JP6334396B2 - 安定化スブチリシン組成物 - Google Patents

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本発明は、ペプチドアルデヒド誘導体により安定化されたスブチリシンを含む組成物に関する。それはまた、この組成物の調製方法およびこの組成物で使用するための化合物に関する。

国際公開第９８／１３４５８号パンフレット、国際公開第９４／０４６５１号パンフレット、国際公開第９８／１３４６０号パンフレット、国際公開第９５／２５７９１号パンフレット、および国際公開第２００９／１１８３７５号パンフレットには、ペプチドアルデヒドにより安定されたスブチリシン型プロテアーゼを含む液体洗剤が開示されている。国際公開第２０１１／０３６１５３号パンフレットには、粒状スブチリシン含有洗剤へのペプチドアルデヒドの添加により洗浄力を向上させうることが開示されている。

アルデヒドがＮａＨＳＯ₃との可溶性付加物（重亜硫酸またはヒドロ亜硫酸の付加物）を形成しうることおよびペプチドアルデヒドが水に溶けにくい傾向があることは、周知である。

国際公開第９８／４７５２３号パンフレットおよび米国特許第６，５００，８０２号明細書には、ペプチジル−２−アミノ−１−ヒドロキシアルカンスルホン酸およびプロテアーゼ阻害剤としてのその使用が開示されている。米国特許第５，４３６，２２９号明細書には、Ｌ−アルギニンアルデヒド誘導体の重亜硫酸付加物およびトロンビン阻害剤としてのその使用が開示されている。

米国特許第４，７０３，０３６号明細書、米国特許第４，４７８，７４５号明細書、および米国特許第５，５７８，５７４号明細書には、乾燥形態のペプチドアルデヒドの調製方法が開示されている。

安定化スブチリシン組成物の大量生産では、安全性およびプロセス要件の両方のために、液体原料を取り扱うことがきわめて好ましい。ペプチドアルデヒドは、水に溶けにくい傾向があるので、濃厚水性溶液の調製が困難または不可能であり、液体配合物で使用すべく安定化スブチリシン溶液を作製する場合または顆粒組成物を製造すべく顆粒化する場合、乾燥生成物またはきわめて希薄な水性溶液のいずれかの使用が余儀なくされる。

ペプチドアルデヒドからヒドロ亜硫酸付加物への変換を用いることにより、ペプチドアルデヒドの精製時、水溶性を増加させることが可能である。有利なことに、我々は、このヒドロ亜硫酸付加物が、それ自体、スブチリシンの阻害剤および安定化剤として効果的であるうえに、第２の（非スブチリシン）酵素（存在する場合）を安定化させうることを見いだした。我々は、ヒドロ亜硫酸付加物がスブチリシン阻害剤として効果的であることを見いだすとともに、我々は、それが貯蔵時に液体洗剤中でその阻害効果および安定化効果を維持することを見いだした。したがって、ヒドロ亜硫酸付加物の使用により、元のペプチドアルデヒドに変換するコストおよび時間を回避することが可能であり、それに続くペプチドアルデヒドの乾燥を省くことが可能であるので、これにより、粉末形態でまたはきわめて希薄な水性溶液としてペプチドアルデヒドを取り扱う不便さを回避することが可能である。さらに、ペプチドアルデヒド重亜硫酸付加物の添加により、スブチリシン含有洗剤の洗浄力（洗浄／洗濯性能）を向上させることも可能である。

したがって、本発明は、スブチリシンと式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍを有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物とを含む組成物を提供する。式中の基は、以下の意味を有する。すなわち
ａ）Ｍは、Ｈ（水素）またはアルカリ金属、好ましくはＮａまたはＫであり、
ｂ）Ｒは、ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯをＬまたはＤ−アミノ酸残基であるようにする基（以下ではＢ⁰と記される）であり、
ｃ）Ｂ¹は、１個のアミノ酸残基であり、かつ
ｄ）Ｘは、１個以上のアミノ酸残基（好ましくは１個または２個）で構成され、任意選択でＮ末端保護基を含んでいてもよい。

本発明はさらに、この組成物の調製方法を提供する。この方法は、スブチリシンと、式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍ（式中、Ｍ、Ｒ、Ｂ¹、およびＸは、以上のように定義される）を有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物を含む水性溶液と、任意選択で界面活性剤と、を混合することを含む。

そのほかに、本発明は、この組成物で使用するための化合物を提供する。この化合物は、式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍを有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物である。Ｒは、ｐ−ヒドロキシ−ベンジルでありうる。また、Ｍ、Ｂ¹、およびＸは、以上のように定義される。

安定化スブチリシン組成物
本発明に係る組成物は、スブチリシンとペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物とを含み、任意選択で第２の酵素を含んでいてもよい。この組成物は、液体形態または顆粒形態をとりうる。それは、界面活性剤をさらに含む洗剤組成物であってもよい。

液体洗剤や顆粒洗剤などの組成物では、各酵素（スブチリシンおよび任意選択の第２の酵素）の量は、純粋な酵素タンパク質として計算して、典型的には０．０４〜８０μＭ（またはマイクロモル／ｋｇ）、特定的には０．２〜３０μＭ、より特定的には０．４〜２０μＭ（一般的には１〜２０００ｍｇ／ｌまたはｍｇ／ｋｇ、特定的には５〜７５０ｍｇ／ｌ、より特定的には１０〜５００ｍｇ／ｌ）であろう。酵素濃縮物などの組成物では、各酵素の量は、純粋な酵素タンパク質として計算して、典型的には０．０１〜２０ｍＭ、特定的には０．０４〜１０ｍＭ、より特定的には０．１〜５ｍＭ（一般的には０．３〜５００ｇ／ｌ、特定的には１〜３００ｇ／ｌ、より特定的には３〜１５０ｇ／ｌ）であろう。

本発明に係る酵素安定化剤または酵素阻害剤対スブチリシンのモル比は、少なくとも１：１または１．５：１であり、かつ１０００：１未満、より好ましくは５００：１未満である。さらにより好ましいのは、１００：１〜２：１または２０：１〜２：１であり、最も好ましいのは、モル比が１０：１〜３：１である。

ペプチドアルデヒド
本方法で使用される重亜硫酸付加物は、式Ｘ−Ｂ¹−Ｂ⁰−Ｈを有するペプチドアルデヒドから誘導可能である。式中の基は、以上のように定義され、Ｂ⁰は、式：ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯを有するＬ配置またはＤ配置の単一のアミノ酸残基である。

ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯ（Ｂ⁰）は、ＬまたはＤ−アミノ酸残基である。ただし、Ｒは、脂肪族または芳香族の側鎖、たとえば、ベンジルなどのアラルキルであってもよく、Ｒは、任意選択で置換されていてもよい。より特定的には、Ｂ⁰残基は、嵩高、中性、極性、疎水性、および／または芳香族であってもよく、任意選択で置換されていてもよい。例は、Ｄ形またはＬ形のＴｙｒ（ｐ−チロシン）、ｍ−チロシン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、ノルバリン（Ｎｖａ）、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはノルロイシン（Ｎｌｅ）、特定的には、Ｔｙｒ、ｍ−チロシン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、Ｐｈｅ（Ｖａｌ）、Ｍｅｔ、Ｎｖａ、またはＮｌｅである。

以上の式Ｘ−Ｂ¹−Ｂ⁰−Ｈ中、Ｂ¹残基は、特定的には、小型、脂肪族、疎水性、および／または中性であってもよい。例は、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、グリシン（Ｇｌｙ）、プロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、およびノルロイシン（Ｎｌｅ）、特定的には、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、およびＮｌｅである。

Ｘは、特定的には、任意選択のＮ末端保護基を有していてもよい１個または２個のアミノ酸残基でありうる（すなわち、この化合物は、保護基を有していても有していなくてもよいトリまたはテトラペプチドアルデヒドである）。したがって、Ｘは、Ｂ²、Ｂ³−Ｂ²、Ｚ−Ｂ²、Ｚ−Ｂ³−Ｂ²でありうる。ただし、Ｂ³およびＢ²は、それぞれ、１個のアミノ酸残基を表し、かつＺは、Ｎ末端保護基である。

Ｂ²残基は、特定的には、小型、脂肪族、および／または中性であってもよく、たとえば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、またはＶａｌ、とくに、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、またはＶａｌである。

Ｂ³残基は、特定的には、嵩高、疎水性、中性、および／または芳香族であってもよく、任意選択で置換されていてもよく、たとえば、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、フェニルグリシン、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、またはＩｌｅである。

Ｎ末端保護基Ｚ（存在する場合）は、ホルミル基、アセチル（Ａｃ）基、ベンゾイル基、トリフルオロアセチル基、フルオロメトキシカルボニル基、メトキシスクシニル基、芳香族および脂肪族のウレタン保護基、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、アダマンチルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルカルボニル（ＭＯＺ）基、ベンジル（Ｂｎ）基、ｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）基もしくはｐ−メトキシフェニル（ＰＭＰ）基、メトキシカルボニル（Ｍｏｃ）基、メトキシアセチル（Ｍａｃ）基、メチルカルバメート基、またはメチルアミノカルボニル／メチルウレア基から選択されうる。保護基を有するテトラペプチドアルデヒド（すなわちＸ＝Ｚ−Ｂ³−Ｂ²）の場合、Ｚは、好ましくは、小型の脂肪族基、たとえば、ホルミル基、アセチル基、フルオロメトキシカルボニル基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、メトキシカルボニル（Ｍｏｃ）基、メトキシアセチル（Ｍａｃ）基、メチルカルバメート基、またはメチルアミノカルボニル基／メチルウレア基である。保護基を有するトリペプチドアルデヒド（すなわちＸ＝Ｚ−Ｂ²）の場合、Ｚは、好ましくは、嵩高い芳香族基、たとえば、ベンゾイル、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルカルボニル（ＭＯＺ）、ベンジル（Ｂｎ）、ｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）、またはｐ−メトキシフェニル（ＰＭＰ）である。

好適なペプチドアルデヒドは、国際公開第９４／０４６５１号パンフレット、国際公開第９５／２５７９１号パンフレット、国際公開第９８／１３４５８号パンフレット、国際公開第９８／１３４５９号パンフレット、国際公開第９８／１３４６０号パンフレット、国際公開第９８／１３４６１号パンフレット、国際公開第９８／１３４６１号パンフレット、国際公開第９８／１３４６２号パンフレット、国際公開第２００７／１４１７３６号パンフレット、国際公開第２００７／１４５９６３号パンフレット、国際公開第２００９／１１８３７５号パンフレット、国際公開第２０１０／０５５０５２号パンフレット、および国際公開第２０１１／０３６１５３号パンフレットに記載されている。より特定的には、ペプチドアルデヒドは、Ｚ−ＲＡＹ−Ｈ、Ａｃ−ＧＡＹ−Ｈ、Ｚ−ＧＡＹ−Ｈ、Ｚ−ＧＡＬ−Ｈ、Ｚ−ＶＡＬ−Ｈ、Ｚ−ＧＡＦ−Ｈ、Ｚ−ＧＡＶ−Ｈ、Ｚ−ＧＧＹ−Ｈ、Ｚ−ＧＧＦ−Ｈ、Ｚ−ＲＶＹ−Ｈ、Ｚ−ＬＶＹ−Ｈ、Ａｃ−ＬＧＡＹ−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡＹ−Ｈ、Ａｃ−ＹＧＡＹ−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡＬ−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡＦ−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＶＹ−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡＭ−Ｈ、Ａｃ−ＷＬＶＹ−Ｈ、ＭｅＯ−ＣＯ−ＶＡＬ−Ｈ、ＭｅＮＣＯ−ＶＡＬ−Ｈ、ＭｅＯ−ＣＯ−ＦＧＡＬ−Ｈ、ＭｅＯ−ＣＯ−ＦＧＡＦ−Ｈ、ＭｅＳＯ₂−ＦＧＡＬ−Ｈ、ＭｅＳＯ₂−ＶＡＬ−Ｈ、ＰｈＣＨ₂Ｏ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＶＡＬ−Ｈ、ＥｔＳＯ₂−ＦＧＡＬ−Ｈ、ＰｈＣＨ₂ＳＯ₂−ＶＡＬ−Ｈ、ＰｈＣＨ₂Ｏ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＬＡＬ−Ｈ、ＰｈＣＨ₂Ｏ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＦＡＬ−Ｈ、またはＭｅＯ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＬＧＡＬ−Ｈでありうる。ここで、Ｚは、ベンジルオキシカルボニルであり、Ｍｅは、メチルであり、Ｅｔは、エチルであり、Ａｃは、アセチルであり、Ｈは、水素であり、かつ他方文字は、標準的一文字表記（たとえば、Ｆ＝Ｐｈｅ、Ｙ＝Ｔｙｒ、およびＬ＝Ｌｅｕ）により記されたアミノ酸残基を表す。他の選択肢として、ペプチドアルデヒドは、国際公開第２０１０／０５５０５２号パンフレットに記載の式：
Ｐ−Ｏ−（Ａ_i−Ｘ’）_n−Ａ_n+1−Ｑ
（式中、
Ｑは、水素、ＣＨ₃、ＣＸ₃、ＣＨＸ₂、またはＣＨ₂Ｘであり、ここで、Ｘは、ハロゲン原子であり、
１つのＸ’は、「ダブルＮキャッピング基」ＣＯ、ＣＯ−ＣＯ、ＣＳ、ＣＳ−ＣＳ、またはＣＳ−ＣＯであり、最も好ましいのはウリド（ＣＯ）であり、他のＸ’は、存在せず、
ｎ＝１〜１０、好ましくは２〜５、最も好ましくは２、
Ａ_iおよびＡ_n+1のそれぞれは、構造：
Ｘ＝−ＣＯ−の右側の残基に対しては−ＮＨ−ＣＲ−ＣＯ−、または
Ｘ＝−ＣＯ−の左側の残基に対しては−ＣＯ−ＣＲ−ＮＨ−
を有するアミノ酸残基であり、
Ｒは、Ｈ−または任意選択で置換されていてもよいアルキル基もしくはアルキルアリール基であり、任意選択でヘテロ原子を含んでいてもよく、任意選択でＮ原子に結合されていてもよく、かつ
Ｐは、水素または任意のＣ末端保護基である）
を有しうる。そのようなペプチドアルデヒドの例としては、α−ＭＡＰＩ、β−ＭＡＰＩ、Ｆ−尿素−ＲＶＹ−Ｈ、Ｆ−尿素−ＧＧＹ−Ｈ、Ｆ−尿素−ＧＡＦ−Ｈ、Ｆ−尿素−ＧＡＹ−Ｈ、Ｆ−尿素−ＧＡＬ−Ｈ、Ｆ−尿素−ＧＡ−Ｎｖａ−Ｈ、Ｆ−尿素−ＧＡ−Ｎｌｅ−Ｈ、Ｙ−尿素−ＲＶＹ−Ｈ、Ｙ−尿素−ＧＡＹ−Ｈ、Ｆ−ＣＳ−ＲＶＦ−Ｈ、Ｆ−ＣＳ−ＲＶＹ−Ｈ、Ｆ−ＣＳ−ＧＡＹ−Ｈ、アンチパイン、ＧＥ２０３７２Ａ、ＧＥ２０３７２Ｂ、キモスタチンＡ、キモスタチンＢ、およびキモスタチンＣが挙げられる。

ペプチドアルデヒドのさらなる例は、国際公開第２０１０／０５５０５２号パンフレットおよび国際公開第２００９／１１８３７５号パンフレット、国際公開第９４／０４６５１号パンフレット、国際公開第９８／１３４５９号パンフレット、国際公開第９８／１３４６１号パンフレット、国際公開第９８／１３４６２号パンフレット、国際公開第２００７／１４５９６３号パンフレット（Ｐ＆Ｇ）に開示されている（参照により本明細書に組み込まれる。

ペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物
ペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物は、以上に記載のペプチドアルデヒドから誘導されうる。

特定例は、Ｃｂｚ−ＲＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｐｈ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＧ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＧ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｐｈ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＲＶ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＬＶ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＬＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＹＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｐｈ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＶ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＷＬＶ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＯ−ＣＯ−ＶＡ−ＮＨＣＨ−（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＮＣＯ−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＯ−ＣＯ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＯ−ＣＯ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｐｈ）−Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＳＯ₂−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＳＯ₂−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＰｈＣＨ₂Ｏ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））−Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＥｔＳＯ₂−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＰｈＣＨ₂ＳＯ₂−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＰｈＣＨ₂Ｏ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＬＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））−Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＰｈＣＨ₂Ｏ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＦＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＯ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＬＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、およびＦ−尿素−ＲＶ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈであり、ただし、Ｍ＝負電荷、Ｈ、Ｎａ、もしくはＫ、または他の対イオンである。

スブチリシン
スブチリシンは、セリンプロテアーゼのサブグループである。セリンプロテアーゼは、ペプチド結合の加水分解を触媒するかつ活性部位に必須のセリン残基が存在する酵素である（Ｗｈｉｔｅ，Ｈａｎｄｌｅｒ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ，１９７３“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，”Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，ＮＹ，ｐｐ．２７１−２７２）。スブチリシンは、Ｓｉｅｚｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｎｇ．４（１９９１）７１９−７３７およびＳｉｅｚｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６（１９９７）５０１−５２３により定義されるＩ−Ｓ１およびＩ−Ｓ２サブグループを含み、好ましくはそれらで構成される。セリンプロテアーゼの活性部位の構造が高度に保存されるので、本発明に係るスブチリシンは、Ｓｉｅｚｅｎ ｅｔ ａｌ．（ｓｕｐｒａ）により提案されたサブグループで表されるスブチラーゼと機能的に等価でありうる。

スブチリシンは、化学修飾または遺伝子修飾された突然変異体（タンパク質工学操作された変異体）を含めて、動物起源、植物起源、または微生物起源でありうる。スブチリシンの例は、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に由来するもの、たとえば、スブチリシンノボ、スブチリシンカールスバーグ、スブチリシンＢＰＮ’、スブチリシン３０９、スブチリシン１４７、およびスブチリシン１６８（国際公開第８９／０６２７９号パンフレットに記載）、ならびにプロテアーゼＰＤ１３８（国際公開第９３／１８１４０号パンフレット）である。例は、国際公開第９８／０２０１１５号パンフレット、国際公開第０１／４４４５２号パンフレット、国際公開第０１／５８２７５号パンフレット、国際公開第０１／５８２７６号パンフレット、国際公開第０３／００６６０２号パンフレット、および国際公開第０４／０９９４０１号パンフレットに記載されている。他の例は、国際公開第９２／１９７２９号パンフレット、国際公開第９８／２０１１５号パンフレット、国際公開第９８／２０１１６号パンフレット、国際公開第９８／３４９４６号パンフレット、国際公開第２０１１／０３６２６３号パンフレットに記載の変異体およびプロテアーゼの混合物である。

市販のスブチリシンの例としては、Ｋａｎｎａｓｅ（商標）、Ｅｖｅｒｌａｓｅ（商標）、Ｒｅｌａｓｅ（商標）、Ｅｓｐｅｒａｓｅ（商標）、Ａｌｃａｌａｓｅ（商標）、Ｄｕｒａｚｙｍ（商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ（商標）、Ｏｖｏｚｙｍｅ（商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ（商標）、Ｃｏｒｏｎａｓｅ（商標）、Ｐｏｌａｒｚｙｍｅ（商標）、Ｐｙｒａｓｅ（商標）、Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｔｒｙｐｓｉｎ ＮＯＶＯ（ＰＴＮ）、Ｂｉｏ−Ｆｅｅｄ（商標）ＰｒｏおよびＣｌｅａｒ−Ｌｅｎｓ（商標）Ｐｒｏ、Ｂｌａｚｅが挙げられる（すべてＮｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ，Ｂａｇｓｖａｅｒｄ，Ｄｅｎｍａｒｋから入手可能）。他の市販のスブチリシンとしては、Ｒｏｎｏｚｙｍｅ（商標）Ｐｒｏ、Ｍａｘａｔａｓｅ（商標）、Ｍａｘａｃａｌ（商標）、Ｍａｘａｐｅｍ（商標）、Ｏｐｔｉｃｌｅａｎ（商標）、Ｐｒｏｐｅｒａｓｅ（商標）、Ｐｕｒａｆａｓｔ（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ Ｏｘ（商標）、Ｐｕｒａｆａｃｔ Ｐｒｉｍｅ（商標）、Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（商標）、ＦＮ２（商標）、ＦＮ３（商標）、およびＦＮ４（商標）が挙げられる（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．、Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ、ＢＡＳＦ、またはＤＳＭから入手可能）。他の例は、Ｐｒｉｍａｓｅ（商標）およびＤｕｒａｌａｓｅ（商標）である。Ｂｌａｐ Ｒ、Ｂｌａｐ Ｓ、およびＢｌａｐ Ｘは、Ｈｅｎｋｅｌから入手可能である。

第２の酵素
スブチリシンに加えて、洗剤組成物は、任意選択で、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼ、ラッカーゼ、および／またはペルオキシダーゼなどの第２の酵素を含んでいてもよい。この組成物は、１種、２種、またはそれ以上の非スブチリシン酵素を含有していてもよい。

リパーゼおよびクチナーゼ
好適なリパーゼおよびクチナーゼとしては、細菌起源または菌類起源のものが挙げられる。化学修飾またはタンパク質工学操作された突然変異体が包含される。例としては、サーモマイセス属（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ）由来のリパーゼ、たとえば、欧州特許第２５８０６８号明細書および欧州特許第３０５２１６号明細書に記載のＴ．ラヌギノサス（Ｔ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）（旧名フミコラ・ラヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ））由来のリパーゼ、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）由来のクチナーゼ、たとえば、国際公開第９６／１３５８０号パンフレットに記載のＨ．インソレンス（Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓ）由来のクチナーゼ、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）のリパーゼ、たとえば、Ｐ．アルカリゲネス（Ｐ．ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）またはＰ．シュードアルカリゲネス（Ｐ．ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）（欧州特許第２１８２７２号明細書）、Ｐ．セパシア（Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ）（欧州特許第３３１３７６号明細書）、Ｐ．スツッツェリ（Ｐ．ｓｔｕｔｚｅｒｉ）（英国特許第１，３７２，０３４号明細書）、Ｐ．フルオレッセンス（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の種の株ＳＤ７０５（国際公開第９５／０６７２０号パンフレットおよび国際公開第９６／２７００２号パンフレット）、Ｐ．ウィスコンシネンシス（Ｐ．ｗｉｓｃｏｎｓｉｎｅｎｓｉｓ）（国際公開第９６／１２０１２号パンフレット）由来のリパーゼ、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）のリパーゼ、たとえば、Ｂ．サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）（Ｄａｒｔｏｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，１１３１：２５３−３６０）、Ｂ．ステアロサーモフィラス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（特開昭６４−７４４９９２号公報）、またはＢ．プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）（国際公開第９１／１６４２２号パンフレット）由来のリパーゼが挙げられる。

他の例は、リパーゼ変異体、たとえば、国際公開第９２／０５２４９号パンフレット、国際公開第９４／０１５４１号パンフレット、欧州特許第４０７２２５号明細書、欧州特許第２６０１０５号明細書、国際公開第９５／３５３８１号パンフレット、国際公開第９６／００２９２号パンフレット、国際公開第９５／３０７４４号パンフレット、国際公開第９４／２５５７８号パンフレット、国際公開第９５／１４７８３号パンフレット、国際公開第９５／２２６１５号パンフレット、国際公開第９７／０４０７９号パンフレット、国際公開第９７／０７２０２号パンフレット、国際公開第００／０６００６３号パンフレット、国際公開第２００７／０８７５０８号パンフレット、および国際公開第２００９／１０９５００号パンフレットに記載のものである。

好ましい市販のリパーゼ酵素としては、Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標）、Ｌｉｐｏｌａｓｅ Ｕｌｔｒａ（商標）、およびＬｉｐｅｘ（商標）、Ｌｅｃｉｔａｓｅ（商標）、Ｌｉｐｏｌｅｘ（商標）、Ｌｉｐｏｃｌｅａｎ（商標）、Ｌｉｐｏｐｒｉｍｅ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）が挙げられる。他の市販のリパーゼとしては、Ｌｕｍａｆａｓｔ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔ Ｉｎｃ）、Ｌｉｐｏｍａｘ（Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ／Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔ Ｉｎｃ）、およびＳｏｌｖａｙ製のバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の種のリパーゼが挙げられる。

アミラーゼ
好適なアミラーゼ（αおよび／またはβ）としては、細菌起源または菌類起源のものが挙げられる。化学修飾またはタンパク質工学操作された突然変異体が包含される。アミラーゼとしては、たとえば、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）から取得されるα−アミラーゼ、たとえば、より詳細には英国特許第１，２９６，８３９号明細書に記載されるバチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の特定の株から取得されるものが挙げられる。

有用なアミラーゼの例は、国際公開第９４／０２５９７号パンフレット、国際公開第９４／１８３１４号パンフレット、国際公開第９６／２３８７３号パンフレット、および国際公開第９７／４３４２４号パンフレットに記載の変異体、特定的には、次の位置、すなわち、１５、２３、１０５、１０６、１２４、１２８、１３３、１５４、１５６、１８１、１８８、１９０、１９７、２０２、２０８、２０９、２４３、２６４、３０４、３０５、３９１、４０８、および４４４の１つ以上に置換を有する変異体である。

市販のアミラーゼは、Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ、Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ Ｐｌｕｓ、Ｄｕｒａｍｙｌ（商標）、Ｔｅｒｍａｍｙｌ（商標）、Ｔｅｒｍａｍｙｌ Ｕｌｔｒａ、Ｎａｔａｌａｓｅ、Ｆｕｎｇａｍｙｌ（商標）、およびＢＡＮ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）、Ｒａｐｉｄａｓｅ（商標）およびＰｕｒａｓｔａｒ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．製）である。

リアーゼ
ペクチン酸リアーゼは、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に由来する野生型酵素、特定的には、Ｂ．リケルニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｒｎｉｆｏｒｍｉｓ）もしくはＢ．アガラドヘレンス（Ｂ．ａｇａｒａｄｈａｅｒｅｎｓ）に由来するものまたはこれらのいずれかに由来する変異体、たとえば、米国特許第６，１２４，１２７号明細書、国際公開第１９９９／０２７０８３号パンフレット、国際公開第１９９９／０２７０８４号パンフレット、国際公開第２００２／００６４４２号パンフレット、国際公開第２００２／０９２７４１号パンフレット、国際公開第２００３／０９５６３８号パンフレットに記載のものであってもよい。市販のペクチン酸リアーゼは、ＸＰｅｃｔ、Ｐｅｃｔａｗａｓｈ、およびＰｅｃｔａｗａｙ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）である。

マンナナーゼ
マンナナーゼは、ファミリー５または２６のアルカリマンナナーゼであってもよい。それは、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）またはフミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）に由来する野生型、特定的には、Ｂ．アガラドヘレンス（Ｂ．ａｇａｒａｄｈａｅｒｅｎｓ）、Ｂ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、Ｂ．ハロデュランス（Ｂ．ｈａｌｏｄｕｒａｎｓ）、Ｂ．クラウシー（Ｂ．ｃｌａｕｓｉｉ））、またはＨ．インソレンス（Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓ）に由来するものであってもよい。好適なマンナナーゼは、国際公開第１９９９／０６４６１９号パンフレットに記載されている。市販のマンナナーゼは、Ｍａｎｎａｗａｙ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）である。

セルラーゼ
好適なセルラーゼとしては、細菌起源または菌類起源のものが挙げられる。化学修飾またはタンパク質工学操作された突然変異体が包含される。好適なセルラーゼとしては、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）に由来するセルラーゼ、たとえば、米国特許第４，４３５，３０７号明細書、米国特許第５，６４８，２６３号明細書、米国特許第５，６９１，１７８号明細書、米国特許第５，７７６，７５７号明細書、および国際公開第８９／０９２５９号パンフレットに開示されている、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、マイセリオフトラ・サーモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、およびフザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）から産生される菌類のセルラーゼが挙げられる。

とくに好適なセルラーゼは、カラーケア効果を有するアルカリ性セルラーゼまたは中性セルラーゼである。そのようなセルラーゼの例は、欧州特許第０４９５２５７号明細書、欧州特許第０５３１３７２号明細書、国際公開第９６／１１２６２号パンフレット、国際公開第９６／２９３９７号パンフレット、国際公開第９８／０８９４０号パンフレットに記載のセルラーゼである。他の例は、セルラーゼ変異体、たとえば、国際公開第９４／０７９９８号パンフレット、欧州特許第０５３１３１５号明細書、米国特許第５，４５７，０４６号明細書、米国特許第５，６８６，５９３号明細書、米国特許第５，７６３，２５４号明細書、国際公開第９５／２４４７１号パンフレット、国際公開第９８／１２３０７号パンフレット、および国際公開第９９／０１５４４号パンフレットに記載のものである。

市販のセルラーゼは、Ｃｅｌｌｕｚｙｍｅ、Ｃｅｌｌｕｃｌｅａｎ、Ｅｎｄｌｏａｓｅ、Ｃａｒｅｚｙｍｅ、Ｒｅｎｏｚｙｍｅ、ｗｈｉｔｅｚｙｍｅ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）である。

ペプチドアルデヒドおよびヒドロ亜硫酸／重亜硫酸付加物の調製
ペプチドアルデヒドは、Ｍａｒｃｈ，Ｊ．Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｆｏｕｒｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＵＳ １９９２，ｐ８９５などの書籍に記載されるように、重亜硫酸ナトリウムとの反応により水溶性ヒドロ亜硫酸付加物に変換しうる。

ヒドロ亜硫酸付加物への変換は、可逆的である（たとえば、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９７８，１００，１２２８）。したがって、付加物は、液体洗剤中、液体スブチリシン配合物中、または洗浄／洗濯水中で、部分的にまたは完全に逆戻りしてペプチドアルデヒドを放出しうる。

対象のペプチドアルデヒドは、公知の方法により、たとえば、米国特許第４，７０３，０３６号明細書、米国特許第４，４７８，７４５号明細書、または米国特許第５，５７８，５７４号明細書に記載されるように、最終乾燥工程を省略して調製されうるか、またはＪ．Ｐｅｐｔ．Ｓｃｉ．２００７；１３；１−１５にレビューされたもしくはＳｙｎｔｈｅｓｉｓ １９８３，６７６に例示された方法のいずれかにより、調製されうる。ペプチドアルデヒドは、粗製でありうるか、または精製されて固体として単離されうるか、または有機溶媒により溶解状態を保持しうる。

重亜硫酸付加物の水性溶液は、公知の方法で、たとえば、国際公開第９８／４７５２３号パンフレット、米国特許第６，５００，８０２号明細書、米国特許第５，４３６，２２９号明細書、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９７８，１００，１２２８、Ｏｒｇ．Ｓｙｎｔｈ．，Ｃｏｌｌ．Ｖｏｌ．７：３６１に記載の方法で、対応するペプチドアルデヒドと重亜硫酸ナトリウム（亜硫酸水素ナトリウムＮａＨＳＯ₃）、重亜硫酸カリウム（ＫＨＳＯ₃）の水性溶液との反応により調製されうる。

洗剤組成物
洗剤は、顆粒洗剤または液体洗剤でありうる。液体洗剤は、固体（またはガス）ではない物理形態をとり、それは、注加可能な液体、注加可能なゲル、または注加不能なゲルでありうる。それは、等方性または構造性のいずれか、好ましくは等方性でありうる。それは、自動洗浄／洗濯機による洗浄／洗濯または手による洗浄／洗濯に有用な配合物を含む。洗剤は、少なくとも１種の界面活性剤を含有する。洗剤はまた、ビルダーを含みうる。

粒状洗剤組成物は、顆粒もしくは粉末でありうるか、または錠剤、ブリケット剤の形にプレスされた粉末／顆粒でありうる。組成物は、錠剤、棒剤、または多区画パウチを含めてパウチの形態をとりうる。組成物は、粉末、たとえば、自由流動性粉末、集塊スプレー乾燥粉末など、カプセル化物、押出し物、針状物、ヌードル、フレーク、またはそれらの任意の組合せの形態をとりうる。

洗剤成分は、水溶性パウチ内または錠剤の異なる層内の区画により、互いに物理的に分離することが可能である（以下の単位用量を参照されたい）。それにより、成分間の貯蔵時有害相互作用を回避することが可能である。また、各区画の異なる溶解プロファイルにより、洗浄／洗濯溶液中の所定の成分の遅延溶解を引き起こすことが可能である。

パウチは、組成物の保持に好適な任意の形態、形状、および材料でありうる。たとえば、水に接触する前にパウチから組成物を放出させないものでありうる。パウチは、内部空間を取り囲む水溶性フィルムから作製される。前記内部空間は、パウチの区画に分割することが可能である。好ましいフィルムは、高分子材料、好ましくはフィルム状またはシート状に形成されたポリマーである。好ましいポリマー、コポリマー、またはそれらの誘導体は、所定のポリアクリレートおよび水溶性アクリレートコポリマー、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ナトリウムデキストリン、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マルトデキストリン、ポリメタクリレート、最も好ましくはポリビニルアルコールコポリマーおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）である。好ましくは、フィルム中のポリマーたとえばＰＶＡのレベルは、少なくとも約６０％である。好ましい平均分子量は、典型的には、約２０，０００〜約１５０，０００であろう。フィルムはまた、グリセロール、エチレングリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、およびそれらの混合物のような可塑剤が加えられたポリアクチドおよびポリビニルアルコール（Ｃｈｒｉｓ Ｃｒａｆｔ Ｉｎ．Ｐｒｏｄ．Ｏｆ Ｇａｒｙ，Ｉｎｄ．，ＵＳにより販売されているＭ８６３０という商品名で知られる）などの加水分解性かつ水溶性のポリマーブレンドを含むブレンド組成物であってもよい。パウチは、水溶性フィルムにより分離された固体衣類クリーニング組成物もしくは部分成分および／または液体クリーニング組成物もしくは部分成分を含んでいてもよい。液体成分用の区画は、固体を含有する区画と組成が異なっていてもよい（たとえば、米国特許出願公開第２００９／００１１９７０号明細書を参照されたい）。

洗剤成分の選択は、テキスタイルの保護のために、クリーニングされるテキスタイルのタイプ、汚れのタイプおよび／または程度、クリーニングが行われる温度、ならびに洗剤製品の配合を考慮することを含みうる。以下に挙げられた成分は、特定の機能に従って一般的な見出しにより分類されているが、これは、当業者であればわかるであろうが、成分が追加の機能を含みうるので、限定要件とみなすべきはでない。

一実施形態では、本発明に係る安定化スブチリシン組成物は、洗浄／洗濯液１リットルあたり、０．００１〜１００ｍｇのタンパク質、たとえば０．０１〜１００ｍｇのタンパク質、好ましくは０．００５〜５０ｍｇのタンパク質、より好ましくは０．０１〜２５ｍｇのタンパク質、さらにより好ましくは０．０５〜１０ｍｇのタンパク質、最も好ましくは０．０５〜５ｍｇのタンパク質、さらに最も好ましくは０．０１〜１ｍｇのタンパク質に対応する量で洗剤組成物に添加されうる。

単位用量
単位用量製品は、再使用不能な容器中の単回用量のパッケージである。それは、衣類洗濯用および食器洗浄用の洗剤でますます使用されるようになっている。洗剤単位用量製品は、１回の洗浄／洗濯に使用される洗剤量のパッケージ（たとえば、水溶性フィルムから作製されたパウチの形態）である。

一態様では、洗剤組成物は、単位用量形態である。単位用量形態の洗剤製品は、錠剤、カプセル、サシェ、パウチなどを含む。ここで使用するために、一態様では、錠剤は、水溶性フィルムおよび水溶性パウチで包まれる。本発明に係る洗剤組成物の重量は、約１０〜約２５グラム、約１２〜約２４グラム、さらには１４〜２２グラムである。これらの重量は、自動食器洗浄用洗剤製品のディスペンサーに適合させるのにきわめて便利である。洗剤組成物を包囲する水溶性材料を有する単位用量製品の場合、水溶性材料は、組成物の一部とみなされない。一態様では、単位用量形態は、水溶性パウチ（すなわち、洗剤組成物を包囲する水溶性フィルム）であり、一態様では、複数の区画を形成する複数のフィルムを有する多区画パウチである。この構成は、組成物の適応性および最適化に寄与する。それにより、さまざまな成分の分離および制御放出が可能なる。一態様では、１つの区画は、固体形態の洗剤組成物を含有し、他の区画は、液体形態の洗剤組成物を含有する。

一態様では、多区画パウチの実施形態の２つの異なる区画は、２つの異なるクリーニング剤を含有しうる。一態様では、これらの２つの区画のフィルムは、異なる溶解プロファイルを有して、異なる時間で同一のまたは異なる作用剤の放出を可能にする。たとえば、１つの区画（第１の区画）からの作用剤は、汚れの除去に役立つように洗浄／洗濯プロセスの初期に送達可能であり、他の区画（第２の区画）からの第２の作用剤は、第１の区画からの作用剤の少なくとも２分後、さらには少なくとも５分後に送達可能である。

一態様では、他方の区画上に重畳された２つの並んだ区画を含み、少なくとも２つの異なる区画が２つの異なる洗剤組成物を含有する多区画パウチが、開示される。

多区画パックは、複数の区画を形成する複数の水溶性包囲材料により形成され、区画の１つは、洗剤組成物の一部または全部の成分を含有し、他の区画は、液体組成物を含有可能であり、液体組成物は、水性であり（すなわち、液体組成物の１０重量パーセント超の水を含む）、区画は、温水に可溶な材料で作製可能である。一実施形態では、１つの区画は、冷水に可溶な材料で作製される。それにより、さまざまな成分の分離および制御放出が可能なる。他の実施形態では、区画はすべて、温水に可溶な材料で作製される。

好適なパックは、他方の区画上に重畳された（すなわち上置された）少なくとも２つの並んだ区画を含み、とくに好適なのは、パウチである。この配置は、パックのコンパクト性、ロバスト性、および強度に寄与し、それに加えて、必要とされる水溶性材料の量を最小限に抑える。それは、３つの区画を形成するために、３片の材料を必要とするにすぎない。パックのロバスト性はまた、パックの物理的完全性を損なうことなく、非常に薄いフィルムの使用を可能にする。パックはまた、一定の幾何形状の機械ディスペンサーで使用するために区画を折り曲げる必要がないので、使用するのが非常に簡単である。パックの区画の少なくとも２つは、２つの異なる洗剤組成物を含有する。「異なる組成物」とは、本明細書では、少なくとも１つの成分が異なる洗剤組成物を意味する。

一態様では、区画の少なくとも１つは、固体洗剤組成物を含有し、他の区画は、水性液体洗剤組成物を含有し、組成物は、典型的には、約２０：１〜約１：２０、約１８：１〜約２：１、または約１５：１〜約５：１の固体対液体重量比である。この種のパックは、広範にわたる固体：液体比の値を有する組成物を収容可能であるので、非常に汎用性がある。洗剤成分の多くは、固体形態で、一態様では粉末形態で使用するのにとくに好適であるので、パウチは、高い固体：液体比を有する。本明細書に定義される固体：液体比は、パック中のすべての固体組成物の重量とすべての液体組成物の重量との間の関係を意味する。

好適な固体：液体重量比は、約２：１〜約１８：１または約５：１〜約１５：１である。これらの重量比は、洗剤の成分のほとんどが液体形態である場合に好適である。

一態様では、２つの並んだ区画は、同一であっても異なっていてもよい液体洗剤組成物を含有し、他の区画は、固体洗剤組成物、たとえば粉末形態のもの、一態様では緻密化粉末を含有する。固体組成物は、パックの強度およびロバスト性に寄与する。

ディスペンサーに適合させるために、とくに自動食器洗浄機では、この場合の単位用量形態の製品は、正方形または長方形の底面および約１〜約５ｃｍまたは約１〜約４ｃｍの高さを有する。一態様では、固体組成物の重量は、約５〜約２０グラムまたは約１０〜約１５グラムであり、液体組成物の重量は、約０．５〜約４グラムまたは約０．８〜約３グラムである。一態様では、異なる区画を形成するフィルムの少なくとも２つは、同一条件下で異なる溶解性を有する。これにより、部分的にまたは完全に包囲された組成物を異なる時間で放出することが可能なる。

多区画パウチの成分の制御放出は、フィルムの厚さおよび／またはフィルム材料の溶解性を変化させることにより達成可能である。国際公開第２００２／１０２９５５号パンフレットに記載されるように、たとえばフィルムを架橋することにより、フィルム材料の溶解を遅らせることが可能である。濯ぎ液中への放出のために設計された他の水溶性フィルムは、米国特許第４，７６５，９１６号明細書および米国特許第４，９７２，０１７号明細書に記載されている。フィルムのワックス被覆（米国特許第５，４５３，２１６号明細書を参照されたい）は、濯ぎ液中への放出に役立ちうる。ｐＨ制御放出手段、特定的には、選択的アセチル化度を有するアミノアセチル化ポリサッカリドは、米国特許第５，４５３，２１６号明細書に記載されている。

異なる溶解性を有するフィルムで区画が作製された異なる区画を有する多区画パウチにより遅延放出を得る他の手段は、米国特許第６，７２７，２１５号明細書に教示されている。

界面活性剤
洗剤組成物は、アニオン性および／またはカチオン性および／または非イオン性および／または半極性および／または双性イオン性またはそれらの混合物であってもよい１種以上の界面活性剤を含みうる。特定の実施形態では、洗剤組成物は、１種以上の非イオン性界面活性剤と１種以上のアニオン性界面活性剤との混合物を含むが、個別に使用することも可能である。

界面活性剤は、典型的には、約０．１重量％〜６０重量％、たとえば、約１％〜約４０％または約３％〜約２０％または約３％〜約１０％のレベルで存在する。界面活性剤は、所望のクリーニング用途に基づいて選択され、当技術分野で公知の任意の従来型の界面活性剤を含む。洗剤で使用することが当技術分野で公知の任意の界面活性剤を利用しうる。

アニオン性界面活性剤の例としては、スルフェートおよびスルホネート、特定的には、線状アルキルベンゼンスルホネート（ＬＡＳ）、ＬＡＳの異性体、分岐状アルキルベンゼンスルホネート（ＢＡＢＳ）、フェニルアルカンスルホネート、α−オレフィンスルホネート（ＡＯＳ）、オレフィンスルホネート、アルケンスルホネート、アルカン−２，３−ジイルビス（スルフェート）、ヒドロキシアルカンスルホネートおよびジスルホネート、アルキルスルフェート（ＡＳ）、たとえば、ナトリウムドデシルスルフェート（ＳＤＳ）、脂肪アルコールスルフェート（ＦＡＳ）、第一級アルコールスルフェート（ＰＡＳ）、ナトリウムラウリルエーテルスルフェート（ＳＬＥＳ）を含むアルコールエーテルスルフェート（ＡＥＳまたはＡＥＯＳまたはＦＥＳ、アルコールエトキシスルフェートまたは脂肪アルコールエーテルスルフェートとしても知られる）、石鹸または脂肪酸、第二級アルカンスルホネート（ＳＡＳ）、パラフィンスルホネート（ＰＳ）、エステルスルホネート、スルホン化脂肪酸グリセロールエステル、メチルエステルスルホネート（ＭＥＳ）を含むα−スルホ脂肪酸メチルエステル（α−ＳＦＭｅまたはＳＥＳ）、アルキルまたはアルケニルコハク酸、ドデセニル／テトラデセニルコハク酸（ＤＴＳＡ）、アミノ酸の脂肪酸誘導体、スルホコハク酸またはスルホ石鹸のジエステルおよびモノエステル、ならびにそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

洗剤は、その中に含む場合、通常、約１重量％〜約４０重量％、たとえば、約５％〜約３０％、たとえば、約５％〜約１５％または約２０％〜約２５％のアニオン性界面活性剤を含有するであろう。

非イオン性界面活性剤の例としては、アルコールエトキシレート（ＡＥまたはＡＥＯ）、アルコールプロポキシレート、プロポキシル化脂肪アルコール（ＰＦＡ）、アルコキシル化脂肪酸アルキルエステル、たとえば、エトキシル化および／またはプロポキシル化脂肪酸アルキルエステル、アルキルフェノールエトキシレート（ＡＰＥ）、ノニルフェノールエトキシレート（ＮＰＥ）、アルキルポリグリコシド（ＡＰＧ）、アルコキシル化アミン、脂肪酸モノエタノールアミド（ＦＡＭ）、脂肪酸ジエタノールアミド（ＦＡＤＡ）、エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド（ＥＦＡＭ）、プロポキシル化脂肪酸モノエタノールアミド（ＰＦＡＭ）、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、またはグルコサミンＮ−アシルＮ−アルキル誘導体（グルカミドＧＡまたは脂肪酸グルカミドＦＡＧＡ）、さらにはＳＰＡＮおよびＴＷＥＥＮという商品名で入手可能な製品、ならびにそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

洗剤は、その中に含む場合、通常、約０．２重量％〜約４０重量％、たとえば、約０．５％〜約３０％、特定的には、約１％〜約２０％、約３％〜約１０％、たとえば、約３％〜約５％または約８％〜約１２％の非イオン性界面活性剤を含有するであろう。

ビルダー
洗剤組成物は、約０〜６５重量％の洗剤ビルダーもしくはコビルダーまたはそれらの混合物を含有しうる。食器洗浄洗剤では、ビルダーのレベルは、典型的には４０〜６５％、特定的には５０〜６５％である。ビルダーおよび／またはコビルダーは、特定的にはＣａおよびＭｇとの水溶性錯体を形成するキレート化剤でありうる。衣類洗剤で使用することが当技術分野で公知の任意のビルダーおよび／またはコビルダーを利用しうる。ビルダーの例としては、ゼオライト、ジホスフェート（ピロホスフェート）、トリホスフェートたとえば三リン酸ナトリウム（ＳＴＰまたはＳＴＰＰ）、ニトリロ三酢酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸、アルキルまたはアルケニルコハク酸、カーボネート、たとえば、炭酸ナトリウム、可溶性シリケート、たとえば、メタケイ酸ナトリウム、層状シリケート類（たとえば、Ｈｏｅｃｈｓｔ製のＳＫＳ−６）、エタノールアミン、たとえば、２−アミノエタン−１−オール（ＭＥＡ）、イミノジエタノール（ＤＥＡ）および２，２’，２”−ニトリロトリエタノール（ＴＥＡ）、およびカルボキシメチルイヌリン（ＣＭＩ）、ならびにそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

ビルダーは、強いビルダー、たとえば、メチルグリシンジ酢酸（「ＭＧＤＡ」）またはＮ，Ｎ−ジカルボキシメチルグルタミン酸テトラナトリウム塩（ＧＬＤＡ）であってもよく、中程度のビルダー、たとえば、ナトリウム−トリ−ポリホスフェート（ＳＴＰＰ）であってもよく、弱いビルダー、たとえば、クエン酸ナトリウムであってもよい。

漂白系
洗剤組成物は、０〜５０重量％の漂白系を含有しうる。衣類洗剤で使用することが当技術分野で公知の任意の漂白系を利用しうる。好適な漂白系成分としては、漂白触媒、光漂白剤、漂白活性化剤、過酸化水素源たとえば過炭酸ナトリウムおよび過ホウ酸ナトリウム、前形成過酸、およびそれらの混合物が挙げられる。好適な前形成過酸としては、ペルオキシカルボン酸および塩、過炭酸および塩、過イミド酸および塩、ペルオキシ一硫酸および塩、たとえばＯｘｏｎｅ（Ｒ））、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。漂白系の例としては、たとえば、過ホウ酸のナトリウム塩（通常、一水和物または四水和物）などのアルカリ金属塩、過炭酸塩、過硫酸塩、過リン酸塩、過ケイ酸塩をはじめとする無機塩を、過酸形成漂白活性化剤と組み合わせて含みうる、過酸化物に基づく漂白系が挙げられるが、これに限定されるものではない。漂白活性化剤とは、本明細書では、過酸化水素のような過酸素漂白剤と反応して過酸を形成する化合物を意味する。こうして形成された過酸は、活性化漂白剤を構成する。ここで使用するのに好適な漂白活性化剤としては、エステル、アミド、イミド、またはアンヒドリドのクラスに属するものが挙げられる。好適な例は、テトラセチルアチレンジアミン（ＴＡＥＤ）、ナトリウム３，５，５トリメチルヘキサノイルオキシベンゼンスルホネート、ジペルオキシドデカン酸、４−（ドデカノイルオキシ）ベンゼンスルホネート（ＬＯＢＳ）、４−（デカノイルオキシ）ベンゼンスルホネート、４−（デカノイルオキシ）ベンゾエート（ＤＯＢＳ）、４−（３，５，５−トリメチルヘキサノイルオキシ）ベンゼンスルホネート（ＩＳＯＮＯＢＳ）、テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）、および４−（ノナノイルオキシ）ベンゼンスルホネート（ＮＯＢＳ）、ならびに／または国際公開第９８／１７７６７号パンフレットに開示されるものである。対象の漂白活性化剤の特定のファミリーは、欧州特許第６２４１５４号明細書に開示されており、そのファミリーでとくに好ましいのは、アセチルトリエチルシトレート（ＡＴＣ）である。ＡＴＣまたはＴｒｉａｃｉｎのような短鎖トリグリセリドは、最終的にクエン酸およびアルコールに分解するので環境にやさしいという利点を有する。さらに、アセチルトリエチルシトレートおよびトリアセチンは、貯蔵時、製品中で良好な加水分解安定性を有し、効率的な漂白活性化剤である。最後に、ＡＴＣは、洗濯添加剤に良好なビルダー能を提供する。他の選択肢として、漂白系は、たとえば、アミド型、イミド型、またはスルホン型のペルオキシ酸を含みうる。漂白系はまた、６−（フタロイルアミノ）過カプロン酸（ＰＡＰ）などの過酸を含みうる。漂白系はまた、漂白触媒を含みうる。

当技術分野でいずれも周知の洗剤組成物の他の成分としては、ヒドロトロープ剤、布染色剤、消泡剤、防汚性ポリマー、再付着防止剤などが挙げられる。

方法および組成物
第１の態様では、本発明は、スブチリシンと式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍを有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物とを含む組成物を提供する。式中、
ａ）Ｍは、Ｈ（水素）またはアルカリ金属であり、
ｂ）Ｒは、ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯをＬまたはＤ−アミノ酸残基であるようにする基であり、
ｃ）Ｂ¹は、１個のアミノ酸残基であり、かつ
ｄ）Ｘは、１個以上のアミノ酸残基で構成され、任意選択でＮ末端保護基を含んでいてもよい。

一実施形態では、Ｒは、ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯをＴｙｒ、ｍ−チロシン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＮｌｅのＬまたはＤ−アミノ酸残基であるようにする基である。

一実施形態では、Ｂ¹は、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、またはＮｌｅの残基である。

一実施形態では、Ｘは、Ｂ²、Ｂ³−Ｂ²、Ｚ−Ｂ２、またはＺ−Ｂ³−Ｂ²である。ただし、Ｂ²およびＢ³は、それぞれ、１個のアミノ酸残基を表し、かつＺは、Ｎ末端保護基である。好ましくは、Ｂ２は、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、またはＴｈｒの残基である。好ましくは、Ｂ３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、フェニルグリシン、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、またはＩｌｅの残基である。

一実施形態では、Ｚは、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルカルボニル（ＭＯＺ）、ベンジル（Ｂｎ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）、ｐ−メトキシフェニル（ＰＭＰ）、ホルミル、アセチル（Ａｃ）、メチルオキシ、またはメチルオキシカルボニルである。

一実施形態では、組成物は、液体形態または顆粒形態である。好ましくは、組成物は、界面活性剤をさらに含む洗剤である。

一実施形態では、組成物は、第２の酵素、特定的には、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼ、ラッカーゼ、またはペルオキシダーゼをさらに含む。

他の態様では、本発明は、以上に記載の本発明に係る組成物の調製方法を提供する。この方法は、スブチリシンと、以上に記載の式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍを有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物を含む水性溶液と、任意選択で界面活性剤と、を混合することを含む。

さらに他の態様では、本発明は、本発明に係る組成物で使用するための化合物を提供する。この化合物は、式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍを有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物である。式中、ＭおよびＸは、以上に記載されるように定義され、Ｂ¹は、プロリン（Ｐｒｏ）とは異なるアミノ酸残基、かつＲは、ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯをＴｙｒ、ｍ−チロシン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｎｖａ、またはＮｌｅのＬまたはＤ−アミノ酸残基であるようにする基である。

一実施形態では、この化合物は、Ｃｂｚ−ＲＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＧ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＲＶ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＬＶ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＬＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＹＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＶ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−ＨまたはＡｃ−ＷＬＶ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈである。ここで、Ａｃは、アセチルであり、かつＣｂｚは、ベンジルオキシカルボニルである。

さらに他の態様では、本発明は、本発明に係る組成物で使用するための化合物を提供する。この化合物は、式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍを有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物である。式中、Ｍ、Ｒ、およびＸは、以上に記載されるように定義され、Ｂ¹は、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、グリシン（ＧＩｙ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、およびノルロイシン（Ｎｌｅ）のアミノ酸残基である。

一実施形態では、この化合物は、Ｃｂｚ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｐｈ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＧ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｐｈ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｐｈ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＯ−ＣＯ−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＮＣＯ−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＯ−ＣＯ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）−Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＯ−ＣＯ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｐｈ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＳＯ₂−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＳＯ₂−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＰｈＣＨ₂Ｏ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＥｔＳＯ₂−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＰｈＣＨ₂ＳＯ₂−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）−Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＰｈＣＨ₂Ｏ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＬＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＰｈＣＨ₂Ｏ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＦＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、およびＭｅＯ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＬＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈである。ここで、Ａｃは、アセチルであり、かつＣｂｚは、ベンジルオキシカルボニルである。

さらに他の態様では、本発明は、本発明に係る組成物で使用するための化合物を提供する。この化合物は、式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍを有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物である。式中、ＲおよびＭは、以上に記載されるように定義され、Ｂ¹は、プロリン（Ｐｒｏ）とは異なる１個のアミノ酸残基を表し、Ｘは、Ｂ²、Ｂ³−Ｂ²、Ｚ−Ｂ²、Ｚ−Ｂ³−Ｂ²であり、ただし、Ｂ³およびＢ²は、それぞれ、１個のアミノ酸残基を表し、かつＺは、Ｎ末端保護基であり、Ｂ²は、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、またはＶａｌである。

さらに他の態様では、本発明は、本発明に係る組成物で使用するための化合物を提供する。この化合物は、式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍを有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物である。式中、ＲおよびＭは、以上に記載されるように定義され、Ｂ¹は、プロリン（Ｐｒｏ）とは異なる１個のアミノ酸残基を表し、Ｘは、Ｂ³−Ｂ²、Ｚ−Ｂ³−Ｂ²であり、ここで、Ｂ³およびＢ²は、それぞれ、１個のアミノ酸残基を表し、かつＺは、Ｎ末端保護基であり、Ｂ³は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、フェニルグリシン、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、またはＩｌｅである。

緩衝剤および基質として使用される化学品は、少なくとも試薬グレードの市販品であった。

実施例１
ペプチドアルデヒドのヒドロ亜硫酸付加物の調製
以上に記載の式Ｘ−Ｂ¹−Ｂ⁰−Ｈを有するペプチドアルデヒドを、対応する重亜硫酸付加物に変換する。周囲温度の８ｍｌのエチルアセテート中の１ｍｍｏｌのＸ−Ｂ¹−Ｂ⁰−Ｈの撹拌懸濁液に、６ｍｌの水中の１．０６ｍｍｏｌの重亜硫酸ナトリウム（１１４ｍｇ）を滴下し、次いで、反応系を２時間撹拌する。水性相を単離し、有機層を２×２ｍｌの水で洗浄する。合わせた水性相を凍結乾燥させて、白色粉末としてＸ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｎａ（予測収率６６％）を与える。

実施例２
ペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物の液体配合物の調製。
４ｍｍｏｌの固体Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｎａを６ｇの脱塩水中に溶解させ、３５℃で３０分間攪拌し、続いて、冷却し、Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｎａの２５％水性溶液を与える。他の選択肢として、以上の合成からの水性相は、後続の工程で酵素安定化に供すべく容易に使用可能であり、この溶液は、約３％（ｗ／ｗ）である。

実施例３
スブチリシンとペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物とを含む安定化スブチリシン配合物の調製。
３．６％の以上の２５％水性溶液を用いて、市販のＳａｖｉｎａｓｅ １６Ｌ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ，Ｂａｇｓｖａｅｒｄ，Ｄｅｎｍａｒｋ）に、０．９％のＸ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｎａを添加する。

実施例４
ヒドロ亜硫酸付加物によるスブチリシンの安定化
スブチリシン（Ｓａｖｉｎａｓｅ １６Ｌ）およびリパーゼ（Ｌｉｐｅｘ １００Ｌ）を含み、Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｎａを含むまたは含まない洗剤（スブチリシンを含有する洗剤にペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物を個別に添加することが可能である）を−１８℃、３５℃、および４０℃で密閉ガラス容器中に配置し、さまざまな時間の後、標準的分析方法を用いてプロテアーゼおよびリパーゼの残存活性を測定する（プロテアーゼは、４０℃、ｐＨ８．３でＮ，Ｎ−ジメチルカゼインの加水分解により、およびリパーゼは、４０℃、ｐＨ７．７でｐＮｐ−バレレートの加水分解により）。好適量のペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物をすでに含有する洗剤にスブチリシンを添加することにより、類似の試験を行うことが可能である。すべての記載のペプチドアルデヒド重亜硫酸付加物で、類似の結果を得ることが可能である。

安定化スブチリシン配合物を含む洗剤組成物の一例として、表１に記載の組成物を作製した。

表２に示されているのは、Ｘ＝Ｃｂｚ−Ｇｌｙ、Ｂ¹＝Ａｌａ、Ｒ＝−ＣＨ₂ｐ（Ｃ₆Ｈ₄）−ＯＨを用いて得られた結果であり、表１に記載の洗剤で４０℃１週間のインキュベーション後に測定した安定性である。

ペプチドアルデヒドのヒドロ亜硫酸付加物の添加によるスブチリシンの安定化が、結果から実証される。

実施例５
スブチリシンおよびリパーゼの安定化
安定化スブチリシン配合物を含む洗剤組成物の一例として、表３に記載の組成物を作製した。

表４に示されているのは、表３に記載の洗剤で３５℃２週間のインキュベーション後に測定された結果である。

ペプチドアルデヒドのヒドロ亜硫酸付加物の添加によりスブチリシンおよび第２の酵素（リパーゼ）を安定化させることが可能であり、しかも先行技術の安定化剤よりも効果的であることが、結果から実証される。

実施例６
スブチリシンおよびリパーゼの安定化
安定化スブチリシン配合物を含む洗剤のさらに他の例として、表５に記載の組成物を作製した。

表６に示されているのは、表５に記載の洗剤で３７℃４週間のインキュベーション後および３０℃８週間のインキュベーション後に測定された結果である。

ペプチドアルデヒドのヒドロ亜硫酸付加物の添加によりスブチリシンおよび種々のスブチリシンに対する第２の酵素（リパーゼ）を安定化させることが可能であることが、結果から確認される。

Claims (15)

1. スブチリシンと、式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍ
   （式中、
   ａ）Ｍは、Ｈ（水素）またはアルカリ金属であり、
   ｂ）Ｒは、ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯをＬまたはＤ−アミノ酸残基であるようにする基であり、
   ｃ）Ｂ¹は、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、またはＮｌｅの残基であり、かつ
   ｄ）Ｘは、Ｚ−Ｂ ² またはＺ−Ｂ ³ −Ｂ ² であり、ここで、Ｂ ² およびＢ ³ が、それぞれ、１個のアミノ酸残基を表し、かつＺが、Ｎ末端保護基であり、Ｂ ² が、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、またはＴｈｒの残基であり、そしてＢ ³ が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、フェニルグリシン、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、またはＩｌｅの残基である）
   を有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物と、を含む組成物。
2. Ｒが、ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯをＴｙｒ、ｍ−チロシン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＮｌｅのＬまたはＤ−アミノ酸残基であるようにする基である、請求項１に記載の組成物。
3. Ｘが、Ｚ−Ｂ ² （式中、Ｂ ² およびＺは、請求項１のように定義される）である、請求項１または２に記載の組成物。
4. Ｂ ² が、Ｇｌｙ、Ａｒｇ、またはＬｅｕの残基である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
5. Ｂ ³ が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、または、Ｌｅｕの残基である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
6. Ｚが、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルカルボニル（ＭＯＺ）、ベンジル（Ｂｎ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）、ｐ−メトキシフェニル（ＰＭＰ）、ホルミル、アセチル（Ａｃ）、メチルオキシ、またはメチルオキシカルボニルである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
7. 液体形態または顆粒形態である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
8. 界面活性剤をさらに含む洗剤である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
9. 第２の酵素、特定的には、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼ、ラッカーゼ、またはペルオキシダーゼをさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
10. スブチリシンと、式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍ（式中、Ｍ、Ｒ、Ｂ¹、およびＸは、請求項１のように定義される）を有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物を含む水性溶液と、任意選択で界面活性剤と、を混合することを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物の調製方法。
11. 式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍ（式中、ＭおよびＸは、請求項１のように定義され、Ｂ¹は、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、またはＮｌｅの残基であり、かつＲは、ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯをＴｙｒ、ｍ−チロシン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｎｖａ、またはＮｌｅのＬまたはＤ−アミノ酸残基であるようにする基である）を有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物で使用するための化合物。
12. Ｃｂｚ−ＲＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＧ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＲＶ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＬＶ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＬＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＹＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＶ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−ＨまたはＡｃ−ＷＬＶ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₄ＯＨ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ（ここで、Ａｃは、アセチルであり、かつＣｂｚは、ベンジルオキシカルボニルである）である、請求項１１に記載の化合物。
13. Ｃｂｚ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｐｈ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ｃｂｚ−ＧＧ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｐｈ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｐｈ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、Ａｃ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＯ−ＣＯ−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＮＣＯ−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＯ−ＣＯ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））−Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＯ−ＣＯ−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｐｈ）Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＳＯ₂−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＭｅＳＯ₂−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＰｈＣＨ₂Ｏ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＥｔＳＯ₂−ＦＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＰｈＣＨ₂ＳＯ₂−ＶＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））−Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＰｈＣＨ₂Ｏ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＬＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、ＰｈＣＨ₂Ｏ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＦＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ、およびＭｅＯ（ＯＨ）（Ｏ）Ｐ−ＬＧＡ−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂））Ｃ（ＯＨ）（ＳＯ₃Ｍ）−Ｈ（ここで、Ａｃは、アセチルであり、かつＣｂｚは、ベンジルオキシカルボニルである）である、請求項１１に記載の化合物。
14. 式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍ（式中、ＲおよびＭは、請求項１のように定義され、Ｂ¹は、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、またはＮｌｅの残基を表し、Ｘは、Ｚ−Ｂ²、Ｚ−Ｂ³−Ｂ²であり、Ｂ³およびＢ²は、それぞれ、１個のアミノ酸残基を表し、Ｚは、Ｎ末端保護基であり、Ｂ ³ は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、フェニルグリシン、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、またはＩｌｅであり、かつＢ²は、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、またはＶａｌである）を有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物で使用するための化合物。
15. 式Ｘ−Ｂ¹−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＨＯＨ−ＳＯ₃Ｍ（式中、ＲおよびＭは、請求項１のように定義され、Ｂ¹は、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、またはＮｌｅの残基を表し、Ｘは、Ｚ−Ｂ³−Ｂ²であり、Ｂ³およびＢ²は、それぞれ、１個のアミノ酸残基を表し、Ｚは、Ｎ末端保護基であり、Ｂ ³は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、フェニルグリシン、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、またはＩｌｅであり、かつＢ ² は、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、またはＴｈｒの残基である）を有するペプチドアルデヒドヒドロ亜硫酸付加物である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物で使用するための化合物。