JP7698635B2 - 抗幹細胞因子抗体及びその使用方法 - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月１６日に出願された米国仮出願第６２／９００，９２７号の優先権の利益を主張し、その内容全体が参照により本明細書に援用される。

分野
本発明は、幹細胞因子（ＳＣＦ）及びその特定の部位に結合する抗体及びその抗原結合フラグメント、ならびにこのような抗体及び抗原結合フラグメントを使用する方法に関する。

電子的に提出するテキストファイルについての説明
本明細書と共に電子的に提出するテキストファイル、すなわち配列表のコンピューター可読フォーマットコピー（ファイル名：ＯＰＳＬ＿００１＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５；記録日：２０２０年０９月１６日；ファイルサイズ：５８ｋｂ）の内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。

炎症性疾患は、世界的に罹患率及び死亡率の主要な原因となっている。いくつかのタイプの慢性炎症は線維症につながり得る。この線維症とは、修復性または反応性のプロセスとしての、器官または組織における過剰な線維性結合組織の形成または発生であり、器官または組織の正常な構成要素としての線維性組織の形成とは異なるものである。慢性炎症及び線維症は、ほぼ全ての組織や器官系に影響を及ぼし、線維性組織リモデリングは、がん転移に影響を及ぼし、移植患者の慢性移植片拒絶を加速する恐れがある。

幹細胞因子（ＳＣＦ）及びその受容体ｃ－Ｋｉｔは、慢性炎症の持続及び線維性疾患における重要な因子である（Ｅｌ－Ｋｏｒａｉｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．６０：１６７（２００１）；Ｐｏｗｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８９：Ｇ２（２００５）；Ｅｌ Ｋｏｓｓｉ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓ． ４１：７８５（２００３）；Ｐｏｗｅｌｌ， ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７７：Ｃ１８３（１９９９）Ｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．２０１３ Ｊｕｎ；２３０（２）：２０５－１４．；Ｂｅｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．２００６ Ｊｕｎ；８６（６）：５５７－６５；Ｒａｓｋｙ ｅｔ ａｌ Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０２０ Ｊａｎ １；３１８（１）：Ｌ２００－Ｌ２１１）。ｃ－Ｋｉｔは多くの細胞タイプに存在するＩＩＩ型受容体－チロシンキナーゼである（Ｏｒｒ－Ｕｒｔｒｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １０９：９１１（１９９０））。免疫細胞、例えば、マスト細胞、好酸球、ならびに自然リンパ球２及び３（ＩＬＣ２及びＩＬＣ３）は全てｃ－Ｋｉｔ＋細胞であり、関与する疾患及び器官によっては慢性炎症プロセスを駆動する可能性がある。炎症応答が開始すると、ＳＣＦを含む様々なメディエーターがｃ－Ｋｉｔ＋免疫細胞を活性化し、その結果、線維芽細胞を活性化筋線維芽細胞に変化させるサイトカインが生成される。筋線維芽細胞は、細胞外マトリックスタンパク質、コラーゲン、及びフィブロネクチンを分泌し、組織の線維化をもたらす。活性化筋線維芽細胞、活性化上皮、内皮、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、単球、及び他の細胞も細胞表面にＳＣＦを発現し、ｃ－Ｋｉｔ＋免疫細胞をより活性化した結果、サイトカイン放出が増加し、炎症が永続する。
当技術分野では、炎症性疾患のためのより効率的かつより特異的な治療が必要とされている。本開示は、このようなニーズ及び他のニーズに対処するものである。

Ｅｌ－Ｋｏｒａｉｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．６０：１６７（２００１） Ｐｏｗｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８９：Ｇ２（２００５） Ｅｌ Ｋｏｓｓｉ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓ． ４１：７８５（２００３） Ｐｏｗｅｌｌ， ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７７：Ｃ１８３（１９９９） Ｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．２０１３ Ｊｕｎ；２３０（２）：２０５－１４． Ｂｅｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．２００６ Ｊｕｎ；８６（６）：５５７－６５ Ｒａｓｋｙ ｅｔ ａｌ Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０２０ Ｊａｎ １；３１８（１）：Ｌ２００－Ｌ２１１

１つの態様において、本開示は、幹細胞因子（ＳＣＦ）に特異的に結合する抗体及びそのフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、抗体及びそのフラグメントは、ＳＣＦアイソフォームＳＣＦ２４８に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体及びそのフラグメントは重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１、２、及び３を含む。いくつかの実施形態において、抗体及びそのフラグメントは軽鎖ＣＤＲを含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４、５、及び６を含む。いくつかの実施形態において、抗体及びそのフラグメントは、配列番号１、３７、及び３をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、抗体及びそのフラグメントは、配列番号７、８、９、１０、１１、及び１２からなる群より選択される配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体及びそのフラグメントは、配列番号１３、１４、１５、１６、及び１７からなる群より選択される配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体及びそのフラグメントは、配列番号７、８、９、１０、１１、及び１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１３、１４、１５、１６、及び１７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、配列番号７に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む。いくつかの実施形態において、配列番号８に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、配列番号９に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む。いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、配列番号１０に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む。いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、配列番号１１に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む。いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、配列番号１２に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む。

いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントはヒト化されている。いくつかの実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＩｇＧ１ドメインまたはヒトＩｇＧ４ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は抗原結合フラグメントであり、当該フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）から選択される。

いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、ＳＣＦ（例えば、ＳＣＦ２４８）とｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体はＳＣＦ２４８に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体はＳＣＦ２２０に結合しない。いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＣＦの内在化を引き起こすことにより、ＳＣＦ２４８とｃ－ｋｉｔとの相互作用を妨げて、それが細胞表面上で利用できないようにする。

１つの態様において、本開示は、本明細書で提供する抗体またはそのフラグメントを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む。

いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書で提供する抗体またはそのフラグメントをコードする単離された核酸分子を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、抗体またはそのフラグメントをコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。さらなる特定の実施形態において、本開示は、発現ベクターを含む組換え型宿主細胞を提供する。

１つの態様において、本開示は、幹細胞因子アイソフォーム２４８（ＳＣＦ２４８）に特異的に結合する抗体を作製するための方法であって、配列番号３０（ＡＳＳＬＲＮＤＳＳＳＳＮＲＫＡＫＮＰＰＧＤ）またはそのフラグメントを含むペプチドで宿主動物を免疫することと、免疫された宿主動物から抗体を得ることとを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、宿主動物はヒトではない。いくつかの実施形態において、配列番号３０のフラグメントは、配列番号３０の少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または２０個の連続したアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、配列番号３０のフラグメントは、配列番号３０の５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、または２０個の連続したアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、配列番号３０のフラグメントのＮ末端アミノ酸は、配列番号３０のＮ末端の１位におけるアラニンである。いくつかの実施形態において、本方法は、配列番号３０からなるペプチドで宿主動物を免疫することを含む。いくつかの実施形態において、免疫化された宿主動物からの抗体は、宿主動物から単離された免疫細胞から得られる。いくつかの実施形態において、本方法はさらに、免疫細胞を用いてハイブリドーマを生成することを含む。したがって、いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書に記載のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを提供する。

１つの態様において、本開示は、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントであって、配列番号３３の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、または少なくとも１３個の連続したアミノ酸を含むエピトープに結合し、当該抗体が、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの相互作用を阻害する、抗体またはそのフラグメントを提供する。さらなる実施形態において、エピトープは、配列番号３３または配列番号３６を含む。またさらなる実施形態において、エピトープは、配列番号３３または配列番号３６からなる。

１つの態様において、本開示は、ＳＣＦとｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を阻害するための組成物及び方法を提供する。ｃ－ｋｉｔは、免疫細胞、造血幹細胞、及びいくつかの構造細胞上に発現する。ｃ－ｋｉｔのリガンドであるＳＣＦ２４８は、筋線維芽細胞、活性化上皮、内皮、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、単球上などで上方調節される。いくつかの実施形態において、組成物及び方法は、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を特異的に阻害する。例えば、いくつかの実施形態において、組成物及び方法は、筋線維芽細胞上のＳＣＦ２４８と免疫細胞上のｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を特異的に阻害する。別の例として、いくつかの実施形態において、本明細書で提供する組成物及び方法は、筋線維芽細胞、活性化上皮、内皮、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、及び／または単球上のＳＣＦ２４８と、免疫細胞及び／または構造細胞上のｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を特異的に阻害する。いくつかの実施形態において、本方法は、筋線維芽細胞上のＳＣＦ２４８を、本明細書で提供する抗体またはそのフラグメントに接触させることを含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体またはそのフラグメントは、ＳＣＦ２４８がｃ－Ｋｉｔに結合するのを遮断する。いくつかの実施形態において、遮断は、立体障害を介した遮断である。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体またはそのフラグメントは、ＳＣＦ２４８を内在化する。

いくつかの実施形態において、本開示は、それを必要とする対象の炎症を阻害するための方法であって、当該対象に、本明細書で提供する抗体またはそのフラグメントを投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、それを必要とする対象の炎症性疾患を阻害するための方法であって、当該対象に、本明細書で提供する抗体またはそのフラグメントを投与することを含む、方法を提供する。さらなる実施形態において、炎症性疾患は慢性炎症性疾患である。いくつかの実施形態において、本開示は、それを必要とする対象の炎症及び／または慢性炎症性疾患を治療するための方法であって、当該対象に、本明細書で提供する抗体またはそのフラグメントを投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本開示は、それを必要とする対象の線維症を阻害するための方法であって、当該対象に、本明細書で提供する抗体またはそのフラグメントを投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、それを必要とする対象の線維性疾患を治療するための方法であって、当該対象に、本明細書で提供する抗体またはそのフラグメントを投与することを含む、方法を提供する。諸実施形態において、本方法はさらに、１つ以上の追加の療法及び／または治療剤を投与することを含む。

いくつかの実施形態において、炎症性疾患または線維性疾患は、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、水疱性類天疱瘡、強皮症、全身性硬化症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、原発性硬化性胆管炎、肝硬変、肺線維症（例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、強皮症肺線維症）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、嚢胞性線維症、気管支周囲線維症、過敏性肺炎、喘息、ブレオマイシン肺、心内膜心筋線維症、線維筋痛症、好酸球性食道炎、放射線線維症、関節リウマチ、及び炎症性腸疾患からなる群より選択される。

組織傷害／炎症性疾患プロセスの概略を示している。 本開示の抗ＳＣＦ２４８抗体である５Ｈ１０の例示的な機構を示している。５Ｈ１０抗体は、図面内では「ＯｐＳＣＦ」と称されている。 ＳＣＦのアイソフォームであるＳＣＦ２２０及びＳＣＦ２４８、ならびに単量体の切断された細胞外ドメインであるＳＣＦ１６５を示している。ＳＣＦ１６５は、ＳＣＦ２４８がＥｘｏｎ６領域内の切断部位で切断されると放出される。 マウス５Ｈ１０抗体と、ＳＣＦを発現しない対照細胞（左パネル）、ＳＣＦ２２０を発現するがＳＣＦ２４８を発現しない細胞（中パネル）、及びＳＣＦ２４８を発現するがＳＣＦ２２０を発現しない細胞（右パネル）との結合を示すヒストグラムのセットである。 マウス５Ｈ１０抗体と、１６５アミノ酸で切断されたＳＣＦ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）及び完全な１９４アミノ酸のＳＣＦ ＥＣＤとの結合を示している。 培養したヒトＩＰＦ筋線維芽細胞をｐＨｒｏｄｏ ｒｅｄ標識２Ｇ８、５Ｈ１０、または対照ＩｇＧ抗体に接触させた後にフローサイトメトリーで測定した平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示している。 ５Ｈ１０抗体またはＩｇＧ対照の存在下で好酸球をＳＣＦ２４８発現細胞に接触させた後のｃ－ｋｉｔシグナル伝達のＰ１３Ｋ／ＡＣＴ経路及びＭＥＫ／ＥＲＫ経路の活性化を示している。５Ｈ１０抗体は、両方の経路の活性化を有意に低減した。 マウス２Ｇ８抗体及びマウス５Ｈ１０抗体と、Ｓｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ２４５４（商標））の初期継代細胞（Ａ）及び後期継代細胞（Ｂ）との結合をフローサイトメトリーにより示している。 マウス２Ｇ８及びマウス５Ｈ１０とＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２２０ （ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ２４５３（商標））の初期継代細胞及びハイグロマイシンＢ処置細胞との結合を示している。 マウス２Ｇ８及びマウス５Ｈ１０とＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８の初期継代細胞及びハイグロマイシンＢ処置細胞との結合を示している。 異なる抗体濃度の２Ｇ８ヒト化バリアントとＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２２０細胞との結合をフローサイトメトリーにより示している。 異なる濃度の２Ｇ８ヒト化バリアントとＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞との結合をフローサイトメトリーにより示している。 異なる抗体濃度の５Ｈ１０ヒト化バリアントとＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞との結合をフローサイトメトリーにより示している。 異なる抗体濃度の５Ｈ１０ヒト化バリアントとＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２２０細胞との結合をフローサイトメトリーにより示している。 異なる抗体濃度の２Ｇ８ヒト化バリアントとＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞との結合をフローサイトメトリーにより示している。 異なる抗体濃度の５Ｈ１０ヒト化バリアントとＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞との結合をフローサイトメトリーにより示している。 異なる抗体濃度の５Ｈ１０ヒト化バリアントとＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞との結合をフローサイトメトリーにより示している。図１１Ｃでは、示されているＶＨはＶＫ３と対になっている。 異なる抗体濃度の５Ｈ１０ヒト化バリアントとＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞との結合をフローサイトメトリーにより示している。図１１Ｄでは、示されている５Ｈ１０抗体はＶＨ１／ＶＫ３である。 ヒトＩＰＦ筋線維芽細胞（Ｍｆｂ）を陽性対照（無関係な抗体）または図の各バー下に示した抗体とプレインキュベートした後のＣＣＬ１１のｍＲＮＡレベルの変化を示している。マウス親抗体は図面内で「５Ｈ１０」と示されている。ヒト化５Ｈ１０抗体ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ３についても、示されているように試験した。試験した抗体濃度は１μｇ／ｍＬまたは１０μｇ／ｍＬであった。 ヒトＩＰＦ筋線維芽細胞（Ｍｆｂ）を陽性対照（無関係な抗体）または図の各バー下に示した抗体とプレインキュベートした後のコラーゲン１Ａ１のｍＲＮＡレベルの変化を示している。マウス親抗体は図面内で「５Ｈ１０」と示されている。ヒト化５Ｈ１０抗体ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ３についても、示されているように試験した。試験した抗体濃度は１μｇ／ｍＬまたは１０μｇ／ｍＬであった。 ヒトＩＰＦ筋線維芽細胞（Ｍｆｂ）を陽性対照（無関係な抗体）または図の各バー下に示した抗体とプレインキュベートした後のフィブロネクチンのｍＲＮＡレベルの変化を示している。マウス親抗体は図面内で「５Ｈ１０」と示されている。ヒト化５Ｈ１０抗体ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ３についても、示されているように試験した。試験した抗体濃度は１μｇ／ｍＬまたは１０μｇ／ｍＬであった。 ヒトＩＰＦ筋線維芽細胞（Ｍｆｂ）を陽性対照（無関係な抗体）または図の各バー下に示した抗体とプレインキュベートした後のコラーゲン３のｍＲＮＡレベルの変化を示している。マウス親抗体は図面内で「５Ｈ１０」と示されている。ヒト化５Ｈ１０抗体ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ３についても、示されているように試験した。試験した抗体濃度は１μｇ／ｍＬまたは１０μｇ／ｍＬであった。 ｐＨｒｏｄｏ ｒｅｄ標識マウス５Ｈ１０抗体、ＶＨ０／ＶＫ０キメラ型抗体、ヒト化バリアントＶＨ１／ＶＫ３、及びＶＨ２／ＶＫ３の内在化を示している。矢印は、内在化した抗体を示す例示的な細胞を指し示している。 ５Ｈ１０ヒト化バリアントがＰＢＭＣ生存率に及ぼす影響を示している。 ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）時間経過Ｔ細胞増殖アッセイにおいて、示されている５Ｈ１０ヒト化バリアントによって誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示している。 ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）時間経過Ｔ細胞増殖アッセイにおいて、示されている５Ｈ１０ヒト化バリアントによって誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示している。 ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）時間経過Ｔ細胞増殖アッセイにおいて、示されている５Ｈ１０ヒト化バリアントによって誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示している。 ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）時間経過Ｔ細胞増殖アッセイにおいて、示されている５Ｈ１０ヒト化バリアントによって誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示している。 ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）時間経過Ｔ細胞増殖アッセイにおいて、示されている５Ｈ１０ヒト化バリアントによって誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示している。 ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）時間経過Ｔ細胞増殖アッセイにおいて、示されている５Ｈ１０ヒト化バリアントによって誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示している。 ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）時間経過Ｔ細胞増殖アッセイにおいて、示されている５Ｈ１０ヒト化バリアントによって誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示している。エキセナチドは陽性対照である。 ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）時間経過Ｔ細胞増殖アッセイにおいて、示されている５Ｈ１０ヒト化バリアントによって誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答を示している。ＫＬＨは陽性対照である。 ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）の時間経過Ｔ細胞増殖アッセイの分散分析（ＡＮＯＶＡ）を示している。 ブレオマイシン対照動物（左パネル）及びブレオマイシン及び５Ｈ１０（２０ｍｇ／ｋｇ）で処置した動物の肺組織像を示している。図面内の５ ブレオマイシン及び対照ＩｇＧで処置した動物、ならびにブレオマイシン及び５Ｈ１０（２０ｍｇ／ｋｇ；図面内では抗ＳＣＦ２４８と称されている）で処置した動物における肺ヒドロキシプロリンの減少を示している。 ナイーブマウス、肺線維症を誘発するためのブレオマイシン及び対照Ｉｇ抗体（Ｂｌｅｏ＋ｃＩｇ）で処置したマウス、ならびにブレオマイシン及びマウス５Ｈ１０抗体（図面内では抗ＳＣＦ２４８と称されている）で処置したマウスにおける体重の経時的変化を、０日目に測定した体重の％として示している。抗体を指示時点で投与した。 ブレオマイシン及び対照ＩｇＧで処置した動物、ならびにブレオマイシン及び５Ｈ１０（２０ｍｇ／ｋｇ；図面内では抗ＳＣＦ２４８と称されている）で処置した動物における炎症性サイトカイン及び筋線維芽細胞活性化マーカー（ＴＧＦβ、ＣＣＬ２、Ｃｏｌ１ａ１、フィブロネクチン（ｆｎ）、平滑筋アクチン（ａｃｔａ２）、及び幹細胞因子（ｋｉｔｌｇ））についてのｍＲＮＡの減少を示している。 ブレオマイシン及び対照ＩｇＧで処置した動物、ならびにブレオマイシン及び５Ｈ１０（２０ｍｇ／ｋｇ；図面内では抗ＳＣＦ２４８と称されている）で処置した動物における肺マスト細胞、好酸球、及びＩＬＣ２リンパ球の減少を示している。 強制呼気量（左パネル）、強制呼気速度（中央パネル）、及び肺圧力の変化（右パネル）によって測定される肺機能検査が、ブレオマイシン及び５Ｈ１０（２０ｍｇ／ｋｇ；図面内では抗ＳＣＦ２４８と称されている）で処置した動物では、ブレオマイシン及び対照ＩｇＧで処置した動物に比べて著しく改善したことを示している。 ヒト化抗体の試験に使用されるｉｎ ｖｉｖｏ慢性アレルギー性喘息モデルにおける試験設計の模式図を示している。 慢性アレルギー性喘息のｉｎ ｖｉｖｏモデルにおけるヒト化５Ｈ１０抗体による処置の結果を示している。Ａは、測定した気道抵抗が、ＶＨ１／ＶＫ３で処置した動物ではＰＢＳ対照に比べて有意に低減したことを示している。肺組織のＩＬ－１３ ｍＲＮＡ（Ｂ）、コラーゲン１ ｍＲＮＡ（Ｃ）、コラーゲン３ ｍＲＮＡ（Ｄ）についても、ＶＨ１／ＶＫ３で処置した動物では慢性喘息（ＰＢＳ）対照に比べて低減した。Ｅは、ＳＣＦ２４８ ｍＲＮＡ の発現についても、ＶＨ１／ＶＫ３ ５Ｈ１０抗体で処置した動物ではＰＢＳ対照に比べて低減したことを示している。 抗体ＶＨ１／ＶＫ３が、ｉｎ ｖｉｖｏで１ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇの濃度で粘液タンパク質Ｇｏｂ５（Ａ）、ＩＬ－１３（Ｂ）、及びＩＬ－５（Ｃ）のｍＲＮＡレベルを低減したことを示している。

幹細胞因子（ＳＣＦ）は、急性及び慢性の炎症、線維性疾患、ならびに組織リモデリング疾患の重要なメディエーターである。免疫細胞上でＳＣＦがｃ－Ｋｉｔと相互作用することにより、炎症及び線維化が開始し、永続する。本開示は、ＳＣＦとｃ－Ｋｉｔとの相互作用を阻害するための組成物及び方法を提供する。１つの態様において、本開示は、ＳＣＦの炎症形態であるＳＣＦ２４８がｃ－Ｋｉｔと相互作用するのを防止して免疫細胞の活性化を低減及び／または防止するための組成物及び方法を提供する。したがって、本開示は、慢性炎症ならびに線維性疾患及び組織リモデリング疾患を治療するための方法を提供する。１つの態様において、本開示は、器官または組織内での免疫細胞の蓄積（例えば、増殖及び／または保持）を低減するための組成物及び方法を提供する。例えば、本開示は、ＳＣＦ２４８がｃ－Ｋｉｔと相互作用するのを防止して器官または組織内での免疫細胞の蓄積を低減及び／または防止する組成物及び方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、マスト細胞、好酸球、２型自然リンパ球（ＩＬＣ２）細胞、及び３型自然リンパ球（ＩＬＣ３）細胞の器官または組織内での活性化及び／または蓄積を低減及び／または防止するための組成物及び方法を提供する。

詳細には、本開示は、ＳＣＦに特異的に結合し、ｃ－Ｋｉｔとの相互作用を遮断または阻害する抗体及びそのフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体及びフラグメントは、ＳＣＦに結合し、ｃ－Ｋｉｔ及びｃ－Ｋｉｔ＋細胞の活性を阻害する。また、本開示は、ＳＣＦに特異的に結合する抗体及びそのフラグメントを生成するための方法、ならびにそれらの使用の診断及び治療方法を提供する。１つの態様において、本明細書で提供する抗体及びそのフラグメントは、炎症を促進するＳＣＦアイソフォームであるＳＣＦ２４８に特異的に結合する。したがって、本開示は、炎症及び線維症を阻害し、慢性炎症性疾患及び線維性疾患を治療するための、特定の有効な組成物及び方法を提供する。

定義
本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、少なくとも１つの抗原結合ドメインを有する結合タンパク質を指す。本発明の抗体及びそのフラグメントは、全抗体であってもその任意のフラグメントであってもよい。したがって、本発明の抗体及びフラグメントには、モノクローナル抗体またはそのフラグメント、抗体バリアントまたはそのフラグメント、及びイムノコンジュゲートが含まれる。抗原結合フラグメントには、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、二重特異性Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）、三重特異性Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）、Ｆｖ、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ｂｉｓ－ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）、重鎖のみの抗体（例えば、ラクダ科ＶＨＨ、ラクダ科ナノボディ、サメＩｇ ＮＡＲ）、及び抗原結合を担当する全長抗体の一部が含まれる。単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、その自然環境の構成要素から同定及び分離され、及び／または回収された抗体である。

いくつかの実施形態において、抗体及びその抗原結合フラグメントは、単離された抗体及びそのフラグメントである。したがって、本発明は、単離された抗体及びその抗原結合フラグメント、ならびにこのような抗体及びフラグメントをコードする核酸、ならびにこのような単離された抗体、フラグメント、及び核酸を含む組成物を提供する。「単離された」という用語は、その自然環境から分離された目的化合物（例えば、抗体または核酸）を指す。本発明はさらに、単離された抗体もしくはそのフラグメント、またはこのような抗体もしくはフラグメントをコードする核酸を含み、１つ以上の医薬的に許容される担体をさらに含む、医薬組成物を提供する。医薬的に許容される担体としては、例えば、賦形剤、希釈剤、カプセル化材料、充填剤、緩衝剤、または他の薬剤が挙げられる。

本明細書で使用する場合、「由来する」という用語は、参照抗体または他の結合タンパク質に対する分子またはポリペプチドを指すために使用される際には、参照抗体または他の結合タンパク質と同じエピトープに特異的であり結合可能な分子またはポリペプチドを意味する。

本明細書で使用する場合、「～に特異的」という表現は、抗体が非特異的相互作用のみによって標的に結合するわけではないことを意味し得、この特性は、イソタイプ対照または同様のものとの比較によって決定することができる。特異的結合は、単一の標的への排他的結合を含む場合もあるが、必ずしもこれを要件とするわけではない。諸実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＳＣＦ２４８に特異的に結合し、ＳＣＦ２２０には結合はしない。

「宿主細胞」という用語は、核酸配列で形質転換されているか、または形質転換可能であることにより、目的遺伝子を発現する細胞を意味する。当該用語は親細胞の後代を含み、それは、目的遺伝子が存在する限り、後代が形態学または遺伝子的構成において元の親細胞と同一であるか否かを問わない。

ポリペプチド（例えば、抗原結合タンパク質、または抗体）の「バリアント」は、別のポリペプチド配列に比べて、１つ以上のアミノ酸残基がアミノ酸配列に挿入、欠失、及び／または置換されているアミノ酸配列を含む。バリアントには、本明細書で提供する抗体もしくはフラグメント、または挙げられたＤＮＡもしくはアミノ酸配列を有する抗体もしくはフラグメントに対し、挙げられた同一性パーセントを有する抗体及びそのフラグメントが含まれる。

「同一性」という用語は、配列のアラインメント及び比較によって決定される２つ以上のポリペプチド分子または２つ以上の核酸分子の配列間の関係を指す。「同一性パーセント」、「相同性パーセント」、「配列同一性」、「配列相同性」などは、比較する分子中のアミノ酸またはヌクレオチド間の同一な残基のパーセントを意味し、比較する分子のうち最小の分子のサイズに基づいて計算される。このような計算について、アラインメントにおけるギャップ（存在する場合）は、好ましくは特定の数学的モデルまたはコンピュータープログラム（すなわち、「アルゴリズム」）で対処する。アラインメントした核酸またはポリペプチドの同一性を計算するのに使用され得る方法としては、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．），１９８８，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．），１９９３，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ Ｉ，（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．），１９９４，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ： Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，１９８７，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．），１９９１，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ；及びＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，１９８８，ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．４８：１０７３に記載のものが挙げられる。同一性パーセントの計算では、比較される配列は、典型的には、配列間の一致度が最も高くなるようにアラインメントされる。

「軽鎖」という用語は、完全長の軽鎖と、結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するそのフラグメントとを含む。完全長の軽鎖は、可変領域ドメイン及び定常領域ドメインを含む。軽鎖の可変領域ドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にある。軽鎖にはカッパ鎖及びラムダ鎖が含まれる。

「重鎖」という用語は、完全長の重鎖と、結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するそのフラグメントとを含む。完全長の重鎖は、可変領域ドメインと、３つの定常領域ドメイン（Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３）とを含む。可変重鎖ドメインはポリペプチドのアミノ末端にあり、Ｃ_Ｈドメインはカルボキシル末端にあり、ＣＨ_３はポリペプチドのカルボキシ末端の最も近くにある。重鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４サブタイプを含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２サブタイプを含む）、ＩｇＭ、ならびにＩｇＥを含めた任意のアイソタイプのものであり得る。「アイソタイプ」という用語は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラスを指す。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＩｇＧ４重鎖、またはある特定のアミノ酸変異を含むＩｇＧ４重鎖を有する。例えば、いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４は、Ｆａｂアーム交換を阻害するために２２８位に変異を含む（ＥＵナンバリングスキーム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＮＩＨ １９９１））。例えば、いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４重鎖はＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ重鎖である。いくつかの実施形態において、重鎖は、Ｆｃ受容体との結合を低減する１つ以上のアミノ酸変異を含むことにより、抗体のエフェクター機能を低減または除去する。例えば、重鎖は、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２６５、３０９、３３１、及び４０９位（ＥＵナンバリング）のうちの１つ以上に変異を含み得る。

「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の軽鎖及び／または重鎖の一部を指し、典型的には、重鎖内のアミノ末端約１２０～１３０アミノ酸及び軽鎖内のアミノ末端約１００～１１０アミノ酸を含む。ある特定の実施形態において、異なる抗体の可変領域は、同じ種の抗体間でもアミノ酸配列が広範囲に異なっている。抗体の可変領域は、典型的には、その特定の抗体の標的に対する特異性を決定する。本明細書で使用する場合、「標的」という用語は、抗原結合タンパク質による結合が可能な分子または分子の一部を指す。ある特定の実施形態において、標的は１つ以上のエピトープを有し得る。ある特定の実施形態において、標的は抗原である。「抗原結合タンパク質」という表現における「抗原」の使用は、単に、抗原を構成するタンパク質配列が抗体によって結合され得ることを意味する。この文脈において、タンパク質が異物であること、または免疫応答の誘導が可能であることは要求されない。

「エピトープ」という用語は、抗原結合タンパク質による結合が可能な任意の決定基（例えば、抗体またはＴ細胞受容体）を含む。エピトープは、抗原を標的とする抗原結合タンパク質によって結合される抗原の領域であり、抗原がタンパク質である場合、エピトープは、抗原結合タンパク質に直接接触する特定のアミノ酸を含む。エピトープは、最も多くの場合タンパク質上に存在するが、場合によっては他の種類の分子（例えば、核酸）上に存在することもある。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面グルーピングを含み得、特定の３次元構造特性及び／または特定の電荷特性を有し得る。概して、特定の標的抗原に特異的な抗体は、タンパク質及び／または巨大分子の複合混合物中にある標的抗原上のエピトープを優先的に認識する。抗体エピトープは、直鎖状の場合も立体構造の場合もある。諸実施形態において、本明細書で提供するエピトープは直鎖状エピトープである。

単数形の使用は、別段の明記がない限り複数形を含む。単語「ａ」または「ａｎ」は、別段の明記がない限り「少なくとも１つ」を意味する。「または」の使用は、別段の記載がない限り、「及び／または」を意味する。「少なくとも１つ」という表現の意味は、「１つ以上」という表現の意味と同等である。さらに、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに他の形式（例えば、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」）の使用は、限定的ではない。また、「要素」または「構成要素」などの用語は、別段の明記がない限り、１つの単位を含む要素または構成要素、及び２つ以上の単位を含む要素または構成要素の両方を包含する。本明細書で使用する場合、「約」という用語は、記載されたパラメーター値よりも多いまたは少ない量、例えば、「約」が修飾する対象のプラスマイナス５％または１０％、または当業者であれば文脈から認識できるような量（例えば、値間の間隔のおよそ５０％）を指す。また、「約」という用語は、言及されている値も含む。

幹細胞因子
ヒトには少なくとも２つの形態のＳＣＦが存在し、異なる構造及び活性を有する。ＳＣＦ２２０は、造血及び精子形成を含めたいくつかの恒常性機能で機能し、骨髄、精巣、ならびに他の組織及び器官に見出される。ＳＣＦ２２０はゆっくりと切断可能であり、「膜ＳＣＦ」と呼ばれることもある。これに対し、ＳＣＦ２４８は迅速に切断可能であり、Ｎ末端のｃ－ｋｉｔ結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置するエキソン６に切断部位を含む。ＳＣＦ２４８は「可溶性ＳＣＦ」と称されることもある。エキソン６は選択的スプライシングによりＳＣＦ２２０から除外されており、よってＳＣＦ２２０にはこの切断部位が欠如している。単量体細胞外ドメイン（ＳＣＦ１６５）は切断産物であり、慢性炎症性疾患に対する血漿中のバイオマーカーとして機能する。血漿は、ＳＣＦ２２０に由来する検出可能なレベルのＳＣＦ細胞外ドメインも含む可能性があるが、検出可能な細胞外ドメインの大部分はＳＣＦ１６５であることが予想される。ＳＣＦ２４８は、筋線維芽細胞、活性化上皮細胞、及び他の細胞に見出されるアイソフォームであり、炎症中に免疫細胞を活性化し、線維症の永続化に寄与する。より具体的には、ＳＣＦ２４８は免疫細胞上のｃ－Ｋｉｔに結合し、サイトカインの産生を開始し、線維芽細胞を活性化して筋線維芽細胞に変え、細胞外マトリックスタンパク質、コラーゲン、及びフィブロネクチンを分泌させる。活性化筋線維芽細胞に加えて活性化上皮、内皮、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、単球、及び他の細胞も細胞表面にＳＣＦを発現し、より多くのｃ－Ｋｉｔ＋免疫細胞を活性化し、その結果さらなるサイトカインの放出及び免疫活性化及び線維化応答を引き起こす。

本明細書で開示する抗体及びその抗原結合フラグメントは、ＳＣＦに特異的である。いくつかの実施形態において、抗体及びそのフラグメントは、ヒトＳＣＦに特異的である。いくつかの実施形態において、抗体及びそのフラグメントは、ＳＣＦ２４８に特異的である。いくつかの実施形態において、抗体はＳＣＦ２４８に結合し、ＳＣＦの他のアイソフォームには結合しない。いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＣＦ２４８に結合し、ＳＣＦ２２０には結合しない。いくつかの実施形態において、本開示は、ＳＣＦ２４８に特異的な抗体またはそのフラグメントを作製するための方法を提供する。ＳＣＦ２４８に特異的な例示的な抗体及びフラグメント、ならびに当該抗体及びフラグメントを作製及び使用するための方法を本開示で提供する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体及びそのフラグメントは、ＳＣＦ２４８に結合し、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を遮断することにより、様々な細胞タイプに発現するＳＣＦ２４８とｃＫｉｔ＋免疫細胞との間の正のフィードバックループを中断する。

抗体及びフラグメント
本開示は、抗体（モノクローナル抗体を含む）及びそのフラグメントを提供する。本明細書で提供するＳＣＦ（例えば、ＳＣＦ２４８）に特異的な抗体フラグメントは、本明細書内で抗原結合フラグメントと称されることがあるが、これは、標的抗原（ＳＣＦ（例えば、ＳＣＦ２４８））と結合可能な親抗体の一部を含むことを意味する。本明細書では「抗体フラグメント」、「抗原結合フラグメント」などは互換的に使用される。抗原フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ）’フラグメント、Ｆｖフラグメント、単離されたＣＤＲ領域、二重特異性Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）、三重特異性Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ｂｉｓ－ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）、重鎖のみの抗体（例えば、ラクダ科ＶＨＨ、ラクダ科ナノボディ、サメＩｇ ＮＡＲ）、及び抗原結合を担当する全長抗体の一部が挙げられる。

「Ｆａｂフラグメント」は、１つの軽鎖と、１つの重鎖のＣ_Ｈ１及び可変領域とを含む。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。「Ｆａｂ’フラグメント」は、１つの軽鎖と、１つの重鎖の一部とを含み、この重鎖の一部は、ＶＨドメイン及びＣ_Ｈ１ドメイン、さらにＣ_Ｈ１ドメインとＣ_Ｈ２ドメインとの間の領域を含み、その結果、２つのＦａｂ’フラグメントの２つの重鎖間で鎖間ジスルフィド結合が形成されてＦ（ａｂ’）_２分子を形成することができる。「Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント」は、２つの軽鎖と、２つの重鎖とを含み、これらの重鎖は、Ｃ_Ｈ１ドメインとＣ_Ｈ２ドメインとの間の定常領域の一部を含み、その結果、２つの重鎖間で鎖間ジスルフィド結合が形成される。したがって、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントは２つのＦａｂ’フラグメントから構成され、これらは２つの重鎖間のジスルフィド結合によって一緒に保持されている。Ｆｖフラグメントは、重鎖及び軽鎖両方の可変領域を含み、定常領域が欠如している。「ｓｃＦｖ」は、重鎖及び軽鎖の可変領域が柔軟なリンカーによって接続して、抗原結合領域を形成する１つのポリペプチド鎖を形成するＦｖ分子である。

いくつかの態様において、本明細書で提供する抗体及びそのフラグメントは、これらの相補的決定領域（ＣＤＲ）によって定義される。ＣＤＲは抗体内の可変鎖の一部であり、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の各々は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の３つのＣＤＲを含む。抗体のＣＤＲが抗原特異性を決定する。ある特定の実施形態において、ＣＤＲの確定的な定義及び抗体の結合部位を含む残基の同定は、抗体の構造を解明すること及び／または抗体－リガンド複合体の構造を解明することにより、遂行される。ある特定の実施形態において、それは、当業者に知られている任意の様々な技法（例えば、Ｘ線結晶解析）により、遂行することができる。ある特定の実施形態において、ＣＤＲ領域を同定または近似するために様々な解析方法を用いることができる。このような方法の例としては、限定されるものではないが、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、及び接触定義が挙げられる。

Ｋａｂａｔ定義は抗体内の残基のナンバリングの基準であり、典型的には、ＣＤＲ領域を同定するために使用される。例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｗｕ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２８：２１４－８（２０００）を参照。Ｃｈｏｔｈｉａ定義はＫａｂａｔ定義に類似するが、Ｃｈｏｔｈｉａ定義では、ある特定の構造ループ領域の位置が考慮されている。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－１７（１９８６）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７－８３（１９８９）を参照。ＡｂＭ定義は、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐによって制作された抗体構造をモデル化するコンピュータープログラムの統合パッケージソフトを使用する。例えば、Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ（ＵＳＡ），８６：９２６８－９２７２（１９８９）；“ＡｂＭ（商標），Ａ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｐｒｏｇｒａｍ ｆｏｒ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ；Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｌｔｄ．を参照。ＡｂＭの定義は、Ｓａｍｕｄｒａｌａ ｅｔ ａｌ．，“Ａｂ Ｉｎｉｔｉｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ”（ＰＲＯＴＥＩＮＳ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｕｐｐｌ．，３：１９４－１９８（１９９９））で説明されているような知識データベースと第１原理法との組合せを用いて、一次配列から抗体の３次構造をモデル化している。接触定義は、利用可能な複雑な結晶構造の解析に基づくものである。例えば、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，５：７３２－４５（１９９６）を参照。

抗体及びそのフラグメントは、組換え型ポリペプチド、融合タンパク質、及び二重特異性抗体も含むことができる。本明細書で開示する抗ＳＣＦ抗体及びそのフラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプのものであり得る。１つの実施形態において、本明細書で開示する抗ＳＣＦ抗体及びそのフラグメントは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプのものである。本発明の抗ＳＣＦ抗体及びそのフラグメントは、任意の種（限定されるものではないが、マウス、ラット、ウサギ、霊長類、ラマ、ラクダ、ヤギ、サメ、ニワトリ、及びヒトを含む）に由来し得る。ＳＣＦ抗体及びそのフラグメントは、キメラ型抗体、ヒト化抗体、または完全ヒト抗体であり得る。１つの実施形態において、抗ＳＣＦ抗体はマウス抗体である。別の実施形態において、抗ＳＣＦ抗体はキメラ型抗体である。さらなる実施形態において、キメラ型抗体はマウス－ヒトキメラ型抗体である。別の実施形態において、抗体はマウスに由来し、ヒト化されている。

「キメラ型抗体」とは、ある種に由来する重鎖可変領域の少なくとも一部及び軽鎖可変領域の少なくとも一部と、別の種に由来する定常領域の少なくとも一部とを有する抗体である。例えば、１つの実施形態において、キメラ型抗体は、マウス可変領域及びヒト定常領域を含み得る。

「ヒト化抗体」は、非ヒト抗体に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）と、ヒト抗体に由来するフレームワーク領域及び定常領域とを含む抗体である。例えば、本明細書で提供する抗ＳＣＦ抗体は、１つ以上のマウス抗体及びヒトフレームワーク領域及び定常領域に由来するＣＤＲを含み得る。したがって、１つの実施形態において、本明細書で提供するヒト化抗体は、抗体のＣＤＲが由来するマウス抗体と同じＳＣＦ上のエピトープに結合する。

いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体及びそのフラグメントは重鎖及び軽鎖を含み、これらの各々が３つのＣＤＲを含む。例示的な重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（それぞれＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（それぞれＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を以下の表１に示す。また、例示的な重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列も表１に示す。いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書で「５Ｈ１０」及び「２Ｇ８」と称されている抗体を提供する。ヒト化５Ｈ１０または２Ｇ８の重鎖可変領域を、本明細書ではＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、及びＶＨ５と称する。５Ｈ１０ ＶＨ０は、本明細書に記載の方法によって生成されたマウス親抗体の可変重鎖である。ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５は各々、５Ｈ１０ ＶＨ０または２Ｇ８ ＶＨ０に由来するヒト化重鎖可変領域である。５Ｈ１０抗体はカッパ軽鎖を含む。マウス親抗体可変軽鎖を、本明細書では５Ｈ１０ ＶＫ０と称する。ＶＫ１、ＶＫ２、ＶＫ３、及びＶＫ４は各々、ＶＫ０に由来するヒト化軽鎖可変領域である。２Ｇ８抗体はラムダ軽鎖を含む。マウス親抗体可変軽鎖を、本明細書では２Ｇ８ ＶＬ０と称する。ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、及びＶＬ４は各々、ＶＬ０に由来するヒト化軽鎖可変領域である。

当業者は、可変重鎖及び可変軽鎖は、本明細書で提供する抗体から独立的に選択させてもよく、または混合及び一致させてもよいことを理解するであろう。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体及びそのフラグメントは、ＶＨ０／ＶＫ０、ＶＨ０／ＶＫ１、ＶＨ０／ＶＫ２、ＶＨ０／ＶＫ３、ＶＨ０／ＶＫ４、ＶＨ１／ＶＫ０、ＶＨ１／ＶＫ１、ＶＨ１／ＶＫ２、ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ１／ＶＫ４、ＶＨ２／ＶＫ０、ＶＨ２／ＶＫ１、ＶＨ２／ＶＫ２、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ４、ＶＨ３／ＶＫ０、ＶＨ３／ＶＫ１、ＶＨ３／ＶＫ２、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ４、ＶＨ４／ＶＫ０、ＶＨ４／ＶＫ１、ＶＨ４／ＶＫ２、ＶＨ４／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ４、ＶＨ５／ＶＫ０、ＶＨ５／ＶＫ１、ＶＨ５／ＶＫ２、ＶＨ５／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ４からなる群より選択される重鎖及び軽鎖の組合せを含む。

いくつかの実施形態において、本開示は、配列番号７～１２からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む抗体またはフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、配列番号７～１２からなる群より選択される配列に記載の重鎖可変領域を含む抗体またはそのフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、配列番号７～１１からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む抗体またはフラグメントであって、配列番号１、２、及び３とそれぞれ同一の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、抗体またはフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、配列番号１２のアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む抗体またはフラグメントであって、配列番号１、３７、及び３とそれぞれ同一の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、抗体またはフラグメントを提供する。

いくつかの実施形態において、本開示は、配列番号１３～１７からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む抗体またはフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、配列番号１３～１７からなる群より選択される配列に記載の軽鎖可変領域を含む抗体またはそのフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、配列番号１３～１７からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む抗体またはフラグメントであって、配列番号４、５、及び６とそれぞれ同一の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、抗体またはフラグメントを提供する。

いくつかの実施形態において、本開示は、以下に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む抗体またはフラグメントを提供する：配列番号７及び配列番号１３；配列番号７及び配列番号１４；配列番号７及び配列番号１５；配列番号７及び配列番号１６；配列番号７及び配列番号１７；配列番号７及び配列番号１３；配列番号７及び配列番号１４；配列番号７及び配列番号１５；配列番号７及び配列番号１６；配列番号７及び配列番号１７；配列番号８及び配列番号１３；配列番号８及び配列番号１４；配列番号８及び配列番号１５；配列番号８及び配列番号１６；配列番号８及び配列番号１７；配列番号９及び配列番号１３；配列番号９及び配列番号１４；配列番号９及び配列番号１５；配列番号９及び配列番号１６；配列番号９及び配列番号１７；配列番号１０及び配列番号１３；配列番号１０及び配列番号１４；配列番号１０及び配列番号１５；配列番号１０及び配列番号１６；配列番号１０及び配列番号１７；配列番号１１及び配列番号１３；配列番号１１及び配列番号１４；配列番号１１及び配列番号１５；配列番号１１及び配列番号１６；配列番号１１及び配列番号１７；配列番号１２及び配列番号１３；配列番号１２及び配列番号１４；配列番号１２及び配列番号１５；配列番号１２及び配列番号１６；または配列番号１２及び配列番号１７。

特定の実施形態において、抗体及びそのフラグメントは、ＶＨ１／ＶＫ１、ＶＨ１／ＶＫ２、ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ１、ＶＨ２／ＶＫ２、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ１、ＶＨ３／ＶＫ２、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ１、ＶＨ４／ＶＫ２、ＶＨ４／ＶＫ３、ＶＨ５／ＶＫ１、ＶＨ５／ＶＫ２、及びＶＨ５／ＶＫ３からなる群より選択される重鎖及び軽鎖の組合せを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号８または配列番号９に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、配列番号１６に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列とを含む。いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、配列番号８または配列番号９に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、配列番号１６に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列とを含み、抗体またはフラグメントは、配列番号１、２、及び３とそれぞれ同一の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、配列番号４、５、及び６とそれぞれ同一の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、配列番号８または配列番号９に対し少なくとも９５％または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、配列番号１６に対し少なくとも９５％または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列とを含み、抗体またはフラグメントは、配列番号１、２、及び３とそれぞれ同一の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、配列番号４、５、及び６とそれぞれ同一の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む。抗体またはそのフラグメントは、ＳＣＦ２４８に特異的に結合するがＳＣＦ２２０には結合しない場合がある。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号８に記載の重鎖可変領域と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号９に記載の重鎖可変領域と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域とを含む。

いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体及びフラグメントは、配列番号７、８、９、１０、１１、もしくは１２に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列またはそのバリアントを含み、及び／または配列番号１３、１４、１５、１６、もしくは１７に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列またはそのバリアントを含む。バリアントは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０のアミノ酸置換もしくは欠失、またはそれらの組合せを含み得る。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換は保存的置換である。ＣＤＲまたは可変軽鎖もしくは重鎖領域に１つ以上のアミノ酸置換、挿入、欠失、またはそれらの組合せを有する本明細書で開示する抗ＳＣＦ抗体は、本明細書で提供する配列に対しアミノ酸置換、挿入、または欠失を有しない対応する抗ＳＣＦ抗体の生物活性を保持する。したがって、本明細書で提供するバリアント抗ＳＣＦ抗体は、ＳＣＦ２４８への特異的結合を保持する。本明細書では、相同性パーセント、配列同一性、配列相同性などの用語が互換的に使用され、これらの用語は、２つの参照配列が共有する同一のアミノ酸配列の数を、アミノ酸位置の総数で割り、１００を掛けたものを指す。

いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書で開示する例示的な抗体のいずれか１つと同じエピトープに結合する抗体を提供する。したがって、いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＣＦに対する結合が、本明細書で提供する例示的な抗体と競合する抗体を提供する。例えば、いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書で配列番号２９として示されるアミノ酸配列の領域に特異的に結合する抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、配列番号３３（ＡＳＳＬＲＮＤＳＳＳＳＮＲＫ）または配列番号３６（ＡＳＳＬＲＮＤＳＳＳＳＮＲ）のアミノ酸配列を含むエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本開示は、配列番号３３または配列番号３６に記載のアミノ酸配列からなるエピトープに特異的に結合する抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、配列番号３３の少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個の連続したアミノ酸を含むエピトープに特異的に結合する抗体を提供する。

いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体及びそのフラグメントは、本明細書で提供する重鎖及び軽鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／またはＬＣＤＲ３、あるいはこれらのバリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体及びそのフラグメントは、ＨＣＤＲが配列番号７、８、９、１０、１１、もしくは１２のＨＣＤＲである抗体、及び／またはＬＣＤＲが配列番号１３、１４、１５、１６、もしくは１７のＬＣＤＲである抗体を含む。例えば、いくつかの実施形態において、抗体及びそのフラグメントは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームによる定義において、本明細書で提供する重鎖可変領域のいずれか１つのアミノ酸３１～３５、５０～６５、及び９５～１０２を含む。いくつかの実施形態において、抗体及びそのフラグメントは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームによる定義において、本明細書で提供する軽鎖可変領域のいずれか１つのアミノ酸２４～３４、５０～５６、及び８９～９７を含む。

本明細書では例示的なヒト化抗体を提供する。本明細書で提供する重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたはそのバリアントを含む追加の抗ＳＣＦ抗体は、任意のヒトフレームワーク配列を用いて生成することができ、本発明に包含される。１つの実施形態において、本発明での使用に適したフレームワーク配列は、本明細書で提供するフレームワーク配列と構造的に類似するフレームワーク配列を含む。本明細書で提供する抗体の特性を改善するために、フレームワーク領域におけるさらなる修飾を行うことができる。このようなさらなるフレームワークの修飾としては、化学的修飾、免疫原性を低減するもしくはＴ細胞エピトープを除去するための点変異、または元の生殖細胞配列内の残基への逆変異が挙げられ得る。

いくつかの実施形態において、このようなフレームワーク修飾には、生殖細胞配列への逆変異を含めた本明細書で例示される変異に対応する修飾が含まれる。例えば、１つの実施形態において、本明細書で提供するヒト化抗体のＶＨ及び／またはＶＬのヒトフレームワーク領域内の１つ以上のアミノ酸は、親マウス抗体内の対応するアミノ酸に逆変異している。また、本発明は、ＳＣＦ（例えば、ＳＣＦ２４８）に結合し、任意の好適なフレームワーク配列について本明細書に記載の例示的な修飾に対応するフレームワーク修飾、加えて、別の方法で抗体の特性を改善する他のフレームワーク修飾を含むヒト化抗体も包含する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、例えば、脱アミド化または酸化を低減する、異性化を低減する、疎水性コア及び／または電荷クラスター残基を最適化する、疎水性表面残基を除去する、可変重鎖と可変軽鎖との間の界面に関与する残基を最適化する、及び／または等電点を修飾する標的アミノ酸変化により、安定性を改善する、溶解度を改善する、グリコシル化を改変する、及び／または免疫原性を低減する１つ以上の変異を含む。

本明細書で提供する抗ＳＣＦ抗体及びそのフラグメントはさらに、エフェクター機能を改変するためのＦｃ領域修飾を含むことができる。Ｆｃ修飾は、アミノ酸の挿入、欠失、または置換の場合もあれば、化学的修飾の場合もある。例えば、Ｆｃ領域修飾は、補体結合を増加もしくは減少するため、抗体依存的な細胞毒性を増加もしくは減少するため、または抗体の半減期を増加もしくは減少するために行われ得る。いくつかのＦｃ修飾は、Ｆｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、またはＦｃＲｎ）に対する抗体の親和性を増加または減少する。様々なＦｃ修飾が当技術分野で説明されている（例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２７６；６５９１（２００１）；Ｔａｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １１９；２０７４（２０１２）；Ｓｐｉｅｋｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ １９６；３０３（２００２）；Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ ２：２；１８１（２０１０）；Ｍｅｄｚｉｈｒａｄｓｋｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ４４６；２９３（２００８）；Ｍａｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ３５；８６（２００７）；及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４；４１７８（２０００）。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域のグリコシル化パターンが改変される。他の実施形態において、Ｆｃ領域は、ペグ化によって（例えば、抗体またはそのフラグメントをポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させることによって）修飾される。例示的なＦｃ修飾としては、２２８、２３３、２３４、２３５、２３６、２４１、２４８、２６５、２９７、３０９、３３１、及び４０９からなる群より選択される１つ以上のアミノ酸位置での修飾が挙げられる（Ｋａｂａｔナンバリング；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。諸実施形態において、抗体は、エフェクター機能を低減または消失するための修飾を有する。諸実施形態において、抗体は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６（欠失）、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｎ２９７Ａ、及びＮ２９７Ｑからなる群より選択される１つ以上のＦｃ修飾を有するＩｇＧ１抗体である。諸実施形態において、抗体は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｖ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｔ、Ｌ３０９Ｌ、及びＲ４０９Ｋからなる群より選択される１つ以上のＦｃ修飾を有するＩｇＧ４抗体である。諸実施形態において、本明細書で提供する抗ＳＣＦ抗体は、Ｓ２４１Ｐ変異及びＬ２４８Ｅ変異を含む。

諸実施形態において、本開示は、配列番号４０及び４１に記載のヒトＩｇＧ４定常領域を含む、本明細書で提供する抗体を提供する。諸実施形態において、本開示は、配列番号４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０に対する少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約９９％の配列同一性を含む抗体を提供する。諸実施形態において、本開示は、配列番号４０に記載の重鎖と、配列番号４１に記載の軽鎖とを含む抗体を提供する。諸実施形態において、本開示は、配列番号４２、４３、４４、４５、または４６に記載の重鎖と、配列番号４７、４８、４９、または５０に記載の軽鎖とを含む抗体を提供する。諸実施形態において、本開示は、配列番号４２に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖とを含む抗体を提供する。諸実施形態において、本開示は、配列番号４３に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖とを含む抗体を提供する。諸実施形態において、本開示は、配列番号４４に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖とを含む抗体を提供する。諸実施形態において、本開示は、配列番号４５に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖とを含む抗体を提供する。諸実施形態において、本開示は、配列番号４６に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖とを含む抗体を提供する。

いくつかの実施形態において、本開示は、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する抗体を作製するための方法を提供する。ＳＣＦのＳＣＦ２４８アイソフォームはエキソン６を含む。これは、２つのアラニン残基（エキソン６のアミノ酸配列を示す配列番号３４のアミノ酸１６及び１７）の間の切断部位を含む。以前の抗ＳＣＦ抗体は、エキソン６及びエキソン７の一部にまたがるペプチドでマウスを免疫することによって生成された（例えば、米国特許第８，９１１，７２９号（あらゆる目的においてその全体が参照により本明細書に援用される）を参照）。ＳＣＦ２２０は恒常性活性に関連するため、ＳＣＦ２２０との任意の交差反応性は、対象に様々なオフターゲット効果をもたらすことから有害と考えられる。有利なことに、本開示で提供する抗体は、非常に高い特異性でＳＣＦ２４８に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＳＣＦ２４８に特異的であり、ＳＣＦ２２０には結合しない。したがって、本明細書で提供する抗体は、慢性炎症応答及び線維症を誘導し永続させるＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を、特異的に阻害可能である。さらに、本明細書で提供する抗体は、ＳＣＦの内在化を特異的に誘導することにより、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの相互作用を低減可能である。したがって、いくつかの実施形態において、本開示は、ＳＣＦ２４８に特異的であり、本明細書で論じられ当技術分野で知られている様々な炎症性疾患及び線維性疾患に安全かつ有効な抗体を提供する。

モノクローナル抗体の調製については、培養下の連続的な細胞株による抗体分子の産生をもたらす任意の技法を使用することができる（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．を参照）。このような技法としては、限定されるものではないが、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎによって最初に開発されたハイブリドーマ技法、ならびにトリオーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｔｏｄａｙ，４：７２（１９８３）を参照）、及びヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶ－ハイブリドーマ技法（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ，ｐｐ．７７－９６（１９８５））が挙げられる。代替的に、抗体は組換え型ＤＮＡ法によって作製してもよい。いくつかの実施形態において、本開示に従う抗体は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２（３）：５８１－９７（１９９１）に記載の技法を用いて、ファージディスプレイライブラリーからモノクローナル抗体を単離することにより、作製することができる。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト由来のファージディスプレイまたは酵母ディスプレイライブラリー（複数可）から選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列（複数可）を、既知のヒト定常ドメイン配列（複数可）と組み合わせることによって構築される、完全ヒト抗体である。

本明細書で提供するいくつかの実施形態において、抗体はハイブリドーマから調製される。ハイブリドーマ法を用いて、マウス、ハムスター、または他の適切な宿主動物に免疫ペプチドを注射することによって免疫して、リンパ球による免疫抗原に特異的に結合する抗体の産生を誘発する。代替的に、リンパ球をｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫してもよい。免疫後、リンパ球を単離し、例えばポリエチレングリコールを用いて、好適な骨髄腫細胞株と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成し、次にこれを未融合のリンパ球及び骨髄腫細胞以外から選択することができる。ハイブリドーマは、免疫沈降法、免疫ブロット法、またはｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ））によって決定される選択した抗原に特異的に指向するモノクローナル抗体を産生するが、このハイブリドーマは、次に標準法（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏ（例えば培養下）で増殖させたり、動物の腹水腫瘍としてｉｎ ｖｉｖｏで増殖させたりすることができる。次にモノクローナル抗体は、ポリクローナル抗体について上述されているように、培養基または腹水から精製することができる。

いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、マウスハイブリドーマ系を用いて生成される。マウスにおけるハイブリドーマ産生は、十分に確立された手順である。融合のために免疫された脾臓細胞を単離するための免疫化プロトコル及び技法は、当技術分野で知られている。また、融合パートナー（例えば、マウス骨髄腫細胞）及び融合手順も知られている。本明細書の技法の実施形態は、ＳＣＦタンパク質の一部またはフラグメントであるペプチドでマウスを免疫することによって調製されたハイブリドーマから産生される抗体（例えば、モノクローナル抗体）を提供する。

いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＳＣＦ２４８に特異的な抗体は、主にまたは独占的にエキソン６内にあるアミノ酸配列を有するペプチドでマウスを免疫することによって生成される。例えば、免疫ペプチドは、配列番号３４内の５個以上の任意の一続きのアミノ酸を含む。別の例として、免疫ペプチドは、配列番号２９のアミノ酸位置２０から始まる５個以上の任意の一続きのアミノ酸を含む。別の例として、免疫ペプチドは、配列番号２９のアミノ酸位置２０で始まり、配列番号２９の位置２５～３８のいずれか１つで終わる５個以上の任意の一続きのアミノ酸を含む。したがって、いくつかの実施形態において、免疫ペプチドは、切断部位以降のエキソン６のアミノ酸配列を含み、エキソン６内に完全に含まれるか、またはエキソン７の１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸のみを含む。いくつかの実施形態において、免疫ペプチドは、配列番号３０を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態において、免疫ペプチドは、本明細書で提供するペプチドまたはその保存的バリアントのいずれかを含む。保存的バリアントは、１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸置換もしくは欠失、またはそれらの組合せを含み得る。上に示されているように、いくつかの実施形態において、本明細書で提供する免疫ペプチドを用いて生成される抗体は、エキソン６内に完全にまたは大部分収まっているエピトープを有する。「～内に大部分」とは、ペプチドの少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％がエキソン６内に収まることを意味する。いくつかの実施形態において、エピトープは、エキソン６の切断部位（すなわち、配列番号２９のアミノ酸位置１９及び２０のアラニン間）で始まり、エキソン６の末端まで及ぶ。いくつかの実施形態において、エピトープはエキソン６の切断部位から始まり、膜貫通ドメインの第１、第２、第３、第４、または第５のｎ末端アミノ酸まで及ぶ。いくつかの実施形態において、エピトープは、配列番号３３を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態において、本明細書で５Ｈ１０と称される抗体（マウス、キメラ型、及びヒト化５Ｈ１０抗体を含む）は、配列番号３３を含むか、またはそれからなるＳＣＦのエピトープに結合する。

いくつかの実施形態において、本明細書で提供する方法は、本明細書で５Ｈ１０と称される抗体を生成するために使用された。いくつかの実施形態において、抗体「５Ｈ１０」は、本明細書では「ＯｐＳＣＦ」とも称される。抗体５Ｈ１０は、有利なことに、ＳＣＦ２４８に高い特異性で結合し、ＳＣＦ２２０には結合しない。マウス親抗体５Ｈ１０及びそのヒト化バリアントのアミノ酸配列が本明細書で提供される（表１を参照）。

１つの実施形態において、本発明は、ＳＣＦ及び少なくとも１つの他の抗原またはエピトープに特異的な二重特異性または多重特異性抗体を提供する。本明細書で提供する抗ＳＣＦ抗体及びそのフラグメントは、本明細書で提供する結合アッセイ、または当技術分野で知られている任意の他の結合アッセイを用いて、ＳＣＦとの結合について試験することができる。

別段の明記がない限り、本発明の実施には、当技術分野で周知され、例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８８－１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）；Ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｃ．Ｂａｒｂａｓ ＩＩＩ ｅｔ ａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２００１）；及びＵｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）に記載されている従来的な分子生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学の技法が用いられる。

治療方法
１つの態様において、本開示は、ＳＣＦ２４８と免疫細胞上のｃ－Ｋｉｔとの相互作用を介した免疫細胞の移動、活性化、及び／または増殖に関連する任意の疾患または状態を治療及び／または予防するための方法を提供する。したがって、いくつかの実施形態において、本開示は、免疫細胞の活性化を阻害または防止する方法、ならびに器官または組織内の免疫細胞の蓄積を低減または防止することにより、炎症を伴う様々な疾患及び障害を治療または防止する方法を提供する。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、マスト細胞、自然リンパ球（ＩＬＣ（例えば、ＩＬＣ２またはＩＬＣ３細胞））、及び好酸球からなる群より選択される。

本明細書で使用する場合、「治療」または「治療する」という用語は、療法的治療及び予防的治療の両方を指す。治療を必要とする対象には、既に疾患または状態を有する対象に加えて、疾患または状態を発症する可能性があり、その疾患または状態の防止、遅延、または軽減を目的とする対象が含まれる。本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、哺乳類（例えば、げっ歯類、ネコ、イヌ、及び霊長類）を意味する。好ましくは、本発明に記載の対象はヒトである。本明細書で使用する場合、「治療有効量」という用語は、対象に治療上及び／または予防上の利益を提供するために必要な化合物または組成物の量を指す。

１つの態様において、本発明は、対象の炎症性疾患、線維性疾患、及び／または組織リモデリング疾患を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、炎症性疾患は慢性炎症性疾患である。

慢性炎症性疾患、線維性疾患、及び組織リモデリング疾患には、肺、腎臓、肝臓、心臓、皮膚、結合組織、及び他の組織の疾患が含まれる。例示的な炎症性、線維性、または組織リモデリング疾患としては、限定されるものではないが、肺線維症（例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、強皮症肺線維症、強皮症関連間質性肺疾患（ＳＳｃ－ＩＬＤ）、肺感染または肺炎に関連する肺線維症、全身性エリテマトーデス及び／または関節リウマチに関連する肺線維症、サルコイドーシス）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、嚢胞性線維症、気管支周囲線維症、ブレオマイシン肺、過敏性肺炎、喘息、線維胸、縦隔線維症、慢性副鼻腔炎、蕁麻疹（例えば、慢性特発性蕁麻疹）、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、結節性表皮下線維症、強皮症、ケロイド、腎線維症、慢性腎疾患、糸球体腎炎、慢性腎同種移植片拒絶、腎症（例えば、ＩｇＡ腎症、巣状分節性糸球体硬化症、急速進行性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、ループス腎炎、高血圧性腎症、もしくは糖尿病性腎症）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変、肝線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性肝硬変、線維筋痛症、歯肉線維症、放射線誘発性線維症、好酸球性食道炎、関節線維症、及び心房線維症、心内膜心筋線維症、実質線維症、線維性組織球腫、またはグリア瘢痕化が挙げられる。

いくつかの実施形態において、本明細書で開示する抗体及びそのフラグメントは、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、脳内、脳室内、結腸内、頚管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、鼓膜内、子宮内、膀胱内、硝子体内、ボーラス、結膜下、経口、経膣、経直腸、頬側、舌下、鼻腔内、腫瘍内、及び経皮から選択される少なくとも１つの経路により、対象に投与することができる。

諸実施形態において、本明細書で開示する抗体及びそのフラグメントは、１つ以上の追加の療法と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することができる。１つ以上の追加の療法は、外科的手順などの手順の場合もあれば、治療剤（例えば、線維症及び／または炎症に関連する疾患または障害の症状を軽減または低減するように設計された薬剤）の場合もある。

以下の実施例を参照することにより、本発明についてさらに説明する。ただし、これらの実施例は、上述の実施形態と同様に例示であり、いかなる形においても本発明の範囲を制限するようには解釈しないものとすることに留意されたい。

以下の実施例は、本開示の様々な実施形態を説明する目的で示すものであり、いかなる形においても本開示を限定するようには意図されていない。この実施例の変更及び他の使用は、特許請求の範囲によって定義される本開示の趣旨の中に包含されることが、当業者には認識されよう。

組織傷害／疾患のプロセスの概要が図１にまとめられている。疾患プロセスが炎症を開始する。ｃ－Ｋｉｔ＋免疫細胞がサイトカインを産生することで、線維芽細胞が活性化筋線維芽細胞に変化し、その表面にＳＣＦ２４８を発現する。筋線維芽細胞及び他の細胞の表面にＳＣＦ２４８が発現すると、より多くの免疫細胞が活性化し、その結果ＩＬ－４、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、ＴＧＦβ、及び他のサイトカインが放出され、炎症が永続化する。筋線維芽細胞は、細胞外マトリックスタンパク質、コラーゲン、フィブロネクチンを分泌し、線維症及びリモデリング疾患（例えば、肺線維症、皮膚線維症、重症喘息、及び他の疾患）を引き起こす。

ＳＣＦ２４８を標的とする本開示の抗体（この抗体は本明細書ではＯｐＳＣＦ及び／または５Ｈ１０と称される）の例示的な機構が図２にまとめられている。

上記に示されているように、ＳＣＦは、選択的スプライシングから生じる２つのアイソフォーム：ＳＣＦ２４８及びＳＣＦ２２０を有する。ＳＣＦ２４８及びＳＣＦ２２０はエキソン６により相違する。ＳＣＦ２２０は恒常性機能に関連し、ＳＣＦ２４８は炎症及び線維症に関連する。ＳＣＦ２４８は、炎症中に免疫細胞を活性化させ、「溶解性ＳＣＦ」と呼ばれることもある。ＳＣＦ２４８は、筋線維芽細胞、活性化上皮、内皮、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、及び単球を含めた様々な細胞タイプに発現する（図３）。ＳＣＦ２４８アイソフォームは、ＳＣＦ１６５と呼ばれる単量体の切断細胞外ドメインの切断をもたらす。エキソン６のアミノ酸配列は、本明細書では配列番号３４として示される。

実施例１：ハイブリドーマ技術を利用した抗ＳＣＦ ｍＡｂｓの産生
ＡＳＳＬＲＮＤＳＳＳＳＮＲＫＡＫＮＰＰＧＤ（配列番号３０）を含むペプチドを使用して、ＳＣＦ２４８に結合する抗体を生成した。免疫ペプチドは、エキソン６の一部、すなわち、幹細胞因子のＳＣＦ２４８アイソフォームを含んだ。詳細には、免疫ペプチドは、本明細書で定義される切断部位の後から始まるエキソン６の一部を含んだ。標準プロトコルにより、配列番号３０に記載のペプチドでマウスを免疫した。高力価血清抗体の定量により、適切な免疫化及び融合ハイブリドーマが作製されたことが示された。培養上清を個々のクローンからＳＣＦ特異的な抗体について解析し、特異性に基づいて選択した。ペプチドに対する特異的なモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを増殖させ、次に、最も力価が高いモノクローナルを生物学的に関連する培養物中で試験した。抗体５Ｈ１０はＳＣＦ２４８に高い特異性を有し、ＳＣＦ２２０との交差反応性は有しなかった。ハイブリドーマが産生した他のモノクローナル抗体には、ＳＣＦ２２０との交差反応を伴わずにＳＣＦ２４８に高い特異性を有するものがなかった。したがって、さらなる特性評価、開発、及びキメラ化、ならびにその後のヒト化のために５Ｈ１０が選択された。

実施例２．５Ｈ１０とＳＣＦ２４８完全細胞外ドメインとの結合
実施例１に記載の方法で得られたマウス５Ｈ１０抗体を蛍光マーカーと直接結合体化させ、この標識抗体を、ＳＣＦ２４８を発現するＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞か、ＳＣＦ２２０を発現するＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２２０細胞か、またはＳＣＦを発現しない対照細胞と共にインキュベートした。標識抗体と細胞との結合をフローサイトメトリーによって評価した。５Ｈ１０がＳＣＦ２４８に特異性を有し、ＳＣＦ２２０との交差反応性が欠如していることが図４Ａに示されている。

ＳＣＦのアミノ酸１～１６５個のみを含む切断細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と、ＳＣＦのアミノ酸１～１９４個を含む完全ＥＣＤとに対するマウス５Ｈ１０抗体の結合をＥＬＩＳＡ法によって評価した。この抗体は完全ＳＣＦ ＥＣＤには結合したが、切断ＳＣＦ ＥＣＤには結合せず（図４Ｂ）、これにより、この抗体が完全細胞外ドメインに特異的であり、血中を循環する単量体の切断ＥＣＤには結合しないことが示された。

筋線維芽細胞上のＳＣＦ２４８を内在化する２Ｇ８抗体及び５Ｈ１０抗体の能力を評価するため、これらの抗体を、中性ｐＨでは無色であり、エンドソーム内の低ｐＨでは赤色に蛍光発光するｐＨｒｏｄｏ ｒｅｄで標識した。標識抗体を、培養したヒトＩＰＦ筋線維芽細胞と共に４５分間インキュベートし、赤色蛍光を顕微鏡により可視化した。図５に示されているように、色素標識した抗体は迅速に内在化され、対照ＩｇＧは内在化されなかった。５Ｈ１０は２Ｇ８に比べより迅速に内在化され、より高い蛍光が得られた。

ＳＣＦは、２つの異なる経路：ＭＥＫ／ＥＲＫ経路及びＰ１３Ｋ／ＡＫＴ経路により、ｃ－ｋｉｔをシグナル伝達するように誘発する。マウス５Ｈ１０抗体が、これらの経路の一方または両方で、ｃ－ｋｉｔ陽性細胞の細胞内シグナル伝達を阻害するかどうかを調べる試験を行った。５Ｈ１０またはＩｇＧ対照のいずれかの存在下で、好酸球をＳＣＦ２４８発現細胞株と共にインキュベートし、ＢｉｏＲａｄ Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘアッセイ系でリン酸化タンパク質の発現を測定した。５Ｈ１０はホスホ－ＭＥＫ及びホスホル－ＡＫＴレベルを有意に減少し、当該抗体がｃ－ｋｉｔを介した細胞内シグナル伝達を有意に低減することを示した（図６）。

これらの試験の結果を総合すると、抗体５Ｈ１０はＳＣＦ２４８に特異的に結合しこれを内在化させ、ＳＣＦ２２０アイソフォームまたは切断ＥＣＤとは交差反応しないことが示された。さらに、５Ｈ１０は、ｃ－ｋｉｔ陽性細胞内での炎症を永続化させる細胞内シグナル伝達経路を有意に阻害する。

実施例３：マウス抗体５Ｈ１０のヒト化
重鎖及び軽鎖の可変ドメインをヒトＩｇＧ４骨格を有するベクターにサブクローニングすることにより、５Ｈ１０由来のキメラ型抗体を産生した。標準的なプロトコルを用いてキメラ型抗体を発現及び精製した。２Ｇ８は以前に開発された抗体であり、ＳＣＦ２４８及びＳＣＦ２２０に結合し、ラムダ軽鎖を含む。２Ｇ８のキメラ型重鎖及び軽鎖をそれぞれＶＨ０及びＶＬ０と命名した。本明細書で提供するＳＣＦ２４８特異的抗体５Ｈ１０は、カッパ軽鎖を含む。５Ｈ１０のキメラ型重鎖及び軽鎖をそれぞれＶＨ０及びＶＫ０と命名した。

このキメラ型抗体をヒト化した。ヒト化重鎖は、相補性決定領域（ＣＤＲ）は同じだが、より「ヒトらしい」フレームワーク領域を保持していた。２Ｇ８及び５Ｈ１０可変重鎖の各々のいくつかのヒト化バリアント（本明細書ではＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、及びＶＨ５と称する）を生成した。５Ｈ１０のヒト化カッパ軽鎖バリアント（本明細書ではＶＫ１、ＶＫ２、ＶＫ３、及びＶＫ４と称される）も生成した。２Ｇ８のヒト化ラムダ軽鎖をＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、及びＶＬ４と命名した。試験した２Ｇ８及び５Ｈ１０におけるキメラ型軽鎖及び重鎖ならびにヒト化軽鎖及び重鎖の組合せを、それぞれ表２及び表３に示す。表２に示されているように、５Ｈ１０抗体バリアントのある特定の重鎖及び軽鎖の組合せがｈＳＣＦ２４８に高い結合をもたらした。結合スコアの決定に使用した結合データを後述の実施例５に示す。

ＢｉａＣｏｒｅ解析を用いて結合親和性も評価した。ＢｉａＣｏｒｅデータからは、ＶＫ１、ＶＫ２、またはＶＫ３軽鎖を有する全てのヒト化５Ｈ１０抗体の固定化ＳＣＦ２４８ペプチド抗原に対する親和性が、このアッセイを用いた親マウス５Ｈ１０の結合親和性に非常に類似することが示された。ＶＫ４軽鎖を有するヒト化５Ｈ１０抗体は、このペプチドに結合しなかった。

実施例４．フローサイトメトリーによる抗ＳＣＦキメラ型抗体結合の評価
ＳＣＦ２４８を発現する形質移入細胞株であるＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞を利用して、キメラ型抗体２Ｇ８及び５Ｈ１０の結合を試験した。抗ＳＣＦ抗体を、ＳＣＦ結合における陽性対照として使用した。ヒトＩｇＧ４抗体を、陰性アイソタイプ対照抗体として使用した。早期継代（Ｐ３）のＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞を後期継代（Ｐ５）の細胞と比較した。予想されたように、陰性対照（ヒトＩｇＧ４抗体）はいずれの細胞集団にも結合しなかった。５Ｈ１０は、初期継代の場合は細胞に結合したが（図７Ａ）、後期継代の場合は検出されなかった（図７Ｂ）。これは、複数回の継代でＳＣＦ２４８の発現が喪失したためである。同様に、１０μｇ／ｍＬの２Ｇ８で検出した最大平均蛍光強度（ＭＦＩ）は、Ｐ５ではＰ３に比べて約４倍低減した。

ハイグロマイシンＢで処置した細胞でも同様の観察がなされた。ハイグロマイシン選択を使用して、該当ヒトＳＣＦ配列を発現するＳｌ／Ｓｌ４細胞の画分を濃縮した。２つのキメラ型抗ＳＣＦ ｍＡｂｓ ２Ｇ８及び５Ｈ１０ならびにヒト化抗ＳＣＦ抗体の結合をフローサイトメトリーにより評価した。Ｓｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞及びＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２２０細胞（それぞれＳＣＦ２４８＋及びＳＣＦ２２０＋）を利用して、キメラ型抗体２Ｇ８及び５Ｈ１０の結合性及び特異性を試験した。抗ＳＣＦ抗体を、ＳＣＦ結合における陽性対照として使用した。ヒトＩｇＧ４抗体を、陰性アイソタイプ対照抗体として使用した。ハイグロマイシンＢで処置した細胞を初期継代（Ｐ３）細胞と比較した。最大平均蛍光強度（ＭＦＩ）及び抗体用量応答曲線は、初期継代（Ｐ３）細胞と同様であった（図８Ａ、図８Ｂ）。

実施例５．フローサイトメトリーによる２Ｇ８及び５Ｈ１０ヒト化ｍＡｂの結合評価
Ｓｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞及びＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２２０細胞（それぞれＳＣＦ２４８＋及びＳＣＦ２２０＋）を利用して、キメラ型抗体２Ｇ８及び５Ｈ１０、ならびにそれらのヒト化バリアントの結合性及び特異性を試験した。両方の実験セットにおいて、ヒトＩｇＧ４抗体を陰性アイソタイプ対照抗体として使用した。アイソタイプ対照は、Ｓｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞にもＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２２０細胞にも結合しなかった（図９Ａ、９Ｂ、１０Ａ、及び１０Ｂ）。市販の抗ＳＣＦ抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ＥＰ６６５Ｙ／ａｂ５２６０３）は、Ｓｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２２０細胞に結合し、Ｓｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞にはわずかに結合する（１：２５希釈時のみ）ことがわかった（図９Ａ、９Ｂ、１０Ａ、及び１０Ｂ）。２Ｇ８ ＶＨ０／ＶＬ０（キメラ型２Ｇ８）は、そのヒト化クローンよりも強い結合を示した。ただし、２Ｇ８ ＶＨ０／ＶＬ０は、抗体濃度３．３及び１０μｇ／ｍＬでＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２２０細胞との結合も示した（図９Ａ、図９Ｂ）。５Ｈ１０ ＶＨ０／ＶＫ０は、ヒト化クローン５Ｈ１０ ＶＨ３／ＶＫ２、５Ｈ１０ ＶＨ３／ＶＫ３、５Ｈ１０ ＶＨ４／ＶＫ２、５Ｈ１０ ＶＨ４／ＶＫ３、５Ｈ１０ ＶＨ５／ＶＫ２、及び５Ｈ１０ ＶＨ５／ＶＫ３に比べて高い結合を示した（図１０Ａ）。５Ｈ１０もそのいずれのヒト化バリアントも、Ｓｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２２０細胞との結合は観察されなかった（図１０Ｂ）。本試験における５０％最大結合（ＢＣ_５０）の観点から、示された５Ｈ１０ヒト化バリアント間の差異を表５に示す。５Ｈ１０クローンの結合は、Ｓｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞上では３．３μｇ／ｍＬで飽和に達した。（図１０Ａ）。

Ｓｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞を利用して、５Ｈ１０及び２Ｇ８のさらなるヒト化バリアントの結合を試験した。２Ｇ８ ＶＨ０／ＶＬ０（キメラ型）は、ヒト化バリアントよりも強い細胞結合を示した（図１１Ａ）。ヒト化５Ｈ１０クローン５Ｈ１０ ＶＨ１／ＶＫ１、５Ｈ１０ ＶＨ１／ＶＫ２、５Ｈ１０ ＶＨ１／ＶＫ３、５Ｈ１０ ＶＨ２／ＶＫ２、及び５Ｈ１０ ＶＨ２／ＶＫ３の結合プロファイルは５Ｈ１０ ＶＨ０／ＶＫ０と同等であった（図１１Ｂ）。上に提示したＢｉａｃｏｒｅデータと一致するように、ヒト化バリアント５Ｈ１０ ＶＨ１／ＶＫ４は標的結合を喪失した（図１１Ｂ）。アイソタイプ対照は、Ｓｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞に結合しなかった。これらの試験で提示されたデータに基づき、ヒト化２Ｇ８及び５Ｈ１０ ｍＡｂｓにＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞に対する結合スコアを割り当て、上の表２及び表３に提示している。

別の実験では、５Ｈ１０クローンＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ３のＳＣＦ２４８発現細胞株との結合をフローサイトメトリーにより評価した。図１１Ｃ及び図１１Ｄに示されているように、ＶＨ１／ＶＫ３及びＶＨ２／ＶＫ３は高い結合性を示し、１μｇ／ｍＬで最大となった。陰性対照は二次抗体のみであった。対照のＳＣＦ２２０発現細胞株についての結合は観察されなかった（図示せず）。

実施例６．ＳＣＦとｃ－ｋｉｔとの相互作用のｉｎ ｖｉｔｒｏ遮断
ヒト化５Ｈ１０抗体を、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＳＣＦ－ｃ－ｋｉｔ相互作用と炎症フィードフォワードループを阻害する能力について試験した。表面ＳＣＦ２４８を発現する培養ヒトＩＰＦ筋線維芽細胞（Ｍｆｂ）を、ＳＣＦ応答性細胞株であるＬＡＤ２マスト細胞と重ね合わせた。他の任意の介入がなければ、ＭｆｂはＬＡＤ２細胞を刺激し、それによって産生されたサイトカインがＭｆｂを刺激し、さらなるサイトカイン及び細胞外マトリックスタンパク質が産生される。このアッセイにおいて、炎症及びフィードフォワードループの読出しは、ＣＣＬ１１、コラーゲン１及び３、ならびにフィブロネクチンのｍＲＮＡである。

マウス５Ｈ１０抗体ならびにヒト化（ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ３）５Ｈ１０抗体を１μｇ／ｍＬ及び１０μｇ／ｍＬの濃度でＭｆｂとプレインキュベートして、これらのフィードフォワードループ阻害能力を評価した。結果を図１２Ａ～１２Ｄに示す。ヒト化ＶＨ１／ＶＫ３抗体は、低濃度においてさえも、一貫してＳＣＦ－ｃ－ｋｉｔ相互作用の阻害を示した。

筋線維芽細胞上のＳＣＦ２４８を内在化するヒト化抗体（５Ｈ１０、ＶＨ１／ＶＫ３、及びＶＨ２／ＶＫ３）の能力を評価するため、これらの抗体を、中性ｐＨでは無色であり、エンドソーム内の低ｐＨでは赤色に蛍光発光するｐＨｒｏｄｏ ｒｅｄで標識した。標識抗体を、培養したヒトＩＰＦ筋線維芽細胞と共に４５分間インキュベートし、赤色蛍光を顕微鏡により可視化した。図１３に示されているように、マウス親抗体５Ｈ１０及びキメラ型抗体（ＶＨ０／ＶＫ０）と同様、ヒト化抗体も迅速に内在化された。

実施例７．キメラ型抗体５Ｈ１０及びヒト化リード候補の免疫原性
５つのヒト化抗体５Ｈ１０ ＶＨ１／ＶＫ３、５Ｈ１０ ＶＨ２／ＶＫ３、５Ｈ１０ ＶＨ３／ＶＫ３、５Ｈ１０ ＶＨ４／ＶＫ３、及び５Ｈ１０ ＶＨ５／ＶＫ３の免疫原性をキメラ型抗体５Ｈ１０ ＶＨ０／ＶＫ０と比較した。

ＰＢＭＣ生存率に及ぼす試料の任意の細胞毒性作用の初期評価を、ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）時間経過アッセイで使用したドナー５例に対し実施した。ＣＤ８＋Ｔ細胞枯渇ＰＢＭＣを試料と共にインキュベートし、７日目にＬｕｎａ－ＦＬ（商標）Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｅｒを用いて細胞の生存率を定量した。その結果、抗ＳＣＦ ｍＡｂで処置したドナー５例由来のＰＢＭＣの平均生存率は、培地のみで処置した細胞と同様であり、８３％～９０％の範囲であることが示された（図１４）。ＫＬＨ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＵＫ）をネオ抗原として使用した。エキセナチド（Ｂｙｄｕｅｏｎ，ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ，ＵＫ）を臨床ベンチマーク対照として使用した。図１５Ａ～Ｈ及び表６は、試料及び対照によって誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答のＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）時間経過Ｔ細胞増殖アッセイで得られた結果を明らかにするものである。臨床ベンチマークのエキセナチド及びネオ抗原のＫＬＨは、いずれも陽性増殖応答を誘発した。５Ｈ１０ ＶＨ１／ＶＫ３、５Ｈ１０ ＶＨ２／ＶＫ３、及び５Ｈ１０ ＶＨ３／ＶＫ３は、低頻度の陽性応答（ＳＩ≧１．９０、ｐ＜０．０５）率を誘導し、４％～８％の範囲であった。試料５Ｈ１０ ＶＨ５／ＶＫ３は、ドナーコホートの１７％でより高い陽性応答を誘導した。５Ｈ１０ ＶＨ０／ＶＫ０及び５Ｈ１０ ＶＨ４／ＶＫ３は、いかなる陽性応答も誘導しなかった。陽性Ｔ細胞増殖応答の平均の大きさは、全試料において２．１４～３．６１であった（表７）。

増殖データセット全体の分散分析（ＡＮＯＶＡ）（５～８日目の増殖の最大規模を使用）を使用して、互いと比べて、及び臨床ベンチマークのエキセナチドに比べて、試験条件に対するＣＤ４＋Ｔ細胞応答の最大の大きさに統計的有意差があるかどうかを判定した（図１６）。エキセナチドに対するＴ細胞増殖応答の最大の大きさは、全試料に対する応答よりも統計的に高かった（表８）。

要約すると、臨床的免疫原性のリスクは、ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）時間経過Ｔ細胞アッセイにおいて、欧州及び北米の集団を代表する（ＨＬＡアロタイプに基づく）健康なドナー２４例から単離した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用いて、ｅｘ ｖｉｖｏ Ｔ細胞応答を測定することにより、決定した。Ｔ細胞応答は、増殖アッセイ（［^３Ｈ］－チミジン取込み）を用いて測定した。その結果、リードヒト化抗体のうち４つにおいて、臨床的免疫原性の潜在可能性が低いことが示された。

実施例８．肺の炎症及び線維症のブレオマイシンモデルにおけるマウス５Ｈ１０の評価
ブレオマイシン肺線維症の動物モデルを用いて、５Ｈ１０のｉｎ ｖｉｖｏでの効果を評価した。ブレオマイシンは、ヒト及び動物に肺線維症を引き起こす化学療法剤である。Ｃ５７ＢＬ６マウスに、１日目にブレオマイシンを気管内投与し、８日目及び１２日目に２０ｍｇ／ｋｇの５Ｈ１０、またはアイソタイプが一致した対照抗体を腹腔内投与した。１７日目に試料を採取した。５Ｈ１０処置動物では、有意な肺組織像の改善（図１７）、肺ヒドロキシプロリン（線維化の定量的尺度；図１８）の減少、経時的な体重の維持（図１９）、炎症性サイトカイン及び筋線維芽細胞活性化マーカーにおけるｍＲＮＡの減少（図２０）、ならびに肺マスト細胞、好酸球、及びＩＬＣ２リンパ球の減少（図２１）が認められた。また、肺機能検査も有意に改善した（図２２）。このように、本試験からは、肺線維症のｉｎ ｖｉｖｏモデルにおいて、５Ｈ１０が線維症及び炎症を低減し、肺機能を改善するのに有効であることが示された。

実施例９．慢性アレルギー性喘息モデルにおけるヒト化５Ｈ１０抗体の評価
慢性アレルギー性喘息のｉｎ ｖｉｖｏモデルでヒト化５Ｈ１０抗体を試験した。マウスを腹腔内及び皮下でゴキブリ抗原（ＣＲＡ）に感作させ、次に１４、１８、２２、及び２６日目に鼻腔内ブースティングを行った。２６、２９、３２、及び３４日目に、指示ヒト化５Ｈ１０抗体またはＰＢＳ対照を２０ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与し、または対照の無関係な抗体を投与した。３０及び３４日目には、ＣＲＡも気管内投与した。３５日目に検体を採取した。試験設計の模式図を図２３に示す。

抗体５Ｈ１０ ＶＨ１／ＶＫ３で処置した動物では、ＰＢＳ対照及び他のヒト化バリアント抗体に比べて気道抵抗が有意に少なかった（図２４Ａ）。さらに、ＶＨ１／ＶＫ３またはＶＨ２／ＶＫ３で処置した動物では、慢性喘息対照に対して（すなわち、いかなる抗体処置もせずにＣＲＡを投与した動物（ＰＢＳ対照）に比べて）、肺ＩＬ－１３ ｍＲＮＡに有意な減少が見られた（図２４Ｂ）。さらに、ＶＨ１／ＶＫ３抗体処置を行った動物では、マトリックス遺伝子の発現が有意に低減した（図２４Ｃに示されているコラーゲン１ ｍＲＮＡ、図２４Ｄに示されているコラーゲン３ ｍＲＮＡ）。また、ＳＣＦ２４８ ｍＲＮＡの発現もＶＨ１／ＶＫ３で処置した動物で有意に低減した（図２４Ｅ）。図２５Ａ、２５Ｂ、及び２５Ｃは、ＶＨ１／ＶＫ３投与により、１ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇの濃度で粘液タンパク質Ｇｏｂ５ならびにサイトカインＩＬ－１３及びＩＬ－５のｍＲＮＡレベルが低減したことを示している。したがって、このデータは、ＶＨ１／ＶＫ３抗体は慢性喘息モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏでサイトカイン及びマトリックス遺伝子の発現を遮断することを示したものである。

実施例１２．抗ＳＣＦ２４８抗体の安全性、薬物動態、及び薬力学を評価するための第１ａ相臨床試験
第１ａ相試験では、１１０例の健康なボランティアを登録する。主な目的は、ヒト化抗ＳＣＦ２４８抗体５Ｈ１０について、安全性評価を得ること、ならびに正確な薬物動態及び薬力学データを得ることである。

単回または複数回の漸増用量のヒト化５Ｈ１０またはプラセボを、静脈内または皮下のいずれかで投与する。６～８例の対象を１つの群とする。開始用量は、ＧＬＰ（優良試験所基準）に従って実施する毒性試験に基づく。ベースライン薬物動態を全ての開発及び製品寿命のために取得する。薬力学を評価するため、ＳＣＦ１６５などの血清炎症マーカーに加えて、マスト細胞前駆細胞及び２型自然リンパ球（ＩＬＣ２）細胞を含めた循環ｃ－ｋｉｔ＋細胞数を評価する。

実施例１３．患者における抗ＳＣＦ２４８抗体の安全性及び有効性を評価するための臨床試験
臨床試験で、炎症性障害（例えば、アトピー性皮膚炎、慢性蕁麻疹、肺線維症、及び／またはその他）を患う患者を登録する。本試験の１つの目的は、ヒト化５Ｈ１０抗体と罹患患者における薬力学的マーカー（例えば、循環ｃ－ｋｉｔ＋細胞（例えば、マスト細胞前駆細胞及び２型自然リンパ球（ＩＬＣ２）細胞）の数）との間の用量応答関係を確立することである。また、炎症バイオマーカー（例えば、ＡＤＡＭ８、ＣＣＬ１７、ＥＰＸ、ＲＮＡＳＥ３、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５、トリプターゼ、ヒスタミン、及びＳＣＦ１６５）も測定する。

５Ｈ１０抗体を単回用量漸増で各対象群に投与する。開始用量は、第１ａ相試験の薬力学バイオマーカーに基づく。患者は、１か月、２か月、３か月、またはそれ以上の月数の間、治療を受ける。本試験の結果は、ヒト化５Ｈ１０抗体が、炎症性障害及び線維性疾患の安定化及び／または治療及び／または進行防止に有効であることを示すであろう。

本明細書に引用する全ての刊行物、特許、及び特許出願は、参照によりそれらの全体が本明細書に具体的に援用される。記載された発明について、その具体的な実施形態を参照しながら説明してきたが、当業者は、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更がなされてもよく、かつ等価物が代用されてもよいことを理解するはずである。加えて、特定の状況、材料、物質の組成物、プロセス、プロセスステップ（１つまたは複数）は、記載された発明の目的、趣旨、及び範囲に適合するように多くの修正が施されてもよい。このような変更は全て、本明細書に付属する請求項の範囲内であることが意図されている。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
幹細胞因子（ＳＣＦ）に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントであって、前記抗体が、配列番号１、２、及び３をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、前記抗体またはそのフラグメント。
(項目２)
前記抗体が、それぞれ配列番号４、５、及び６を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３をさらに含む、項目１に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目３)
前記抗体が、配列番号７、８、９、１０、及び１１から選択される配列に少なくとも８０％の同一性を有する重鎖可変領域を含む、項目１または項目２に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目４)
前記抗体が、配列番号７、８、９、１０、及び１１から選択される配列に少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変領域を含む、項目３に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目５)
前記抗体が、配列番号１３、１４、１５、及び１６から選択される配列に少なくとも８０％の同一性を有する軽鎖可変領域を含む、項目１または項目２に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目６)
前記抗体が、配列番号１３、１４、１５、及び１６から選択される配列に少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変領域を含む、項目５に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目７)
前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号７、８、９、１０、及び１１から選択される重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１３、１４、１５、及び１６から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む、項目１に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目８)
前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号７に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む、項目１に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目９)
前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号８に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む、項目１に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目１０)
前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号９に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む、項目１に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目１１)
前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号１０に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む、項目１に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目１２)
前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号１１に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む、項目１に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目１３)
前記抗体がヒト化されている、項目１または２に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目１４)
前記抗体がモノクローナル抗体である、項目１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目１５)
前記抗体がヒトＩｇＧ４ドメインを含む、項目１４に記載の抗体。
(項目１６)
前記ＩｇＧ４ドメインが、アミノ酸残基２４１におけるＳ２４１Ｐ変異及びアミノ酸残基２４８におけるＬ２４８Ｅ変異を含み、前記残基のナンバリングがＫａｂａｔナンバリングシステムのナンバリングである、項目１５に記載の抗体。
(項目１７)
前記抗体が、配列番号４２に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖とを含む、項目１４～１６のいずれか１項に記載の抗体。
(項目１８)
前記抗体が、配列番号４３に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖とを含む、項目１４～１６のいずれか１項に記載の抗体。
(項目１９)
前記抗体またはそのフラグメントが、ＳＣＦとｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を遮断する、項目１～１８のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目２０)
前記抗体またはそのフラグメントが、ＳＣＦの内在化を引き起こす、項目１～１８のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目２１)
前記抗体が、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する、項目１～２０のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目２２)
前記抗体がＳＣＦ２２０に結合しない、項目１～２１のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目２３)
前記フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’ _）２ 、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、及びシングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）から選択される、項目１～１４または１７～２２のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目２４)
項目１～２３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントをコードする、単離された核酸分子。
(項目２５)
項目１～２３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントをコードする核酸セグメントを含む、発現ベクター。
(項目２６)
項目２５に記載の発現ベクターを含む、組換え型宿主細胞。
(項目２７)
幹細胞因子アイソフォーム２４８（ＳＣＦ２４８）に特異的に結合する抗体を作製するための方法であって、配列番号３０を含むペプチドまたはそのフラグメントで宿主動物を免疫し、前記免疫された宿主動物から抗体を取得することを含む、前記方法。
(項目２８)
前記フラグメントが少なくとも５個のアミノ酸を含む、項目２７に記載の方法。
(項目２９)
前記フラグメントが少なくとも１０個のアミノ酸を含む、項目２７に記載の方法。
(項目３０)
前記ペプチドが配列番号３０からなる、項目２７に記載の方法。
(項目３１)
前記ペプチドが少なくとも５個のアミノ酸を含み、前記ペプチドのＮ末端アミノ酸が、配列番号３０の１位にあるアラニンである、項目２７に記載の方法。
(項目３２)
前記ペプチドが少なくとも１０個のアミノ酸を含む、項目３１に記載の方法。
(項目３３)
前記免疫された宿主動物からの抗体が、前記宿主動物から単離された免疫細胞から得られる、項目２７～３２のいずれか１項に記載の方法。
(項目３４)
前記免疫細胞を用いてハイブリドーマを生成することをさらに含む、項目３３に記載の方法。
(項目３５)
項目２７～３４のいずれか１項に記載の方法によって調製された抗体であって、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する、前記抗体。
(項目３６)
それを必要とする対象の慢性炎症を阻害するための方法であって、前記対象に、項目１～２３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントを投与することを含む、前記方法。
(項目３７)
それを必要とする対象の線維症を阻害するための方法であって、前記対象に、項目１～２３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントを投与することを含む、前記方法。
(項目３８)
それを必要とする対象の慢性炎症性疾患または線維性疾患を治療するための方法であって、前記対象に、項目１～２３のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記方法。
(項目３９)
前記慢性炎症性疾患または前記線維性疾患が、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、原発性硬化性胆管炎、肺線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、嚢胞性線維症、気管支周囲線維症、過敏性肺炎、喘息、ブレオマイシン肺、強皮症、肝硬変、心内膜心筋線維症、線維筋痛症、及び好酸球性食道炎からなる群より選択される、項目３８に記載の方法。
(項目４０)
前記肺線維症が、特発性肺線維症または強皮症肺線維症である、項目３９に記載の方法。
(項目４１)
前記方法が、前記対象に追加の治療剤を投与することをさらに含む、項目３７に記載の方法。
(項目４２)
ＳＣＦ２４８に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントであって、配列番号３３の少なくとも８個の連続したアミノ酸を含むエピトープに結合し、前記抗体が、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの相互作用を阻害する、前記抗体またはそのフラグメント。
(項目４３)
前記エピトープが配列番号３３を含む、項目４２に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目４４)
前記エピトープが配列番号３３からなる、項目４２に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目４５)
前記抗体またはそのフラグメントが、ＳＣＦ２４８が免疫細胞上のｃ－Ｋｉｔに結合するのを遮断する、項目４２に記載の抗体またはそのフラグメント。
(項目４６)
免疫細胞の活性化を阻害するための方法であって、前記免疫細胞に、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを接触させることを含み、前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号３３の少なくとも８個の連続したアミノ酸を含むエピトープに結合し、前記抗体が、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔの相互作用を阻害する、前記方法。
(項目４７)
前記方法がｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｖｏで実施される、項目４６に記載の方法。
(項目４８)
それを必要とする対象の炎症を阻害するための方法であって、前記対象に、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを投与することを含み、前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号３３の少なくとも８個の連続したアミノ酸を含むエピトープに結合し、前記抗体が、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔの相互作用を阻害する、前記方法。
(項目４９)
それを必要とする対象の線維症を阻害するための方法であって、前記対象に、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを投与することを含み、前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号３３の少なくとも８個の連続したアミノ酸を含むエピトープに結合し、前記抗体が、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔの相互作用を阻害する、前記方法。
(項目５０)
それを必要とする対象の炎症性疾患または炎症性障害を治療するための方法であって、前記対象に、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを投与することを含み、前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号３３の少なくとも８個の連続したアミノ酸を含むエピトープに結合し、前記抗体が、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔの相互作用を阻害する、前記方法。
(項目５１)
前記炎症性疾患または前記炎症性障害が、慢性炎症性疾患または炎症性障害である、項目５０に記載の方法。
(項目５２)
それを必要とする対象の線維性疾患を治療するための方法であって、前記対象に、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを投与することを含み、前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号３３の少なくとも８個の連続したアミノ酸を含むエピトープに結合し、前記抗体が、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔの相互作用を阻害する、前記方法。
(項目５３)
前記炎症性疾患もしくは前記炎症性障害または前記線維性疾患が、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、原発性硬化性胆管炎、肺線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、嚢胞性線維症、気管支周囲線維症、過敏性肺炎、喘息、ブレオマイシン肺、強皮症、肝硬変、心内膜心筋線維症、線維筋痛症、及び好酸球性食道炎からなる群より選択される、項目５０～５２のいずれか１項に記載の方法。
(項目５４)
前記肺線維症が、特発性肺線維症または強皮症肺線維症である、項目５３に記載の方法。
(項目５５)
医薬品として使用するための、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントであって、配列番号３３の少なくとも８個の連続したアミノ酸を含むエピトープに結合し、前記抗体が、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの相互作用を阻害する、前記抗体またはそのフラグメント。
(項目５６)
治療方法で使用するための、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントであって、配列番号３３の少なくとも８個の連続したアミノ酸を含むエピトープに結合し、前記抗体が、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの相互作用を阻害し、前記方法が、対象の免疫細胞の活性化の阻害、対象の炎症の阻害、対象の線維症の阻害、炎症性疾患もしくは炎症性障害の治療、慢性炎症性疾患もしくは炎症性障害の治療、及び／または線維性疾患の治療を含む、前記方法。
(項目５７)
医薬品として使用するための、項目１～２１、３４、または４２～４５のいずれか１項に記載の抗体もしくはそのフラグメント、または項目２２に記載の医薬組成物。
(項目５８)
対象の慢性炎症を阻害する、線維症を阻害する、慢性炎症性疾患を治療する、及び／または線維性疾患を治療する方法に使用するための、項目１～２１、３４、または４２～４５のいずれか１項に記載の抗体もしくはそのフラグメント、または項目２２に記載の医薬組成物。
(項目５９)
前記慢性炎症性疾患または前記線維性疾患が、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、原発性硬化性胆管炎、肺線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、嚢胞性線維症、気管支周囲線維症、過敏性肺炎、喘息、ブレオマイシン肺、強皮症、肝硬変、心内膜心筋線維症、線維筋痛症、及び好酸球性食道炎からなる群より選択される、項目５６または項目５８に記載の使用のための抗体またはそのフラグメント。
(項目６０)
前記肺線維症が特発性肺線維症または強皮症肺線維症である、項目５９に記載の使用のための抗体またはそのフラグメント。
(項目６１)
前記使用が、前記対象に追加の治療剤を投与することをさらに含む、項目５５～６０のいずれか１項に記載の使用のための抗体またはそのフラグメント。

Claims (13)

1. 幹細胞因子２４８（ＳＣＦ２４８）に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、配列番号１、２、及び３をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４、５、及び６を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含み、
   前記抗体がヒト化されており、前記抗体が、
   （ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
   （ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と
   を含む、前記抗体。
2. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１に記載の抗体。
3. 前記抗体がヒトＩｇＧ４ドメインを含む、請求項２に記載の抗体。
4. 前記ＩｇＧ４ドメインが、アミノ酸残基２４１におけるＳ２４１Ｐ変異及びアミノ酸残基２４８におけるＬ２４８Ｅ変異を含み、前記残基のナンバリングがＫａｂａｔナンバリングシステムのナンバリングである、請求項３に記載の抗体。
5. 前記抗体が、配列番号４２に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖とを含む、請求項２に記載の抗体。
6. （ａ）前記抗体が、ＳＣＦとｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を遮断する、
   （ｂ）前記抗体が、ＳＣＦの内在化を引き起こす、及び／または
   （ｃ）前記抗体が、ＳＣＦ２２０に結合しない、
   請求項１に記載の抗体。
7. 前記抗体が、配列番号３３の少なくとも８個の連続したアミノ酸を含むエピトープに結合し、前記抗体が、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの相互作用を阻害する、請求項１に記載の抗体。
8. 前記エピトープが配列番号３３からなる、請求項７に記載の抗体。
9. 前記ヒトＩｇＧ４ドメインが、配列番号４０のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗体。
10. 軽鎖ヒトＩｇカッパ定常領域を含む、請求項１に記載の抗体。
11. 前記軽鎖ヒトＩｇカッパ定常領域が配列番号４１のアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の抗体。
12. 軽鎖ヒトＩｇラムダ定常領域を含む、請求項１に記載の抗体。
13. 幹細胞因子２４８（ＳＣＦ２４８）に特異的に結合する抗ＳＣＦ２４８抗体であって、
    （ｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖と、
    （ｉｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖と
    を含む、抗体。