JP6970236B2

JP6970236B2 - ゲムシタビンプロドラッグ

Info

Publication number: JP6970236B2
Application number: JP2020076384A
Authority: JP
Inventors: グリフィス，ヒュー; マクギガン，クリストファー; スラサルジク，マグダレナ; セルピ，ミカエラ; フェラーリ，ヴァレンティナ
Original assignee: ヌカナピーエルシー
Priority date: 2014-06-25
Filing date: 2020-04-22
Publication date: 2021-11-24
Anticipated expiration: 2035-06-25
Also published as: TWI758728B; NZ725205A; CA2945938C; CL2016003260A1; SG11201608808TA; JP2017519014A; HUE062474T2; SMT202000564T1; AU2015278899B2; US20170107246A1; ME03817B; SI3160978T1; CN106459129A; RS60968B1; EP3160978B1; AU2019216626B2; WO2015198058A1; TW201613614A; HRP20201264T1; ES2811268T3

Description

本発明は、周知の腫瘍薬ゲムシタビンのモノホスフェートのプロドラッグに関する。詳
細には、本発明は、単一のホスフェートジアステレオ異性体として存在する場合のゲムシ
タビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−ホスフェート（化学名：２’−
デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏ−［フェニル（ベンゾキシ
−Ｌ−アラニニル）］ホスフェート）に関するものであり、特に、本発明は、（Ｒ）−ジ
アステレオ異性体に比べて溶解度において顕著で予想外の上昇を示す、（Ｓ）−ホスフェ
ートジアステレオ異性体に関する。（Ｓ）−ホスフェートジアステレオ異性体はまた、（
Ｒ）−ジアステレオ異性体より優先的に、シクロデキストリン溶液中に取り込まれる。

ゲムシタビン（１、Ｇｅｍｚａｒ（登録商標）として販売されている）は、乳癌、非小
細胞肺癌、卵巣癌および膵臓癌を治療するために現在承認されていて、膀胱癌、胆道癌、
結腸直腸癌およびリンパ腫を含む様々なその他の癌を治療するために広く使用されている
、有効なヌクレオシド類似体である。

ゲムシタビンの臨床的有用性は、いくつかの生得および獲得の耐性機構によって限定さ
れる。細胞レベルで、耐性は、３つのパラメーターに依存する：（ｉ）リン酸化部分にす
る活性化のために必要である、デオキシシチジンキナーゼのダウンレギュレーション、（
ｉｉ）癌細胞による取り込みのために必要とされるヌクレオシド輸送体、特にｈＥＮＴ１
の発現の減少、および（ｉｉｉ）ゲムシタビンを分解する触媒酵素、特にシチジンデアミ
ナーゼのアップレギュレーション。

国際公開第２００５／０１２３２７号パンフレットは、ゲムシタビンおよび関連するヌ
クレオシド薬物分子のための一連のヌクレオチドプロドラッグを記載している。一連のヌ
クレオチドプロドラッグの中で、ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニ
ル）］−ホスフェート（ＮＵＣ−１０３１；２）は、特に有効な化合物として確認されて
いる。これらのプロドラッグは、ゲムシタビンの有用性を限定する、生得および獲得の耐
性機構の多くを回避すると思われる（'Application of ProTide Technology to Gemcitab
ine: A Successful Approach to Overcome the Key Cancer Resistance Mechanisms Lead
s to a New Agent (NUC-1031) in Clinical Development'; Slusarczyk et al.; J. Med.
Chem.; 2014, 57, 1531-1542）。

ＮＵＣ−１０３１２は、ホスフェート中心でエピマーの２つのジアステレオ異性体の
混合物として調製される。

残念ながら、ＮＵＣ−１０３１２は、極度に親油性であり、したがって、水に溶解し
にくく（計算によると、＜０．１ｍｇ／ｍＬ）、イオン化できる部分、ピリミジン窒素お
よびフェノール性ヒドロキシルは、非経口投与にとって適切なｐＨ範囲外にある、計算さ
れたｐＫａを有する。ＮＵＣ−１０３１２は、塩含有量またはｐＨにかかわらず、水に
本質的に不溶性であり、これは、有効な治療にとって十分に高い用量でプロドラッグを送
達するための配合物の開発に影響する。これは、高い対費用効果でＮＵＣ−１０３１の生
成を可能にすることになる、効率的製造方法の開発にもまた影響する。

有効な医薬組成物中に配合できる形態で、ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ
−アラニニル）］−ホスフェート（ＮＵＣ−１０３１；２）を提供することが、本発明の
特定の実施形態の目的である。

調製でき、長期間貯蔵できる、ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニ
ル）］−ホスフェート（ＮＵＣ−１０３１；２）の形態を提供することもまた、本発明の
特定の実施形態の目的である。

先行技術の形態より高い溶解度を有する形態で、ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキ
シ−Ｌ−アラニニル）］−ホスフェート（ＮＵＣ−１０３１；２）を提供することが、本
発明の特定の実施形態の目的である。

リンでの単一ジアステレオ異性体として、ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ
−アラニニル）］−ホスフェート（ＮＵＣ−１０３１；２）を提供することが、本発明の
特定の実施形態の目的である。

本発明の特定の実施形態は、上の目的のいくつかまたは全てを満足させる。
本開示は以下の［１］から［２３］を含む。
［１］ゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３、

またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
［２］医学的使用のための、上記［１］に記載の化合物。
［３］癌治療における使用のための、上記［１］に記載の化合物。
［４］癌治療用の医薬品の製造における使用のための、ゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
［５］癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量のゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を投与することを含む、方法。
［６］上記癌が、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、結腸直腸癌、肺癌、膀胱癌、前立腺癌、胆管細胞癌腫、腎臓癌、子宮頚癌、胸腺癌、原発不明癌、リンパ腫または白血病から選択される、上記［３］もしくは上記［４］に記載の化合物または上記［５］に記載の治療の方法。
［７］約９０％を超えるジアステレオ異性体純度を有するゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および少なくとも１種の薬学的に許容される添加剤を含む、医薬配合物。
［８］静脈内投与用である、上記［７］に記載の医薬配合物。
［９］極性有機溶媒もまた含む水性配合物である、上記［８］に記載の医薬配合物。
［１０］シクロデキストリンをさらに含む、上記［７］から［９］のいずれか一項に記載の医薬配合物。
［１１］経口投与用である、上記［７］に記載の医薬配合物。
［１２］上記ゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３が、遊離塩基の形態である、上記［１］から［１１］のいずれか一項に記載の化合物、方法または配合物。
［１３］ゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェート４、

またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
［１４］医学的使用のための、上記［１３］に記載の化合物。
［１５］癌治療における使用のための、上記［１３］に記載の化合物。
［１６］癌治療用の医薬品の製造における使用のための、ゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェート４、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
［１７］癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量のゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェート４、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を投与することを含む、方法。
［１８］上記癌が、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、結腸直腸癌、肺癌、膀胱癌、前立腺癌、胆管細胞癌腫、腎臓癌、子宮頚癌、胸腺癌、原発不明癌、リンパ腫または白血病から選択される、上記［１５］もしくは上記［１６］に記載の化合物または上記［１７］に記載の治療の方法。
［１９］約９０％を超えるジアステレオ異性体純度を有するゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェート４、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および少なくとも１種の薬学的に許容される添加剤を含む、医薬配合物。
［２０］静脈内投与用である、上記［１９］に記載の医薬配合物。
［２１］極性有機溶媒もまた含む水性配合物である、上記［２０］に記載の医薬配合物。［２２］経口投与用である、上記［１９］に記載の医薬配合物。
［２３］上記ゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェート４が、遊離塩基の形態である、上記［１３］から［２０］のいずれか一項に記載の化合物、方法または配合物。

本発明のゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−ホスフェート
は、ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−ホスフェート（ＮＵ
Ｃ−１０３１；２）と、好ましくは、実質的に同じ活性がある。しかし、本発明のゲムシ
タビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−ホスフェートは、わずかにより
低い活性を有するが、本明細書に記載されているその他の利点を有し、その場合、この形
態でそれを使用する製造または治療上の利点がある。

本発明においては、ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（
Ｓ）−ホスフェート３、

または薬学的に許容される塩もしくはその溶媒和物が提供される。好ましくは、ゲムシタ
ビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３は、実
質的にジアステレオ異性体的に純粋な形態である。

本発明者らは、２つのジアステレオ異性体の溶解度における、驚くべき、顕著な差異を
発見した。（Ｓ）−エピマー３は、それを、治療薬剤として配合および投与に適切なもの
にする、いくつかの極性有機溶媒と水との混合物中での十分な溶解度を有する。（Ｒ）−
エピマー４は、測定されたほとんどの溶媒混合物中で、実質的に不溶性である。溶解度に
おけるこの顕著な差異は、以前は確認されておらず、（Ｓ）−エピマーのこの特性の潜在
的利点は、確認されていなかった。試験された、いくつかの溶媒混合物において、（Ｓ）
−エピマーと（Ｒ）−エピマーとの間の溶解度における差異は、１００倍を超える。

驚いたことに、（Ｓ）−エピマーはまた、（Ｒ）−エピマーより優先的に、シクロデキ
ストリン溶液中に取り込まれる。これは、その他のゲムシタビンホスフェート誘導体では
観察されなかった。

本発明の第２の態様において、約９０％を超えるジアステレオ異性体純度を有するゲム
シタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３、
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および少なくとも１種の薬学的に許
容される添加剤を含む、医薬配合物が提供される。

配合物は、非経口用、例えば、静脈内、皮下または筋肉内投与用であってよい。好まし
くは、配合物は、静脈内投与用である。

配合物は、極性有機溶媒を場合によってまた含む、水性配合物であってよい。非経口（
例えば、静脈内）投与の場合、配合物は、極性有機溶媒を好ましくはまた含む。

配合物は、シクロデキストリンをまた含んでよい。

本発明の第３の態様において、医学的使用のための、ゲムシタビン−［フェニル−ベン
ゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３、またはその薬学的に許容され
る塩もしくは溶媒和物が提供される。

本発明の第４の態様において、癌治療における使用のための、ゲムシタビン−［フェニ
ル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３、またはその薬学的に
許容される塩もしくは溶媒和物が提供される。

本発明の第５の態様において、癌治療用の医薬品の製造における使用のための、ゲムシ
タビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３、ま
たはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物が提供される。

本発明の第６の態様において、癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に治
療有効量のゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホス
フェート３、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を投与することを含む
、方法が提供される。

溶媒和物は、典型的に、水和物ということになる。したがって、ゲムシタビン−［フェ
ニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェートは、塩または水和物の形
態であってよい。ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）
−ホスフェートは、塩および／または溶媒和物（例えば、水和物）の形態ではないことが
あり得る。好ましくは、ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−
（Ｓ）−ホスフェートは、遊離塩基の形態である。

ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート
は、約９０％を超えるジアステレオ異性体純度を有してよい。ゲムシタビン−［フェニル
−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェートは、９５％、９８％、９９％
、または９９．５％さえも超えるジアステレオ異性体純度を有してよい。「実質的にジア
ステレオマー的に純粋な」は、約９０％を超えるジアステレオマー純度として、本発明の
目的のために定義される。

癌は、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、結腸直腸癌、肺癌、膀胱癌、前立腺癌、胆管細
胞癌腫、腎臓癌、子宮頚癌、胸腺癌、原発不明癌から選択される、癌であってよい。癌は
また、リンパ腫または白血病であってもよい。

本発明の第７の態様において、実質的にジアステレオ異性体的に純粋な形態のゲムシタ
ビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−ホスフェートの少なくとも１つの
ジアステレオ異性体を生成する方法であって、
ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェート
４とゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェー
ト３との混合物を得るステップ、
混合物に分離技法を実施するステップ、ならびに
いったん分離したら、実質的にジアステレオ異性体的に純粋な形態で、ゲムシタビン−［
フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェート４および／または
ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート
３を単離するステップ
を含む、方法が提供される。

本発明の第８の態様において、実質的にジアステレオ異性体的に純粋な形態のゲムシタ
ビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−ホスフェートの少なくとも１つの
ジアステレオ異性体を生成する方法であって、
３'−保護されたゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）
−ホスフェート４と３'−保護されたゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−ア
ラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３との混合物を得るステップ、
混合物に分離技法を実施するステップ、
いったん分離したら、実質的にジアステレオ異性体的に純粋な形態で、３'−保護された
ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェート
４および／または３'−保護されたゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニ
ニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３を単離するステップ、
分離されたジアステレオ異性体の一方または両方から３’−保護基を除去し、実質的にジ
アステレオ異性体的に純粋な形態で、ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラ
ニニル）］−（Ｒ）−ホスフェート４および／またはゲムシタビン−［フェニル−ベン
ゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３を生成するステップ
を含む、方法が提供される。

３’−保護されたゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−ホス
フェートは、３’−ヒドロキシ基がヒドロキシルの保護基であることを特徴とする、ゲム
シタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−ホスフェートの誘導体である
。当該の保護基は、明確に除去可能でなければならない。代表的な保護基としては、シリ
ル保護基（例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルおよびトリエチルシリル）が挙げら
れ、その場合、保護基は、ＴＦＡ、ＨＦ、フルオロケイ酸およびテトラブチルアンモニウ
ムフルオリドから選択される試薬を使用して、除去されてよい。代替の保護基は、カーボ
ネート基（例えば、ｔｅｒｔブチルカーボネート）であり得て、その場合、保護基は、ブ
ロンステッド酸（例えば、ＴＦＡ）またはルイス酸（例えば、ＺｎＢｒ_２）を使用して、
除去してよい。

分離技法は、クロマトグラフィー、例えば、カラムクロマトグラフィー、分取薄層クロ
マトグラフィーまたは分取ＨＰＬＣであってよい。分離技法が分取ＨＰＬＣである場合、
キラルカラム、例えば、アミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）を
含むキラルカラムを使用して、実行されてよい。本発明の方法において有用なキラルカラ
ムの例は、ＣｈｉｒａｌｐａｋＡＤ（商標）であり、その固定相は、アミローストリス
（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）が物理的にコーティングされた、２０μｍの
シリカ担体から成る。

分離技法は、シクロデキストリン溶液中への選択的取り込みであってよい。この技法は
、一方のエピマーが、他方のエピマーに優先してシクロデキストリン溶液中へ取り込まれ
るように、混合物をシクロデキストリン溶液と接触させること、および次に、溶解されな
かった固形物からシクロデキストリン溶液を分離することを伴う。シクロデキストリン溶
液は、シクロデキストリン水溶液であってよい。固形物からの溶液の分離は、ろ過によっ
て達成されてよい。

本発明はまた、ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）
−ホスフェート４、

またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。本発明はまた、約９０％
を超えるジアステレオ異性体純度を有するゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−
アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェート４、またはその薬学的に許容される塩もしくは
溶媒和物、および薬学的に許容される添加剤を含む、医薬配合物、ならびに化合物４の医
学的使用ならびに化合物４を使用する治療の方法を提供する。（Ｒ）−エピマーのこれら
の態様は、上に記載された本発明の第３から第６の態様における化合物３に関して記載さ
れたものに対応する。ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（
Ｒ）−ホスフェートは、実質的にジアステレオ異性体的に純粋な形態であってよい。ゲム
シタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェートは、塩
および／または溶媒和物（例えば、水和物）ではないことがあり得る。好ましくは、ゲム
シタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェートは、遊
離塩基として存在する。

Ｒ−エピマーは、Ｓ−エピマーの４倍である、単離されたヒト肝細胞でのインキュベー
ションにおける半減期を有することが示された（実施例４参照）。Ｒ−異性体に関するよ
り長い半減期は、より低い固有クリアランスを意味し、Ｓ−異性体とは異なる薬物動態お
よび薬力学のプロファイルをもたらすはずである。このプロファイルは、体循環における
Ｒ−異性体のより高く、より長時間の濃度、それ故に、Ｓ−エピマーで達成され得るより
大きなＲ−エピマーへの暴露を意味し得る。したがって、Ｒ−異性体についてのＡＵＣは
、より大きくなり、例えば、初回通過効果がより明白である、経口の投与経路のための部
分への、より大きくより長時間の暴露をもたらし得る。Ｒ−エピマーへのこの長時間の暴
露は、Ｒ−エピマーへの実質的に長時間の腫瘍暴露を可能にし、より高い有効性をもたら
し、そこでは、肝臓における初回通過代謝が減少することによって、より高い薬物濃度が
もたらされることになる。この異なる特性はまた、より長いＰＫプロファイルが、脈管構
造の貧弱な、接近が困難な腫瘍部位に、より高い有効性をもたらし得る、特定の腫瘍のタ
ーゲッティングを可能にし得る。Ｒ−エピマーへの長時間の暴露は、細胞分裂を含む、細
胞周期のより多くの期を通じて、活性代謝物の十分な薬物濃度を確実にし得る。

本発明の実施形態を、添付の図面を参照しながら、以降にさらに説明する。

ＣｈｉｒａｌｐａｋＡＤカラムおよびｎ−ヘプタン／ＩＰＡグラジェント溶媒系を使用するＨＰＬＣによる、化合物３と４の分離のためのクロマトグラフを示す図である。ｘ線回析によって測定された化合物４の構造を示す図である。ｘ線回析によって測定された化合物３の構造を示す図である。モル比１：２．３のＨＰ−β−ＣＤの添加後の、ＮＵＣ−１０３１異性体混合物（３．１２ｍＭ）の^３１Ｐ-ＮＭＲスペクトル（２０２ＭＨｚ、Ｄ_２Ｏ）を示す図である。（Ｂ）モル比１：２．３のＨＰ−β−ＣＤの添加後のＨ_２Ｏ中（Ａ）ＭｅＯＨ中のＮＵＣ−１０３１（３．１２ｍＭ）のＨＰＬＣ痕跡量を示す図である。

本明細書全体にわたって、用語Ｓ−エピマーまたはＳ−ジアステレオ異性体は、ゲムシ
タビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェートを指す。
同様に、本明細書全体にわたって、用語Ｒ−エピマーまたはＲ−ジアステレオ異性体は、
ゲムシタビン−［フェニル−ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェートを
指す。

本発明の化合物は、人体の治療において使用できる。本発明の化合物は、動物体の治療
において使用してよい。特に、本発明の化合物は、家畜などの商業用動物を治療するため
に使用できる。代替方法として、本発明の化合物は、猫、犬等などのペットを治療するた
めに使用できる。

本発明の化合物は、薬学的に許容される塩の形態で、得られ、貯蔵されおよび／または
投与されてよい。適切な薬学的に許容される塩としては、これらに限定されるものではな
いが、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸、ホウ酸、スルファミン酸、および臭化水素酸な
どの薬学的に許容される無機酸の塩、または酢酸、プロピオン酸、酪酸、酒石酸、マレイ
ン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、ムチン酸、グルコ
ン酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、トルエンスル
ホン酸、ベンゼンスルホン酸、サリチル酸、スルファニル酸、アスパラギン酸、グルタミ
ン酸、エデト酸、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、ラウリン酸、パントテン酸
、タンニン酸、アスコルビン酸および吉草酸などの薬学的に許容される有機酸の塩が挙げ
られる。適切な塩基塩は、無毒性塩を形成する塩基から形成される。例としては、アルミ
ニウム塩、アルギニン塩、ベンザチン塩、カルシウム塩、コリン塩、ジエチルアミン塩、
ジオラミン塩、グリシン塩、リジン塩、マグネシウム塩、メグルミン塩、オラミン塩、カ
リウム塩、ナトリウム塩、トロメタミン塩および亜鉛塩が挙げられる。酸および塩基のヘ
ミ塩、例えば、ヘミ硫酸塩、ヘミシュウ酸塩およびヘミカルシウム塩もまた形成され得る
。特定の実施形態、特に、ｓ−エピマーに適用される実施形態において、化合物は、ＨＣ
ｌ塩またはヘミシュウ酸塩の形態である。

本発明の化合物は、単結晶形態もしくは結晶形態の混合物で存在してよい、または本発
明の化合物は、非晶質であってよい。したがって、医薬的使用を目的とする本発明の化合
物は、結晶性または非晶質生成物として投与されてよい。本発明の化合物は、例えば、沈
殿、晶析、凍結乾燥、または噴霧乾燥、または蒸発乾燥などの方法によって、固形プラグ
、粉末、または薄膜として、得られてよい。マイクロ波または高周波乾燥が、この目的の
ために使用されてよい。

本発明の、上に記載された化合物について、投与される用量は、使用される化合物、投
与の方法、所望の治療および治療の必要を示された障害によって、もちろん変動すること
になる。例えば、本発明の化合物が非経口的に投与される場合、本発明の化合物の用量は
、０．１から５ｇ／ｍ^２の範囲内、例えば、０．５から２ｇ／ｍ^２であってよい。本発明
の化合物の治療目的用の一回分の量は、医薬の周知の原則に従って、状態の性質および重
症度、動物または患者の年齢および性別、ならびに投与経路によって、当然変動すること
になる。

本発明の化合物の服用レベル、投薬回数、および治療期間は、配合物、ならびに患者の
臨床的徴候、年齢、および併存する病状に応じて異なることが、予期される。

本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、それ自体で使用されてよいが、
本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩が薬学的に許容されるアジュバント、
賦形剤または担体と合併している、医薬組成物の形態で一般的に投与されることになる。
適切な医薬配合物の選択および調製のための従来の手順は、例えば、"Pharmaceuticals -
The Science of Dosage Form Designs", M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988
に記載されている。

本発明の化合物の投与の方法に応じて、本発明の化合物を投与するために使用される医
薬組成物は、好ましくは、０．０５から９９％ｗ（重量パーセント）の本発明の化合物、
より好ましくは、０．０５から８０％ｗの本発明の化合物、さらにより好ましくは、０．
１０から７０％ｗの本発明の化合物、もっとより好ましくは、０．１０から５０％ｗの本
発明の化合物を含むことになり、全ての重量パーセントは、全組成物に対するものである
。

経口投与のために、本発明の化合物は、アジュバントまたは担体、例えば、ラクトース
、ショ糖、ソルビトール、マンニトール；デンプン、例えば、ジャガイモデンプン、コー
ンスターチもしくはアミロペクチン；セルロース誘導体；結合剤、例えば、ゼラチンもし
くはポリビニルピロリドン；および／または滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム
、ステアリン酸カルシウム、ポリエチレングリコール、ロウ、パラフィン等と混合し、次
に、圧縮して錠剤にしてよい。コーティング錠剤が必要とされる場合、上に記載された通
りに調製された核は、例えば、アラビアゴム、ゼラチン、タルカムおよび二酸化チタンを
含有してよい濃縮糖溶液で、コーティングされてよい。代替方法として、錠剤は、容易に
揮発する有機溶媒中に溶解された適切なポリマーでコーティングしてよい。

軟ゼラチンカプセル剤の調製のために、本発明の化合物は、例えば、植物油またはポリ
エチレングリコールと混合してよい。硬ゼラチンカプセル剤は、錠剤のための上述の添加
剤のいずれかを使用し、化合物の顆粒を含有してよい。また、本発明の化合物の液状もし
くは半流動の配合物が、硬ゼラチンカプセル中に充填されてもよい。

経口適用のための液体製剤は、シロップまたは懸濁液、例えば、本発明の化合物を含有
する溶液の形態であってよく、残余は、糖ならびにエタノール、水、グリセロールおよび
プロピレングリコールの混合物である。場合によって、かかる液体製剤は、着色剤、香味
剤、甘味剤（サッカリンなど）、防腐剤および／もしくは増粘剤としてカルボキシメチル
セルロース、または当業者に公知のその他の添加剤を含有してよい。

非経口（例えば、静脈内）投与のために、本発明の化合物は、無菌の水性または油性溶
液として投与されてよい。本発明の化合物は、非常に親油性である。したがって、水性配
合物は、薬学的に許容される極性有機溶媒を、典型的に含有することにもなる。

シクロデキストリンには、薬物送達において広い適用があるとわかった（Rasheed et a
l, Sci. Pharm., 2008, 76, 567-598）。シクロデキストリンは、環状オリゴ糖のファミ
リーである。シクロデキストリンは、薬物分子を被包し、溶解度などのそれらの薬物分子
の特性を変更する、「分子のカゴ」として働く。シクロデキストリンは、（α−１，４）
結合したα−Ｄ−グルコピラノース単位を含む。シクロデキストリンは、６、７または８
グルコピラノース単位（それぞれ、α−、β−およびγ−シクロデキストリンと呼ばれる
）を含有してよい。医薬配合物中で使用されるシクロデキストリンは、しばしばβ-シク
ロデキストリンである。側鎖のヒドロキシル基は、Ｃ_１〜Ｃ_６置換または非置換アルキル
基でアルキル化できる。シクロデキストリンの例は、α−シクロデキストリン、β−シク
ロデキストリン、γ−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキス
トリン（ＨＰ−β−ＣＤ）、スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンナトリウム塩
、部分的にメチル化されたβ−シクロデキストリンである。

本発明の化合物の治療目的用の一回分の量は、医薬の周知の原則に従って、状態の性質
および重症度、動物または患者の年齢および性別、ならびに投与経路によって、当然変動
することになる。

本発明はまた、化合物３または４の全ての薬学的に許容される同位体標識形態を含み、
１つまたは複数の原子が、同じ原子番号を有するが、通常自然界にみられる主な同位体の
原子質量または質量数と違う、原子質量または質量数を有する原子によって、置換されて
いる。

本発明の化合物に含めるのに適切な同位体の例としては、^２Ｈおよび^３Ｈなどの水素、
^１１Ｃ、^１３Ｃおよび^１４Ｃなどの炭素、^３６Ｃｌなどの塩素、^１８Ｆなどのフッ素、^１
^２３Ｉおよび^１２５Ｉなどのヨウ素、^１３Ｎおよび^１５Ｎなどの窒素、^１５Ｏ、^１７Ｏお
よび^１８Ｏなどの酸素、^３２Ｐなどのリン、ならびに^３５Ｓなどのイオウの同位体が挙げ
られる。

特定の同位体標識化合物、例えば、放射性同位体を組み込んだ化合物は、薬物および／
または基質組織分布研究において有用である。放射性同位体トリチウム、すなわち、^３Ｈ
、および炭素１４、すなわち、^１４Ｃは、組み込みの容易さおよび検出の迅速な手段を考
慮すると、この目的のために特に有用である。

重水素、すなわち^２Ｈなどのより重い同位体での置換は、より高い代謝的安定性に起因
する特定の治療の優位性、例えば、インビボ半減期の増加または必要用量の減少をもたら
し得るし、それ故に、いくつかの状況において好まれ得る。

^１１Ｃ、^１８Ｆ、^１５Ｏおよび^１３Ｎなどのポジトロン放出同位体での置換は、基質受
容体占有率を調査するためのポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）研究において有用であり
得る。

同位体標識化合物は、当業者に公知の従来技法によって、または以前に使用された非標
識試薬の代わりに好適な同位体標識試薬を使用する、記載された方法と類似の方法によっ
て、一般的に調製できる。

治療の方法または癌の治療における使用のための化合物は、本発明の化合物に加えて、
従来の外科手術または放射線療法または化学療法を伴ってよい。かかる化学療法は、１種
または複数のその他の活性薬剤の投与を含んでよい。

さらなる活性薬剤が本発明の治療の方法の一部として投与される場合、かかる併用治療
は、治療の個々の成分の同時、順次または分離投薬によって達成されてよい。かかる併用
生成物は、上文に記載された治療有効用量の範囲内の本発明の化合物および承認された用
量の範囲内の１種または複数のその他の薬学的活性薬剤（複数可）を使用する。

したがって、本発明の医薬配合物は、別の活性薬剤を含んでよい。

１種または複数のその他の活性薬剤は、抗腫瘍薬剤の以下の分類の１つまたは複数であ
ってよい：
（ｉ）抗増殖性／抗悪性腫瘍性薬物およびその組合せ、例えば、アルキル化剤（例えば、
シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、ベンダムスチン、メルファラン、クロ
ラムブシル、ブスルファン、テモゾロミドおよびニトロソ尿素）；代謝拮抗剤（例えば、
ゲムシタビンならびに葉酸代謝拮抗薬、例えば、５−フルオロウラシルおよびテガフール
のようなフルオロピリミジン、ラルチトレキセド、メトトレキサート、ペメトレキセド、
シトシンアラビノシド、ならびにヒドロキシ尿素）；抗生物質（例えば、アントラサイク
リン類、例えば、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン
、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシンＣ、ダクチノマイシンおよびミトラマイ
シン）；有糸分裂阻害剤（例えば、ビンカアルカロイド類、例えば、ビンクリスチン、ビ
ンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビン、ならびにタキソイド類、例えば、タキソ
ールおよびタキソテール、ならびにポロキナーゼ阻害剤）；プロテアソーム阻害剤、例え
ば、カルフィルゾミブおよびボルテゾミブ；インターフェロン療法；ならびにトポイソメ
ラーゼ阻害剤（例えば、エピポドフィロトキシン類、例えば、エトポシドおよびテニポシ
ド、アムサクリン、トポテカン、ミトキサトロン、ならびにカンプトテシン）；
（ｉｉ）細胞分裂阻害剤、例えば、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン、フルベ
ストラント、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェンおよびヨードキシフェン
）、抗アンドロゲン剤（例えば、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミドおよび酢酸シプ
ロテロン）、ＬＨＲＨアンタゴニストまたはＬＨＲＨアゴニスト（例えば、ゴセレリン、
リュープロレリンおよびブセレリン）、プロゲストゲン（例えば、酢酸メゲストロール）
、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、ボロゾールおよびエ
キセメスタン）、およびフィナステリドなどの５α−レダクターゼの阻害剤；
（ｉｉｉ）抗浸潤剤、例えば、ダサチニブおよびボスチニブ（ＳＫＩ−６０６）、ならび
にメタロプロテアーゼ阻害剤、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター受容体機能
の阻害剤またはヘパラナーゼに対する抗体；
（ｉｖ）増殖因子機能の阻害剤：例えば、かかる阻害剤としては、増殖因子抗体および増
殖因子受容体抗体、例えば、抗ｅｒｂＢ２抗体トラスツズマブ［Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商
標）］、抗ＥＧＦＲ抗体パニツムマブ、抗ｅｒｂＢ１抗体セツキシマブ、チロシンキナー
ゼ阻害剤、例えば、上皮増殖因子ファミリーの阻害剤（例えば、ＥＧＦＲファミリーチロ
シンキナーゼ阻害剤、例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブおよび６−アクリルアミド−
Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）−キナ
ゾリン−４−アミン（Ｃｌ１０３３）、ｅｒｂＢ２チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、ラ
パチニブ）；肝細胞増殖因子ファミリーの阻害剤；インスリン増殖因子ファミリーの阻害
剤；細胞アポトーシスのタンパク質制御因子の調節剤（例えば、Ｂｃｌ−２阻害剤）；血
小板由来増殖因子ファミリーの阻害剤、例えば、イマチニブおよび／またはニロチニブ（
ＡＭＮ１０７）；セリン／トレオニンキナーゼの阻害剤（例えば、Ｒａｓ／Ｒａｆシグナ
ル伝達阻害剤、例えば、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、ソラフェニブ
、チピファルニブおよびロナファルニブ）、ＭＥＫおよび／またはＡＫＴキナーゼによる
細胞シグナル伝達の阻害剤、ｃ−ｋｉｔ阻害剤、ａｂｌキナーゼ阻害剤、ＰＩ３キナーゼ
阻害剤、Ｐｌｔ３キナーゼ阻害剤、ＣＳＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、ＩＧＦ受容体キナーゼ
阻害剤；オーロラキナーゼ阻害剤ならびにサイクリン依存性キナーゼ阻害剤、例えば、Ｃ
ＤＫ２および／またはＣＤＫ４阻害剤が挙げられる；
（ｖ）血管内皮増殖因子の効果を阻害する剤などの抗血管新生剤、［例えば、抗血管内皮
細胞増殖因子抗体ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標））；サリドマイド；レナリドミ
ド；ならびに、例えば、ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、バンデタニブ
、バタラニブ、スニチニブ、アキシチニブおよびパゾパニブ；
（ｖｉ）遺伝子療法アプローチ、例えば、異常ｐ５３または異常ＢＲＣＡ１もしくはＢＲ
ＣＡ２などの異常遺伝子を置き換えるアプローチを含む；
（ｖｉｉ）免疫療法アプローチ、例えば、抗体療法、例えば、アレムツズマブ、リツキシ
マブ、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））およびオファツムマ
ブ；インターフェロン、例えば、インターフェロンα；インターロイキン、例えば、ＩＬ
−２（アルデスロイキン）；インターロイキン阻害剤、例えば、ＩＲＡＫ４阻害剤；ＨＰ
Ｖワクチンなどの予防および治療ワクチンを含む、癌ワクチン、例えば、ガーダシル、サ
ーバリックス、オンコファージおよびシプロイセル−Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ）；ならびに
ｔｏｌｌ様受容体調節剤、例えば、ＴＬＲ−７またはＴＬＲ−９アゴニストを含む；なら
びに
（ｖｉｉｉ）細胞障害性剤、例えば、フルダラビン（フルダラ）、クラドリビン、ペント
スタチン（Ｎｉｐｅｎｔ（商標））；
（ｉｘ）ステロイド剤、例えば、糖質コルチコイドおよびミネラルコルチコイドを含む、
副腎皮質ステロイド剤、例えば、アルクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、
アルドステロン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタ
メタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、吉相酸ベタメ
タゾン、ブデソニド、クロベタゾン、酪酸クロベタゾン、プロピオン酸クロベタゾール、
クロプレドノール、コルチゾン、酢酸コルチゾン、コルチバゾール、デオキシコルトン、
デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、イ
ソニコチン酸デキサメタゾン、ジフルオロコルトロン、フルクロロロン、フルメタゾン、
フルニソリド、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコ
ルチンブチル、フルオロコルチゾン、フルオコルトロン、カプロン酸フルオコルトロン、
ピバリン酸フルオコルトロン、フルオロメトロン、フルプレドニデン、酢酸フルプレドニ
デン、フルランドレノロン、フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ハルシノニド、
ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、アソポン酸ヒドロコ
ルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプレート、吉草酸ヒドロコルチゾン、イコメタゾン（ic
omethasone）、イコメタゾンエンブテート（icomethasone enbutate）、メプレドニゾン
、メチルプレドニゾロン、モメタゾン、パラメタゾン、モメタゾンフロエート一水和物、
プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、チキソコルトール、ピバリン酸チ
キソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンア
ルコールおよびそれらのそれぞれの薬学的に許容される誘導体。ステロイド剤の組合せ、
例えば、この段落に述べられた２種以上のステロイド剤の組合せが、使用されてよい；
（ｘ）標的療法、例えば、ＰＩ３Ｋｄ阻害剤、例えば、イデラリシブおよびペリフォシン
；またはＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＣＡＲＴを阻害する化合物。

１種または複数のその他の活性薬剤はまた、抗生物質であってもよい。

本明細書の記載および特許請求の範囲の全体にわたって、語「含む」および「含有する
」ならびにそれらの変化形は、「含むが限定されない」ことを意味し、語「含む」および
「含有する」ならびにそれらの変化形は、その他の部分、添加物、成分、整数またはステ
ップを排除することを意図しない（および排除しない）。本明細書の記載および特許請求
の範囲の全体にわたって、文脈上、他の意味に解すべき場合を除き、単数形は、複数形を
包含する。特に、不定冠詞が使用される場合、文脈上、他の意味に解すべき場合を除き、
明細書は、複数も単数も考慮していると理解されるべきである。

本発明の特定の態様、実施形態または実施例と共に記載されている特徴、整数、特性、
化合物、化学的部分または基は、矛盾がなければ、本明細書に記載されている他のいずれ
の態様、実施形態または実施例にも適用可能であると理解されるべきである。本明細書（
いずれの添付の特許請求の範囲、要約および図面も含む）に開示された特徴の全て、およ
び／またはそのように開示されたいずれの方式または方法のステップの全ても、かかる特
徴および／またはステップの少なくともいくつかが、相互排他的である組合せを除いて、
いずれの組合せで組み合わされてもよい。本発明は、いずれの前述の実施形態の詳細にも
制限されない。本発明は、本明細書（いずれの添付の特許請求の範囲、要約および図面も
含む）に開示された特徴のいずれの新規の１つもしくはいずれの新規の組合せ、またはそ
のように開示されたいずれの方式もしくは方法のステップのいずれの新規の１つもしくは
いずれの新規の組合せにも及ぶ。

読者の注目は、本出願に関連して、本明細書と同時にまたは本明細書に先立って申請さ
れ、本明細書と一緒に公衆の閲覧に付されている、全ての文書に向けられ、全てのかかる
文書の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

以下の略語が、本明細書で使用される。
ＤＭＦ − Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ − ジメチルスルホキシド
ＩＰＡ − イソプロピルアルコール
ＮＭＰ − Ｎ−メチルピロリドン
ＰＥＧ − ポリエチレングリコール
ＴＢＤＭＳ − ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
ＴＦＡ − トリフルオロ酢酸

（Ｒ）および（Ｓ）異性体を、以下の条件下で、ＨＰＬＣによって分離した。
装置：ＤＡＤ検出器付きＡｇｉｌｅｎｔ１２００（商標）シリーズ
流速：１．０ｍＬ／分
カラム：ＣｈｉｒａｌｐａｋＡＤ（商標）、２５０×４．６ｍｍＩＤ（順相）
温度：気温
粒子径：２０μｍ
フィード：ＭｅＯＨ中に溶解される、１０ｇ／Ｌ
溶媒：ｎ−ヘプタン／ＩＰＡ１０−>５０％ＩＰＡ
クロマトグラムを、図１に示す。（Ｓ）−エピマーは、８．６分で溶出し、（Ｒ）−エピ
マーは、１０．３分で溶出した。

特性決定方法および材料：プロトン（^１Ｈ）、炭素（^１３Ｃ）、リン（^３１Ｐ）および
フッ素（^１９Ｆ）ＮＭＲスペクトルを、２５℃で、ＢｒｕｋｅｒＡｖａｎｃｅ５００分
光計で記録した。スペクトルを、重水素化溶媒ピークに自動較正し、全ての^１３ＣＮＭ
Ｒおよび^３１ＰＮＭＲを、プロトンデカップリングした。最終化合物の純度を、３５分
内にＨ_２Ｏ／ＭｅＯＨ、１００／０から０／１００のグラジェント溶離による分析カラム
として、ＶａｒｉａｎＰｏｌａｒｉｓＣ１８−Ａ（１０μΜ）を使用するＨＰＬＣ分
析により、＞９５％であると検証した。ＨＰＬＣ分析を、ＶａｒｉａｎＰｒｏｓｔａｒ
（ＬＣＷｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ−Ｖａｒｉａｎｐｒｏｓｔａｒ３３５ＬＣ検出器）に
よって実行した。
２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏ−［フェニル（ベン
ジルオキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３
検出（ＥＳ＋）ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｎａ^＋）６０３．１４。必要Ｃ_２５Ｈ_２７Ｆ_２Ｎ_４Ｏ_８Ｎ
ａＰ：（Ｍ^＋）５８０．４７。
³¹P NMR (202 MHz, MeOD): δ_Ρ 3.66
¹H NMR (500 MHz, MeOD): δ_Η 7.58 (d, J = 7.5 Hz, 1H, H-6), 7.38-7.32 (m, 7H, Ar
H), 7.26-7.20 (m, 3H, ArH), 6.24 (t, J = 7.5 Hz, 1H, H-1'), 5.84 (d, J = 7.5 Hz,
1H, H-5), 5.20 (AB系, J_AB= 12.0 Hz, 2H, OCH₂Ph), 4.46-4.43 (m, 1H, H-5'), 4.36-
4.31 (m, 1H, H-5'), 4.25-4.19 (m, 1H, H-3'), 4.07-4.00 (m, 2H, H-4', CHCH₃), 1.3
8 (d, J= 7.2 Hz, 3H, CHCH₃).
¹⁹F NMR (470 MHz, MeOD): δ_F- 118.0 (d, J = 241 Hz, F), - 120.24 (広幅なd, J = 2
41 Hz, F).
¹³C NMR (125 MHz, MeOD): δ_C174.61 (d, ³J_C-P = 5.0 Hz, C = O, エステル), 167.63
(C-NH₂), 157.74 (C=O ベース), 152.10 (d, ²J_C-P = 7.0 Hz, C-Ar), 142.40 (CH-ベー
ス), 137.22 (C-Ar), 130.90, 129.63, 129.39, 129.32, 126.32 (CH-Ar), 124.51 (d, ¹
J_C-F = 257 HZ, CF₂), 121.47, 121.43 (CH-Ar), 96.67 (CH-ベース), 85.92 (広幅シグ
ナル, C-1'), 80.31 (C-4'), 71.27 (見かけ上t, ²J_C-F= 23.7 Hz, C-3'), 68.03 (OCH₂P
h), 65.73 (d, ²J_C-P= 5.30 Hz, C-5'), 51.66 (CHCH₃), 20.42 (d, ³J_C-P= 6.25 Hz, CH
CH₃).
３５分内にＨ_２Ｏ／ＭｅＯＨ、１００/０から０/１００で溶出する、逆相ＨＰＬＣは、ｔ
_Ｒ＝２２．５３分でジアステレオ異性体の１つのピークを示した。
２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏ−［フェニル（ベン
ジルオキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｒ）−ホスフェート４．
検出（ＥＳ＋）ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｎａ^＋）６０３．１４。必要Ｃ_２５Ｈ_２７Ｆ_２Ｎ_４Ｏ_８Ｎ
ａＰ：（Ｍ^＋）５８０．４７。
³¹P NMR (202 MHz, MeOD): δ_Ρ 3.８３
¹H NMR (500 MHz, MeOD): δ_Η 7.56 (d, J = 7.5 Hz, 1H, H-6), 7.38-7.31 (m, 7H, Ar
H), 7.23-7.19 (m, 3H, ArH), 6.26 (t, J = 7.5 Hz, 1H, H-1'), 5.88 (d, J = 7.5 Hz,
1H, H-5), 5.20 (s, 2H, OCH₂Ph), 4.49-4.46 (m, 1H, H-5'), 4.38-4.34 (m, 1H, H-5'
), 4.23-4.17 (m, 1H, H-3'), 4.07-4.01 (m, 2H, H-4', CHCH₃), 1.38 (d, J = 7.2 Hz,
3H, CHCH₃).
¹⁹F NMR (470 MHz, MeOD): δ_F- 118.3 (d, J = 241 Hz, F), - 120.38 (広幅なd, J = 2
41 Hz, F).
¹³C NMR (125 MHz, MeOD): δ_C174.65 (d, ³J_C-P = 5.0 Hz, C = O, エステル), 167.65
(C-NH₂), 157.75 (C=O ベース), 152.10 (d, ²J_C-P = 7.0 Hz, C-Ar), 142.28 (CH-ベー
ス), 137.50 (C-Ar), 130.86, 129.63, 129.40, 129.32, 126.31 (CH-Ar), 124.50 (d, ¹
J_C-F = 257 Hz, CF₂), 121.44, 121.40 (CH-Ar), 96.67 (CH-ベース), 85.90 (広幅シグ
ナル, C-1'), 80.27 (C-4'), 71.30 (見かけ上t, ²J_C-F= 23.7 Hz, C-3'), 68.02 (OCH₂P
h), 65.50 (C-5'), 51.83 (CHCH₃), 20.22 (d, ³J_C-P = 7.5 Hz, CHCH₃).
３５分内にＨ_２Ｏ／ＭｅＯＨ、１００／０から０／１００で溶出する、逆相ＨＰＬＣは、
ｔ_Ｒ＝２１．８７分でジアステレオ異性体の１つのピークを示した。

Ｘ線回析データをまた、２つの異性体について取得し、結果の画像を、図２および３に
示す。対応する回析データおよび方法を、下の表１から４に提供する。

ＮＵＣ−１０３１の溶解度およびそのジアステレオ異性体を、ある範囲の薬学的に許容
される溶媒系中で測定した。採用したプロトコールは、以下の通りであった：
それぞれの溶媒系の少量１〜２ｍＬを調製し、当該の化合物のある重量を加えた。溶液を
、およそ４時間撹拌し、次に、０．４５μＬを、膜ろ過した。次に、濾液中の当該の化合
物の濃度を、ＨＰＬＣアッセイによって測定した。

膵臓癌の治療において使用されるゲムシタビン投与計画に基づいて、ＮＵＣ−１０３１
の分子量を調整した一回分は、週に一回の点滴として与えられ、約３２００ｍｇとなる。
必要とされる溶解度のレベルの指標として、５００ｍＬ点滴量を概念的な標的にして、Ｎ
ＵＣ−１０３１の必要とされる溶解度は、点滴液において＞６ｍｇ／ｍｌとなる。しかし
、この溶解度レベルは、ただの指標であり、下の溶解度ですら、有効な療法を提供できる
。

表６からわかるように、（Ｒ）−エピマー４は、水中極性有機溶媒の１０％混合物中で
実質的に不溶性である。他方、（Ｓ）−エピマー３は、有意に改善された溶解度を示す。
水中極性有機溶媒の５０％混合物において、（Ｓ）−エピマー３は、（Ｒ）−エピマー４
より１００倍を超える可溶性であり得る。したがって、（Ｓ）−エピマーは、潜在的に非
常に便利で有効な療法を提供できる。

（Ｒ）−および（Ｓ）−エピマーのシクロデキストリン中への差異のある取り込みを評
価するために、Ｄ_２Ｏ中のＨＰ−β−ＣＤによる処理の後、ＮＵＣ−１０３１異性体混合
物の^３１ＰＮＭＲスペクトルを記録した。

ＮＭＲ研究。^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ）および^３１ＰＮＭＲ（２０２ＭＨｚ）を
、２５℃でＢｒｕｋｅｒＡｖａｎｃｅ５００ＭＨｚ分光計で記録した。化学シフト（δ
）は、内部Ｄ_２Ｏ（δ４．９^１ＨＮＭＲ）または外部８５％Ｈ_３ＰＯ_４（δ０．００^３
^１ＰＮＭＲ）に対して、百万分率（ｐｐｍ）で引用される。ＨＰＬＣとＮＭＲ研究の両
方とも、室温で実行した。

ＨＰＬＣ研究。分析用高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析を、Ｔｈｅｒｍｏ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃシステムを使用して実施した。逆相ＨＰＬＣ分析を、流速１ｍＬ／
分および検出波長２８０ｎｍで、３０分内に、Ｈ_２Ｏ／ＣＨ_３ＣＮ、９０／１０から０／
１００によって溶出する、ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣＨｙｐｅｒｓｉｌＧｏｌｄＣ１８
、５μ、１５０×４．６ｍｍで実行した。ＮＵＣ−１０３１エピマー（ＭｅＯＨ中に溶解
）の保持時間を、これらの条件下で、（Ｓ）−エピマー３について１３．５８分および（
Ｒ）−エピマー４について１３．４４分で、それぞれ観察する（図５Ａ）。

ＮＵＣ−１０３１異性体混合物（１：１．１、（Ｓ）：（Ｒ））を２．３６ｍｇ計量し
、ＮＭＲ管中へ移した。次に、ＨＰ−β−ＣＤ１３．３ｍｇを、酸化重水素１．３ｍＬ中
に溶解させ、これが、ＮＭＲ管へ加えられた溶液であった（モル比１：２．３、ＮＵＣ１
０３１：ＨＰ−β−ＣＤ）（注：溶液中に溶解された全ての固形物ではない）。

^３１ＰＮＭＲスペクトルは、ＨＰ−β−ＣＤが、（Ｒ）エピマー（４．００Ｈｚ）に
比べてＮＵＣ−１０３１（Ｓ）−エピマー３（４．１４Ｈｚ）の溶解度を強化することが
できることを示し、溶液中の（Ｓ）−および（Ｒ）−エピマーの観察された比は、（Ｓ）
−エピマーが優位の６．６：１である。（図４）。

ＮＭＲ研究からのＤ_２Ｏ溶液０．５ｍＬを、水０．５ｍＬを加えることによって、１ｍ
Ｌまで希釈した（１．１５ｍｇ／ｍＬ）。この溶液２０μＬを、ＨＰＬＣ中へ注入した。

希釈されたＮＭＲ試料のＨＰＬＣ分析は、（Ｓ）−エピマー３が、（Ｒ）−エピマー４
より良く溶液中へ取り込まれることを確認し、溶液中の（Ｓ）−および（Ｒ）−エピマー
の観察された比は、ＮＭＲデータと広く一致して、（Ｓ）−エピマーが優位の５：１であ
る（図５Ｂ）。

別のゲムシタビンホスフェート誘導体で実行した同様の研究は、シクロデキストリン溶
液中へのその誘導体の（Ｓ）−エピマーおよび（Ｒ）−エピマーの取り込みの間に、差が
ないことを示した。

ほとんどの医薬のクリアランスおよび生物学的利用能は、肝臓中での初回通過代謝によ
って強く影響される。凍結保存された肝細胞で化合物をインキュベートし、インキュベー
ション混合物中の試験化合物の初期量対最終量を測定することによって、インビトロで相
対的肝臓「代謝的安定性」を推定することが可能である。

以下の手順は、プールされたヒト凍結保存肝細胞懸濁液を使用する、ＨＰＬＣ−ＭＳ／
ＭＳアッセイである。

アッセイマトリックス
ヒト肝細胞：男女混合および１０のプール
最終細胞密度：１００万（１０^６）生細胞／ｍＬ

実験プロトコール
プールされた凍結保存肝細胞を、解凍し、洗浄し、クレブス−ヘンゼライトバッファ（
ｐＨ７．３）中に再懸濁する。反応を、細胞懸濁液中に試験化合物（１μＭ最終濃度）を
加えることによって開始させ、３７℃／５％ＣＯ_２で、０分および１２０分のそれぞれに
ついて、平底９６ウェルプレート上で最終体積１００μＬにおいてインキュベートする。
反応を、インキュベーション混合物中へアセトニトリル１００μＬを加えることによって
停止する。次に、試料を、プレートシェーカー上で、穏やかに短時間、混合し、０．８ｍ
ＬのＶ字底９６ウェルプレートへ完全に移し、室温で１５分間、２５５０×ｇで遠心分離
する。それぞれの上澄み（１５０μＬ）を、清潔なクラスターチューブへ移し、続いて、
ＴｈｅｒｍｏＥｌｅｃｔｒｏｎ三連四重極システムでのＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析を行
う。

このアッセイを、半減期測定のために改変した。この場合、サンプリング時点は、０、
３０、６０、９０、および１２０分である。

基準化合物
４つの基準化合物（１μＭ）を、試験化合物と同時に試験した。プロプラノロールは、
ヒト肝細胞で相対的に安定していて、一方、フルラゼパム、ナロキソン、およびテルフェ
ナジンは、ヒト肝細胞で相対的に不安定である。

分析方法
試料を、選択反応モニタリング（ＳＲＭ）を使用する、（ＲＰ）ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ
によって分析する。ＨＰＬＣ条件は、オートサンプラー付きＨＰ１１００バイナリポンプ
、Ｃ−１２混合モード、２×２０ｍｍカラム、およびグラジェントから成る。

データ分析
試験化合物に対応するピーク面積を、ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって記録する。残存す
る試験化合物のパーセントとして表される代謝的安定性を、２時間からゼロ時間での試験
化合物のピーク面積を比較することによって、計算する。半減期測定の場合、半減期を、
一次速度論を前提として、残存する試験化合物（％）対時間の対数曲線の初期線形範囲の
傾斜から推定する。

結果を表７に示す。

Claims

膵臓癌、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、胆管細胞癌腫、腎臓癌、子宮頚癌、および胸腺癌から選択される癌を治療するための医薬の製造のための、９０％を超えるジアステレオ異性体純度を有するゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３：

またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用。
膵臓癌、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、胆管細胞癌腫、腎臓癌、子宮頚癌、および胸腺癌から選択される癌を治療するための医薬の製造のための、９０％を超えるジアステレオ異性体純度を有するゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３：

の使用。
前記癌が、膵臓癌である、請求項１または２に記載の使用。
前記癌が、卵巣癌である、請求項１または２に記載の使用。
前記癌が、胆管細胞癌腫である、請求項１または２に記載の使用。
前記医薬が、シクロデキストリンを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の使用。
前記医薬が水性配合物である、請求項１から６のいずれか一項に記載の使用。
前記医薬が、経口投与用である、請求項１から７のいずれか一項に記載の使用。
前記医薬が、静脈内投与用である、請求項１から７のいずれか一項に記載の使用。
前記医薬が極性有機溶媒を含む、請求項９に記載の使用。
前記ゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３の前記ジアステレオ異性体の純度が、９５％を超える、請求項１から１０のいずれか一項に記載の使用。
前記ゲムシタビン−［フェニル−（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）］−（Ｓ）−ホスフェート３のジアステレオ異性体純度が、９９．５％を超える、請求項１１に記載の使用。