ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ ５１．８％、オリーブ抽出物（１００μg/ml） ４０．４％、マスリン酸標準品（１００μＭ）８０．７％、マスリン酸標準品（２００μＭ）７３．２％、マスリン酸標準品（５００μＭ）３５．８％であった。
マスリン酸を含むオリーブ抽出物及びマスリン酸標準品はいずれも抗アレルギー効果を有することが確認できた。

［実施例２］錠菓及び錠剤の製造
卵殻カルシウム１０８g、ピロリン酸第二鉄２ｇ、アスコルビン酸４０ｇ、微結晶セルロース４０ｇ、還元麦芽糖２８０ｇ、マスリン酸５ｇをミキサーによって常法により混合した後、打錠して錠菓及び錠剤を製造した。

Claims (1)

1. マスリン酸を有効成分として含有することを特徴とするＩ型アレルギーを抑制するための医薬組成物。

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