JP6440360B2 - 経皮投与用ワクチン組成物 - Google Patents

Description

本発明は、医薬組成物、より具体的にはワクチン組成物に関する。さらに具体的には、本発明は、経皮細胞性免疫誘導のためのワクチン組成物に関する。

一般に広く使用されているワクチンは、免疫を誘導するために、微生物もしくはウイルス等の病原体またはその一部を投与するものである。この他にも、癌細胞特異的抗原を細胞性免疫機構に認識させ、免疫系による癌細胞への特異的な攻撃を誘導することを目的とした癌ワクチンがあり、癌治療手段の一つとして用いられている。

通常、微生物やウイルスはそのサイズの為に皮膚によって侵入が阻止されるため、ワクチンは、侵襲的に体内に投与される必要がある。したがって、免疫には注射が一般的に利用される。しかし、注射には、痛み、恐怖心、注射痕およびそれに続く瘢痕化、医療従事者にしか許されていないこと、免疫効果の高い皮内注射は投与手技が難しいこと、医療従事者の針刺し感染事故のリスクがあること、繰返し投与を行う場合は通院が患者の生活の負担となること、注射針など特殊廃棄の必要な医療廃棄物が生じること等の問題があるため、それは必ずしも最適な投与経路とはいえない。

ワクチンの投与経路としては皮下または皮内注射が最も一般的であるが、これ以外にも様々な投与経路、例えば経皮投与（特許文献１および非特許文献１）、頬側投与、経鼻投与、舌下投与等（非特許文献２、特許文献２および特許文献３）による免疫誘導が試みられている。

注射による免疫において一般的に使用されるアジュバントとしては、水酸化アルミニウムやリン酸アルミニウム、塩化アルミニウムのようなアルミニウム塩、ＭＦ５９やＡＳ０３といったスクワレンを含むエマルション等が実用化されており、これら以外にも鞭毛成分や核酸、サイトカイン、カチオンポリマー、ポリペプチド等が広く検討されている。注射以外の経路、例えば経皮投与や経粘膜投与による免疫において検討されているアジュバントとしては、水酸化アルミニウムやリン酸アルミニウム、塩化アルミニウムのようなアルミニウム塩、コレラトキシンや大腸菌易熱性毒素のような毒素類等が挙げられるが、実用化には至っていない。これらはそのほとんどがウイルス、細菌等からの感染症予防の為に抗体を産生させる液性免疫を誘導させるアジュバントとして用いられている。一方、細胞性免疫誘導に限れば、注射においては、フロイントアジュバント、モンタナイド、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γが検討されているが、実用化には至っておらず、経皮投与や粘膜投与においてもコレラトキシンや大腸菌易熱性毒素のような毒素類、核酸類でわずかな報告がある程度である。

米国特許出願公開ＵＳ２００８／０１９３４８７号 特表２００２−５３１４１５号公報 米国特許出願公開ＵＳ２００８／０１１２９７４号 特表平７−５０５８８３号公報 特表２００７−５２９５３１号公報

Ｈｏｓｏｉ Ａｋｉｈｉｒｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ６８， ３９４１−３９４９ （２００８） Ｚｈｅｎｇｒｏｎｇ Ｃｕｉ ｅｔ ａｌ．， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｖｏｌ．１９， Ｎｏ．７， ９４７−９５３ （２００２）

注射に関する種々の問題点を解決する一つの手段として経皮投与が考えられた。しかし、抗原の経皮投与による細胞性免疫誘導において用い得る有効な細胞性免疫誘導促進剤はほとんど報告されておらず、経皮投与では注射と比較して十分な細胞性免疫誘導効果が得られない場合が多い。

そこで、本発明は、経皮投与で高い細胞性免疫誘導効果を発揮するワクチン組成物を提供することを目的とする。

本発明は、抗原の経皮投与による細胞性免疫誘導において様々な抗原に対して普遍的に使用可能な細胞性免疫誘導促進剤を含み、経皮投与で高い細胞性免疫誘導効果を発揮するワクチン組成物を提供する。
本発明の一つの態様において、本発明者らは、細胞性免疫に関与する種々の細胞のうち、ヘルパーＴ細胞、特に、Ｔｈ１細胞数とＴｈ２細胞数のバランスに着目した。

経皮投与による免疫誘導においては、抗原の透過性を増大させるために、例えばテープストリッピングによって角質層を除去する等、皮膚の前処理を行うことが一般的である。しかし、本発明者らは、このような前処理による皮膚への刺激によって、Ｔｈ１細胞およびＴｈ２細胞の合計に対するＴｈ２細胞の割合が増大し、細胞性免疫誘導効果が減弱する一方、皮膚に対する刺激の少ない条件では、Ｔｈ１細胞およびＴｈ２細胞の合計に対するＴｈ１細胞の割合が高く、細胞性免疫誘導効果が高いことを見出した。更に、Ｔｈ１細胞を増加させる添加物を添加する事により、皮膚に刺激の少ない条件の場合以上にＴｈ１細胞の割合が高まり、細胞性免疫誘導効果が高まる事を見出した。即ち、対象におけるＴｈ１細胞とＴｈ２細胞のバランスにおいて、Ｔｈ１細胞比率を増大させることにより、所望の抗原において経皮投与で高い細胞性免疫誘導効果が得られることを見出した。更に本発明のワクチン組成物の経皮投与によって、注射投与と比較してより強い細胞性免疫誘導効果が得られることを見出した。

本発明の一つの態様において、抗原の経皮投与による細胞性免疫誘導は、抗原と共に特定の細胞性免疫誘導促進剤を用いることによって増強される。具体的には、経皮投与用ワクチン組成物において、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチド、免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤を用いることにより、経皮投与において高い細胞性免疫誘導効果が得られる。

本発明の一つの態様において、抗原の経皮投与による細胞性免疫誘導は、抗原を、低刺激条件下で投与することによって増強される。具体的には、経皮投与用ワクチン組成物を投与する前の皮膚刺激評価用モデル動物の皮膚の状態の指標となる経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）（ｇ／ｈ・ｍ^２）が５０以下となる低刺激状態を選択した上で、経皮投与用ワクチン組成物を投与することによって、高い細胞性免疫誘導効果が得られる。あるいは、経皮投与用ワクチン組成物の皮膚刺激特性を、皮膚刺激評価用モデル動物への該組成物の投与終了時における該モデル動物の皮膚内ＴＳＬＰレベル（ｐｇ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）が１００００以下となるような低刺激特性とすることによって、高い細胞性免疫誘導効果が得られる。

本発明の一つの態様において、Ｔｈ１細胞とＴｈ２細胞のバランスは、抗原と共に特定の細胞性免疫誘導促進剤を用いることによって制御される。具体的には、経皮投与用ワクチン組成物において、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチド、免疫調節低分子薬物、からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤を用いることにより、Ｔｈ１細胞／（Ｔｈ１細胞＋Ｔｈ２細胞）の比を増大させることができ、その結果、経皮投与において高い細胞性免疫誘導効果が得られる。

また、本発明の一つの態様において、本発明のワクチン組成物を低刺激条件下で投与することによってもＴｈ１細胞とＴｈ２細胞のバランスは制御される。具体的には、経皮投与用ワクチン組成物を投与する前の皮膚刺激評価用モデル動物の皮膚の状態の指標となる経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）（ｇ／ｈ・ｍ^２）が５０以下となる低刺激状態を選択した上で、経皮投与用ワクチン組成物を投与することによって、Ｔｈ１細胞／（Ｔｈ１細胞＋Ｔｈ２細胞）の比を増大させることができ、その結果、高い細胞性免疫誘導効果が得られる。あるいは、経皮投与用ワクチン組成物の皮膚刺激特性を、投与終了時の皮膚内ＴＳＬＰレベル（ｐｇ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）が１００００以下となるような低刺激特性とすることによってもＴｈ１細胞／（Ｔｈ１細胞＋Ｔｈ２細胞）の比を増大させることができ、その結果、高い細胞性免疫誘導効果が得られる。

したがって本発明は、以下に列挙する態様を提供する：
（１）抗原を含み、細胞性免疫誘導のための、経皮投与用ワクチン組成物であって、該組成物を投与した免疫評価用モデル動物におけるＴｈ１細胞比率が１０％以上となることを特徴とする、ワクチン組成物；
（２）細胞性免疫誘導のための、経皮投与用ワクチン組成物であって、該組成物が、抗原と、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤とを含む、ワクチン組成物；
（３）該組成物が、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤を含むことにより、免疫評価用モデル動物におけるＴｈ１細胞比率が１０％以上となるものである、（１）または（２）のワクチン組成物；
（４）細胞性免疫誘導促進剤がＴＬＲリガンドである、（２）または（３）のワクチン組成物；
（５）細胞性免疫誘導促進剤が環状ジヌクレオチドである、（２）または（３）のワクチン組成物；
（６）細胞性免疫誘導促進剤が免疫調節低分子薬物である、（２）または（３）のワクチン組成物；
（７）細胞性免疫誘導促進剤がヘルパーペプチドである、（２）または（３）のワクチン組成物；
（８）細胞性免疫誘導促進剤が、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上と、ヘルパーペプチドとの組合せである、（２）または（３）のワクチン組成物；
（９）低刺激条件下で投与されるものである、（１）〜（８）のいずれか１項のワクチン組成物；
（１０）低刺激条件が、皮膚刺激評価用モデル動物における投与前の経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）が５０ｇ／ｈ・ｍ^２以下の条件である、（９）のワクチン組成物；
（１１）低刺激条件が、皮膚刺激評価用モデル動物における投与終了時の皮膚内ＴＳＬＰレベルが１００００ｐｇ／ｍｇタンパク質以下の条件である、（９）または（１０）のワクチン組成物；および
（１２）抗原が、サバイビン２Ｂペプチドおよび／または改変サバイビン２Ｂペプチド、ＧＰＣ３ペプチドおよび／または改変ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＩＰＥＰ８７ペプチドおよび／または改変ＩＰＥＰ８７ペプチド、ＰＲ１ペプチドおよび／または改変ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ＨＢＶｅｎｖペプチドおよび／または改変ＨＢＶｅｎｖペプチド、ならびにＭＵＣ１ペプチドおよび／または改変ＭＵＣ１ペプチドからなる群より選択されるペプチドである、（１）〜（１１）のいずれかのワクチン組成物。

別の態様において、本発明のワクチン組成物は、疾患の処置または予防のために使用することができる。したがって本発明は、次に列挙する態様も提供する：
（１３）治療上有効量の（ｉ）癌抗原、ならびに（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤を対象に経皮投与することを含む、癌の処置または予防方法；
（１４）癌抗原が、サバイビン２Ｂペプチドおよび／または改変サバイビン２Ｂペプチド、ＧＰＣ３ペプチドおよび／または改変ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＰＲ１ペプチドおよび／または改変ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ならびにＭＵＣ１ペプチドおよび／または改変ＭＵＣ１ペプチドからなる群より選択される癌抗原ペプチドである、（１３）の方法；
（１５）治療上有効量の（ｉ）ウイルス抗原、ならびに（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤を対象に経皮投与することを含む、ウイルス性疾患の処置または予防方法；および
（１６）ウイルス抗原が、ＩＰＥＰ８７ペプチドおよび／または改変ＩＰＥＰ８７ペプチドならびにＨＢＶｅｎｖペプチドおよび／または改変ＨＢＶｅｎｖペプチドからなる群より選択されるペプチドである、（１５）の方法。

別の態様において、本発明は、抗原の経皮投与用細胞性免疫誘導促進剤として使用するための、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチド、免疫調節低分子薬物またはそれらの２種以上の組合せも提供する。したがって、本発明は、次の態様も提供する：
（１７）抗原の経皮投与による細胞性免疫誘導において細胞性免疫誘導促進剤として使用するための、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチド、免疫調節低分子薬物またはそれらの２種以上の組合せ。

また、本発明は、次に記載する態様も提供する：
（１８）抗原と、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤とを対象に経皮投与することを含む、細胞性免疫誘導方法；
（１９）抗原の経皮投与による細胞性免疫誘導の促進のために使用するための、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチド、免疫調節低分子薬物またはそれらの２種以上の組合せ；
（２０）抗原の経皮投与による細胞性免疫誘導のために使用するための、抗原と、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤との組合せ；
（２１）癌の処置または予防に用いるための、（ｉ）癌抗原と（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤との組合せであって、経皮投与されるものである組合せ；
（２２）ウイルス性疾患の処置または予防に用いるための、（ｉ）ウイルス抗原と（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤との組合せであって、経皮投与されるものである組合せ；
（２３）細胞性免疫誘導のための経皮投与用ワクチン組成物の製造における、抗原、ならびにＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤の使用；
（２４）癌の処置または予防のための経皮投与用ワクチン組成物の製造における、（ｉ）癌抗原、ならびに（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤の使用； および
（２５）ウイルス性疾患の処置または予防のための経皮投与用ワクチン組成物の製造における、（ｉ）ウイルス抗原、ならびに（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤の使用。

本発明のワクチン組成物は、経皮投与が可能であるため、優れたコンプライアンス、例えば非侵襲的投与、無痛、注射の恐怖からの解放、投与が簡便なため患者が自ら投与可能であり、医療従事者の針刺し感染事故のリスクも回避でき、繰返し投与を行う場合の通院頻度の低減が可能となり患者の生活の質の向上に貢献でき、注射針のような特殊廃棄の必要な医療廃棄物が生じないという利点を有する。また、パップ剤やテープ剤等の貼付剤の形態であれば、所定の投与量を確実に投与でき、薬物放出速度を任意に制御でき、また投与に際して他の部位に付着することがないという利点がある。さらに、貼付剤は容易に着脱可能であるため、副作用が生じた場合等に適用部位から貼付剤を除去することによって患者自らが即座に投与を中止することができるという利点も有する。さらに、本発明のワクチン組成物の効能が、抗原の単独投与と比較して、顕著に向上するという利点も有する。更に、本発明のワクチン組成物の経皮投与は、注射投与と比較して強い免疫を誘導可能であるという利点も有する。

本発明がより容易に理解されるように、本明細書で用いる用語を以下に定義する。定義のない用語は、特に文脈が異なることを示唆しない限り、当業者、特に医学、薬学、免疫学、細胞生物学、生化学、高分子化学等の分野における当業者が通常理解する意味を有する。

Ｉ．定義
本明細書において使用するとき、用語「抗原」は、免疫応答を誘導し得るあらゆる物質を意味し、例えばタンパク質、ペプチド等が挙げられる。抗原の皮膚透過性が求められる経皮投与においては、分子量の小さい抗原を用いることが好ましく、例えば約８〜約１２個のアミノ酸からなるペプチドを用いることができる。本発明においては、例えば、以下に記載するサバイビン２Ｂペプチド、ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＩＰＥＰ８７ペプチド、ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ＨＢＶｅｎｖペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ Ｅ７５ペプチド、ＭＵＣ１ペプチド等を抗原として用いることができる。一実施態様では、本発明のワクチン組成物において用いる抗原は、癌ワクチン用途のＨＥＲ２／ｎｅｕ Ｅ７５ペプチド、癌ワクチン用途の改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ Ｅ７５ペプチド、癌ワクチン用途のＷＴ１ペプチド、および癌ワクチン用途の改変ＷＴ１ペプチドからなる群より選択される１種以上のペプチドを除くものである。

本明細書において使用するとき、用語「サバイビン２Ｂペプチド」は、配列Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｌｅｕ（配列番号１）からなる、癌遺伝子産物サバイビン由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＧＰＣ３ペプチド」は、配列Ｇｌｕ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ（配列番号２）からなる、癌遺伝子産物ＧＰＣ３由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド」は、配列Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｅｕ（配列番号３）からなる、癌遺伝子産物ＨＥＲ２／ｎｅｕ由来のＨＬＡ−Ａ２４拘束性ペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド」は、配列Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｉｌｅ（配列番号４）からなる、癌遺伝子産物ＭＡＧＥ３由来のＨＬＡ−Ａ２４拘束性ペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＩＰＥＰ８７ペプチド」は、配列Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｖａｌ（配列番号５）からなる、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）タンパク質由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＰＲ１ペプチド」は、配列Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｖａｌ（配列番号６）からなる、癌遺伝子産物プロテイナーゼ‐３由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド」は、配列Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｖａｌ（配列番号７）からなる、癌遺伝子産物ＨＥＲ２／ｎｅｕ由来のＨＬＡ−Ａ０２拘束性ペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド」は、配列Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｌｅｕ（配列番号８）からなる、癌遺伝子産物ＭＡＧＥ３由来のＨＬＡ−Ａ０２拘束性ペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＨＢＶｅｎｖペプチド」は、配列Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｈｅ Ｖａｌ（配列番号９）からなる、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）タンパク質由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ Ｅ７５ペプチド」は、配列Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｌｅｕ（配列番号１０）からなる、癌遺伝子ＨＥＲ２／ｎｅｕの産物（ＨＥＲ２タンパク質）に由来するペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＭＵＣ１ペプチド」は、配列Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ｖａｌ（配列番号１１）からなり、多くの癌細胞上に高発現する糖タンパクであるＭＵＣ１タンパクに由来するペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＷＴ１ペプチド」は、癌遺伝子ＷＴ１（Ｗｉｌｍ’ｓ腫瘍）の産物であるＷＴ１蛋白が断片化された、約８〜約１５個、好ましくは約８〜約１２個のアミノ酸からなる部分ペプチドを意味し、Ｄｂ１２６ペプチドやＤｂ２３５ペプチド（いずれも特許第４４２２９０３号公報に記載）等がこれに含まれる。また、ＷＯ２０００／０６６０２にて開示されているＷＴ１産物の部分ペプチド、ＷＯ２００５／０９５５９８に記載のＷＴ１由来ＨＬＡ−Ａ２６結合性癌抗原ペプチド、ＷＯ２００７／０９７３５８に記載のＨＬＡ−Ａ^＊３３０３拘束性ＷＴ１ペプチド、およびＷＯ２００８／０８１７０１に記載のＨＬＡ−Ａ^＊１１０１拘束性ＷＴ１ペプチドも本明細書にいう「ＷＴ１ペプチド」に含まれる。

本明細書において使用するとき、用語「改変ＸＸペプチド」（ＸＸは任意のペプチドの名称）とは、ＸＸペプチドの全部または一部のアミノ酸が置換や修飾等により改変されたペプチドを意味する。
改変ＸＸペプチドには、例えば、
（ａ）ＸＸペプチドのアミノ酸配列において、１個から数個、例えば１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸が置換、欠失または付加されたアミノ酸配列からなるペプチド；および
（ｂ）ＸＸペプチドのアミノ酸配列において、全部または一部のアミノ酸、例えば１個または複数個、例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個のアミノ酸が修飾されたアミノ酸配列からなるペプチド
が含まれる。
改変ＸＸペプチドが有し得るアミノ酸の「修飾」としては、これらに限定されないが、例えば、アセチル化、メチル化などのアルキル化、グリコシル化、ヒドロキシル化、カルボキシル化、アルデヒド化、リン酸化、スルホニル化、ホルミル化、ミリストイル化やパルミトイル化やステアロイル化のような脂肪鎖付加修飾、オクタノイル化、エステル化、アミド化、脱アミド化、シスチン修飾やグルタチオン修飾やチオグリコール酸修飾のようなジスルフィド結合形成修飾、糖化、ユビキチン化、スクシンイミド形成、グルタミル化、プレニル化等が挙げられる。改変ＸＸペプチドは、１個以上のアミノ酸の置換、欠失または付加と、１個以上のアミノ酸の修飾を組み合わせて含むものであってもよい。

好ましい態様において、本発明の経皮投与用ワクチン組成物が含有する抗原は、サバイビン２Ｂペプチドおよび／または改変サバイビン２Ｂペプチド、ＧＰＣ３ペプチドおよび／または改変ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＩＰＥＰ８７ペプチドおよび／または改変ＩＰＥＰ８７ペプチド、ＰＲ１ペプチドおよび／または改変ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ＨＢＶｅｎｖペプチドおよび／または改変ＨＢＶｅｎｖペプチド、ならびにＭＵＣ１ペプチドおよび／または改変ＭＵＣ１ペプチドからなる群より選択されるペプチドである。あるいは、抗原としてＨＥＲ２／ｎｅｕ Ｅ７５ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ Ｅ７５ペプチドを用いてもよい。

上に列挙したペプチドは、遊離形または薬理学的に許容される任意の塩形、例えば酸塩（酢酸塩、ＴＦＡ塩、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、臭化水素酸塩、コハク酸塩、硝酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、プロピオン酸塩、蟻酸塩、安息香酸塩、ピクリン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ドデシル硫酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、グルタル酸塩、種々のアミノ酸塩など）、金属塩（アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩）、アルミニウム塩など）、アミン塩（トリエチルアミン塩、ベンジルアミン塩、ジエタノールアミン塩、ｔ−ブチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、アルギニン塩、ジメチルアンモニウム塩、アンモニウム塩など）の形態でありうる。好ましい薬理学的に許容される塩は、酢酸塩またはＴＦＡ塩である。本発明において抗原として用い得る上記のペプチドは、周知の方法で合成または産生し、単離および精製したものを使用できる。

本明細書において使用するとき、用語「Ｔｈ１細胞」および「Ｔｈ２細胞」は、それぞれ、１型ヘルパーＴ細胞および２型ヘルパーＴ細胞を意味する。

本明細書において使用するとき、用語「Ｔｈ１細胞比率」とは、以下の式により算出される、Ｔｈ１細胞数とＴｈ２細胞数の合計に対するＴｈ１細胞数の比率（パーセンテージ）を意味する。

Ｔｈ１細胞数およびＴｈ２細胞数は、免疫評価用モデル動物を用いた免疫誘導実験およびＥＬＩＳＰＯＴ方法（ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４）により測定することができる。

本発明の一つの態様において、本発明のワクチン組成物は、該組成物を投与した免疫評価用モデル動物におけるＴｈ１細胞比率が１０％より大きくなることを特徴とする。本発明のワクチン組成物を投与した免疫評価用モデル動物におけるＴｈ１細胞比率は、例えば、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上または８０％以上となり得る。ＨＬＡ−Ａ^＊２４型ＭＨＣ拘束性クラス１ペプチドを含むワクチン組成物の場合、免疫評価用モデル動物としてのＢＡＬＢ／ｃマウスで評価した場合に、該組成物の投与後のＴｈ１細胞比率が好ましくは１０％以上、例えば１５％以上、２０％以上、または２５％以上、より好ましくは３０％以上、例えば３５％以上、４０％以上、または４５％以上、さらに好ましくは５０％以上、例えば５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上または８０％以上となる。ＨＬＡ−Ａ^＊０２型ＭＨＣ拘束性クラス１ペプチドを含むワクチン組成物の場合は、免疫評価用モデル動物としてのＨＬＡ−Ａ^＊０２型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウスで評価した場合に、該組成物の投与後のＴｈ１細胞比率が好ましくは１０％以上、例えば１５％以上、２０％以上、または２５％以上、より好ましくは３０％以上、例えば３５％以上、４０％以上、または４５％以上、さらに好ましくは５０％以上、例えば５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上または８０％以上となる。最も好ましい態様において、本発明のワクチン組成物を投与した免疫評価用モデル動物におけるＴｈ１細胞比率は、ＨＬＡ−Ａ^＊２４型ＭＨＣ拘束性クラス１ペプチドを含むワクチン組成物については、ＢＡＬＢ／ｃマウスで評価した場合に１０％以上、ＨＬＡ−Ａ^＊０２型ＭＨＣ拘束性クラス１ペプチドを含むワクチン組成物については、ＨＬＡ−Ａ^＊０２型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウスで評価した場合に５０％以上である。

免疫評価用モデル動物において１０％以上のＴｈ１細胞比率を達成する本発明のワクチン組成物は、これを所望の対象、例えばヒト等に投与することにより、該対象におけるＴｈ１細胞比率を増大させ、高い細胞性免疫誘導効果を発揮する。

一つの好ましい態様において、免疫評価用モデル動物における１０％以上のＴｈ１細胞比率は、抗原ならびにＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチド、免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤を含有するワクチン組成物を投与することにより達成される。

本発明のワクチン組成物を投与した免疫評価用モデル動物におけるＴｈ１細胞比率は、該組成物の最終投与から６日後に測定する。Ｔｈ１細胞比率を測定するためのサンプルは、免疫評価用モデル動物の脾臓である。

本明細書において使用するとき、用語「細胞性免疫誘導促進剤」は、共に投与された抗原の細胞性免疫を誘導する効率を、それなしでの効率と比較して、改善しうるあらゆる物質を意味するものであり、細胞性免疫誘導を促進する作用機構によって限定されないが、本願明細書で特定されたものを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲリガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のリガンドを意味し、例えばＴＬＲ１〜９のリガンドを含む。ＴＬＲリガンドとしては、ＴＬＲ１／２リガンド、ＴＬＲ２／６リガンド、ＴＬＲ２およびＤｅｃｔｉｎ１リガンド、ＴＬＲ３リガンド、ＴＬＲ４リガンド、ＴＬＲ５リガンド、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンド、ＴＬＲ９リガンドなどが挙げられる。本発明の好ましい態様において、ＴＬＲリガンドは、ＴＬＲ１／２リガンド、ＴＬＲ２およびＤｅｃｔｉｎ１リガンド、ＴＬＲ３リガンド、ＴＬＲ４リガンド、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンド、および／またはＴＬＲ９リガンドである。

本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ１／２リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）１及びＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）２のヘテロダイマーのリガンドを意味し、例えば細菌の細胞壁由来のトリアシル化リポタンパク及びその塩が含まれるが、これらは抽出物、生成物または合成品であってもよく、またこれらに限定されない。

本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ１／２リガンドは、Ｐａｍ_３ＣＳＫ_４である。Ｐａｍ_３ＣＳＫ_４は、式

を有する。

本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ２およびＤｅｃｔｉｎ１リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）２及びβ１，３−グルカン受容体（Ｄｅｃｔｉｎ１）のリガンドを意味し、例えば真菌の細胞壁由来のβ１，３−グルカン及びその塩が含まれるが、これらは抽出物、生成物または合成品であってもよく、またこれらに限定されない。本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ２およびＤｅｃｔｉｎ１リガンドは、酵母細胞壁由来のＺｙｍｏｓａｎである。

本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ３リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）３のリガンドを意味し、例えばウイルス由来の二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）及びその塩が含まれるが、これらは抽出物、生成物または合成品であってもよく、またこれらに限定されない。本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ３リガンドは、合成品であるポリイノシンポリシチジン酸（Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ））及び／またはその塩である。

本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ４リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）４のリガンドを意味し、例えば細菌もしくは植物由来のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）、特にリピドＡ誘導体、例えばモノホスホリルリピドＡ、３脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ）、ＯＭ１７４、ＯＭ ２９４ ＤＰもしくはＯＭ １９７ ＭＰ−Ａｃ ＤＰ等、アルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰ）、例えばＷＯ ９８５０３９９もしくはＵＳ ６３０３３４７に開示されるＡＧＰまたはＵＳ ６７６４８４０に開示されるようなＡＧＰの塩を含み、また、パントエア菌由来リポポリサッカライド、グルコピラノシルリピッド、ヒアルロン酸ナトリウムを含むがこれらに限定されない。

本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ４リガンドは、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ属（例えばＡｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｘｙｌｉｎｕｍ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ等）、Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ属（例えばＺｙｍｏｍｏｎａｓ ｍｏｂｉｌｉｓ等）、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ属（例えばＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ等）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ属（例えばＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ等）、Ｐａｎｔｏｅａ属（例えばＰａｎｔｏｅａ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ等）由来のリポポリサッカライドが好ましい。これらのリポポリサッカライド由来の抽出物または精製したリポポリサッカライドをそのまま用いる事も可能である。また、例えばＰａｎｔｏｅａ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ由来のリポポリサッカライド（ＩＰ−ＰＡ１）はフナコシから購入できる。また、本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ４リガンドは、パントエア菌由来リポポリサッカライド、グルコピラノシルリピッド、および／またはヒアルロン酸ナトリウムである。

本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）７および／またはＴＬＲ８のリガンドを意味し、例えば一本鎖ＲＮＡ、イミキモド、レシキモド（Ｒ８４８）、ＴＬＲ７−ＩＩおよび他の化合物、例えばロキソリビンおよびブロピリミンを含むがこれらに限定されない。

本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンドは、イミキモドである。イミキモドは式

の１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンであり、例えば特表平７−５０５８８３号公報（特許文献４）にその特徴および製造法が記載されている。

別の好ましい態様において、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンドは、レシキモドである。レシキモドは式

の４−アミノ−２−（エトキシメチル）−α，α−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノールである。

別の好ましい態様において、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンドはＴＬＲ７−ＩＩである。ＴＬＲ７−ＩＩは式、

で表される。

別の好ましい態様において、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンドはブロピリミンである。ブロピリミンは式、

で表される。

本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ９リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）９のリガンドを意味し、例えば、ＯＤＮ１８２６等が含まれる。本発明において用いるＴＬＲ９リガンドは抽出物、生成物または合成品であってもよく、またこれらに限定されない。本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ９リガンドは、ＯＤＮ１８２６である。

ＯＤＮ１８２６は、以下の配列（配列番号１２）からなるオリゴデオキシヌクレオチドである。

本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ２／６リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）２及びＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）６のヘテロダイマーのリガンドを意味し、例えばマイコプラズマの細胞壁由来のジアシル化リポタンパク及びその塩が含まれるが、これらは抽出物、生成物または合成品であってもよく、またこれらに限定されない。本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ２／６リガンドは、Ｐａｍ_２ＣＳＫ_４、ＭＡＬＰ−２及び／またはＦＳＬ−１である。

Ｐａｍ_２ＣＳＫ_４は、次の式で表される。

ＦＳＬ−１は、次の式で表される。

本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ５リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）５のリガンドを意味し、例えば、フラジェリン等が含まれる。本発明において用いるＴＬＲ５リガンドは抽出物、生成物または合成品であってもよく、またこれらに限定されない。本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ５リガンドは、フラジェリンである。

Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、そのｉｎ ｖｉｖｏ活性化によって特異的サイトカイン、ケモカインおよび成長因子が関与する先天性免疫応答を開始させる、Ｉ型膜貫通タンパク質のファミリーである。全てのＴＬＲが一定の細胞内シグナル伝達分子、例えば核性因子κＢ（ＮＦ−κＢ）およびマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰキナーゼ）などを活性化することができる一方で、放出されるサイトカインおよびケモカインの特異的集合物は各ＴＬＲに固有なようである。ＴＬＲ３、７、８、および９は、免疫細胞（樹状細胞および単球など）のエンドソーム区画またはリソソーム区画中に存在するＴＬＲのサブファミリーを含む。具体的には、ＴＬＲ３は、樹状細胞や繊維芽細胞など広範囲な細胞によって発現され、ＴＬＲ７は、形質細胞様樹状細胞によって発現され、且つより少ない程度で単球によって発現され、ＴＬＲ８は、単球ならびに単球由来樹状細胞および骨髄性樹状細胞によって発現され、ＴＬＲ９は、形質細胞様樹状細胞によって発現される。このサブファミリーは、微生物核酸（一本鎖ＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＤＮＡなど）の認識を媒介する。ＴＬＲ３、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８、ＴＬＲ９のアゴニストは、種々の炎症性サイトカイン（例えばインターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＴＮＦ−α、およびインターフェロン−γが含まれる）の産生を刺激する。かかるアゴニストはまた、共刺激分子（例えばＣＤ４０、ＣＤ８０、およびＣＤ８６など）、主要組織適合性複合体分子、およびケモカイン受容体の発現の増加を促進する。Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮαおよびＩＦＮβ）はまた、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８アゴニストでの活性化の際に細胞によって産生される。

本明細書において使用するとき、用語「環状ジヌクレオチド」は、２個のヌクレオチドの糖部分のＯＨ基２個が、各々同一のリン酸分子に対してエステルを生成し、環状化した分子およびその類似体を意味し、例えば環状ジＡＭＰ（ｃ−ｄｉ−ＡＭＰ）、環状ジＧＭＰ（ｃ−ｄｉ−ＧＭＰ）、ｃ−ｄＧｐＧｐ、ｃ−ｄＧｐｄＧｐ、ｃ−ＧｐＡｐ、ｃ−ＧｐＣｐ、ｃ−ＧｐＵｐ等を含むが、これらに限定されない。環状ジヌクレオチドは、樹状細胞またはＴ細胞を活性化する。環状ジヌクレオチドのさらなる例、それらをアジュバントとして使用できること、およびそれらの製造方法は、特表２００７−５２９５３１号公報（特許文献５）に記載されている。本発明の好ましい態様において、環状ジヌクレオチドは、環状ジＧＭＰ及び／又は環状ジＡＭＰである。環状ジＧＭＰは式

を有し、Ｋａｗａｉ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｕｐｐｌ．３：１０３−４にその合成方法が記載されている。

本明細書において使用するとき、用語「ヘルパーペプチド」は、ヘルパーＴ細胞を活性化するあらゆるペプチドを意味し、例えば（結核菌由来ヘルパーペプチド、麻疹ウイルス由来ヘルパーペプチド、Ｂ型肝炎ウイルス由来ヘルパーペプチド、Ｃ型肝炎ウイルス由来ヘルパーペプチド、トラコーマクラミジア由来ヘルパーペプチド、熱帯性マラリア原虫スポロゾイド由来ヘルパーペプチド、ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈａｅｍｏｃｙａｎｉｎ由来ヘルパーペプチド、破傷風毒素由来ヘルパーペプチド、百日咳毒素由来ヘルパーペプチド、ジフテリア毒素由来ヘルパーペプチド、癌細胞由来ヘルパーペプチド（例えばＩＭＡ−ＭＭＰ−００１ヘルパーペプチド、ＣＥＡ−００６ヘルパーペプチド、ＭＭＰ−００１ヘルパーペプチド、ＴＧＦＢＩ−００４ヘルパーペプチド、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（ａａ７７６−７９０）ヘルパーペプチド、ＡＥ３６ヘルパーペプチド、ＡＥ３７ヘルパーペプチド、ＭＥＴ−００５ヘルパーペプチド、ＢＩＲ−００２ヘルパーペプチドなど）、ユニバーサルヘルパーアナログ（例えばＰＡＤＲＥ）を含む。

また、本発明においては、上記のようなヘルパーペプチドに代えて、またはこれと組み合わせて、該ヘルパーペプチドの全部または一部のアミノ酸が置換や修飾等により改変されたペプチド（以下、「改変ヘルパーペプチド」と称する）も使用することができる。
改変ヘルパーペプチドには、例えば、
（ａ）元のヘルパーペプチドのアミノ酸配列において、１個から数個、例えば１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸が置換、欠失または付加されたアミノ酸配列からなるペプチド；および
（ｂ）元のヘルパーペプチドのアミノ酸配列において、全部または一部のアミノ酸、例えば１個または複数個、例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個または１５個のアミノ酸が修飾されたアミノ酸配列からなるペプチド
が含まれる。
改変ヘルパーペプチドが有し得るアミノ酸の「修飾」としては、これらに限定されないが、例えば、アセチル化、メチル化などのアルキル化、グリコシル化、ヒドロキシル化、カルボキシル化、アルデヒド化、リン酸化、スルホニル化、ホルミル化、ミリストイル化やパルミトイル化やステアロイル化のような脂肪鎖付加修飾、オクタノイル化、エステル化、アミド化、脱アミド化、シスチン修飾やグルタチオン修飾やチオグリコール酸修飾のようなジスルフィド結合形成修飾、糖化、ユビキチン化、スクシンイミド形成、グルタミル化、プレニル化等が挙げられる。また、改変ヘルパーペプチドは、１個以上のアミノ酸の置換、欠失または付加と、１個以上のアミノ酸の修飾を組み合わせて含むものであってもよい。

本発明の好ましい態様において、ヘルパーペプチドは、１０〜１８個のアミノ酸、好ましくは１２〜１６個のアミノ酸、より好ましくは１３〜１５個のアミノ酸からなるものである。本発明の好ましい態様において、ヘルパーペプチドはＰｅｐｔｉｄｅ−２５または改変Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５またはＰＡＤＲＥである。改変Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５の一例はＰｅｐｔｉｄｅ−２５Ｂである。Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５は、ヒト型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）によって分泌される主要タンパク質の一つであるＡｇ８５Ｂのアミノ酸残基２４０〜２５４に対応する、配列Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｈｅ（配列番号１３）からなる１５アミノ酸のペプチドである。Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５Ｂは、免疫賦活効果を高めるためにＰｅｐｔｉｄｅ−２５の一部アミノ酸を改変した、改変Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５の一例であり、配列Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｈｅ（配列番号１４）からなる１５アミノ酸のペプチドである。ＰＡＤＲＥは、配列Ｄ−Ａｌａ Ｌｙｓ ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ−Ａｌａ Ｖａｌ Ａｌａ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｄ−Ａｌａからなる１３アミノ酸のペプチドである（本願において、配列番号１５として示す）。

本明細書において使用するとき、用語「免疫調節低分子薬物」は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ等の免疫細胞を活性化または抑制する物質のうち、上述したＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチド、のいずれにも該当しないものを意味する。免疫調節低分子薬物としては、例えば、ベスタチン、ピドチモド、レバミゾール、ゴロチモド、ホルフェニシノール、およびそれらの誘導体、ならびにそれらの薬理学的に許容される塩などが挙げられる。例えば、レバミゾールの薬理学的に許容される塩としては、レバミゾール塩酸塩などが挙げられる。

ベスタチンは式

で表される。

ピドチモドは式

で表される。

レバミゾール塩酸塩は式

で表される。

本発明において、免疫調節低分子薬物は、通常、分子量１０００未満、好ましくは５００未満の化合物である。本発明の好ましい態様において、免疫調節低分子薬物は、ベスタチン、ピドチモドおよびレバミゾール塩酸塩からなる群より選択される１種以上の化合物である。

一つの態様において、本発明は、所望の抗原を経皮投与する場合に、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチド、免疫調節低分子薬物がＴｈ１細胞比率を増大させるのに好適であることを見出したものである。したがって、一つの態様において、本願発明の細胞性免疫誘導促進剤は、それらから選択される１種以上の物質である。細胞性免疫の誘導を定量的に測定する方法としては様々なものが開発されており、そのいずれか１つまたはそれ以上、例えば実施例に記載のＥＬＩＳＰＯＴ法を用いてよい。

好ましい態様において、本発明の経皮投与用ワクチン組成物が含有する細胞性免疫誘導促進剤は、ＴＬＲリガンドおよびヘルパーペプチドからなる群より選択される１種以上であり、より好ましくは、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンド、ヘルパーペプチドからなる群より選択される１種以上である。

本明細書において使用するとき、非侵襲的投与とは、物理的刺激および／または化学的刺激、好ましくは物理刺激（例えばテープストリッピング、マイクロニードル）を積極的に皮膚に与えることなく、投与することを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「低刺激条件」は、皮膚に与えられる刺激が、従来のワクチンに含まれる抗原の皮膚透過性を向上させるために皮膚に通常与えられる刺激よりも低い条件または皮膚に刺激を与えない条件を意味する。従来のワクチン組成物を経皮投与する際、投与前または投与時に皮膚に物理的および／または化学的刺激を与えて抗原の皮膚透過性を向上させている。好ましい態様において、低刺激条件としては、物理的刺激が低い条件および化学的刺激が低い条件が挙げられる。物理的刺激が低い条件は、例えば、ワクチン投与前の皮膚刺激評価用モデル動物での経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）（ｇ／ｈ・ｍ^２）が５０以下、好ましくは４５以下、より好ましくは４０以下、さらに好ましくは３５以下、さらにより好ましくは３０以下の条件である。無処置の皮膚ではＴＥＷＬレベルは約２（ｇ／ｈ・ｍ^２）であるから、投与前のＴＥＷＬレベルは２（ｇ／ｈ・ｍ^２）以上となる。一つの態様において、化学的刺激が低い条件は、皮膚刺激評価用モデル動物の皮膚内における胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）レベル（ｐｇ／ｍｇタンパク質）が１００００以下、好ましくは９０００以下、より好ましくは８０００以下、より好ましくは７０００以下、より好ましくは６０００以下、より好ましくは５０００以下、より好ましくは４０００以下、より好ましくは３０００以下、より好ましくは２０００以下、より好ましくは１０００以下、より好ましくは９００以下、より好ましくは８００以下、より好ましくは７００以下、より好ましくは６００以下、より好ましくは５００以下、最も好ましくは４００以下の条件である。無処置の皮膚ではＴＳＬＰレベルは約１（ｐｇ／ｍｇタンパク質）であるから、投与終了時にはＴＳＬＰレベルは１（ｐｇ／ｍｇタンパク質）を超え、好ましくは２（ｐｇ／ｍｇタンパク質）を超え、より好ましくは３（ｐｇ／ｍｇタンパク質）を超える。胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）はＴｈ２細胞の分化やリクルートに関与するサイトカインであり、本発明において皮膚刺激の程度の指標として（値が大きいほど刺激が強い）、あるいは皮膚刺激等によるＴｈ２細胞の増加（Ｔｈ１細胞比率の低下）の指標として利用可能である。物理的刺激が低い条件を達成するための手段は例えば、本発明のワクチン組成物を、対象のインタクトな皮膚面上に投与することが挙げられる。かかる手段はより具体的には、本発明のワクチン組成物を対象に投与する前に、当該対象の皮膚面上に前処理、例えばテープストリッピング、マイクロニードル穿刺等を行わないことが挙げられる。化学的刺激が低い条件を達成するための手段は例えば、本発明のワクチン組成物が、皮膚刺激有効量未満の刺激性化学成分を含有する、または含有しないことが挙げられる。ここにいう刺激性化学成分とは、対象の皮膚に刺激性を有する化学成分、例えばエタノール、界面活性剤等が挙げられる。所望の対象への本発明のワクチン組成物の投与においては、皮膚刺激評価用モデル動物を用いて上記低刺激条件を達成するための具体的手段を決定し、かかる手段を所望の対象、例えばヒト等への投与の際に適用することができる。

本明細書において使用するとき、用語「癌」は、癌遺伝子の異常な発現、例えば過剰発現を伴う癌、例えば造血器腫瘍や固形癌を意味する。癌遺伝子としては、例えば、サバイビン遺伝子、ＧＰＣ３遺伝子、ＨＥＲ２／ｎｅｕ遺伝子、ＭＡＧＥ３遺伝子、ＭＡＧＥ Ａ１遺伝子、ＭＡＧＥ Ａ３／Ａ６遺伝子、ＭＡＧＥ Ａ４遺伝子、ＭＡＧＥ１２遺伝子、プロテイナーゼ‐３遺伝子、ＡＦＰ遺伝子、ＣＡ−１２５遺伝子、ＣＤ４４遺伝子、ＣＥＡ遺伝子、ｃ−Ｋｉｔ遺伝子、ｃ−ｍｅｔ遺伝子、ｃ−ｍｙｃ遺伝子、Ｌ−ｍｙｃ遺伝子、ＣＯＸ２遺伝子、ＣｙｃｌｉｎＤ１遺伝子、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ−７遺伝子、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ−１９遺伝子、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ−２０遺伝子、Ｅ２Ｆ１遺伝子、Ｅ２Ｆ３遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、Ｇｌｉ１遺伝子、ｈＣＧβ遺伝子、ＨＩＦ−１α遺伝子、ＨｎＲＮＰ Ａ２／Ｂ１遺伝子、ｈＴＥＲＴ遺伝子、ＭＤＭ遺伝子、ＭＤＲ−１遺伝子、ＭＭＰ−２遺伝子、ＭＭＰ−９遺伝子、Ｍｕｃ−１遺伝子、Ｍｕｃ−４遺伝子、Ｍｕｃ−７遺伝子、ＮＳＥ遺伝子、ＰｒｏＧＲＰ遺伝子、ＰＳＡ遺伝子、ＲＣＡＳ１遺伝子、ＳＣＣ遺伝子、サイモグロブリン遺伝子、ＶＥＧＦ−Ａ遺伝子、ＶＥＧＦ−Ａ遺伝子等が挙げられる。サバイビン遺伝子の異常な発現を伴う癌には、悪性リンパ腫、膀胱癌、肺癌、大腸癌等が含まれるが、これらに限定されない。ＧＰＣ３遺伝子の異常な発現を伴う癌には、肝癌、胆管癌、胃癌等が含まれるが、これらに限定されない。ＨＥＲ２／ｎｅｕ遺伝子の異常な発現を伴う癌には、乳癌、胃癌、卵巣癌、子宮癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、前立腺癌等が含まれるが、これらに限定されない。ＭＡＧＥ３遺伝子の異常な発現を伴う癌には、メラノーマ、肺癌、頭頚部癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、肝臓癌が含まれるが、これらに限定されない。プロテイナーゼ‐３遺伝子の異常な発現を伴う癌には、急性骨髄性白血病、膵臓癌が含まれるが、これらに限定されない。

本明細書において使用するとき、用語「遺伝子の異常な発現」は、ある細胞におけるその遺伝子の発現レベルが、同じ組織の他の細胞と比較して、顕著に、例えば２倍以上、例えば４倍以上、上昇または低下していることを意味する。用語「過剰発現」は、異常な発現が発現レベルの上昇であることを意味する。遺伝子の発現レベルは、当該技術分野で周知のいずれかの方法を用いて、容易に測定できる。

本明細書において使用するとき、用語「対象」は、実用段階においてワクチン組成物を投与して免疫応答を誘導し得るいずれかの動物、典型的にはヒトを含む哺乳類、例えばマウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、サル、チンパンジー等を意味する。特に好ましい対象は、ヒトである。

本明細書において使用するとき、用語「免疫評価用モデル動物」は、ワクチン組成物の免疫誘導特性を評価するためのモデル動物を意味し、具体的には細胞性免疫誘導レベル、Ｔｈ１細胞比率を評価するためのモデル動物を意味する。免疫評価用モデル動物としては、ワクチン組成物中の抗原と、動物のＭＨＣクラス１分子との適合性を考慮し、ワクチン組成物中の抗原による細胞性免疫誘導が評価可能な動物を用いる。例えばＨＬＡ−Ａ^＊２４型ＭＨＣ拘束性クラス１ペプチドを含むワクチン組成物の場合は、ＢＡＬＢ／ｃマウスで評価する。ＨＬＡ−Ａ^＊０２型ＭＨＣ拘束性ペプチドを含むワクチン組成物の場合は、ＨＬＡ−Ａ^＊０２型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウスで評価する。他のＨＬＡ型のＭＨＣ拘束性ペプチドを含むワクチン組成物の場合は、そのＨＬＡ型のＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な動物で評価する。蛋白抗原を含むワクチン組成物の場合は、蛋白抗原のアミノ酸配列中に含まれるクラス１エピトープのうち、細胞性免疫誘導したいクラス１エピトープと適合性のあるＭＨＣを有する動物で評価する。経皮投与部位を確保するために毛刈りをした場合は、毛刈りによる皮膚ダメージを十分に回復させた状態の動物を用いる。

本明細書において使用するとき、用語「皮膚刺激評価用モデル動物」は、皮膚の物理的刺激の指標としての経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）、ワクチン組成物の皮膚刺激特性としてのＴＳＬＰを評価するためのモデル動物を意味する。ワクチン組成物に含まれる抗原の種類に関わらず、皮膚刺激評価用モデル動物としてはＣ５７ＢＬ／６マウスを用いる。経皮投与部位を確保するために毛刈りをした場合は、毛刈りによる皮膚ダメージを十分に回復させた状態の動物を用いる。

本明細書において使用するとき、用語「癌抗原」は、腫瘍細胞ないし癌細胞特異的に発現し、免疫応答を誘導し得るタンパク質、ペプチド等の物質を意味する。

本明細書において使用するとき、用語「癌抗原ペプチド」は、癌抗原タンパク質に由来する部分ペプチドであって、細胞性免疫応答を誘導し得るものをいう。通常、癌抗原ペプチドは、癌遺伝子の産物である癌抗原タンパク質が癌細胞内で分解されることによって生じ、ＭＨＣクラスＩ分子によって癌細胞の表面に提示される。癌ワクチン製剤において用いる癌抗原ペプチドは、癌細胞から単離・精製された内因性の癌抗原ペプチドであってもよく、内因性の癌抗原ペプチドと同じアミノ酸配列を有する合成ペプチドであってもよい。本発明の好ましい態様においては、例えば、サバイビン２Ｂペプチドおよび／または改変サバイビン２Ｂペプチド、ＧＰＣ３ペプチドおよび／または改変ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＰＲ１ペプチドおよび／または改変ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ならびにＭＵＣ１ペプチドおよび／または改変ＭＵＣ１ペプチドからなる群より選択される、内因性または合成の癌抗原ペプチドを細胞性免疫誘導のために使用できる。

本明細書において使用するとき、用語「ウイルス抗原」は、ウイルスもしくはその構成成分またはそれらに由来する物質であって、細胞性免疫応答を誘導し得るものを意味する。したがって、ウイルス抗原を、好ましくは細胞性免疫誘導促進剤と共に、対象に経皮投与することによってウイルス性疾患を処置または予防することができる。本発明の好ましい態様においては、例えば、ＩＰＥＰ８７ペプチドおよび／または改変ＩＰＥＰ８７ペプチドならびにＨＢＶｅｎｖペプチドおよび／または改変ＨＢＶｅｎｖペプチドからなる群より選択されるペプチドを、ウイルス抗原として用いることができる。

本明細書において使用するとき、用語「ウイルス性疾患」は、ウイルスの感染、増殖等により引き起こされる疾患を意味し、例えば、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、子宮頸がん、尖圭コンジローマ、ＨＩＶ感染症、性器クラミジア感染症、単純疱疹等が挙げられる。

ＩＩ．経皮投与用ワクチン組成物
本発明の一つの態様において、本発明の経皮投与用ワクチン組成物は、対象におけるＴｈ１細胞／Ｔｈ２細胞のバランスをＴｈ１細胞が優位な状態に制御することにより、種々の抗原の経皮投与において高い細胞性免疫誘導効果を発揮するものである。

本明細書において使用するとき、用語「経皮投与用」組成物は、経皮投与に通常使用されるいずれかの製剤、例えばリニメント剤もしくはローション剤のような外用液剤、エアゾール剤のような外用スプレー剤、軟膏剤、硬膏剤、クリーム剤、ゲル剤またはテープ剤もしくはパップ剤のような貼付剤であってよい。これらの組成物の区分、定義、性質、製法等は、当該技術分野において周知であり、例えば日本薬局方第１６版を参照されたい。

例えばリニメント剤用基剤としては、水、エタノール、脂肪油、例えば硬パラフィン、軟パラフィン、液パラフィン、グリセリン、パラフィン油、蜜蝋、金属石鹸；粘液（ｍｕｃｉｌａｇｅ）；天然油［例：アーモンド油、コーン油、ピーナッツ油、ヒマシ油、オリーブ油、またはそれらの誘導体（例えば、ポリオキシルヒマシ油）］；羊脂若しくはその誘導体、脂肪酸及び／又はエステル（例：ステアリン酸、オレイン酸、ミリスチン酸イソプロピル）が挙げられる。
ローション剤は、活性成分を水性の液中に微細に均質分散した製剤であり、懸濁性ローション剤と、乳濁性ローション剤とがある。懸濁化剤としては、例えばアラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ベントナイト等が挙げられる。乳化剤としては、例えばラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタン脂肪酸エステル等が挙げられる。

例えば軟膏基剤としては、一般に疎水性基剤としての油脂類、ロウ、炭化水素化合物等を用いることができる。具体的には、軟膏基剤としては、黄色ワセリン、白色ワセリン、パラフィン、流動パラフィン、プラスチベース、シリコーン等の鉱物性基剤、ミツロウ、動植物性油脂等の動植物性基剤等が挙げられる。
例えばクリーム剤用基剤としては、親水軟膏、バニシングクリーム等の水／油型基剤；親水ワセリン、精製ラノリン、アクアホール、オイセリン、ネオセリン、加水ラノリン、コールドクリーム、親水プラスチベース等の油／水型基剤が挙げられる。
例えばゲル基剤としては、ヒドロゲル基剤としてのカルボキシビニルポリマー、ゲルベース、無脂肪性軟膏、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デンプン、キサンタンガム、カラヤガム、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、カルボキシメチルエチルセルロース（ＣＭＥＣ）、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、トラガント、アラビアゴム、タラガム、タマリンドシードガム、サイリウムシードガム、寒天、ジェランガム、グルコマンナン、ローカストビーンガム、グアーガム、カラギーナン、デキストリン、デキストラン、アミロース、カルボキシメチルセルロースカリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、プルラン、キトサン、カルボキシメチルスターチナトリウム、プランタゴ種皮、ガラクトマンナン、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＲＳ、メタクリル酸コポリマーＬ、メタクリル酸コポリマーＬＤ、メタクリル酸コポリマーＳ、メチルアクリレート・メタクリル酸・メチルメタアクリレートコポリマー、アクリル酸エチル・メタクリル酸メチルコポリマー、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、カゼイン、アルギン酸アルキルエステル、ゼラチン、ポリエチレングリコール等を用いることができる。

例えばパップ剤用基剤としては、ゼラチン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリアクリル酸ナトリウム、カオリン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、グリセリン、プロピレングリコール、水等が挙げられる。
例えばテープ剤は、アクリル系粘着剤、天然ゴム系粘着剤、合成ゴム系粘着剤（合成イソプレンゴム、ポリイソブチレン（ＰＩＢ）、スチレン−ブタジエンゴム、スチレン−イソプレン−スチレン（ＳＩＳ）ゴム）、シリコーン系粘着剤、ビニルエステル系粘着剤、ビニルエーテル系粘着剤等を含む粘着剤層と、粘着剤層を支持する支持体とを含む。所望により、使用前に粘着剤層を露出させず、使用時に粘着剤層から容易に剥離できる剥離ライナーをさらに含んでいてもよい。

本発明の組成物中における抗原および細胞性免疫誘導促進剤の割合は、特に限定されない。一つの態様において、本発明の組成物は、所望の抗原を、組成物の総重量に基づき、好ましくは０．０１〜４０重量％、より好ましくは０．１〜３０重量％含む。一つの態様において、本発明の組成物は、細胞性免疫誘導促進剤を、組成物の総重量に基づき、好ましくは０．００１〜３０重量％、より好ましくは０．０１〜２０重量％含む。

本発明の経皮投与用ワクチン組成物がテープ剤の形態である場合、テープ剤は、マトリクス型テープ剤の場合、抗原である有効成分等を含む粘着剤層と、粘着剤層を支持する支持体を含む。テープ剤は、リザーバー型テープ剤の場合、抗原である有効成分等を含むリザーバーおよび粘着剤層と、リザーバーおよび粘着剤層を支持する支持体を含む。該テープ剤（以下、「本発明のテープ剤」とも称する）の粘着剤層は、抗原を含み、所望により、さらに細胞性免疫誘導促進剤を含む。一つの態様において、本発明のテープ剤の粘着剤層は、抗原を、粘着剤層の総重量に基づき、好ましくは０．０１〜４０重量％、より好ましくは０．１〜３０重量％含む。本発明のテープ剤の粘着剤層が細胞性免疫誘導促進剤を含む場合、細胞性免疫誘導促進剤は、粘着剤層の総重量に基づき、好ましくは０．００１〜３０重量％、より好ましくは０．０１〜２０重量％含まれる。

本発明のテープ剤の粘着剤層を形成すべき粘着剤は特に限定されず、例えば、アクリル系重合体からなるアクリル系粘着剤；スチレン−ジエン−スチレンブロック共重合体（例えばスチレン−イソプレン−スチレンブロック共重合体、スチレン−ブタジエン−スチレンブロック共重合体など）、ポリイソプレン、ポリイソブチレン、ブチルゴム、ポリブタジエン等のゴム系エラストマーを含むゴム系粘着剤；シリコーンゴム、ジメチルシロキサンベース、ジフェニルシロキサンベース等のシリコーン系粘着剤；ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルエチルエーテル、ポリビニルイソブチルエーテル等のビニルエーテル系粘着剤；酢酸ビニル−エチレン共重合体等のビニルエステル系粘着剤；ジメチルテレフタレート、ジメチルイソフタレート、ジメチルフタレート等のカルボン酸成分と、エチレングリコール等の多価アルコール成分とからなるポリエステル系粘着剤等が挙げられる。特に好ましい粘着剤は、アクリル系粘着剤、ゴム系粘着剤、シリコーン系粘着剤である。これらの粘着剤はその固形分として、粘着剤層中に、粘着剤層の総重量に基づき、好ましくは１０〜９０重量％、より好ましくは２０〜８０重量％含まれる。

アクリル系粘着剤の例としては、（メタ）アクリル酸Ｃ２〜１８アルキルエステルを第１の単量体として含む重合体を主成分とするアクリル酸エステル系粘着剤が挙げられる。上記（メタ）アクリル酸アルキルエステル（第１の単量体）の例としては、アルキル基の炭素数が１〜１８の直鎖状、分岐鎖状又は環状アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、へキシル、シクロヘキシル、へプチル、オクチル、２−エチルヘキシル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシルなど）である（メタ）アクリル酸アルキルエステルなどが挙げられ、アルキル基の炭素数が４〜１８の直鎖状、分岐鎖状又は環状アルキル基（例えば、ブチル、ペンチル、へキシル、シクロヘキシル、へプチル、オクチル、２−エチルヘキシル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシルなど）である（メタ）アクリル酸アルキルエステルが好ましい。さらに、常温で粘着性を与えるために、重合体のガラス転移温度を低下させるモノマー成分の使用がさらに好適であることから、アルキル基の炭素数が４〜８の直鎖状、分岐鎖状又は環状アルキル基（例えば、ブチル、ペンチル、へキシル、シクロヘキシル、へプチル、オクチル、２−エチルヘキシルなど、好ましくは、ブチル、２−エチルヘキシル、シクロヘキシル、特に好ましくは２−エチルヘキシル）である（メタ）アクリル酸アルキルエステルがより好ましい。具体的にはアクリル酸ブチル、アクリル酸２−エチルへキシル、メタクリル酸２−エチルへキシル、アクリル酸シクロへキシル、メタクリル酸シクロへキシルなどがより好ましく、中でも、アクリル酸２−エチルへキシルが最も好ましい。これら（メタ）アクリル酸アルキルエステル（第１単量体成分）は１種又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

また、アクリル系粘着剤は、上記（メタ）アクリル酸アルキルエステルと共重合可能な第２の単量体を含有してもよく、このような第２の単量体としては、架橋剤を用いる際の架橋点となりうる官能基を有する単量体が挙げられる。架橋反応に関与できる官能基としては、水酸基、カルボキシル基、ビニル基などが挙げられ、水酸基及びカルボキシル基が好ましい。当該単量体（第２単量体成分）の具体例としては、（メタ）アクリル酸ヒドロキシエチルエステル、（メタ）アクリル酸ヒドロキシプロピルエステル、Ｎ−ヒドロキシアルキル（メタ）アクリルアミド、（メタ）アクリル酸、イタコン酸、マレイン酸、無水マレイン酸、メサコン酸、シトラコン酸、グルタコン酸などが挙げられる。これらのうち、入手の容易性の観点から、アクリル酸、メタクリル酸、アクリル酸ヒドロキシエチルエステル（特に、アクリル酸２−ヒドロキシエチル）が好ましく、アクリル酸が最も好ましい。これらの単量体（第２単量体成分）は１種又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

さらに、アクリル系粘着剤は、所望により、第２の単量体以外に第３の単量体を含有してもよい。第３の単量体（第３単量体成分）としては、例えば、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニルなどのビニルエステル類；メチルビニルエーテル、エチルビニルエーテルなどのビニルエーテル類；Ｎ−ビニル−２−ピロリドン、Ｎ−ビニルカプロラクタムなどのビニルアミド類；（メタ）アクリル酸メトキシエチルエステル、（メタ）アクリル酸エトキシエチルエステル、（メタ）アクリル酸テトラヒドロフルフリルエステルなどの（メタ）アクリル酸アルコキシエステル；ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、α−ヒドロキシメチルアクリレートなどの水酸基含有モノマー（第３単量体成分としての使用なので架橋点とはしない）；（メタ）アクリルアミド、ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ブチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−メチロール（メタ）アクリルアミドなどのアミド基を有する（メタ）アクリル酸誘導体；（メタ）アクリル酸アミノエチルエステル、（メタ）アクリル酸ジメチルアミノエチルエステル、（メタ）アクリル酸ｔ−ブチルアミノエチルエステルなどの（メタ）アクリル酸アミノアルキルエステル；（メタ）アクリル酸メトキシエチレングリコールエステル、（メタ）アクリル酸メトキシジエチレングリコールエステル、（メタ）アクリル酸メトキシポリエチレングリコールエステル、（メタ）アクリル酸メトキシポリプロピレングリコールエステルなどの（メタ）アクリル酸アルコキシアルキレングリコールエステル；（メタ）アクリロニトリル；スチレンスルホン酸、アリルスルホン酸、スルホプロピル（メタ）アクリレート、（メタ）アクリロイルオキシナフタレンスルホン酸、アクリルアミドメチルスルホン酸などのスルホン酸を有するモノマー；ビニルピペリドン、ビニルピリミジン、ビニルピペラジン、ビニルピロール、ビニルイミダゾール、ビニルオキサゾール、ビニルモルホリンなどのビニル基含有モノマーなどが挙げられる。これらの中でも、ビニルエステル類、ビニルアミド類が好ましく、ビニルエステル類は酢酸ビニルが好ましく、ビニルアミド類はＮ−ビニル−２−ピロリドンが好ましい。これらの単量体（第３単量体成分）は１種又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

当該アクリル系粘着剤は、（メタ）アクリル酸アルキルエステル（第１単量体成分）と、架橋反応に関与できる官能基を有するビニルモノマー（第２単量体成分）との共重合体である場合、（メタ）アクリル酸アルキルエステルと、架橋反応に関与できる官能基を有するビニルモノマーとは、（メタ）アクリル酸アルキルエステル：架橋反応に関与できる官能基を有するビニルモノマー＝９９〜８５：１〜１５の重量比で配合して共重合させることが好ましく、９９〜９０：１〜１０の重量比がより好ましい。

また、当該アクリル系粘着剤が、（メタ）アクリル酸アルキルエステル（第１単量体成分）と、架橋反応に関与できる官能基を有するビニルモノマー（第２単量体成分）と、これら以外の他のモノマー（第３単量体成分）との共重合体である場合、（メタ）アクリル酸アルキルエステルと、架橋反応に関与できる官能基を有するビニルモノマーと、これら以外の他のモノマーとは、（メタ）アクリル酸アルキルエステル：架橋反応に関与できる官能基を有するビニルモノマー：これら以外の他のモノマー＝４０〜９４：１〜１５：５〜５０の重量比で配合して共重合させることが好ましく、５０〜８９：１〜１０：１０〜４０の重量比がより好ましい。

重合反応は、自体公知の方法で行えばよく特に限定されないが、例えば、上記のモノマーを、重合開始剤（例えば、過酸化ベンゾイル、アゾビスイソブチロニトリルなど）を添加して、溶媒（例えば、酢酸エチルなど）中で、５０〜７０℃で５〜４８時間反応させる方法が挙げられる。

本発明における特に好ましいアクリル系粘着剤としては、例えば、アクリル酸２−エチルへキシルエステル／アクリル酸／Ｎ−ビニル−２−ピロリドンの共重合体、アクリル酸２−エチルへキシルエステル／Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド／Ｎ−ビニル−２−ピロリドンの共重合体、アクリル酸、２−エチルへキシルエステル／アクリル酸２−ヒドロキシエチルエステル／酢酸ビニルの共重合体、アクリル酸２−エチルへキシルエステル／アクリル酸の共重合体等であり、より好ましくは、アクリル酸２−エチルへキシルエステル／アクリル酸／Ｎ−ビニル−２−ピロリドンの共重合体である。

所望により、これらのアクリル系粘着剤に、紫外線照射や電子線照射などの放射線照射による物理的架橋、三官能性イソシアネートなどのイソシアネート系化合物や有機過酸化物、有機金属塩、金属アルコラート、金属キレート化合物、多官能性化合物（多官能性外部架橋剤やジアクリレートやジメタクリレートなどの多官能性内部架橋用モノマー）などの各種架橋剤を用いた化学的架橋処理を施してもよい。

ゴム系粘着剤としては、ゴム系エラストマーとして例えば、ポリイソブチレン・ポリブテン系、スチレン・ジエン・スチレンブロック共重合体、スチレン・ブタジエン系、ニトリル系、クロロプレン系、ビニルピリジン系、ポリイソブチレン系、ブチル系、イソプレン・イソブチレン系等のエラストマーが配合されたゴム系粘着剤が挙げられる。中でも、ペプチドおよびその細胞性免疫誘導促進剤に対する溶解性および皮膚接着性の点から、ポリイソブチレン（ＰＩＢ）、スチレン・ジエン・スチレンブロック共重合体〔例えば、スチレン・ブタジエン・スチレンブロック共重合体（ＳＢＳ）、スチレン・イソプレン・スチレンブロック共重合体（ＳＩＳ）等〕等が好ましく使用され、これらは混合して用いてもよい。

また、ゴム系粘着剤は、適度な粘着力および薬剤溶解性を得るために、同一成分または異なる成分で平均分子量の異なるゴム系エラストマーを混合して使用することができる。例えば、ポリイソブチレンを例に挙げて説明すると、平均分子量１５０，０００〜５，５００，０００の高分子量のポリイソブチレンと、平均分子量１０，０００〜１５０，０００の中分子量のポリイソブチレンおよび／または平均分子量５００〜４，０００の低分子量のポリイソブチレンとの混合物が好ましい。ここで、高分子量、中分子量および低分子量のポリイソブチレンを、高分子量：中分子量：低分子量＝１０〜８０、好ましくは２０〜７０：０〜９０、好ましくは１０〜８０：０〜８０、好ましくは１０〜６０の重量比で配合することが好適である。

本発明における平均分子量とは、Ｆｌｏｒｙの粘度式から計算される粘度平均分子量を意味し、シュタウディンガーインデックス（Ｊ_０）を、２０℃にてウベローデ粘度計のキャピラリー１のフロータイムからＳｃｈｕｌｚ−Ｂｌａｓｃｈｋｅ式により算出し、このＪ_０値を用いて下記式により求めるものである。

当該ゴム系粘着剤には、適度な粘着性を付与するために、例えば、ロジン系樹脂、ポリテルペン樹脂、クマロン−インデン樹脂、石油系樹脂、テルペン−フェノール樹脂、キシレン樹脂、脂環族飽和炭化水素樹脂等の粘着付与剤が配合されていてもよい。粘着付与剤は、これら１種または２種以上をゴム系粘着剤の総重量に基づいて、５０重量％以下、好ましくは５〜４０重量％の割合で配合することができる。

シリコーン系粘着剤としては、ポリオルガノシロキサン系、ポリジメチルシロキサン系、又はポリジメチルジフェニル−シロキサン系等からなるシリコーン系粘着剤が挙げられる。中でも、Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからのＢＩＯ ＰＳＡのような商業的に入手可能なシリコーン系粘着剤等が好ましく使用される。

粘着剤層を支持する支持体としては特に限定されるものではないが、実質的にペプチドや細胞性免疫誘導促進剤を不透過なもの、即ち粘着剤層中に含まれるペプチド、細胞性免疫誘導促進剤、添加剤等が支持体中を通って背面から失われて含有量の低下を引き起こさないものが好ましい。

支持体としては、例えば、ポリエステル、ポリアミド、ポリ塩化ビニリデン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、エチレン−アクリル酸エチル共重合体、ポリテトラフルオロエチレン、アイオノマー樹脂、金属箔等の単独フィルム又はこれらの積層フィルム等を用いることができる。これらのうち、支持体と粘着剤層との接着性（投錨性）を良好とするために、支持体を上記材質からなる無孔のプラスチックフィルムと、多孔質フィルムとの積層フィルムとすることが好ましい。この場合、粘着剤層は多孔質フィルム側に形成することが望ましい。このような多孔質フィルムとしては、粘着剤層との投錨性が向上するものが採用されるが、具体的には紙、織布、不織布、編布、機械的に穿孔処理を施したシート等が挙げられる。これらのうち、取り扱い性等の観点から、特に紙、織布、不織布が好ましい。多孔質フィルムは、投錨性向上、テープ剤の柔軟性及び貼付操作性等の点から、厚み１〜２００μｍの範囲のものが採用される。また、多孔質フィルムとして織布や不織布を用いる場合、目付量を好ましくは５〜３０ｇ／ｍ^２、より好ましくは６〜１５ｇ／ｍ^２とするのがよい。

最も好適な支持体としては、厚さ１．５〜６μｍのポリエステルフィルム（好ましくは、ポリエチレンテレフタレートフィルム）と、目付量６〜１５ｇ／ｍ^２のポリエステル（好ましくは、ポリエチレンテレフタレート）製不織布との積層フィルムが挙げられる。

本発明のテープ剤は、使用時まで粘着剤層の粘着面を保護するために、粘着面に剥離ライナーを積層することが望ましい。剥離ライナーとしては、剥離処理され、充分に軽い剥離力を確保できれば特に限定されるものではないが、例えば、粘着剤層との接触面にシリコーン樹脂、フッ素樹脂等を塗布することによって剥離処理が施された、ポリエステル、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリエチレンテレフタレート等のフィルム、上質紙、グラシン紙等の紙、又は上質紙若しくはグラシン紙等とポリオレフィンとのラミネートフィルム等が用いられる。剥離ライナーの厚みは、好ましくは１０〜２００μｍ、より好ましくは２５〜１００μｍである。剥離ライナーとしては、バリアー性、価格等の点から、ポリエステル（特に、ポリエチレンテレフタレート）樹脂からなるものが好ましい。
さらに、この場合、取り扱い性の点から、２５〜１００μｍ程度の厚みを有するものが好ましい。

また、本発明の組成物は、必要に応じて、添加剤を含んでいてもよい。添加剤は、基剤の主成分、抗原および細胞性免疫誘導促進剤との適合性、意図する投与レジメン等に応じて、例えば、等張化剤、防腐・殺菌剤、酸化防止剤、溶解剤、溶解補助剤、懸濁化剤、充填剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、吸収促進剤、放出速度制御剤、着色剤、可塑剤、架橋剤、粘着剤等、あるいはそれらの２種以上の組合せから選択され得る。また、本発明の組成物がテープ剤の形態である場合、該テープ剤は添加剤として皮膚透過性増強剤を含み得る。

本明細書において使用するとき、用語「皮膚透過性増強剤」は、経皮投与される抗原が皮膚を透過する効率を、それなしでの効率と比較して、改善しうるあらゆる物質を意味する。皮膚透過性増強剤としては、室温（２５℃）で液状、すなわち流動性を有するもの、または２種以上を混合して用いる場合には、最終的に混合物が室温（２５℃）で液状となり、吸収促進効果を有するものであれば特に限定されない。かかる有機液状成分としては粘着剤層との相溶性の観点から疎水性液状成分が好ましい。
かかる皮膚透過性増強剤としては例えば、オレイルアルコール、オクチルドデカノールなどの高級アルコール；グリセリン、エチレングリコール、ポリプロピレングリコールなどの多価アルコール；オレイン酸、カプリル酸などの高級脂肪酸；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸エチルなどの脂肪酸エステル；セバシン酸ジエチル、アジピン酸ジイソプロピルなどの多塩基酸エステル；トリイソステアリン酸ジグリセリル、モノオレイン酸ソルビタン、ジカプリル酸プロピレングリコール、モノラウリン酸ポリエチレングリコール、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビットなどの多価アルコール脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンラウリルエーテルなどのポリオキシエチレンアルキルエーテル；スクアラン、流動パラフィンなどの炭化水素；オリーブ油、ヒマシ油などの植物油；シリコーン油；Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−ドデシルピロリドンのようなピロリドン類；デシルメチルスルホキシドのようなスルホキシドなどが挙げられ、これらは１種で、または２種以上を混合して使用することができる。

ゴム系またはアクリル系の粘着剤を用いる場合、第二の皮膚透過性増強剤を用いることができる。具体的な第二の皮膚透過性増強剤は、例えば、ポリビニルピロリドン、クロスポビドン、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、カルボキシビニルポリマー、ヒドロキシプロピルセルロース等またはそれらの混合物を含むが、これらに限定されない、好ましい態様において、本発明の第二の皮膚透過性増強剤は、ポリビニルピロリドン、クロスポビドンおよび／またはポリプロピレングリコールである。

抗原ペプチドの皮膚透過性増強の観点から、皮膚透過性増強剤としては、高級アルコール、より具体的には、炭素数８〜１８（好ましくは８〜１４）の高級アルコール、脂肪酸エステル、より具体的には、炭素数８〜１８（好ましくは１２〜１６）の脂肪酸と炭素数が１〜１８の１価アルコールとの脂肪酸エステル、多価アルコール脂肪酸エステルなど、特に脂肪酸エステル、特にミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、またはセバシン酸ジエチルが好ましく用いられる。かかる皮膚透過性増強剤の量は、粘着剤層の総重量に基づいて、好ましくは０．１重量％〜７０重量％、より好ましくは１重量％〜６５重量％、より好ましくは５重量％〜６０重量％である。皮膚透過性増強剤の割合が０．１重量％以上である場合、高い経皮吸収促進効果が得られる。７０重量％以下である場合、粘着剤層全体の粘着力、凝集力の低下を抑制しつつ、高い経皮吸収性が得られるので有利である。

本発明の組成物は、低刺激条件下で対象に投与することが好ましい。低刺激条件下における投与は、例えば、（ｉ）皮膚刺激評価用モデル動物で評価した場合の経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）（ｇ／ｈ・ｍ^２）が５０以下となるような投与条件下で本発明の組成物を対象に投与すること、（ｉｉ）皮膚刺激評価用モデル動物で評価した場合の皮膚内ＴＳＬＰレベル（pg/mgタンパク質）が１００００以下となるような組成物を対象に投与すること等により達成し得る。

また、本発明の組成物は、薬理学的に許容される酸もしくはその薬理学的に許容される塩をさらに含有させることにより、細胞性免疫誘導促進効果を向上させることができる。

本明細書において使用するとき、本発明の組成物に含有させ得る、第二の細胞性免疫誘導促進剤としての、「薬理学的に許容される酸」とは、投与対象に有害な作用を及ぼさず、かつ、該組成物中の成分の薬理活性を消失させない酸を意味する。本発明の好ましい態様において、薬理学的に許容される酸は有機酸であり、より好ましくはカルボキシル基を含む有機化合物またはスルホン酸基を含む有機化合物であり、より好ましくは飽和直鎖部分の炭素数が８〜２０である飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪酸または乳酸またはリンゴ酸またはサリチル酸またはマレイン酸またはクエン酸、またはスルホン酸基を含む有機化合物であり、より好ましくは飽和直鎖部分の炭素数が８〜１６である飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪酸または乳酸またはリンゴ酸またはサリチル酸またはマレイン酸またはクエン酸、またはスルホン酸基を含む有機化合物であり、さらに好ましくはデカン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、イソステアリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸およびオレイン酸からなる群より選択される脂肪酸、または乳酸またはサリチル酸またはクエン酸またはメタンスルホン酸である。

本明細書において使用するとき、本発明の組成物に含有させ得る「薬理学的に許容される塩」とは、投与対象に有害な作用を及ぼさず、かつ、該組成物中の成分の薬理活性を消失させない塩を意味する。無機酸塩（例えば塩酸塩やリン酸塩）、有機酸塩（例えば酢酸塩やフタル酸塩、ＴＦＡ塩）、金属塩（アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩）、アルミニウム塩など）、アミン塩（トリエチルアミン塩、ベンジルアミン塩、ジエタノールアミン塩、ｔ−ブチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、アルギニン塩、ジメチルアンモニウム塩、アンモニウム塩など）を含むが、これらに限定されない。

抗原の治療上有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および相対的な健康ならびに他の既知の要因に依存して広範に変化し得るが、一般に、１日用量約０．１μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重で満足のいく結果が得られる。細胞性免疫誘導促進剤は抗原と同時または逐次的に、好ましくは同時に投与される。細胞性免疫誘導促進剤の有効量は、用いる具体的な細胞性免疫誘導促進剤、他の細胞性免疫誘導促進剤の有無などに依存して広範に変化し得るが、１日用量０．０１μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重で満足のいく結果が得られる。１日用量は、１回で投与してもよいが、２回以上、例えば２回、３回、４回または５回などの複数回に分けて投与してもよい。１回あたり連続投与時間は、１分間〜７日間の間で適宜選択される。投与間隔は毎日〜１年に１回（例えば１日１回、２日に１回、３日に１回、１週間に１回、２週間に１回、１月に１回、３月に１回、６月に１回、１年に１回）またはそれより長期の投与間隔から、患者の状態、疾患の重症度、治療目的か予防目的か等に応じて、適宜選択される。一般に、重度の疾患を現実に有する患者の治療目的では、より高頻度、高用量で抗原を投与し、疾患を有さない患者の予防目的では、より低頻度、低用量で抗原を投与する。

本発明では、物理刺激とは擦傷や擦過を始め、角質に損傷を与えるようなあらゆる物理的な刺激を意味する。例えば、粘着テープ等で角質を除去するテープストリッピングの操作や、カッターにより皮膚に損傷を与えるような操作、また微小な針により角質に穴を開けるようなマイクロニードルを用いた操作も当該物理刺激に含まれる。

経皮水分蒸散量とは、角質１ｍ^２から１時間あたりに蒸散される水分量（ｇ）を意味する。経皮水分蒸散量は、水分蒸散量測定装置により容易に短時間で測定可能であり、皮膚の損傷度合を評価する指標として一般的に広く用いられている。本発明においても物理刺激レベルの指標として経皮水分蒸散量を用い得る。

ＴＳＬＰ（Ｔｈｙｍｉｃ ｓｔｒｏｍａｌ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ）とは、皮膚のケラチノサイトや胸腺、粘膜上皮細胞から産生されるＩＬ−７様サイトカインの１種であり、樹状細胞の成熟化や、Ｔ細胞分化に関与することが知られている。本発明においては、薬物や添加剤由来の刺激である化学刺激レベルの指標としてＴＳＬＰレベルを用い得る。

以下に実施例を示して本発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、本発明は実施例の範囲に限定されるものではない。

外用液剤
下記表１〜１１の組成を有する外用液剤を製造した。表中に明記した重量部の抗原ペプチド、３重量部のヘルパーペプチド以外の細胞性免疫誘導促進剤、０．３重量部のヘルパーペプチド、および２０重量部のＤＭＳＯを配合し、そこに基材を加えて全１００重量部とし、混和して外用液剤を得た。表中に配合量を特記した試験例の外用液剤では、各成分の配合量は表中に記載される通りとした。基材としては、プロピレングリコール（ＰＧ）とオレイルアルコール（ＯＡ）を重量比で９８：２あるいは９０：１０、あるいは８７．５：１２．５、あるいは８５：１５の割合となる量で配合、混合して調製したものを用いた。
イミキモドは東京化成工業から購入した。ＧＰＣ３ペプチド、サバイビン２Ｂペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＩＰＥＰ８７ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ Ｅ７５ペプチド、ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ＨＢＶｅｎｖペプチド、ＭＵＣ１ペプチド、Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５およびＰｅｐｔｉｄｅ−２５Ｂはいずれも化学合成し、ＨＰＬＣ精製したものを用いた。
セルロース不織布（面積０．８ｃｍ^２）を固定用粘着テープの中央部に貼り合わせた複合基材を用意した。この複合基材の不織布部分に調製した外用液剤６７μＬを含浸させたものを免疫実験の投与サンプルとした。

マウス免疫試験１（外用液剤）
上記外用液剤について、免疫評価用モデル動物を用いてマウス免疫試験を行った。免疫誘導レベルの評価は、ＥＬＩＳＰＯＴ法によって行った。具体的には、マウス背部を毛刈りし、毛刈りによる皮膚ダメージを回復させるための飼育期間を設けた後、マウスの背部皮膚にサンプルを所定時間投与して除去し、所定日数の飼育を行い、抗原特異的な細胞性免疫の誘導レベルを評価した。投与から所定日数経過後に脾臓を摘出し、脾細胞懸濁液を調製した。抗マウスＩＦＮ−γ抗体を固定化したＥＬＩＳＰＯＴプレートのウェルに、脾細胞(３×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ)と抗原ペプチド(１００μＭ)（抗原として蛋白を用いる場合は、抗原蛋白１００μｇ／ｍＬ）とを培養液とともに入れ、３７℃、５％ＣＯ_２の培養条件にて２０時間、共培養し、ＥＬＩＳＰＯＴ法にてＩＦＮ−γ産生細胞スポット数（スポット数／３×１０^６ｃｅｌｌｓ）を評価した。外用液剤の投与量は上記の通りいずれも６７μＬ、投与回数は（２４ｈｒ／週）×１回、脾臓摘出は投与から６日後とした。

さらに、以下に示す方法により、対象におけるＴｈ１細胞とＴｈ２細胞の合計に対するＴｈ１細胞のパーセンテージ（Ｔｈ１細胞比率）を測定した。

試験例６においては、ダンプロンテープ（No.３７５、日東電工ＣＳシステム製）を用いてテープストリッピング（ＴＳ）を１０回行った皮膚への投与を行った。
また、一部の外用液剤については、以下に記載する方法に従い、投与後のマウスの皮膚内ＴＳＬＰレベル、および投与前のマウスの経皮水分蒸散量の測定も行った。

（Ｔｈ１細胞比率測定）
免疫投与サンプルにヘルパーペプチドあるいは蛋白抗原を含む場合、以下の方法によるＴｈ１細胞比率を測定した。
マウス免疫実験で得られた脾細胞懸濁液を用い、抗マウスＩＦＮ−γ抗体を固定化したＥＬＩＳＰＯＴプレート及び抗マウスＩＬ−４抗体を固定化したＥＬＩＳＰＯＴプレートのウェルに、脾細胞(１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ)と免疫に用いたヘルパーペプチド（１００μＭ）とを培養液とともに入れ、３７℃、５％ＣＯ_２の培養条件にて２０時間、共培養し、ＥＬＩＳＰＯＴ法にてＩＦＮ−γ産生細胞スポット数（スポット数／１×１０^６ｃｅｌｌｓ）及びＩＬ−４産生細胞スポット数（スポット数／１×１０^６ｃｅｌｌｓ）を評価した。上記評価法において、ＯＶＡ蛋白のような蛋白抗原を含むワクチンで免疫した試験の場合は、ヘルパーペプチド（１００μＭ）の代わりに蛋白抗原（１００μｇ／ｍＬ）を用いて共培養した。当該ＩＦＮ−γ産生細胞スポット数をＴｈ１細胞数とし、ＩＬ−４産生細胞スポット数をＴｈ２細胞数とし、（Ｔｈ１細胞数ｘ１００）／（Ｔｈ１細胞数＋Ｔｈ２細胞数）の計算式によりＴｈ１細胞比率（％）を算出した。

（ＴＳＬＰレベルの測定方法）
皮膚刺激評価用モデル動物としてのＣ５７ＢＬ／６マウスを用いてＴＳＬＰレベルを評価した。免疫評価用モデル動物に対する投与条件と同じ条件にて、皮膚刺激評価用モデル動物に対して製剤投与を行い、製剤投与終了時に、マウス背部皮膚を摘出し、抽出溶媒中（プロテアーゼ阻害剤（Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ ｆｏｒ ｇｅｎｅｒａｌ ｕｓｅ, ＳＩＧＭＡ―ＡＬＤＲＩＣＨ製）と10μMインドメタシン（和光純薬製）を含むＰＢＳ溶液）でホモジナイザー（ヒスコトロン、マイクロテック・ニチオン製）を用い皮膚を破砕した。破砕した皮膚を４℃、９０００ｇで１０分間遠心分離した後、上清を回収した。上清中のＴＳＬＰ量をＥＬＩＳＡ（Ｍｏｕｓｅ ＴＳＬＰ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ製）により測定した。また、上清中の総タンパク量をＢＣＡ法（Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ、Ｔｈｅｒｍｏ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ製）により測定し、ＴＳＬＰ量を総タンパク量で除することで標準化した。

（経皮水分蒸散量測定）
皮膚刺激評価用モデル動物としてのＣ５７ＢＬ／６マウスを用いて、製剤投与前の皮膚の経皮水分蒸散量を評価した。携帯型閉鎖チャンバー方式水分蒸散量測定装置（ＶＡＰＯ ＳＣＡＮ ＡＳ−ＶＴ１００ＲＳ、アサヒバイオメッド製）を用い、マウス皮膚に当該機器を５〜１５秒程度接触させる事により測定を行った。マウス皮膚に前処理を行った１０分後に測定した値を経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）（ｇ／ｈ・ｍ^２）とした。

免疫試験の結果、ならびにＴｈ１細胞比率、ＴＳＬＰレベルおよび経皮水分蒸散量の測定結果を、使用したマウスと共に下記表１〜１１に示す。表中の「遺伝子改変マウス」は、ＨＬＡ−Ａ^＊０２０１型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウスである。また、比較のため、後述の注射剤を用いた免疫の結果（参考例１〜８）を各表の最後に記載する。

テープ剤
テープ剤に用いる粘着剤（ＰＩＢゴム系粘着剤およびアクリル系粘着剤）を以下の通りに調製した。

（ＰＩＢゴム系粘着剤の調合）
ポリイソブチレン（オパノールＢ２００、ＢＡＳＦ社製）２４部、ポリイソブチレン（オパノールＢ１２、ＢＡＳＦ社製）３６部および脂環族系石油樹脂（アルコンＰ−１００、荒川化学社製）４０部をトルエンに溶解して、ＰＩＢ粘着剤溶液を得た。

（アクリル系粘着剤の重合）
不活性ガス雰囲気下、アクリル酸２−エチルへキシル７５部、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン２２部、アクリル酸３部およびアゾビスイソブチロニトリル０．２部を酢酸エチル中６０℃にて溶液重合させてアクリル系粘着剤溶液を得た。

下記表１２〜１７の組成を有するテープ剤を製造した。具体的には、表１２〜１７に記載される配合量の抗原ペプチド、細胞性免疫誘導促進剤、ならびに所望により皮膚透過性増強剤および／または薬理学的に許容される酸と、粘着剤溶液および有機溶媒（酢酸エチル、エタノール、トルエンなど）を配合、混和し、乾燥後の厚みが約８０μｍになるように剥離ライナーに展延し、乾燥により有機溶媒を除去して、支持体を貼り合わせてテープ剤を調製した。粘着剤溶液は、有機溶媒乾燥後における各成分と粘着剤の合計が１００重量部となるように配合した。このテープ剤を面積０．７ｃｍ^２になるようカットしたものを免疫実験の投与サンプルとした。投与時には剥離ライナーを剥して投与した。
支持体にはポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（厚さ２５μｍ）を用いた。剥離ライナーには、シリコーン剥離処理を施したポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）製ライナー（厚さ７５μｍ）を用いた。抗原ペプチド、ヘルパーペプチドは化学合成し、ＨＰＬＣ精製したものを用いた。イミキモドの入手元は上記外用液剤の場合と同様である。環状ジＧＭＰ（ｃ−ｄｉ−ＧＭＰ）および環状ジＡＭＰ（ｃ−ｄｉ−ＡＭＰ）はＢｉｏｌｏｇ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ社から購入した。パントエア菌由来リポポリサッカライドは自然免疫応用技研製のもの、グルコピラノシルリピッドはＩｎｖｉｖｏＧｅｎ製のもの（ＭＰＬＡｓ）、ヒアルロン酸Ｎａはキッコーマンバイオケミファ製のもの（マイクロヒアルロン酸ＦＣＨ）、ＯＤＮ１８２６はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ製のもの、ピドチモドはＳａｎｔa Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製のもの、レバミゾール塩酸塩はＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ製のものを用いた。

マウス免疫試験２（テープ剤）
上記の通りに製造したテープ剤を用いて、上記マウス免疫試験１と同様の方法によりマウス免疫試験を行った。投与回数は（２４ｈｒ／週）×１回、脾臓摘出は投与から６日後とした。さらに、上記外用液剤と同様の方法により、対象におけるＴｈ１細胞とＴｈ２細胞の合計に対するＴｈ１細胞のパーセンテージ（Ｔｈ１細胞比率）を測定した。

試験例１９においては、ダンプロンテープ（No.３７５、日東電工ＣＳシステム製）を用いてテープストリッピング（ＴＳ）を１０回行った皮膚への投与を行った。

一部のテープ剤については、皮膚刺激評価用モデル動物としてのＣ５７ＢＬ／６マウスを用いて上記外用液剤と同様の方法により、投与後のマウスの皮膚内ＴＳＬＰレベル、および投与前のマウスの経皮水分蒸散量の測定を行った。

免疫試験の結果、ならびにＴｈ１細胞比率、ＴＳＬＰレベルおよび経皮水分蒸散量の測定結果を、使用したマウスと共に下記表１２〜１７に示す。表中の「遺伝子改変マウス」は、ＨＬＡ−Ａ^＊０２０１型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウスである。また、比較のため、後述の注射剤を用いた免疫の結果（参考例１〜８）を各表の最後に記載する。

クリーム剤
下記表１９〜２４および２６の組成を有するクリーム剤を製造した。具体的には、表１９〜２４および２６中に明記した重量部の抗原（ペプチドあるいは蛋白）、ヘルパーペプチド以外の細胞性免疫誘導促進剤、ヘルパーペプチド、１５重量部のＤＭＳＯ、および所望により添加剤を配合し、そこに基材（ベースクリーム）を加えて全１００重量部とし、混和して、クリーム剤を得た。表１９〜２４および２６中に配合量を特記した試験例のクリーム剤では、各成分の配合量は表中に記載される通りとした。用いたベースクリームは、表１８に記載の組成にて材料を配合し、混和して調製したものである。
ＰＥＴフィルム／ＰＥＴ不織布積層品（面積０．７ｃｍ^２）を固定用粘着テープの中央部にＰＥＴフィルム側をテープ側にして貼り合わせた複合基材を用意した。この複合基材の不織布部分にクリーム剤４ｍｇを塗布したものを免疫実験の投与サンプルとした。

マウス免疫試験３（クリーム剤）
上記の通りに製造したクリーム剤を用いて、上記マウス免疫試験１と同様の方法によりマウス免疫試験を行った。投与回数は（２４ｈｒ／週）×１回、脾臓摘出は投与から６日後とした。さらに、上記外用液剤と同様の方法により、対象におけるＴｈ１細胞とＴｈ２細胞の合計に対するＴｈ１細胞のパーセンテージ（Ｔｈ１細胞比率）を測定した。

試験例６５、６７、７４、７８および７９においては、ダンプロンテープ（No.３７５、日東電工ＣＳシステム製）を用いてテープストリッピング（ＴＳ）を１０回行った皮膚への投与を行い、試験例７１においては、マイクロカッター（ＭＩＣＲＯ ＦＥＡＴＨＥＲ Ｎｏ．７３３０Ｇ、ＦＥＡＴＨＥＲ製）傷をつけた皮膚への投与を行った。

一部のクリーム剤については、皮膚刺激評価用モデル動物としてのＣ５７ＢＬ／６マウスを用いて上記外用液剤と同様の方法により、投与後のマウスの皮膚内ＴＳＬＰレベル、および投与前のマウスの経皮水分蒸散量の測定を行った。

免疫試験の結果、ならびにＴｈ１細胞比率、ＴＳＬＰレベルおよび経皮水分蒸散量の測定結果を、使用したマウスと共に下記表１９〜２４および２６に示す。また、比較のため、後述の注射剤を用いた免疫の結果（参考例１〜８）を各表の最後に記載する。

白色ワセリン、モノステアリン酸ソルビタン、イソステアリン酸、ベンジルアルコール、ステアリルアルコール、ポリソルベート６０、濃グリセリン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は和光純薬工業から購入した。セタノールは東京化成工業から購入した。ＯＶＡタンパクはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入した。ＫＬＨ由来ペプチド（ＴＦＡ塩）、Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５Ｂ（Ｐｅｐ２５Ｂ）、抗原ペプチド、ヘルパーペプチドは化学合成し、ＨＰＬＣ精製したものを用いた。イミキモドの入手元は上記外用液剤の場合と同様である。

皮下注射剤
下記表２５の組成を有する皮下注射剤を調製し、免疫実験の投与サンプルとした。具体的には、表２５に記載される配合量の抗原ペプチドおよびアジュバントとしてのＭｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ５１ＶＧ（フロイント産業）に、０．５重量部の添加剤（ＤＭＳＯ）および基剤としての生理食塩水を添加して合計１００重量部とし、ホモジナイザーにて混和して注射剤を調製した。抗原ペプチドは化学合成し、ＨＰＬＣ精製したものを用いた。

マウス免疫試験４（注射剤）
上記の通りに製造した注射剤を用いて、上記マウス免疫試験１と同様の方法によりマウス免疫試験を行った。投与量は２００μＬ、投与回数は１回、脾臓摘出は投与から６日後とした。免疫試験の結果を、使用したマウスと共に下記表２５に示す。

In vivo CTL アッセイ
最終免疫投与から7日後に下記の要領で脾臓細胞（ターゲット細胞あるいはコントロール細胞）を移殖し、その１８時間後に脾臓を採取し、ＦＡＣＳ測定を行うことにより % 特異的溶解を求めた。

手順１．ナイーブマウスの脾臓細胞採取
ナイーブマウス（C57BL/6）から脾臓を摘出し、RPMI1640培地を入れたシャーレ中でスライドガラスを用いてすりつぶした。50 mLチューブに回収後、10℃、1100rpm、5分遠心分離した後、上清を捨て、Lysis Buffer 20 mLを加え、室温で5分インキュベートした。培地を20 mL加えた後、遠心分離した後、培地を加え、セルストレーナーに通した。

手順２．脾臓細胞の抗原標識
手順１で調製した脾臓細胞を10℃、1100rpm、5分遠心分離した後、上清を捨て、HBSS bufferを加えて2×10⁷ cells/mLとした。この細胞液を２本の50mLチューブに分注し、一方の細胞液に最終濃度10μMとなるように100μM抗原溶液（抗原は各免疫投与物に配合した抗原）を加えてターゲット細胞とした。もう一方の細胞はコントロール細胞とした。両方の細胞を37℃で１時間インキュベートした後、遠心分離し、上清を捨て、培地を加えた。

手順３．脾臓細胞のCFSE標識
手順２で抗原標識した細胞を遠心分離し、0.1% BSA-PBSを1×10⁷ cells/mLとなるように加えた。ターゲット細胞液に5 mM CFSE溶液を最終濃度10μMとなるように加え、コントロール細胞液に5 mM CFSE溶液を最終濃度1μMとなるように加え、ボルテックスした後37℃で10分インキュベートした。その後遠心分離し、上清を捨て、培地を加えた。

手順４．脾臓細胞移植
手順３でCFSE標識した細胞を遠心分離し、上清を捨て、HBSS bufferを用い、5×10⁷ cells/mLとなるように調製した。ターゲット細胞液とコントロール細胞液を等量混合し、免疫したマウスに200μLずつ眼窩静脈から投与した（移植細胞数：1×10⁷ cells/匹）。

手順５．免疫マウスの脾臓細胞調製とFACS測定
脾臓細胞移植の18時間後、脾臓を摘出し、手順１と同様に脾臓細胞を調製した。その後、FACSによりCFSE陽性細胞を検出し、CFSE high細胞（ターゲット細胞）とCFSE low細胞（コントロール細胞）の比率から、以下の式より細胞傷害活性を評価した。この指標により抗原特異的に誘導した免疫が生体内で抗原提示細胞を特異的に攻撃する能力を評価し、本発明の投与物の効果が高いことを確認した。
r= (% CFSE low 細胞)/(% CFSE high 細胞)
% 特異的溶解=(1-(r_非免疫/r_免疫))×100

担癌マウス試験
C57BL/6マウスにOVA発現E.G7癌細胞（E.G7)(ATCCより購入)を皮下注射により接種した（２×１０^６ｃｅｌｌｓ／匹）。その後、３〜４日毎に５回免疫を行い、癌細胞接種から25日目に腫瘍の大きさを評価した。腫瘍成長の阻害により誘導した免疫の効果を評価し、本発明の投与物の効果が高いことを確認した。

表３（試験例６および７）、表１２（試験例１８および１９）、表１９（試験例６４〜６５および６７〜６８）、表２２（試験例７１および７２）、表２３（試験例７３および７４）、表２４（試験例７７〜８０）に示すように、テープストリッピング処理やマイクロカッター処理によりＴＥＷＬ値は高まり、Ｔｈ１細胞比率が低下し、免疫誘導レベル（ELISPOT）が低下した。このことから、投与前の皮膚の物理刺激性の高さは、投与前の皮膚のＴＥＷＬの高さを指標として判定できることが明らかになり、物理的な皮膚刺激が強くなると免疫誘導に不利に働くことが明らかとなった。

表３（試験例３〜５および７）、表１２（試験例２０〜２４）、表１９（試験例６４および６６）、表２３（試験例７３および７５）に示すように、皮膚刺激性の高いオレイルアルコールを多く含む外用液剤や、皮膚刺激性の高い界面活性剤ＢＬ２を含むテープ剤やクリーム剤を用いる場合にはＴＳＬＰ産生の誘導が高まり、Ｔｈ１細胞比率が低下し、免疫誘導レベル（ELISPOT）が低下した。このことから、投与する薬剤の皮膚に対する化学的刺激性の高さは、投与後の皮膚内のＴＳＬＰレベルの高さを指標として判定できることが明らかになり、化学的な皮膚刺激が強くなっても免疫誘導に不利に働くことが明らかとなった。
表１２、１３、１９、２３、２４および２６に示すように、抗原の経皮投与による細胞性免疫誘導は、抗原と共に特定の細胞性免疫誘導促進剤を用いることによって増強された。具体的には、経皮投与用ワクチン組成物において、ＴＬＲリガンド（試験例１６と試験例１７または２８との比較、試験例１８と試験例２０または２９との比較、試験例３６と試験例３７または４３との比較、試験例３８と試験例３９または４４との比較、試験例６４と６８との比較、試験例７３と７６との比較、試験例７７と８０との比較）、環状ジヌクレオチド（試験例１６と２５との比較、試験例１８と２６との比較、試験例８１と８３との比較）、ヘルパーペプチド（試験例１６と１８との比較、試験例３６と３８との比較）、免疫調節低分子薬物（試験例１６と試験例３３または３５との比較、試験例１８と３４との比較、試験例３６と試験例４８または５０との比較、試験例３８と試験例４９または５１との比較）からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤を用いることにより、経皮投与において高い細胞性免疫誘導効果が得られた。

皮膚刺激状態の異なる経皮免疫試験、あるいは細胞性免疫誘導促進剤を配合したワクチン組成物での免疫試験において、細胞性免疫誘導レベルとＴｈ１細胞比率の関係性を検討した結果、Ｔｈ１細胞比率が１０％以上となった場合に強い細胞性免疫が誘導されることがわかった。また、ＴＳＬＰレベルが低い場合に強い免疫が誘導されること、ＴＥＷＬレベルが低い場合に強い免疫が誘導されることが確認された。
また、上記の試験結果から、本発明のワクチン組成物の経皮投与により、注射投与と比較して高い細胞性免疫誘導が認められる事も明らかとなった。

Claims (5)

1. 抗原を含み、細胞性免疫誘導のための、経皮投与用ワクチン組成物であって、細胞性免疫誘導促進剤として環状ジヌクレオチドを含み、貼付剤の形態であることを特徴とする、ワクチン組成物。
2. 低刺激条件下で投与されるものである、請求項１のワクチン組成物。
3. 低刺激条件が、皮膚刺激評価用モデル動物における該組成物の投与前の経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）が５０ｇ／ｈ・ｍ^２以下の条件である、請求項２のワクチン組成物。
4. 低刺激条件が、皮膚刺激評価用モデル動物における該組成物の投与終了時の皮膚内ＴＳＬＰレベルが１００００pg/mgタンパク質以下の条件である、請求項２または３のワクチン組成物。
5. 抗原が、サバイビン２Ｂペプチドおよび／または改変サバイビン２Ｂペプチド、ＧＰＣ３ペプチドおよび／または改変ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＩＰＥＰ８７ペプチドおよび／または改変ＩＰＥＰ８７ペプチド、ＰＲ１ペプチドおよび／または改変ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ＨＢＶｅｎｖペプチドおよび／または改変ＨＢＶｅｎｖペプチド、ならびにＭＵＣ１ペプチドおよび／または改変ＭＵＣ１ペプチドからなる群より選択されるペプチドである、請求項１〜４のいずれかのワクチン組成物。