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JP6435865B2 - Method for producing tempeh fermented product - Google Patents
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本発明は、糸状菌を用いて大豆を含む発酵原料を発酵させるテンペ発酵物の製造方法に関する。   The present invention relates to a method for producing a tempeh fermented product in which a fermentation raw material containing soybean is fermented using a filamentous fungus.

テンペは、インドネシアの伝統的な大豆発酵食品であり、テンペ菌を大豆に接種して発酵させることにより製造されることが知られている。テンペには、タンパク質、ビタミンB群、サポニン、イソフラボン、ポリアミン等が含まれていることから、注目されている食品の一つである。   Tempe is a traditional soybean fermented food in Indonesia and is known to be produced by inoculating soybeans with tempeh bacteria and fermenting them. Tempe is one of the foods attracting attention because it contains protein, vitamin B group, saponin, isoflavone, polyamine and the like.

特許文献1には、酵母エキス及び/又は酵母に、舞茸と麹菌とを加え、加温して発酵させることを特徴とする旨味食品の製造方法について記載されている。これによれば、各種免疫炎症性障害や酸化ストレス障害に起因する疾患、さらにはメタボリック・シンドロームの予防や治療に有用な、ポリアミンを含有する旨味食品及びその製造方法を提供できるとされている。しかしながら、特許文献1に記載の方法では、ポリアミン含量が十分に高い食品を得ることができない場合も多く、ポリアミン含量のより高いものを得る方法が望まれていた。   Patent Document 1 describes a method for producing an umami food characterized by adding maiko and koji molds to yeast extract and / or yeast and heating and fermenting them. According to this, it is said that umami foods containing polyamines and methods for producing the same can be provided, which are useful for the prevention and treatment of diseases caused by various immunoinflammatory disorders and oxidative stress disorders, as well as metabolic syndrome. However, in the method described in Patent Document 1, there are many cases where a food having a sufficiently high polyamine content cannot be obtained, and a method for obtaining a product having a higher polyamine content has been desired.

WO2011/081024号公報WO2011 / 081024

本発明は上記課題を解決するためになされたものであり、ポリアミン含量が著しく高いテンペ発酵物の製造方法を提供することを目的とするものである。また、ポリアミン含量が著しく高いテンペ発酵物を得ることのできるスターターを提供することを目的とするものである。   The present invention has been made to solve the above-described problems, and an object of the present invention is to provide a method for producing a tempeh fermented product having a remarkably high polyamine content. It is another object of the present invention to provide a starter capable of obtaining a tempeh fermented product having a remarkably high polyamine content.

上記課題は、糸状菌を用いて大豆を含む発酵原料を発酵させるテンペ発酵物の製造方法であって、糸状菌がリゾプス ミクロスポラス 変種 キネンシス(Rhizopus microsporus var. chinensis)3005株(受託番号:NITE P−01977)であることを特徴とするテンペ発酵物の製造方法を提供することによって解決される。   The above-mentioned problem is a method for producing a tempeh fermented product in which a fermentation raw material containing soybean is fermented using a filamentous fungus, wherein the filamentous fungus is Rhizopus microsporus var. Chinensis 3005 strain (Accession number: NITE P). This is solved by providing a method for producing a fermented tempeh characterized by

このとき、前記製造方法により得られるテンペ発酵物であって、ポリアミンの含量が250mg/100g以上であるテンペ発酵物が本発明の好適な実施態様である。   At this time, a tempeh fermented product obtained by the above production method and having a polyamine content of 250 mg / 100 g or more is a preferred embodiment of the present invention.

また、上記課題は、リゾプス ミクロスポラス 変種 キネンシス(Rhizopus microsporus var. chinensis)3005株(受託番号:NITE P−01977)を含むテンペ発酵物製造用スターターを提供することによっても解決される。   Moreover, the said subject is also solved by providing the starter for tempeh fermented product manufacture containing Rhizopus microsporus var. Chinensis (Rhizopus microsporus var. Chinensis) 3005 strain (accession number: NITE P-01977).

さらに上記課題は、糸状菌を用いて大豆を含む発酵原料を発酵させて得られるポリアミンの製造方法であって、糸状菌がリゾプス ミクロスポラス 変種 キネンシス(Rhizopus microsporus var. chinensis)3005株(受託番号:NITE P−01977)であることを特徴とするポリアミンの製造方法を提供することによっても解決される。このとき、ポリアミンがプトレシン、スペルミジン及びスペルミンからなる群から選択される少なくとも1種であることが好適である。   Furthermore, the above-mentioned problem is a method for producing a polyamine obtained by fermenting a fermentation raw material containing soybean using a filamentous fungus, wherein the filamentous fungus is Rhizopus microsporus var. Chinensis 3005 (accession number: It is also solved by providing a method for producing a polyamine characterized by NITE P-01977). At this time, it is preferable that the polyamine is at least one selected from the group consisting of putrescine, spermidine and spermine.

本発明により、ポリアミン含量が著しく高いテンペ発酵物を得ることのできるテンペ発酵物の製造方法を提供することができる。また、ポリアミン含量が著しく高いテンペ発酵物を得ることのできるスターターを提供することができる。   ADVANTAGE OF THE INVENTION By this invention, the manufacturing method of the tempeh fermented product which can obtain the tempeh fermented product with remarkably high polyamine content can be provided. Moreover, the starter which can obtain a tempeh fermented material with a remarkably high polyamine content can be provided.

12種類のリゾプス属糸状菌をそれぞれ用いて得られた菌体中のポリアミン含量を示したグラフである。It is the graph which showed the polyamine content in the microbial cell obtained using each of 12 types of Rhizopus sp. 12種類のリゾプス属糸状菌をそれぞれ用いて得られた菌体中のポリアミンのHPLCパターンである。It is the HPLC pattern of the polyamine in the microbial cell obtained using each of 12 types of Rhizopus sp. Rhizopus microsporus var. chinensis 3005株を用いて得られた菌体中のポリアミンのHPLCパターンである。It is the HPLC pattern of the polyamine in the microbial cell obtained using Rhizopus microsporus var. Chinensis 3005 strain.

本発明のテンペ発酵物の製造方法は、大豆を含む発酵原料を糸状菌であるリゾプス ミクロスポラス 変種 キネンシス(Rhizopus microsporus var. chinensis)3005株(受託番号:NITE P−01977、以下「3005株」と略記することがある)を用いて発酵させることを特徴とする。これにより、ポリアミン含量が著しく高いテンペ発酵物を得ることができる。後述する実施例からも分かるように、リゾプス属糸状菌の中でも3005株を用いた場合に、ポリアミン含量が著しく高いテンペ発酵物が得られることが明らかとなった。本発明者らが見出した3005株は、2014年12月4日に独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センターに寄託され、受託番号NITE P−01977が付与されたものである。   The method for producing a tempeh fermented product according to the present invention comprises a fermented raw material containing soybean as a filamentous fungus, Rhizopus microsporus var. Chinensis 3005 strain (accession number: NITE P-01977, hereinafter referred to as “3005 strain”). It may be abbreviated to be fermented. Thereby, a tempeh fermented product having a remarkably high polyamine content can be obtained. As can be seen from the examples described later, when 3005 strains were used among the Rhizopus spp., It became clear that a tempeh fermented product having a remarkably high polyamine content was obtained. The 3005 strain found by the present inventors was deposited with the Patent Microorganism Depositary Center for Product Evaluation Technology on December 4, 2014, and was given the deposit number NITE P-01977.

本発明において、大豆を含む発酵原料としては特に限定されず、丸大豆、脱脂大豆、大豆由来のタンパク質及び前記タンパク質を加水分解して得られるペプチドからなる群から選択される少なくとも1種を含む発酵原料を好適に使用することができる。また、大豆を含む発酵原料の形態としては特に限定されず、前記発酵原料をそのまま使用してもよいし、前記発酵原料を粉砕したものであってもよいし、前記発酵原料を含む液体であってもよい。   In the present invention, the fermentation raw material containing soybean is not particularly limited, and fermentation containing at least one selected from the group consisting of whole soybeans, defatted soybeans, soybean-derived proteins and peptides obtained by hydrolyzing the proteins. The raw material can be preferably used. Further, the form of the fermentation raw material containing soybean is not particularly limited, and the fermentation raw material may be used as it is, or the fermentation raw material may be pulverized, or may be a liquid containing the fermentation raw material. May be.

本発明において、発酵させる際の温度としては特に限定されないが、20〜45℃であることが好ましい。発酵温度が20℃未満の場合、発酵時間が非常に長くなるおそれがあり、25℃以上であることがより好ましく、30℃以上であることが更に好ましい。一方、発酵温度が45℃を超える場合、3005株の生育が困難となり、発酵がうまくいかないおそれがあり、42℃以下であることがより好ましく、40℃以下であることが更に好ましい。   In this invention, it is although it does not specifically limit as temperature at the time of making it ferment, It is preferable that it is 20-45 degreeC. When fermentation temperature is less than 20 degreeC, there exists a possibility that fermentation time may become very long, it is more preferable that it is 25 degreeC or more, and it is still more preferable that it is 30 degreeC or more. On the other hand, when fermentation temperature exceeds 45 degreeC, growth of 3005 stock | strain will become difficult and there exists a possibility that fermentation may not be successful, It is more preferable that it is 42 degrees C or less, and it is still more preferable that it is 40 degrees C or less.

本発明において、発酵させる際の時間としては特に限定されないが、ポリアミン含量の高いテンペ発酵物を得ることができる観点から、6時間〜5日であることが好ましい。発酵時間が6時間未満の場合、発酵が不十分となるおそれがあり、発酵時間が5日を超える場合、コスト高となるおそれがある。発酵時間は、12時間〜3日であることがより好ましい。また、本発明において、発酵させる際のpHとしては特に限定されないが、6.0〜9.0の範囲であることが好ましい。   In the present invention, the time for fermentation is not particularly limited, but it is preferably 6 hours to 5 days from the viewpoint of obtaining a tempeh fermented product having a high polyamine content. If the fermentation time is less than 6 hours, the fermentation may be insufficient, and if the fermentation time exceeds 5 days, the cost may increase. The fermentation time is more preferably 12 hours to 3 days. Moreover, in this invention, although it does not specifically limit as pH at the time of making it ferment, It is preferable that it is the range of 6.0-9.0.

本発明では、発酵させた後に集菌することによりテンペ発酵物を得ることができる。集菌方法としては、濾過や遠心分離等が好適に採用される。集菌して得られたテンペ発酵物は、濃縮、乾燥等の処理を行ってもよい。乾燥方法としては、凍結乾燥、噴霧乾燥等が好適に採用され、これによりテンペ発酵物の粉末を得ることができる。   In the present invention, a tempeh fermented product can be obtained by collecting after fermentation. As a method for collecting bacteria, filtration, centrifugation, or the like is preferably employed. The tempeh fermented product obtained by collecting the bacteria may be subjected to a treatment such as concentration and drying. As the drying method, freeze-drying, spray-drying, or the like is preferably employed, whereby a powder of tempeh fermented product can be obtained.

本発明におけるポリアミン含量とは、テンペ発酵物中に含まれるプトレシン、スペルミジン及びスペルミンの合計を示すものである。テンペ発酵物中のポリアミン含量としては、250mg/100g以上であることが好ましく、300mg/100g以上であることがより好ましく、350mg/100g以上であることが更に好ましい。ポリアミン含量は、通常、5000mg/100g以下である。   The polyamine content in the present invention indicates the total of putrescine, spermidine and spermine contained in the tempeh fermented product. The polyamine content in the tempeh fermented product is preferably 250 mg / 100 g or more, more preferably 300 mg / 100 g or more, and further preferably 350 mg / 100 g or more. The polyamine content is usually 5000 mg / 100 g or less.

本発明により得られるテンペ発酵物は、ポリアミン含量が著しく高いものである。後述する実施例からも分かるように、リゾプス属糸状菌を用いて大豆を含む発酵原料を発酵させたところ、3005株を用いた場合にポリアミン含量が著しく高いテンペ発酵物が得られることが明らかとなった。したがって、3005株を含むテンペ発酵物製造用スターターであることが本発明の実施態様である。また、3005株を用いて大豆を含む発酵原料を発酵させて得られるポリアミンの製造方法も本発明の実施態様であり、ポリアミンがプトレシン、スペルミジン及びスペルミンからなる群から選択される少なくとも1種であることが好ましい。   The fermented tempeh obtained by the present invention has a significantly high polyamine content. As can be seen from the examples described below, when fermenting a fermentation raw material containing soybean using Rhizopus sp. Fungi, it is clear that a tempeh fermented product having a remarkably high polyamine content can be obtained when 3005 strain is used. became. Therefore, an embodiment of the present invention is a starter for producing a tempeh fermented product containing 3005 strains. Moreover, the manufacturing method of the polyamine obtained by fermenting the fermentation raw material containing soybean using 3005 strain is also an embodiment of the present invention, and the polyamine is at least one selected from the group consisting of putrescine, spermidine and spermine. It is preferable.

本発明により得られたテンペ発酵物を精製することにより、ポリアミンの純度を高めることが可能となり、また、プトレシン、スペルミジン及びスペルミンをそれぞれ単離することも可能となる。精製方法としては特に限定されないが、イオン交換法、ゲル濾過法、膜分画法等が好適に採用される。   By purifying the tempeh fermented product obtained by the present invention, it becomes possible to increase the purity of the polyamine, and it is also possible to isolate putrescine, spermidine and spermine, respectively. Although it does not specifically limit as a purification method, The ion exchange method, the gel filtration method, the membrane fractionation method etc. are employ | adopted suitably.

また、本発明により得られるテンペ発酵物は、カダベリン含量も高いものである。したがって、3005株を用いて大豆を含む発酵原料を発酵させて得られるカダベリンの製造方法も本発明の好適な実施態様である。カダベリン含量としては、200mg/100g以上であることが好ましく、250mg/100g以上であることがより好ましく、300mg/100g以上であることが更に好ましい。カダベリン含量は、通常、3000mg/100g以下である。   The tempeh fermented product obtained by the present invention also has a high cadaverine content. Therefore, a method for producing cadaverine obtained by fermenting a fermentation raw material containing soybean using 3005 strain is also a preferred embodiment of the present invention. The cadaverine content is preferably 200 mg / 100 g or more, more preferably 250 mg / 100 g or more, and further preferably 300 mg / 100 g or more. The cadaverine content is usually 3000 mg / 100 g or less.

本発明により得られるテンペ発酵物の好適な実施態様は発酵食品である。ポリアミンには抗炎症作用等を有することが知られている。したがって、本発明により得られるポリアミン含量が著しく高いテンペ発酵物は、機能性発酵食品として好適である。   A preferred embodiment of the fermented tempeh obtained by the present invention is a fermented food. Polyamines are known to have anti-inflammatory effects and the like. Therefore, the tempeh fermented product having a remarkably high polyamine content obtained by the present invention is suitable as a functional fermented food.

以下、実施例を用いて本発明を更に具体的に説明する。   Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples.

実施例1
[菌株及びポリアミン含量の検討]
2%ポリペプトン(日本製薬株式会社製「ポリペプトンS」)の液体培地200mLに、12種類のリゾプス属糸状菌(株式会社秋田今野商店製)をそれぞれ1白金耳接種し、振とう培養(37℃、100rpm)を2日間行った。集菌後に凍結乾燥して得られた粉末を用いて、それぞれの菌株中に含まれるポリアミン含量の検討を行った。ポリアミン含量の分析は、斉藤らの方法(HPLC法)に準じて行った(K. Saito et al., Anal. Sci., 8, p.675-680, 1992)。日本分光社製のHPLCを用い、カラムはShodex Asahipak ODP−50 4D(4.6mm×150mm)を用い、50mMホウ酸ナトリウム緩衝液(pH9.9):アセトニトリル(2mM OPA及び2mM NACを含む)=77:23を移動相とした。日本分光社製の蛍光検出器「FP−1520」を用いて、還元蛍光発色法にて励起波長330nm、蛍光波長430nm、カラム温度40℃、流速0.5ml/minで測定を行った。標準品としてプトレシン、スペルミジン、スペルミン、カダベリンを用いた。プトレシン、スペルミジン及びスペルミンの合計をポリアミン含量(dry wt.)とした。得られた結果を表1及び図1〜3に示す。
Example 1
[Examination of strain and polyamine content]
Inoculate one platinum ear of 12 types of Rhizopus fungi (manufactured by Akita Imano Co., Ltd.) into 200 mL of a liquid medium of 2% polypeptone (“Polypeptone S” manufactured by Nippon Pharmaceutical Co., Ltd.) and shake culture (37 ° C., 100 rpm) for 2 days. Using the powder obtained by freeze-drying after collection, the polyamine content contained in each strain was examined. The polyamine content was analyzed according to the method of Saito et al. (HPLC method) (K. Saito et al., Anal. Sci., 8, p.675-680, 1992). Using HPLC manufactured by JASCO Corporation, the column uses Shodex Asahipak ODP-50 4D (4.6 mm × 150 mm), 50 mM sodium borate buffer (pH 9.9): acetonitrile (containing 2 mM OPA and 2 mM NAC) = 77:23 was the mobile phase. Using a fluorescence detector “FP-1520” manufactured by JASCO Corporation, measurement was performed by a reduction fluorescence coloring method at an excitation wavelength of 330 nm, a fluorescence wavelength of 430 nm, a column temperature of 40 ° C., and a flow rate of 0.5 ml / min. Putrescine, spermidine, spermine and cadaverine were used as standard products. The total of putrescine, spermidine and spermine was defined as the polyamine content (dry wt.). The obtained results are shown in Table 1 and FIGS.

表1と図1〜3の結果から分かるように、Rhizopus microsporus var. chinensis 3005株を用いることにより、ポリアミン含量が著しく高い(460.20mg/100g)テンペ発酵物が得られることが明らかとなった。中でも、プトレシン含量の割合が高いことが分かった。また、カダベリン含量も多いことが分かった。
As can be seen from the results shown in Table 1 and FIGS. . Above all, it was found that the ratio of putrescine content was high. It was also found that the cadaverine content was high.

Claims (5)

糸状菌を用いて大豆を含む発酵原料を発酵させるテンペ発酵物の製造方法であって、
糸状菌がリゾプス ミクロスポラス 変種 キネンシス(Rhizopus microsporus var. chinensis)3005株(受託番号:NITE P−01977)であることを特徴とするテンペ発酵物の製造方法。
A method for producing a tempeh fermented product in which a fermentation raw material containing soybean is fermented using a filamentous fungus,
A method for producing a tempeh fermented product, wherein the filamentous fungus is Rhizopus microsporus var. Chinensis strain 3005 (accession number: NITE P-01977).
請求項1記載の製造方法により得られるテンペ発酵物であって、ポリアミンの含量が250mg/100g以上であるテンペ発酵物。   A tempeh fermented product obtained by the production method according to claim 1, wherein the polyamine content is 250 mg / 100 g or more. リゾプス ミクロスポラス 変種 キネンシス(Rhizopus microsporus var. chinensis)3005株(受託番号:NITE P−01977)を含むテンペ発酵物製造用スターター。   A starter for producing a tempeh fermented product containing Rhizopus microsporus var. Chinensis 3005 strain (accession number: NITE P-01977). 糸状菌を用いて大豆を含む発酵原料を発酵させて得られるポリアミンの製造方法であって、
糸状菌がリゾプス ミクロスポラス 変種 キネンシス(Rhizopus microsporus var. chinensis)3005株(受託番号:NITE P−01977)であることを特徴とするポリアミンの製造方法。
A method for producing a polyamine obtained by fermenting a fermentation raw material containing soybean using a filamentous fungus,
A method for producing a polyamine, wherein the filamentous fungus is Rhizopus microsporus var. Chinensis 3005 (accession number: NITE P-01977).
ポリアミンがプトレシン、スペルミジン及びスペルミンからなる群から選択される少なくとも1種である請求項4記載のポリアミンの製造方法。
The method for producing a polyamine according to claim 4, wherein the polyamine is at least one selected from the group consisting of putrescine, spermidine and spermine.
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