JP5689247B2 - セラミド産生促進剤及び保湿剤 - Google Patents

Description

本発明は、セラミド産生促進剤及び保湿剤に関する。

スフィンゴ脂質の一つであるセラミドは、生体全体の中では微量な脂質であるが、皮膚の最も外側の層である角層中では、脂質の半分以上を占め、皮膚の保湿機構、バリア機構に重要な役割を果たしている。このセラミドは表皮細胞中において産生、分泌された後に角層中の細胞間においてラメラ構造を構築することにより機能する。しかし、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬等の皮膚疾患においては、セラミドの健全な代謝が妨げられ、角層中のセラミド量が減少し、皮膚の保湿能やバリア能の低下等を引き起こしていることが数多く報告されている。
減少したセラミドを外部から補給する方法が試みられているが、現在のところ必ずしもその効果は十分なものではない。

本発明は、高いセラミド産生促進効果を有するセラミド産生促進剤を提供することを課題とする。また、本発明は、セラミド産生を促進する作用に優れた保湿剤を提供することを課題とする。

本発明者等は上記課題に鑑み、セラミド産生促進作用を有する新規素材を探求すべく鋭意検討を行った。その結果、下記一般式（１）で表される化合物が高いセラミド産生促進作用を有することを見い出し、該化合物が新規の保湿成分として有用であるとの知見を得た。本発明はこの知見に基づいて成されたものである。

すなわち、本発明は、下記一般式（１）で表される化合物を有効成分として含有するセラミド産生促進剤に関する。

（式中、Ｒは炭素数１〜５のアシル基を表す。）

また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物を有効成分として含有する保湿剤に関する。

本発明によれば、セラミド産生促進剤を提供することができる。また、本発明によれば、セラミド産生促進作用に優れた保湿剤を提供することができる。

以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のセラミド産生促進剤及び保湿剤は、下記一般式（１）で表される化合物を有効成分として含有する。後述の実施例で実証されているように、この化合物は高いセラミド産生促進作用を有する。

一般式（１）中、Ｒは炭素数１〜５のアシル基を表す。
Ｒとしては、炭素数１〜３のアシル基が好ましく、炭素数２のアシル基がより好ましい。Ｒとして具体的には、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基等が挙げられ、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基が好ましく、アセチル基がより好ましい。なお、Ｒがアセチル基である一般式（１）で表される化合物は、テルペン類の１種のトウセンダニン（Toosendanin）である。
一般式（１）で表される化合物は、下記の互変異性をとりうるが、本発明の一般式（１）で表される化合物においては、その両方の互変異性体が包含される。

本発明に用いる前記一般式（１）で表される化合物の製造方法としては、特に限定されず、化学合成したものを用いてもよく、天然物由来の材料から抽出や精製等したものであってもよい。また、試薬として市販されているものを用いることもできる。
試薬としては、ＡｖａＣｈｅｍ社（ＵＳＡ）から市販されているもの等を利用できる。

天然物由来の材料から前記一般式（１）で表される化合物を得る方法としては、例えば、トウセンダン（学名：Melia toosendan Sieb. et Zucc.）、センダン（学名：Melia azedarach）、チャンチン（学名：Toona sinensis）等の植物から単離することができる。
これらの植物は、その全ての任意の部分（上記植物の全木、全草、根、根茎、幹、枝、茎、葉、樹皮、樹液、樹脂、花、果実、種子等）が使用可能である。特に、トウセンダンから単離する場合は、その樹皮、種子又は果実を用いることが好ましい。また、トウセンダンの果実を基原植物として得られた生薬、川楝子（センレンシ）を用いることもできる。センダンから単離する場合は、その樹皮を用いることが好ましい。また、センダンの樹皮を基原植物として得られた生薬、苦楝皮（クレンピ）を用いることもできる。チャンチンから単離する場合は、その樹皮を用いることが好ましい。
また、これらの各植物又は各部位を適宜組み合わせて用い、前記一般式（１）で表される化合物を単離することもできる。

これらの植物から、前記一般式（１）で表される化合物を単離する方法としては、特に限定されないが、例えば、上述した植物を適当な溶媒を用いて抽出し、得られた植物抽出物からクロマトグラフィー等の手法により一般式（１）で表される化合物を単離する方法が挙げられる。
植物抽出物の調製には、上記植物をそのまま用いてもよく、乾燥粉砕して用いることもできる。抽出に用いる溶媒としては、通常植物成分の抽出に用いられるもの、例えば水、石油エーテル、ｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルム、エーテル、酢酸エチル、アセトン、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール及びこれらの混合溶液等を用いることができる。また抽出条件も通常の条件を適用でき、例えば上記植物を５〜８０℃で２時間〜６０日間浸漬又は加熱還流すればよい。
具体的な抽出、単離法としては、後述の実施例で示す方法を用いることができるが、本発明はこれに限定されるものではない。

前記一般式（１）で表される化合物は、後述の実施例に示すように優れたセラミド産生促進作用を有し、この化合物を含有させることでセラミド産生促進剤を得ることができる。また、前述のように、セラミドは皮膚の保湿機構やバリア機構にとって重要な働きをしており、セラミド産生を促進させることで生体の有するセラミド産生機構を健常に戻し、減少した角層中のセラミドを増加させ、高いバリア機能及び保湿機能を有する皮膚を取り戻しうるため、前記一般式（１）で表される化合物を含有させることで保湿剤を得ることができる。前記一般式（１）で表される化合物がセラミド産生促進作用を有することは従来全く知られておらず、本発明者等により得られた新しい知見である。

本発明において、前記一般式（１）で表される化合物はそのままセラミド産生促進剤として用いてもよい。又は、その効果に影響を与えない範囲で、前記一般式（１）で表される化合物に各種添加剤等を加えてもよい。例えば酸化チタン、炭酸カルシウム、蒸留水、乳糖、デンプン等の適当な液体または固体の賦形剤または増量剤を加えてセラミド産生促進剤として用いてもよい。
組成物とする場合、セラミド産生促進剤中の前記一般式（１）で表される化合物の量は特に制限されないが、前記一般式（１）で表される化合物が０．００００１〜２０質量％含まれるのが好ましく、０．０００１〜１０質量％程度含まれるのが特に好ましい。

本発明において、前記一般式（１）で表される化合物はそのまま保湿剤として用いてもよい。又は、前記一般式（１）で表される化合物を有効成分として含有させ、その効果に影響を与えない範囲で、通常用いられる添加剤、その他の薬効成分等を配合して保湿剤とすることもできる。例えば、既知のセラミド産生促進剤、擬似セラミド、天然セラミド、糖セラミド等を併せて添加してもよい。さらに、保湿剤以外の薬効成分として、皮膚老化防止剤、美白剤等を併せて添加してもよい。
前記セラミド産生促進剤としては、特に限定されるものではないが、例えば、アセチルヒドロキシプロリン、グリチルリチン酸カリウム、Ｌ-カルニチン、アスコルビン酸、アスコルビルグルコシド、アスコルビルリン酸マグネシウム、dl-α-トコフェリル-dl-アスコルビルリン酸、dl-α-トコフェリルリン酸、ニコチン酸アミド、ニコチン酸トコフェロール、L-乳酸、ビタミンＣ、アスパラガス抽出物、ブッチャーブルーム、ゲンクワニン、ローズマリー、ラベンダー、セージ、ナツメ、黒（赤）霊芝、トウキ、クジン、ヨクイニン、ベニセアンヌ抽出物、ライスパワーエキスなどが挙げられる。
また、擬似セラミドとしては、特に限定されるものではないが、例えば、市販のセラミドＲ（ユニリーバ製）、セラミドＰＣ-１０４（太平洋化学製）、セラミドＨＯ３（sederma製）、エルデュウＰＳ-２０３（味の素製）などが挙げられる。
また、糖セラミドとしては、特に限定されるものではないが、グルコシルセラミド、ガラクトシルセラミド等が挙げられ、市販のものとしては、ニップンセラミド（日本製粉製）、オリザセラミド（オリザ油化製）、ニッサンセラミド、ネオリキッドセラミドN（日本油脂製）、セラミド（ユニチカ製）等が挙げられる。
組成物とする場合、保湿剤中における前記一般式（１）で表される化合物の量は特に限定されないが、前記一般式（１）で表される化合物が０．００００１〜２０質量％含まれるのが好ましく、０．０００１〜１０質量％含まれるのがより好ましい。

本発明の保湿剤は、その多くは人や動物に適用される。この保湿剤は、人や動物の皮膚、爪、粘膜、毛髪等に適用されうるすべての形態を含む。本発明の保湿剤の形態としては、例えば、軟膏、ローション、クリーム、美容液、化粧水、マッサージ剤、パック、ファンデーション、口紅、入浴剤、シャンプー、ヘアコンディショナー、ヘアトニック、錠剤、カプセル、サニタリー用品等の吸収性物品、おしり拭き、ウェットティッシュ等のシート状製品等が挙げられる。その剤型も限定されず、液状、固形状、乳液状、ペースト状、ゲル状、パウダー状(粉末状)、顆粒状、ペレット状、スティック状等の各種剤型が挙げられる。

本発明のセラミド産生促進剤及び保湿剤は、食品、化粧料、医薬品等の用途に適用することができる。
食品用途に用いる場合、一般飲食品の他、皮膚の保湿能又はバリア機能の改善・維持効果をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した健康飲食品、美容飲食品、特定保健用飲食品、病者用飲食品等とすることができる。
食品の形態としては特に制限はなく、例えば、果汁飲料、乳飲料、茶系飲料等の飲料類、キャンディ、ドロップ、ゼリー、クッキー、チョコレート、ケーキ、ヨーグルト、ガム等の菓子類、調味料、調理油、乳製品、パン類、麺類、加工米等が挙げられる。また、錠剤（タブレット）、カプセル、顆粒、シロップ等の美容食品、健康食品等としてもよい。
これらの飲料又は食品は、例えば、甘味剤、着色剤、抗酸化剤、ビタミン類、香料、ミネラル等の添加剤、タンパク質、脂質、糖質、炭水化物、食物繊維等の食品原料を適宜組み合わせて用い、これに前記一般式（１）で表される化合物を含有させ、常法に従って各種の食品形態とすることにより調製することができる。

化粧料用途に用いる場合、例えば皮膚外用剤の形態とすることができる。皮膚外用剤の態様で用いる場合、前記一般式（１）で表される化合物に加えて、上述した各種添加剤やその他の薬効成分を適宜加えることができ、さらには取りうる剤型に応じて皮膚外用剤に通常用いられる各種成分を配合することができる。皮膚外用剤の剤型として、具体的には、クリーム、乳液、ローション、ゲル、軟膏、ペースト、パック、シート状製品等、外用適用可能な種々の剤型が挙げられ、これらの剤型とするにあたって、例えば、各種油剤、界面活性剤、ゲル化剤、防腐剤、酸化防止剤、溶剤、アルコール、水、キレート剤、増粘剤、紫外線吸収剤、乳化安定剤、pH調整剤、色素、香料等を配合することができる。
皮膚外用剤中の前記一般式（１）で表される化合物の含有量は、前述したセラミド産生促進剤及び保湿剤中における前記一般式（１）で表される化合物の量と同様である。

本発明のセラミド産生促進剤又は保湿剤を、食品、化粧料又は医薬品として使用する場合の摂取又は使用量は、その形態、摂取者の年齢、性別等の条件により適宜選択されうるが、通常成人１人当たり１日に、前記一般式（１）で表される化合物を０．００１〜１０００ｍｇ摂取又は使用することが好ましく、０．０１〜１００ｍｇ摂取又は使用することが特に好ましい。

以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。

製造例
トウセンダンの果実（センレンシ、新和物産社製）８００ｇを、８Ｌの５０％エタノールで２０〜３５℃、７日間抽出し、溶媒を濃縮したところ、抽出固形分１２３．５ｇが得られた。得られた抽出固形分を、後述する試験例の手法によるセラミド産生促進活性を指標に分画を行なった。水と酢酸エチルを用いて液々分配を行なったところ、酢酸エチル層２０．７８ｇ（収率１６．８％）に活性が集約した。酢酸エチル層をさらにシリカゲルカラムにより分画を行なったところ、画分（１）７．４９ｇ（収率６．１％）得た。さらにこの画分を、シリカゲルカラムを用いて分画を行い、画分（２）２．７８ｇ（収率２．３％）が得られた。次に、この画分をＬＨ−２０（ＧＥヘルスケア社製：Ｓｅｐｈａｄｅｘ^ＴＭ ＬＨ２０）によって分画し、画分（３）１．２８ｇ（収率１．０％）を得た。この内３４０ｍｇをＨＰＬＣで分画したところ、画分（４）１６４．８ｍｇ（収率０．４８％）を得た。さらにこの内２０ｍｇを用いてＨＰＬＣで分画を行なったところ、画分（５）１．４ｍｇ（収率０．０３％）が得られた。この画分（５）を、ＮＭＲを用いて構造解析を行った。なお、ＮＭＲによる構造解析には、試薬として市販されているトウセンダニン（ＡｖａＣｈｅｍ社製）を比較用として用いた。ＮＭＲによる構造解析の結果を表１に示す。
その結果、トウセンダンから単離された活性成分は下記表１に示す構造を有する化合物であり、この化合物はトウセンダニン（toosendanin）であると同定した。なお、表１中、Ａｃはアセチル基を表す。

（試験例）セラミド産生促進効果の検証
培養プレートを用い、培養液（商品名：EpiLife-KG2、KURABO社製）中にて、正常ヒト表皮角化細胞（商品名：NHEK(F)、KURABO社製）を３７℃、５％ＣＯ₂で培養した。
その後、培養液を上皮成長因子などの増殖因子を除いたEpiLife-KG2に換え、トウセンダニン（ＡｖａＣｈｅｍ社製）の濃度が１ｍＭ（５７４ｐｐｍ）となるように調製したもの、又はコントロール溶液（５０％エタノール）を、０．０１％量添加した。
３日間培養した後、各々の細胞を１ｗｅｌｌごと回収した。

回収した細胞からBligh and Dyer法により脂質を抽出した有機相をガラス管に移し、窒素乾固した後、クロロホルム、メタノールで再溶解し、脂質サンプルとした。
また、脂質を抽出した後の細胞に０．１Ｎ ＮａＯＨ、１％ＳＤＳ水溶液を加え、６０℃で２時間加熱することにより、タンパク質を可溶化し、室温まで冷却した後２Ｎ ＨＣｌを加えて中和し、タンパク量をＢＣＡ法により定量した。

調製した脂質サンプルを薄膜クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でクロロホルム：メタノール：酢酸＝１９０：９：１で２回水平展開した。硫酸銅液をスプレーで噴霧し、ホットプレートで焼き付けセラミドを検出し、セラミド量とした。
結果を表２に示す。なお、表２に示すセラミド量は、コントロール溶液添加群を１とした場合の相対値を示している。

（参考例）
１．ユーカリ抽出物の調製
ユーカリノキ（Eucalyptus globulus Labillardiere：新和物産株式会社製）の葉４０ｇを細切し、５０％エタノール４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で７日間抽出を行った。その後、濾過して、ユーカリ抽出物２９１ｍＬを得た。得られた抽出物について、下記の方法で蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は３．１６％（ｗ／ｖ）であった。

２．セラミド産生促進効果の検証
得られたユーカリ抽出物を用いて、上記試験例と同様の手法によってセラミド産生促進効果を検証した。なお、細胞への添加は、濃度が固形分換算で１％（ｗ／ｖ）となるように調整した抽出物を、０．００１％添加した。
結果を表２に示す。なお、ユーカリ抽出物はセラミド産生促進作用を有する保湿成分として公知のものである。

表２から明らかなように、トウセンダニンを添加した系ではコントロールの系に比べてセラミド産出量の上昇が認められ、前記一般式（１）で表される化合物を有効成分として含有する本発明のセラミド産生促進剤は、セラミド産生を促進することができることがわかった。
さらに、セラミドは皮膚の保湿・バリア機能維持に関係するため、表２の結果から前記一般式（１）で表される化合物はセラミドの産生を促し保湿作用を有することがわかる。すなわち、公知の保湿成分であるユーカリ抽出物（参考例）と同様、前記一般式（１）で表される化合物を有効成分として含有する本発明の保湿剤はセラミドの産生を促し、保湿作用を有するものである。

（処方例）
前記一般式（１）で表される化合物を有効成分として、下記に示す組成の化粧水、0/W（オイルインウォーター）型乳液、W/O（ウォーターインオイル）型クリーム、ジェル状化粧料、液体入浴剤、及び錠剤形態の食品を常法により各々調製した。

１．化粧水の調製
（組成） （配合：質量％）
トウセンダニン（ＡｖａＣｈｅｍ社製） 0.05
ポリエチレングリコール（商品名：ＰＥＧ−１５４０、三洋化成社製） 1.00
ポリオキシエチレン（20）ソルビタンモノラウリン酸エステル 1.50
グリセリン 2.00
パラべン 0.10
精製水 残余

２．0/W型乳液の調製
（組成） （配合：質量％）
トウセンダニン（ＡｖａＣｈｅｍ社製） 1.00
ポリエチレングリコール（商品名：ＰＥＧ−２０００、三洋化成社製） 1.00
プルラン（商品名：プルランＰＴ−２０、林原社製） 0.40
セチルアルコール 1.00
ワセリン 2.00
スクワラン 6.00
ジメチルポリシロキサン 2.00
グリセリン 2.00
擬似セラミド（Ｎ−（３−ヘキサデシロキシ−２−ヒドロキシプロピル）−Ｎ−２−ヒドロキシエチルヘキサデカミナド） 1.00
ポリオキシエチレン（10）モノオレイン酸エステル 1.00
グリセロールモノステアリン酸エステル 1.00
植物のカルス由来の酸性へテロ多糖類（チュベロース多糖１重量％水溶液）2.00
パラべン 0.20
精製水 残余

３．W/O型クリームの調製
（組成） （配合：質量％）
トウセンダニン（ＡｖａＣｈｅｍ社製） 3.00
アクリル酸アルキル共重合体（商品名：ヨドゾールＧＨ８１０、カネボウＮＳＣ社製）
1.30
ポリビニルピロリドン（商品名：ルビスコールＫ−９０、ＢＡＳＥジャパン社製）
0.70
ジメチルポリシロキサン 10.00
メチルフェニルポリシロキサン 3.00
オクタメチルシクロテトラシロキサン 12.00
ポリオキシアルキレン変性シリコーン 5.00
1,3-ブチレングリコール 6.00
擬似セラミド（Ｎ−（３−ヘキサデシロキシ−２−ヒドロキシプロピル）−Ｎ−２−ヒドロキシエチルヘキサデカミナド） 1.20
パラべン 0.20
香料 微量
精製水 残余

４．ジェル状化粧料の調製
（組成） （配合：質量％）
トウセンダニン（ＡｖａＣｈｅｍ社製） 0.50
ポリエチレングリコール（商品名：ＰＥＧ−２０００、三洋化成社製） 0.50
キサンタンガム（商品名：ネオソフトＸＫＫ、興人社製） 0.20
グリセリン 3.00
エタノール 3.00
カルボキシビニルポリマー 0.50
水酸化カリウム 0.15
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 1.00
クエン酸 0.80
クエン酸三ナトリウム 0.80
ナイロンパウダー 1.00
パラべン 0.10
香料 微量
精製水 残余

５．液体入浴剤の調製
（組成） （配合：質量％）
トウセンダニン（ＡｖａＣｈｅｍ社製） 0.01
擬似セラミド（Ｎ−（３−ヘキサデシロキシ−２−ヒドロキシプロピル）−Ｎ−２−ヒドロキシエチルヘキサデカミナド） 0.10
ミリスチン酸イソプロピル 15.00
ポリオキシエチレン（１２）オレイルエーテル 10.00
ポリオキシエチレン（６）オレイルエーテル 6.00
植物のカルス由来の酸性へテロ多糖類（チュベロース多糖１重量％水溶液）2.00
パラべン 0.30
香料 微量
流動パラフィン 残余

６．食品の調製
各材料を下記の組成に従い混合し、錠剤に成型した。
（組成） （配合：質量％）
トウセンダニン（ＡｖａＣｈｅｍ社製） 1.0
結晶セルロース 89.0
乳清カルシウム 残余

Claims (2)

1. 下記一般式（１）で表される化合物を有効成分とするセラミド産生促進剤。
   

   

   （式中、Ｒは炭素数１〜５のアシル基を表す。）
2. 下記一般式（１）で表される化合物を有効成分とする保湿剤。
   

   

   （式中、Ｒは炭素数１〜５のアシル基を表す。）