JP6357616B2 - シート状免疫学的検査具 - Google Patents

Description

この発明は、シート状免疫学的検査具、詳しくは抗原抗体反応を利用した臨床検体の免疫学的な検査に用いられるシート状免疫学的検査具に関する。

生体から採取された血液、血清、尿などの検体（展開溶媒）中に含まれる目的物質（抗原または抗体）を簡易に検出する免疫学的検査具として、抗原抗体反応を利用したイムノクロマト法によるものが知られている。この免疫学的検査具は、毛細管現象によって輸液可能な帯状展開媒体（クロマトグラフィー媒体）を有し、その一端から他端に向かって、検体滴下ゾーンと、標識試薬を含有した標識試薬ゾーンと、検体に含まれる目的物質を検出する検出ゾーンとを有している。
検査時、検体滴下ゾーンに検体を滴下することにより、検体が帯状展開媒体の他端に向かって展開し、標識試薬ゾーンにおいて検体中の目的物質と標識物質とが結合して複合体が形成され、検出ゾーンにおいて検体中の複合体が捕捉物質により捕捉される。その後、この検出ゾーンで標識物質の発色の有無を観察することにより、検体が目的物質を含む陽性であるか、そうでない陰性であるかを判定する。

従来、このようなイムノクロマト法を利用した廉価で薄肉なシート状免疫学的検査具として、例えば、特許文献１に記載されたクロマトグラフィ・アッセイ装置が知られている。これは、第１の対置成分（表疎水性シート）と第２の対置成分（裏疎水性シート）とをヒンジを介して折り畳み自在に連結した二つ折り式のシート材（疎水性積層シート材）を有し、第１の対置成分の裏面の中央部から一端部にかけて、クロマトグラフィ媒体（帯状展開媒体）を固定したものである。第１の対置成分の中央部には、検出ゾーンでの目的物質の検出結果を視認する窓が形成されている。また、第２の対置成分の表面（使用状態での上面）の一端部には、両対置成分を折り畳んで二つ折りのシート材（シート状ケース）とした際、クロマトグラフィ媒体の一端部に当接し、かつ検体が滴下される多孔性素材を有した検体調製ゾーンが設けられている。

特許文献１による検査時には、まず検体調製ゾーンに検体を滴下し、その後、両対置成分をヒンジを中心に二つ折りして固定する。これにより、検体調製ゾーンの多孔性素材がクロマトグラフィ媒体の一端部に押し付けられる。その結果、検体調製ゾーンに滴下された検体がクロマトグラフィ媒体に移動する。この状態で、第２の対置成分を下に向けてシート材をテーブルに載置し、その後は、上述したクロマトグラフィ媒体での検体の展開、これに伴う標識試薬ゾーンでの標識物質と目的物質との結合、検出ゾーンでの標識物質−目的物質の複合体の捕捉が順次行われる。

特許第３５８５９３３号公報

ところで、特許文献１のクロマトグラフィ・アッセイ装置では、検体調製ゾーンに検体を滴下することで、二つ折りされたシート材の内部空間において、多孔性素材が膨潤するとともに、クロマトグラフィ媒体も、検体の展開に伴い検体を吸収しながら、徐々に膨潤して行く。この膨潤時の力（内圧）により、二つ折りのシート材は徐々に押し広げられ、一部のクロマトグラフィ媒体において、クロマトグラフィ媒体と、この媒体の外面に検体を介して接触していたシート材の内面部分との間に空気層が形成される。この空気層は、帯状展開媒体内での検体の移動を乱す外乱要因の１つとなる。そのため、各クロマトグラフィ媒体内で展開中の媒体の移動速度に差が生じ、各検出ゾーンにおいて、検体の検出結果を略同時に得ることは困難となっていた。この問題は、複数のクロマトグラフィ媒体を第1の対置成分に配設した場合に顕著となる。

また、特許文献１のクロマトグラフィ・アッセイ装置では、このようにシート材を二つ折りにした際、第１の対置成分と第２の対置成分とにより、多孔性素材およびクロマトグラフィ媒体が、仕切りのない状態で、厚さ方向から押圧されていた。そのため、多孔性素材やクロマトグラフィ媒体から、それぞれに含まれた検体がシート材の内部空間に漏出していた。これにより、例えば複数のクロマトグラフィ媒体を第１の対置成分に配設し、これらを利用して異なる検体を検査する場合、各クロマトグラフィ媒体などから漏出した検体が、二つ折りのシート材の内部空間で混ざり合い、各クロマトグラフィ媒体の検出ゾーンにおいて目的物質の正確な検査ができなかった。

また、界面活性剤が含まれた検体の場合には、特許文献１に記載のクロマトグラフィ・アッセイ装置では、内部空間に検体が広がり、目的物質の正確な検査ができなかった。

そこで、発明者は鋭意研究の結果、シート材として、表疎水性シートと裏疎水性シートとの間に、少なくとも１枚の中間疎水性シートを一体的に挟み込んだ疎水性積層シート材を採用し、複数の帯状展開媒体を、中間疎水性シートに形成した複数の媒体収納孔に個別に収納するとともに、中間疎水性シートと裏疎水性シートとを対向領域の全域において接合し、表疎水性シートと中間疎水性シートとは、複数の媒体収納孔を囲むように対向領域の外周部を接合すれば、上述した問題は全て解消することを知見し、この発明を完成させた。

すなわち、この発明は、廉価で嵩張らず、かつ複数の帯状展開媒体を利用して、異なる検体でも混ざり合うことなく、たとえ界面活性剤が含まれたとしても、各検体中の目的物質を同時かつ正確に検査することができるシート状免疫学的検査具を提供することを目的としている。

請求項１に記載の発明は、検出される目的物質を含む検体を、毛細管現象によって輸液可能な複数の帯状展開媒体と、表疎水性シートと裏疎水性シートとの間に、少なくとも１枚の中間疎水性シートを挟み込んだ疎水性積層シート材とを備え、前記複数の帯状展開媒体には、それぞれの長さ方向の一端から他端に向かって、前記検体を滴下する検体滴下ゾーンと、前記目的物質を標識する標識試薬を含有した標識試薬ゾーンと、前記検体に含まれる目的物質を捕捉する捕捉物質を含有した検出ゾーンとが順番に配置されたシート状免疫学的検査具であって、前記中間疎水性シートには、その表裏面を貫通して、前記複数の帯状展開媒体を収納する複数の媒体収納孔が並列状態で形成され、前記表疎水性シートには、前記複数の帯状展開媒体の検体滴下ゾーンに前記検体を滴下するための複数の滴下用窓と、前記複数の帯状展開媒体の検出ゾーンを露出する複数の判定用窓とがそれぞれ離間して形成され、前記中間疎水性シートと前記裏疎水性シートとは、それぞれの対向領域の全域において接合され、前記複数の帯状展開媒体は、それぞれの長さ方向の一端から他端の向きを揃えて、対応する前記媒体収納孔に収納した状態で、前記裏疎水性シートの中間疎水性シート接合側の面に接合され、前記表疎水性シートと前記中間疎水性シートとは、前記複数の媒体収納孔を囲むように、それぞれの対向領域の外周部が接合されたシート状免疫学的検査具である。

請求項１に記載の発明によれば、検体を、各滴下用窓から各帯状展開媒体の一端部の検体滴下ゾーンに滴下し、これらの検体中の目的物質の検査を行う。各帯状展開媒体は毛細管現象によって輸液可能な構造を有している。そのため、検体滴下ゾーンに滴下された検体は帯状展開媒体の他端側に向かって輸液される。その途中、標識試薬ゾーンにおいて、検体中の目的物質と標識物質とが結合して複合体を形成し、検出ゾーンにおいて、検体中の複合体が捕捉物質により捕捉されるか否かを、判定用窓を通した標識物質の発色の有無により観察する。すなわち、この発色を視認できた場合、検体中に目的物質が存在する陽性と判定され、そうでない場合には陰性と判定される。

また、表疎水性シートと中間疎水性シートとは、複数の媒体収納孔を囲むように、それぞれの対向領域の外周部の全体が接合されている。そのため、滴下された検体を各帯状展開媒体が吸収して膨潤しても、その膨潤時の力（帯状展開媒体が膨らむことで、両疎水性シートに作用する内圧）を原因として、表疎水性シートと中間疎水性シートとのあいだに隙間は現出しにくい。これにより、各帯状展開媒体をそれぞれの他端に向かって展開（移動）する各検体（目的物質）の移動速度は安定し、その結果、各検出ゾーンにおいて、全ての検体の検出結果を略同時に視認することができる。
仮に、表疎水性シートと中間疎水性シートとのあいだに隙間が現出すれば、一部の帯状展開媒体において、帯状展開媒体と、この展開媒体の外面に検体を介して接触する、媒体収納孔の形成壁を含む疎水性積層シート材の内壁面との間に、空気層が形成されてしまう。この空気層は、帯状展開媒体内での検体の移動を乱す外乱要因の１つとなるため、各帯状展開媒体に滴下された媒体の移動速度に差が生じる。その結果、各検出ゾーンで、全ての検体の検出結果を略同時に取得することは困難となる。

また、シート状免疫学的検査具は、それぞれの媒体収納孔の裏疎水性シート接合側の開口（下側の開口）が、裏疎水性シートの中間疎水性シート接合側の面（表面、上面）に液密的に接合して封止されている。これは、中間疎水性シートと裏疎水性シートとが、それぞれの対向領域の全域で接合されているためである。
検査時、シート状免疫学的検査具は、裏疎水性シートを下方に向けて水平配置される。したがって、検体滴下ゾーンに検体を滴下し、その後、検体が帯状展開媒体の内部を展開しても、検体が各媒体収納孔の裏疎水性シート接合側の開口から疎水性積層シート材の内部空間に漏出しない。その結果、各帯状展開媒体に含まれた検体がこの内部空間で混ざり合わず、廉価で薄肉な検査具でありながら、複数の検体に含まれる目的物質を同時かつ正確に検査することができる。

ここでいうシート状免疫学的検査具とは、抗原抗体反応を利用したイムノクロマト法によって、臨床検体を免疫学的に簡易検査するための器具（キット）である。免疫学的検査は、抗原検出系のものでも、抗体検出系のものでもよい。
検体としては、例えば、全血、血漿、血清などの血液や尿、唾液、関節液、骨髄液などの体液、さらには喀痰、咽頭や鼻腔の拭い液、肺洗浄液などを採用することができる。
検体中の目的物質（捕捉物質）としては、例えば抗原、抗体、ホルモン、ホルモンレセプター、レクチン、レクチン結合性糖質、薬物もしくはその代謝物、薬物レセプター、核酸およびこれらの断片などを採用することができる。具体的には、細菌、原生生物や真菌などの細胞、ウイルス、タンパク質、多糖類などが挙げられる。さらに具体的には、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、ＲＳウイルス、ヒトメタニューモウイルス、マイコプラズマニューモニエ、ロタウイルス、カルシウイルス、コロナウイルス、アデノウイルス、エンテロウイルス、ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、肝炎ウイルスなどの各種ウイルスの他、大腸菌、スタフィロコッカスアウレウス、ストレプトコッカスニューモニエ、ストレプトコッカスピヨゲネス、マイコプラズマニューモニエ、マラリア原虫などの細胞、消化器系疾患、中枢神経系疾患、出血熱等の様々な疾患の病原体、病原体の代謝産物が挙げられる。

表疎水性シート、中間疎水性シートおよび裏疎水性シートとしては、疎水性を有する各種のセルロース基材、例えば紙などを採用することができる。その他、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネートなどの各種のプラスチックでもよい。これらの疎水性シートは、同一素材の大判シートに折り目を入れて分割された１枚ものでも、異なる素材から構成された別体ものでもよい。
表疎水性シート、中間疎水性シートおよび裏疎水性シートの形状は任意である。例えば、矩形状を採用することができる。３つの部分シートは、両端の疎水性シートに比べ、中間の疎水性シートの方が短くした方が、疎水性積層シート材がコンパクトとなり、取り扱いが容易になる。表疎水性シート、中間疎水性シートおよび裏疎水性シートの厚さはそれぞれ任意であるものの、０．５〜３ｍｍが取り扱い易い。

これらの疎水性シートの接合方法としては、例えば、両面テープによる貼着、接着剤による接着、ホットメルトによる融着などを採用することができる。
また、ここでいう「表疎水性シートと中間疎水性シートとの対向領域」とは、表疎水性シートと中間疎水性シートとを重ね合わせた際、表疎水性シートの中間疎水性シート側の面と、中間疎水性シートの表疎水性シート側の面とが接触している部分（範囲）をいう。
ここでいう「中間疎水性シートと裏疎水性シートとの対向領域」とは、中間疎水性シートと裏疎水性シートとを重ね合わせた際、中間疎水性シートの裏疎水性シート側の面と、裏疎水性シートの中間疎水性シート側の面とが接触している部分（範囲）をいう。

さらに、中間疎水性シートと裏疎水性シートとが接合される「中間疎水性シートと裏疎水性シートとの対向領域の全域」とは、両疎水性シートの中央部および外周部を含んだ対向領域の８０％以上、好ましくは９０％以上をいう。
このように、中間疎水性シートと裏疎水性シートとが、それぞれの対向領域の全域で接合されることで、それぞれの媒体収納孔の裏疎水性シート接合側の開口（下側の開口）が、裏疎水性シートの中間疎水性シート接合側の面（表面、上面）により封止される。ここで、「媒体収納孔の裏疎水性シート接合側の開口が封止される」とは、中間疎水性シートに穿孔して得られた媒体収納孔の２つの開口のうち、裏疎水性シートによって塞がれる側の開口を、裏疎水性シートとのあいだに隙間が現出しない液密な状態で接合（固着）することをいう。
また、ここでいう表疎水性シートと中間疎水性シートとが接合される「表疎水性シートと中間疎水性シートとの対向領域の外周部」とは、各媒体収納孔の全てを囲む領域でも、各媒体収納孔に共通する一部分を除いた残りを囲む領域でもよい。

表疎水性シートには、各帯状展開媒体の検体滴下ゾーンとの対峙位置に複数の滴下用窓が形成されるとともに、各帯状展開媒体の検出ゾーンとの対峙位置に複数の判定用窓がそれぞれ形成されている。
各滴下用窓は、ピペットによる検体の滴下に支障がない形状およびサイズでなければならない。
また、各判定用窓は、検体検査の判定に支障がない形状およびサイズでなければならない。
中間疎水性シートの使用枚数は、１枚でも２枚以上でもよい。ただし、２枚以上の積層体の場合には、この積層体の表裏面を貫通して各媒体収納孔を形成する必要がある。これに伴い、各媒体収納孔に挿入される帯状展開媒体も、厚肉なものを採用することができる。
中間疎水性シートには、各帯状展開媒体を収納する複数の媒体収納孔が並列状態で形成されている。
ここでいう「複数の媒体収納孔が並列状態」とは、平面視して各媒体収納孔が長さ方向を平行にして並んでいる状態をいう。
各媒体収納孔の形状およびサイズは、対応する帯状展開媒体の形状およびサイズに応じて適宜変更される。媒体収納孔の深さは、帯状展開媒体の厚さと同一かそれより深い。
「中間疎水性シートの表裏面」とは、中間疎水性シートの表疎水性シートとの接合側の面（表面、上面）と、これとは反対側の裏疎水性シートとの接合側の面（裏面、下面）をいう。

帯状展開媒体の素材としては、例えば、ニトロセルロース、プラスチック、濾紙など採用することができる。このうち、液体に対して湿潤性があり、添着された液体を実質的に吸収しないニトロセルロースが好ましい。この帯状展開媒体を担体として、検出ゾーンに抗体や抗原を固相化する。
帯状展開媒体の構成としては、例えば、検体滴下ゾーンに配置されるサンプルパッドと、標識試薬ゾーンに配置され、標識試薬が固定されたコンジュゲートパッドと、検出ゾーンに配置され、捕捉物質が固定されたニトロセルロース膜と、検出ゾーンより帯状展開媒体の他端側に配置される吸水紙とからなるものを採用することができる。この場合、検体滴下ゾーンでサンプルパッドに滴下された検体は、帯状展開媒体の他端に向かって展開され、標識試薬ゾーンのコンジュゲートパッドを通過中に目的物質が標識試薬と結合し、目的物質−標識試薬の複合体が形成される。その後、この複合体を含む検体は検出ゾーンに到達し、ここでニトロセルロース膜に固定された捕捉物質に複合体が捕捉されて、目的物質−標識試薬−捕捉物質の免疫複合体が形成される。また、捕捉後の使用済みの検体は濾紙などの吸水紙に吸水される。これにより、検体の帯状展開媒体内の逆流が防止される。

帯状展開媒体の使用数は任意である。例えば、８連または１２連のマルチチャンネルピペット（８連または１２連マイクロチューブ用）に対応可能なように、裏疎水性シートの中間疎水性シート接合側の面（検査時の内面、上面）に、８個または１２個の帯状展開媒体を、数ｍｍまたは数ｃｍピッチで各長さ方向を揃えた並列状態で配置してもよい。
検体滴下ゾーンは、帯状展開媒体の一端部に配置されて、例えばピペットにより検体が滴下される領域である。
標識試薬ゾーンは、帯状展開媒体の検体滴下ゾーンより他端側に配置され、標識試薬が固相化される領域である。
標識試薬としては、例えば、有色のラテックスや金属コロイド（金コロイド、銀コロイド、青銅コロイド、鉄コロイドなど）などの標識物質と、抗原または抗体とが結合した複合体を採用することができる。その他、蛍光物質や化学発光物質を標識物質としたものや、各種の酵素標識試薬を採用することができる。

検出ゾーンは、帯状展開媒体の標識試薬ゾーンより他端側に配置されて、標識試薬ゾーンで得られた標識試薬と結合した目的物質を捕捉する捕捉物質が固相化される領域である。
捕捉物質は、検体中の目的物質に応じて適宜変更される。目的物質が抗体の場合には、その抗原が捕捉物質となる。また、その反対の場合もある。
検出ゾーンにおいて捕捉された免疫複合体の構造（捕捉物質−目的物質−標識試薬）としては、（１）固相抗体−検体中抗原−標識抗体、（２）固相抗原−検体中抗体−標識抗体、（３）固相抗原−検体中抗体−標識抗原が挙げられる。このようにサンドイッチ構造が形成された部分は、標識試薬中の金コロイドや着色ラテックスなどの標識物質により着色され、目視またはカメラ撮像機器を利用して目的物質の検出の有無などが判定される。
また、検出ゾーンには、検体中に目的物質が存在しない陰性の検査結果を確認するため、標識試薬を捕捉する別の捕捉物質を固相化してもよい。

請求項２に記載の発明は、前記表疎水性シートと前記裏疎水性シートと前記中間疎水性シートとのうち少なくとも前記複数の帯状展開媒体と接する面はフッ素樹脂皮膜によりコーティングされた請求項１に記載のシート状免疫学的検査具である。
フッ素樹脂皮膜により表疎水性シートと裏疎水性シートと中間疎水性シートとのうち少なくとも複数の帯状展開媒体と接する面がコーティングされることにより、表面は界面活性剤が含まれた検体に対し撥水面となる。これにより滴下するサンプル中に一定濃度以上の界面活性剤が含まれる場合であっても、他のレーンにサンプル液が流れ込むことがなく、目的物質を同時かつ従来に比べてより正確に検査することができる。

フッ素樹脂皮膜によるコーティング方法は、任意であり、液状のフッ素樹脂にシートを浸す方法、スプレーにて液状フッ素樹脂を疎水性積層シート材に噴霧する方法、フッ素樹脂を含んだスポンジにて疎水性積層シート材にフッ素樹脂を塗布する方法など、従来のコーティング方法を採用することができる。また、表疎水性シート、中間疎水性シートおよび裏疎水性シートにあらかじめフッ素樹脂をコーティングし、その後、これらの疎水性シートを接合する方法や、これらの疎水性シートの接合して疎水性積層シート材を作製した後に複数の媒体収納孔の複数の帯状展開媒体と接する面にのみフッ素樹脂をコーティングする方法が採用可能である。

請求項１に記載の発明によれば、検体検査時、複数の検体を各滴下用窓から各帯状展開媒体の一端部の検体滴下ゾーンに滴下する。これにより、検体滴下ゾーンの検体は帯状展開媒体の他端側に向かって輸液される。その途中、標識試薬ゾーンにおいて検体中の目的物質と標識物質とが結合して複合体を形成し、検出ゾーンにおいて、検体中の複合体が捕捉物質により捕捉されるか否かを、判定用窓を通した標識物質の発色の有無で観察する。

表疎水性シートと中間疎水性シートとは、複数の媒体収納孔を囲むように、それぞれの対向領域の外周部の全体が接合されている。そのため、滴下された検体を各帯状展開媒体が吸収して膨潤しても、その膨潤時の力（内圧）によって、表疎水性シートと中間疎水性シートとの間に隙間は現出しにくい。これにより、各帯状展開媒体をそれぞれの他端に向かって展開する各検体（目的物質）の移動速度は安定し、その結果、各検出ゾーンにおいて、全ての検体の検出結果を略同時に視認することができる。
仮に、表疎水性シートと中間疎水性シートとのあいだに隙間が現出すれば、一部の帯状展開媒体において、帯状展開媒体と、この展開媒体の外面に検体を介して接触する疎水性積層シート材（媒体収納孔の形成壁を含む）の内壁面との間に、検体の移動を乱す空気層が形成され、各帯状展開媒体を展開している各媒体の移動速度に差が生じ、各検出ゾーンでは、全ての検体の検出結果を略同時に取得することは困難となる。

また、それぞれの媒体収納孔の裏疎水性シート接合側の開口（下側の開口）は、裏疎水性シートの中間疎水性シート接合側の面に液密的に接合することで、封止されている。これは、中間疎水性シートと裏疎水性シートとが、それぞれの対向領域の全域で接合されているためである。
検体検査時、シート状免疫学的検査具は、裏疎水性シートを下方に向けて水平配置される。したがって、検体滴下ゾーンに検体を滴下し、その後、検体が帯状展開媒体の内部を展開しても、検体が各媒体収納孔の裏疎水性シート接合側の開口から疎水性積層シート材の内部空間に漏出しない。その結果、各帯状展開媒体に含まれた検体がこの内部空間で混ざり合わず、廉価で薄肉な検査具でありながら、複数の検体に含まれる目的物質を同時かつ正確に検査することができる。

請求項２に記載の発明によれば表疎水性シートと裏疎水性シートと中間疎水性シートとのうち少なくとも複数の帯状展開媒体と接する面がフッ素樹脂皮膜によりコーティングされることにより、表面は界面活性剤が含まれた検体に対し撥水面となる。これにより滴下するサンプル中に一定濃度以上の界面活性剤が含まれる場合であっても、他のレーンにサンプル液が流れ込むことがなく、目的物質を同時かつ従来に比べてより正確に検査することができる。

この発明の実施例１に係るシート状免疫学的検査具の使用後の状態を示す平面図である。 この発明の実施例１のシート状免疫学的検査具の中間疎水性シートを裏疎水性シートに貼着し、帯状展開媒体を貼着した状態を示す展開底面図である。 この発明の実施例１のシート状免疫学的検査具の帯状展開媒体への検体の滴下状態を示す拡大斜視図である。 この発明の実施例１のシート状免疫学的検査具の疎水性積層シート材の展開平面図である。 この発明の実施例１のシート状免疫学的検査具の疎水性積層シート材の展開底面図である。 この発明の実施例１のシート状免疫学的検査具の中間疎水性シートを裏疎水性シートに貼着した状態を示す要拡大断面図である。 （ａ）は、この発明の実施例１のシート状免疫学的検査具の検査前の状態を示す要部拡大側面図である。（ｂ）は、この発明の実施例１のシート状免疫学的検査具の検体滴下ゾーンにおける検体滴下状態を示す要部拡大側面図である。（ｃ）は、この発明の実施例１のシート状免疫学的検査具の検出ゾーンにおける目的物質の捕捉状態を示す要部拡大側面図である。

以下、この発明の実施例を具体的に説明する。ここでは、ｈＭＰＶ（ヒトメタニューモウイルス）の抗体検査用のシート状免疫学的検査具を例にとる。

図１〜図３において、１０はこの発明の実施例１に係るシート状免疫学的検査具で、このシート状免疫学的検査具１０は、検出される目的物質（抗ｈＭＰＶ抗体、図７）ａを含む検体（抗体産生の培養上清）１６を、それぞれ毛細管現象によって輸液可能な１２本の帯状展開媒体１５と、表疎水性シート１１と裏疎水性シート１３との間に、１枚の中間疎水性シート１２を挟み込んで一体化した疎水性積層シート材１４とを備えたものである。以下、これらの構成体を詳細に説明する。

図２、図３および図７に示すように、帯状展開媒体１５は、複数の部材から構成される全体が長さ６９ｍｍ、幅５ｍｍのアフィニティークロマトグラフィー媒体である。帯状展開媒体１５には、その長さ方向の一端から他端に向かって、検出される目的物質ａを含む検体１６を滴下する検体滴下ゾーンＡと、目的物質ａと結合し、複合体を形成する標識試薬（コンジュゲート抗体：金コロイド標識抗体）ｂを含有した標識試薬ゾーンＢと、検体１６に含まれる目的物質ａを捕捉する捕捉物質（ｈＭＰＶ抗原）ｃを含有した検出ゾーンＣとが配置されている。

この帯状展開媒体１５の構成は、検体滴下ゾーンＡに配置される不織布からなる長さ２０ｍｍ、幅５ｍｍ、厚さ２６０μｍのサンプルパッド１７と、標識試薬ゾーンＢに配置され、標識試薬ｂが固相化された長さ５ｍｍ、幅５ｍｍ、厚さ６００μｍのコンジュゲートパッド１８と、検出ゾーンＣに配置され、捕捉物質ｃが固相化された長さ２５ｍｍ、幅５ｍｍ、厚さ２５０μｍのニトロセルロース膜１９と、検出ゾーンＣより帯状展開媒体１５の他端側に配置された長さ２７ｍｍ、幅５ｍｍ、厚さ４５０μｍの濾紙製の吸水紙２０とからなる。このうち、コンジュゲートパッド１８は、標識試薬ｂの金コロイド標識抗体を含浸させ、さらに乾燥により固相化される。コンジュゲートパッド１８を被うように、サンプルパッド１７の他端部がニトロセルロース膜１９の一端部上に積層されている。さらに、ニトロセルロース膜１９の他端部上には、検体１６の標識試薬ゾーン側への逆流を防止する吸水紙２０の一端部が積層されている。

次に、図１、図２、図４〜図６を参照して、疎水性積層シート材１４について説明する。
図２および図４に示すように、疎水性積層シート材１４を構成する疎水性素材としては、厚さ１ｍｍの白色の合成紙（株式会社ユポ・コーポレーション製アルファユポ）を用いる。そしてこの合成紙にフッ素樹脂溶液（株式会社フロロテクノロジー製、フロロサーフ）を均一な膜厚となるように塗布する。そしてこの合成紙を長さ２７０ｍｍ、幅１４０ｍｍの縦長な矩形状にカットし、かつ２本の平行な折り目１４ａによって長さ方向に３分割することで、表疎水性シート１１と裏疎水性シート１３と中間疎水性シート１２とが、合成紙の一端から他端に向かって順に形成される。各部分シート１１〜１３は、表疎水性シート１１および裏疎水性シート１３が長さ９０ｍｍ、幅１４０ｍｍ、厚さ１ｍｍ、中間疎水性シート１２が長さ８７ｍｍ、幅１４０ｍｍ、厚さ１ｍｍの横長な矩形状の紙片である。
表疎水性シート１１および裏疎水性シート１３は長さ９０ｍｍ、幅１４０ｍｍ、厚さ１ｍｍ、中間疎水性シート１２は長さ８７ｍｍ、幅１４０ｍｍ、厚さ１ｍｍの横長な矩形状の紙片である。

このうち、表疎水性シート１１の中間疎水性シート接合側とは反対側の面（以下、表面）には、表疎水性シート１１の長さ方向に長い１２個の媒体表示枠線２１が、表疎水性シート１１の幅方向に１．５ｍｍピッチで印刷されている（図４）。各媒体表示枠線２１は、長さが５０ｍｍ、幅７．５ｍｍのもので、裏疎水性シート１３上での各帯状展開媒体１５の配置位置を示す。各媒体表示枠線２１の枠内には、対応する帯状展開媒体１５の検体滴下ゾーンＡを露出する滴下用窓２２と、対応する帯状展開媒体１５の検出ゾーンＣを露出する判定用窓２３とが、媒体表示枠線２１の長さ方向に離間してそれぞれ形成されている。また、各媒体表示枠線２１の長さ方向の中間部付近には、対応する判定用窓２３の形成位置を示し、かつ「１」の白抜き数字が入った赤三角マーク２４と、対応する滴下用窓２２の形成位置を示し、かつ「２」の白抜き数字が入った黒三角マーク２５とがそれぞれ印刷されている。さらに、表疎水性シート１１の表面のうち、各媒体表示枠線２１より一端側の部分（折り目１４ａとは反対側の辺部）には、対応する帯状展開媒体１５の配置順（１〜１２番）を示す短尺な通し番号枠線２６が、１２個印刷されている。

また、この表疎水性シート１１には、その中間疎水性シート接合側の面（以下、裏面）の外周部全域に、各給水紙２０を被う幅広な吸水紙側枠部分２８ａを有し、かつ各媒体表示枠線２１に該当する領域Ｘを除くように、大判で矩形枠状の第１の両面テープ２８が貼着されている（図２）。
さらに、裏疎水性シート１３には、その中間疎水性シート接合側の面（以下、表面）の略全域に、大判で矩形状の第２の両面テープ２９が貼着されている（図２および図５）。
さらにまた、中間疎水性シート１２には、各帯状展開媒体１５を個別に収納する１２個の媒体収納孔３０が、中間疎水性シート１２の幅方向に向かって３．５ｍｍピッチで、かつ中間疎水性シート１２の表裏面を貫通して形成されている（図２、図４および図５）。各媒体収納孔３０は、長さが６９ｍｍ、幅が５ｍｍ、深さが１ｍｍのサイズを有する、中間疎水性シート１２の長さ方向に長い短冊状の孔である。

シート状免疫学的検査具１０を作製する際には、まず第２の両面テープ２９を使用して裏疎水性シート１３の表面に中間疎水性シート１２を貼着する（図２）。このとき、各媒体収納孔３０の裏疎水性シート接合側の開口３０ａが封止されるとともに、媒体収納孔３０から第２の両面テープ２９の粘着面の一部がそれぞれ露出する（図６）。その後、吸水紙側の端部を表疎水性シート方向に向けた状態で、各帯状展開媒体１５を各媒体収納孔３０にそれぞれ収納する。これによって、第２の両面テープ２９の粘着力により、各帯状展開媒体１５が裏疎水性シート１３の表面に９ｍｍピッチの並列状態で貼着される。

次に、矩形枠状の第１の両面テープ２８を使用し、表疎水性シート１１の裏面の外周部のみを中間疎水性シート１２の表面の外周部に貼着する（図１および図２）。このとき、各給水紙２０には、幅広な吸水紙側枠部分２８ａが貼着される一方、略各媒体表示枠線２１に該当する領域（中央部一帯）Ｘは、未貼着状態となる。こうして、疎水性積層シート材１４からシート状の検査ケース３１が組み立てられる。この組み立て時、表疎水性シート１１の各滴下用窓２２を通して、対応する検体滴下ゾーンＡのサンプルパッド１７が露出し、また各判定用窓２３を通して、対応する検出ゾーンＣのニトロセルロース膜１９がそれぞれ露出する（図１）。

次に、図１〜図７を参照して、この発明の実施例１に係るシート状免疫学的検査具１０を使用した検体検査方法を説明する。
検体検査時には、まずシート状免疫学的検査具１０を検査テーブルの上に水平に載置する（図１および図７（ａ））。次に、ｈMPV抗原をニトロセルロース膜の判定用窓２３の中央部分に固相化する。その後、１２連のマルチチャンネルピペットＰを使用し、１２人の患者から得られた１２個の検体（又は抗体産生の培養上清）１６を、表疎水性シート１１の対応する１〜１２番の滴下用窓２２を通して、各帯状展開媒体１５の検体滴下ゾーンＡのサンプルパッド１７にそれぞれ滴下する（図３および図７（ｂ））。

その後、各サンプルパッド１７に滴下された検体１６は、毛細管現象によって帯状展開媒体１５の他端に向かって展開され、標識試薬ゾーンＢのコンジュゲートパッド１８を通過中に、各検体１６中の目的物質（抗ｈＭＰＶ抗体）ａが標識試薬（コンジュゲート抗体）ｂと結合し、抗ｈＭＰＶ抗体−金コロイド標識抗体の複合体ｄが形成される（図７（ｃ））。その後、検体１６はニトロセルロース膜１９に移動し、それが検出ゾーンＣに到達したとき、ニトロセルロース膜１９に固相化された捕捉物質（ｈＭＰＶ抗原）ｃに、抗ｈＭＰＶ抗体−金コロイド標識抗体の複合体ｄが捕捉される（図７（ｃ））。これにより、検出ゾーンＣには、抗ｈＭＰＶ抗体−金コロイド標識抗体−ｈＭＰＶ抗原の複合体ｅが現出する。その後、使用済みの検体１６は吸水紙２０に吸水され、検体１６の帯状展開媒体１５内での逆流が防止される。
検体検査の結果、対応する判定用窓２３から赤色の丸い陽性マークの発色が視認できた場合には、該当する検体１６中に目的物質ａが存在する陽性と判定される（図１の部分拡大図中の黒丸を参照）。一方、判定用窓２３から陽性マークを視認できなかった場合には、検体１６中に目的物質ａが存在しない陰性と判定される（図１の部分拡大図中の破線白丸を参照）。

このように、表疎水性シート１１と中間疎水性シート１２とは、幅広な吸水紙側枠部分２８ａにより各給水紙２０を被い、かつ各媒体表示枠線２１に該当する領域Ｘを除くように、それぞれの対向領域の外周部の全域が矩形枠状の第１の両面テープ２８によって貼着されている。そのため、各滴下用窓２２から滴下された検体１６を各帯状展開媒体１５（特に、各標識試薬ゾーンＢの部分および各吸水紙２０）が吸収して膨潤しても、その膨潤時の力（内圧）によって、表疎水性シート１１と中間疎水性シート１２とのあいだに隙間は現出しにくい。これにより、各帯状展開媒体１５をそれぞれの他端に向かって展開する各検体（目的物質）１６の移動速度は安定し、その結果、各検出ゾーンＣにおいて、全ての検体１６の検出結果を略同時に視認することができる。
仮に、表疎水性シート１１と中間疎水性シート１２とのあいだに隙間が現出すれば、一部の帯状展開媒体１５において、帯状展開媒体１５と、この帯状展開媒体１５の外面に検体１６を介して接触する、媒体収納孔３０の形成壁を含む疎水性積層シート材１４の内壁面との間に、検体１６の移動を乱す空気層が形成される。これにより、各帯状展開媒体１５を展開している各媒体１６の移動速度に差が生じ、各検出ゾーンＣでは、全ての検体１６の検出結果を略同時に取得することは困難となる。

また、各媒体収納孔３０の裏疎水性シート接合側の開口３０ａは、裏疎水性シート１３の中間疎水性シート接合側の面に液密的な接合状態で封止され、かつ検体検査時、シート状免疫学的検査具１０は裏疎水性シート１３を下方に向けた水平状態で検査が行われる。これにより、検体滴下ゾーンＡに検体１６を滴下し、その後、検体１６が帯状展開媒体１５の内部を展開しても、各媒体収納孔３０の裏疎水性シート接合側の開口３０ａから検体１６がシート状の検査ケース３１の内部空間に漏出することはない。その結果、各帯状展開媒体１５に含まれた検体１６がシート状の検査ケース３１の内部空間で混ざり合わず、廉価で薄肉な検査具でありながら、複数の検体１６に含まれる目的物質ａを同時かつ正確に検査することができる。

この発明のシート状免疫学的検査具は、抗原抗体反応を利用した臨床検体の免疫学的な検査を行うための技術として有用である。

１０ シート状免疫学的検査具、
１１ 表疎水性シート、
１２ 中間疎水性シート、
１３ 裏疎水性シート、
１４ 疎水性積層シート材、
１５ 帯状展開媒体、
１６ 検体、
２２ 滴下用窓、
２３ 判定用窓、
２８ 第１の両面テープ、
２９ 第２の両面テープ、
３０ 媒体収納孔、
３０ａ 裏疎水性シート接合側の開口、
Ａ 検体滴下ゾーン、
Ｂ 標識試薬ゾーン、
Ｃ 検出ゾーン、
ａ 目的物質、
ｂ 標識試薬、
ｃ 捕捉物質。

Claims (2)

1. 検出される目的物質を含む検体を、毛細管現象によって輸液可能な複数の帯状展開媒体と、
   表疎水性シートと裏疎水性シートとの間に、少なくとも１枚の中間疎水性シートを挟み込んだ疎水性積層シート材とを備え、
   前記複数の帯状展開媒体には、それぞれの長さ方向の一端から他端に向かって、前記検体を滴下する検体滴下ゾーンと、前記目的物質を標識する標識試薬を含有した標識試薬ゾーンと、前記検体に含まれる目的物質を捕捉する捕捉物質を含有した検出ゾーンとが順番に配置されたシート状免疫学的検査具であって、
   前記中間疎水性シートには、その表裏面を貫通して、前記複数の帯状展開媒体を収納する複数の媒体収納孔が並列状態で形成され、
   前記表疎水性シートには、前記複数の帯状展開媒体の検体滴下ゾーンに前記検体を滴下するための複数の滴下用窓と、前記複数の帯状展開媒体の検出ゾーンを露出する複数の判定用窓とがそれぞれ離間して形成され、
   前記中間疎水性シートと前記裏疎水性シートとは、それぞれの対向領域の全域において接合され、
   前記複数の帯状展開媒体は、それぞれの長さ方向の一端から他端の向きを揃えて、対応する前記媒体収納孔に収納した状態で、前記裏疎水性シートの中間疎水性シート接合側の面に接合され、
   前記表疎水性シートと前記中間疎水性シートとは、前記複数の媒体収納孔を囲むように、それぞれの対向領域の外周部が接合されたシート状免疫学的検査具。
2. 前記表疎水性シートと前記裏疎水性シートと前記中間疎水性シートとのうち少なくとも前記複数の帯状展開媒体と接する面はフッ素樹脂皮膜によりコーティングされた請求項１に記載のシート状免疫学的検査具。

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