JP5825342B2 - 支持構造及び計測装置 - Google Patents
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Description
(計測装置の概略)
第1実施形態は、計測装置及び支持構造に関する。
計測が行われる場合には、図2及び図3に示すように、分析チップ1002が支持体1004に支持され、押圧機構1006により分析チップ1002が支持体1004へ押し付けられ、分析チップ1002が測定位置に固定される。分析チップ1002が支持体1004に支持される場合には、流路形成体1070が支持体1004に支持され、プリズム1066は支持体1004から離れる。プリズム1066が支持体1004に接触しない場合は、プリズム1066に応力が加わりにくく、プリズム1066に複屈折が生じにくい。これにより、励起光ELの偏光方向が乱れにくくなり、計測の感度及び精度が向上する。また、プリズム1066を支持体1004で支持しない場合は、プリズム1066に支持のための構造を設ける必要がなくなり、プリズム1066の形状が簡略化される。プリズム1066の形状の簡略化は、成形のときの密度のむらを減らし、複屈折を生じにくくすることに寄与する。
図4及び図5に示すように、流路形成体1070の外形形状は直方体又は立方体であり、流路形成体1070の表面1101は、平坦な上面1102、側面1104及び下面1106を有する。流路形成体1070の表面1101には、接合領域1108及び露出領域1112が設けられ、被支持領域1110a及び1110bが設定される。接合領域1108は、金膜1064の第1の主面1114に接合される領域であり、下面1106の一部を占める。露出領域1112は、分析チップ1002の外部に露出する領域であり、上面1102の一部及び側面1104を占める。被支持領域1110a及び1110bは、支持体1004に支持される領域であり、下面1106の一部を占める。図4においては、被支持領域1110a及び1110bにハッチングが描かれる。接合領域1108、露出領域1112並びに被支持領域1110a及び1110bの配置が変更されてもよい。流路形成体1070の外形形状が直方体及び立方体以外であってもよい。流路形成体1070の外形形状が直方体及び立方体以外である場合は、下面1106のような一定方向を向く平坦面に接合領域1108並びに被支持領域1110a及び1110bが集中して設けられる。接合領域1108が設けられる平坦面と被支持領域1110a及び1110bが設定される平坦面とが異なる方向を向いてもよい。
プリズム1066の外形形状は半円柱体であり、プリズム1066の表面1118は、円周側面1120及び平坦側面1122を有する。プリズム1066の表面1118には、励起光ELの入射領域1124、反射領域1126及び出射領域1128が設定される。入射領域1124及び出射領域1128は、円周側面1120の一部を占める。反射領域1126は、平坦側面1122の一部を占める。入射領域1124、反射領域1126及び出射領域1128は、入射領域1124へ入射した励起光ELが反射領域1126に全反射され出射領域1128から出射するように配置される。入射領域1124が円周側面1120の一部を占める場合は、異なる入射角で入射した励起光ELが集光され、共鳴角の変化の影響が現れにくくなる。
金膜1064の第1の主面1114には、捕捉体1068が定着する。金膜1064の第1の主面1114は、接合領域1108に接合される。金膜1064の第2の主面1116は、反射領域1126に密着する。捕捉体1068は、流路1072に収容される。金膜1064の第1の主面1114に抗原が直接的に捕捉される場合は、捕捉体1068が省略されてもよい。
流路形成体1070は、表面プラズモン励起蛍光FLに対して透明な材質からなる。流路形成体1070は、望ましくは、樹脂からなり、射出成形により製造される。流路形成体1070の厚さは、望ましくは、1〜10mmである。「厚さ」は、接合領域1108に垂直な方向の寸法である。厚さがこの範囲を下回る場合は、流路形成体1070の剛性が低下し、流路形成体1070が応力を受けとめることが難しくなる。厚さがこの範囲を上回る場合は、流路形成体1070の成形に要する時間が長くなり、分析チップの製造費用が増加する。
プリズム1066は、励起光ELに対して透明な材質からなる誘電体媒体である。望ましくは、プリズム1066は、屈折率が1.4〜1.6のガラス又は樹脂からなる。プリズム1066が樹脂からなる場合は、望ましくは、射出成形によりプリズム1066が製造される。ただし、プリズム1066が他の方法により製造されてもよい。プリズム1066の材質は、望ましくは、複屈折を生じにくい樹脂である。ただし、第1実施形態の支持構造1100によれば、応力がプリズム1066に加わりにくいので、複屈折を生じやすい樹脂からプリズム1066がなる場合も計測の精度及び感度が低下しにくい。
金膜1064は、薄膜である。金膜1064の膜厚は、望ましくは、30〜70nmである。ただし、金膜1064の膜厚がこの範囲外であってもよい。
流路形成体1070には、流路1072が形成される。流路1072は、一方の試料液出入口1130から流路形成体1070の内部を経由し他方の試料液出入口1132まで延在し、試料液1092を収容する試料液収容空間を提供する。試料液出入口1130及び1132は、露出領域1112に設けられる。これにより、試料液出入口1130及び1132への試料液1092の供給が可能になる。
流路形成体1070は、1個の構造物からなる。ただし、流路形成体1070が2個以上の構造物の結合物であってもよい。例えば、流路形成体1070が、表面露出流路1136が形成されたシールと、内部貫通流路1138及び1140が形成されたブロックと、の結合物であってもよい。
捕捉体1068は、非流動体からなる。したがって、試料液1092が捕捉体1068に接触しても、捕捉体1068は移動しない。
図6に示すように、支持体1004は、板形状を有する支持脚1104a及び1104bが基台1102から分岐する二又分岐体である。支持脚1104a及び1104bが板形状以外を有してもよい。基台1102は、計測装置1000の内部に固定される。支持脚1104a及び1104bは、基台1102から鉛直方向の上方へ延在する。支持脚1104aの先端にある上面1250aの一部及び支持脚1104bの先端にある上面1250bの一部は、それぞれ、支持領域1200a及び1200bになる。支持体1004が分析チップ1002を支持する場合には、支持領域1200a及び1200bは、それぞれ、被支持領域1110a及び1110bに接触する。支持領域1200a及び1200bは、平坦であり、同じ高さにある。
押圧機構1006は、押圧子1142を備える。押圧機構1006は、押圧子1142を分析チップ1002へ当て、分析チップ1002を支持体1004へ向かって押圧する。押圧子1142は、望ましくは、ゴム等の弾性体からなり、流路形成体1070の上面1102に接触する。これにより、分析チップ1002が押圧されるときに流路形成体1070が損傷しにくくなる。押圧機構1006が省略され、分析チップ1002が支持体1004に単に載置されてもよい。押圧機構1006は、表面プラズモン励起蛍光FLを妨げない場所に配置される。
図1に示すように、励起光ELは、励起光学系1046によりレーザーダイオードユニット1020から入射領域1124へ導かれる。励起光ELは、第1のバンドバスフィルタ1024、直線偏光フィルタ1026、減光フィルタ1028、半波長板1030及び整形光学系1034を順次に通過する。反射光RLは、出射領域1128の近傍に設けられた光吸収体1014に吸収される。これにより、反射光RLが計測に影響を与えにくくなる。
レーザーダイオードユニット1020においては、レーザーダイオード1050から放射されたビームがビームスプリッタ1054により主ビームと副ビームとに分割される。主ビームは、励起光ELとなる。
励起光ELが第1のバンドパスフィルタ1024を透過するときに、励起光ELの波長の分布が狭められる。これにより、レーザーダイオードユニット1020から放射される励起光ELの波長の分布が広くても、波長の分布が狭い励起光ELが得られる。レーザーダイオードユニット1020から放射される励起光ELの波長の分布が十分に狭い場合は、第1のバンドパスフィルタ1024が省略されてもよい。
励起光ELが直線偏光フィルタ1026を透過するときに、励起光ELの偏光方向の分布が狭められる。これにより、レーザーダイオードユニット1020から放射される励起光ELの偏光方向の分布が広くても、偏光方向の分布が狭い励起光ELが得られる。レーザーダイオードユニット1020から放射される励起光ELの偏光方向の分布が十分に狭い場合は、直線偏光フィルタ1026が省略されてもよい。
励起光ELが減光フィルタ1028を透過するときに、励起光ELの光量が減少させられる。レーザーダイオードユニット1020から放射される励起光ELの光量が適切である場合は、減光フィルタ1028が省略されてもよい。
半波長板1030は、半波長板駆動機構1032により半波長板1030に垂直な回転軸の周りに回転させられる。半波長板駆動機構1032は、ロータリーステッピングモータ等により半波長板1030を自転させる。半波長板1030を通過する励起光ELの偏光方向は、半波長板1030の回転角により調整される。励起光ELの偏光方向は、反射領域1126からのエバネッセント波のしみだしが最大になる偏光方向と反射領域1126からのエバネッセント波のしみだしがなくなる偏光方向との間に調整されうる。初期状態においては、反射領域1126に主にp偏光成分が入射すると予想される回転角に半波長板1030の回転角が設定される。
励起光ELが整形光学系1034を通過するときに励起光ELのビームの大きさ、断面形状等がスリット、ズーム光学系等により整形される。
表面プラズモン励起蛍光FLは、検出光学系1048により捕捉体1068から光電子増倍管1044へ導かれる。表面プラズモン励起蛍光FLは、集光レンズ1036、第2のバンドパスフィルタ1038及び結像レンズ1042を順次に通過する。
集光レンズ1036は、表面プラズモン励起蛍光FLを集光し平行光へ変換する。結像レンズ1042は、表面プラズモン励起蛍光FLを光電子増倍管1044へ結像する。集光レンズ1036及び結像レンズ1042は、共役光学系を構成する。これにより、迷光の影響が抑制される。
第2のバンドパスフィルタ1038は、バンドパスフィルタ駆動機構1040により集光レンズ1036と結像レンズ1042との間の測定光の光路に挿抜される。「測定光」は、励起光ELの散乱光及び表面プラズモン励起蛍光FLである。
測定光の光量は光電子増倍管1044により測定される。光電子増倍管1044には感度及び信号対雑音(S/N)比が良好であるという利点がある。ただし、光電子増倍管1044が他の形式の光量センサに置きかえられてもよい。例えば、光電子増倍管1044が冷却電荷結合素子(CCD)カメラ等に置きかえられてもよい。
送液機構1012においては、送液ポンプ1060が被送液物を送液元から吸引し送液先へ吐出する。送液ポンプ1060は、送液元から送液先へ送液ポンプ駆動機構1062により搬送される。チューブにより被送液物が送液されてもよい。
制御部1016は、ソフトウエアを実行する組み込みコンピュータである。1個の組み込みコンピュータが制御部1016の機能を担ってもよいし、2個以上の組み込みコンピュータが分担して制御部1016の機能を担ってもよい。ソフトウエアを伴わないハードウエアが制御部1016の全部又は一部の機能を担ってもよい。ハードウエアは、オペアンプ、コンパレータ等の電子回路であってもよいし、リンク機構等の機械的機構であってもよい。
図7の模式図は、反射領域1126における照射領域1300、測定領域1302及び反応領域1304の望ましい関係を示す平面図である。照射領域1300は、励起光ELが照射される領域である。測定領域1302は、測定光の光量が光電子増倍管1044により測定される領域である。反応領域1304は、捕捉体1068が設けられ、抗原抗体反応が進行する領域である。照射領域1300及び測定領域1302の平面形状は、望ましくは、円形である。
図8のフローチャートは、計測の手順を示す。計測装置1000においては、抗原抗体反応の進行中に計測が行われる。
図8に示すように、分析チップ1002及び試薬チップ1008が準備され、分析チップ1002及び試薬チップ1008が計測装置1000に取りつけられる(ステップS101)。試薬チップ1008は、前処理室に配置される。試薬チップ1008の検体容器1073には、試薬チップ1008が準備されるときに検体1084が収容される。検体1084は、典型的には、血液等の人間からの採取物であるが、人間以外の生物からの採取物であってもよく、非生物からの採取物であってもよい。試薬チップ1008の希釈液容器1074、蛍光標識液容器1076及び洗浄液容器1078には、それぞれ、希釈液1086、蛍光標識液1088及び洗浄液1090が予め収容される。試薬チップ1008の希釈容器1082には、試料液1092が収容されることが予定されている。
分析チップ1002及び試薬チップ1008が計測装置1000に取りつけられた後に、検体容器1073から希釈容器1082へ検体1084が送液され、希釈液容器1074から希釈容器1082へ希釈液1086が送液され、蛍光標識液容器1076から希釈容器1082へ蛍光標識液1088が送液される。これにより、試料液1092が希釈容器1082に調製される(ステップS102)。試料液1092の成分が変更されてもよい。
試料液1092が調製された後に、望ましくは、照射位置が最適化される(ステップS103)。ただし、照射位置の最適化が省略されてもよい。試料液1092が調製される前又は試料液1092が調製されるのと並行して照射位置が最適化されてもよい。
照射位置が最適化された後に、光電子増倍管1044により自家蛍光の光量が測定される(ステップS104)。自家蛍光の光量の測定結果は、制御部1016へ転送され、制御部1016に記憶される。
自家蛍光の光量が測定された後に、励起光ELの偏光方向が最適化される(ステップS105)。
励起光ELの偏光方向が最適化された後に、光電子増倍管1044により暗ノイズ量が測定される(ステップS106)。暗ノイズ量の測定結果は制御部1016へ転送され、制御部1016に記憶される。暗ノイズ量が測定されている間は、第2のバンドパスフィルタ1038が測定光の光路に挿入される。
暗ノイズ量が測定された後に、流路1072へ試料液1092が注入される。また、抗原抗体反応と並行して光電子増倍管1044により表面プラズモン励起蛍光FLの光量が測定される(ステップS107)。
表面プラズモン励起蛍光FLの光量が測定された後に、制御部1016は、表面プラズモン励起蛍光FLの光量の測定結果から自家蛍光の光量の測定結果及び暗ノイズ量の測定結果を減ずる補正を行う(ステップS108)これにより、自家蛍光及び暗ノイズの影響が抑制され、計測の感度及び精度が向上する。測定結果の補正は、省略されてもよい。測定結果の補正が省略される場合は、自家蛍光の光量の測定及び暗ノイズ量の測定も省略される。
補正された表面プラズモン励起蛍光FLの光量の測定結果は、検体番号等と共に制御部1016に記憶され、検体番号等と共に表示部1018に表示される(ステップS109)。表面プラズモン励起蛍光FLの光量の測定結果は、必要に応じて、抗原の絶対量、濃度等に換算される。
測定結果の記憶及び表示の後に、計測装置1000が初期化される(ステップS110)。計測装置1000の初期化においては、半波長板1030等の可動物が初期位置に復帰させられる。
第2実施形態は、第1実施形態の支持構造に代えて採用される支持構造に関する。
第3実施形態は、第1実施形態の支持構造に代えて採用される支持構造に関する。
第4実施形態は、第1実施形態の支持構造に代えて採用される支持構造に関する。
第5実施形態は、第1実施形態の支持構造に代えて採用される支持構造に関する。
第6実施形態は、第1実施形態の支持構造に代えて採用される支持構造に関する。
第7実施形態は、第1実施形態の支持構造に代えて採用される支持構造に関する。
1004,2004,3004,4004,5004,6004,7004 支持体
1066,2066,3066,4066,5066,6066,7066 プリズム
1064,2064,3064,4064,5064,6064,7064 金膜
1070,2070,3070,4070,5070,6070,7070 流路形成体
Claims (7)
- 表面プラズモン励起蛍光分光法による計測を行う計測装置における支持構造であって、
第1の表面を有し、前記第1の表面が接合領域及び被支持領域を有し、試料収容空間が形成され、前記試料収容空間が前記接合領域に開口を有する構造物と、
第2の表面を有し、前記第2の表面が入射領域、反射領域及び出射領域を有し、前記入射領域へ入射した励起光が前記反射領域に全反射され前記出射領域から出射するように前記入射領域、前記反射領域及び前記出射領域が配置される誘電体媒体と、
第1の主面及び第2の主面を有し、前記第1の主面が前記接合領域に接合され、前記第2の主面が前記反射領域に密着する導電体膜と、
前記被支持領域に接触する支持領域を有し、前記支持領域が前記被支持領域に接触する場合に前記誘電体媒体から離れる形状を有する支持体と、
を備える支持構造。 - 請求項1の支持構造において、
前記第1の表面が平坦面を有し、前記被支持領域及び前記接合領域が前記平坦面に設けられる
支持構造。 - 請求項2の支持構造において、
前記支持体が前記接合領域に平行な方向への前記構造物の移動を規制する位置決め構造を有する
支持構造。 - 請求項3の支持構造において、
前記位置決め構造は、
前記支持領域から突出し前記支持領域に垂直に延在する位置決めピン
を備え、
前記支持領域が前記被支持領域に接触する場合に前記位置決めピンが挿入される位置決め孔が前記構造物に形成される
支持構造。 - 請求項3の支持構造において、
前記位置決め構造が前記構造物を収容する位置決め溝である
支持構造。 - 請求項1の支持構造において、
前記第1の表面が第1の平坦面、第2の平坦面及び第3の平坦面を有し、
前記第2の平坦面及び前記第3の平坦面が前記第1の平坦面に垂直な方向から傾斜し、前記第2の平坦面と前記第3の平坦面との間隔が前記第1の平坦面へ近づくにつれて狭くなり、
前記被支持領域が第1の被支持領域であり、前記第1の表面が第2の被支持領域を有し、
前記接合領域が前記第1の平坦面にあり、
前記第1の被支持領域が前記第2の平坦面にあり、
前記第2の被支持領域が前記第3の平坦面にあり、
前記支持領域が第1の支持領域であり、前記支持体が前記第2の被支持領域に接触する第2の支持領域を有する
支持構造。 - 表面プラズモン励起蛍光分光法による計測を行う計測装置であって、
第1の表面を有し、前記第1の表面が接合領域及び被支持領域を有し、試料収容空間が形成され、前記試料収容空間が前記接合領域に開口を有する構造物と、
第2の表面を有し、前記第2の表面が入射領域、反射領域及び出射領域を有し、前記入射領域へ入射した励起光が前記反射領域に全反射され前記出射領域から出射するように前記入射領域、前記反射領域及び前記出射領域が配置される誘電体媒体と、
第1の主面及び第2の主面を有し、前記第1の主面が前記接合領域に接合され、前記第2の主面が前記反射領域に密着する導電体膜と、
前記被支持領域に接触する支持領域を有し、前記支持領域が前記被支持領域に接触する場合に前記誘電体媒体から離れる形状を有する支持体と、
前記入射面へ励起光を入射させ、表面プラズモン励起蛍光分光法による測定を行う測定機構と、
を備える計測装置。
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