JP7669063B2

JP7669063B2 - Ｂｔｋ阻害剤としての架橋二環式化合物

Info

Publication number: JP7669063B2
Application number: JP2023512197A
Authority: JP
Inventors: チェン、シャンヤン; パン、イーチョン
Original assignee: Beijing Innocare Pharma Tech Co Ltd
Current assignee: Beijing Innocare Pharma Tech Co Ltd
Priority date: 2020-08-20
Filing date: 2021-08-19
Publication date: 2025-04-28
Anticipated expiration: 2041-08-19
Also published as: WO2022037650A1; EP4200283A1; JP2023538090A; CN116670119A; CN116670119B; EP4200283A4; CN114075190A; JP2023538091A; US20230192691A1; WO2022037649A1; US20230212175A1

Description

本発明は、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）及びそのＣ４８１変異体の活性を調節又は阻害するのに好適な、架橋二環式化合物又はその薬学的に許容される塩に関する。本発明は、また、前記化合物又はその薬学的に許容される塩の製造方法に関する。さらに、本発明は、がん及び自己免疫疾患の治療及び／又は予防における前記化合物又はその薬学的に許容される塩の用途及び使用方法に関する。

ＢＴＫは、細胞シグナル伝達を仲介する重要な非受容体型チロシンキナーゼであり、Ｂ細胞を含む形質細胞中に存在する。Ｂ細胞は、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）を介して活性化され、ＢＴＫは、ＢＣＲ仲介シグナル伝達経路において重要な役割を果たす。Ｂ細胞上のＢＣＲが活性化されると、ＢＴＫが活性化され、下流のホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）の濃度が上昇し、ＩＰ３及びＤＡＧシグナル伝達経路が活性化される。このシグナル伝達経路は、細胞の増殖、接着及び生存を促進でき、Ｂ細胞リンパ腫の発生において重要な役割を果たす。

ＢＴＫ阻害剤は、ＢＴＫの活性を阻害することでＢリンパ腫細胞の増殖を阻害し、腫瘍細胞の接着を破壊し、腫瘍細胞のアポトーシスを促進し、ＢＴＫを、Ｂ細胞に関連するがん、例えば非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンストロームマクログロブリン血症（ＷＭ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、中枢神経系白血病（ＣＮＳＬ）等の注目せずにはいられない標的にする。Abbvie/JNJのイブルチニブ、ＡＺのアカラブルチニブ、Beigeneのザヌブルチニブ及びGilead/Onoのチラブルチニブを含め、いくつかのＢＴＫ阻害剤が現在上市されており、多くのＢＴＫ阻害剤が臨床研究中である。

Ｂ細胞に関連するリンパ腫の治療に加え、ＢＴＫ阻害剤は、Ｂ細胞自己抗体及びサイトカインの産生も阻害できる。自己免疫疾患では、Ｂ細胞は、自身の抗原を提示し、Ｔ細胞の活性化を促進し、組織損傷を引き起こす炎症性因子を分泌し、同時に、Ｂ細胞を活性化して自己免疫応答を誘発する多数の抗体を産生する。Ｔ細胞及びＢ細胞は、互いに相互作用して、制御されていない自己免疫応答をもたらし、組織の病理学的損傷を悪化させる正のフィードバック調節チェーンを形成する。研究によれば、体内には、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）又はトランスフォーミング成長因子β１（ＴＧＦ－β１）の分泌及び他の機構を介して、免疫応答を負に調節し、免疫が仲介する炎症を阻害できる制御性Ｂ細胞が存在することが示されている。したがって、ＢＴＫは、例えば関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、天疱瘡等の自己免疫疾患の標的となる可能性がある。自己免疫疾患への適応に関し、ＢＴＫ阻害剤は依然として臨床研究中である。その中で、Sanofiのリルザブルチニブ及びMerck Seronoのエボブルチニブは、それぞれ、天疱瘡及び多発性硬化症の治療において、有効な結果を達成している。

市販されている及び研究中のＢＴＫ阻害剤の大部分は、ＢＴＫタンパク質の４８１位のシステイン残基と共有結合することでＢＴＫの活性を阻害する不可逆的阻害剤である。一部のＢ細胞リンパ腫の患者は、一定期間イブルチニブによる治療を受けた後に、ＢＴＫのＣ４８１の変異、例えばＣ４８１Ｓによってイブルチニブがタンパク質と共有結合する部位を失い、その結果、イブルチニブの活性が低下し、患者がイブルチニブ治療に対して耐性となった（Quinquenel, et. al Blood 2019, 134, 641-644）。

ＢＴＫとそのＣ４８１変異体の活性を有効に阻害し、不可逆的ＢＴＫ阻害剤に関連するＣ４８１変異によって生じる薬剤耐性を克服するＢＴＫ阻害剤が必要とされている。

発明の詳細な説明
定義
別途説明しない限り、この出願で使用する以下の用語は、以下の意味を有する。

「ＣＳＦ／血漿比（Ｋｐ，ＣＳＦ）」は、脳脊髄液（ＣＳＦ）中の化合物濃度と血漿中の化合物濃度の比率を指す。化合物が血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する能力は、げつ歯類のＣＳＦ及び血漿中の化合物の濃度を測定し、その比率（Ｋｐ，ＣＳＦ）を決定することによって評価される。

「異性体」は、分子式は共通するが、原子の結合位置や空間配置が異なる化合物を指す。原子の空間配置が異なる異性体を「立体異性体」と呼ぶ。立体異性体には、光学異性体、幾何異性体及び配座異性体が含まれる。

本発明の化合物は光学異性体として存在してもよい。光学異性体には、エナンチオマーとジアステレオマーが含まれる。エナンチオマーは、互いに鏡像であり、重ね合わせることができない２つの立体異性体の一方である。ラセミ混合物又はラセミ体は、キラル分子の等量の左旋性及び右旋性エナンチオマーを有するものである。ジアステレオマーは、互いに鏡像ではなく、互いに重ね合わせることができない立体異性体である。化合物が単一の異性体であり、絶対配置が決定されている場合、キラル炭素原子の周囲の置換基の配置により、「Ｒ」又は「Ｓ」異性体と呼ばれる。絶対配置が決定されていない場合、測定された旋光度に応じて、（＋）又は（－）異性体と呼ばれる。光学異性体を製造し分離する方法は、当業者に知られている。

本発明の化合物は、炭素－炭素二重結合、炭素－窒素二重結合、シクロアルキル基又はヘテロシクリル基の周囲の置換基の分布から生じる幾何異性体を有していてもよい。炭素－炭素二重結合又は炭素－窒素結合の周囲の置換基は、Ｚ又はＥの立体配置にあるといい、シクロアルキル又は複素環の周囲の置換基は、シス又はトランスの立体配置にあるという

本発明の化合物は、また、ケト－エノール互変異性などの互変異性であってもよい。

本発明は、任意の互変異性又は立体異性の形態及びその混合物を含み、化合物の命名法又は化学構造式で特定される互変異性又は立体異性の形態には限定されない。

「同位体」には、本発明の化合物中の原子の全ての安定な同位体が含まれる。同位体は、原子番号が同じで質量が異なる原子を含む。本発明の化合物に組み込むのに適した同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素及び塩素の同位体であり、^２Ｈ（Ｄ）、^３Ｈ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１８Ｏ、^１７Ｏ、^３１Ｐ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^１８Ｆ及び^３６Ｃｌが例示されるが、これらには限定されない。本発明の同位体標識化合物は、一般に、当業者に知られている従来技術によって、又は、非同位体標識試薬に代えて適切な同位体標識試薬を使用して、実施の形態に記載した方法と同様の方法によって製造できる。このような化合物には、生物学的活性の決定における標準物質及び試薬といった、さまざまな潜在的な用途がある。安定な同位体では、そのような化合物は、生物学的、薬理学的又は薬物動態的特性を有利に変化させる可能性がある。重水素^２Ｈ（Ｄ）は、本発明の好ましい同位体である。例えば、メチル、メチレン又はメチンの水素を、重水素で置換できる。

本発明の化合物は、プロドラッグの形態で投与できる。「プロドラッグ」は、in vivoの生理学的条件下で、例えば酸化、還元及び加水分解（それぞれ酵素の関与の有無にかかわらず生じる）によって、生物学的に活性な化合物に変換される誘導体を指す。プロドラッグの例は、アミノがアシル化、アルキル化又はリン酸化された本発明の化合物、例えばエイコサノイルアミノ、アラニルアミノ及びピバロイルオキシメチルアミノであり、ヒドロキシルがアシル化、アルキル化又はリン酸化されたか、ボレートに変換された本発明の化合物、例えばアセトキシ、パルミトイルオキシ、ピバロイルオキシ、スクシニルオキシ、フマロイルオキシ及びアラニルオキシであり、カルボニルがエステル化又はアミド化された本発明の化合物であり、チオールが、ペプチドのような薬物を標的及び／又は細胞のサイトゾルに選択的に送達する担体分子と、ジスルフィド架橋を形成する本発明の化合物である。プロドラッグは、本発明の化合物から周知の方法で製造できる。

「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物が１つ以上の酸性基又は塩基性基を含むという条件で、本発明の化合物と、無機アルカリ又は無機酸及び有機塩基又は有機酸を含む薬学的に許容される塩基又は酸から作られる塩を指す。酸性基を含む本発明の化合物は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩又はアンモニウム塩などの塩の形態で存在できる。例えば、そのような塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩若しくはアンモニア、又はエチルアミン、エタノールアミン、トリエタノールアミン若しくはアミノ酸の塩などの有機アミン塩を含む。塩基性基を含む本発明の化合物は、無機酸塩又は有機酸塩などの塩の形態で存在できる。適切な酸の例には、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、シュウ酸、酢酸、酒石酸、乳酸、サリチル酸、安息香酸、ギ酸、プロパン酸、ピバル酸、マロン酸、コハク酸、ピメリン酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、スルファミン酸、フェニルプロピオン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、イソニコチン酸、クエン酸、アジピン酸及び当業者に知られている他の酸が含まれる。本発明の化合物が分子内に酸性基と塩基性基を含む場合、本発明は、塩の形態に加えて分子内塩を更に含む。各塩は、当業者に知られている従来の方法で、例えば、溶媒又は分散剤中で本発明の化合物と有機若しくは無機の酸若しくは塩基とを混合することで、又は、別の塩との陰イオン交換若しくは陽イオン交換することで得ることができる。

「医薬組成物」は、本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩、安定な同位体誘導体、異性体、プロドラッグ及びそれらの混合物、並びに、薬学的に許容される担体及び添加物といった他の成分の１つ以上を含む組成物を指す。

「がん、リンパ腫又は白血病」は、Ｂ細胞悪性腫瘍、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例．ＡＢＣ－ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫、ろ胞性リンパ腫、ワルデンストロームマクログロブリン血症、辺縁帯リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、慢性リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、形質細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、種々の固形腫瘍（例．黒色腫、骨がん、脳のがん、結腸がん、肝がん、皮膚がん、腎がん、肺がん、筋肉のがん、膀胱がん、消化管／胃腸がん、乳がん、卵巣がん、頭頚部がん、前立腺がん）等を含むがこれらに限定されるものではない。

「自己免疫又は炎症性疾患」は、関節炎、多発性硬化症、骨粗しょう症、炎症性腸疾患、大腸炎、クローン病、狼瘡、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ループス腎炎、シェーグレン症候群、ＩｇＧ４関連疾患、特発性血小板減少性紫斑病、免疫性血小板減少症、ライト症候群、乾癬、ベーチェット病、喘息、天疱瘡、糖尿病、重症筋無力症、ギランバレー症候群、バセドウ病、橋本甲状腺炎、血管炎、自己免疫性血管炎、多発性血管炎を伴う肉芽腫、自己免疫性肝炎等を含むがこれらに限定されるものではない。

「治療有効量」は、ＢＴＫとそのＣ４８１変異体の活性を有効に阻害し、及び／又はＢＴＫとそのＣ４８１変異体が仲介する疾患を治療若しくは予防できる本発明の化合物の量を指す。

「患者」は、哺乳動物、好ましくはヒトを指す。

本発明は、可逆的ＢＴＫ阻害剤としての２種の架橋二環式化合物Ａ及びＢ（以下に示す構造を有する）に関し、これらの化合物は、ＢＴＫとそのＣ４８１変異体の活性を有効に阻害し、不可逆的ＢＴＫ阻害剤に関連するＣ４８１変異によって生じる薬剤耐性を克服する。

本発明は、化合物Ａ若しくはＢ、又はその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、異性体及びそれらの混合物を対象とする。

化合物Ａ及びＢは、ＢＴＫとそのＣ４８１変異体の活性を有効に阻害し、ＩＣ_５０が１０ｎＭ未満である。化合物Ａ及びＢは非脳透過剤であり、Ｋｐ，ＣＳＦが０．１未満である。

本発明は、また、化合物Ａ若しくはＢ、又はその薬学的に許容される塩、安定な同位体誘導体、異性体及びプロドラッグ、並びに、１つ以上の薬学的に許容される担体又は添加物を含む医薬組成物に関する。

本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、安定な同位体誘導体、異性体、プロドラッグ及びそれらの混合物と、少なくとも１種の追加の治療剤とを含む医薬組成物に関し、前記治療薬は、低分子化学療法薬（例．抗炎症性ステロイド薬、キナーゼ標的化薬、アポトーシス阻害剤、炎症モジュレーター、細胞毒性薬、ＤＮＡ損傷関連薬）又は高分子免疫及び／若しくは炎症モジュレーター（例．ＣＤ２０抗体、ＣＤ１９抗体、ＰＤ抗体）であってもよい。

化合物Ａ又はＢ及び別の治療薬は、同じ医薬組成物中に存在してもよく、又は別々の医薬組成物中に存在してもよい。式（Ｉ）で表される化合物及び別の薬剤は、同じ又は異なる形態で、同時に又は連続して投与してもよい。

本発明は、ＢＴＫ又はそのＣ４８１変異体が仲介する疾患の治療又は予防方法を提供する。該方法は、必要とする患者に、治療有効量の化合物Ａ若しくはＢ又はその薬学的に許容される塩、安定な同位体誘導体、異性体、プロドラッグ及びそれらの混合物を投与することを含む。疾患には、例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例．ＡＢＣ－ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫、ろ胞性リンパ腫、ワルデンストロームマクログロブリン血症、辺縁帯リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、慢性リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、形質細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、種々の固形腫瘍（例．肺がん、前立腺がん、頭頚部がん、乳がん、卵巣がん、子宮がん、膵がん、結腸がん、直腸がん、胃がん、食道がん、脳のがん、肝臓がん、腎臓がん、皮膚のがん、筋肉のがん、上皮がん、膀胱がん、神経芽腫、黒色腫、骨のがん、黒色腫）、関節炎、多発性硬化症、骨粗しよう症、炎症性腸疾患、大腸炎、クローン病、狼瘡、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ループス腎炎、シェーグレン症候群、ＩｇＧ４関連疾患、特発性血小板減少性紫斑病、免疫性血小板減少症、ライト症候群、乾癬、ベーチェット病、喘息、天疱瘡、糖尿病、重症筋無力症、ギランバレー症候群、グレーブス病、橋本甲状腺炎、血管炎、自己免疫性血管炎、多発性血管炎を伴う肉芽腫、自己免疫性肝炎といった、がん、リンパ腫、白血病、自己免疫疾患又は炎症疾患、とりわけ、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例．ＡＢＣ－ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫、ろ胞性リンパ腫、ワルデンストロームマクログロブリン血症、辺縁帯リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、慢性リンパ球性リンパ腫、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、ループス腎炎、乾燥症候群、ＩｇＧ４関連疾患、特発性血小板減少性紫斑病、免疫性血小板減少症、天疱瘡、蕁麻疹等が含まれるが、これらには限定されない。

本発明では、医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、液剤、凍結乾燥調製物及び注射剤を含むがこれらには限定されない剤形であってもよい。

本発明の医薬製剤は、所定の量の活性成分を含む投与単位の形態で投与してもよい。このような単位は、治療する疾患、投与方法、並びに患者の年齢、体重及び状態に応じて、１ｍｇ～１ｇ、好ましくは５ｍｇ～７００ｍｇ、特に好ましくは１０ｍｇ～５００ｍｇの本発明の化合物を含んでいてもよい。医薬製剤は、製薬分野で周知の方法により、例えば、活性成分を１種以上の添加物又は１種以上のアジュバントとともに製剤化することによって製造してもよい

本発明の医薬製剤は、任意の適切な方法、例えば経口（経口又は舌下を含む）又は非経口（皮下、筋肉内、静脈内又は皮内を含む）による投与に好適である。

本発明は、化合物Ａ及びＢの製造方法も提供する。本発明の化合物の製造は、以下の代表的な方法及び実施例で行ってもよいが、これらの方法及び例は、本発明の範囲を如何なる形でも限定するものと考えるべきではない。本発明の化合物は、当業者に公知の合成技術により、又は当技術分野で公知の方法と本発明の方法との組合せにより、合成してもよい。反応の各工程で得られた生成物は、抽出、ろ過、蒸留、結晶化及びクロマトグラフィー分離を含むがこれらには限定されない、当技術分野で公知の分離技術によって単離する。合成に使用する出発物質及び試薬は、文献（例．SciFinder）に基づいて従来の方式で製造してもよく、又は購入してもよい。

本発明における出発材料は、当技術分野における公知の方法で合成するか、又はABCR GmbH & Co. KG、Acros Organics、Aldrich Chemical Company、Accela ChemBio Inc.、Beijing Ouhe等から購入した。

化合物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）又は質量分析（ＭＳ）によって決定した。ＮＭＲ測定は、Bruker ASCEND-400 NMR分光計を使用した。溶媒として、重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ－ｄ_６）、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ_３）又は重水素化メタノール（ＣＤ_３ＯＤ）を使用した。内部標準物質はテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を用い、化学シフトを１０^－６（ｐｐｍ）の単位で示した。ＭＳ測定は、Agilent SQD(ＥＳＩ）質量分析計（Agilent6120）を使用した。

ＨＰＬＣ測定は、Agilent 1260 DAD高圧液体クロマトグラフィー（カラム：Poroshell120 EC-C18、５０×３．０ｍｍ、２．７μｍ）又はWaters Arc高圧液体クロマトグラフィー（カラム：Sunfire C18、１５０×４．６ｍｍ、５μｍ）を使用した。

薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、厚さ０．１５～０．２ｍｍのQingdao Haiyang Chemical Co.,Ltd.製ＧＦ２５４シリカゲルプレートを使用し、薄層クロマトグラフィーによる生成物の分離／精製は、厚さ０．４～０．５ｍｍのシリカプレートを使用した。

カラムクロマトグラフィーは、通常、Qingdao Haiyang Chemical Co.,Ltd.製の２００～３００メッシュシリカゲルを使用した。

実施例において別に説明しない限り、反応は、室温（２０～３０℃）、容量が約１Ｌのバルーンを用いるアルゴン又は窒素雰囲気中で実行した。

水素化は、真空にした後に水素を充填し、反応容器に取り付けた容量が約１Ｌのバルーンを用いる水素雰囲気中で、繰り返し３回実施した。

反応は、Agilent LCMS (1260/6120)又は薄層クロマトグラフィーを使用して監視した。カラムクロマトグラフィー及びＴＬＣの溶出溶媒系は、ａ）ジクロロメタン／メタノール、ｂ）石油エーテル／酢酸エチル、又は記載した他の系を使用した。溶媒の比は、化合物の極性に従って調整し、必要に応じて、少量のＴＥＡ又は酸性若しくはアルカリ性試薬を添加して更に調整した。化合物の精製は、ＭＳ検出器（ＳＱＤ２）を備えたWatersのＭＳ誘導自動調製システム（分取ＨＰＬＣという）を使用して行い、適切なアセトニトリル／水（ＴＦＡ又はギ酸を０．１％含有）又はアセトニトリル／水（２５～２８％水酸化アンモニウムを０．０５％含有）の勾配（XBridge-C18、１９×１５０ｍｍ、５μｍ）を用い、流速２０ｍＬ／分で溶出させた。一部の化合物は、分取ＨＰＬＣによる精製後、得られた画分に１Ｎ塩酸を添加し、続いて、減圧下で乾燥することによって、塩酸塩として製造した。

ＤＭＦは、N,N-ジメチルホルムアミドを指す。
ＤＩＰＥＡは、N,N-ジイソプロピルエチルアミンを指す。
ＤＢＵは、1,8-ジアザビシクロウンデカ-7-エンを指す。
ＮＩＳは、N-ヨードスクシンイミドを指す。
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２は、[1,1’-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウムを指す。
ＨＡＴＵは、2-(7-アザベンゾトリアゾール)-N,N,N’,N’-テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェートを指す。

実施例１ 4-(4-アミノ-5-(4-((5-フルオロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)フェニル)イミダゾ[5,1-f][1,2,4]トリアジン-7-イル)ビシクロ[2.2.2]オクタン-1-カルボン酸（化合物Ａ）の製造

工程１ (4-((5-フルオロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)フェニル)ボロン酸（１ｂ）
０℃のジクロロメタン（１０ｍＬ）中の5-フルオロ-2-メトキシ安息香酸１ａ（３４０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（０．０５ｍＬ）の溶液に、塩化オキサリル（２７９ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温に徐々に加温し、１時間撹拌し、次いで、再度０℃に冷却し、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の(4-(アミノメチル)フェニル)ボロン酸塩酸塩（３７４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（５１６ｍｇ、４ｍｍｏｌ）の懸濁液を添加した。室温で１５時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去した。残留物を酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解し、飽和塩化アンモニウム（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して表題化合物１ｂを得た（４６０ｍｇ、７６％）。
MS m/z (ESI): 304 [M+1]

工程２ 1-(2,5-ジオキソピロリジン-1-イル)4-メチルビシクロ[2.2.2]オクタン-1,4-ジカルボキシレート（１ｄ）
０℃のＴＨＦ（５０ｍＬ）中の(メトキシカルボニル)ビシクロ[2.2.2]オクタン-1-カルボン酸１ｃ（８５０ｍｇ、４ｍｍｏｌ）及び1-ヒドロキシ-ピロリジン-2,5-ジオン（５５２ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＣ（１．０７ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を添加した。室温に加温し、１５時間撹拌した後、混合物を０℃に冷却し、ろ過した。ろ液を濃縮乾固して表題化合物１ｄを得た（１．４ｇ、粗生成物）。
MS m/z (ESI): 310 [M+H]⁺

工程３ 4-(((5-オキソ-4,5-ジヒドロ-1,2,4-トリアジン-6-イル)メチル)カルバモイル)ビシクロ[2.2.2]オクタン-1-カルボン酸メチル（１ｅ）
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の6-アミノメチル-4H-[1,2,4]トリアジン-5-オン（２５２ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．０３ｇ、８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（５ｍＬ）中の１ｄ（１．４ｇ、粗生成物）の溶液を滴下した。混合物を３時間撹拌し、次いで、濃縮乾固した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝５０／１～１０／１）で精製して表題化合物１ｅを得た（１５０ｍｇ、２工程で２３％）。
MS m/z (ESI): 321 [M+H]⁺

工程４ 4-(4-オキソ-3,4-ジヒドロイミダゾ[5,1-f][1,2,4]トリアジン-7-イル)ビシクロ[2.2.2]オクタン-1-カルボン酸メチル（１ｆ）
ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中の１ｅ（１５０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＯＣｌ_３（２ｍＬ）を添加した。混合物を８０℃に加熱し、５時間撹拌した。次いで、混合物を濃縮乾固して表題化合物１ｆを得た（１５０ｍｇ、１００％）。
MS m/z (ESI): 303 [M+H]⁺

工程５ 4-(5-ヨード-4-オキソ-3,4-ジヒドロイミダゾ[5,1-f][1,2,4]トリアジン-7-イル)ビシクロ[2.2.2]オクタン-1-カルボン酸メチル（１ｇ）。
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の１ｆ（１５０ｍｇ、粗生成物、０．４７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＩＳ（５２９ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を５５℃に加熱し、５時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物を分取ＨＰＬＣで精製して表題化合物１ｇを得た（８０ｍｇ、４０％）。
MS m/z (ESI): 429 [M+H]⁺

工程６ 4-(4-アミノ-5-ヨードイミダゾ[5,1-f][1,2,4]トリアジン-7-イル)ビシクロ[2.2.2]オクタン-1-カルボン酸メチル（１ｈ）
ピリジン（２ｍＬ）中の1H-[1,2,4]トリアゾール（１３１ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＯＣｌ_３（８６ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１０分間撹拌し、ピリジン（２ｍＬ）中の１ｇ（８０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。更に１時間撹拌した後、混合物にＮＨ_３の溶液（イソプロパノール中２Ｍ、１０ｍＬ）を添加し、０．５時間撹拌した。次いで、混合物を濃縮乾固し、残留物を分取ＨＰＬＣで精製して表題化合物１ｈを得た（６０ｍｇ、７４％）。
MS m/z (ESI): 428 [M+H]⁺

工程７ 4-(4-アミノ-5-(4-((5-フルオロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)フェニル)イミダゾ[5,1-f][1,2,4]トリアジン-7-イル)ビシクロ[2.2.2]オクタン-1-カルボン酸メチル（１ｉ）。

１ｈ（６０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、１ｂ（６４ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、Ｋ_２ＣＯ_３（３９ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２（１１ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）、1,4-ジオキサン（４ｍＬ）及び水（１ｍＬ）の混合物を窒素雰囲気中で１００℃に加熱し、２時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物を濃縮乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２０：１～１：２）で精製して表題化合物１ｉを得た（６０ｍｇ、７７％）。
MS m/z (ESI): 559 [M+H]⁺.
¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.80 (s, 1H), 7.64 - 7.57 (m, 3H), 7.52 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.25 (ddd, J = 9.1, 7.6, 3.3 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 9.1, 4.2 Hz, 1H), 4.69 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 2.26 (dd, J = 9.7, 6.2 Hz, 6H), 1.93 (dd, J = 9.7, 6.3 Hz, 6H).

工程８ 4-(4-アミノ-5-(4-((5-フルオロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)フェニル)イミダゾ[5,1-f][1,2,4]トリアジン-7-イル)ビシクロ[2.2.2]オクタン-1-カルボン酸（Ａ）
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の１ｉ（５５ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム溶液（１Ｎ、４ｍＬ）を添加した。混合物を４０℃に加熱し、４８時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物に氷酢酸（１ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣで精製して表題化合物Ａを得た（４０ｍｇ、固体、７５％）。
MS m/z (ESI): 545 [M+1]
¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.80 (s, 1H), 7.64 - 7.56 (m, 3H), 7.53 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.28 - 7.22 (m, 1H), 7.17 (dd, J = 9.1, 4.2 Hz, 1H), 4.69 (s, 2H), 3.96 (d, J = 7.6 Hz, 3H), 2.30 - 2.22 (m, 6H), 1.98 - 1.90 (m, 6H).

実施例２ N-(4-(4-アミノ-7-(4-(モルホリン-4-カルボニル)ビシクロ[2.2.2]オクタン-1-イル)イミダゾ[5,1-f][1,2,4]トリアジン-5-イル)ベンジル)-5-フルオロ-2-メトキシベンズアミド（化合物Ｂ）の製造

ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＡ（７５ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）、モルホリン（１２ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（５３ｍｇ、０．４０９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（５８ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を５分間撹拌し、次いで、分取ＨＰＬＣで精製して表題化合物Ｂを得た（４０ｍｇ、固体、４８％）。
MS m/z (ESI): 614.2 [M+H]+
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.84 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.58 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.52 (dd, J = 9.2, 3.3 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.39 - 7.29 (m, 1H), 7.19 (dd, J = 9.1, 4.3 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.57 (d, J = 9.6 Hz, 8H), 2.21 - 2.09 (m, 6H), 1.97 - 1.84 (m, 6H).

実施例３ＢＴＫ活性阻害アッセイ
in vitroキナーゼアッセイにより、本発明化合物のＢＴＫ活性に対する効果を評価した（表１）。

実験方法を以下に要約する：
ホモジニアス均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）キナーゼ検出キット（Cisbio、カタログ番号62TK0PEC）を用い、ＢＴＫの酵素活性を、キナーゼ反応における基質のリン酸化のレベルを検出することで決定する。反応バッファーは、キット中の酵素反応バッファー（１×）、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、１ｍＭのＤＴＴ、１０ｎＭのＳＥＢ及び０．０１％のTween（登録商標）20を含む；キナーゼ反応溶液は、反応バッファーで０．２ｎｇ／μＬに希釈したヒト由来組換えＢＴＫタンパク質（Carna Biosciences、カタログ番号08-180）を含む；基質反応溶液は、反応バッファーで０．５μＭに希釈したビオチン標識チロシンキナーゼ基質及び４０μＭのＡＴＰを含む；検出バッファーは、反応バッファーで０．０５ｎｇ／μＬに希釈したＥｕ^３＋標識ケージ抗体、及び３１．２５ｎＭに希釈したストレプトアビジン標識ＸＬ６６５抗体を含む；試験化合物は、ＤＭＳＯに溶解して１００μＭに希釈し、続いて、ＤＭＳＯで最低濃度６．１ｎＭまで４段階希釈し、反応バッファーで最終的に４０倍希釈する。化合物のＩＣ_５０値が非常に低い場合、化合物の初期濃度を小さくする。

４μＬの試験化合物溶液及び２μＬのキナーゼ反応溶液を３８４ウェル検出プレート（Corning, catalog number 3674）に加え、十分に混合し、室温で１５分間インキュベートする；４μＬの基質反応溶液を加え、５０分間インキュベートする；１０μＬの検出バッファーを加え、十分に混合し、６０分間放置する；Envisionプレートリーダー（Perkin Elmer）を使用して６２０ｎｍ及び６６５ｎｍにおけるシグナルを検出する。シグナルの値（６６５ｎｍの吸光度／６２０ｎｍの吸光度）は、基質のリン酸化の程度と正に相関しており、それによって、ＢＴＫのキナーゼ活性を検出する。この実験では、ＢＴＫを含まない群が陰性対照（１００％阻害）であり、ＢＴＫを含むが化合物を含まない群が陽性対照（０％阻害）である。阻害曲線をプロットし、試験化合物の対応するＩＣ_５０値を、XLfitソフトウェア（ID Business Solutions Ltd., UK）で計算する。

実施例４ＢＴＫＣ４８１Ｓ活性阻害アッセイ
in vitroキナーゼアッセイにより、本発明化合物のＢＴＫＣ４８１Ｓ活性に対する効果を評価した（表１）。

実験方法を以下に要約する：
ホモジニアス時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）キナーゼ検出キット（Cisbio、カタログ番号62TK0PEC）を用い、ＢＴＫＣ４８１Ｓの酵素活性を、キナーゼ反応における基質のリン酸化のレベルを検出することで決定する。反応バッファーは、キット中の酵素反応バッファー（１×）、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、１ｍＭのＤＴＴ、１０ｎＭのＳＥＢ及び０．０１％のTween（登録商標）20を含有する；キナーゼ反応溶液は、反応バッファーで１．５ｎｇ／μＬに希釈したヒト組換えＢＴＫＣ４８１Ｓタンパク質（社内で精製）を含む；基質反応溶液は、反応バッファーで０．５μＭに希釈したビオチン標識チロシンキナーゼ基質及び３５μＭのＡＴＰを含む；検出バッファーは、反応バッファーで０．０５ｎｇ／μＬに希釈したＥｕ^３＋標識ケージ抗体、及び３１．２５ｎＭに希釈したストレプトアビジン標識ＸＬ６６５抗体を含む；試験化合物は、ＤＭＳＯで溶解して１００μＭに希釈し、続いて、ＤＭＳＯで最低濃度６．１ｎＭまで４段階希釈し、反応バッファーで最終的に４０倍希釈する。化合物のＩＣ_５０値が非常に低い場合、化合物の初期濃度を小さくする。

４μＬの試験化合物溶液及び２μＬのキナーゼ反応溶液を３８４ウェル検出プレート（Corning, catalog number 3674）に加え、十分に混合し、室温で１５分間インキュベートする；４μＬの基質反応溶液を加え、５０分間インキュベートする；１０μＬの検出バッファーを加え、十分に混合し、６０分間放置する；Envisionプレートリーダー（Perkin Elmer）を使用して６２０ｎｍ及び６６５ｎｍにおけるシグナルを検出する。シグナルの値（６６５ｎｍの吸光度／６２０ｎｍの吸光度）は、基質のリン酸化の程度と正に相関しており、それによって、ＢＴＫＣ４８１Ｓのキナーゼ活性を検出する。この実験では、ＢＴＫを含まない群が陰性対照（１００％阻害）であり、ＢＴＫＣ４８１Ｓを含むが化合物を含まない群が陽性対照（０％阻害）である。阻害曲線をプロットし、試験化合物の対応するＩＣ_５０値を、XLfitソフトウェア（ID Business Solutions Ltd., UK）で計算する。

表１は、化合物Ａ及びＢのＢＴＫのＩＣ_５０及びＢＴＫＣ４８１ＳのＩＣ_５０を示す。

実施例５脳透過活性試験
０．５ｍｇ／ｍＬの、N,N-ジメチルアセトアミドを５％、solutolを１０％及び生理食塩水を８５％を有する溶液中の化合物Ａ又はＢを、１２匹の雄のSprague Dawleyラットに、用量５ｍｇ／ｋｇで経口投与した。投与の１、２、４及び８時間後に、血漿、脳組織ホモジネート（Ｋｐ，脳を測定するため）及び脳脊髄液（Ｋｐ，ＣＳＦを測定するため）の試料を、（各時点で３匹の動物から）収集した。

API-4500質量分析計のＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより、血漿、脳組織ホモジネート及びＣＳＦ中の化合物の濃度を定量した。分析の定量限界（ＬＯＱ）は１ｎｇ／ｍＬであった。薬物動態学的（ＰＫ）パラメータを、WinNonlinを用いて非コンパートメント法で計算した。Ｋｐ，脳及びＫｐ，ＣＳＦを、それぞれ、ＡＵＣ脳／ＡＵＣ血漿及びＡＵＣＣＳＦ／ＡＵＣ血漿として計算した。結果を表２に示し、これは、化合物ＡとＢの両者が非脳透過剤であることを示す。

本発明、並びにそれを製造し、使用する様式及び方法が、本発明が関係する技術分野の当業者がそれを製造し、使用できるように、完全、明瞭、簡潔かつ正確な用語でこの明細書に記載されている。この明細書は本発明の好ましい態様を記載したもので、特許請求の範囲に記載した本発明の範囲から逸脱することなく、それに修正を加えてもよいことが理解される。発明とみなされる主題を特に指摘し、明確に請求するために、以下の特許請求の範囲をもって本明細書の結びとする。

Claims

化合物Ａ若しくはＢ、又はその薬学的に許容される塩、安定な同位体誘導体若しくは立体異性体。
化合物Ａ若しくはＢ、又はその薬学的に許容される塩、安定な同位体誘導体若しくは立体異性体と、その薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
ＢＴＫ又はそのＣ４８１変異体が仲介する疾患を予防又は治療する医薬組成物であって、治療有効量の化合物Ａ若しくはＢ、又はその薬学的に許容される塩、安定な同位体誘導体若しくは立体異性体を含み、前記疾患が、がん、リンパ腫、白血病、自己免疫疾患及び炎症性疾患からなる群から選択される、医薬組成物。
前記疾患が、Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ワルデンストロームマクログロブリン血症、辺縁帯リンパ腫、ろ胞性リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、ループス腎炎、シェーグレン症候群、ＩｇＧ４関連疾患、特発性血小板減少性紫斑病、免疫性血小板減少症又は天疱瘡である、請求項３に記載の医薬組成物。