JP6842782B2 - 更年期女性の低エストロゲン症の改善及び予防用機能性組成物 - Google Patents

Description

本発明は、アザミ抽出物、又は、アザミ及びタイム（ｔｈｙｍｅ）の複合抽出物の新しい用途に関する。より詳しくは、本発明は、アザミ抽出物を有効成分として含み、女性の更年期に応じた低エストロゲン症を効率的に改善するための機能性組成物に関する。

女性は年齢が上昇するにつれて卵巣の機能が低下し、そのためにエストロゲンの分泌が大幅に減少する。それにより、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）に対する反応が減少し、プロゲステロンの生成も減少する。特に４０代中後半からは、卵巣の機能が完全に止まる閉経が発生する確率が非常に高くなる。閉経が現れた以後の時期を更年期といい、平均的に４〜７年ほど持続する。

女性に更年期が来ると、女性ホルモンの生産がこれ以上なされず、顔面紅潮、発汗、疲労感、不安感、憂鬱、記憶力障害、不眠症、血液中コレステロールの増加、体重の増加、骨密度の減少といった様々な症状が現れる。

従来には、上記のような女性疾患を治療するためにホルモン療法や植物エストロゲン（Ｐｈｙｔｏｅｓｔｒｏｇｅｎ）を利用しようとする試みがある。なお、植物エストロゲンは、生体内の内分泌系で生成されず、植物から分離した外因性エストロゲンであって、大部分の植物に含まれていることが知られている。植物エストロゲンは、構造的にエストロゲンと類似しており、生体内でエストロゲンと競争的にエストロゲン受容体に結合されることが知られている。しかし、実際にその結合による効果は具体的に明らかになっておらず、結合される比率においてもそのレベルが微小であることが知られている。

非特許文献１には、種々の植物の中でも、アザミを用いて植物エストロゲンを抽出する構成が開示されている。具体的には、非特許文献１には次のような内容が開示されている。

第１に、在来種のアザミにはエストロゲン受容体（Ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）と結合する物質が存在する。具体的には、非特許文献１の実施例２において、形質転換された酵母菌株の乳糖オペロン（Ｌａｃ ｏｐｅｒｏｎ）を用いて在来種のアザミ抽出物にエストロゲン受容体と結合する物質が存在することが確認され、その結合レベルが植物エストロゲンとして知られるケルセチンに準ずることが確認された。

第２に、在来種のアザミには植物エストロゲンが存在する。非特許文献１の実施例３において、在来種のアザミの根から、メタノールを用いて抽出物を抽出した後、その抽出物に含まれる植物エストロゲン、具体的には、ゲニステイン、ダイゼイン、ケルセチンを検出することによってそれが確認された。

しかし、従来のアザミを用いた機能性組成物から知ることができるのは、アザミ内にエストロゲン受容体と結合する物質があるということだけであって、アザミ抽出物がどのような効能を発揮するかは知ることができない。そして、在来種のアザミから検出されたゲニステイン、ダイゼイン、ケルセチンといった植物エストロゲンは、その構造的な類似性により、エストロゲン受容体と結合する可能性が高いが、上記のとおり、実際にその結合による効果については具体的に明らかになっておらず、結合される比率においてもそのレベルは微小であることが知られている。さらに、植物エストロゲンは大部分の植物に存在することが知られているため、非特許文献１に記載されたアザミ組成物は、新しい意味を有しない。

近来、人体内のエストロゲン濃度の減少によって発生する顔面紅潮のような２次的な症状の他に、エストロゲン濃度が減少する現象を疾患と認識するようになり、それを直接的に治療する目的で多くの研究が行われている。このように女性の人体内のエストロゲン濃度が減少する疾患を低エストロゲン症（Ｈｙｐｏｅｓｔｒｏｇｅｎｉｓｍ）という。そして、性腺機能低下症（Ｈｙｐｏｇｏｎａｄｉｓｍ）の場合、卵巣の機能が低下して性ホルモンが減少することを意味するため、低エストロゲン症の範疇に含まれるといえる。

したがって、根本的に低エストロゲン症を予防又は改善し、副作用を最小化した天然物質に対する研究及び開発が必要である。本発明者らは、アザミ抽出物とアザミ及びタイムの複合抽出物とが、更年期女性の人体内のエストロゲンを増加させることを確認し、本発明を完成するに至った。

アザミ（Ｃｉｒｓｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）は、双子葉植物綱、キキョウ目、キク科の多年草であり、シスルともいい、山や野で主に育つ。幼い芽は食用であり、葉、幹、根は薬用である。

タイム（Ｔｈｙｍｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）は、双子葉植物綱、シソ目、シソ科の落葉半潅木であり、海辺岩が多いところに自生するタイム（Ｔｈｙｍｕｓ ｑｕｉｎｑｕｅｃｏｓｔａｔｕｓ ｖａｒ． ｊａｐｏｎｉｃａ）、白い花が咲くタイム（Ｔｈｙｍｕｓ ｑｕｉｎｑｕｅｃｏｓｔａｔｕｓ ｆ． ａｌｂｕｓ Ｙ．Ｎ．Ｌｅｅ）等がある。このようなタイムは、飲料、殺菌剤、化粧料の原料又は薬用である。

一方、本発明のアザミ抽出物、又はアザミ及びタイムの複合抽出物を用いて低エストロゲン症を改善する技術は、非特許文献１の記載と類似していると考えることもできる。しかし、アザミ抽出物が低エストロゲン症に効果があるということは、非特許文献１の「アザミに植物エストロゲンが存在する」という記載から導き出されることではない。また、既に発表された研究から「植物エストロゲンは人体内の女性ホルモンの調節とは関係ない」という結果が導かれたことがある。

Ｃｈｅｎｇ ｅｔ．ａｌ （２００７） Ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ａｃｕｔｅ ｍｅｎｏｐａｕｓａｌ ｓｙｍｔｏｍｓ． Ｍｅｎｏｐａｕｓｅ，１４，ｐｐ４６８−４７３

本発明が解決しようとする課題は、更年期女性のエストロゲンが減少する症状を効果的に予防、改善し、女性更年期と関連して現れる症状を効率的に緩和することができ、天然成分からなり、身体に対する拒否反応を低減させることが可能なアザミを用いた、低エストロゲン症の予防及び改善用機能性組成物を提供することである。

本発明の課題を解決するための手段は、アザミ抽出物を有効成分として含む、低エストロゲン症の改善及び予防用食品組成物を提供するものである。

また、本発明の課題を解決するための手段は、アザミ及びタイムの複合抽出物を有効成分として含む、低エストロゲン症の改善及び予防用食品組成物を提供するものである。

本発明に係るアザミ抽出物、又は、アザミ及びタイムの複合抽出物を含む組成物は、更年期女性のエストロゲンが減少する症状である低エストロゲン症を緩和させることができる。

また、本発明の組成物は、更年期女性の人体内のエストロゲン濃度を直接的に上昇させることにより、エストロゲン低下により発生する顔面紅潮、発汗、疲労感、不安感、憂鬱、記憶力障害、不眠症、血液中コレステロールの増加、体重の増加、骨密度の減少といった症状をさらに効率的に改善させることができる。

試験対象動物の血液中エストラジオール濃度の測定結果を示すグラフである。 試験対象動物の血液中エストラジオール濃度の測定結果を示すグラフである。 試験対象動物の血液中エストラジオール濃度の測定結果を示すグラフである。 試験対象動物の血液中エストラジオール濃度の測定結果を示すグラフである。 試験対象動物の血液中エストラジオール濃度の測定結果を示すグラフである。 試験対象動物の血液中エストラジオール濃度の測定結果を示すグラフである。 試験対象動物の血液中エストラジオール濃度の測定結果を示すグラフである。 試験対象動物の血液中エストラジオール濃度の測定結果を示すグラフである。 試験対象動物の体重変化を示すグラフである。 試験対象動物の体重の増加量を示すグラフである。 試験対象動物の血液中アルカリ性ホスファターゼの増加量を示すグラフである。 試験対象動物の血液中オステオカルシンの増加量を示すグラフである。 ＫＩ検査法により測定された試験対象女性の更年期症状の改善率を示すグラフである。 ＭＲＳ検査法により測定された試験対象女性のＭＲＳ点数を示すグラフである。

本発明を説明するに先立ち、本発明で用いられる用語の意味を説明する。

本明細書において、「抽出物」は、当業界で粗抽出物（Ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔ）と通用する意味を有するが、広義的には抽出物をさらに分画（Ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ）した分画物も含む。すなわち、アザミ抽出物は、上記抽出溶媒を用いて得たものだけでなく、これに精製過程をさらに適用して得たものも含む。例えば、前記抽出物を一定の分子量カットオフ値を有する限外濾過膜を通過させて得た分画物、様々なクロマトグラフィー（大きさ、電荷、疏水性又は親和性に応じた分離のために製作されたもの）による分離等の追加的に実施された様々な精製方法によって得た分画物も、本発明に用いるアザミ抽出物に含まれる。

本明細書において、「有効成分として含む」とは、アザミ抽出物の効能や活性を達成するのに充分な量を含むことを意味する。本発明には、天然植物材料であるアザミからの抽出物が用いられており、過量投与しても人体に副作用がないため、アザミ抽出物が本発明の組成物に含まれる量的な上限は、通常の技術者が適切な範囲内で選択することができる。

以下では、本発明の組成物について詳細に説明する。

本発明に係るアザミ抽出物は、有機溶媒を用いて抽出したものであり、抽出溶媒として用いられるものは、下記のとおりである。

先ず、極性溶媒として好適なものは、（ｉ）水、（ｉｉ）炭素数１〜６のアルコール（好ましくは、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ｎ−プロパノール、ｉｓｏ−プロパノール、ｎ−ブタノール、１−ペンタノール、２−ブトキシエタノール、又はエチレングリコール）、（ｉｉｉ）酢酸、（ｉｖ）ＤＭＦＯ（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｆｏｒｍａｍｉｄｅ）、及び（ｖ）ＤＭＳＯ（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）等がある。

そして、非極性溶媒として好適なものは、アセトン、アセトニトリル、エチルアセテート、メチルアセテート、フルオロアルカン、ペンタン、ヘキサン、２，２，４−トリメチルペンタン、デカン、シクロヘキサン、シクロペンタン、ジイソブチレン、１−ペンテン、１−クロロブタン、１−クロロペンタン、ｏ−キシレン、ジイソプロピルエーテル、２−クロロプロパン、トルエン、１−クロロプロパン、クロロベンゼン、ベンゼン、ジエチルエーテル、ジエチルスルフィド、クロロホルム、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、アニリン、ジエチルアミン、エーテル、四塩化炭素、メチレンクロライド、石油エーテル、及びＴＨＦ等がある。

本発明は、抽出溶媒として、（ａ）水、（ｂ）炭素数１〜４の無水又は低級アルコール（メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等）、（ｃ）前記低級アルコールと水との混合溶媒、（ｄ）アセトン、（ｅ）エチルアセテート、（ｆ）クロロホルム、（ｇ）ブチルアセテート、（ｈ）１，３−ブチレングリコール、（ｉ）ヘキサン、及び（ｊ）ジエチルエーテル等を用いることが好ましく、容易な抽出のために、水、エタノール、又は水とエタノールとの混合物をアザミに処理して抽出することがより好ましい。

また、本発明で用いられるアザミ抽出物は、減圧蒸留、凍結乾燥、又は噴霧乾燥等の追加の過程によって粉末状態に製造され得る。

したがって、本発明では、上記のような抽出溶媒を用いて抽出物を製造することができる。以下ではアザミ抽出物を製造する方法について説明する。

１）アザミ抽出物の製造
(i)アザミを選別して粉砕した後、
(ii)粉砕物重量の約１倍〜２５倍の体積量（ｖ／ｗ％）、好ましくは７倍〜１５倍の体積量の、精製水を含む水、メタノール、エタノール、ブタノール等の炭素数１〜４の低級アルコール、及びこれらの混合溶媒から選択された溶媒、より好ましくは水、エタノール、又はこれらの混合溶媒を用いて、
(iii)０℃〜１２０℃、好ましくは５０℃〜１００℃の抽出温度で、
(iv)約１時間〜１０日間、好ましくは約３時間〜６時間、
(v)冷浸抽出法、熱水抽出法、超音波抽出法、還流冷却抽出法、又は加熱抽出法等の抽出方法により、好ましくは熱水抽出法又は還流冷却抽出法により、
(vi)約１回〜１０回、好ましくは２回〜８回繰り返し抽出する。
そして、
(vii)前記抽出物を濾過布により濾過し、
(viii)濾過液を真空濃縮後、
(ix)−(1)凍結乾燥するか、
(ix)−(2)配合比率に応じてデキストリンを混合した後に噴霧乾燥して
アザミ抽出物を取得する。

また、アザミ抽出物は、亜臨界流体を用いて抽出する亜臨界抽出法や超臨界流体を用いて抽出する超臨界抽出法により製造されてもよい。

後述する試験では、熱水抽出法に従い、有機溶媒抽出（エタノール、メタノール）を行って製造したアザミ抽出物を用いた。各抽出条件は下記のとおりである。

アザミ抽出物１は、粉砕物の重量に対して７倍の体積量の精製水を用いて１２１℃で５時間１次抽出し、５倍の体積量の精製水を加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合し、噴霧乾燥することによって製造する。

アザミ抽出物２は、粉砕物の重量に対して７倍の体積量の精製水を用いて１００℃で５時間１次抽出し、５倍の体積量の精製水を加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合し、噴霧乾燥することによって製造する。

アザミ抽出物３は、粉砕物の重量に対して７倍の体積量の精製水を用いて７０℃で５時間１次抽出し、５倍の体積量の精製水を加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合し、噴霧乾燥することによって製造する。

アザミ抽出物４は、粉砕物の重量に対して７倍の体積量の４０％エタノールを用いて７０℃で５時間１次抽出し、５倍の体積量の４０％エタノールを加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合し、噴霧乾燥することによって製造する。

アザミ抽出物５は、粉砕物の重量に対して７倍の体積量の９０％エタノールを用いて５０℃で５時間１次抽出し、５倍の体積量の９０％エタノールを加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合し、噴霧乾燥することによって製造する。

アザミ抽出物６は、粉砕物の重量に対して７倍の体積量の４０％メタノールを用いて７０℃で５時間１次抽出し、５倍の体積量の４０％メタノールを加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合し、噴霧乾燥することによって製造する。

アザミ抽出物７は、粉砕物の重量に対して７倍の体積量の９０％メタノールを用いて５０℃で５時間１次抽出し、５倍の体積量の９０％メタノールを加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合して噴霧乾燥することによって製造する。

２）タイム抽出物の製造
タイム抽出物も、アザミ抽出物の製造方法と同様である。

後述する試験では、熱水抽出法に従い、有機溶媒抽出（エタノール、メタノール）を行って製造したタイム抽出物を用いた。各抽出条件は下記のとおりである。

タイム抽出物１は、粉砕物の重量に対して６倍の体積量の精製水を用いて１２１℃で６時間１次抽出し、６倍の体積量の精製水を加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合して噴霧乾燥することによって製造する。

タイム抽出物２は、粉砕物の重量に対して６倍の体積量の精製水を用いて１００℃で６時間１次抽出し、６倍の体積量の精製水を加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合して噴霧乾燥することによって製造する。

タイム抽出物３は、粉砕物の重量に対して６倍の体積量の精製水を用いて７０℃で６時間１次抽出し、６倍の体積量の精製水を加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合して噴霧乾燥することによって製造する。

タイム抽出物４は、粉砕物の重量に対して６倍の体積量の４０％エタノールを用いて７０℃で６時間１次抽出し、６倍の体積量の４０％エタノールを加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合して噴霧乾燥することによって製造する。

タイム抽出物５は、粉砕物の重量に対して６倍の体積量の９０％エタノールを用いて５０℃で６時間１次抽出し、６倍の体積量の９０％エタノールを加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合して噴霧乾燥することによって製造する。

タイム抽出物６は、粉砕物の重量に対して６倍の体積量の４０％メタノールを用いて７０℃で６時間１次抽出し、６倍の体積量の４０％メタノールを加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合して噴霧乾燥することによって製造する。

タイム抽出物７は、粉砕物の重量に対して６倍の体積量の９０％メタノールを用いて５０℃で６時間１次抽出し、６倍の体積量の９０％メタノールを加えて２次抽出した後、これを真空濃縮後、抽出物とデキストリンとを１：１で混合して噴霧乾燥することによって製造する。

３）アザミ及びタイムの複合抽出物の製造
各々の条件に対応するアザミ抽出物とタイム抽出物とを６：４の比率（重量比）で混合する。例えば、アザミ及びタイムの複合抽出物１は、アザミ抽出物１とタイム抽出物１とを混合し、アザミ及びタイムの複合抽出物２は、アザミ抽出物２とタイム抽出物２とを混合する方式で、アザミ及びタイムの複合抽出物７まで製造する。そして、さらにアザミ抽出物１とタイム抽出物１とを、２：８、４：６、８：２の比率（重量比）で混合した複合抽出物を製造する。

本発明に係るアザミ抽出物は食品組成物として製造される。すなわち、アザミ抽出物を有効成分として含む、低エストロゲン症の予防及び改善用食品組成物として製造され得る。

本発明に係るアザミ抽出物が食品組成物として製造される場合、食品製造時に通常添加される成分が含まれる。例えば、タンパク質、炭水化物、脂肪、栄養素、及び調味剤がこれに該当する。そして、ドリンク剤として製造される場合には、有効成分としてアザミ抽出物の他に、香味剤又は天然炭水化物等が追加成分として含まれ得る。例えば、天然炭水化物は、単糖類（グルコース、フルクトース等）、二糖類（マルトース、スクロース等）、オリゴ糖、多糖類（デキストリン、シクロデキストリン等）、及び糖アルコール（キシリトール、ソルビトール、エリトリトール等）を含む。香味剤としては、天然香味剤（例えば、タウマチン、ステビア抽出物等）及び合成香味剤（例えば、サッカリン、アスパルテーム等）を用いることができる。

一方、アザミ及びタイムの複合抽出物が食品組成物として製造される場合も、上記と同様である。

以下では、本発明に係るアザミ抽出物による効果を試験例によって詳細に説明する。

試験例１：動物対象試験
＜１−１＞試験対象
体重２００ｇ〜２５０ｇの７週齢の雌ラット（Ｒａｔ）を対象に実験室で１週間適応させた後、一部は卵巣切除術を施して閉経モデルを誘導し、残りは腹部切開後に縫合させるＳｈａｍ−ｏｐｅｒａｔｉｏｎを施して非閉経モデルを誘導した。そして、各モデルに、１週間固形飼料を与えて傷を回復させた後、卵巣が切除されていない対照群（以下、「正常対照群」という）、卵巣が切除された対照群（以下、「陰性対照群」という）には各々５匹ずつ分類し、卵巣が切除された第１実験群（以下、「第１実験群」という）には２１匹を分類し、卵巣が切除された第２実験群（以下、「第２実験群」という）には３０匹を分類した。

第１実験群は、３匹ずつ７個のグループに分け、各グループに、５０ｍｇ／ｋｇの濃度で生理食塩水に溶解させたアザミ抽出物１〜７を各々経口投与した。第２実験群は、３匹ずつ１０個のグループに分けた後、７個のグループには、５０ｍｇ／ｋｇの濃度で生理食塩水に溶解させたアザミ及びタイムの複合抽出物１〜７を各々経口投与し、残りの３個のグループには、アザミ抽出物１とタイム抽出物１とを２：８、４：６、８：２の比率で混合したアザミ及びタイムの複合抽出物を各々経口投与した。正常対照群及び陰性対照群には、同一量の生理食塩水を各々経口投与した。なお、投与期間は８週間であり、飼育条件は、温度２４±２℃、湿度５０％〜５５％で、水及び食餌は制限なしで提供した。

＜１−２＞体内エストロゲンの測定
エストロゲンの減少は、女性の更年期症状が発生する代表的な原因である。したがって、本発明は、アザミ抽出物がエストロゲンに及ぼす影響を確認するために、薬品投与後、血液中エストラジオール（Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ）−１７β濃度を測定した。なお、エストラジオールは、代表的なエストロゲンであって、エストロン（Ｅｓｔｒｏｎ）やエストリオール（Ｅｓｔｒｉｏｌ）と比べて活性が非常に高いため、エストロゲン測定対象として用いられる。

具体的には、前記＜１−１＞試験対象において投与が完了した各群の血液を採取して遠心分離（１０００ｇ、１５分間、４℃）を施し、分析前までは−８０℃の超低温冷凍庫（Ｄｅｅｐ ｆｒｅｅｚｅｒ）で保管した。そして、Ｒａｔ ｅｓｔｒａｄｉｏｌ（Ｅ２） ＥＬＩＳＡＫｉｔ（Ｃａｙｍａｎ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ，ＵＳＡ）を用いて血液中エストラジオールを測定した。試験の結果は統計プログラムＳＰＳＳ（ｖｅｒｓｉｏｎ １２．０）で統計処理し、ｐ＜０．０５レベルで有意性を検証した。各抽出物に対する血液中エストラジオールの測定結果を図１〜８に示す。すなわち、アザミ抽出物１とアザミ及びタイムの複合抽出物１とに応じた結果は図１に、アザミ抽出物２とアザミ及びタイムの複合抽出物２とに応じた結果は図２に、アザミ抽出物３とアザミ及びタイムの複合抽出物３とに応じた結果は図３に、アザミ抽出物４とアザミ及びタイムの複合抽出物４とに応じた結果は図４に、アザミ抽出物５とアザミ及びタイムの複合抽出物５とに応じた結果は図５に、アザミ抽出物６とアザミ及びタイムの複合抽出物６とに応じた結果は図６に、アザミ抽出物７とアザミ及びタイムの複合抽出物７とに応じた結果は図７に、アザミ抽出物１とタイム抽出物１との混合比率に応じた結果は図８に、各々示されている。

参考に、円滑な比較のために、図１〜図７には、正常対照群（Ｓｈａｍ）及び陰性対照群（ＯＶＸ−Ｃｏｎ）の結果が各々含まれている。

図１に示すように、陰性対照群（ＯＶＸ−Ｃｏｎ）は、正常対照群（Ｓｈａｍ）と比べて血液中エストラジオール濃度が顕著に低いことから、閉経によりエストロゲンの活性度が低下することが分かる。そして、陰性対照群（ＯＶＸ−Ｃｏｎ）と比べて、第１実験群（ＯＶＸ−Ｃｉｒｓ）の血液中エストラジオール濃度が高く表れたことから、アザミ抽出物が、閉経後のエストロゲン濃度の急激な低下を緩和させる効果があることが分かる。そして、第２実験群（ＯＶＸ−ＣＴ）は、第１実験群（ＯＶＸ−Ｃｉｒｓ）と比べてエストラジオール濃度がさらに高く測定されたことから、アザミ及びタイムの複合抽出物が血液中エストロゲン濃度の上昇により効果的であることが分かる。

図２〜図７も、図１と微細な差があるだけであって、類似したパターンで結果が出たことから、抽出溶媒又は温度は、アザミ抽出物、アザミ及びタイムの複合抽出物の効能に大きな影響を与えないことが分かる。

そして、図８はアザミ抽出物１とタイム抽出物１との混合比率に応じたエストラジオール濃度を測定した結果であり、アザミ抽出物１の割合が高い８：２の比率で混合して投与したときに、最も高濃度のエストラジオールが測定されたことが分かる。

＜１−３＞体重の測定
体重の増加は、女性更年期の代表的な症状のうちの１つである。したがって、本発明は、アザミ抽出物が体重に及ぼす影響を確認するために、投与期間に応じた体重の変化を測定した。

具体的には、薬品投与前から８週間の薬品投与を終えた後の１週間までの合計９週間、各群（第１実験群の場合：アザミ抽出物１が投与されたグループ、第２実験群の場合：アザミ及びタイムの複合抽出物１（６：４の比率）が投与されたグループ）の体重を測定した。試験の結果は、統計プログラムＳＰＳＳ（ｖｅｒｓｉｏｎ １２．０）で統計処理し、正常対照群と対比してｐ＜０．０５レベルで有意性を検証した。その結果を図９及び図１０に示す。

図１０に示すように、陰性対照群（ＯＶＸ−Ｃｏｎ）は、正常対照群（Ｓｈａｍ）と比べて体重が顕著に増加することから、閉経が体重の増加にある程度影響を及ぼすことが分かる。そして、第１実験群（ＯＶＸ−Ｃｉｒｓ）は、陰性対照群（ＯＶＸ−Ｃｏｎ）と比べて体重が相対的に少なめに増加することが分かる。また、図９に示すように、９週間後には第１実験群（ＯＶＸ−Ｃｉｒｓ）は、正常対照群（Ｓｈａｍ）と比較して体重の増加に大差がないことが分かる。したがって、アザミ抽出物が閉経後の体重増加を緩和させる効果を有することが分かる。

一方、第２実験群（ＯＶＸ−ＣＴ）は、第１実験群（ＯＶＸ−Ｃｉｒｓ）よりも低い比率で体重が増加したことから、アザミ及びタイムの複合抽出物が更年期の体重増加に対してさらに効果的に作用することが分かる。

＜１−４＞体内コレステロールの測定
元気な若い女性は、同じ年齢の男性と比べて、血液中の総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、及び中性脂肪は低く、ＨＤＬコレステロールは高い。しかし、閉経期になると、中性脂肪及びＨＤＬコレステロールは概して変化がないが、総コレステロール及びＬＤＬコレステロールは増加し、このような変化は女性の閉経期後の血管性疾患の発病率を高めることが知られている。したがって、本発明は、アザミ抽出物、アザミ及びタイムの複合抽出物が血液中コレステロールに及ぼす影響を確認するために、薬品投与後に血液中コレステロールの濃度を測定した。

具体的には、前記＜１−１＞試験対象で投与が完了した各群（第１実験群の場合：アザミ抽出物１が投与されたグループ、第２実験群の場合：アザミ及びタイムの複合抽出物１（６：４の比率）が投与されたグループ）の血液を採取した。そして、血清を分離し、血清中の中性脂肪、総コレステロール、ＨＤＬコレステロール濃度を、自動測定用スライド（富士フィルム（株）製）を用いて臨床化学分析装置（富士ドライケム３５００ｉ、富士フィルム（株）製）で、４００ｎｍ〜６００ｎｍの波長にて測定した。ＨＤＬコレステロールの場合、沈殿剤を用いてカイロミクロン、低密度リポタンパク、及び超低密度リポタンパクを沈殿させて、上清にあるＨＤＬコレステロールを測定した。ＬＤＬコレステロールは、以下のＦｒｉｅｄｅｗａｌｄ公式によって算出した。
ＬＤＬコレステロール
＝｛総コレステロール−（ＨＤＬコレステロール−中性脂肪／５）｝

研究の結果は平均±標準偏差で示し、統計プログラムＳＰＳＳ（ｖｅｒｓｉｏｎ １２．０）で統計処理して、ｐ＜０．０５レベルで有意性を検証した。その結果を表１に示す。

試験の結果、表１に示すように、陰性対照群は、正常対照群と比べて、血液中の総コレステロール、中性脂肪、及びＬＤＬコレステロールが有意に増加し、ＨＤＬコレステロールは減少した。これに対して、第１実験群及び第２実験群は、陰性対照群（ＯＶＸ−Ｃｏｎ）と比べて、血液中の総コレステロール、中性脂肪、及びＬＤＬコレステロールが有意に低く、ＨＤＬコレステロールは増加した。

したがって、本試験例の結果から、本発明の組成物に含まれるアザミ抽出物、アザミ及びタイムの複合抽出物が、閉経期の状況で、血液中の脂質含量とそれによって現れる高脂血症等との改善に効果を有することが分かる。

＜１−５＞骨マーカーの測定
骨密度の減少は、更年期の女性に現れる症状のうちの１つであり、骨粗しょう症のような疾患が誘発される原因である。したがって、アザミ抽出物、アザミ及びタイムの複合抽出物が骨密度に及ぼす影響を確認するために、薬品投与後の血液中のアルカリ性ホスファターゼ（Ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ、以下、「ＡＬＰ」という）濃度とオステオカルシン（Ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ、以下、「ＯＣ」という）濃度とを測定した。

具体的には、前記＜１−１＞試験対象で投与が完了した各群（第１実験群の場合：アザミ抽出物１が投与されたグループ、第２実験群の場合：アザミ及びタイムの複合抽出物１（６：４の比率）が投与されたグループ）の血液を採取した。血液中のＡＬＰ濃度は、自動分析器（ＡＤＶＩＡ １６５０、バイエル社製）を用いて分析し、血液中のＯＣ濃度は、ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（Ｍｅｔｒａ ＯＣ，Ｑｕｉｄｅｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて分析した。

試験の結果は、統計プログラムＳＰＳＳ（ｖｅｒｓｉｏｎ １２．０）で統計処理し、正常対照群と対比してｐ＜０．０５レベルで有意性を検証した。その結果を図１１及び図１２に示す。

試験の結果、図１１及び図１２に示すように、陰性対照群（ＯＶＸ−Ｃｏｎ）は、正常対照群（Ｓｈａｍ）と比べて、血液中のＡＬＰ濃度及びＯＣ濃度が上昇した。このような結果は、卵巣切除術による骨密度の減少によって骨再形成過程が増加し、この過程で骨代謝回転指標が向上することに起因すると考えられる。したがって、この過程で代表的な骨代謝回転指標である血液中のＡＬＰ濃度が上昇し、骨再吸収及び骨形成指標であるＯＣ濃度が上昇するようになる（Ｈｅｒｔｒａｍｐｆ Ｔ．，Ｓｃｈｌｅｉｐｅｎ Ｂ．，Ｏｆｆｅｒｍａｎｎｓ Ｃ．，Ｖｅｌｄｅｒｓ Ｍ．，Ｌａｕｄｅｎｂａｃｈ Ｕ．，Ｄｉｅｌ Ｐ．，Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｎｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ−ｒｉｃｈ ｄｉｅｔ ｗｉｔｈ ｄｉｅｔａｒｙ ａｎｄ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｉｎ ｏｖａｒｉｅｃｔｏｍｉｚｅｄ ｒａｔｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｌｅｔｔ．２００９，１８４，１９８−２０３．）。これに対して、第１実験群（ＯＶＸ−Ｃｉｒｓ）は、血液中のＡＬＰ濃度及びＯＣ濃度が、陰性対照群（ＯＶＸ−Ｃｏｎ）と比べて低下した。また、第２実験群（ＯＶＸ−ＣＴ）は、血液中のＡＬＰ濃度及びＯＣ濃度がこれよりもさらに低下し、正常対照群（Ｓｈａｍ）に最も近い数値であった。

したがって、上記のように血液中のＡＬＰ濃度及びＯＣ濃度が相対的に少なめに上昇することから、アザミ抽出物、アザミ及びタイムの複合抽出物は、閉経による骨密度の減少を緩和させる効果を有することが分かる。

試験例２：人体対象試験
＜２−１＞試験対象
本試験に同意した満４５才以上の中年女性６０人を、偽薬を摂取した対照群（Ｐｌａｃｅｂｏ）、アザミ抽出物を摂取した第１実験群（Ｃｉｒｓｉｕｍ）、アザミ及びタイムの複合抽出物を摂取した第２実験群（Ｃ＋Ｔｈｙｍｅ）として各々２０人ずつ任意に分類し、偽薬、アザミ抽出物、又は、アザミ及びタイムの複合抽出物が含まれた実験薬を、１日に４００ｍｇ、１２週間に亘って摂取して貰った。

＜２−２＞ハングル版ＫＩ（Ｋｕｐｐｅｒｍａｎ ｉｎｄｅｘ）
これは、１９５３年にＫｕｐｐｅｒｍａｎの臨床的な更年期障害治療経験に基づいて、以下の表２に示す更年期の代表的な症状１１個を項目に設定して更年期障害の程度及び特徴を把握して発表した検査法であり、現在まで、女性の更年期症状と関連した研究において症状評価の尺度として最も多用されている自己評価質問検査法である。更年期の各症状の程度及び特徴を把握して、項目別に配点をかけたものを合算し、２０点未満は軽症、２０点以上４０点未満は中等症、４０点以上６０点未満は重症、６０点以上は危急な状態と判定する。摂取後の改善率が計算された結果を図１３に示す。結果は、統計プログラムＳＰＳＳ（ｖｅｒｓｉｏｎ １２．０）で統計処理し、ｐ＜０．０５レベルで有意性を検証した。

図１３に示すように、偽薬を摂取した対照群（Ｐｌａｃｅｂｏ）では、３ヶ月の摂取後に４．２％の症状改善率が示されたに過ぎないのに対し、第１実験群（Ｃｉｒｓｉｕｍ）では、ＫＩで評価した女性の更年期症状が３０％減少し、対照群（Ｐｌａｃｅｂｏ）と比べて有意に更年期症状が改善された。また、第２実験群（Ｃ＋Ｔｈｙｍｅ）では、女性の更年期症状が４５％以上減少したことが分かる。

したがって、これらの結果から、アザミ抽出物、アザミ及びタイムの複合抽出物により、顔面紅潮、発汗、不眠症、神経質、憂鬱症、めまい症、疲労感、関節痛及び筋肉痛、胸騒ぎ、膣の乾燥、分泌物の減少等の複合的な女性の更年期症状が効果的に改善されることが確認された。

＜２−３＞ハングル版ＭＲＳ（Ｍｅｎｏｐａｕｓｅ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ）
ＭＲＳ検査法は、１９９２年にＨｉｌｄｉｃｈらがＫｕｐｐｅｒｍａｎ ｉｎｄｅｘを補完して作成したＭＥＮＱＯＬ（Ｍｅｎｏｐａｕｓｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ）検査法を、１９９６年に新しく補完して作成した検査法である。ＭＲＳは、全世界的に多くの研究に引用され、信頼度及び妥当性が認められている。身体症状、精神症状、泌尿生殖器症状等、合計１１個の項目で構成されており、項目数が少なく簡便であるという長所を有している。このＭＲＳは、以下の表３に示す基準で症状を評価する。

計算した総得点から、０点〜４点は良好な更年期状態で、円満な更年期を示す。５点〜８点は軽微な更年期状態で、管理が必要であることを示す。９点〜１５点は重症度の更年期状態で更年期障害があるため、専門家の診断及び治療が必要であることを示す。１６点以上は激しい更年期状態で、長期的な計画及び治療が大いに必要であることを示す。

これらの結果を図１４に示す。結果は、統計プログラムＳＰＳＳ（ｖｅｒｓｉｏｎ １２．０）で各実験群の摂取前後の点数を統計分析し、ｐ＜０．０５レベルで有意性を検証した。

図１４に示すように、対照群（Ｐｌａｃｅｂｏ）では、３ヶ月の摂取後にＭＲＳ点数で統計的に有意な差が示されなかった。これに対して、第１実験群（Ｃｉｒｓｉｕｍ）では、３ヶ月の摂取後にＭＲＳ点数が３０％ほど減少し、女性の更年期症状が有意に減少したことが確認された。また、第２実験群（Ｃ＋Ｔｈｙｍｅ）では、３ヶ月の摂取後に、第１実験群（Ｃｉｒｓｉｕｍ）よりも大差にて点数が減少したことから、より効果的に更年期症状が改善され得ることが分かる。

本発明に係る組成物に含まれるアザミ抽出物、アザミ及びタイムの複合抽出物は、更年期女性のエストロゲンが減少する症状である低エストロゲン症を緩和させることができるので、該組成物を、機能性食品又は医薬品等として提供することができる。

Claims (1)

1. アザミ（Ｃｉｒｓｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）及びタイム（Ｔｈｙｍｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）の複合抽出物を有効成分として含み、
   前記アザミ及びタイムの複合抽出物は、アザミ熱水抽出物とタイム熱水抽出物との混合物であり、
   前記アザミ熱水抽出物と前記タイム熱水抽出物との重量比は、２：８、４：６、６：４、又は８：２であることを特徴とする、更年期女性の低エストロゲン症の改善及び予防用食品組成物。