JP7717687B2 - 腎疾患における抗幹細胞因子抗体及びその使用方法 - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月１６日に出願された米国仮特許出願第６２／９００，９２７号の優先権の利益を主張するものであり、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

電子的に提出されたテキストファイルの説明
本明細書と共に電子的に提出されるテキストファイルの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：コンピュータ読み取り可能な形態コピーの配列表（ファイル名：ＯＰＳＬ＿００１＿０２ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５、データ記録日：２０２０年９月１６日、ファイルサイズ５８キロバイト）

炎症性疾患は、世界中の罹患率及び死亡率の主要な原因である。いくつかのタイプの慢性炎症は、線維症につながる可能性があり、これは、臓器または組織の正常な構成要素としての線維性組織の形成とは対照的に、修復的または反応的プロセスとして臓器または組織における過剰な線維性結合組織の形成または発生である。慢性炎症及び線維症は、ほとんどすべての組織及び臓器系に影響を及ぼす可能性があり、線維性組織リモデリングは、移植レシピエントにおける癌転移に影響を及ぼし、慢性移植片拒絶を加速させる可能性がある。腎臓の慢性炎症は、死亡率の高い線維性疾患につながる可能性がある。

幹細胞因子（ＳＣＦ）及びその受容体ｃ－Ｋｉｔは、慢性炎症の持続及び線維性疾患における重要な因子である（Ｅｌ－Ｋｏｒａｉｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．６０：１６７（２００１）、Ｐｏｗｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８９：Ｇ２（２００５）、Ｅｌ Ｋｏｓｓｉ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓ．４１：７８５（２００３）、Ｐｏｗｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７７：Ｃ１８３（１９９９） Ｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．２０１３ Ｊｕｎ；２３０（２）：２０５－１４．、Ｂｅｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．２００６ Ｊｕｎ；８６（６）：５５７－６５、Ｒａｓｋｙ ｅｔ ａｌ Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０２０ Ｊａｎ １；３１８（１）：Ｌ２００－Ｌ２１１）。ｃ－Ｋｉｔは、多くの細胞型に存在するＩＩＩ型受容体－チロシンキナーゼである（Ｏｒｒ－Ｕｒｔｒｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １０９：９１１（１９９０）。肥満細胞、好酸球、及び自然リンパ球細胞２及び３（ＩＬＣ２及びＩＬＣ３）などの免疫細胞はすべて、関連した疾患及び臓器に応じて、慢性炎症プロセスを駆動し得るｃ－Ｋｉｔ＋細胞である。炎症性応答の開始時に、ＳＣＦを含む種々のメディエーターは、ｃ－Ｋｉｔ＋免疫細胞を活性化し、これは同様に、サイトカインを産生し、線維芽細胞を活性化した筋線維芽細胞にする。筋線維芽細胞は、細胞外マトリックスタンパク質、コラーゲン、及びフィブロネクチンを分泌し、組織の線維化をもたらす。活性化された筋線維芽細胞、活性化された上皮、内皮、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、単球、及び他の細胞もまた、細胞表面上でＳＣＦを発現し、これはより多くのｃ－Ｋｉｔ＋免疫細胞を活性化し、より多くのサイトカイン放出をもたらし、炎症を持続させる。
腎臓の炎症性疾患及び線維性疾患に対するより効率的かつより特異的な治療の必要性が当該技術分野に存在する。本開示は、この必要性及び他の必要性に対処する。

Ｅｌ－Ｋｏｒａｉｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．６０：１６７（２００１） Ｐｏｗｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８９：Ｇ２（２００５） Ｅｌ Ｋｏｓｓｉ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓ．４１：７８５（２００３） Ｐｏｗｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７７：Ｃ１８３（１９９９） Ｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．２０１３ Ｊｕｎ；２３０（２）：２０５－１４． Ｂｅｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．２００６ Ｊｕｎ；８６（６）：５５７－６５ Ｒａｓｋｙ ｅｔ ａｌ Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０２０ Ｊａｎ １；３１８（１）：Ｌ２００－Ｌ２１１ Ｏｒｒ－Ｕｒｔｒｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １０９：９１１（１９９０）

一態様では、本開示は、腎疾患または障害を有する患者に、幹細胞因子（ＳＣＦ）に特異的に結合する抗体またはその断片を投与することを含む、腎疾患及び障害を治療する方法を提供する。実施形態では、腎疾患または障害は、炎症性腎疾患、線維性腎疾患、及び／または組織リモデリング腎疾患である。実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体及びその断片は、ＳＣＦアイソフォームＳＣＦ２４８に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体及びその断片は、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、重鎖ＣＤＲ１ ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１、２、及び３を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体及びその断片は、軽鎖ＣＤＲを含み、軽鎖ＣＤＲ１ ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４、５、及び６を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体及びその断片は、それぞれ、配列番号１、３７、及び３を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体及びその断片は、配列番号７、８、９、１０、１１、及び１２からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体及びその断片は、配列番号１３、１４、１５、１６、及び１７からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体及びその断片は、配列番号７、８、９、１０、１１、及び１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１３、１４、１５、１６、及び１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号７に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む抗体またはその断片を対象に投与することを含む、腎臓の炎症性疾患及び／または線維性疾患を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該抗体またはその断片は、配列番号８に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む、請求項１に記載の抗体またはその断片。いくつかの実施形態では、当該抗体またはその断片は、配列番号９に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む。いくつかの実施形態では、当該抗体またはその断片は、配列番号１０に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む。いくつかの実施形態では、当該抗体またはその断片は、配列番号１１に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む。いくつかの実施形態では、当該抗体またはその断片は、配列番号１２に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む。

いくつかの実施形態では、当該抗体またはその断片は、ヒト化される。いくつかの実施形態では、当該抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、当該抗体は、ヒトＩｇＧ１ドメインまたはヒトＩｇＧ４ドメインを含む。いくつかの実施形態では、当該抗体は、抗原結合断片であり、この断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）から選択される。

いくつかの実施形態では、当該抗体またはその断片は、ＳＣＦ（例えば、ＳＣＦ２４８）とｃ－ｋｉｔとの間の相互作用を遮断する。いくつかの実施形態では、当該抗体は、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、当該抗体は、ＳＣＦ２２０に結合しない。いくつかの実施形態では、当該抗体は、ＳＣＦの内在化を引き起こし、それを細胞表面上で利用できなくすることによって、ＳＣＦ２４８とｃ－ｋｉｔとの相互作用を防止する。

一態様では、本開示は、本明細書で提供される抗体またはその断片を含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で提供される抗体またはその断片をコードする単離核酸分子を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、抗体またはその断片をコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、発現ベクターを含む組換え宿主細胞を提供する。

一態様では、本開示は、宿主動物を、配列番号３０（ＡＳＳＬＲＮＤＳＳＳＳＮＲＫＡＫＮＰＰＧＤ）またはその断片を含むペプチドで免疫化することと、免疫化宿主動物から抗体を得ることと、を含む、幹細胞因子アイソフォーム２４８（ＳＣＦ２４８）に特異的に結合する抗体を作製するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、宿主動物は、ヒトではない。いくつかの実施形態では、配列番号３０の断片は、配列番号３０の少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または２０個の連続したアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、配列番号３０の断片は、配列番号３０の５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、または２０個の連続したアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、配列番号３０の断片のＮ末端アミノ酸は、配列番号３０のＮ末端の１位のアラニンである。いくつかの実施形態では、本方法は、宿主動物を配列番号３０からなるペプチドで免疫化することを含む。いくつかの実施形態では、免疫化宿主動物からの抗体は、宿主動物から単離された免疫細胞から得られる。いくつかの実施形態では、本方法は、免疫細胞を使用してハイブリドーマを生成することをさらに含む。したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを提供する。

一態様では、本開示は、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する抗体またはその断片を提供し、抗体またはその断片は、配列番号３３の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、または少なくとも１３個の連続したアミノ酸を含むエピトープに結合し、抗体は、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの相互作用を阻害する。さらなる実施形態では、エピトープは、配列番号３３または配列番号３６を含む。さらに別の実施形態では、エピトープは、配列番号３３または配列番号３６からなる。

一態様では、本開示は、ＳＣＦとｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を阻害するための組成物及び方法を提供する。Ｃ－ｋｉｔは、免疫細胞、造血幹細胞、及びいくつかの構造細胞上で発現される。Ｃ－ｋｉｔのリガンドＳＣＦ２４８は、筋線維芽細胞、活性化上皮、内皮、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、単球などで上方調節され得る。いくつかの実施形態では、組成物及び方法は、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を特異的に阻害する。例えば、いくつかの実施形態では、組成物及び方法は、筋線維芽細胞上のＳＣＦ２４８と免疫細胞上のｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を特異的に阻害する。別の例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物及び方法は、筋線維芽細胞、活性化上皮、内皮、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、及び／または単球上のＳＣＦ２４８と、免疫細胞及び／または構造細胞上のｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を特異的に阻害する。いくつかの実施形態では、本方法は、筋線維芽細胞上のＳＣＦ２４８を、本明細書で提供される抗体またはその断片と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその断片は、ｃ－ＫｉｔへのＳＣＦ２４８の結合を遮断する。いくつかの実施形態では、遮断は、立体障害を介する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその断片は、ＳＣＦ２４８を内在化する。

いくつかの実施形態では、本開示は、炎症の阻害を必要とする対象に、本明細書で提供される抗体またはその断片を投与することを含む、炎症の阻害を必要とする対象における炎症を阻害するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、炎症性疾患の阻害を必要とする対象に、本明細書で提供される抗体またはその断片を投与することを含む、炎症性疾患の阻害を必要とする対象における炎症性疾患を阻害するための方法を提供する。さらなる実施形態では、炎症性疾患は、慢性炎症性疾患である。いくつかの実施形態では、本開示は、炎症及び／または慢性炎症性疾患の治療を必要とする対象に、本明細書で提供される抗体またはその断片を投与することを含む、炎症及び／または慢性炎症性疾患の治療を必要とする対象における炎症及び／または慢性炎症性疾患を治療するための方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、線維症の阻害を必要とする対象に、本明細書で提供される抗体またはその断片を投与することを含む、線維症の阻害を必要とする対象における線維症を阻害するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、線維性疾患の治療を必要とする対象に、本明細書で提供される抗体またはその断片を投与することを含む、線維性疾患の治療を必要とする対象における線維性疾患を治療するための方法を提供する。実施形態では、本方法は、１つ以上の追加の療法及び／または治療薬を投与することをさらに含む。

いくつかの実施形態では、炎症性腎疾患または線維性腎疾患は、腎臓の腎線維症、間質性線維症及び尿細管萎縮症（ＩＦＴＡ）、慢性腎疾患、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、糸球体腎炎、慢性腎同種移植片拒絶反応、腎原性全身性線維症、及び腎症（例えば、ＩｇＡ腎症、巣状分節性糸球体硬化症、急速進行性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、ループス腎炎、高血圧性腎症、または糖尿病性腎症）からなる群から選択される。

組織損傷／炎症性疾患プロセスの概略図を提供する。 本開示の抗ＳＣＦ２４８抗体、５Ｈ１０の例示的な機序を示す。５Ｈ１０抗体は、図において「ＯｐＳＣＦ」と称される。 ＳＣＦ、ＳＣＦ２２０、及びＳＣＦ２４８のアイソフォーム、ならびに単量体切断細胞外ドメイン、ＳＣＦ１６５を示す。ＳＣＦ１６５は、エクソン６領域内のその切断部位でのＳＣＦ２４８の切断時に放出される。 ＳＣＦを発現しない対照細胞（左パネル）、ＳＣＦ２２０を発現するがＳＣＦ２４８を発現しない細胞（中央パネル）、及びＳＣＦ２４８を発現するがＳＣＦ２２０を発現しない細胞（右パネル）へのマウス５Ｈ１０抗体の結合を示すヒストグラムのセットである。 完全な１９４アミノ酸ＳＣＦ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対する、１６５アミノ酸切断型ＳＣＦ ＥＣＤへのマウス５Ｈ１０抗体の結合を示す。 培養したヒトＩＰＦ筋線維芽細胞をｐＨｒｏｄｏ赤標識２Ｇ８、５Ｈ１０、または対照ＩｇＧ抗体と接触させた後のフローサイトメトリーによって測定された平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。 ５Ｈ１０抗体またはＩｇＧ対照の存在下で好酸球をＳＣＦ２４８発現細胞と接触させた後のｃ－ｋｉｔシグナル伝達のＰ１３Ｋ／ＡＫＴ経路及びＭＥＫ／ＥＲＫ経路の活性化を示す。５Ｈ１０抗体は、両方の経路の活性化を有意に低下させた。 Ｓｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞へのフローサイトメトリーによって異なる抗体濃度での５Ｈ１０ヒト化バリアントの結合を示す。Ａにおいて、示されるＶＨは、ＶＫ３と対合される。Ｂにおいて、示される５Ｈ１０抗体は、ＶＨ１／ＶＫ３である。 ヒトＩＰＦ筋線維芽細胞（Ｍｆｂ）を陽性対照（イレレバント抗体）または図中の各バーの下に示す抗体でプレインキュベーションした後の、ＣＣＬ１１のｍＲＮＡレベルの変化を示す。マウス親抗体は、図において「５Ｈ１０」として示され、ヒト化５Ｈ１０抗体ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ３も示されるように試験した。試験した抗体濃度は、１μｇ／ｍＬまたは１０μｇ／ｍＬであった。 ヒトＩＰＦ筋線維芽細胞（Ｍｆｂ）を陽性対照（イレレバント抗体）または図中の各バーの下に示す抗体でプレインキュベーションした後の、コラーゲン１Ａ１のｍＲＮＡレベルの変化を示す。マウス親抗体は、図において「５Ｈ１０」として示され、ヒト化５Ｈ１０抗体ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ３も示されるように試験した。試験した抗体濃度は、１μｇ／ｍＬまたは１０μｇ／ｍＬであった。 ヒトＩＰＦ筋線維芽細胞（Ｍｆｂ）を陽性対照（イレレバント抗体）または図中の各バーの下に示す抗体でプレインキュベーションした後の、フィブロネクチンのｍＲＮＡレベルの変化を示す。マウス親抗体は、図において「５Ｈ１０」として示され、ヒト化５Ｈ１０抗体ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ３も示されるように試験した。試験した抗体濃度は、１μｇ／ｍＬまたは１０μｇ／ｍＬであった。 ヒトＩＰＦ筋線維芽細胞（Ｍｆｂ）を陽性対照（イレレバント抗体）または図中の各バーの下に示す抗体でプレインキュベーションした後の、コラーゲン３のｍＲＮＡレベルの変化を示す。マウス親抗体は、図において「５Ｈ１０」として示され、ヒト化５Ｈ１０抗体ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ３も示されるように試験した。試験した抗体濃度は、１μｇ／ｍＬまたは１０μｇ／ｍＬであった。 巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）を有する患者におけるＳＣＦ２４８ｍＲＮＡと、糸球体濾過率との間の相関を示す。 巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）を有する患者におけるＳＣＦ２４８ｍＲＮＡと、間質線維症との間の相関を示す。 巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）を有する患者におけるＳＣＦ２４８ｍＲＮＡと、腎生検における単核白血球の割合との間の相関を示す。 ＳＣＦ１６５（及びその誘導体）の血漿レベルが、慢性腎疾患を有する患者における推定糸球体濾過率（ｅＧＦＲ）と逆相関することを示す。 ＳＣＦ１６５（及びその誘導体）の血漿レベルが、慢性腎疾患を有する患者における尿中アルブミン／クレアチニン比（ＵＡＣＲ）と逆相関することを示す。 ヒト糸球体腎炎腎生検の管状領域及びメサンギウム領域におけるＳＣＦ２４８の免疫組織化学染色を示す。Ａは、対照ＩｇＧでの染色を示し、Ｂ及びＣは、管間質におけるＳＣＦ３４８の強陽性染色を示す。 健常腎臓（Ａ）ならびに糖尿病腎症及びＩｇＡ腎症を有する患者の腎臓（それぞれ、Ｂ及びＣ）における肥満細胞トリプターゼの免疫組織化学染色を示す。 ＣＫＤのＴＧＦβマウスモデルにおける生存（Ａ）及び腎臓重量（Ｂ）におけるマウス５Ｈ１０（図中ではＯｐＳＣＦと称される）処置の効果を示す。 ＣＫＤのＴＧＦβマウスモデルにおける生存（Ａ）及び腎臓重量（Ｂ）におけるマウス５Ｈ１０（図中ではＯｐＳＣＦと称される）処置の効果を示す。 ＣＫＤのＴＧＦβマウスモデルにおける生存（Ａ）及び腎臓重量（Ｂ）におけるマウス５Ｈ１０（図中ではＯｐＳＣＦと称される）処置の効果を示す。 （図１５Ａ）ＣＫＤのＴＧＦβマウスモデルにおける糸球体体積腎臓重量におけるマウス５Ｈ１０処置の効果を示す。 （図１５Ｂ）ＣＫＤのＴＧＦβマウスモデルにおけるメサンギウム体積腎臓重量におけるマウス５Ｈ１０処置の効果を示す。 （図１５Ｃ）ＣＫＤのＴＧＦβマウスモデルにおける有足細胞密度腎臓重量におけるマウス５Ｈ１０処置の効果を示す。 いくつかの線維性マトリックスタンパク質における統計的に有意な減少を示すＲＮＡ配列決定を示す。Ａ：コラーゲン３型α１鎖、Ｂ：コラーゲン６型α３鎖、Ｃ：コラーゲンＸＶ型α１鎖、Ｄ：フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン含有１、Ｅ：フィブリン１、Ｆ：マイクロフィブリル関連タンパク質４

幹細胞因子（ＳＣＦ）は、急性及び慢性炎症、線維性疾患、ならびに組織リモデリング疾患の重要な媒介物である。免疫細胞上でＳＣＦとｃ－Ｋｉｔとの相互作用は、炎症及び線維症を開始し、持続させる。本開示は、ＳＣＦとｃ－Ｋｉｔとの相互作用を阻害することによって炎症性及び線維性腎疾患を治療するための組成物及び方法を提供する。したがって、本開示は、慢性腎炎性疾患及び慢性腎疾患などの線維性腎疾患を治療するための方法を提供する。本方法は、炎症性及び／または線維性腎疾患を患っている患者に、ＳＣＦに特異的に結合する抗体またはその断片を投与することを含む。実施形態では、本明細書で提供される抗体及びその断片は、ＳＣＦ２４８に特異的に結合し、ＳＣＦ２２０に結合しない。したがって、本開示は、腎疾患及び障害における炎症及び線維症を阻害するための、ならびに炎症性腎疾患及び線維性腎疾患を治療するための特定の有効な方法を提供する。

定義
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、少なくとも１つの抗原結合ドメインを有する結合タンパク質を指す。本発明の抗体及びその断片は、全抗体またはその任意の断片であり得る。したがって、本発明の抗体及び断片は、モノクローナル抗体またはその断片、及び抗体バリアントまたはその断片、ならびに免疫複合体を含む。抗原結合断片には、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、二重特異性Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）、三重特異性Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ビス－ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）、重鎖のみ抗体（例えば、ラクダ科ＶＨＨ、ラクダ科ナノボディ、サメＩｇ ＮＡＲ）、及び抗原結合を担う全長抗体の部分が含まれる。単離された抗体またはその抗原結合断片は、その天然環境の成分から特定及び分離及び／または回収されたものである。

いくつかの実施形態では、抗体及びその抗原結合断片は、単離抗体及びその断片であり、したがって、本発明は、単離抗体及びその抗原結合断片、ならびにそのような抗体及び断片をコードする核酸、ならびにそのような単離抗体、断片、及び核酸を含む組成物を提供する。「単離された」という用語は、その天然環境から分離された目的の化合物（例えば、抗体または核酸）を指す。本発明はさらに、単離抗体もしくはその断片、またはかかる抗体もしくは断片をコードする核酸を含み、１つ以上の薬学的に許容される担体をさらに含む薬学的組成物を提供する。薬学的に許容される担体としては、例えば、賦形剤、希釈剤、封入材料、充填剤、緩衝剤、または他の薬剤が挙げられる。

本明細書で使用される場合、「誘導される」という用語は、参照抗体または他の結合タンパク質と比較して分子またはポリペプチドを指すために使用される場合、参照抗体または他の結合タンパク質と同じエピトープに特異的であり、かつそれに結合可能な分子またはポリペプチドを意味する。

本明細書で使用される場合、「に特異的な」という語句は、抗体が非特異的相互作用のみによって標的に結合しないことを意味し得、この特性は、アイソタイプ対照または同様のものと比較することによって決定することができる。特異的結合は、単一標的への排他的結合を含み得るが、必ずしも必要ではない。実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＳＣＦ２４８に特異的に結合し、ＳＣＦ２２０には結合しない。

「宿主細胞」という用語は、核酸配列で形質転換されているか、または核酸配列で形質転換されることができ、これにより、目的の遺伝子を発現する細胞を意味する。この用語は、目的の遺伝子が存在する限り、子孫が元の親細胞と形態的に同一であるかどうか、または元の親細胞と遺伝的組成が同一であるかどうかにかかわらず、親細胞の子孫を含む。

ポリペプチド（例えば、抗原結合タンパク質または抗体）の「バリアント」は、１つ以上のアミノ酸残基が、別のポリペプチド配列と比較して、アミノ酸配列に挿入され、欠失され、及び／または置換されているアミノ酸配列を含む。バリアントとしては、本明細書で提供される抗体もしくは断片、または列挙されるＤＮＡもしくはアミノ酸配列を有する抗体もしくは断片に対する列挙されたパーセント同一性を有する抗体及びその断片が挙げられる。

「同一性」という用語は、配列をアラインメント及び比較することによって決定された、２つ以上のポリペプチド分子または２つ以上の核酸分子の配列間の関係を指す。「パーセント同一性」、「パーセント相同性」、「配列同一性」、または「配列相同性」などは、比較されている分子中のアミノ酸またはヌクレオチド間の同一の残基のパーセントを意味し、比較される分子のうちの最小のサイズに基づいて計算される。これらの計算のために、アラインメント中のギャップ（存在する場合）を、好ましくは、特定の数学的モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によって処理される。アラインメントされた核酸またはポリペプチドの同一性を計算するために使用することができる方法としては、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．），１９８８，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．），１９９３，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ Ｉ，（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．），１９９４，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ：Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，１９８７，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．），１９９１，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、及びＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，１９８８，ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．４８：１０７３に記載されているものが挙げられる。パーセント同一性の計算において、比較された配列は、典型的には、配列間の最大の一致を与える方法でアラインメントされる。

「軽鎖」という用語は、結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有する、完全長軽鎖及びその断片を含む。完全長軽鎖は、可変領域ドメイン及び定常領域ドメインを含む。軽鎖の可変領域ドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にある。軽鎖は、カッパ鎖及びラムダ鎖を含む。

「重鎖」という用語は、結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有する、完全長重鎖及びその断片を含む。完全長重鎖は、可変領域ドメイン、３つの定常領域ドメイン、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３を含む。可変重鎖ドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にあり、Ｃ_Ｈドメインは、カルボキシル末端にあり、ＣＨ_３が、ポリペプチドのカルボキシ末端に最も近い。重鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４サブタイプを含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２サブタイプを含む）、ＩｇＭ、ならびにＩｇＥを含む任意のアイソタイプであり得る。「アイソタイプ」という用語は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラスを指す。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＩｇＧ４重鎖、または特定のアミノ酸変異を含むＩｇＧ４重鎖を有する。例えば、いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４は、Ｆａｂアーム交換を阻害するための２２８位（ＥＵ番号付けスキーム、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＮＩＨ １９９１）での変異を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４重鎖は、ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ重鎖である。いくつかの実施形態では、重鎖は、Ｆｃ受容体への結合を低減し、それによって抗体のエフェクター機能を低減または排除する１つ以上のアミノ酸変異を含む。例えば、重鎖は、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２６５、３０９、３３１、及び４０９位（ＥＵ番号付け）のうちの１つ以上に変異を含み得る。

「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の軽鎖及び／または重鎖の一部分を指し、典型的に、重鎖におおよそアミノ末端１２０～１３０のアミノ酸、及び軽鎖には約１００～１１０のアミノ末端アミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、異なる抗体の可変領域は、同じ種の抗体間であっても、アミノ酸配列が広く異なる。抗体の可変領域が、典型的に、特定の抗体のその標的に対する特異性を決定する。「標的」という用語は、本明細書で使用する場合、抗原結合タンパク質によって結合されることが可能な分子または分子の一部分を指す。ある特定の実施形態では、標的は、１つ以上のエピトープを有し得る。ある特定の実施形態では、標的は、抗原である。「抗原結合タンパク質」という語句における「抗原」の使用は、単に、抗原を含むタンパク質配列が、抗体によって結合され得ることを示す。この文脈において、タンパク質が外来性であること、または免疫応答を誘導する能力があることを必要とするものではない。

「エピトープ」という用語には、抗体などの抗原結合タンパク質によって、またはＴ細胞受容体に、結合することが可能な任意の決定基が含まれる。エピトープは、その抗原を標的とする抗原結合タンパク質によって結合される抗原の領域であり、抗原がタンパク質である場合は、抗原結合タンパク質に直接接触する特異的アミノ酸を含む。より頻繁には、エピトープは、タンパク質上に存在するが、いくつかの事例においては、核酸などの他の種類の分子上に存在し得る。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面配置を含み得、特異的な３次元構造特性及び／または特異的電荷特性を有し得る。一般的に、特定の標的抗原に特異的な抗体は、タンパク質及び／または巨大分子の複合混合物中で、標的抗原上のエピトープを選択的に認識する。抗体エピトープは、直線的であっても立体配座的であってもよい。実施形態では、本明細書で提供されるエピトープは、直線状エピトープである。

単数形の使用は、別途明確に記述されない限り、複数形を含む。「ａ」または「ａｎ」という単語は、別途明確に記述されない限り、「少なくとも１つ」を意味する。「または」の使用は、別途記述されない限り、「及び／または」を意味する。「少なくとも１つ」という語句の意味は、「１つ以上」という語句の意味に相当する。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定的ではない。また、「要素」または「成分」などの用語は、別途明確に記述されない限り、１つのユニットを含む要素及び成分、ならびに１つを超えるユニットを含む要素及び成分の両方を包含する。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、記載されたパラメータ値よりも多いまたは少ない量、例えば、「約」が修飾する対象物のプラスもしくはマイナス５もしくは１０％、または当業者が文脈から認識するであろうものとして（例えば、値間の間隔の約５０％）を指す。「約」という用語は、参照される値も含む。

幹細胞因子
ヒトにおいて、異なる構造及び活性を有する少なくとも２つの形態のＳＣＦが存在する。ＳＣＦ２２０は、血液形成及び精子形成を含むいくつかの恒常性維持機能で機能し、骨髄、精巣、ならびに他の組織及び臓器に見出される。ＳＣＦ２２０は、ゆっくりと切断可能であり、「膜ＳＣＦ」と呼ばれることもある。対照的に、ＳＣＦ２４８は、迅速に切断可能であり、Ｎ末端ｃ－ｋｉｔ結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置するエクソン６内の切断部位を含む。ＳＣＦ２４８は、「可溶性ＳＣＦ」と称され得る。エクソン６は、代替的スプライシングを介してＳＣＦ２２０から除外され、したがって、ＳＣＦ２２０は、この切断部位を欠いている。単量体細胞外ドメイン（ＳＣＦ１６５）は、切断産物であり、慢性炎症性疾患の血漿におけるバイオマーカーとして機能する。血漿はまた、ＳＣＦ２２０に由来する検出可能なレベルのＳＣＦ細胞外ドメインを含有し得るが、検出可能な細胞外ドメインの大部分は、ＳＣＦ１６５であると予想される。ＳＣＦ２４８は、筋線維芽細胞、活性化上皮細胞、及び他の細胞に見られるアイソフォームであり、これは、炎症中に免疫細胞を活性化し、線維症の持続に貢献する。より具体的には、ＳＣＦ２４８は、免疫細胞上でｃ－Ｋｉｔに結合し、細胞外マトリックスタンパク質、コラーゲン、及びフィブロネクチンを分泌する、線維芽細胞を活性化して筋線維芽細胞となるサイトカインの産生を開始する。活性化された筋線維芽細胞、ならびに活性化された上皮、内皮、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、単球、及び他の細胞もまた、細胞表面上でＳＣＦを発現し、より多くのｃ－Ｋｉｔ＋免疫細胞を活性化し、さらなるサイトカイン放出及び免疫活性化及び線維化応答をもたらす。

本明細書に開示される抗体及びその抗原結合断片は、ＳＣＦに特異的である。いくつかの実施形態では、抗体及びその断片は、ヒトＳＣＦに特異的である。いくつかの実施形態では、抗体及びその断片は、ＳＣＦ２４８に特異的である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＳＣＦ２４８と結合し、ＳＣＦの他のアイソフォームと結合しない。いくつかの実施形態では、抗体は、ＳＣＦ２４８と結合し、ＳＣＦ２２０には結合しない。いくつかの実施形態では、本開示は、ＳＣＦ２４８に特異的な抗体またはその断片を作製するための方法を提供する。ＳＣＦ２４８に特異的な例示的な抗体及び断片、ならびに抗体及び断片を作製及び使用するための方法が、本開示に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体及びその断片は、ＳＣＦ２４８に結合し、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を遮断することによって、様々な細胞型上に発現されるＳＣＦ２４８とｃＫｉｔ＋免疫細胞との間の正のフィードバックループを破壊する。

抗体及び断片
本開示は、モノクローナル抗体を含む抗体、及びその断片を提供する。本明細書において、ＳＣＦ（例えば、ＳＣＦ２４８）に特異的である本明細書で提供される抗体断片は、本明細書において、抗原結合断片と称されることがあり、これは、それらが、標的抗原（ＳＣＦ、例えば、ＳＣＦ２４８）と結合することが可能な親抗体の一部分を含むことを意味する。「抗体断片」、「抗原結合断片」などは、本明細書において互換的に使用される。抗原結合断片の例には、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆｖ断片、単離されたＣＤＲ領域、二重特異性Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）、三重特異性Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）、一本鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ビス－ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）、重鎖のみ抗体（例えば、ラクダ科ＶＨＨ、ラクダ科ナノボディ、サメＩｇ ＮＡＲ）、及び抗原結合を担う全長抗体の部分が含まれる。

「Ｆａｂ断片」は、１つの軽鎖、ならびに１つの重鎖のＣ_Ｈ１及び可変領域を含む。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することはできない。「Ｆａｂ’断片」は、１つの軽鎖、ならびにＶＨドメイン及びＣ_Ｈ１ドメインを含有する１つの重鎖の一部分、またＣ_Ｈ１ドメインとＣ_Ｈ２ドメインとの間の領域を含み、その結果、鎖間ジスルフィド結合が２つのＦａｂ’断片の２つの重鎖の間に形成されて、Ｆ（ａｂ’）_２分子を形成することができる。「Ｆ（ａｂ’）_２断片」は、２つの重鎖と、Ｃ_Ｈ１ドメインとＣ_Ｈ２ドメインとの間の定常領域の一部分を含有する２つの重鎖と、を含有し、その結果、鎖間ジスルフィド結合が２つの重鎖の間に形成される。したがって、Ｆ（ａｂ’）_２断片は、２本の重鎖間のジスルフィド結合によって共に保持される２つのＦａｂ’断片からなる。「Ｆｖ断片」は、重鎖及び軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠失する。「ｓｃＦｖ」は、重鎖及び軽鎖可変領域が、可撓性リンカーによって接続されて、抗原結合領域を形成する単一のポリペプチド鎖を形成するＦｖ分子である。

いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体及びその断片は、それらの相補的決定領域（ＣＤＲ）によって定義される。ＣＤＲは、抗体における可変鎖の一部であり、軽鎖及び重鎖可変領域の各々は、３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。抗体のＣＤＲは、抗原特異性を決定する。ある特定の実施形態では、ＣＤＲの明確な描写、及び抗体の結合部位を含む残基の同定は、抗体の構造を解明すること、及び／または抗体－リガンド複合体の構造を解明することによって達成される。ある特定の実施形態では、それは、当業者に公知の様々な技術のうちのいずれか、例えばＸ線結晶学によって達成され得る。ある特定の実施形態では、様々な分析方法が、ＣＤＲ領域を同定または見積もりのために用いられ得る。そのような方法の例としては、Ｋａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、ＡｂＭの定義、及び接触の定義が挙げられるが、これらに限定されない。

Ｋａｂａｔの定義は、抗体の残基を番号付けするための標準であり、典型的には、ＣＤＲ領域を同定するために使用される。例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｗｕ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２８：２１４－８（２０００）を参照のこと。Ｃｈｏｔｈｉａの定義は、Ｋａｂａｔの定義と同様であるが、Ｃｈｏｔｈｉａの定義は、ある特定の構造的ループ領域の位置を考慮する。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－１７（１９８６）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７－８３（１９８９）を参照のこと。ＡｂＭの定義は、抗体構造をモデル化するＯｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐによって生成されたコンピュータプログラムの統合スイートを使用する。例えば、Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ（ＵＳＡ），８６：９２６８－９２７２（１９８９）；“ＡｂＭ（商標，Ａ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｐｒｏｇｒａｍ ｆｏｒ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，” Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ；Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｌｔｄを参照のこと。ＡｂＭの定義は、知識データベース及びアブイニシオ（ａｂ ｉｎｉｔｉｏ）法の組み合わせ、例えば、Ｓａｍｕｄｒａｌａ ｅｔ ａｌ．，”Ａｂ Ｉｎｉｔｉｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，” ｉｎ ＰＲＯＴＥＩＮＳ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｓｕｐｐｌ．３；１９４－１９８，（１９９９）に記載されるもの、を用いて抗体の３次構造を１次配列からモデル化する。接触の定義は、実現可能な複合体結晶構造の分析に基づく。例えば、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，５：７３２－４５（１９９６）を参照のこと。

抗体及びその断片は、組換えポリペプチド、融合タンパク質、及び二重特異性抗体も含み得る。本明細書に開示される抗ＳＣＦ抗体及びその断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプのものであり得る。一実施形態では、本明細書に開示される抗ＳＣＦ抗体及びその断片は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプのものである。本発明の抗ＳＣＦ抗体及びその断片は、マウス、ラット、ウサギ、霊長類、ラマ、ラクダ、ヤギ、サメ、ニワトリ、及びヒトを含むが、これらに限定されない任意の種に由来し得る。ＳＣＦ抗体及びその断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒト抗体であり得る。一実施形態では、抗ＳＣＦ抗体は、マウス抗体である。別の実施形態では、抗ＳＣＦ抗体は、キメラ抗体である。さらなる実施形態では、キメラ抗体は、マウス－ヒトキメラ抗体である。別の実施形態では、抗体は、マウスに由来し、ヒト化される。

「キメラ抗体」は、１つの種に由来する重鎖可変領域の少なくとも一部分と軽鎖可変領域の少なくとも一部分と、別の種に由来する定常領域の少なくとも一部分と、を有する抗体である。例えば、一実施形態では、キメラ抗体は、マウス可変領域及びヒト定常領域を含み得る。

「ヒト化抗体」は、非ヒト抗体に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびにヒト抗体に由来するフレームワーク領域及び定常領域を含有する抗体である。例えば、本明細書で提供される抗ＳＣＦ抗体は、１つ以上のマウス抗体に由来するＣＤＲ、ならびにヒトフレームワーク領域及び定常領域を含み得る。したがって、一実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗体は、抗体のＣＤＲが誘導されるマウス抗体と同じＳＣＦのエピトープに結合する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体及びその断片は、重鎖及び軽鎖を含み、これらのそれぞれが、３つのＣＤＲを含む。例示的な重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（それぞれ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（それぞれ、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を、以下の表１に提供する。表１はまた、例示的な重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列も提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書において「５Ｈ１０」及び「２Ｇ８」と称される抗体を提供する。ヒト化５Ｈ１０または２Ｇ８の重鎖可変領域は、本明細書においてＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、及びＶＨ５と称される。５Ｈ１０ ＶＨ０は、本明細書に記載の方法を介して生成されたマウス親抗体の可変重鎖である。ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、及びＶＨ５は、各々、５Ｈ１０ ＶＨ０または２Ｇ８ ＶＨ０に由来するヒト化重鎖可変領域である。５Ｈ１０抗体は、カッパ軽鎖を含む。マウス親抗体可変軽鎖は、本明細書において５Ｈ１０ ＶＫ０と称される。ＶＫ１、ＶＫ２、ＶＫ３、及びＶＫ４は、各々、ＶＫ０に由来するヒト化軽鎖可変領域である。２Ｇ８抗体は、ラムダ軽鎖を含む。マウス親抗体可変軽鎖は、本明細書において２Ｇ８ ＶＬ０と称される。ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、及びＶＬ４は、各々、ＶＬ０に由来するヒト化軽鎖可変領域である。

当業者であれば、可変重鎖及び可変軽鎖が、独立して、本明細書で提供される抗体から選択され得るか、または混合及びマッチングされ得ることを理解するであろう。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体及びその断片は、ＶＨ０／ＶＫ０、ＶＨ０／ＶＫ１、ＶＨ０／ＶＫ２、ＶＨ０／ＶＫ３、ＶＨ０／ＶＫ４、ＶＨ１／ＶＫ０、ＶＨ１／ＶＫ１、ＶＨ１／ＶＫ２、ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ１／ＶＫ４、ＶＨ２／ＶＫ０、ＶＨ２／ＶＫ１、ＶＨ２／ＶＫ２、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ４、ＶＨ３／ＶＫ０、ＶＨ３／ＶＫ１、ＶＨ３／ＶＫ２、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ４、ＶＨ４／ＶＫ０、ＶＨ４／ＶＫ１、ＶＨ４／ＶＫ２、ＶＨ４／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ４、ＶＨ５／ＶＫ０、ＶＨ５／ＶＫ１、ＶＨ５／ＶＫ２、ＶＨ５／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ４からなる群から選択される重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号７～１２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む抗体または断片を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号７～１２からなる群から選択される配列に記載の重鎖可変領域を含む抗体またはその断片を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号７～１１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む抗体または断片を提供し、抗体または断片は、それぞれ、配列番号１、２、及び３と同一の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む抗体または断片を提供し、抗体または断片は、それぞれ、配列番号１、３７、及び３と同一の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１３～１７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む抗体または断片を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１３～１７からなる群から選択される配列に記載の軽鎖可変領域を含む抗体またはその断片を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１３～１７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む抗体または断片を提供し、抗体または断片は、それぞれ、配列番号４、５、及び６と同一の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号７及び配列番号１３、配列番号７及び配列番号１４、配列番号７及び配列番号１５、配列番号７及び配列番号１６、配列番号７及び配列番号１７、配列番号７及び配列番号１３、配列番号７及び配列番号１４、配列番号７及び配列番号１５、配列番号７及び配列番号１６、配列番号７及び配列番号１７、配列番号８及び配列番号１３、配列番号８及び配列番号１４、配列番号８及び配列番号１５、配列番号８及び配列番号１６、配列番号８及び配列番号１７、配列番号９及び配列番号１３、配列番号９及び配列番号１４、配列番号９及び配列番号１５、配列番号９及び配列番号１６、配列番号９及び配列番号１７、配列番号１０及び配列番号１３、配列番号１０及び配列番号１４、配列番号１０及び配列番号１５、配列番号１０及び配列番号１６、配列番号１０及び配列番号１７、配列番号１１及び配列番号１３、配列番号１１及び配列番号１４、配列番号１１及び配列番号１５、配列番号１１及び配列番号１６、配列番号１１及び配列番号１７、配列番号１２及び配列番号１３、配列番号１２及び配列番号１４、配列番号１２及び配列番号１５、配列番号１２及び配列番号１６、または配列番号１２及び配列番号１７、に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む抗体または断片を提供する。

特定の実施形態では、抗体及びその断片は、ＶＨ１／ＶＫ１、ＶＨ１／ＶＫ２、ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ１、ＶＨ２／ＶＫ２、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ１、ＶＨ３／ＶＫ２、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ１、ＶＨ４／ＶＫ２、ＶＨ４／ＶＫ３、ＶＨ５／ＶＫ１、ＶＨ５／ＶＫ２、及びＶＨ５／ＶＫ３からなる群から選択される重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８または配列番号９に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、配列番号１６に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８または配列番号９に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、配列番号１６に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、を含み、抗体または断片は、それぞれ、配列番号１、２、及び３と同一の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、それぞれ、配列番号４、５、及び６と同一の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８または配列番号９に対して少なくとも９５％または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、配列番号１６に対して少なくとも９５％または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、を含み、抗体または断片は、それぞれ、配列番号１、２、及び３と同一の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、それぞれ、配列番号４、５、及び６と同一の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。抗体またはその断片は、ＳＣＦ２４８に特異的に結合し得るが、ＳＣＦ２２０に結合し得ない。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８に記載の重鎖可変領域と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９に記載の重鎖可変領域と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域と、を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体及び断片は、配列番号７、８、９、１０、１１、または１２に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列またはそのバリアントを含み、及び／または配列番号１３、１４、１５、１６、または１７に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列またはそのバリアントを含む。バリアントは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換もしくは欠失、またはそれらの組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、保存的置換である。ＣＤＲまたは可変軽鎖もしくは重鎖領域に１つ以上のアミノ酸置換、挿入、欠失、またはそれらの組み合わせを有する本明細書に開示される抗ＳＣＦ抗体は、本明細書で提供される配列と比較して、アミノ酸置換、挿入、または欠失を有しない対応する抗ＳＣＦ抗体の生物学的活性を保持する。したがって、本明細書で提供されるバリアント抗ＳＣＦ抗体は、ＳＣＦ２４８への特異的結合を保持する。パーセント相同性、配列同一性、配列相同性などの用語は、本明細書において互換的に使用され、２つの参照配列によって共有される同一のアミノ酸配列の数を、アミノ酸位置の総数で除算し、１００を乗算することを指す。

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に開示される例示的な抗体のうちのいずれか１つと同じエピトープに結合する抗体を提供する。したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、ＳＣＦへの結合について本明細書で提供される例示的な抗体と競合する抗体を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号２９として本明細書で提供されるアミノ酸配列の領域に特異的に結合する抗体を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号３３（ＡＳＳＬＲＮＤＳＳＳＳＮＲＫ）または配列番号３６（ＡＳＳＬＲＮＤＳＳＳＳＮＲ）のアミノ酸配列を含むエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３３または配列番号３６に記載のアミノ酸配列からなるエピトープに特異的に結合する抗体を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３３の少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個の連続したアミノ酸を含むエピトープに特異的に結合する抗体を提供する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体及びその断片は、本明細書で提供される重鎖及び軽鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／またはＬＣＤＲ３、またはそれらのバリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体及びその断片は、ＨＣＤＲが、配列番号７、８、９、１０、１１、または１２のＨＣＤＲであり、及び／またはＬＣＤＲが、配列番号１３、１４、１５、１６、または１７のＬＣＤＲである抗体を含む。例えば、いくつかの実施形態では、抗体及びその断片は、Ｋａｂａｔ番号付けスキームによって定義される、本明細書で提供される重鎖可変領域のうちのいずれか１つのアミノ酸３１～３５、５０～６５、及び９５～１０２を含む。いくつかの実施形態では、抗体及びその断片は、Ｋａｂａｔ番号付けスキームによって定義される、本明細書で提供される軽鎖可変領域のうちのいずれか１つのアミノ酸２４～３４、５０～５６、及び８９～９７を含む。

例示的なヒト化抗体が、本明細書で提供される。本明細書で提供される重鎖及び軽鎖ＣＤＲ、またはそれらのバリアントを含む追加の抗ＳＣＦ抗体は、任意のヒトフレームワーク配列を使用して生成され得、本発明にも包含される。一実施形態では、本発明での使用に適したフレームワーク配列は、本明細書で提供されるフレームワーク配列と構造的に類似しているフレームワーク配列を含む。フレームワーク領域におけるさらなる修飾は、本明細書で提供される抗体の特性を改善するために行われ得る。かかるさらなるフレームワーク修飾は、化学修飾、免疫原性を低減させるかもしくはＴ細胞エピトープを除去するための点変異、または元の生殖細胞系列配列内の残基への復帰変異を含み得る。

いくつかの実施形態では、かかるフレームワーク修飾は、生殖系列配列への逆変異を含む、本明細書において例示される変異に対応するものを含む。例えば、一実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗体のＶＨ及び／またはＶＬのヒトフレームワーク領域内の１つ以上のアミノ酸が、親マウス抗体内の対応するアミノ酸に復帰変異される。本発明はまた、ＳＣＦ（例えば、ＳＣＦ２４８）に結合し、任意の好適なフレームワーク配列に関して本明細書に記載される例示的な修飾に対応するフレームワーク修飾、ならびに抗体の特性を別様に改善する他のフレームワーク修飾を含む、ヒト化抗体も包含する。他の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、例えば、脱アミド化または酸化を低減させる、異性化を低減させる、疎水性コア及び／または電荷クラスター残基を最適化する、疎水性表面残基を除去する、可変重鎖と可変軽鎖との間の界面に関与する残基を最適化する、及び／または等電点を修飾する標的化アミノ酸変化などにより、安定性を向上させる、溶解性を向上させる、グリコシル化を変化させる、及び／または免疫原性を低減するための１つ以上の変異を含む。

本明細書で提供される抗ＳＣＦ抗体及びその断片は、エフェクター機能を改変するためのＦｃ領域修飾をさらに含み得る。Ｆｃ修飾は、アミノ酸挿入、欠失、もしくは置換であり得るか、または化学修飾であり得る。例えば、Ｆｃ領域修飾は、補体結合を増加もしくは減少させるため、抗体依存性細胞毒性を増加もしくは減少させるため、または抗体の半減期を増加もしくは減少させるために行われ得る。いくつかのＦｃ修飾は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、またはＦｃＲｎなどのＦｃγ受容体に対する抗体の親和性を増加または減少させる。種々のＦｃ修飾が、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２７６；６５９１（２００１）、Ｔａｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １１９；２０７４（２０１２）、Ｓｐｉｅｋｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ １９６；３０３（２００２）、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ ２：２；１８１（２０１０）、Ｍｅｄｚｉｈｒａｄｓｋｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ４４６；２９３（２００８）、Ｍａｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ３５；８６（２００７）、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４；４１７８（２０００）において、当該技術分野で説明されている。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域グリコシル化パターンは、改変される。他の実施形態では、Ｆｃ領域は、ペグ化によって（例えば、抗体またはその断片をポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させることによって）修飾される。例示的なＦｃ修飾は、２２８、２３３、２３４、２３５、２３６、２４１、２４８、２６５、２９７、３０９、３３１、及び４０９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置での修飾を含む（Ｋａｂａｔ番号付け；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。実施形態では、抗体は、エフェクター機能を低減または廃止するための修飾を有する。実施形態では、抗体は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６（欠失）、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｎ２９７Ａ、及びＮ２９７Ｑからなる群から選択される１つ以上のＦｃ修飾を有するＩｇＧ１抗体である。実施形態では、抗体は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｖ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｔ、Ｌ３０９Ｌ、及びＲ４０９Ｋからなる群から選択される１つ以上のＦｃ修飾を有するＩｇＧ４抗体である。実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＣＦ抗体は、Ｓ２４１Ｐ変異及びＬ２４８Ｅ変異を含む。

実施形態では、本開示は、配列番号４０及び４１に記載のヒトＩｇＧ４定常領域を含む本明細書で提供される抗体を提供する。実施形態では、本開示は、配列番号４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０に対する少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約９９％の配列同一性を含む抗体を提供する。実施形態では、本開示は、配列番号４０に記載の重鎖と、配列番号４１に記載の軽鎖と、を含む抗体を提供する。実施形態では、本開示は、配列番号４２、４３、４４、４５、または４６に記載の重鎖と、配列番号４７、４８、４９、または５０に記載の軽鎖と、を含む抗体を提供する。実施形態では、本開示は、配列番号４２に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖と、を含む抗体を提供する。実施形態では、本開示は、配列番号４３に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖と、を含む抗体を提供する。実施形態では、本開示は、配列番号４４に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖と、を含む抗体を提供する。実施形態では、本開示は、配列番号４５に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖と、を含む抗体を提供する。実施形態では、本開示は、配列番号４６に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖と、を含む抗体を提供する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＳＣＦ２４８に特異的であり、ＳＣＦ２２０に結合しない。したがって、本明細書で提供される抗体は、炎症性及び線維性腎疾患において慢性炎症反応及び線維症を誘導し、持続させる、ＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を特異的に阻害することが可能である。さらに、本明細書で提供される抗体は、ＳＣＦの内在化を特異的に誘導し、それによってＳＣＦ２４８とｃ－Ｋｉｔとの間の相互作用を低減することが可能である。したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、炎症性及び線維性腎疾患を治療するための方法であって、ＳＣＦ２４８に特異的であり、本明細書で論じられ、当該技術分野で周知の様々な炎症性及び線維性腎疾患において安全かつ有効である抗体を、治療を必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。

モノクローナル抗体の調製のために、培養物中の連続的な細胞株による抗体分子の産生を提供する任意の技術が、使用され得る（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）。これらには、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎによって最初に開発されたハイブリドーマ技術、及びトリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，４：７２（１９８３）を参照のこと）、及びヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶ－ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７－９６（１９８５））が含まれるが、これらに限定されない。あるいは、抗体は、組換えＤＮＡ法によって作製され得る。いくつかの実施形態では、本開示による抗体は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２（３）：５８１－９７（１９９１）に記載される技術を使用して、モノクローナル抗体をファージディスプレイライブラリから単離されることによって作製され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト由来ファージディスプレイまたは酵母ディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列（複数可）と、既知のヒト定常ドメイン配列（複数可）とを組み合わせることによって構築される完全ヒト抗体である。

本明細書で提供されるいくつかの実施形態では、抗体は、ハイブリドーマから調製される。ハイブリドーマ法を使用して、マウス、ハムスター、または他の適切な宿主動物を、免疫ペプチドを注入することによって免疫化し、免疫化抗原に特異的に結合する抗体のリンパ球による産生を誘発する。あるいは、リンパ球が、インビトロで免疫化され得る。免疫化後、リンパ球を単離し、例えば、ポリエチレングリコールを使用して好適な骨髄腫細胞株と融合させ、次いで、非融合リンパ球及び骨髄腫細胞から離れて選択され得るハイブリドーマ細胞を形成する。次いで、免疫沈降、免疫ブロッティング、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロ結合アッセイによって決定されるように、選択された抗原に対して特異的に指向されるモノクローナル抗体を生成するハイブリドーマは、標準的な方法（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）を使用してインビトロで（例えば、培養中で）または動物における腹水腫瘍としてインビトロで繁殖され得る。次いで、モノクローナル抗体は、上記のポリクローナル抗体について記載されているように、培養培地または腹水から精製され得る。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、マウスハイブリドーマ系を使用して生成される。マウスにおけるハイブリドーマ産生は、確立された手順である。融合のための免疫化脾細胞の単離のための免疫化プロトコル及び技術は、当該技術分野で既知である。融合パートナー（例えば、マウス骨髄腫細胞）及び融合手順もまた、既知である。本明細書における技術の実施形態は、マウスを、ＳＣＦタンパク質の一部分または断片であるペプチドで免疫化することによって調製されたハイブリドーマから生成された抗体（例えば、モノクローナル抗体）を提供する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＳＣＦ２４８に特異的な抗体は、マウスを、エクソン６内の大部分または排他的であるアミノ酸配列を有するペプチドで免疫化することによって生成される。例えば、免疫化ペプチドは、配列番号３４内の５個以上のアミノ酸の任意の伸長を含む。別の例として、免疫化ペプチドは、配列番号２９のアミノ酸２０位から始まる５個以上のアミノ酸の任意の伸長を含む。別の例として、免疫化ペプチドは、配列番号２９のアミノ酸位置２０から始まり、配列番号２９の２５～３８位のうちのいずれか１つで終わる５個以上のアミノ酸の伸長を含む。したがって、いくつかの実施形態では、免疫化ペプチドは、切断部位の後にエクソン６のアミノ酸配列を含み、エクソン６内に完全に含まれるか、またはエクソン７の１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸のみを含む。いくつかの実施形態では、免疫化ペプチドは、配列番号３０を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、免疫化ペプチドは、本明細書で提供されるペプチドまたはその保存的バリアントのうちのいずれかを含む。保存的バリアントは、１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換もしくは欠失、またはそれらの組み合わせを含み得る。上記で提供されるように、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される免疫化ペプチドを使用して生成される抗体は、エクソン６内に完全にまたは大部分含まれるエピトープを有する。「～内に大部分」とは、ペプチドの少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％が、エクソン６内に含まれることを意味する。いくつかの実施形態では、エピトープは、エクソン６の切断部位（すなわち、配列番号２９のアミノ酸１９位及び２０位のアラニン間）から始まり、エクソン６の末端まで伸長する。いくつかの実施形態では、エピトープは、エクソン６の切断部位から始まり、膜貫通ドメインの第１、第２、第３、第４、または第５のｎ末端アミノ酸まで伸長する。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号３３を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書において５Ｈ１０と称される抗体（マウス、キメラ、及びヒト化５Ｈ１０抗体を含む）は、配列番号３３を含むか、またはそれからなるＳＣＦのエピトープに結合する。

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される方法は、本明細書において５Ｈ１０と称される抗体を生成するために使用された。いくつかの実施形態では、抗体「５Ｈ１０」はまた、本明細書において「ＯｐＳＣＦ」とも称される。抗体５Ｈ１０は、高い特異性でＳＣＦ２４８と有利に結合し、ＳＣＦ２２０と結合しない。マウス親抗体５Ｈ１０のアミノ酸配列、ならびにそのヒト化バリアントは、本明細書で提供される（表１を参照のこと）。

一実施形態では、本発明は、ＳＣＦ及び少なくとも１つの他の抗原またはエピトープに特異的な二重特異性または多重特異性抗体の使用方法を提供する。本明細書で提供される抗ＳＣＦ抗体及びその断片は、本明細書で提供される結合アッセイ、または当該技術分野で既知の任意の他の結合アッセイを使用して、ＳＣＦへの結合について試験することができる。

別途記述されない限り、本発明の実施は、当該技術分野で周知であり、例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８８－１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｃ．Ｂａｒｂａｓ ＩＩＩ ｅｔ ａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２００１）、及びＵｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）に記載されている従来の分子生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学技術を用いる。

治療の方法
本明細書で使用される場合、「治療」または「治療すること」という用語は、治療的処置及び予防的手段または予防手段の両方を指す。治療を必要としている対象には、既に疾患または状態を有している対象、ならびに疾患または状態を発症し得る対象が含まれ、その対象は、疾患または状態を予防、遅延、または減少させる。本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、齧歯類、ネコ、イヌ、及び霊長類などの哺乳動物を示す。好ましくは、本発明による対象は、ヒトである。本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、対象に治療的及び／または予防的利益を提供するために必要である化合物または組成物の量を指す。

一態様では、本発明は、炎症性及び／または線維性腎疾患の対象を治療するための方法を提供する。一態様では、本開示は、炎症性及び／または線維性腎疾患などの腎疾患を治療するのに有用な医薬品として使用するための抗体を提供する。一態様では、本開示は、炎症性及び／または線維性腎疾患などの腎疾患の治療方法に使用するための抗体を提供する。いくつかの実施形態では、炎症性腎疾患は、慢性炎症性腎疾患である。例示的な炎症性及び／または線維性腎疾患としては、例えば、腎臓の腎線維症、腎硬変、間質性線維症及び尿細管萎縮症（ＩＦＴＡ）、慢性腎疾患、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、グッドパスチャー症候群、糸球体腎炎、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、慢性腎同種移植片拒絶反応、腎性全身性線維症、及び腎症（例えば、ＩｇＡ腎症、巣状分節性糸球体硬化症、急速進行性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、ループス腎炎、高血圧性腎症、または糖尿病性腎症）が挙げられる。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体及びその断片は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、空洞内、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸部内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内（ｉｎｔｒａｏｓｔｅａｌ）、骨盤内、心膜内、腹膜内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ）、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、脊髄内、滑液嚢内、胸腔内、鼓室内、子宮内、膀胱内、硝子体内、ボーラス、結膜下、経口、膣、直腸、頬、舌下、鼻腔内、腫瘍内、及び経皮から選択される少なくとも１つの経路によって対象に投与され得る。

実施形態では、本明細書に開示される抗体及びその断片は、１つ以上の追加の療法と組み合わせて、それを必要とする対象に投与され得る。１つ以上の追加の療法は、外科的処置もしくは透析などの処置であり得るか、または腎線維症及び／または炎症に関連する疾患もしくは障害の症状を軽減もしくは低減するように設計された薬剤などの治療剤であり得る。

本発明は、以下の実施例を参照することによってさらに例示される。しかしながら、これらの実施例は、上記の実施形態と同様に、例示的であり、本発明の範囲をいかなる方法でも制限するものとして解釈されるべきではないことに留意されたい。

以下の実施例は、本開示の様々な実施形態を説明する目的で与えられており、いかなる方法でも本開示を限定することを意味するものではない。特許請求の範囲によって定義されるような、本開示の趣旨内に包含される本実施例の変更及び他の使用が、当業者には認識されよう。

組織損傷／疾患プロセスの概要を、図１に要約する。疾患プロセスが、炎症を開始する。ｃ－Ｋｉｔ＋免疫細胞は、サイトカインを産生し、線維芽細胞をそれらの表面上でＳＣＦ２４８を発現する活性化された筋線維芽細胞へと変化させる。筋線維芽細胞及び他の細胞の表面上でのＳＣＦ２４８の発現は、より多くの免疫細胞を活性化し、ＩＬ－４、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－２５、ＴＧＦβ、及び他のサイトカインのサイトカイン放出をもたらし、炎症を持続させる。筋線維芽細胞は、細胞外マトリックスタンパク質、コラーゲン、及びフィブロネクチンを分泌し、慢性腎疾患などの線維症疾患を引き起こす。例示的な腎疾患として糸球体腎炎（ＧＮ）におけるＳＣＦ２４８を標的とする本開示の抗体（当該抗体は、本明細書においてＯｐＳＣＦ及び／または５Ｈ１０と称される）の例示的な機序を、図２に要約する。

上記に提供されるように、ＳＣＦは、代替的スプライシングから生じる２つのアイソフォーム：ＳＣＦ２４８及びＳＣＦ２２０を有する。ＳＣＦ２４８及びＳＣＦ２２０は、エクソン６によって異なる。ＳＣＦ２２０は、恒常性機能に関連し、ＳＣＦ２４８は、炎症及び線維症に関連する。ＳＣＦ２４８は、炎症中に免疫細胞を活性化し、「可溶性ＳＣＦ」と呼ばれることがある。ＳＣＦ２４８は、筋線維芽細胞、活性化上皮、内皮、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、及び単球を含む様々な細胞型で発現される（図３）。ＳＣＦ２４８アイソフォームは、ＳＣＦ１６５と呼ばれる単量体切断細胞外ドメインの切断をもたらす。エクソン６のアミノ酸配列は、配列番号３４として本明細書で提供される。

実施例１：ハイブリドーマ技術を利用した抗ＳＣＦ ｍＡｂの生成
ＡＳＳＬＲＮＤＳＳＳＳＮＲＫＡＫＮＰＰＧＤ（配列番号３０）を含むペプチドを使用して、ＳＣＦ２４８に結合する抗体を生成した。免疫化ペプチドは、エクソン６の一部分、すなわち、幹細胞因子のＳＣＦ２４８アイソフォームを含んだ。特に、免疫化ペプチドは、本明細書に定義される切断部位の後に開始するエクソン６の一部分を含んだ。マウスを、標準プロトコルで配列番号３０に記載のペプチドで免疫化した。高力価血清抗体の決定は、適切な免疫化及び融合ハイブリドーマが行われたことを示した。培養上清を、個々のクローンからＳＣＦ特異的抗体について分析し、特異性に基づいて選択した。ペプチドに対する特異的モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを増殖させ、その後、最も高い力価を有するモノクローナルを、生物学的に関連する培養物で試験した。抗体５Ｈ１０は、ＳＣＦ２４８に対して高い特異性を有し、ＳＣＦ２２０との交差反応性を有しなかった。ハイブリドーマによって産生された他のモノクローナル抗体は、ＳＣＦ２２０との交差反応性なしに、ＳＣＦ２４８に対して高い特異性を有しなかった。したがって、５Ｈ１０を、さらなる特性評価、発生、及びキメラ化、ならびにその後のヒト化のために選択した。

実施例２．ＳＣＦ２４８の完全な細胞外ドメインへの５Ｈ１０の結合
実施例１に記載されるように得られたマウス５Ｈ１０抗体を、蛍光マーカーと直接コンジュゲートし、標識抗体を、ＳＣＦ２４８を発現するＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２４８細胞、ＳＣＦ２２０を発現するＳｌ／Ｓｌ４ ｈＳＣＦ２２０細胞、またはＳＣＦを発現しない対照細胞と共にインキュベートした。細胞への標識抗体の結合を、フローサイトメトリーによって評価した。ＳＣＦ２４８に対する５Ｈ１０の特異性及びＳＣＦ２２０との交差反応性の欠如を、図４Ａに示す。

ＳＣＦのアミノ酸１～１６５のみを含有する切断細胞外ドメイン（ＥＣＤ）への、それに対してＳＣＦのアミノ酸１～１９４を含有する完全なＥＣＤへのマウス５Ｈ１０抗体の結合を、ＥＬＩＳＡ法によって評価した。抗体は、完全なＳＣＦ ＥＣＤと結合したが、切断されたＳＣＦ ＥＣＤと結合しなかった（図４Ｂ）。このことは、抗体が、完全な細胞外ドメインに特異的であり、血液中を循環する単量体切断ＥＣＤに結合しないことを実証した。

筋線維芽細胞上のＳＣＦ２４８を内在化する２Ｇ８及び５Ｈ１０抗体の能力を評価するために、抗体をｐＨｒｏｄｏ赤色で標識した。これは、中性ｐＨでは無色であり、エンドソーム内の低ｐＨで赤色に蛍光する。標識抗体を、培養したヒトＩＰＦ筋線維芽細胞と共に４５分間インキュベートし、赤色蛍光が、顕微鏡によって視覚化された。図５に示すように、対照ＩｇＧではないが、染料標識抗体は、急速に内在化された。５Ｈ１０は、より急速に内在化され、２Ｇ８と比較してより高い蛍光をもたらした。

ＳＣＦは、ｃ－ｋｉｔを、ＭＥＫ／ＥＲＫ経路及びＰ１３Ｋ／ＡＫＴ経路の２つの異なる経路によってシグナル伝達するように誘導する。マウス５Ｈ１０抗体は、ｃ－ｋｉｔ陽性細胞の細胞内シグナル伝達を、これらの経路のいずれかまたは両方において阻害するかどうかを判定するために研究が行われた。好酸球を、５Ｈ１０またはＩｇＧ対照のいずれかの存在下で、ＳＣＦ２４８発現細胞株と共にインキュベートし、ホスホ－タンパク質の発現を、ＢｉｏＲａｄ Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘアッセイシステムで測定した。５Ｈ１０は、ホスホ－ＭＥＫ及びリン－ＡＫＴレベルを有意に低下させ、抗体がｃ－ｋｉｔ媒介性細胞内シグナル伝達を有意に低下させたことを示した（図６）。

総合すると、これらの研究の結果は、抗体５Ｈ１０がＳＣＦ２４８に特異的に結合し、内在化し、ＳＣＦ２２０アイソフォームまたは切断されたＥＣＤと交差反応しないことを示した。さらに、５Ｈ１０は、炎症を持続させるｃ－ｋｉｔ陽性細胞の細胞内シグナル伝達経路を有意に阻害する。

実施例３．ヒト化５Ｈ１０
５Ｈ１０に由来するキメラ抗体は、重鎖及び軽鎖の可変ドメインをヒトＩｇＧ４骨格を有するベクターにサブクローニングすることによって産生された。キメラ抗体を発現させ、標準的なプロトコールを使用して精製した。２Ｇ８は、ＳＣＦ２４８及びＳＣＦ２２０に結合する以前に開発された抗体であり、ラムダ軽鎖を含有する。２Ｇ８のキメラ重鎖及び軽鎖は、それぞれ、ＶＨ０及びＶＬ０と名付けられた。本明細書で提供されるＳＣＦ２４８特異的抗体である５Ｈ１０は、カッパ軽鎖を含有する。５Ｈ１０のキメラ重鎖及び軽鎖は、それぞれ、ＶＨ０及びＶＫ０と名付けられた。

キメラ抗体を、ヒト化した。ヒト化重鎖は、同じ相補性決定領域（ＣＤＲ）を保持したが、より多くの「ヒト様」フレームワーク領域を保持し、ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、及びＶＨ５と本明細書において称される、２Ｇ８及び５Ｈ１０可変重鎖の各々のいくつかのヒト化バリアントが、生成された。ＶＫ１、ＶＫ２、ＶＫ３、及びＶＫ４と本明細書において称される、５Ｈ１０のヒト化カッパ軽鎖バリアントもまた、生成された。２Ｇ８のヒト化ラムダ軽鎖は、ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、及びＶＬ４と名付けられた。試験したキメラ及びヒト化軽鎖及び重鎖の２Ｇ８及び５Ｈ１０の組み合わせを、それぞれ、表２及び表３に示す。表２に示されるように、５Ｈ１０抗体変異体の特定の重鎖及び軽鎖の組み合わせは、ｈＳＣＦ２４８への高い結合をもたらした。

結合親和性も、ＢｉａＣｏｒｅ分析を使用して評価した。ＢｉａＣｏｒｅデータは、ＶＫ１、ＶＫ２、またはＶＫ３軽鎖を有するすべてのヒト化５Ｈ１０抗体の固定化ＳＣＦ２４８ペプチド抗原に対する親和性が、このアッセイを使用した親マウス５Ｈ１０の結合親和性と非常に類似していることを示した。ＶＫ４軽鎖を有するヒト化５Ｈ１０抗体は、ペプチドに結合しなかった。

５Ｈ１０クローンＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ３を、ＳＣＦ２４８発現細胞株への結合についてフローサイトメトリーによって評価した。図７Ａ及び７Ｂに示すように、ＶＨ１／ＶＫ３及びＶＨ２／ＶＫ３は、高い結合を示し、１μｇ／ｍＬで最大化した。陰性対照は、二次抗体のみであった。対照ＳＣＦ２２０発現細胞株との結合は、観察されなかった（図示せず）。

実施例４．ＳＣＦとｃ－ｋｉｔとの相互作用のインビトロ阻止
ヒト化５Ｈ１０抗体を、ＳＣＦ－ｃ－ｋｉｔ相互作用及びインビトロでの炎症フィードフォワードループを阻害するそれらの能力について試験した。表面ＳＣＦ２４８を発現する培養ヒトＩＰＦ筋線維芽細胞（Ｍｆｂ）を、ＳＣＦ応答性細胞株であるＬＡＤ２肥満細胞と重ね合わせた。他の介入がなければ、Ｍｆｂは、ＬＡＤ２細胞を刺激し、ＬＡＤ２細胞は、Ｍｆｂを刺激して、さらにサイトカイン及び細胞外マトリックスタンパク質を産生する。このアッセイでは、炎症の読み出し及びフィードフォワードループは、ＣＣＬ１１、コラーゲン１及び３、ならびにフィブロネクチンのｍＲＮＡである。

マウス５Ｈ１０及びヒト化（ＶＨ１／ＶＫ３、ＶＨ２／ＶＫ３、ＶＨ３／ＶＫ３、ＶＨ４／ＶＫ３、及びＶＨ５／ＶＫ３）５Ｈ１０抗体を、Ｍｆｂと１μｇ／ｍＬ及び１０μｇ／ｍＬの濃度で予めインキュベートし、フィードフォワードループを阻害するそれらの能力を評価した。これらの結果を、図８Ａ～８Ｄに示す。ヒト化ＶＨ１／ＶＫ３抗体は、低濃度であっても、ＳＣＦ－ｃ－ｋｉｔ相互作用の阻害を一貫して実証した。

実施例５．腎生検におけるＳＣＦ２４８と疾患進行との相関
巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）患者の腎生検からＳＣＦ２４８ ｍＲＮＡを定量するために、ＲＮＡｓｅｑを実施した。図９Ａに示すように、ＳＣＦ２４８ ｍＲＮＡと糸球体濾過速度との有意な逆相関が、観察された。図９Ｂに示すように、ＳＣＦ２４８ ｍＲＮＡと間質性線維症の割合との正相関も、観察された。さらに、図９Ｃに示すように、ＳＣＦ２４８ｍＲＮＡと腎生検における単核白血球のパーセンテージとの正相関が、特定された。総合すると、これらのデータは、ＳＣＦ２４８と炎症及び進行性腎不全のマーカーとの関連性を示唆している。

さらに、慢性腎疾患の対象の血漿レベルの切断幹細胞因子細胞外ドメインであるＳＣＦ１６５は、推定糸球体濾過率（ｅＧＦＲ）と有意に逆相関し（図１０）、慢性腎疾患における尿中アルブミン／クレアチニン比（ＵＡＣＲ）と相関した（図１１）。

実施例６．５Ｈ１０は、慢性腎臓病モデルにおける疾患を効果的に治療する。
ヒト腎線維症の領域では、ＳＣＦ２４８が、発現される。免疫組織化学による対照ＩｇＧで染色した試料（図１２Ａ）と比較して、マウス５Ｈ１０抗体で染色した試料は、管状間質中のＳＣＦ２４８に対して強度に陽性であった（図１２Ｂ及び図１２Ｃ）。さらに、肥満細胞トリプターゼの染色は、糖尿病腎症及びＩｇＡ腎症を有する患者の腎臓における肥満細胞の存在を示した（図１３Ｂ及び図１３Ｃ）が、健常患者の腎臓における肥満細胞の存在は示さなかった。（図１３Ａ）。

慢性腎臓病（ＣＫＤ）のマウスモデルを用いて、疾患の進行及び生存に対する５Ｈ１０の効果を調査した。Ｃ５７／黒６ ＴＧＦβ１トランスジェニックマウス（ＴＧＦβマウス）は、アルブミンプロモーターの制御下で肝臓においてＴＧＦβ１を過剰発現し、これにより組織線維症を促進する循環ＴＧＦβの増加をもたらす。ＴＧＦβマウスは、進行性の糸球体及びメサンギウムの拡大、ならびに有足細胞密度の減少を経験する。進行性間質線維症は、腎臓重量の減少及び死亡をもたらす。

ＴＧＦβマウスには、２週齢から４週間、５Ｈ１０または対照抗体のいずれかを、２０ｍｇ／ｋｇの用量で、週２回投与した。この実験は、６週目に死亡したため終了した。対照ＩｇＧ抗体で処置したマウスと比較して、５Ｈ１０で処置したマウスは、有意に改善された生存率（ｐ＝０．０３）及び腎臓重量低下の減少（ｐ＝０．０３）を有した（図１４Ａ及び図１４Ｂ）。経験豊富な腎臓病理医によって腎臓をマスクしてスコアリングし、５Ｈ１０処置群の腎臓は、有意に線維症が少なかった（図１４Ｃ）。

疾患進行中の腎臓組織学を評価するために、ＴＧＦβマウスに、５Ｈ１０または対照抗体を２週齢から週２回５ｍｇ／ｋｇで投与し、ＣＫＤ疾患進行中の２週間後に剖検を行った。対照ＩｇＧと比較して、糸球体体積及びメサンギウム体積は、５Ｈ１０処置ではあまり増加せず、組織損傷の減少を示唆した。ＣＫＤの初期段階では、炎症細胞及び細胞外マトリックスの流入に伴い、糸球体体積及びメサンギウム体積が増加する。有足細胞密度を、５Ｈ１０療法を用いて維持し、有足細胞ドロップアウトが少なく、糸球体腫脹が少ないことを示した（図１５Ａ、図１５Ｂ、図１５Ｃ）。ＲＮＡシークエンシングは、ｍ５Ｈ１０で処置した動物において、コラーゲン３型アルファ１鎖（図１６Ａ）、コラーゲン６型アルファ３鎖（図１６Ｂ）、コラーゲンＸＶ型アルファ１鎖（図１６Ｃ）、１を含有するフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（図１６Ｄ）、フィブリン１（図１６Ｅ）、及びマイクロフィブリル関連タンパク質４（図１６Ｆ）において統計的に有意な減少を示した。したがって、慢性腎疾患モデルにおける５Ｈ１０抗体の投与は、腎線維症を有意に低下させ、生存率を改善し、抗体が腎疾患の治療として有用であることを示した。

本明細書で引用される刊行物、特許、及び特許出願は、具体的には、参照によりそれらの全体が組み込まれる。記載された本発明を、その特定の実施形態を参照して説明してきたが、当業者は、本発明の真の主旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更が行われてもよく、均等物が置き換えられてもよいことを理解されたい。加えて、記載された本発明の客観的精神及び範囲に対して特定の状況、材料、物質の組成、プロセス、プロセスステップ（複数可）を採用するために多くの変更が行われ得る。すべてのそのような修正は、特許請求の範囲内であることが意図される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
炎症性または線維性腎疾患の治療を必要とする対象における炎症性または線維性腎疾患を治療するための方法であって、前記対象に、幹細胞因子（ＳＣＦ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を投与することを含み、前記抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ、配列番号１、２、及び３を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、それぞれ、配列番号４、５、及び６による軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む、前記方法。
(項目２)
前記抗体またはその断片が、配列番号７、８、９、１０、及び１１から選択される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する重鎖可変領域を含む、項目１に記載の方法。
(項目３)
前記抗体またはその断片が、配列番号７、８、９、１０、及び１１から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変領域を含む、項目１または項目２に記載の方法。
(項目４)
前記抗体またはその断片が、配列番号１３、１４、１５、及び１６から選択される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する軽鎖可変領域を含む、項目１～３のいずれか一項に記載の方法。
(項目５)
前記抗体またはその断片が、配列番号１３、１４、１５、及び１６から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変領域を含む、項目１～４のいずれか一項に記載の方法。
(項目６)
前記抗体またはその断片が、配列番号７、８、９、１０、及び１１から選択される重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１３、１４、１５、及び１６から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む、項目１～５のいずれか一項に記載の方法。
(項目７)
前記抗体またはその断片が、配列番号７に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む、項目１～６のいずれか一項に記載の方法。
(項目８)
前記抗体またはその断片が、配列番号８に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む、項目１～６のいずれか一項に記載の方法。
(項目９)
前記抗体またはその断片が、配列番号９に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む、項目１～６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０)
前記抗体またはその断片が、配列番号１０に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む、項目１～６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１)
前記抗体またはその断片が、配列番号１１に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１６に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む、項目１～６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２)
前記抗体またはその断片が、ヒト化されている、項目１に記載の方法。
(項目１３)
前記抗体が、モノクローナル抗体である、項目１～１２のいずれか一項に記載の方法。
(項目１４)
前記抗体が、ヒトＩｇＧ４ドメインを含む、項目１３に記載の方法。
(項目１５)
前記ＩｇＧ４ドメインが、アミノ酸残基２４１におけるＳ２４１Ｐ変異及びアミノ酸残基２４８におけるＬ２４８Ｅ変異を含み、前記残基の番号付けが、Ｋａｂａｔ番号付けシステムのものである、項目１４に記載の方法。
(項目１６)
前記抗体が、配列番号４２に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖と、を含む、項目１３～１５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１７)
前記抗体が、配列番号４３に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖と、を含む、項目１３～１５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１８)
前記抗体またはその断片が、ＳＣＦ２４８に特異的に結合する、項目１～１７のいずれか一項に記載の方法。
(項目１９)
前記抗体が、ＳＣＦ２２０に結合しない、項目１～１８のいずれか一項に記載の方法。
(項目２０)
前記炎症性または線維性腎疾患が、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、末期腎疾患（ＥＲＳＤ）、腎線維症、糸球体腎炎、及び腎症からなる群から選択される、項目１～１９のいずれか一項に記載の方法。
(項目２１)
前記腎症または糸球体腎炎が、ＩｇＡ腎症、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症、急速進行性糸球体腎症、半月体形成性糸球体腎炎、ループス腎炎、高血圧性腎症、または糖尿病性腎症である、項目２０に記載の方法。

Claims (9)

1. 炎症性または線維性腎疾患の治療を必要とする対象における炎症性または線維性腎疾患を治療するための組成物であって、幹細胞因子２４８（ＳＣＦ２４８）に特異的に結合する抗体を含み、前記抗体が、それぞれ、配列番号１、２、及び３を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、それぞれ、配列番号４、５、及び６による軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含み、前記抗体が、
   （ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
   （ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む、前記組成物。
2. 前記抗体が、ヒト化されている、請求項１に記載の組成物。
3. 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１に記載の組成物。
4. 前記抗体が、ヒトＩｇＧ４ドメインを含む、請求項３に記載の組成物。
5. 前記ＩｇＧ４ドメインが、アミノ酸残基２４１におけるＳ２４１Ｐ変異及びアミノ酸残基２４８におけるＬ２４８Ｅ変異を含み、前記残基の番号付けが、Ｋａｂａｔ番号付けシステムのものである、請求項４に記載の組成物。
6. 前記抗体が、配列番号４２に記載の重鎖と、配列番号４９に記載の軽鎖と、を含む、請求項２～５のいずれか一項に記載の組成物。
7. 前記抗体が、ＳＣＦ２２０に結合しない、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
8. 前記炎症性または線維性腎疾患が、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、末期腎疾患（ＥＲＳＤ）、腎線維症、糸球体腎炎、及び腎症からなる群から選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。
9. 前記腎症または糸球体腎炎が、ＩｇＡ腎症、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症、急速進行性糸球体腎症、半月体形成性糸球体腎炎、ループス腎炎、高血圧性腎症、または糖尿病性腎症である、請求項８に記載の組成物。