JP7728704B2 - 炭素環誘導体及びそれらのコンジュゲート誘導体、並びにワクチンにおけるそれらの使用 - Google Patents

Description

本発明はワクチンの分野のものであり、それは、多くの炭素環の繰り返し単位を連結することによって得られる、選択された重合度を有するオリゴマー、並びにそれのコンジュゲート誘導体に関する。本発明のオリゴマー及びそれのコンジュゲート誘導体もまた、選択されたアセチル化度を有する。本発明の誘導体は、例えばワクチンの形での免疫原性組成物の調製に有用である。

髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、世界的な細菌性髄膜炎及び敗血症の主原因であり、侵襲性疾患の発生及び流行を引き起こし得る。侵襲性髄膜炎菌性疾患は世界中で発生している。発生率は世界の地域によって異なるが、乳児、小児及び青年が、侵襲性疾患の発症に対して最も脆弱である。その疾患の症状は急速に進行し、壊滅的な転帰をもたらす場合が多い。それらの莢膜多糖類の抗原性の違いに基づいて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の１２の血清型が同定された。事実上全ての疾患関連分離株が被嚢性であり、血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、Ｘ及びＹが世界中の侵襲性髄膜炎菌感染症の９０％以上に関与している。これらの血清型の分布には、地理的及び時間的な変動がある。

一般に、髄膜炎菌の莢膜多糖類（ＣＰＳ）は、Ｔ細胞非依存性抗原であり、それはＴ細胞の関与なしに免疫応答を与え得ることを意味する。この応答には、免疫記憶、ＩｇＭからＩｇＧへのクラススイッチ、親和性成熟など、Ｔ細胞依存性免疫応答を特徴付けるいくつかの重要な特性が欠けている。しかしながら、多糖類の部分がキャリアタンパク質に連結されている場合、それは記憶効果を生み出す細胞性免疫応答を引き起こし、幼児を保護する。キャリアタンパク質に連結したそのような多糖類は複合糖質と称されることが多く、ワクチンとして特に価値がある。この点で、特に効率的なワクチン（複合糖質ワクチン）は、リンカー部分（又はスペーサー）を介して、又はさらにはその糖の選択されたキャリアタンパク質との直接カップリングによって接続することによって、その糖をキャリアタンパク質に接続させることによって作ることができる。いずれにせよ、複合糖質は、幼児でも記憶と効果を伴うＴ細胞依存性免疫応答を誘発することができるが、非複合ＣＰＳは一般に、成人での記憶効果又は乳児での実質的な免疫原性効果のいずれも提供しない。

髄膜炎菌莢膜多糖類の中で、髄膜炎菌血清型Ａ莢膜多糖類（ＭｅｎＡ ＣＰＳ）は、水中での固有の化学的不安定性の影響を受けることが知られている（例えば、Ｆｒａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ， １９９０， １２， １２３－１４５を参照のこと）。ＭｅｎＡ ＣＰＳは、（１→６）連結した２－アセトアミド－２－デオキシ－アα－Ｄ－マンノピラノシルホスフェート繰り返し単位で構成され、ＭｅｎＡ多糖の加水分解不安定性は、主に環酸素とＮ－アセトアミドが促進するホスホジエステル連結に対する加水分解によるものである。実際、環内の酸素とＮ－アセチル基の両方がホスホジエステルグリコシド連結を不安定化し、下記スキームＡで示すように、ＮＨＡｃの軸方向位置もこの機序に寄与することが認められている（Ｂｅｒｔｉ ｅｔ ａｌ．， Ｖａｃｃｉｎｅ， ２０１２， ３０， ６４０９－６４１５）。

加水分解に耐性のあるＭｅｎＡ多糖模倣物が利用可能であれば、より安定したコンジュゲートワクチンを開発するにあたって非常に魅力的である。ＣＰＳの安定化は様々な方法で達成することができ、環酸素がメチレン基で置き換えられているＭｅｎＡ ＣＰＳ類縁体が先行技術で報告されている。特にこの点で、スキームＢで示す通り、環内の酸素が炭素で置き換えられることで、スキームＡに記載の不安定化が防止される。

Ｔｏｍａ ｅｔ ａｌ． Ｏｒｇ． Ｂｉｏｍｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２００９， ７， ３７３４－３７４０には、ＭｅｎＡ ＣＰＳの繰り返し単位のピラノース酸素に代えてメチレン基となっているモノマーであるＯ－（２－アセトアミド－２－デオキシ－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノシル）ホスフェートの製造が記載されている。この文献は、そのモノマー自体の化学的合成製造についてのみ言及している。

Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．（Ｏｒｇ． Ｂｉｏｍｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２０１２， １０（３３）， ６６７３、及びＡＣＳ Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． ２０１３， ８（１１）， ２５６１）及びＲａｍｅｌｌａ Ｄ． ｅｔ ａｌ．（Ｅｕｒ Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ， ２０１４， ５９１５－５９２４）は、ピラノース酸素原子に代わってメチレン基となっているカルバ糖を用いることによる、グリコシル１－Ｏ－ホスフェートの安定化について説明している。彼らはまた、合成カルバ三量体のタンパク質キャリアへのコンジュゲーションを報告しているが、より高い重合度を有するカルバ類縁体の挙動をさらに調べてはいない。特定のレベルのアセチル化及び／又は特定のアセチル化パターンを有するカルバ類縁体についての言及もない。さらに、検討した三量体は、抗ＭｅｎＡ ＣＰＳ抗体の結合を阻害する可能性が低く、それは、記載された誘導体が比較的弱いコンジュゲート抗原であることを示している。

従って、良好な安定性を有し、また良好な免疫原性プロファイルを示し、信頼性が高く便利な合成手法に従って得ることができ、適切には液体形態で製剤化される髄膜炎に対するワクチン製造に好適であるカルバ類縁体多糖誘導体を見い出すことが必要とされている。

第１の態様において、本発明は、式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）のオリゴマーに関する。
式中、
ｎは≧６であり；
ＲはＨ又は－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ″）_２であり、Ｒ″はＨ又は薬学的に許容されるリン酸対イオンであり；
Ｒ′はＨ又は薬学的に許容されるリン酸対イオンであり；
Ｒ^ｘはＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、各繰り返し単位において同一であっても異なっていても良く；
Ｒ^ｙはＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、各繰り返し単位において同一であっても異なっていても良く；
Ｒ^ｘ又はＲ^ｙの少なくとも一つが、少なくとも一つの繰り返し単位において－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、総合すると、オリゴマー中のＲ^ｘ及びＲ^ｙの約５０～９０％が－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり；
Ａｚは、－ＮＨ（ＣＯ）Ｒ^１、－Ｎ（Ｒ^１）_２及び－Ｎ_３からなる群から選択されるアザ置換基であり、Ｒ^１は、Ｈ、直鎖若しくは分岐のＣ_１－Ｃ_６－アルキル及び直鎖若しくは分岐のＣ_１－Ｃ_６－ハロアルキルからなる群から独立に選択され；
Ｚは、
（ｉ）保護基、
（ｉｉ）タンパク質へのコンジュゲーションのための官能性リンカー、又は
（ｉｉｉ）直鎖若しくは分岐のＣ_１－Ｃ_６アルキル、置換されていても良いフェニル、－Ｃ（Ｏ）Ｙ、又は直鎖若しくは分岐のＣ_１－Ｃ_６－アルキル－Ｘ
であり、
ＹはＨ、直鎖若しくは分岐のＣ_１－Ｃ_６－アルキル又は保護基であり、
Ｘは－ＮＨ_２、－Ｎ_３、－Ｃ≡ＣＨ、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－ＳＨ又は－Ｓ－Ｃ≡Ｎである。

第２の態様において、本発明は、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）のオリゴマーコンジュゲート抗原に関する。
式中、
ｎ、Ｒ、Ｒ′、Ｒ^ｘ及びＲ^ｙは、第１の態様に関連して上記で定義された通りであり；
Ｚはリンカー又は結合であり；
Ｐはタンパク質である。

第３の態様において、本発明は、（ａ）本発明の第２の態様による上記のコンジュゲート；及び（ｂ）少なくとも一つの薬学的に許容される賦形剤を含む免疫原性組成物に関する。

第４の態様において、本発明は、本発明の第２の態様による上記のコンジュゲート、又は本発明の第３の態様による上記の免疫原性組成物を含むワクチンに関する。

第５の態様において、本発明は、対象における髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹの治療又は予防方法であって、治療上又は予防上有効量の第２の態様によるコンジュゲート、又は本発明の第３の態様による免疫原性組成物、又は本発明の第４の態様によるワクチンを対象に投与することを含む方法に関する。

第６の態様において、本発明は、対象における髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹに対する免疫方法であって、免疫学的に有効量の本発明の第３の態様による免疫原性組成物又は本発明の第４の態様によるワクチンを対象に投与することを含む方法に関する。

第７の態様において、本発明は、対象における髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹに対する免疫応答の誘発方法であって、免疫学的に有効な量の本発明の第３の態様による免疫原性組成物、又は本発明の第４の態様によるワクチンを対象に投与することを含む方法に関する。

第８の態様において、本発明は、髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹの治療又は予防のための医薬の製造における、本発明の第３の態様による免疫原性組成物、又は本発明の第４の態様によるワクチンの使用に関する。

第９の態様において、本発明は、髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹの予防又は治療に使用される、本発明の第３の態様による免疫原性組成物、又は本発明の第４の態様によるワクチンに関する。

第１０の態様において、本発明は、髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹに対する免疫応答の誘発で使用される、本発明の第３の態様による免疫原性組成物、又は本発明の第４の態様によるワクチンに関する。

カルバ類縁体ＤＰ８、即ちｎ＝８である式（Ｉａ）のランダムＯ－アセチル化の３反応工程の^１Ｈ－ＮＭＲスペクトルモニタリングである。 アセチル化率（％）を決定するための積分を含む、最終的なランダムＯ－アセチル化カルバ類縁体ＤＰ８（即ち、ｎ＝８である式（Ｉａ））の^１Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。 最終的なランダムＯ－アセチル化カルバ類縁体ＤＰ８（式Ｉａ）の^３１Ｐ ＮＭＲスペクトルである。そのスペクトルは、Ｃ_３＋Ｃ_４の位置で４４％の程度まで発生する同時のアセチル化、及び２８％の程度までのＣ_３又はＣ_４のいずれかで発生するアセチル化を示している。分子の２７％はアセチル化されていない。 ＣＲＭ_１９７及び粗反応のＳＤＳｐａｇｅの特性決定とともに本発明によるオリゴマーのコンジュゲーションスキームを描いた図である。 ２用量及び３用量ワクチン投与後のＥＬＩＳＡ力価である。ｐ値は、天然のベンチマークＭｅｎＡ－ＣＲＭ_１９７と他のワクチン接種群との比較を指すものである。 ２用量及び３用量ワクチン投与後のＥＬＩＳＡ力価である。ｐ値は、天然のベンチマークＭｅｎＡ－ＣＲＭ_１９７と他のワクチン接種群との比較を指すものである。 ３用量ワクチン投与後に測定されたＥＬＩＳＡ力価を示す図であり：抗ＭｅｎＡ多糖ＩｇＧ抗体について、選択的３－Ｏ－アセチル化カルバＭｅｎＡ ＤＰ８のＣＲＭ_１９７コンジュゲート及びベンチマークとしての天然ＭｅｎＡ－ＣＲＭ_１９７ワクチン（即ち、陽性対照）と比較して、ランダムＯ－アセチル化カルバＭｅｎＡ類縁体ＤＰ８のＣＲＭ_１９７コンジュゲートで評価を行っている。 ウサギ（ｒＳＢＡ）及びヒト補体（ｈＳＢＡ）で得られた本発明による２用量及び３用量ワクチン投与後のＳＢＡ力価を示す図である。 ３用量ワクチン投与後のＳＢＡ力価を示す図であり：選択的３－Ｏ－アセチル化カルバＭｅｎＡ ＤＰ８のＣＲＭ_１９７コンジュゲート及びベンチマークとしての天然ＭｅｎＡ－ＣＲＭ_１９７ワクチン（即ち、陽性対照）と比較して、ランダムＯ－アセチル化カルバＭｅｎＡ類縁体ＤＰ８のＣＲＭ_１９７コンジュゲートで誘発された血清における、ヒト補体で介在される殺菌力価を測定した。 ＭｅｎＡ－ＣＲＭ_１９７（すなわち、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされた天然ＭｅｎＡ多糖）の安定性を、ｎが７であり、オリゴマーがＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている本発明のアセチル化オリゴマーと比較するグラフである。

本発明の理解を容易にするために、多くの用語及び句を以下で定義する。具体的に説明されていない場合であっても、以下の用語及び句（過去、現在などの時制を含む）の当業界での認識される同義語又は代替語が想到される。

本開示及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを指示していない限り、複数形を含む。即ち、「ａ」は、別断の断りがない限り、「１以上」を意味する。

「Ａ及び／又はＢ」などの句で使用される「及び／又は」という用語は、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」、及び「Ｂ」を含むことを意図している。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」などの句で使用される「及び／又は」という用語は、以下の実施形態：Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）のそれぞれを包含することを意図している。

別断の断りがない限り、指定「Ａ％－Ｂ％」、「Ａ－Ｂ％」、「Ａ％からＢ％（Ａ％ｔｏＢ％）」、「ＡからＢ％（ＡｔｏＢ％）」、「Ａ％－Ｂ」、「Ａ％からＢ（Ａ％ｔｏＢ）」は全て、それらの通常の及び慣習的な意味を与えられる。一部の実施形態において、これらの指定は同義語である。

「実質的に」又は「実質的な」という用語は、説明又は主張された状態が、説明された標準として全ての重要な側面で機能することを意味する。従って、「実質的に不含」とは、たとえ、数値がいくつかの不純物又は物質の存在を示しているとしても、全ての重要な側面で不含状態として機能する状態を包含することを意味する。「実質的な」とは、一般に、９０％を超える、好ましくは９５％を超える、最も好ましくは９９％を超える値を意味する。特定の値が明細書及び特許請求の範囲で使用されている場合、別断の断りがない限り、「実質的に」という用語は、その特定の値についての許容可能な誤差範囲であることを意味する。

「有効量」とは、参照された効果又は転帰を引き起こすのに十分な量を意味する。「有効量」は、述べられた目的に関連して既知の技術を使用して、経験的にかつ常法で決定することができる。

「免疫学的有効量」又は「治療的有効量」とは、単回投与又は連続投与の一部として個体へのその量の投与が、治療又は予防に有効であることを意味する。この量は、治療される個体の健康及び体調、年齢、治療される個体の分類学的群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、抗体を合成する個体の免疫系の能力、望まれる保護の程度、ワクチンの製剤、治療を行う医師による医学的状況の評価、及びその他の関連する要素に応じて変化し得る。その量は、通常の試験で決定できる比較的広い範囲に収まると予測される。

「治療」という用語は、次のもの：（ｉ）従来のワクチンの場合のように、感染又は再感染の予防、（ｉｉ）症状の重度の軽減、又は症状の除去、（ｉｉｉ）症状の再発の遅延、及び（ｉｖ）対象における問題の病原体若しくは障害の実質的又は完全な排除のいずれか一つを意味する。従って、治療は、予防的（感染前）に、又は治療的（感染後）に影響され得る。

「重量％（％ｗ／ｗ）」という用語は、示されるように、異なる化合物に対する又は組成物の全含有量に対する所与の化合物の重量パーセントを示す。

同様に、「体積％（％ｖ／ｖ）」という用語は、示されているように、異なる化合物又は組成物の全含有量に対する、所与の化合物の体積パーセントを示す。

「オリゴ糖」という用語は、その意味において、当技術分野で一般に知られているように、３～１０個の単糖単位を有する多糖を含む（例えば、ｈｔｔｐｓ：／／ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｏｌｉｇｏｓｕｇａｒを参照のこと）。

「オリゴマー」という用語は、環内酸素がメチレン（－ＣＨ_２－）基で置き換えられることでシクロヘキサン骨格を提供する、カルバ類縁多糖類を指す。

「重合度」（ＤＰ）は、最終的なオリゴマーを提供するために一緒に連結されたモノマーの数を示す。本発明において、別断の断りがない限り、ＤＰは、式（Ｉ）及び（ＩＩ）において「ｎ」によって表される。

「平均重合度」（ａｖＤＰ）は、オリゴマーを構成する繰り返し単位の平均数を示す。

「莢膜多糖類／糖類」（ＣＰＳ）という用語は、細菌の細胞外皮の外側にあることで、細菌細胞自体の外側の外皮の一部である層に見ることができる糖類を示す。ＣＰＳは、広い範囲の細菌の最外表面で発現し、場合によっては真菌でも発現する。

別段の定めがない限り、「コンジュゲーション」という用語は、対象となる実体、特にｎ（即ち、ＤＰ）≧６を有する本発明のオリゴマー及び選択されたタンパク質の接続又は連結を示す。

本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、飽和、直鎖、又は分岐の炭化水素部分を表す。「Ｃ_１－Ｃ_６－アルキル」という用語は、１～６個の炭素原子を含むアルキル部分を指す。

本明細書で使用される場合、「ハロアルキル」という用語は、１以上の水素原子がハロゲン原子で置き換えられている飽和、直鎖又は分岐の炭化水素部分を表す。特に、「ハロアルキル」と言う場合、それは、ハロゲンがフルオロである「フルオロアルキル」への言及である。「Ｃ_１－Ｃ_６－ハロアルキル」という用語は、１以上の水素原子がハロゲン原子で置き換えられている、１～６個の炭素原子を含むアルキル部分を指す。例としては、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２ＣＦ_３などがある。

本明細書で使用される場合、特にＺの定義によれば、フェニルは置換されていても良い。フェニル基は、Ｎ_３、ＮＨ_２、ＳＨなどのコンジュゲーションを可能にするために、１以上の反応性官能基で置換されていても良い。他の適切な基は、当業者によく知られている。

本明細書で使用される場合、「保護基」という用語は、所定の目的のための任意の好適な保護基である。そのような保護基の選択と使用法、及びそれらの使用法の詳細は、例えば、Ｇｒｅｅｎｅ， Ｔ． Ｗ． ａｎｄ Ｗｕｔｓ， Ｐ． Ｇ． Ｍ．， ″Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ″に記載のものを使用できる。適切な保護基は当業者には知られている。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容されるリン酸対イオン」という用語は、リン酸基に適した任意の対イオン、即ち、妥当な医学的判断の範囲内であり、過度の毒性、刺激その他の問題や合併症なくヒト及び動物の組織と接触する使用に適切であり、妥当な利益／リスク比に相応の金属カチオンである。薬学的に許容されるリン酸対イオンは、第１族又は第２族金属であることができる。そのような薬学的に許容されるリン酸対イオンの特定の例は、ナトリウム（Ｎａ^＋）及びカリウム（Ｋ^＋）である。例えば、本発明のオリゴマー又はコンジュゲートが緩衝液中にある場合、対イオンはナトリウムであることが好ましい。

上記のように、本発明は、重合度が少なくとも６であり、第１の単位のＣ－１を第２の単位のＣ－６に接続する１，６連結を介して第２の類縁体モノマーに接続されている第１の類縁体モノマーを有し、前記１，６連結がホスホネート部分を含む多糖カルバ類縁体（即ち、マンノサミン単位の環酸素がメチレンで置き換えられているもの）に関する。注目すべきことに、本発明の誘導体は、ＭｅｎＡ血清型からの天然多糖を模倣することができるだけでなく、天然ＣＰＳと比較して改善された安定性を有することも予測される。

ある実施形態では、本発明のオリゴマーは、式（Ｉａ）によって定義される。ある実施形態では、本発明のオリゴマーコンジュゲート抗原は、式（ＩＩａ）によって定義される。

上記で定義した通り、ｎは≧６である。ある実施形態では、ｎは８～３０である。別の実施形態では、ｎは８～２０である。特定の実施形態では、ｎは８～１５である。ある実施形態では、ｎは≦１５である。特に、ｎは８又は１０である。ある実施形態では、ｎは８である。

ある実施形態では、ＲはＨ又は－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ″）_２であり、少なくとも一つのＲ″がＮａ^＋である。ある実施形態では、ＲはＨである。

ある実施形態では、Ｒ′はＮａ^＋であり、本発明のオリゴマーは、式（Ｉａ′）又は（Ｉｂ′）、好ましくは式（Ｉａ′）で定義される。

従って、ある実施形態では、本発明のオリゴマーコンジュゲート抗原は、式（ＩＩａ′）又は式（ＩＩｂ′）、好ましくは式（ＩＩａ′）で定義されるということになる。

上記で定義した通り、Ｒ^ｘはＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、各繰り返し単位で同じ又は異なっていてもよく、Ｒ^ｙはＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、各繰り返し単位で同じ又は異なっていてもよく、Ｒ^ｘ又はＲ^ｙのうちの少なくとも一つが、少なくとも一つの繰り返し単位において－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、総合すると、オリゴマー中のＲ^ｘ及びＲ^ｙの約５０～９０％が－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３である。従って、理解すべき点として、式（Ｉａ）、（ＩＩａ）、（Ｉｂ）及び（ＩＩｂ）に従って角括弧内で定義される式は、オリゴマーの各単位がこの骨格を有するが、Ｒ^ｘとＲ^ｙについての異なる選択肢は角括弧で定義された各繰り返し単位について選択可能であることを考慮すると、角括弧によって定義されたモノマー単位は必ずしも同一であるとは限らない。従って、ｎ及びＲ^ｘ及びＲ^ｙについてのＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３の選択に応じて、異なるアセチル化率（％）が達成され得ることが理解されるであろう。例えば、角括弧によって定義されるオリゴマーの各繰り返し単位は、アセチル化のレベルに応じて、即ち、Ｒ^ｘ及びＲ^ｙのそれぞれについてのＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３の選択に応じて、同じであっても異なっていてもよい。

上記で定義した通り、総合すると、オリゴマー中のＲ^ｘ及びＲ^ｙの約５０～９０％は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３である。換言すれば、オリゴマーのアセチル化の総量は約５０～９０％である。言い換えれば、本発明のオリゴマーにおいて、Ｒ^ｘの少なくとも一つ及びＲ^ｙの一つは、同一又は異なる繰り返し単位中の－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、３位（Ｒ^ｙは－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３）及び４位（Ｒ^ｘは－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３）での合計アセチル化度は約５０～９０％である。誤解を避けるために、上記のように、Ｒ^ｘ及びＲ^ｙは、オリゴマーの各繰り返し単位において同一であっても異なっていても良い。

別の実施形態では、総合すると、オリゴマー中のＲ^ｘ及びＲ^ｙの約６０～８０％は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３である。言い換えれば、オリゴマーのアセチル化の総量は約６０～８０％である。誤解を避けるために、上記のように、Ｒ^ｘ及びＲ^ｙは、オリゴマーの各繰り返し単位において同一であっても異なっていても良い。

ある実施形態では、Ｒ^ｘ及びＲ^ｙの両方が、本オリゴマーの少なくとも一つの同じ繰り返し単位において、好ましくは、オリゴマーの繰り返し単位の約４０～５０％において－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり；残りの繰り返し単位の約１０～３０％は、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であるＲ^ｘ又はＲ^ｙのうちの一方を有することができ、オリゴマー中の残りの繰り返し単位は、Ｒ^ｘ＝Ｒ^ｙ＝Ｈを有する。

上記で定義した通り、Ａｚは、－ＮＨ（ＣＯ）Ｒ^１、－Ｎ（Ｒ^１）_２及び－Ｎ_３からなる群から選択されるアザ置換基であり、Ｒ^１は、Ｈ、直鎖又は分岐のＣ_１－Ｃ_６－アルキル及び直鎖又は分岐のＣ_１－Ｃ_６－ハロアルキルからなる群から独立に選択される。窒素原子は、カルバ類縁体繰り返し単位に直接接続している。

そのようなＡｚ置換基の例には、－Ｎ_３、－ＮＨ_２、－ＮＨ－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、－Ｎ－（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）_２及び－ＮＨ（ＣＯ）－Ｃ_１－Ｃ_６アルキルなどがある。ある実施形態では、－Ｃ_１－Ｃ_６アルキルは、－Ｃ_１－Ｃ_４アルキル、特に－ＣＨ_３である。従って、ある実施形態によれば、Ａｚは、－ＮＨ（ＣＯ）－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、特に－ＮＨ（ＣＯ）－ＣＨ_３であり、－ＮＨＡｃとしても示される（Ａｃは、アセテート、即ち、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３を示す）。

Ｚは、本発明のオリゴマーがタンパク質にコンジュゲートしているか否かに応じて異なる意味を有し得る。

式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）によれば、本発明のオリゴマーはタンパク質にコンジュゲートしていない。従って、上記で定義した通り、式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）によれば、Ｚは次のいずれかである。
（ｉ）保護基、
（ｉｉ）直鎖若しくは分岐のＣ_１－Ｃ_６アルキル、置換されていても良いアリール、－Ｃ（Ｏ）Ｙ、又は直鎖若しくは分岐のＣ_１－Ｃ_６－アルキル－Ｘ、又は
（ｉｉｉ）タンパク質へのコンジュゲーションのための官能性リンカー。

従って、ある実施形態によれば、Ｚは、例えば、さらなる鎖伸長のために、又はその後の修飾のために、それが非反応性又は反応性であり得るように、末端糖単位をキャッピングするための手段である。

Ｚが末端カルバ類縁体単位をキャッピングするための手段であることが意図される場合、それは、保護基又はキャッピング基、例えば、直鎖若しくは分岐のＣ_１－Ｃ_６アルキル、置換されていても良いフェニル、Ｃ（Ｏ）－Ｙ、又は直鎖若しくは分岐の－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル－Ｘを含むことができ、Ｘは－ＮＨ_２、－Ｎ_３、－Ｃ≡ＣＨ、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－ＳＨ又は－ＳＣ≡Ｎであり、ＹはＨ、直鎖若しくは分岐のＣ_１－Ｃ_６－アルキル又は保護基である。

本明細書で定義されるように、Ｚは、タンパク質へのコンジュゲーションのための官能性リンカーであり得る。この場合、「官能性リンカー」は、糖をタンパク質にコンジュゲートさせるために使用されることが当技術分野で知られている任意のリンカーを指す。

ある実施形態では、Ｘは－ＮＨ_２である。

ある実施形態では、式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）によるＺは、－（ＣＨ_２）_６－ＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_４－ＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_３－ＮＨ_２及び－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ_２から選択され、アミノ基は、適切な保護基、例えば－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３によって保護されていても良い（そのような保護基の選択と使用法、及びそれらの使用法の詳細は、例えば、Ｇｒｅｅｎｅ， Ｔ． Ｗ． ａｎｄ Ｗｕｔｓ， Ｐ． Ｇ． Ｍ．， ″ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ″に記載のものを使用できる。）。

本発明のオリゴマーは、多糖カルバ類縁体の製造のための有機合成で公知の合成手法に従って製造することができる。一般に、本発明のオリゴマーの製造は、繰り返し単位間に１，６－アルファ連結（ｌｉｎｋａｇｅ）を形成することにより、所望の方法で少なくとも６個のマンノサミンカルバ類縁体構成ブロックを連結させることによって達成することができ、それにより、少なくとも６の重合度を有するオリゴマーが提供される。式（Ｉ）に示されるように、それらのモノマーは、アルファ－（１→６）ホスフェート連結を介して連結され、そのような接続は、とりわけ、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｏｒｇ． Ｂｉｏｍｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２０１２， １０， ６６７３に記載のものなどの標準的な重合技術を使用して行うことができる。

マンノサミンカルバ類縁体構成ブロックは、位置３及び／又は４にアセテート、又は合成の任意の工程でアセテートで置き換えることができる保護基を有し得る。

或いは、ある実施形態によれば、本発明は、下記の工程を含む式（Ｉ）のオリゴマーの製造方法に関する。
ａ．ホスホジエステル連結を有するモノマーの製造；
ｂ．例えばホスホルアミダイトを用いる、得られたモノマーの伸長反応；
ｃ．オリゴマーのＯ－アセチル化。

ある実施形態では、Ｒ^ｙがＣ（Ｏ）ＣＨ_３である場合、工程（ｂ）及び（ｃ）は、伸長反応の前にＯ－アセチル化が行われるように、逆であっても良い。

より詳細には、プロセスは、スキーム１に示される工程を含み得る。

誤解を避けるために、Ａｃはアセチル基、即ち－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３を指すことを意図している。

スキーム１：本発明のオリゴ糖の製造方法
（ａ）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ、０℃→室温、９２％。（ｂ）ＭｅＯＮａ、ＭｅＯＨ、室温、８５％。（ｃ）ＤＭＴｒＣｌ、Ｅｔ_３Ｎ、ＤＣＭ、室温、９１％。（ｄ）_２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピル－クロロホスホルアミダイト、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＣＭ、室温、９（９４％）。（ｅ）Ｉ．１１、ＤＣＩ、ＭｅＣＮ、ＩＩ．ＣＳＯ、ＭｅＣＮ、ＩＩＩ．ＴＣＡ、ＤＣＭ、Ｈ_２Ｏ、９４％。（ｆ）Ｉ．９、ＤＣＩ、ＭｅＣＮ、ＩＩ．ＣＳＯ、ＭｅＣＮ、ＩＩＩ．ＴＣＡ、ＤＣＭ、Ｈ_２Ｏ、１６（８２％）、１７（９５％）、１８（９０％）、１９（９２％）、２０（８８％）、２１（８６％）、２２（８７％）。（ｇ）ＮＨ_４ＯＨ、Ｈ_２Ｏ、ジオキサン。（ｈ）Ｈ_２、Ｐｄブラック、Ｈ_２Ｏ、ＡｃＯＨ、１（９９％）、２（７６％）、３（６９％）、４（３９％）、５（８８％）、６（８３％）、７（７７％）、８（４４％）、（ｉ）：（Ｂｏｃ）_２Ｏ、ＮａＨＣＯ_３、室温、１６時間；（ｌ）：Ａｃ_２Ｏ／イミダゾール、４０℃、～９ｄ；（ＮＳ）；ＴＦＡ、室温、１時間。

特に、ホスホルアミダイト構成ブロックの使用は、ホスホジエステル連結（ｌｉｎｋａｇｅ）の形成により効果的である。本発明者らは、伸長させる１級アルコールの機能を一時的にマスクするために、ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）エーテルの使用を選択した。各伸長工程は、ホスホルアミダイトと成長鎖アルコールとのカップリング、中間体ホスファイトの相当するホスホジエステルへの酸化、及び（ｎ＋１）オリゴマー上の１級ヒドロキシルのアンマスキングを含む３工程手順の反復に基づいている。スキーム１に示されているように、重要な構成ブロック９は中間体１０から得られ、そして中間体１０は既知のカルバ糖１２から３工程で得られる（例えば、Ｑ． Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｏｒｇ． Ｂｉｏｍｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２０１２， １０， ６６７３－６６８１を参照のこと）。後者のカルバマンノース構成ブロックは、従来技術の方法論に従って、市販の３，４，６－トリ－Ｏ－アセチル－Ｄ－グルカールから製造することができる。従って、一級シリルエーテル及びアセチルエステルを、フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）及びＮａＯＭｅの連続作用によって化合物１２から除去して、収率８５％でジオール１４を得た。次に、ＤＭＴｒ基を位置選択的に導入して、収率９１％でアルコール１０を得た。この化合物を、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－クロロホスホルアミダイトとの反応により、伸長ブロックホスホルアミダイト９に変換した。手持ちの構成ブロックで、標的のオリゴマーを組み立てた。その合成は、既知のホスホルアミダイト１１を使用してアルコール１０へのアミノヘキサノールスペーサーの取り付けから開始した。ホスホルアミダイトの活性化のための活性剤としてジシアノイミダゾール（ＤＣＩ）を使用する２工程ワンポット反応で構成ブロックをカップリングさせた。ｉｎ ｓｉｔｕで形成されたホスファイトは、（１Ｓ）－（＋）－（１０－カンファースルホニル）－オキサジリジン（ＣＳＯ）を用いて酸化された。ＤＣＩ（ｐＫａ５．２）は、酸性度が低く、酸不安定性のＤＭＴｒ基と組み合わせて使用するのに適しているため、従来使用されているテトラゾール（ｐＫ_ａ４．９）より好ましかった。アセトニトリルなどの非水溶媒での溶解度が高いため、ヨウ素に代えてＣＳＯを使用した。粗ホスホジエステル生成物をＴＣＡで処理してＤＭＴｒ基を切断した。生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０）で精製して、スペーサーを備えたモノマー１５を収率９４％で得た。その後のカップリングは全て、上記の手順に従って、８以上の所望の重合度に達するまで実施した。より長いオリゴマーの伸長のために、より多量のホスホルアミダイト９を使用し、カップリング反応時間を増加させて、アルコールの完全な変換を確実にした。各伸長サイクルについての収率は、８２％～９５％の範囲で、良好ないし優れたものであった。１０から開始して総収率４０％で８量体２２を得た。２工程手順を使用して、フラグメント１６～２２を脱保護した。最初に、シアノエチル基（ＣＥ）をアンモニア水溶液（３３％）を使用して除去した。次に、そのように形成されたホスホジエステル上の全ての残留保護基（ベンジルエーテル及びカルボキシベンジルカーバメート）を、パラジウムブラックでの水素化分解によって開裂させて、標的の非アセチル化オリゴマー１－８を得た。

非アセチル化オリゴマー１－８は、３位及び／又は４位でランダムにＯ－アセチル化することができ、即ち、総合すると、オリゴマー中のＲ^ｘ及びＲ^ｙの約５０～９０％が、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３である。これは、（ｉ）遊離アミン基のＢＯＣ保護；（ｉｉ）例えばＡｃ_２Ｏ／イミダゾールを使用するＯ－アセチル化；及び（ｉｉｉ）脱保護によるアセチル化オリゴマー１ｃ－８ｃ又は１ｄ～８ｄの取得によって達成することができる。次に、そのようなアセチル化オリゴマーは、ビス－スクシンイミジルアジペート（ＳＩＤＥＡとしても知られる）などのリンカー基で活性化され、ＣＲＭ_１９７などのタンパク質にコンジュゲートされ得る。

スキーム２．３－Ｏ－アセチル化モノマー構成ブロックの製造に至るプロセス
（ａ）Ｋ_２ＣＯ_３、ＭｅＯＨ；（ｂ）ＰＭＢＣＨ（ＯＭｅ）_２、ＰＰＴＳ；（ｃ）ＢｎＢｒ、ＮａＨ；（ｄ）ＤＩＢＡＬ－Ｈ、ＤＣＭ；（ｅ）ＤＭＰ、ＤＣＭ；（ｆ）ＰＰｈ_３ＣＨ_３Ｉ、ＫＨＭＤＳ、ＴＨＦ、－７８℃；（ｇ）ｍ＿ジクロロベンゼン、ｔ、μ波；（ｈ）ＮａＢＨ_４、ＥｔＯＨ／ＴＨＦ；（ｉ）ＴＤＳＣｌ、Ｉｍ、ＤＣＭ；（ｊ）ＯｓＯ_４、ＴＭＡＮＯ、３：１アセトン－Ｈ_２Ｏ；（ｌ）（ＭｅＯ）_３Ｃｍｅ、ＰＴＳＡ、ＣＡＮ、次に８０％ＡｃＯＨ；（ｍ）Ｔｆ_２Ｏ、ＤＣＭ／ｐｙ、－２０℃から室温；次にＮａＮ_３、１９：１ＤＭＦ－Ｈ_２Ｏ；（ｎ）ＰＰｈ_３、ＴＨＦ、６０℃、Ｈ_２Ｏ；次にＡｃ_２Ｏ、ＭｅＯＨ；（ｏ）ＮａＯＭｅ／ＭｅＯＨ；（ｐ）ＴＢＳＯＴｆ、２，６－ルチジン、ＤＣＭ；（ｑ）ＤＤＱ、次にＡｃ_２Ｏ、ｐｙ；（ｒ）ＨＦ／ピリジン、ＴＨＦ；（ｓ）ＤＭＴｒＣｌ、ピリジン、ＤＣＭ。

別の方法として、３－Ｏ－アセチル化モノマー構成ブロック及び４－Ｏ－アセチル化構成ブロックを、下記のスキーム３に示すプロセスによって製造することができる。

スキーム３．３－Ｏ－アセチル化及び４－Ｏ－アセチル化モノマー構成ブロックの製造に至るプロセス
（ａ′）Ｋ_２ＣＯ_３、ＭｅＯＨ；（ｂ′）ＴＤＳＣｌ、イミダゾール、ＤＭＦ、－３０℃；（ｃ′）ＢｎＢｒ、ＮａＨ、ＤＭＦ、０℃；（ｄ′）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ；（ｅ′）ＩＢＸ、ＡｃＯＥｔ；（ｆ′）ＰＰｈ_３ＣＨ_３Ｉ、ＫＨＭＤＳ、ＴＨＦ、－７８℃から室温；（ｇ′）１，３－ジクロロベンゼン、ＮａＢＨ_４、ＥｔＯＨ／ＴＨＦ、２３０℃；（ｈ′）ＴＩＰＳＣｌ、イミダゾール、ＤＭＦ；（ｉ′）ＴｉＣｌ_４、ＤＣＭ／トルエン２：８、－７０℃；（ｌ′）ＮａｐＢｒ、ＮａＨ、ＤＭＦ、０℃；（ｍ′）Ｍｅ_３ＮＯ・２Ｈ_２Ｏ、アセトン／Ｈ_２Ｏ３：１、ＯｓＯ_４；（ｎ′）（ＭｅＯ）_３ＣＭｅ、ＰＴＳＡ、ＡＣＮ；（ｏ′）Ｔｆ_２Ｏ、ＤＣＭ／Ｐｙ、－２０℃から室温；次にＮａＮ_３、１９：１ ＤＭＦ－Ｈ_２Ｏ；（ｐ′）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ；（ｑ′）ＴＢＳＯＴｆ、－１０℃～７０℃、Ｐｙｒ、ＤＭＡＰ；（ｒ′）Ｐｄ／Ｃ、Ｈ_２、ＡｃＯＨ、次にＡｃ_２Ｏ、Ｐｙｒ；（ｓ′）ＨＦｐｙｒ、Ｐｙｒ；（ｔ′）ＤＭＴｒＣｌ、Ｐｙｒ、０℃；（ｒ″）ＤＤＱ、ＤＣＭ、Ｈ_２Ｏ；（ｓ″）ＰＰｈ_３、Ｈ_２Ｏ、ＴＨＦ、次にＤＭＴｒＣｌ、Ｐｙｒ。

アセチル化構成ブロック３８、５５ａ、５５ｂ及び完全アセチル化構成ブロック（即ち、同じ単位のＣ_３及びＣ_４位置の両方にＯ－Ａｃ基を有する）は、ホスホルイミデートへの変換及び化合物９に関連して上記で説明したその後のカップリングによって、そのオリゴマーバージョンに変換することができる。

本発明のカルバ類縁体の免疫原性の重要な前提条件は、対応するＭｅｎＡ莢膜糖を模倣するそれらの能力である。これを調べるために、異なる重合度のカルバ類縁体を使用して競合ＥＬＩＳＡを実施した。

本発明のオリゴマーは、哺乳動物宿主、及び好ましくはヒト宿主などの宿主に、単独で、又はキャリアタンパク質に連結して、又はマンノースカルバ類縁体単位のホモポリマー若しくはヘテロポリマーとして導入することができる。特定の実施形態において、本発明のオリゴマーは、タンパク質コンジュゲートとして使用される。従って、さらなる態様において、本発明は、一般式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）に従って、タンパク質に接続された式（Ｉ）の本発明のオリゴマーを含むコンジュゲート誘導体を含む。
式中、
ｎ、Ｒ、Ｒ′、Ｒ^ｘ、及びＲ^ｙは上記で定義されたとおりであり；
Ｚはリンカー又は結合であり；
Ｐはタンパク質である。

一般式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）のオリゴマーは、好ましくはリン酸部分を介して第１の繰り返し単位のＣ－１炭素に接続したＺ部分を介してタンパク質にコンジュゲートされると特に有用である。そうして得られた式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）のオリゴマー－タンパク質コンジュゲート誘導体は、乳児において免疫原性応答を誘発することができ、そして恐らくワクチン接種の有効性を延長するためのメモリー効果を提供する細胞応答を誘発することができる組成物の調製に有用な可能性がある。

ある実施形態では、オリゴマーコンジュゲートは、好ましくは、式（ＩＩａ）によって定義され、即ち、タンパク質がカルバ類縁体の６位ではなく１位でコンジュゲートする。

タンパク質（又はキャリアタンパク質）は、免疫原性応答に影響を及ぼし、コンジュゲートとして送達された場合に本発明の１以上の化合物で哺乳動物を処理することから生じる抗体の正確な性質にさえ影響を及ぼし得る。適切なタンパク質は、Ｚ部分の末端部分と反応して、本発明のコンジュゲート誘導体を形成することができる官能基を有するものである。好ましくは、前記官能基は、－ＮＨ_２及び－ＳＨから選択され、アミド結合又はチオエーテルを形成するＺ部分に接続することができる。より好ましくは、そのタンパク質は、Ｚと反応したときにアミド結合を形成するのに適した－ＮＨ_２基を有する。

有用なタンパク質は当技術分野で知られている。しかしながら、ある実施形態では、Ｐは、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ＣＲＭ_１９７、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ及び緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素（ｒＥＰＡ）から選択される不活化細菌毒素であるか、Ｐは、ポリ（リジン：グルタミン酸）などのポリアミノ酸であるか、Ｐは、Ｂ型肝炎ウイルスコアタンパク質又はＳＰＲ９６－２０２１、又は髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ抗原ｆＨｂｐ－２３１（即ち、ＷＯ２０１５／１２８４８０（参照により本明細書に組み込まれる）において定義されているように、因子Ｈ結合タンパク質（ｆＨｂｐ）のバリアント２、バリアント３及びバリアントＩの融合タンパク質）である。

ある実施形態では、Ｐは、ＴＴ、ＤＴ又はＣＲＭ_１９７である。

特定の実施形態では、ＰはＣＲＭ_１９７である。

上記で定義した通り、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）によれば、Ｚはリンカー又は結合である。Ｚがリンカーである場合、それは、オリゴ糖のタンパク質へのコンジュゲーションに適した、当技術分野で知られている任意の適切なリンカーから誘導することができる。

言い換えれば、未反応型でのＺ、即ち、オリゴマー及びタンパク質に連結されていない時のＺは、それが本発明のオリゴマーとタンパク質との間のリンカーとして作用することを可能にする官能基を有することで、Ｚは官能性リンカー（式（Ｉａ）及び式（Ｉｂ）に従って定義）であり得る。好ましくは、Ｚは、タンパク質キャリア上の相補基とカップリングするためのアミン、カルボキシレート、又はヒドロキシル基を含む化合物から誘導されるが、オリゴ糖をタンパク質にコンジュゲートする方法を提供することが当技術分野で知られている他の基も想到される。

本発明のオリゴマーがタンパク質にコンジュゲートされると、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）中の好ましいＺ部分は、保護された形であっても良いアミン置換アルコキシ基であるリンカーに由来する。この形態の場合、アミンは二官能性試薬でアセチル化又はアルキル化され、それの他方の端は同様にタンパク質に接続する。

ある実施形態では、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）によれば、Ｚは、本発明のオリゴマーをタンパク質に連結することができる、ホモ二官能性又はヘテロ二官能性のいずれかのリンカーに由来する。この点で、本発明のコンジュゲートでの使用に適した二官能性リンカーには、ジカルボン酸、好ましくはマロン酸、コハク酸、アジピン酸及びスベリン酸、又はそれらの活性化型などの当技術分野で知られているものなどがある。或いは、スクアリン酸エステルを使用することができる。これらの種類の試薬は、スペーサー部分がアミンを含む化合物をタンパク質に連結するのに特に便利である。好ましくは、前記二官能性リンカーは、アジピン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドジエステル（ＳＩＤＥＡ）、及びＢＳ（ＰＥＧ）５に由来する。

いくつかの実施形態では、Ｚは少なくとも２原子又は３原子長である。リンカーのいくつかの非限定的な例には、－（ＣＨ_２）_ｍＡ、－Ｐｈ－Ａ、－（ＣＨ_２）_ａ－Ｐｈ－（ＣＨ_２）_ａ－Ａ及びこれらの置換型などがあり、各Ｐｈは、置換されていても良いフェニル基を表し、ａ及びｍはそれぞれ独立に、１～１０の整数を表す。「Ａ」は、－ＮＨ_２、－ＯＨ若しくは－ＳＨ、エステル、アミド、又は他のカルボキシル含有基、ジエン、又はジエノフィル、マレイミド、アルキン、シクロアルキンなどのタンパク質が可能であるか、又はタンパク質を連結することができる又はそれらを連結する官能基又はその残基を表す。Ｚは、ＯＲ′、ＳＲ′又はＮ（Ｒ′）_２を含むことができ、各Ｒ′は独立に、Ｈ又はＣ_１－Ｃ_６－アルキル、アシル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアシル、ヘテロアリール、又はヘテロアリールアルキル基であり、さらにＡを含むことができる。

ある実施形態では、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）におけるＺは、下記式を有するヘテロ二官能性リンカーである。
式中、
^＊は接続箇所を表し、
ｐは独立に１～１０から選択され；
Ｘは、－Ｏ－、－Ｓ－及び－ＮＨ－から選択される。

ある実施形態では、Ｚは式^＊－（ＣＨ_２）_６ＮＨＣＯ（ＣＨ_２）_４ＣＯ^＊を有する。

別の実施形態では、Ｚは、下記式を有するリンカーである。
式中、
^＊は接続点を表し、ｍは独立に１～１０から選択される。

別の実施形態では、Ｚは下記式を有する。

Ｚリンカーは、通常は、伸長するモノマーが接続する前にタンパク質に連結されるモノマーに導入され、任意に保護型で導入されることで、後続の伸長反応に影響を与えたり、それに関与したりすることはない。

従って、ある実施形態では、Ｚは、下記一般式を有する二価リンカーである。
式中、ｒは２～６の整数であり、（^＊）はオリゴマーへの接続箇所を表し、ＰＧは水素又は保護基を表し、好ましくはアルコキシカルボニル、メトキシカルボニル、ｔ－ブチルオキシカルボニル又はベンジルオキシカルボニルから選択される。そのタンパク質はアミンを介して接続している。

存在する場合、ＰＧを好適に除去して、Ｚ部分をタンパク質と反応させてそれのコンジュゲートを得ることを可能とすることができる。或いは、ＰＧを除去することができ、そうして得られた遊離アミノ基を、例えば、タンパク質への連結に適したさらなるスペーサー部分を導入することで、さらに官能化することができる。

ある実施形態では、下記式によるオリゴマーコンジュゲートが提供される。
式中、ｎ、Ｒ、Ｒ′、Ｒ^ｘ、及びＲ^ｙは上記で定義の通りである。

本発明のある実施形態では、下記式による、即ち、Ｒ′がＮａ^＋であるオリゴマーコンジュゲートが提供される。

式中、ｎ、Ｒ、Ｒ^ｘ、及びＲ^ｙは上記で定義の通りである。

本ランダムにアセチル化されたオリゴマーコンジュゲートがワクチン組成物に組み込まれる場合、それは、天然ＭｅｎＡコンジュゲートより高いアセチル化パーセントの安定性を示し、カルバ類縁体がワクチンに製剤されるときに失われる可能性があるアセチル化の５％未満である。

誤解を避けるために、留意すべき点として、本発明のオリゴマーは、例えば、”Ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｓｅｍｉ－ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ａｎｄ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ”， Ｐ． Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ． Ｄｒｕｇ． Ｄｉｓｃｏｖ．に報告されている方法に従って、当技術分野で公知の任意の好適な方法によってタンパク質にコンジュゲートすることができる。

コンジュゲーション反応はまた、ＭｅｎＡ糖のキャリアタンパク質へのコンジュゲーションに使用されるものと同様の、そして例えばＷＯ２００４／０６７０３０に記載されているコンジュゲーション方法を用いて行うこともでき実施することができる。ある実施形態では、本発明のオリゴマーは、例えばＢｅｒｔｉ ｅｔ ａｌ．， ＡＣＳＣｈｅｍ． Ｂｉｏｌ．， ２０１２， ７， １４２０－１４２８に報告されているジ－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルアジペートリンカーを利用するコンジュゲーション手順を用いて、ＣＲＭ_１９７とカップリングさせることができる。トリメチルアミンを含むＤＭＳＯ中で、選択されたリンカーで処理した後、得られた活性化オリゴマーをアセトンとの共沈により精製し、コンジュゲーションに使用することができる。従って、１００：１オリゴマー／タンパク質モル比でＣＲＭ_１９７と一晩インキュベートすることによって、所望のネオコンジュゲートを得ることができる。そのコンジュゲーションは、式（Ｉａ）／（Ｉｂ）のオリゴマーの活性化と、それに続く、選択されるタンパク質へのコンジュゲーション、又は関連するタンパク質官能基の活性化、及びそれに続く、代表的にはＺ部分を介した本発明のオリゴ糖とのコンジュゲーションを想到することができる。従って、ある実施形態によれば、本発明のオリゴマーを、当技術分野で知られている方法に従って、最初に適切な活性化剤で活性化し、次に、選択されたタンパク質の－ＮＨ_２残基とカップリングさせる。

ある実施形態では、Ｚ基は、リンカーの第１の末端部分との反応によって活性化され、それにより、リンカーの他端は、選択されたタンパク質に連結され得る。例えば、そしてある実施形態によれば、そのプロセスは、トリエチルアミンの存在下でのＳＩＤＥＡによる本発明のオリゴマーの活性化により、原料オリゴマーの活性化エステルを得ることを含み得る。次に、そのような活性化エステルを、ホスホン酸緩衝液の存在下でＣＲＭ_１９７と反応させて、所望のコンジュゲートを得ることができる。

コンジュゲーション後、オリゴマー－タンパク質コンジュゲートは、当技術分野で公知の各種技術によって精製することができる。精製工程の一つの目標は、オリゴマー－タンパク質コンジュゲートから未結合のオリゴマーを除去することである。通常は、本発明のコンジュゲートは、特には、例えばＡｎｄｅｒｓｏｎ， Ｐ． Ｗ．， ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． （１９８６）１３７：１１８１－１１８６、及びＪｅｎｎｉｎｇｓ， Ｈ． Ｊ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． （１９８１）１２７：１０１１－１０１８に記載のようなサイズ排除クロマトグラフィー、密度勾配遠心分離、疎水性相互作用クロマトグラフィー又は硫酸アンモニウム分別などの任意の数の標準的技術によって、未反応のタンパク質及びオリゴマーから精製することができる。

別の実施形態において、Ｚは、単糖、好ましくは、以下で記載されるようなマンノサミンであり得る。従って、さらなる実施形態において、本発明はまた、下記式（ＩＩＩ）を有するオリゴマーに関する。
式中、Ｒ、Ａｚ、及びｎは上記で定義されたとおりであり；
Ｚは：
であり；
Ｐ及びリンカーは、式（Ｉ）及び（ＩＩ）についてのＺの定義に関連して上記で定義された通りである。

例えば、このように定義されたコンジュゲートの１例は次のとおりである。

この実施形態によれば、本発明の誘導体は、－Ｏ－リンカーＺ部分を介して選択されたタンパク質に直接連結することで、末端モノマーの炭素原子に直接接続した－Ｏリンカー－Ｐ部分を有するコンジュゲート誘導体を生じさせることができる。リンカーに関する限り、これは、上記で示したリンカーＺによる任意の好適な二価リンカーであることができる。或いは、Ｚは、ケト又はアルデヒド基を有するリンカーで誘導化されたタンパク質にコンジュゲートするためのアミンであることができると考えられる。

本発明のさらなる態様によれば、（ａ）上記のコンジュゲート；及び（ｂ）少なくとも一つの薬学的に許容される賦形剤；を含む免疫原性組成物が提供される。

一般に、薬学的に許容される賦形剤は、それ自体が抗体の産生を誘発せず、組成物を投与される患者に有害ではなく、過度の毒性なしに投与することができる任意の物質であり得る。薬学的に許容されるキャリア及び賦形剤は、当技術分野で使用されるものであり、水、生理食塩水、グリセロール及びエタノールなどの液体を含み得る。従来技術によれば、湿潤剤若しくは乳化剤、ｐＨ緩衝物質などの補助物質もまた、そのような媒体中に存在することができる。

免疫原性組成物は、アジュバントをさらに含み得る。アジュバントは、水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウムなどのアルミニウム系アジュバントであることができる。

免疫原性組成物は、髄膜炎菌血清型Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ及び任意にＡのうちの一つに由来する少なくとも一つの抗原をさらに含み得る。

本発明の免疫原性組成物は、多くの場合、他の薬学的に活性な物質又は他のワクチンと組み合わせて投与される。投与用の組成物は、例えば、他の髄膜炎病原体に対する保護を提供するための免疫応答を誘発することができる、複合糖質などの他のタイプの免疫原性化合物を含んでもよい。

本発明のさらなる態様によれば、上記のようなコンジュゲート、又は既述のような免疫原性組成物を含むワクチンが提供される。

ワクチンは、無菌の実質的に水性の混合物、パイロジェンを含まない緩衝生理食塩水、又は防腐剤を含むことができるか防腐剤を含まないことができるリン酸含有溶液として製剤化することができる。溶液はほぼ等張性であることができ、そしてその等張性は、酒石酸ナトリウム、塩化ナトリウム、プロピレングリコールなどの薬剤で調節することができる。製剤中の本発明の免疫原性オリゴマーコンジュゲートの濃度は、約０．１重量％未満から最大２０重量％～５０重量％以上まで大きく変動し得るものであり、主に流体容量、粘度などによって、そして選択された投与の特定のモードに従って選択される。

本発明はまた、脊椎動物、好ましくは哺乳動物において免疫応答を高める方法であって、本発明のオリゴマーコンジュゲート又は本発明の免疫原性組成物を哺乳動物その他の脊椎動物に投与することを含む方法も含むことができる。免疫応答は、好ましくは保護的であり、好ましくは抗体が関与する。この方法は、ブースター応答を上昇させ得る。

ある態様において、本発明は、対象における髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹの治療又は予防方法であって、治療的又は予防的に有効な量の本発明によるオリゴマーコンジュゲート、又は本発明による免疫原性組成物、又は本発明によるワクチンを対象に投与することを含む方法に関する。そのような方法は、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ及び任意にＡから選択される少なくとも一つの血清型と組み合わせた投与をさらに含むことができる。

本明細書で使用される場合、「本発明の誘導体」という用語は、オリゴマー及びそれのオリゴマーコンジュゲートの両方を指す。本発明の誘導体はまた、他の哺乳動物、例えばウシ、ヒツジ及びブタ並びに魚及び家禽などの他の非哺乳類脊椎動物を免疫するのに用いることもできる。

別の態様において、本発明は、対象における髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹに対して免疫化する方法であって、免疫学的に有効な量の本発明による免疫原性組成物又は本発明によるワクチンを対象に投与することを含む方法に関する。

別の態様において、本発明は、対象において髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹに対する免疫応答を誘発する方法であって、免疫学的に有効量の本発明による免疫原性組成物又は本発明によるワクチンを対象に投与することを含む。

ある実施形態では、対象はヒトである。

さらなる態様において、本発明は、髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹの治療又は予防のための医薬の製造における、本発明による免疫原性組成物又は本発明によるワクチンの使用に関する。

別の態様において、本発明は、髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹの予防の処置に使用するための、又は髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹに対する免疫応答誘発において使用するための、本発明による免疫原性組成物又は本発明によるワクチンに関する。

本発明の免疫原性組成物は、一般に、対象に直接投与される。直接送達は、非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、又は組織の間質腔へ）によって、又は直腸、経口、経膣、局所、経皮、経鼻、眼球、耳、肺又は他の粘膜投与によって達成することができる。例えば大腿や上腕への筋肉内投与が好ましい。注射は針（例えば皮下注射針）を介して行うことができるが、別法として、無針注射を使用することもできる。

本発明はまた、全身性及び／又は粘膜免疫を誘発するのに使用することができる。投薬治療は、単回投与スケジュール又は複数回投与スケジュールであることができる。複数回投与は、初回免疫スケジュール及び／又はブースター免疫スケジュールで使用することができる。初回投与スケジュールの後に、ブースター免疫投与スケジュールを行うことができる。初回投与間（例えば、４～１６週間）、及び初回とブースター免疫の間の適切なタイミングは、常法で決定することができる。感染症は体の様々な領域に影響を与えるので、本発明の組成物は様々な形態で調製することができる。例えば、組成物は、溶液又は懸濁液のいずれかとして、注射剤として調製することができる。注射前の液体媒体中への溶解又は懸濁に適した固体形態も調製することができる。組成物は、軟膏、クリーム又は粉剤として局所投与用に調製することができる。組成物は、錠剤又はカプセルとして、又はシロップとして（香味を付けても良い）経口投与用に調製されてもよい。組成物は、微粉末又は噴霧剤を用いる、例えば吸入器として肺投与用に調製することができる。組成物は、坐剤又はペッサリーとして調製することができる。組成物は、例えば滴剤として、経鼻、耳又は眼球投与用に調製することができる。非経口注射に適した組成物が最も好ましい。組成物は好ましくは無菌である。それは好ましくは、パイロジェンを含まない。それは、好ましくは、例えばｐＨ６～ｐＨ８、一般的にはほぼｐＨ７に緩衝化されている。本発明の組成物は、ヒトに関して等張性であり得る。

免疫原性組成物は、免疫学的に有効な量の本発明のコンジュゲート、並びに必要に応じて任意の他の特定の成分を含む。投薬治療は、単回投与スケジュール又は複数回投与スケジュール（例えば、ブースター免疫用量を含む）であることができる。組成物は、他の免疫調節剤と組み合わせて投与することができる。本発明の組成物に使用できるアジュバントには、不溶性金属塩、水中油型乳濁液（例えば、両方ともスクアレンを含むＭＦ５９又はＡＳ０３）、サポニン類、ＬＰＳの非毒性誘導体（モノホスホリル脂質Ａ又は３－Ｏ－脱アシル化ＭＰＬなど）、免疫刺激性オリゴヌクレオチド類、無毒化細菌ＡＤＰ－リボシル化毒素、微粒子、リポソーム類、イミダゾキノロン類、又はこれらの混合物、好ましくは水酸化アルミニウム、リン酸塩又はこれらの混合物などがあるが、これらに限定されるものではない。免疫刺激剤として作用する他の物質は、例えば、Ｗａｔｓｏｎ， Ｐｅｄｉａｔｒ． Ｉｎｆｅｃｔ． Ｄｉｓ． Ｊ． （２０００）１９：３３１－３３２に開示されている。これらの塩には、オキシ水酸化物及びヒドロキシリン酸塩などがある。塩は、いずれかの好適な形態（例えば、ゲル、結晶、非晶質など）をとすることができる。

番号付きの実施形態
実施形態１
下記式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）のオリゴマー。
式中、
ｎは≧６であり；
ＲはＨ又は－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ″）_２であり、Ｒ″はＨ又は薬学的に許容されるリン酸対イオンであり；
Ｒ′はＨ又は薬学的に許容されるリン酸対イオンであり；
Ｒ^ｘはＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、各繰り返し単位において同一であっても異なっていても良く；
Ｒ^ｙはＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、各繰り返し単位において同一であっても異なっていても良く；
Ｒ^ｘ又はＲ^ｙのうちの少なくとも一つは、少なくとも一つの繰り返し単位中の－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、総合すると、オリゴマー中のＲ^ｘ及びＲ^ｙの約５０～９０％が－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり；
Ａｚは、－ＮＨ（ＣＯ）Ｒ^１、－Ｎ（Ｒ^１）_２及び－Ｎ_３からなる群から選択されるアザ置換基であり、Ｒ^１は、Ｈ、直鎖又は分岐のＣ_１－Ｃ_６－アルキル及び直鎖又は分岐のＣ_１－Ｃ_６－ハロアルキルから選択され；
Ｚは、
（ｉ）保護基、
（ｉｉ）タンパク質へのコンジュゲーションのための官能性リンカー、又は
（ｉｉｉ）直鎖若しくは分岐のＣ_１－Ｃ_６アルキル、置換されていても良いフェニル、－Ｃ（Ｏ）Ｙ、又は直鎖若しくは分岐のＣ_１－Ｃ_６－アルキル－Ｘ
であり、
ＹはＨ、直鎖若しくは分岐のＣ_１－Ｃ_６－アルキル又は保護基であり、
Ｘは－ＮＨ_２、－Ｎ_３、－Ｃ≡ＣＨ、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－ＳＨ又は－Ｓ－Ｃ≡Ｎである。

実施形態２
式（Ｉａ）によって定義される、実施形態１のオリゴマー。

実施形態３
ｎが８～３０である、実施形態１又は実施形態２のオリゴマー。

実施形態４
ｎが８～２０である、実施形態１又は実施形態２のオリゴマー。

実施形態５
ｎが８～１５である、実施形態１又は実施形態２のオリゴマー。

実施形態６
Ａｚが－ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ_３である、先行する実施形態のいずれか一つに記載のオリゴマー。

実施形態７
ｎが８である、先行する実施形態のいずれか一つに記載のオリゴマー。

実施形態８
Ｒ^ｘ及びＲ^ｙの両方が、少なくとも一つの同じ繰り返し単位において、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３である、実施形態１～７のいずれか一つに記載のオリゴマー。

実施形態９
Ｒ^ｘ及びＲ^ｙの両方が、オリゴマーの繰り返し単位の４０～５０％において－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３である、実施形態１～８のいずれか一つに記載のオリゴマー。

実施形態１０
オリゴマーの残りの繰り返し単位の１０～２０％において、Ｒ^ｘ又はＲ^ｙのうちの一つが－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、オリゴマー中の残りの繰り返し単位がＲ^ｘ＝Ｒ^ｙ＝Ｈを有する、実施形態９に記載のオリゴマー。

実施形態１１
式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）のオリゴマーコンジュゲート抗原。
式中、
ｎ、Ｒ、Ｒ′、Ｒ^ｘ及びＲ^ｙは、実施形態１～１０のいずれか一つで定義される通りであり；
Ｚはリンカー又は結合であり；
Ｐはタンパク質である。

実施形態１２
式（ＩＩａ）によって定義される実施形態１１のコンジュゲート。

実施形態１３
Ｐが、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ＣＲＭ_１９７、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ及び緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素（ｒＥＰＡ）から選択される不活化細菌毒素であり、又はＰがポリ（リジン：グルタミン酸）などのポリアミノ酸であり、又はＰがＢ型肝炎ウイルスのコアタンパク質又はＳＰＲ９６－２０２１である、実施形態１１又は１２のコンジュゲート。

実施形態１４
ＰがＣＲＭ_１９７である、実施形態１１～１３のいずれか一つのコンジュゲート。

実施形態１５
Ｚが下記式を有するリンカーである、実施形態１１～１４のいずれか一つのコンジュゲート。
式中、
^＊は接続箇所を表し、
ｐは独立に１～１０から選択され、
Ｘは－Ｏ－、－Ｓ－及び－ＮＨ－から選択される。

実施形態１６
Ｚが、下記式を有するリンカーである、実施形態１１～１４のいずれか一つのコンジュゲート。
式中、
ｍは独立に１～１０から選択される。

実施形態１７
下記構造を有する、実施形態１１～１６のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
式中、
ｎ、Ｒ、Ｒ^ｘ及びＲ^ｙは、実施形態１～１０のいずれか一つで定義される。

実施形態１８
（ａ）実施形態１１～１７のいずれか一つに記載のコンジュゲート；及び（ｂ）少なくとも一つの薬学的に許容される賦形剤を含む、実施形態１１～１７のいずれか一つに記載の免疫原性組成物。

実施形態１９
アジュバントをさらに含む、実施形態１８に記載の免疫原性組成物。

実施形態２０
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ及び任意にＡのうちの一つに由来する少なくとも一つの抗原をさらに含む、実施形態１８又は実施形態１９に記載の免疫原性組成物。

実施形態２１
実施形態１１～１７のいずれか一つに記載のコンジュゲート、又は実施形態１７～１８のいずれか一つに記載の免疫原性組成物を含むワクチン。

実施形態２２
対象における髄膜炎（Ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹの治療又は予防方法であって、治療的又は予防的に有効量の実施形態１１～１７のいずれか一つに記載のコンジュゲート、又は実施形態１８～２０のいずれか一つに記載の免疫原性組成物、又は実施形態２１に記載のワクチンを対象に投与することを含む、方法。

実施形態２３
対象において髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹに対して免疫する方法であって、免疫学的に有効量の実施形態１８～２０のいずれか一つに記載の免疫原性組成物又は実施形態２１に記載のワクチンを対象に投与することを含む、方法。

実施形態２４
対象における髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹに対する免疫応答の誘発方法であって、免疫学的に有効量の実施形態１８～２０のいずれか一つに記載の免疫原性組成物又は実施形態２１に記載のワクチンを対象に投与することを含む、方法。

実施形態２５
対象がヒトである、実施形態２２～２４のいずれか一つに記載の方法。

実施形態２６
髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹの治療又は予防のための医薬の製造における、実施形態１８～２０のいずれか一つによる免疫原性組成物、又は実施形態２１によるワクチンの使用。

実施形態２７
髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹの治療又は予防で使用するための、実施形態１８～２０のいずれか一つに記載の免疫原性組成物、又は実施形態２１に記載のワクチン。

実施形態２８
髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹに対する免疫応答を誘発するのに使用するための、実施形態１８～２０のいずれか一つに記載の免疫原性組成物、又は実施形態２１に記載のワクチン。

本発明は、本発明の範囲に制限を課すことなく、本発明をより良く説明することを目的とする以下の実験部分で、本発明について、より詳細に説明する。

実験の部
一般的な手順及び材料
全ての化学物質（Ａｃｒｏｓ、Ｂｉｏｓｏｌｖｅ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、及びＴＣＩ）は入荷時の状態のままで使用し、別断の断りがない限り、全ての反応はアルゴン雰囲気下、周囲温度（２２℃）で実施した。ＴＬＣ分析には、アルミニウムシート（Ｍｅｒｃｋ、ＴＬＣシリカゲル６０ Ｆ２５４）を使用し、Ｈ_２ＳＯ_４／ＥｔＯＨ中溶液（２０％）、又は（ＮＨ_４）_６Ｍｏ_７Ｏ_２４・４Ｈ_２Ｏ（２５ｇ／Ｌ）及び（ＮＨ_４））_４Ｃｅ（ＳＯ_４）_４・２Ｈ_２Ｏ（１０ｇ／Ｌ）の１０％Ｈ_２ＳＯ_４水溶液中溶液、又はＫＭｎＯ_４（２％）及びＫ_２ＣＯ_３（１％）のＨ_２Ｏ溶液を噴霧し、約１４０℃で加熱した。カラムクロマトグラフィーには、４０～６３μｍ ６０Åシリカゲル（ＳＤ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用した。ＮＭＲスペクトル（１Ｈ、^１３Ｃ及び^３１Ｐ）は、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ－４００ｌｉｑ又はＢｒｕｋｅｒ ＡＶ－５００又はＢｒｕｋｅｒ ＡＶ－６００で記録した。高分解能質量スペクトルは、エレクトロスプレーイオン源を備えた質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｎｎｉｇａｎ ＬＴＱ Ｏｒｂｉｔｒａｐ）に、ｍ／ｚ４００（質量範囲ｍ／ｚ＝１５０－２０００）及びロックマスとしてのジオクチルフタレート（ｍ／ｚ＝３９１．２８４２８）で分解能Ｒ＝６００００でのポジティブモード（電源電圧３．５ｋＶ、シースガス流１０、キャピラリー温度２５０℃）で直接注入することにより記録した。

略称
ＡｃＯＨ＝酢酸
ＡＣＮ＝アセトニトリル
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＭＴｒＣｌ＝４，４′－ジメトキシトリチルクロリド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＢＡＦ＝フッ化テトラブチルアンモニウム

実施例１：スキーム１による、式（Ｉａ）の本発明のオリゴマーの調製
アセトアミド－３，４－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－６－Ｏ－テキシルジメチルシリル－５ａ－カルバ－α－ドマンノピラノース（１３）
シリルエーテル１２は、Ｑ． Ｇａｏ ｅｔ ａｌ． Ｏｒｇ． Ｂｉｏｍｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２０１２， １０， ６６７３に記載の手順に従って調製することができる。

シリルエーテル１２（１．６ｇ、２．７ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解した。混合物を冷却して０℃とした。０．１Ｍ ＴＢＡＦ／ＴＨＦ溶液（４．１ｍＬ、４．１ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。反応液を加温して室温とし、３時間撹拌した。反応液にＡｃＯＨ（０．３１ｍＬ）を加えた。溶液をＤＣＭで３回抽出し、ブラインで１回洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、生成物１３を収率９２％で得た（１．１ｇ、２．５２ｍｍｏｌ）。スペクトルデータは報告されたデータと一致していた。

２－アセトアミド－３，４－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－５ａ－カルバ－α－Ｄマンノピラノース（１４）
アルコール１３（１．１２ｇ、２．５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３２ｍＬ）に溶解した。混合物にＮａＯＭｅ（０．０３ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で３時間撹拌した。中性ｐＨに達するまでアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）Ｈ＋樹脂を加えた。懸濁液を濾過し、減圧下で濃縮した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ＝１．７０－１．８５（ｍ、２Ｈ、Ｈ－５ａ）、１．９０（ｓ、３Ｈ、ＡｃＮＨ）、２．１９－２．２３（ｍ、１Ｈ、Ｈ－５）、３．６０－３．７９（ｍ、３Ｈ、Ｈ－６、Ｈ－１）、３．８３－３．９０（ｍ、１Ｈ、Ｈ－２）、３．９１－３．９９（ｍ、１Ｈ、Ｈ－４）、４．１４－４．２３（ｍ、１Ｈ、Ｈ－３）、４．３３－４．４１（ｍ、１Ｈ、ＣＨＨ Ｂｎ）、４．５４－４．７２（ｍ、３Ｈ、ＣＨ_２ Ｂｎ、ＣＨＨ Ｂｎ）、５．７９（ｍ、１Ｈ、ＮＨＡｃ）、７．２２－７．４２（ｍ、１０Ｈ、Ｈ_ａｒｏｍ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ＝２３．５（ＣＨ_３ ＡｃＮＨ）、３０．６（ＣＨ_２ Ｃ－５ａ）、３９．５（ＣＨ Ｃ－５）、５３．５（ＣＨ Ｃ－３）、６４．１（ＣＨ_２ Ｃ－６）、６７．９（ＣＨ Ｃ－４）、７２．４（ＣＨ_２ Ｂｎ）、７３．８（ＣＨ_２ Ｂｎ）、７５．５（ＣＨ Ｃ－１）、７９．０（ＣＨ Ｃ－４）、１２７．３－１２８．９（ＣＨ_ａｒｏｍ）、１７１．８（Ｃ＝ＯＡｃＮＨ）。ＨＲＭＳ：［Ｃ_２３Ｈ_２９ＮＯ_５＋Ｈ］^＋には４００．２１２５１が必要で、実測値は４００．２１１７９であった。

２－アセトアミド－３，４－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－６－Ｏ－（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル））－５－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノース（１０）
ジオール１４（０．９ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶解した。混合物にＥｔ_３Ｎ（１．９ｍＬ、１３．５ｍｍｏｌ）を加えた。ＤＭＴｒＣｌ（１．１６ｇ、３．３８ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を２時間撹拌した。反応物にＨ_２Ｏを加え、ブラインで１回洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、生成物１０を収率９１％で得た（１．６ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝１．７０－１．８５（ｍ、１Ｈ、５ａ′－Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ、ＡｃＮＨ）、２．００－２．２１（ｍ、２Ｈ、５ａ－Ｈ、５－Ｈ）、３．０１－３．１９（ｍ、１Ｈ、６′－Ｈ）、３．２７－３．３７（ｍ、１Ｈ、６－Ｈ）、３．５１－３．６７（ｍ、１Ｈ、Ｈ－４）、３．７３（ｓ、７Ｈ、Ｈ－３、２×ＯＭｅ）、４．０６－４．２０（ｍ、１Ｈ、Ｈ－１）、４．２２－４．３２（ｍ、１Ｈ、ＣＨＨ Ｂｎ）、４．４０－４．６２（ｍ、３Ｈ、ＣＨ_２ Ｂｎ、Ｈ－２）、４．６５－４．７３（ｍ、１Ｈ、ＣＨＨ Ｂｎ）、６．３５－６．４４（ｍ、１Ｈ、ＮＨＡｃ）、６．７８－７．４７（ｍ、２３Ｈ、Ｈ_ａｒｏｍ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝２３．２（ＣＨ_３ ＡｃＮＨ）、３１．６（ＣＨ_２ Ｃ－５ａ）、３８．６（ＣＨ Ｃ－５）、５３．３（ＣＨ Ｃ－２）、５５．８（２×ＣＨ_３ ＯＭｅ）、６４．６（ＣＨ_２ Ｃ－６）、６７．６（ＣＨ Ｃ－１）、７２．１（ＣＨ_２ Ｂｎ）、７３．８（ＣＨ_２ Ｂｎ）、７７．２（ＣＨ Ｃ－４）、７９．８（ＣＨ Ｃ－３）、８６．５（Ｃｑ ＤＭＴｒ）、１１３．９（ＣＨ_ａｒｏｍ）、１２７．３－１３０．７（ＣＨ_ａｒｏｍ）、１３７．２－１５９．４（５×Ｃｑ ＤＭＴｒ）、１７１．１（Ｃ＝ＯＡｃＮＨ）。ＨＲＭＳ：［Ｃ_４４Ｈ_４７ＮＯ_７＋Ｎａ］^＋には７２４．３２５０１が必要で、実測値は７２４．３２４８３であった。

１－Ｏ－（（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルアミノ）－Ｏ－２－シアノエチル－ホスホルアミダイト））－２－アセトアミド－３，４－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－６－Ｏ－（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル））－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノース（９）
アルコール１０（１．５ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）をＡＣＮと３回共留去させ、乾燥ＤＣＭ（２２ｍＬ）に溶解した。混合物に、新鮮な活性化ＭＳ３Å及びＤＩＰＥＡ（０．６ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物に、２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピル－クロロホスホルアミダイト（０．６ｍＬ、２．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を２時間撹拌した。この溶液にＨ_２Ｏを加え、ブライン／ＮａＨＣＯ_３の１：１溶液で１回洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／アセトン／Ｅｔ_３Ｎ）によって精製して、収率９４％で生成物９を得た（１．８１ｇ、２．０ｍｍｏｌ）（ジアステレオマーの混合物）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝１．０４－１．２４（ｍ、１２Ｈ、４×イソプロピルアミノ）、１．７０－１．８５（ｍ、１Ｈ、５ａ′－Ｈ）、１．９２（ｓ、３Ｈ、ＡｃＮＨ）、２．００－２．２１（ｍ、２Ｈ、５ａ－Ｈ、５－Ｈ）、２．５５－２．７５（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２シアノエチル）、２．９８－３．１０（ｍ、１Ｈ、６′－Ｈ）、３．２７－３．３７（ｍ、１Ｈ、６－Ｈ）、３．４７－３．７０（ｍ、３Ｈ、２×ＣＨイソプロピルアミノ、Ｈ－４）、３．７０－３．８８（ｍ、９Ｈ、Ｈ－３、ＣＨ_２シアノエチル、２×ＯＭｅ）、４．０６－４．２０（ｍ、１Ｈ、Ｈ－１）、４．２２－４．３２（ｍ、１Ｈ、ＣＨＨ Ｂｎ）、４．４０－４．６２（ｍ、３Ｈ、ＣＨ_２ Ｂｎ、Ｈ－２）、４．６５－４．７３（ｍ、１Ｈ、ＣＨＨ Ｂｎ）、６．３５－６．４４（ｍ、１Ｈ、ＮＨＡｃ）、６．７８－７．４７（ｍ、２３Ｈ、Ｈ_ａｒｏｍ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝２０．７（ＣＨ_２シアノエチル）、２２．９（ＣＨ_３ ＡｃＮＨ）、２４．５－２４．７（２×ＣＨ_３イソプロピルアミノ）、３０．６（ＣＨ_２ Ｃ－５ａ）、３８．５（ＣＨ Ｃ－５）、４３．７（２×ＣＨイソプロピルアミノ）、５１．７（ＣＨ Ｃ－２）、５５．５（２×ＣＨ_３ ＯＭｅ）、５９．１（ＣＨ_２シアノエチル）、６４．２（ＣＨ_２ Ｃ－６）、７０．５（ＣＨ Ｃ－１）、７１．５（ＣＨ_２ Ｂｎ）、７４．３（ＣＨ_２ Ｂｎ）、７７．８（ＣＨ Ｃ－４）、７９．５（ＣＨ Ｃ－３）、８６．２（Ｃｑ ＤＭＴｒ）、１１３．６（ＣＨ_ａｒｏｍ）、１２７．３－１３０．７（ＣＨ_ａｒｏｍ）、１３６．８－１５９．２（５×Ｃｑ ＤＭＴｒ）、１７０（Ｃ＝ＯＡｃＮＨ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝１４６．９、１４７．２６。

通常の規模（０．０３～０．３ｍｍｏｌ）でのホスホルアミダイトカップリング、酸化及び脱トリチル化の一般的手順
出発アルコールをＡＣＮと３回共留去させ、新たに活性化したＭＳ３ÅとＤＣＩ（０．２５Ｍ／ＡＣＮ溶液、１．５当量）を加えた。溶液を１５分間撹拌した。混合物にホスホルアミダイト試薬（０．１～０．１６Ｍ／ＡＣＮ溶液、１．３～３当量）を加え、出発物質が完全に変換されるまで（約２時間）撹拌した。続いて、ＣＳＯ（０．５Ｍ／ＡＣＮ溶液、２当量）を反応混合物に加え、１５分間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブライン／ＮａＨＣＯ_３の１：１溶液で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をＡＣＮと３回共留去させ、ＤＣＭ（５～１０ｍＬ）に溶解した。この溶液にＴＣＡ（０．１８ＭＤＣＭ溶液）を加え、１時間撹拌した。反応混合物にＨ_２Ｏを加え、１５分間撹拌した。反応物をブライン／ＮａＨＣＯ_３の１：１溶液で洗浄した。水層をＤＣＭで３回抽出した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／アセトン）又はサイズ排除クロマトグラフィー（ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ１：１）によって精製した。

１－Ｏ－（（２－アセトアミド－３，４－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノシル－１－Ｏ－ホスホリル）２－シアノエチル）－６－ヘキシル－ベンジル－カーバメート（１５）
上記の一般的な手順を使用して、アルコール１０（０．２１ｇ、０．３ｍｍｏｌ）をホスホルアミダイト１１（２．５ｍＬ ０．１６Ｍ／ＡＣＮ溶液、０．４５ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、酸化、脱トリチル化した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／アセトン）により精製して、収率９４％で生成物１５を得た（０．２１６ｇ、０．２８２ｍｍｏｌ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝１．２４－１．４０（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．４０－１．５１（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．５８－１．７０（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．８０－１．９２（ｍ、４Ｈ、５ａ′－Ｈ、ＡｃＮＨ）、１．９６－２．０２（ｍ、２Ｈ、５ａ－Ｈ、５－Ｈ）、２．７２－２．８２（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２シアノエチル）、２．９６（ｂｓ、１Ｈ、ＯＨ）、３．０２－３．１２（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３．５６－３．７４（ｍ、３Ｈ、Ｈ－６、Ｈ－４）、３．７６－３．８４（ｍ、１Ｈ、Ｈ－３）、３．９５－４．０７（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、４．０８－４．２０（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２シアノエチル）、４．４４－４．６３（ｍ、５Ｈ、Ｈ－１、Ｈ－２、ＣＨ_２ Ｂｎ、ＣＨＨ Ｂｎ）、４．７２－４．８０（ｍ、１Ｈ、ＣＨＨ Ｂｎ）、５．０３（ｓ、２Ｈ、ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、５．７０（ｂｓ、１Ｈ、ＮＨ）、６．４９－６．６０（ｍ、１Ｈ、ＮＨＡｃ）、７．２３－７．４４（ｍ、１５Ｈ、Ｈ_ａｒｏｍ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝１９．９（ＣＨ_２シアノエチル）、２２．８（ＣＨ_３ ＡｃＮＨ）、２５．４（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２６．４（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３０．０（ＣＨ_２ Ｃ－５ａ）、３０．４（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３０．５（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、４０．０（ＣＨ Ｃ－５）、４１．０（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、５１．１（ＣＨ Ｃ－２）、６２．９（ＣＨ_２ Ｃ－６）、６３．０（ＣＨ_２シアノエチル）、６６．３（ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、６８．８（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、７２．２（ＣＨ_２ Ｂｎ）、７４．０（ＣＨ_２ Ｂｎ）、７５．１（ＣＨ Ｃ－１）、７６．７（ＣＨ Ｃ－４）、７９．３（ＣＨＣ－３）、１２８．１－１２９．１（ＣＨ_ａｒｏｍ）、１３８．９－１３９．７（３×Ｃｑ Ｂｎ）、１７０．８（Ｃ＝Ｏ ＡｃＮＨ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝－２．４０、－２．３６。ＨＲＭＳ：［Ｃ_４０Ｈ_５２Ｎ_３Ｏ_１０Ｐ＋Ｈ］^＋には７６６．３４７０７が必要で、実測値は７６６．３４７０７であった。

１－Ｏ－ジ－（（２－アセトアミド－３，４－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノシル－１－Ｏ－ホスホリル）２－シアノエチル）－６－ヘキシル－ベンジルカーバメート（１６）
上記の一般的な手順を使用して、アルコール１５（０．１８６ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）をホスホルアミダイト９（２．３ｍＬ ０．１６Ｍ／ＡＣＮ溶液、０．３７ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、酸化、脱トリチル化した。粗生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ１：１）によって精製して、生成物１６を収率８２％で得た（０．２５５ｇ、０．１９９ｍｍｏｌ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝１．２５－１．４０（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．４０－１．５１（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．５８－１．７１（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．８０－１．９２（ｍ、８Ｈ、２×５ａ′－Ｈ、２×ＡｃＮＨ）、１．９６－２．０２（ｍ、４Ｈ、２×５ａ－Ｈ、２×５－Ｈ）、２．７０－２．８１（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ_２シアノエチル）、２．９６（ｂｓ、１Ｈ、ＯＨ）、３．０１－３．１２（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３．５６－３．８７（ｍ、６Ｈ、２×Ｈ－６、２×Ｈ－４）、３．９４－４．２８（ｍ、８Ｈ、２×Ｈ－３、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー、２×ＣＨ_２シアノエチル）、４．２９－４．８５（ｍ、１２Ｈ、２×Ｈ－１、２×Ｈ－２、４×ＣＨ_２ Ｂｎ）、５．０３（ｓ、２Ｈ、ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、５．７５（ｂｓ、１Ｈ、ＮＨ）、６．５２－６．６２（ｍ、１Ｈ、ＮＨＡｃ）、６．８５－６．９９（ｍ、１Ｈ、ＮＨＡｃ）、７．２１－７．４１（ｍ、２５Ｈ、Ｈ_ａｒｏｍ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝１９．９－２０．０（２×ＣＨ_２シアノエチル）、２２．９－２３．０（２×ＣＨ_３ ＡｃＮＨ）、２５．５（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２６．５（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２９．１－２９．２（２×ＣＨ_２ Ｃ－５ａ）、３０．１（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３０．５（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３８．１－４０．０（２×ＣＨ Ｃ－５）、４１．１（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、５０．９－５１．４（２×ＣＨ Ｃ－２）、６２．５－６２．６（２×ＣＨ_２Ｃ－６）、６３．０－６３．２（２×ＣＨ_２シアノエチル）、６６．３（ＣＨ_２Ｂｎスペーサー）、６８．９（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、７２．１－７２．３（４×ＣＨ_２ Ｂｎ）、７５．０－７５．４（２×ＣＨＣ－１）、７５．５－７６．９（２×ＣＨＣ－４）、７９．２－７９．５（２×ＣＨ Ｃ－３）、１２８．２－１２９．１（ＣＨ_ａｒｏｍ）、１３８．９－１３９．６（５×Ｃｑ Ｂｎ）、１７０．８（２×Ｃ＝Ｏ ＡｃＮＨ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝－２．６０、－２．５８、－２．３４、－２．３２、－２．２２、－２．１７。ＨＲＭＳ：［Ｃ_６６Ｈ_８３Ｎ_５Ｏ_１７Ｐ_２＋Ｈ］^＋には１２８０．５３３２０が必要で、実測値は１２８０．５３３２０であった。

１－Ｏ－トリ－（（２－アセトアミド－３，４－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノシル－１－Ｏ－ホスホリル）２－シアノエチル）－６－ヘキシル－ベンジルカーバメート（１７）
上記の一般的な手順を使用して、アルコール１６（０．２１５ｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）をホスホルアミダイト９（１．６ｍＬ ０．１６Ｍ／ＡＣＮ溶液、０．２５ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、酸化、脱トリチル化した。粗生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ１：１）によって精製して、収率９５％で生成物１７を得た（０．２８５ｇ、０．１５８ｍｍｏｌ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝１．２５－１．４０（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．４０－１．５１（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．５８－１．７１（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．８０－１．９２（ｍ、１２Ｈ、３×５ａ′－Ｈ、３×ＡｃＮＨ）、１．９６－２．３０（ｍ、６Ｈ、３×５ａ－Ｈ、３×５－Ｈ）、２．６８－２．８３（ｍ、６Ｈ、３×ＣＨ_２シアノエチル）、２．９３（ｂｓ、１Ｈ、ＯＨ）、３．００－３．１１（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３．５９－３．８９（ｍ、９Ｈ、３×Ｈ－６、３×Ｈ－４）、３．９６－４．２２（ｍ、１１Ｈ、３×Ｈ－３、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー、３×ＣＨ_２シアノエチル）、４．３１－４．８６（ｍ、１８Ｈ、３×Ｈ－１、３×Ｈ－２、６×ＣＨ_２ Ｂｎ）、５．０３（ｓ、２Ｈ、ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、５．７８（ｂｓ、１Ｈ、ＮＨ）、６．５５－６．６５（ｍ、１Ｈ、ＮＨＡｃ）、６．９－７．１５（ｍ、２Ｈ、２×ＮＨＡｃ）、７．１９－７．４０（ｍ、３５Ｈ、Ｈ_ａｒｏｍ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝２０．０－２０．１（３×ＣＨ_２シアノエチル）、２２．９－２３．０（３×ＣＨ_３ＡｃＮＨ）、２５．５（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２６．５（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２８．９－２９．２（３×ＣＨ_２ Ｃ－５ａ）、３０．１（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３０．５（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３８．０－４０．０（３×ＣＨ Ｃ－５）、４１．１（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、５０．８－５１．４（３×ＣＨ Ｃ－２）、６２．５－６３．０（３×ＣＨ_２ Ｃ－６）、６３．０－６３．３（３×ＣＨ_２シアノエチル）、６６．３（ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、６８．４（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、７２．１－７４．１（６×ＣＨ_２ Ｂｎ）、７５．２－７５．５（３×ＣＨ Ｃ－１）、７５．５－７６．１（３×ＣＨ Ｃ－４）、７９．３－７９．５（３×ＣＨ Ｃ－３）、１２８．２－１２９．１（ＣＨ_ａｒｏｍ）、１３８．９－１３９．７（７×Ｃｑ Ｂｎ）、１７０．９－１７１．２（３×Ｃ＝Ｏ ＡｃＮＨ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、ＣＤ_３ＣＮ）δ＝－２．８２、－２．７７、－２．６２、－２．５８、－２．３６、－２．３３、－２．２４、－２．２０、－２．１６。ＨＲＭＳ：［Ｃ_９２Ｈ_１１４Ｎ_７Ｏ_２４Ｐ_３＋Ｈ］^＋には１７９５．７２３３３が必要で、実測値１７９５．２２３３３であった。

１－Ｏ－テトラ－（（２－アセトアミド－３，４－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノシル－１－Ｏ－ホスホリル）２－シアノエチル）－６－ヘキシル－ベンジルカーバメート（１８）
上記の一般的な手順を使用して、アルコール１７（０．２６７ｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）をホスホルアミダイト９（１．４ｍＬ ０．１６Ｍ／ＡＣＮ溶液、０．２２ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、酸化、脱トリチル化した。粗生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ１：１）によって精製して、生成物１８を収率８７％で得た（０．２９９ｇ、０．１２９ｍｍｏｌ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝１．３１－１．４７（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．４７－１．５７（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．６２－１．７５（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．８５－２．０２（ｍ、１６Ｈ、４×５ａ′－Ｈ、４×ＡｃＮＨ）、２．０７－２．１７（ｍ、８Ｈ、４×５ａ－Ｈ、４×５－Ｈ）、２．８２－３．００（ｍ、８Ｈ、４×ＣＨ_２シアノエチル）、３．０８－３．１８（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３．６６－４．０１（ｍ、１２Ｈ、４×Ｈ－６、４×Ｈ－４）、４．０４－４．３６（ｍ、１４Ｈ、４×Ｈ－３、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー、４×ＣＨ_２シアノエチル）、４．４０－４．９４（ｍ、２４Ｈ、４×Ｈ－１、４×Ｈ－２、８×ＣＨ_２ Ｂｎ）、５．０５（ｓ、２Ｈ、ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、６．３９（ｂｓ、１Ｈ、ＮＨ）、７．１７－７．４２（ｍ、４５Ｈ、Ｈ_ａｒｏｍ）、７．４２－７．８０（ｍ、４Ｈ、ＮＨＡｃ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝２０．０－２０．１（４×ＣＨ_２シアノエチル）、２３．１－２３．２（４×ＣＨ_３ ＡｃＮＨ）、２５．８（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２６．８（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２９．２－２９．８（４×ＣＨ_２ Ｃ－５ａ）、３０．８（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３０．８（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３８．３－４０．３（４×ＣＨ Ｃ－５）、４１．４（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、５１．２－５１．５（４×ＣＨ Ｃ－２）、６２．６－６３．４（４×ＣＨ_２ Ｃ－６）、６３．４－６３．６（４×ＣＨ_２シアノエチル）、６６．２（ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、６８．８（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、７２．０－７５．０（８×ＣＨ_２ Ｂｎ）、７５．６－７５．８（４×ＣＨ Ｃ－１）、７６．５－７７．２（４×ＣＨ Ｃ－４）、７９．７－７９．８（４×ＣＨ Ｃ－３）、１２８．１－１２９．１（ＣＨ_ａｒｏｍ）、１３９．３－１４０．１（９ｘＣｑ Ｂｎ）、１７０．７－１７１．２（４×Ｃ＝Ｏ ＡｃＮＨ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝－２．８４、－２．７７、－２．６８、－２．４７、－２．４２、－２．３７、－２．３０、－１．９６、－１．９１、－１．８９。ＨＲＭＳ：［Ｃ_１１８Ｈ_１４５Ｎ_９Ｏ_３１Ｐ_４＋２Ｈ］^＋＋には、１１５５．４５８９２が必要で、実測値は１１５５．４５８９２であった。

１－Ｏ－ペンタ－（（２－アセトアミド－３，４－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノシル－１－Ｏ－ホスホリル）２－シアノエチル）－６－ヘキシル－ベンジルカーバメート（１９）
上記の一般的な手順を使用して、アルコール１８（０．２７７ｇ、０．１２０ｍｍｏｌ）をホスホルアミダイト９（１．１ｍＬ ０．１６Ｍ／ＡＣＮ溶液、０．１８ｍｍｏｌ）とカップリングさせて、酸化、脱トリチル化した。粗生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ１：１）によって精製して、生成物１９を収率９２％で得た（０．３１ｇ、０．１１０ｍｍｏｌ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝１．３１－１．４６（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．４６－１．５８（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．６２－１．７５（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．８４－２．０２（ｍ、２０Ｈ、５×５ａ′－Ｈ、５×ＡｃＮＨ）、２．０７－２．１９（ｍ、１０Ｈ、５×５ａ－Ｈ、５×５－Ｈ）、２．８２－２．９７（ｍ、１０Ｈ、５×ＣＨ_２シアノエチル）、３．０８－３．１８（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３．６７－４．０２（ｍ、１５Ｈ、５×Ｈ－６、５×Ｈ－４）、４．０４－４．３６（ｍ、１７Ｈ、５×Ｈ－３、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー、５×ＣＨ_２シアノエチル）、４．３８－４．９５（ｍ、３０Ｈ、５×Ｈ－１、５×Ｈ－２、１０×ＣＨ_２ Ｂｎ）、５．０５（ｓ、２Ｈ、ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、６．４３（ｂｓ、１Ｈ、ＮＨ）、７．１６－７．４１（ｍ、５５Ｈ、Ｈ_ａｒｏｍ）、７．４２－７．８６（ｍ、５Ｈ、ＮＨＡｃ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝１９．８－２０．０（５×ＣＨ_２シアノエチル）、２３．０－２３．１（５×ＣＨ_３ ＡｃＮＨ）、２５．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２６．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２９．２－３０．０（５×ＣＨ_２ Ｃ－５ａ）、３０．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３０．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３８．２－４０．２（５×ＣＨ Ｃ－５）、４１．２（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、５１．０－５１．４（５×ＣＨ Ｃ－２）、６２．５－６３．２（５×ＣＨ_２ Ｃ－６）、６３．３－６３．５（５×ＣＨ_２シアノエチル）、６６．１（ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、６８．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、７２．０－７５．０（１０ｘＣＨ_２ Ｂｎ）、７５．６－７５．８（５×ＣＨ Ｃ－１）、７６．５－７７．２（５×ＣＨ Ｃ－４）、７９．７－７９．８（５×ＣＨ Ｃ－３）、１２８．０－１２９．０（ＣＨ_ａｒｏｍ）、１３９．２－１４０．０（１１×Ｃｑ Ｂｎ）、１７０．７－１７１．２（５×Ｃ＝ＯＡｃＮＨ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝－２．８４、－２．７７、－２．６８、－２．４７、－２．４２、－２．３７、－２．３０、－１．９６、－１．８８、－１．８９、－１．８６、－１．８４、－１．７９。ＨＲＭＳ：［Ｃ_１４４Ｈ_１７６Ｎ_１１Ｏ_３８Ｐ_５＋２Ｈ］^＋＋には１４１２．５５２１９が必要で、実測値１４１２．５５２１９であった。

１－Ｏ－ヘキサ－（（２－アセトアミド－３，４－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノシル－１－Ｏ－ホスホリル）２－シアノエチル）－６－ヘキシル－ベンジルカーバメート（２０）
上記の一般的な手順を使用して、アルコール１９（０．２８０ｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）をホスホルアミダイト９（１．２４ｍＬ ０．１６Ｍ／ＡＣＮ溶液、０．２０ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、酸化、脱トリチル化した。粗生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ１：１）によって精製して、収率８８％で生成物２０を得た（０．２９ｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝１．３１－１．４６（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．４６－１．５７（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．６３－１．７４（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．８４－２．０２（ｍ、２４Ｈ、６×５ａ′－Ｈ、６×ＡｃＮＨ）、２．０７－２．３０（ｍ、１２Ｈ、６×５ａ－Ｈ、６×５－Ｈ）、２．８２－２．９７（ｍ、１２Ｈ、６×ＣＨ_２シアノエチル）、３．０９－３．１８（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３．６７－４．０４（ｍ、１８Ｈ、６×Ｈ－６、６×Ｈ－４）、４．０４－４．３８（ｍ、２０Ｈ、６×Ｈ－３、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー、６×ＣＨ_２シアノエチル）、４．３８－５．００（ｍ、３６Ｈ、６×Ｈ－１、６×Ｈ－２、１２×ＣＨ_２ Ｂｎ）、５．０５（ｓ、２Ｈ、ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、６．４２（ｂｓ、１Ｈ、ＮＨ）、７．１６－７．４１（ｍ、６５Ｈ、Ｈ_ａｒｏｍ）、７．４２－７．８９（ｍ、６Ｈ、ＮＨＡｃ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝１９．９－２０．０（６×ＣＨ_２シアノエチル）、２３．０－２３．１（６×ＣＨ_３ ＡｃＮＨ）、２５．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２６．８（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２９．２－３０．２（６×ＣＨ_２ Ｃ－５ａ）、３０．４（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３０．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３８．２－４０．２（６×ＣＨ Ｃ－５）、４１．３（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、５１．０－５１．４（６×ＣＨ Ｃ－２）、６２．５－６３．４（６×ＣＨ_２ Ｃ－６）、６３．４－６３．５（６×ＣＨ_２シアノエチル）、６６．２（ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、６８．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、７２．２－７５．６（１２×ＣＨ_２ Ｂｎ）、７５．６－７５．８（６×ＣＨ Ｃ－１）、７６．５－７７．２（６×ＣＨ Ｃ－４）、７９．７－７９．８（６×ＣＨＣ－３）、１２８．１－１２９．１（ＣＨ_ａｒｏｍ）、１３９．２－１４０．０（１３×Ｃｑ Ｂｎ）、１７０．７－１７１．２（６×Ｃ＝Ｏ ＡｃＮＨ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝－２．８４、－２．７７、－２．６８、－２．４５、－２．４２、－２．３７、－２．３１、－１．９４、－１．８１、－１．７８。ＨＲＭＳ：［Ｃ_１７０Ｈ_２０７Ｎ_１３Ｏ_４５Ｐ_６＋ＮＨ_４］^＋には３３５６．３１２が必要で、実測値３３５７．０１０であった。

ｎ＝６であるオリゴマーを製造するため、以下で記載の一般的な脱保護手順を、上記の工程の後に実施することができる。

１－Ｏ－エプタ－（（２－アセトアミド－３，４－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノシル－１－Ｏ－ホスホリル）２－シアノエチル）－６－ヘキシル－ベンジルカーバメート（２１）
上記の一般的な手順を使用して、アルコール２０（０．１４０ｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）をホスホルアミダイト９（０．８ｍＬ ０．１Ｍ／ＡＣＮ溶液、０．８４ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、酸化、脱トリチル化した。粗生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ１：１）によって精製して、生成物２１を収率８６％で得た（０．１３９ｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝１．３１－１．４６（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．４６－１．５７（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．６３－１．７４（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．８４－２．０２（ｍ、２８Ｈ、７×５ａ′－Ｈ、７×ＡｃＮＨ）、２．０７－２．３０（ｍ、１４Ｈ、７×５ａ－Ｈ、７×５－Ｈ）、２．８２－２．９７（ｍ、１４Ｈ、７×ＣＨ_２シアノエチル）、３．０９－３．１８（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３．６７－４．０４（ｍ、２１Ｈ、７×Ｈ－６、７×Ｈ－４）、４．０４－４．３８（ｍ、２３Ｈ、７×Ｈ－３、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー、７×ＣＨ_２シアノエチル）、４．３８－５．００（ｍ、４２Ｈ、７×Ｈ－１、７×Ｈ－２、１４×ＣＨ_２ Ｂｎ）、５．０５（ｓ、２Ｈ、ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、６．４２（ｂｓ、１Ｈ、ＮＨ）、７．１６－７．４１（ｍ、７５Ｈ、Ｈ_ａｒｏｍ）、７．４２－７．８９（ｍ、７Ｈ、ＮＨＡｃ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝１９．９－２０．０（７×ＣＨ_２シアノエチル）、２３．０－２３．１（７×ＣＨ_３ ＡｃＮＨ）、２５．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２６．８（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２９．２－３０．２（７×ＣＨ_２ Ｃ－５ａ）、３０．４（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３０．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３８．２－４０．２（７×ＣＨ Ｃ－５）、４１．３（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、５１．０－５１．４（７×ＣＨ Ｃ－２）、６２．５－６３．４（７×ＣＨ_２Ｃ－６）、６３．４－６３．５（７×ＣＨ_２シアノエチル）、６６．２（ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、６８．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、７２．２－７５．６（１４×ＣＨ_２ Ｂｎ）、７５．６－７５．８（７×ＣＨ Ｃ－１）、７６．５－７７．２（７×ＣＨ Ｃ－４）、７９．７－７９．８（７×ＣＨ Ｃ－３）、１２８．１－１２９．１（ＣＨ_ａｒｏｍ）、１３９．２－１４０．０（１５×Ｃｑ Ｂｎ）、１７０．７－１７１．２（７×Ｃ＝Ｏ ＡｃＮＨ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝－２．８４、－２．７７、－２．６８、－２．４５、－２．４２、－２．３７、－２．３１、－１．９４、－１．８１、－１．７８。ＨＲＭＳ：［Ｃ_１９６Ｈ_２３８Ｎ_１５Ｏ_５２Ｐ７＋２Ｈ］^＋＋には、１９２６，７３９０８が必要で、実測値１９２６，７３９０８であった。

１－Ｏ－オクタ－（（２－アセトアミド－３，４－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノシル－１－Ｏ－ホスホリル）２－シアノエチル）－６－ヘキシル－ベンジルカーバメート（２２） ｎ＝８
上記の一般的な手順を使用して、アルコール２２（０．１０５ｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）をホスホルアミダイト９（０．７ｍＬ ０．１Ｍ／ＡＣＮ溶液、０．６８ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、酸化、脱トリチル化した。粗生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ１：１）によって精製して、生成物２２を収率８７％で得た（０．１０３ｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝１．３１－１．４６（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．４６－１．５７（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．６３－１．７４（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．８４－２．０２（ｍ、３２Ｈ、８×５ａ′－Ｈ、８×ＡｃＮＨ）、２．０７－２．３０（ｍ、１６Ｈ、８×５ａ－Ｈ、８×５－Ｈ）、２．８２－２．９７（ｍ、１６Ｈ、８×ＣＨ_２シアノエチル）、３．０９－３．１８（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３．６７－４．０４（ｍ、２４Ｈ、８×Ｈ－６、８×Ｈ－４）、４．０４－４．３８（ｍ、２６Ｈ、８×Ｈ－３、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー、８×ＣＨ_２シアノエチル）、４．３８－５．００（ｍ、４８Ｈ、８×Ｈ－１、８×Ｈ－２、１６×ＣＨ_２ Ｂｎ）、５．０５（ｓ、２Ｈ、ＣＨ_２Ｂｎスペーサー）、６．４２（ｂｓ、１Ｈ、ＮＨ）、７．１６－７．４１（ｍ、８５Ｈ、Ｈ_ａｒｏｍ）、７．４２－７．８９（ｍ、８Ｈ、ＮＨＡｃ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝１９．９－２０．０（８×ＣＨ_２シアノエチル）、２３．０－２３．１（８×ＣＨ_３ ＡｃＮＨ）、２５．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２６．８（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２９．２－３０．２（８×ＣＨ_２ Ｃ－５ａ）、３０．４（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３０．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３８．２－４０．２（８×ＣＨ Ｃ－５）、４１．３（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、５１．０－５１．４（８×ＣＨ Ｃ－２）、６２．５－６３．４（８×ＣＨ_２ Ｃ－６）、６３．４－６３．５（８×ＣＨ_２シアノエチル）、６６．２（ＣＨ_２ Ｂｎスペーサー）、６８．７（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、７２．２－７５．６（１６×ＣＨ_２ Ｂｎ）、７５．６－７５．８（８×ＣＨ Ｃ－１）、７６．５－７７．２（８×ＣＨ Ｃ－４）、７９．７－７９．８（８×ＣＨ Ｃ－３）、１２８．１－１２９．１（ＣＨ_ａｒｏｍ）、１３９．２－１４０．０（１７×Ｃｑ Ｂｎ）、１７０．７－１７１．２（８×Ｃ＝Ｏ ＡｃＮＨ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ、（ＣＤ_３）_２ＣＯ）δ＝－２．８４、－２．７７、－２．６８、－２．４５、－２．４２、－２．３７、－２．３１、－１．９４、－１．８１、－１．７８。ＨＲＭＳ：［Ｃ_２２２Ｈ_２６９Ｎ_１７Ｏ_５９Ｐ_８＋２Ｈ］^＋＋には２１８４．３３４１０が必要で、実測値２１８４．３３４１０であった。

通常のスケール（５～４０μｍｏｌ）での脱保護の一般的な手順
出発アルコールをＮＨ_３（３０～３３％水溶液、１０μｍｏｌあたり１ｍＬ）とジオキサンに完全に溶解するまで溶解した。反応混合物を２時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。^１Ｈ ＮＭＲ及び^３１Ｐ ＮＭＲ分析は、半保護中間体（Ｓｅｍｉ－ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）への完全な変換を示した。粗生成物をＭｉｌｌｉＱ Ｈ_２Ｏに溶解させ、Ｄｏｗｅｘ Ｎａ＋カチオン交換樹脂（型：５０ＷＸ４－２００、０．５Ｍ ＮａＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶液に保存、使用前にＭｉｌｌｉＱ Ｈ_２Ｏ及びＭｅＯＨを流した）を含むカラムで溶出した。粗取得物をＭｉｌｌｉＱ Ｈ_２Ｏ（１０μｍｏｌ当たり２ｍＬ）に溶解した。反応混合物に氷酢酸を４～５滴加えた。混合物をＡｒでパージした。溶液に１カップのＰｄブラックを加えた。反応混合物をＨ_２で数秒間パージし、Ｈ_２雰囲気下で３日間撹拌した。混合物にセライトを加えた。溶液を濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ－４０）により精製した。純粋な化合物をＭｉｌｌｉＱ Ｈ_２Ｏに溶かし、Ｄｏｗｅｘ Ｎａ＋カチオン交換樹脂（型：５０ＷＸ４－２００、０．５Ｍ ＮａＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶液に保存、使用前にＭｉｌｌｉＱ Ｈ_２Ｏ及びＭｅＯＨを流した）を含むカラムで溶出し、凍結乾燥させた。

１－Ｏ－オクタ－（２－アセトアミド－２－デオキシ－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノシル－１－Ｏ－ホスホリル）－６－ヘキシルアミン（８）ｎ＝８
上記の一般的な手順を使用してアルコール２２（２３．２μｍｏｌ）を脱保護した。純粋なオリゴマー８を収率４４％で得た（２５．９ｍｇ、１０．２μｍｏｌ）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、Ｄ_２Ｏ）δ＝１．３３－１．４３（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．５７－１．６９（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、１．７３－２．０８（ｍ、４８Ｈ、８×５ａ′－Ｈ、８×５ａ－Ｈ、８×５－Ｈ、８×ＡｃＮＨ）、２．９２－３．００（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３．４８－３．６８（ｍ、８Ｈ、８×Ｈ－４）、３．６８－３．７６（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３．８１－４．２２（ｍ、２４Ｈ、８×Ｈ－３、８×Ｈ－６）、４．２５－４．３６（ｍ、８Ｈ、８×Ｈ－１）、４．３７－４．５３（ｍ、８Ｈ、８×Ｈ－２）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、Ｄ_２Ｏ）δ＝２１．９（８×ＣＨ_３ ＡｃＮＨ）、２４．４（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２５．１（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２６．６（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、２８．０（８×ＣＨ_２ Ｃ－５ａ）、２９．５（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、３８．６（８×ＣＨ Ｃ－５）、３９．４（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、５３．５（８×ＣＨ Ｃ－２）、６１．９（８×ＣＨ_２ Ｃ－６）、６６．２（ＣＨ_２ヘキシルスペーサー）、７０．１（８×ＣＨ Ｃ－１）、７０．４（８×ＣＨ Ｃ－４）、７１．９（８×ＣＨ Ｃ－３）、１７４．７（８×Ｃ＝Ｏ ＡｃＮＨ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ、Ｄ_２Ｏ）δ＝０．２５、０．３７、０．４１、０．４４、０．４８。ＨＲＭＳ：［Ｃ_７８Ｈ_１４５Ｎ_９Ｏ_５７Ｐ_８＋Ｈ］^＋＋には１１８３．８３０７１が必要で、実測値１１８３．８３０７１であった。

本発明によるランダムアセチル化カルバオリゴマーの製造
１．Ｂｏｃ誘導体としてのアミン保護
乾燥させたカルバ類縁体ＤＰ６（ｎ＝６）、ＤＰ７（ｎ＝７）及びＤＰ８（ｎ＝８）をＨ_２Ｏ：ジオキサン１：１（体積比）に溶かし、次にＮａＨＣＯ_３（２．９５当量）及び（Ｂｏｃ）_２Ｏ（１．１３当量）を４℃で加えた。次に、反応物を室温で磁気撹拌下で一晩維持し、次に生成物をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ１０カラム（溶出液：Ｈ_２Ｏ）によって精製し、化合物を含む分画を乾燥させた。

２．ランダムＯ－アセチル化
工程１からの乾燥Ｂｏｃ保護カルバ類縁体をアセトニトリルに再懸濁させ、無水酢酸（分子内の各－ＯＨ基に対して３．６当量）及びイミダゾール（１．８当量）を加えた。反応液を４０℃に保ち、アセチル化反応時間を目標のアセチル化率（％）（約７５％）に達するまで延長した（^１Ｈ－ＮＭＲでモニタリングした。）。次に、粗アセチル化化合物を乾燥させた。

誤解を避けるために、「ランダムＯ－アセチル化」は、Ｒ^ｘとＲ^ｙのどれだけの数が－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であるかは最終的に制御されないことを意味するものである。しかしながら、ＮＭＲ技術を使用すると、オリゴマー中の総Ｏ－アセチル化率（％）を決定することができる。

３．Ｂｏｃ脱保護
工程２からの乾燥粗Ｏ－アセチル化カルバ類縁体をＣＨ_２Ｃｌ_２：ＴＦＡ ４：１（体積比）に溶かし、反応液を室温で１時間にわたり磁気撹拌下で維持した。次に、粗反応液を乾燥させ、Ｈ_２Ｏに再溶解し、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１０カラム（溶離液：Ｈ_２Ｏ）で精製した。

アセチル化率（％）測定のためのＮＭＲプロトコール
サンプルを真空乾燥させ、Ｄ_２Ｏ ０．６ｍＬで再生し、５ｍｍＮＭＲ管に移し入れた。４００ＭＨｚ及び２５℃での標準的な一次元パルスプログラムによって、プロトンＮＭＲスペクトルを得た。スペクトルの取得及び処理は、ＴｏｐＳｐｉｎ Ｂｒｕｋｅｒソフトウェアによって行った。

カルバ類縁体におけるＯ－アセチル化率（％）の測定は、５～５．４ｐｐｍのＨ_３＋Ｈ_４ Ｏ－Ａｃ（即ち、アセテート基のＨ）のピーク、及び値２が与えられている約３ｐｐｍのリンカーのＮＨ_２に隣接するＣＨ_２の三重線を積分することによって行った。図１を見ると、Ｏ－アセチル化が１００％である場合、Ｈ_３＋Ｈ_４ Ｏ－Ａｃの積分値はＤＰ６では１２（ＤＰ７では１４及びＤＰ８では１６）でなければならないと仮定することで、次の割合が適用される。
１２：１００＝９．０４：Ｘ（Ｘ＝アセチル化率（％））

最終生成物を^１Ｈ－ＮＭＲによって特性決定して、同一性構造を確認し、合成された糖のＯ－アセチル化率（％）を求めた（図２及び表１）。

図２は、最終的なランダムアセチル化カルバ類縁体の^１Ｈ ＮＭＲを示したものであり、アセチル化率（％）測定の積分も示している（ｎ＝８）。

ｎ＝８である式（Ｉａ）の同じランダムアセチル化カルバ類縁体について、３位と４位の間のアセチル基の分布を^３１Ｐ ＮＭＲ分光法（１０１ＭＨｚ、Ｄ_２Ｏ）によって求めた。記録されたスペクトルを図３に示した。これは、Ｃ３位とＣ４位で４４％の程度で発生する同時アセチル化（即ち、オリゴマーの同じ繰り返し単位中のＲ^ｘとＲ^ｙは両方とも－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３である。）及び２８％の程度までのＣ３又はＣ４でのアセチル化（即ち、同じ繰り返し単位で、Ｒ^ｘが－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、Ｒ^ｙがＨであり、又はＲ^ｘがＨであり、Ｒ^ｙが－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３である。）を示しており、繰り返し単位の２７％がアセチル化されていないことを示す。

スキーム２による選択的にアセチル化されたカルバモノマー構成ブロックの生成（即ち、Ｒ^ｘがＨであり、Ｒ^ｙが－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３である）
Ｄ－グルカール（２３）
３，４，６－トリ－Ｏ－アセチル－Ｄ－グルカール（１０．０ｇ、３６．７ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｋ_２ＣＯ_３（５０８ｍｇ、３．６７ｍｍｏｌ）／乾燥ＭｅＯＨ溶液（１５０ｍＬ）を加え、次いで、室温でＮ_２下で撹拌した。１時間後、反応を完了させ、酢酸で反応停止して、ｐＨ７とした。溶媒を減圧下で留去し、透明油状物であるＤ－グルカールの粗生成物を次の工程にそのまま用いた。

４，６－Ｏ－（４－メトキシベンジリデン）－Ｄ－グルカール（２４）
乾燥ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の粗化合物２３に、Ｎ_２下でアニスアルデヒドジメチルアセタール（９．４０ｍＬ、５５．１ｍｍｏｌ）、次にピリジンｐ－トルエンスルホン酸塩（９２２ｍｇ、３．６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応は、ロータリーエバポレータ上で、減圧（１８０ｍｂａｒ）下で２５～３０℃で２．５～３時間行った。次に、ＤＭＦを減圧下で留去し、粗生成物をＤＣＭ １００ｍＬで抽出した。有機層をＮＨ_４Ｃｌ ５０ｍＬ、蒸留水５０ｍＬ及びブライン溶液５０ｍＬの順で洗浄した。最後に、集めた水層をＤＣＭ ５０ｍＬで抽出した。次に、混合物をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で溶媒留去して、４，６－Ｏ－（４－メトキシベンジリデン）－Ｄ－グルカールを白色粉末として収率４５％で得た。

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
７．４３（２Ｈ、ｔｄ、Ｊ８．６、Ｊ４．７、８－Ｈ）、６．９０（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ８．８、Ｊ４．９、９－Ｈ）、６．３３（１Ｈ、ｄｄｄ、Ｊ６．１、Ｊ１．６、Ｊ０．４、１－Ｈ）、５．５５（１Ｈ、ｓ、７－Ｈ）、４．７６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ６．１、Ｊ２．０、２－Ｈ）、４．４９（１Ｈ、ｂｒｄ、Ｊ７．３、３－Ｈ）、４．３５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ１０．３、Ｊ５．０、５－Ｈ）、３．９３－３．８７（１Ｈ、ｍ、６－Ｈ）、３．８３－３．７９（１Ｈ、ｍ、６－Ｈ）、３．８０（３Ｈ、ｓ、－ＯＭｅ）、３．７７－３．７５（１Ｈ、ｍ、４－Ｈ）、２．４７（１Ｈ、ｓ、－ＯＨ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１５９．４（１１－Ｃ）、１４３．３（１－Ｃ）、１２８．６（８－Ｃ）、１２６．７（９－Ｃ）、１１２．８（１０－Ｃ）、１０２．７（２－Ｃ）、１００．９（７－Ｃ）、７９．８（４－Ｃ）、６８．９（５－Ｃ）、６７．６（６－Ｃ）、６５．７（３－Ｃ）、５４．４（ＯＭｅ）。

３－Ｏ－ベンジルオキシ－４，６－Ｏ－（４－メトキシベンジリデン）－Ｄ－グルカール（２５）
０℃の２４（１６．０５ｇ、６０．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（３５０ｍＬ）に、６０％水素化ナトリウム／鉱油（７．２９ｇ、１８２ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた（ＮａＨは、事前に、それの鉱油を乾燥ｎ－ヘキサンで３回洗い流すことができる。）。同じ温度で３０分間撹拌した後、氷浴を取り外した。臭化ベンジル（１４．４ｍＬ、１２１ｍｍｏｌ）を加え、反応液を一晩撹拌し、その間に加温して室温とした。次に、混合物をメタノール（２０ｍＬ）で反応停止し、ＤＭＦを減圧下で蒸発させた。有機相をＥｔＯＡｃ １００ｍＬで抽出し、次に有機層をＮＨ_４Ｃｌ、ＮａＨＣＯ_３及びブライン（それぞれ５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、溶媒を減圧下で留去した。残留物をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝３：７）で精製して、３－Ｏ－ベンジルオキシ－４，６－Ｏ－（４－メトキシベンジリデン）－Ｄ－グルカール（１８．４３ｇ、８６％）を白色粉末として得た。

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
７．４２（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ８．５、Ｊ４．６、８－Ｈ）、７．３７－７．２３（７Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、６．９０（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ８．９、Ｊ４．９、９－Ｈ）、６．３４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ６．２、Ｊ１．４、１－Ｈ）、５．５８（１Ｈ、ｓ、７－Ｈ）、４．８１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ６．１７、Ｊ２．０６、２－Ｈ）、４．７９（１Ｈ、ｄ、Ｊ１２．１１０－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．７０（１Ｈ、ｄ、Ｊ１２．１、１０－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．３６－４．３２（２Ｈ、ｍ、３－Ｈ、６ａ－Ｈ）、４．００（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ９．８、Ｊ７．４、６ｂ－Ｈ）、３．８８（１Ｈ、ｔｄ、Ｊ１０．１、Ｊ４．７、５－Ｈ）、３．８１（１Ｈ、ｔ、Ｊ１０．１、４－Ｈ）、３．８０（３Ｈ、ｓ、－ＯＭｅ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１６０．２（１１－Ｃ）、１４４．５（１－Ｃ）、１３８．６（１３－Ｃ）、１２９．９（８－Ｃ）、１２９．９－１２７．２（Ｃ_ａｒｏｍ９、１４、１５、１６－Ｃ）、１１３．７（１０－Ｃ）、１０２．４（２－Ｃ）、１０１．３（７－Ｃ）、８０．１（５－Ｃ）、７３．２（４－Ｃ）、７２．１（６－Ｃ）、６８．８（３－Ｃ）、６８．４（１２－Ｃ）、５５．４（－ＯＭｅ）。

３－Ｏ－ベンジルオキシ－４－Ｏ－（４－メトキシベンジルオキシ）－Ｄ－グルカール（２６）
グルカール２５（７８０ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、０℃で冷却し、室温で２０分間撹拌した。次に、１Ｍ ＤＩＢＡＬ－Ｈ／ヘキサン溶液（１１．０ｍＬ、１１．０ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。混合物を０℃で２時間撹拌した。反応は、一般にロシェル塩と称される酒石酸カリウムナトリウム四水和物の蒸留水溶液（水７．５ｍＬ中酒石酸塩１．５ｇ）によって２０分間反応停止した。次に、混合物をＤＣＭ（３０ｍＬ）で抽出し、有機層を蒸留水で２回、ブライン（各４０ｍＬ）で洗浄した。最後に水層をＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。有機相を集め、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を減圧下で留去した。残留物をシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：３）によって精製して、３－Ｏ－ベンジルオキシ－４－Ｏ－（４－メトキシベンジルオキシ）－Ｄ－グルカールを白色固体として収率８４％で得た。

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
７．３４－７．２０（７Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、６．８３（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ８．７、Ｊ４．８、９－Ｈ）、６．３４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ６．１、Ｊ１．２、１－Ｈ）、４．８２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ６．１、Ｊ２．６、２－Ｈ）、４．７５（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．１、１０－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．６３（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．１、１０－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．６１（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．８、７－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．５２（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．８、７－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．１９（１Ｈ、ｄｄｄ、Ｊ６．３、Ｊ２．４、Ｊ２．３、３－Ｈ）、３．８７（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ８．８、Ｊ４．２、５－Ｈ）、３．８１－３．７９（２Ｈ、ｍ、６－Ｈ）、３．７７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ８．７、Ｊ６．３、４－Ｈ）、３．７１（３Ｈ、ｓ、－ＯＭｅ）、２．６５（１Ｈ、ｓ、－ＯＨ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１５９．２（１１－Ｃ）、１４４．４（１－Ｃ）、１３８．１（１３－Ｃ）、１３０．１（８－Ｃ）、１２９．７－１２７．６（Ｃ_ａｒｏｍ９、１４、１５、１６－Ｃ）、１１３．７（１０－Ｃ）、１００．１（２－Ｃ）、７７．５（５－Ｃ）、７５．６（３－Ｃ）、７４．１（４－Ｃ）、７３．３（１２－Ｃ）、７０．４（７－Ｃ）、６１．４（６－Ｃ）、５５．１（－ＯＭｅ）。

１，５－アンヒドロ－３－Ｏ－ベンジルオキシ－４－Ｏ－（４－メトキシベンジルオキシ）－２，６，７－トリデオキシ－Ｄ－アラビノ－ヘプト－１，６－ジエニトール（２８）
前出のアルコール２６（６５０ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ溶液（６．１ｍＬ）に、ＤＭＰ（９２６ｍｇ、２．１８ｍｍｏｌ）を加えた。次に、混合物を室温（２５℃）で１時間撹拌した。

一方、－７８℃で新鮮なＰＰｈ_３ＣＨ_３Ｉ（１．４８ｇ、３．６５ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ溶液（１２．０ｍＬ）でイリドを調製し、２５分間撹拌した。次に、ＫＨＭＤＳ（７．３ｍＬ、３．６５ｍｍｏｌ、０．５Ｍ／トルエン溶液）を－７８℃で滴下した。混合物を－７８℃で２０分間、０℃で５０分間、そして最後に－７８℃で３０分間の順で撹拌して、イリドを形成した。

さらに、酸化反応を、Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３（３０ｍＬ）及びＮａＨＣＯ_３（３０ｍＬ）の溶液によって１０分間反応停止した。次に、アルデヒドをＤＣＭで後処理し（４０ｍＬで３回）、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、ＤＣＭを減圧下で留去した。

次に、乾燥ＴＨＦ中のアルデヒド（１１．０ｍＬ）を－７８℃で前記イリドに滴下した。反応物を一晩撹拌した。混合物をＮＨ_４Ｃｌ（２０ｍＬ）及びＤＣＭ（５０ｍＬ）で処理した。次に、有機層を再びＤＣＭで抽出し（３０ｍＬで２回）、ＮａＣｌ（８０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ｎＨｅｘａｎｅ／ＥｔＯＡｃ＝７：３）で精製して、アルケンを黄色油状物として２工程で収率８３％で得た。

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
７．３７－７．２７（４Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、７．２４（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ８．６、Ｊ５．５、９－Ｈ）、６．８６（２Ｈ、ｔｄ、Ｊ８．７、Ｊ５．５、１０－Ｈ）、６．４１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ６．１、Ｊ１．３、１－Ｈ）、６．０４（１Ｈ、ｄｄｄ、Ｊ１７．２、Ｊ１０．６、Ｊ６．６、６－Ｈ）、５．４３（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ２．９、Ｊ１７．３、７ｂ－Ｈ）、５．３１（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ２．６、Ｊ１０．６、７ａ－Ｈ）、４．８８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ６．２、Ｊ２．７、２－Ｈ）、４．７０（１Ｈ、ｄ、Ｊ１０．９、１１－Ｈ、ＣＨ_２Ｐｈ）、４．６４（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．７、８－Ｈ、ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．６２（１Ｈ、ｄ、Ｊ１０．９、１１－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．５８（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．７、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．３１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ７．１、Ｊ８．０、５－Ｈ）、４．１９（１Ｈ、ｄｄｄ、Ｊ６．２、Ｊ２．５、Ｊ１．５、３－Ｈ）、３．７９（３Ｈ、ｓ、－ＯＭｅ）、３．５９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ８．６、Ｊ６．２、４－Ｈ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１５９．４（１２－Ｃ）、１４４．６（１－Ｃ）、１３８．５（１４－Ｃ）、１３４．５（６－Ｃ）、１３０．３（９－Ｃ）、１２９．８－１２７．８（Ｃ_ａｒｏｍ１０、１５、１６、１７－Ｃ）、１１８．４（７－Ｃ）、１１３．９（１１－Ｃ）、１００．５（２－Ｃ）、７８．２（５－Ｃ）、７８．０（４－Ｃ）、７５．５（３－Ｃ）、７３．６（８－Ｃ）、７０．８（１３－Ｃ）、５５．４（－ＯＭｅ）。

（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－４－Ｏ－ベンジルオキシ－３－Ｏ－（４－メトキシベンジルオキシ）－５－（ヒドロキシメチル）シクロヘキセン（２９）
アルケン２８（２００ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を室温でｍ－ＤＣＢ（１．４３ｍＬ、０．４Ｍ）に溶解した。次に、クライゼン転位を、マイクロ波下２６５℃で１０分間行った。反応性アルデヒドの黄色溶液が消費されたら、直ちにＮａＢＨ_４（８６ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／ＥｔＯＨ（１０ｍＬ、４：１）中の混合物に注ぎ入れ、室温で１時間撹拌した（ＴＬＣ上に単一スポット、橙赤色溶液）。蒸留水（１０ｍＬ）で反応停止した。水相を蒸留水１０ｍＬで増量させ、ＤＣＭで抽出した（２０ｍＬで３回）。最後に、有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ｎヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝８：２）によって精製して、アルコール７を無色油状物として２工程で収率で得た。

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
７．２８－７．１６（７Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、６．７９（２Ｈ、ｂｒｄ、Ｊ８．３、１４－Ｈ）、５．６７－５．６４（１Ｈ、ｍ、１－Ｈ）、５．６４－５．５９（１Ｈ、ｍ、２－Ｈ）、４．８８（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．３、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．６４（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．３、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．５６（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．２、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．４８（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．７、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．１２（１Ｈ、ｂｒｄ、４－Ｈ）、３．７１（３Ｈ、ｓ、－ＯＭｅ）、３．５７－３．４７（３Ｈ、ｍ、３－Ｈ、６－Ｈ）、２．３５（１Ｈ、ｓ、－ＯＨ）、２．０７－２．００（１Ｈ、ｍ、７－Ｈ）、１．９７－１．８８（１Ｈ、ｍ、５－Ｈ）、１．８２－１．７５（１Ｈ、ｍ、７－Ｈ）δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１５９．４（１７－Ｃ）、１３８．５（９－Ｃ）、１３２．１（１４－Ｃ）、１３０．５－１２８．０（Ｃ_ａｒｏｍ１０、１１、１２、１５－Ｃ）、１２７．７（１－Ｃ）、１２６．１（２－Ｃ）、１１４．０（１６－Ｃ）、８２．３（３－Ｃ）、８０．９（４－Ｃ）、７４．４（８－Ｃ）、７１．１（１３－Ｃ）、６５．９（６－Ｃ）、５５．４（－ＯＭｅ）、４０．７（５－Ｃ）、２８．１（７－Ｃ）。

４－Ｏ－ベンジル－３－Ｏ－（４－メトキシベンジルオキシ）－６－Ｏ－テキシルジメチルシリル－５－メチルシクロヘキセン（３０）
アルコール２９（７１５ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）を室温で乾燥ＴＨＦ（１７ｍＬ）に溶解した。イミダゾール（１２５ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５分間、次に０℃で１０分間撹拌した。次に、注意深くテキシルジメチルシリルクロリド（１．１９ｍＬ、６．０５ｍｍｏｌ）を滴下して、白い沈殿物を形成させた。氷浴を最初の沈殿時に取り外し、残りのＴＤＳＣｌを混合物にゆっくりと加え、加温して室温とし、一晩攪拌した。反応をＴＬＣ（Ｐｅｎｔ／ＡｃＯＥｔ３：１）でモニタリングした。有機相をＥｔＯＡｃで抽出し、次に蒸留水で洗浄した（５回）。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ｎＨｅｘ／ＡｃＯＥｔ９５：５）によって精製して、化合物３０を黄色油状物として定量的収率で形成した。

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
７．３７－７．１６（７Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、６．８８－６．８４（２Ｈ、ｍ、１４－Ｈ）、５．７５（１Ｈ、ｄｄｑ、Ｊ９．０、Ｊ４．３、Ｊ２．４、１－Ｈ）、５．６４（１Ｈ、ｂｒｄ、２－Ｈ）、４．９１（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．０、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．６８（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．０、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．６４（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．３、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．６０（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．３、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．１６（１Ｈ、ｄｄｑ、Ｊ７．１、Ｊ３．６、Ｊ１．８、３－Ｈ）、３．８６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ９．８、Ｊ４．８、６－Ｈ）、３．７９（３Ｈ、ｓ、－ＯＭｅ）、３．６４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ１０．０、Ｊ６．６、４－Ｈ）、３．６３－３．５８（１Ｈ、ｍ、６－Ｈ）、２．２８－２．１６（１Ｈ、ｍ、７－Ｈ）、２．１０（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ１８．４、Ｊ５．３、７－Ｈ）、１．９１（１Ｈ、ｔｔｄ、Ｊ１０．５、Ｊ５．１、Ｊ２．７、５－Ｈ）、１．６４（１Ｈ、ｈｅｐｔ、Ｊ６．９、１７－Ｈ）、０．９０（６Ｈ、ｄ、Ｊ６．９、１８－Ｈ）、０．８７（６Ｈ、ｓ、１６－Ｈ）、０．１３（６Ｈ、ｓ、１５－Ｈ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１５９．３（１４－Ｃ）、１３９．３（９－Ｃ）、１３３．８（１７－Ｃ）、１３１．０－１２８．０（Ｃ_ａｒｏｍ１０、１１、１２、１５－Ｃ）、１２７．６（１－Ｃ）、１２６．３（２－Ｃ）、１１３．９（１６－Ｃ）、８１．５（３－Ｃ）、７９．７（４－Ｃ）、７４．７（８－Ｃ）、７１．５（１３－Ｃ）、６２．６（６－Ｃ）、５５．４（－ＯＭｅ）、４１．４（５－Ｃ）、３４．３（２１－Ｃ）、２８．７（７－Ｃ）、２５．３（１９－Ｃ）、２０．５－２０．３（２０－Ｃ）、１８．８－１８．７（２２－Ｃ）、－３．２７－－３．４６（１８－Ｃ）。

４－Ｏ－ベンジル－３－Ｏ－（４－メトキシベンジルオキシ）－６－Ｏ－テキシルジメチルシリル－５ａ－カルバ－α－Ｄ－グルコピラノース（３１）
化合物３０（２３０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）をアセトン（１．６９ｍＬ）と水（５６２μＬ）の混合物に溶解した。ＯｓＯ_４（Ｈ_２Ｏ ４．５ｍＬ及びアセトン１８ｍＬにＯｓＯ_４ ２５０ｍｇを溶解した溶液の５３７μＬ）及びＴＭＡＮＯ（１１６ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）の溶液を室温で加えた。反応を２５℃で４８時間行った。Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３の飽和水溶液（２ｍＬ）を加え、混合物を室温で撹拌してＯｓＯ_４を還元した。有機相をＣＨＣｌ_３（１５ｍＬ）で抽出し、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、最後にＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ｎＨｅｘ／ＡｃＯＥｔ、８．２）によって精製して、収率７７％で無色油状物としてジオール３１を形成した。

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
７．３７－７．１５（７Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、６．８７（２Ｈ、ｂｒｄ、Ｊ８．７、１４－Ｈ）、４．９０（１Ｈ、ｄ、Ｊ１２、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．８８（１Ｈ、ｄ、Ｊ８、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．６９（１Ｈ、ｄ、Ｊ１０．９、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．６１（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．１、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．０５（１Ｈ、ｂｒｄ、Ｊ２．７、１－Ｈ）、３．９６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ１０．０、Ｊ３．３、６－Ｈ）、３．７８（３Ｈ、ｓ、－ＯＭｅ）、３．７１（１Ｈ、ｔ、Ｊ９．４、３－Ｈ）、３．４８（２Ｈ、ｔ、Ｊ１０．０、６－Ｈ、４－Ｈ）、３．４３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ２．３、Ｊ９．４、２－Ｈ）、２．６４（１Ｈ、ｓ、－ＯＨ）、２．５８（１Ｈ、ｓ、－ＯＨ）、２．０９－２．０３（１Ｈ、ｍ、５－Ｈ）、１．７７（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ１４．５、Ｊ３．６、７－Ｈ）、１．６２（１Ｈ、ｈｅｐｔ、Ｊ６．９、１７－Ｈ）、１．５９－１．５２（１Ｈ、ｍ、７－Ｈ）、０．８８（６Ｈ、ｄ、Ｊ６．９、１８－Ｈ）、０．８５（６Ｈ、ｄ、ｄ１．２、１６－Ｈ）、０．０７（６Ｈ、ｓ、１５－Ｈ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１５９．５（１４－Ｃ）、１３８．９（９－Ｃ）、１３０．９（１７－Ｃ）、１２９．７－１２７．７（Ｃ_ａｒｏｍ１０、１１、１２、１５－Ｃ）、１１４．２（１６－Ｃ）、８３．４（３－Ｃ）、８１．０（４－Ｃ）、７５．１（１３－Ｃ）、７４．９（８－Ｃ）、７４．６（２－Ｃ）、６８．５（１－Ｃ）、６２．１（６－Ｃ）、５５．３（－ＯＭｅ）、３８．９（５－Ｃ）、３４．３（２１－Ｃ）、３０．４（７－Ｃ）、２５．２（１９－Ｃ）、２０．５－２０．４（２０－Ｃ）、１８．８－１８．７（２２－Ｃ）、－３．３５－－３．５６（１８－Ｃ）。

１－Ｏ－アセチル－４－Ｏ－ベンジル－３－Ｏ－（４－メトキシベンジルオキシ）－６－Ｏ－テキシルジメチルシリル－５ａ－カルバ－α－Ｄ－グルコピラノース（３２）
化合物３１（１５５ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を、窒素下、室温でアセトニトリル（２．９ｍＬ）に溶解した。混合物に、オルト酢酸トリメチル（１１５μＬ、０．８８ｍｍｏｌ）とＰＴＳＡ（５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を順に加え、次に窒素下、室温で６０分間撹拌した。反応完了後、ＡｃＯＨ ８０％の溶液（ＡｃＯＨ ２．３２ｍＬ＋Ｈ_２Ｏ ０．５８ｍＬ）を加えた。次のアセチル化反応は６０分で完全に終了した。有機相をＤＣＭ（５ｍＬ）で抽出し、水（５ｍＬ）とＮａＨＣＯ_３（５ｍＬ）で洗浄し、最後にＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ｎＨｅｘ／ＡｃＯＥｔ）によって精製して、シュードアノマー位置で選択的にアセチル化された化合物３２を無色油状物として定量的収率で得た。

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
７．３９－７．１３（７Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、６．８７（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ８．７、Ｊ５．０、１４－Ｈ）、５．２６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ５．７、Ｊ３．０、１－Ｈ）、４．９１（１Ｈ、ｄ、Ｊ１０．６、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．９０（１Ｈ、ｄ、Ｊ１０．９、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．７０（１Ｈ、ｄ、Ｊ１０．０、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．６８（１Ｈ、ｄ、Ｊ１０．５、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、３．９５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ１０．０、Ｊ３．５、６－Ｈ）、３．８０（３Ｈ、ｓ、－ＯＭｅ）、３．７５（１Ｈ、ｔ、Ｊ９．３、３－Ｈ）、３．５８（１Ｈ、ｂｒｄ、Ｊ９．６、２－Ｈ）、３．５３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ９．１、Ｊ１０．１、４－Ｈ）、３．５０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ９．８、Ｊ２．４、６－Ｈ）、２．２８（１Ｈ、ｓ、－ＯＨ）、２．０８（３Ｈ、ｓ、－ＯＡｃ）、１．９５－１．８８（１Ｈ、ｍ、５－Ｈ）、１．８５（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ１４．８、Ｊ７．６、７－Ｈ）、１．６１（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ１３．８、Ｊ６．９、７－Ｈ）、１．６１（１Ｈ、ｈｅｐｔ、Ｊ６．９、１７－Ｈ）、０．８８（６Ｈ、ｄ、Ｊ６．８、１８－Ｈ）、０．８４（６Ｈ、ｄ、Ｊ１．７、１６－Ｈ）、０．０７（６Ｈ、ｄ、Ｊ４．４、１５－Ｈ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１７０．９（Ｃ（Ｏ）、－ＯＡｃ）、１５９．５（１４－Ｃ）、１３８．７（９－Ｃ）、１３０．８（１７－Ｃ）、１２９．８－１２７．９（Ｃ_ａｒｏｍ１０、１１、１２、１５－Ｃ）、１１４．８（１６－Ｃ）、８４．０（３－Ｃ）、８０．５（４－Ｃ）、７５．４（１３－Ｃ）、７５．３（８－Ｃ）、７３．４（２－Ｃ）、７１．８（１－Ｃ）、６１．８（６－Ｃ）、５５．４（－ＯＭｅ）、３９．６（５－Ｃ）、３４．３（２１－Ｃ）、２８．８（７－Ｃ）、２５．３（１９－Ｃ）、２１．４（ＣＨ_３、－ＯＡｃ）、２０．５－２０．４（２０－Ｃ）、１８．８－１８．７（２２－Ｃ）、－３．２８－－３．５３（１８－Ｃ）。

１－Ｏ－アセチル－２－アジド－４－Ｏ－ベンジルオキシ－３－Ｏ－（４－メトキシベンジルオキシ）－６－Ｏ－テキシルジメチルシリル－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノース
化合物３２（２２０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／ピリジン（５：１、０．０５Ｍ）の混合物に溶解し、窒素下で１０℃で１０分間撹拌した。トリフラート無水物（３５５μＬ、２．１１ｍｍｏｌ）を－１０℃で滴下した。混合物を順次に、３０分間撹拌してゆっくりと０℃に到達させ、さらに０℃で３０分間撹拌した。反応終了後、有機相をＮａＨＣＯ_３及びブラインで洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、得られた粗生成物を、トルエンとの共留去（３回）後に次の工程でそのまま用いた。次に、乾燥粗取得物を４０℃でＤＭＦ／Ｈ_２Ｏ（１９：１、０．２Ｍ）に溶解した。アジ化ナトリウム（１２５ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）及び１５－クラウン－５（１５．２μＬ、０．０８ｍｍｏｌ）を室温で加え、４０℃で一晩にわたり反応を進めた。トリフラート中間体が完全に消失した後、溶媒を留去し、残留物を最終的にフラッシュクロマトグラフィー（ｎＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ）によって精製して、無色油状物として収率８２％で標題化合物アジドを形成させた。

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
７．３８－７．１４（７Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、６．８６（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ８．６、Ｊ４．９、１４－Ｈ）、４．９８－４．９４（１Ｈ、ｍ、１－Ｈ）、４．８８（１Ｈ、ｄ、Ｊ１０．７、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．６６（１Ｈ、ｄ、Ｊ１９．１、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．６３（１Ｈ、ｄ、Ｊ１９．５、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．５９（１Ｈ、ｄ、Ｊ１０．９、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、３．８７－３．８４（１Ｈ、ｍ、２－Ｈ）、３．８４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ６．３、Ｊ２．７、６－Ｈ）、３．８０（３Ｈ、ｓ、－ＯＭｅ）、３．８２－３．７５（２Ｈ、ｍ、４－Ｈ、３－Ｈ）、３．５２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ９．９、Ｊ２．１、６－Ｈ）、２．００（３Ｈ、ｓ、－ＯＡｃ）、１．９１－１．８２（２Ｈ、ｍ、５－Ｈ、７－Ｈ）、１．６５－１．５７（２Ｈ、ｍ、７－Ｈ、１７－Ｈ）、０．８９（６Ｈ、ｄ、Ｊ６．９、１８－Ｈ）、０．８５（６Ｈ、ｄ、Ｊ１．２、１６－Ｈ）、０．０７（６Ｈ、ｄ、Ｊ４．１、１５－Ｈ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１６９．８（Ｃ（Ｏ）、－ＯＡｃ）、１５９．６（１４－Ｃ）、１３８．９（９－Ｃ）、１３０．２（１７－Ｃ）、１２９．８－１２７．８（Ｃ_ａｒｏｍ１０、１１、１２、１５－Ｃ）、１１４．０（１６－Ｃ）、８１．１（４－Ｃ）、７７．０（３－Ｃ）、７５．４（８－Ｃ）、７２．９（１３－Ｃ）、７０．６（１－Ｃ）、６２．２（６－Ｃ）、６１．４（２－Ｃ）、５５．４（－ＯＭｅ）、３９．８（５－Ｃ）、３４．４（２１－Ｃ）、２７．１（７－Ｃ）、２５．３（１９－Ｃ）、２１．２（ＣＨ_３、－ＯＡｃ）、２０．６－２０．５（２０－Ｃ）、１８．８－１８．７（２２－Ｃ）、－３．３５－－３．５２（１８－Ｃ）。

１－Ｏ－アセチル－２－アセトアミド－４－Ｏ－ベンジルオキシ－３－Ｏ－（４－メトキシベンジルオキシ）－６－Ｏ－テキシルジメチルシリル－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノース（３３）
上記で示したアジド（３３４ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の混合物に、ＰＰｈ_３（３６６ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）と触媒量のピリジン（１３．６μＬ、０．１７ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で２４時間撹拌した。出発物質が消失した後、生成されたアミンから溶媒を留去し、次にピリジン（５．６ｍＬ）に溶解した。無水酢酸（１．０６ｍＬ、１１．２ｍｍｏｌ）を加え、溶液を再び２４時間撹拌した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ｎＨｅｘ／ＡｃＯＥｔ）により精製して、アセトアミド３３を黄色油状物として収率７５％で得た。

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
７．３９－７．２８（５Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、７．１９（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ９．４、Ｊ４．６、１３－Ｈ）、６．８６（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ９．４、Ｊ４．８、１４－Ｈ）、５．５９（１Ｈ、ｄ、Ｊ８．１、ＮＨＡｃ）、５．１２（１Ｈ、ｔｄ、Ｊ７．２、Ｊ３．９、１－Ｈ）、４．７１（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．３、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．５６（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．３、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．５０（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．２、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．４２（１Ｈ、ｔｄ、Ｊ７．７、Ｊ４．１、２－Ｈ）、４．３６（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．２、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、３．８４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ２．４、Ｊ４．０、３－Ｈ）、３．８５－３．８２（１Ｈ、ｍ、６－Ｈ）、３．８０（３Ｈ、ｓ、－ＯＭｅ）、３．７２（１Ｈ、ｔ、Ｊ６．３、４－Ｈ）、３．６０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ９．９、Ｊ５．５、６－Ｈ）、２．０９－２．０２（１Ｈ、ｍ、５－Ｈ）、２．０１（３Ｈ、ｓ、－ＯＡｃ）、１．９０（３Ｈ、ｓ、－ＮＨＡｃ）、１．８２（２Ｈ、ｔｄｄ、Ｊ１４．２、Ｊ７．４、Ｊ４．６、７－Ｈ）、１．６６－１．５７（１Ｈ、ｈｅｐｔ、Ｊ６．９、１７－Ｈ）、０．８９（６Ｈ、ｄ、Ｊ６．９、１８－Ｈ）、０．８４（６Ｈ、ｓ、１６－Ｈ）、０．０８（６Ｈ、ｄ、Ｊ６．２、１５－Ｈ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１７０．７（Ｃ（Ｏ）、－ＮＨＡｃ）、１７０．１（Ｃ（Ｏ）、－ＯＡｃ）、１５９．６（１４－Ｃ）、１３８．６（９－Ｃ）、１３０．０（１５－Ｃ）、１２９．９（１７－Ｃ）、１２８．６－１２７．８（Ｃ_ａｒｏｍ１０、１１、１２－Ｃ）、１１４．１（１６－Ｃ）、７８．７（３－Ｃ）、７４．４（４－Ｃ）、７３．６（８－Ｃ）、７１．９（１３－Ｃ）、６９．６（１－Ｃ）、６２．５（６－Ｃ）、５５．４（－ＯＭｅ）、５０．６（２－Ｃ）、３９．９（５－Ｃ）、３４．４（２１－Ｃ）、２７．１（７－Ｃ）、２５．２（１９－Ｃ）、２３．５（ＣＨ_３、－ＮＨＡｃ）、２１．３（ＣＨ_３、－ＯＡｃ）、２０．５（２０－Ｃ）、１８．８（２２－Ｃ）、－３．３７－－３．４８（１８－Ｃ）。

１－Ｏ－テルブチルシリル－２－アセトアミド－４－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－３－Ｏ－（４－メトキシベンジルオキシ）－６－Ｏ－テキシルジメチルシリル－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノース（３５）
化合物３３（５８２ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（９．５ｍＬ）に溶解した。混合物にＮａＯＭｅ（１１ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で３時間撹拌した。中性ｐＨに達するまでアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）Ｈ^＋イオン交換樹脂を加えた。懸濁液を濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をトルエンと３回共留去させた。

Ｎ_２ガス流下、フラスコに、３４（０．９５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（４ｍＬ）を入れた。０℃で、２，６－ルチジン（２．３７ｍｍｏｌ）、続いてＴＢＳＯＴｆ（４３７μＬ、１．９ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を撹拌して、加温して室温とした。完了後、反応物を冷却して室温とし、ＭｅＯＨで反応停止し、混合物をクロロホルムで希釈した。混合物を１０％ＣｕＳＯ_４水溶液（２回）、Ｈ_２Ｏ及びブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ｎＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ）による精製により、標題化合物３５を橙赤色油状物として２工程で収率８３％で得た。

Ｊ． Ｄ． Ｃ． Ｃｏｄｅｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ， ２０１７， ８２， ２， ８４８－８６８

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
７．４１－７．２４（５Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、７．１９（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ９．５、Ｊ４．６、１３－Ｈ）、６．８６（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ９．４、Ｊ４．８、１４－Ｈ）、５．５７（１Ｈ、ｄ、Ｊ５．７、ＮＨＡｃ）、４．９３（１Ｈ、ｄ、Ｊ１０．６、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．５８（１Ｈ、ｄ、Ｊ１０．５、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．５６（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．１、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．４８（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．１、１２－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ（４－ＯＭｅ））、４．２７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ５．２、Ｊ２．３、２－Ｈ）、４．２５－４．２１（１Ｈ、ｍ、１－Ｈ）、４．０３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ９．６、Ｊ４．５、３－Ｈ）、３．９７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ９．７、Ｊ３．６、６－Ｈ）、３．８１（３Ｈ、ｓ、－ＯＭｅ）、３．５４（１Ｈ、ｔ、Ｊ９．９、４－Ｈ）、３．４８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ９．７、Ｊ２．２、６－Ｈ）、２．０９－２．０２（１Ｈ、ｍ、５－Ｈ）、２．０１（３Ｈ、ｓ、－ＮＨＡｃ）、１．７８－１．６９（１Ｈ、ｍ、７－Ｈ）、１．６９－１．５９（１Ｈ、ｍ、１７－Ｈ）、１．５２－１．４５（１Ｈ、ｍ、７－Ｈ）、０．９３（６Ｈ、ｄ、Ｊ６．９、１８－Ｈ）、０．８７（６Ｈ、ｓ、１６－Ｈ）、０．８６（６Ｈ、ｓ、２０－Ｈ）、０．８４（６Ｈ、ｓ、１６－Ｈ）、０．１２（６Ｈ、ｄ、Ｊ１２．０、１９－Ｈ）、０．０９（６Ｈ、ｄ、Ｊ９．４、１５－Ｈ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１７０．７（Ｃ（Ｏ）、－ＮＨＡｃ）、１５９．５（１４－Ｃ）、１３９．１（９－Ｃ）、１３０．２（１７－Ｃ）、１３０．０（１５－Ｃ）、１２８．６－１２７．７（Ｃ_ａｒｏｍ１０、１１、１２－Ｃ）、１１４．０（１６－Ｃ）、７８．５（３－Ｃ）、７７．６（４－Ｃ）、７５．５（８－Ｃ）、７１．４（１３－Ｃ）、６７．７（２－Ｃ）、６２．６（６－Ｃ）、５５．４（－ＯＭｅ）、５３．４（１－Ｃ）、３８．６（５－Ｃ）、３４．６（２１－Ｃ）、３０．４（７－Ｃ）、２５．９（２５－Ｃ）、２５．２（１９－Ｃ）、２３．６（ＣＨ_３－ＮＨＡｃ）、２０．７－２０．６（２０－Ｃ）、１８．９－１８．８（２２－Ｃ）、１８．０（２４－Ｃ）、－３．３７－－３．５８（１８－Ｃ）、－４．８２－－４．９２（２３－ＮＳ）。

１－Ｏ－ｔｅｒｔブチルシリル－２－アセトアミド－４－Ｏ－ベンジルオキシ－３－Ｏ－（４－メトキシベンジルオキシ）－６－Ｏ－テキシルジメチルシリル－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノース
１４（７１ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（３．４ｍＬ）を冷却（０℃）し、それに、新たに調製したリン酸緩衝液（３６２μＬ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ）を加えた。新たに調製したＤＤＱ（５０．０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を１時間かけて少量ずつ加えた後、混合物を加温して室温とし、３０分間撹拌した。混合物をＮａＨＣＯ_３で希釈し、水層をＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ｎＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ）による精製により、化合物１５を橙赤色固体として収率７２％で得た。

Ｄａｎ Ｖａｎ Ｄｅｒ Ｅｓ， Ｔｈｅｓｉｓ， ２０１６， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｅｉｔ Ｌｅｉｄｅｎ， ｐｐ１６０．

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
７．４１－７．２７（５Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、５．５２（１Ｈ、ｄ、Ｊ５．４、ＮＨＡｃ）、４．７３（２Ｈ、ｓ、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．２６（１Ｈ、ｂｒｄ、Ｊ２．７、１－Ｈ）、４．１６（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ９．０、Ｊ３．８、３－Ｈ）、４．０６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ９．０、Ｊ４．５、２－Ｈ）、３．９４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ９．９、Ｊ３．７、６－Ｈ）、３．５３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ１０．０、Ｊ２．１、６－Ｈ）、３．４６（１Ｈ、ｔ、Ｊ９．５、４－Ｈ）、２．７３（１Ｈ、ｓ、－ＯＨ）、２．１０－２．０３（１Ｈ、ｍ、５－Ｈ）、２．００（３Ｈ、ｓ、－ＮＨＡｃ）、１．８１－１．６９（１Ｈ、ｍ、７－Ｈ）、１．６９－１．５９（１Ｈ、ｍ、１４－Ｈ）、１．５１（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ１３．７、Ｊ３．２、７－Ｈ）、０．９３（６Ｈ、ｄ、Ｊ６．９、１５－Ｈ）、０．８８（６Ｈ、ｓ、１７－Ｈ）、０．８７（６Ｈ、ｓ、１３－Ｈ）、０．１４－０．０４（１２Ｈ、ｍ、１６－Ｈ、１２－Ｈ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１７０．１（Ｃ（Ｏ）、－ＮＨＡｃ）、１３８．８（９－Ｃ）、１２８．７－１２７．７（Ｃ_ａｒｏｍ１０、１１、１２－Ｃ）、７９．６（４－Ｃ）、７４．８（８－Ｃ）、７０．７（３－Ｃ）、６７．６（１－Ｃ）、６２．９（６－Ｃ）、５６．５（２－Ｃ）、３８．５（５－Ｃ）、３４．６（１６－Ｃ）、３１．２（７－Ｃ）、２５．９（２０－Ｃ）、２５．３（１４－Ｃ）、２３．６（ＣＨ_３、－ＮＨＡｃ）、２０．７－２０．６（１５－Ｃ）、１８．９－１８．８（１７－Ｃ）、１８．０（１９－Ｃ）、－３．３７－－３．５３（１３－Ｃ）、－４．８０－－４．９０（１８－Ｃ）。

１－Ｏ－ｔｅｒｔブチルシリル－２－アセトアミド－４－Ｏ－ベンジルオキシ－６－Ｏ－テキシルジメチルシリル－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノース（３６）
上記で示したアルコール（１８０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を窒素下で室温で乾燥ＤＣＭ（３．２ｍＬ）に溶解した。ピリジン（２５７μＬ、３．１８ｍｍｏｌ）、無水酢酸（６０１μＬ、６．３６ｍｍｏｌ）及び触媒量のＤＭＡＰ（７．８ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）をその順で加え、反応終了まで混合物を撹拌した。溶液をＭｅＯＨで反応停止し、次に減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ｎＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ）による精製により、化合物３６を黄色油状物として定量的収率で形成した。

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
７．３７－７．１３（５Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、５．４４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ１０．３、Ｊ４．５、３－Ｈ）、５．２７（１Ｈ、ｄ、Ｊ７．４、ＮＨＡｃ）、４．７０（２Ｈ、ｄ、Ｊ１０．９、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．６１（１Ｈ、ｄ、Ｊ１０．９、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．３１（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ７．３、Ｊ３．８、２－Ｈ）、４．１０（１Ｈ、ｂｒｄ、Ｊ２．７、１－Ｈ）、３．９７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ９．８、Ｊ３．２、６－Ｈ）、３．６１（１Ｈ、ｔ、Ｊ１０．３、４－Ｈ）、３．４６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ９．８、Ｊ２．０、６－Ｈ）、２．１８－２．１１（１Ｈ、ｍ、５－Ｈ）、２．００（３Ｈ、ｓ、－ＮＨＡｃ）、１．９８（３Ｈ、ｓ、－ＯＡｃ）、１．７９－１．７０（１Ｈ、ｍ、７－Ｈ）、１．７０－１．６１（１Ｈ、ｍ、１４－Ｈ）、１．５２（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ１４．３、Ｊ２．８、７－Ｈ）、０．９５（６Ｈ、ｄ、Ｊ６．９、１５－Ｈ）、０．９０（６Ｈ、ｓ、１７－Ｈ）、０．８８（６Ｈ、ｓ、１３－Ｈ）、０．１３（６Ｈ、ｄ、Ｊ１５．１、１６－Ｈ）、０．０９（６Ｈ、ｄ、Ｊ１４．８、１２－Ｈ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１７０．０（Ｃ（Ｏ）、－ＮＨＡｃ）、１６９．８（Ｃ（Ｏ）、－ＯＡｃ）、１３８．７（９－Ｃ）、１２８．６－１２７．６（Ｃ_ａｒｏｍ１０、１１、１２－Ｃ）、７６．２（４－Ｃ）、７５．１（８－Ｃ）、７３．２（３－Ｃ）、６８．１（１－Ｃ）、６２．３（６－Ｃ）、５４．０（２－Ｃ）、３８．７（５－Ｃ）、３４．６（１６－Ｃ）、３０．６（７－Ｃ）、２５．８（２０－Ｃ）、２５．３（１４－Ｃ）、２３．６（ＣＨ_３、－ＮＨＡｃ）、２１．２（ＣＨ_３、－ＯＡｃ）、２０．７－２０．６（１５－Ｃ）、１９．０－１８．９（１７－Ｃ）、１８．１（１９－Ｃ）、－３．４１－－３．６２（１３－Ｃ）、－４．９０－－４．９９（１８－Ｃ）。

２－アセトアミド－４－Ｏ－ベンジルオキシ－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノース（３７）
化合物３６（１２０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を０℃で乾燥ＴＨＦ（２．０ｍＬ）に溶解した。ＨＦ／Ｐｙ３０％の溶液（４２０μＬ）を滴下し、反応液を一晩攪拌しながら、０℃から室温までゆっくり加温した。次に、混合物をＮａＨＣＯ_３（３ｍＬ）で反応停止した。有機層をＥｔＯＡｃで２回抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。得られた粗化合物３７をシリカで濾過して、収率６０％で白色固体を得た。

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤ_３ＯＤ）
７．３７－７．２６（５Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、５．３３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ８．４、Ｊ４．４、３－Ｈ）、４．７２（２Ｈ、ｄ、Ｊ１１．４、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．６６（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．４、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．４５（１Ｈ、ｔ、Ｊ４．８、２－Ｈ）、４．１０（１Ｈ、ｂｒｄ、Ｊ２．７、１－Ｈ）、３．８７（１Ｈ、ｑ、Ｊ４．５、１－Ｈ）、３．７８－３．７３（２Ｈ、ｍ、４－Ｈ、６－Ｈ）、３．６８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ１０．６、Ｊ４．２、６－Ｈ）、２．１７－２．０９（１Ｈ、ｍ、５－Ｈ）、２．０４（１Ｈ、ｓ、－ＯＨ）、２．０３（１Ｈ、ｓ－ＯＨ）、２．０２（３Ｈ、ｓ、－ＮＨＡｃ）、１．９８（３Ｈ、ｓ、－ＯＡｃ）、１．８３（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ７．８、Ｊ３．８、７－Ｈ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）
１７３．６（Ｃ（Ｏ）、－ＮＨＡｃ）、１７２．０（Ｃ（Ｏ）、－ＯＡｃ）、１４０．０（９－Ｃ）、１２９．３－１２８．６（Ｃ_ａｒｏｍ１０、１１、１２－Ｃ）、７７．２（４－Ｃ）、７４．９（８－Ｃ）、７４．７（３－Ｃ）、６８．２（１－Ｃ）、６３．１（６－Ｃ）、５４．０（２－Ｃ）、４０．７（５－Ｃ）、３０．９（７－Ｃ）、２２．５（ＣＨ_３、－ＮＨＡｃ）、２１．１（ＣＨ_３、－ＯＡｃ）。

２－アセトアミド－４－Ｏ－ベンジルオキシ－６－Ｏ－ジメトキシトリチル－５ａ－カルバ－α－Ｄ－マンノピラノース（３８）
化合物３７（１５ｍｇ、４２．７μｍｏｌ）を窒素下、室温で乾燥ＤＣＭに溶解した。乾燥ピリジン（５．２μＬ、６４．０μｍｏｌ）とＤＭＴｒＣｌ（２１７ｍｇ、６４．０μｍｏｌ）を順に加え、混合物を室温で３時間撹拌した。次に反応物にＨ_２Ｏを加えた。有機層をブラインで１回洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ｎＨｅｘ／ＡｃＯＥｔ、０．１％ＴＥＡ）による精製により、化合物３８を白色固体として収率７４％で得た。

δ ^１Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤ_３ＯＤ）
７．４０－７．０５（１４Ｈ、ｍ、Ｈ_ａｒｏｍ）、６．７９（４Ｈ、ｄｄ、Ｊ８．９、Ｊ１．７、１３－Ｈ）、５．２４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ７．９、Ｊ４．３、３－Ｈ）、４．５３（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．３、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、４．３８（１Ｈ、ｔ、Ｊ４．８、２－Ｈ）、４．３１（１Ｈ、ｄ、Ｊ１１．３、８－Ｈ ＣＨ_２ Ｐｈ）、３．７９（１Ｈ、ｑ、Ｊ５．２、１－Ｈ）、３．７２（３Ｈ、ｓ、－ＯＭｅ）、３．７２（３Ｈ、ｓ、－ＯＭｅ）、３．６１（１Ｈ、ｔ、Ｊ８．１、４－Ｈ）、３．３４－３．２６（１Ｈ、ｍ、６－Ｈ）、３．０５（１Ｈ、ｔ、Ｊ８．３、６－Ｈ）、２．３４－２．２４（１Ｈ、ｍ、５－Ｈ）、２．０８－１．９８（１Ｈ、ｍ、７－Ｈ）、１．９５（３Ｈ、ｓ、－ＮＨＡｃ）、１．８６（３Ｈ、ｓ、－ＯＡｃ）、１．８５－１．７９（１Ｈ、ｍ、７－Ｈ）。

δ ^１３Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤ_３ＯＤ）
１７３．６（Ｃ（Ｏ）、－ＮＨＡｃ）、１７２．０（Ｃ（Ｏ）、－ＯＡｃ）、１６０．０（１７－Ｃ）、１４６．７（９－Ｃ）、１３７．６（１４－Ｃ）、１３７．５（１４－Ｃ）、１３７．３（９－Ｃ）、１３１．４（１８－Ｃ）、１２９．９－１２６．３（Ｃ_ａｒｏｍ１０、１１、１２、１５、１９、２０、２１－Ｃ）、１１４．０（１６－Ｃ）、８７．２（１３－Ｃ）、７７．３（４－Ｃ）、７４．５（３－Ｃ）、７４．４（８－Ｃ）、６８．０（１－Ｃ）、６５．０（６－Ｃ）、５５．７（－ＯＭｅ）、５４．１（２－Ｃ）、３９．２（５－Ｃ）、３１．９（７－Ｃ）、２２．５（ＣＨ_３、－ＮＨＡｃ）、２１．１（ＣＨ_３、－ＯＡｃ）。

参考例：アセチル化なしのオリゴマーコンジュゲート－ＣＲＭ_１９７－ＭｅｎＡ ＤＰ６（ＯＡＣなし）及びＣＲＭ_１９７－ＭｅｎＡ ＤＰ８（ＯＡｃなし）の調製
出発オリゴマー（ＤＰ６及びＤＰ８）を真空乾燥させ、１：９ Ｈ_２Ｏ：ＤＭＳＯ溶液に溶かして最終アミノ基濃度を４０ｍｍｏｌ／ｍＬとし、アミノ基と比較して５倍モル過剰のトリエチルアミンの存在下で、１２倍モル過剰のアジピン酸ジ－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルリンカー（ＳＩＤＥＡ）と反応させた。反応物を緩やかに攪拌しながら室温で３時間維持した。活性化オリゴ糖は、４倍体積の酢酸エチルで沈殿させた後、同じ溶媒１ｍＬでペレットを１０回洗浄することにより精製した。最後に、ペレットを真空乾燥させ、導入されたＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステル基の含有量を決定した。

コンジュゲートは、活性エステル（ＡＥ）：タンパク質のモル比を４０：１として使用して、５０ｍＭ ＮａＨ_２ＰＯ_４ ｐＨ７で調製し、緩やかに攪拌しながら室温で一晩経過させた。コンジュゲートを、３０ｋＤａのカットオフを用い、緩衝液としてＰＢＳ ｐＨ７．２を用いて、タンジェンシャルフロー濾過（Ｖｉｖａｓｐｉｎ）によって精製した。コンジュゲートは、ＳＤＳ－ｐａｇｅで、総タンパク質含有量についてはマイクロＢＣＡ^２で、及び総糖含有量についてはＭＡＬＤＩ分析で特性決定した。

ドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリラミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－Ｐａｇｅ）。ＳＤＳ－Ｐａｇｅを、プレキャスト３～８％ポリアクリルアミドゲル（ＮｕＰＡＧＥ（登録商標） Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で実施した。電気泳動の実施は、各サンプルについてタンパク質５μｇをロードして、Ｔｒｉｓ－アセテートＳＤＳランニングバッファー（ＮｕＰＡＧＥ（登録商標） Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で、１５０Ｖの電圧の電気泳動チャンバーを使用して約４０分間行った。サンプルは、ＮｕＰＡＧＥ（登録商標） ＬＤＳサンプルバッファー３μＬを加えて調製した。電気泳動を行った後、ゲルをＨ_２Ｏで３回洗浄し、クマシーで染色した。

実施例２：式（ＩＩａ）による本発明のオリゴマーコンジュゲートの調製
上記のように製造したランダムＯ－アセチル化カルバ類縁体を、ジ－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルアジペートリリンカー（ＳＩＤＥＡ）で活性化し、オリゴ糖について得られた活性化率（％）は、ＤＰ６ＯＡｃについて５６％、ＤＰ７ＯＡｃについて７９％、及びＤＰ８ＯＡｃについて８４％と推算した。

活性化オリゴ糖（即ち、活性化されたＯ－アセチル化カルバ類縁体）を凍結乾燥させて、コンジュゲーション工程用に準備した。図４並びにＳＤＳ－ページ特性決定が示されている同じ図で報告の化学を適用することでコンジュゲートを得て、そのコンジュゲートのスミアを観察することができる。

表２に示すように、精製複合糖質（即ち、ランダムＯ－アセチル化カルバ類縁体を含むもの）について、ＭｉｃｒｏＢＣＡによるタンパク質含有量及びＨＰＡＥＣ－ＰＡＤによる糖含有量に関して特性決定した。

マウス免疫化並びにＥＬＩＳＡ及び血清殺菌アッセイ（ｒＳＢＡ及びｈＳＢＡ）による抗体応答のｉｎ ｖｉｔｒｏ分析
抗原製剤は無菌条件下で調製した。マウス（ＢＡＬＢ／ｃ）１０匹の群を、第１日、第１４日、及び第２８日に免疫した。第０日（免疫前）、第２７日（免疫後２）、第４２日（免疫後３）に採血を行った。ワクチンは、糖質投薬（ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｄｏｓｅ）で、そして糖質に関して２μｇ／マウス／用量で投与した。アジュバントＡｌＰＯ_４を０．１２ｍｇのＡｌ^３＋の用量で使用した。

カルバＭｅｎＡコンジュゲートに使用しワクチン製剤は次のとおりであった。
ＡｌＰＯ_４（２ｍｇ／ｍＬ ＮａＣｌを含む４．４３ｍｇ／ｍＬ）３２４．９６μＬを対象のコンジュゲートに加えた。ｐＨ７．２のＰＢＳ緩衝液を加えることにより、ＡｌＰＯ_４濃度１．２ｍｇ／ｍＬで容量を１．２ｍＬとした。最後に、溶液をＰＢＳで１：１（体積比）希釈して、ＡｌＰＯ_４最終濃度が０．６ｍｇ／ｍＬとなるように２．４ｍＬとした。製剤２００μＬ／マウスを注射した。この手順を、ストック溶液からのＭｅｎＡ－ＣＲＭ_１９７の製剤にも用いた。

血清のＥＬＩＳＡ。複合糖質によって誘発される抗体応答は、ＥＬＩＳＡによって測定されている。この分析では、免疫前血清を陰性対照として使用した。プレートに、ｐＨ８．２のＰＢＳ緩衝液中の５μｇ／ｍＬ多糖溶液を１００μＬ／ウェル加え、次に４℃で一晩インキュベートすることで、ＨＳＡ－ＤｅＯＡｃ（文献^２１に記載の方法に従って製造）又はＭｅｎＡ ＣＰＳでコーティングした。ＨＳＡ－ＤｅＯＡｃ ＭｅｎＡ ＣＰＳ、ＣＲＭ_１９７コンジュゲート及びＣＲＭ_１９７は、ｐＨ７．２ ＰＢＳ緩衝液でタンパク質濃度２μｇ／ｍＬでコーティングした。０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（Ｓｉｇｍａ）を含むＰＢＳ緩衝液（ＴＰＢＳ）で３回洗浄することにより、コーティング溶液をプレートから除去した。次に、３％ ＢＳＡ／ＴＰＢＳ溶液を１００μＬ／ウェル加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートすることにより、ブロッキング工程を行った。ＴＰＢＳで３回洗浄することにより、ブロッキング溶液をプレートから除去した。２００μＬ／ウェルの前希釈血清（免疫前陰性対照の場合は１：２５、基準血清の場合は１：２００～１：５００、試験血清の場合は１：２５から１：２００）をプレートの各列の最初のウェルに加え、他のウェルにはＴＰＢＳ １００μＬを分注した。次に、ウェルからウェルに血清溶液１００μＬを移すことにより、各列に沿って８連続２倍希釈を行った。一次抗体希釈後、プレートを３７℃で２時間インキュベートした。ＴＰＢＳで３回洗浄し、二次抗体アルカリホスファターゼコンジュゲート（抗マウスＩｇＧ１：１００００、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）のＴＰＢＳ溶液１００μＬ／ウェルを加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。ＴＰＢＳでさらに３回洗浄した後、０．５Ｍジエタノールアミン緩衝液ｐＨ９．６中の１ｍｇ／ｍＬのｐ－ＮＰＰ（Ｓｉｇｍａ）１００μＬ／ウェルを加えた。最後に、プレートを室温で３０分間インキュベートし、プレートリーダーＳｐｅｃｔｒａｍａｘ１９０を用いて４０５ｎｍで読み取りを行った。血清力価は、カットオフＯＤ＝１に相当する血清希釈液の逆数として表した。

各免疫化群は、単一マウス力価の９５％ＣＩでの幾何平均（ＧＭＴ）として表されている。統計解析及びグラフ解析を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェアによって行った。

免疫学的評価
ランダムアセチル化がある場合とない場合のコンジュゲートカルバＤＰ６及びＤＰ８類縁体の免疫原性を調べるため、ＢＡＬＢ／ｃ雌マウス８匹の群をネオ複合糖質で免疫した。コンジュゲートしたサイズを合わせたＭｅｎＡ多糖を対照として使用した。マウスを、２週間間隔で３回の皮下（ｓ．ｃ．）投与（糖質ベースで２μｇ）で免疫した。抗ＭｅｎＡ ＣＰＳ応答を評価したところ、データは、糖鎖長６（ｎ＝６）及び８（ｎ＝８）の両方で、Ｏ－アセチル化なしのカルバＭｅｎＡ糖抗原で得られたコンジュゲートについて応答を示さなかった。逆に、オリゴマーのランダムＯ－アセチル化後に得られたカルバＭｅｎＡコンジュゲートは、非アセチル化ワクチンと比較して、天然ＭｅｎＡ ＣＰＳに対して有意に高い応答を誘発した（表３及び図５）。比較すると、Ｏ－アセチル化ワクチンによって誘発された応答は、調べたワクチン間でより良い応答を与えたＤＰ８では、ベンチマークのＭｅｎＡ－ＣＲＭ_１９７コンジュゲートより２倍低いだけであった。

カルバＭｅｎＡコンジュゲートに使用されたワクチン製剤は次のとおりであった。
ＡｌＰＯ_４（２ｍｇ／ｍＬ ＮａＣｌを含む４．４３ｍｇ／ｍＬ）３２４．９６μＬを対象のコンジュゲートに加えた。ｐＨ７．２のＰＢＳ緩衝液を添加することにより、ＡｌＰＯ_４濃度１．２ｍｇ／ｍＬで容量を１．２ｍＬとした。最後に、溶液をＰＢＳで１：１（体積比）希釈し、ＡｌＰＯ_４最終濃度が０．６ｍｇ／ｍＬになるように２．４ｍＬとした。製剤２００μＬ／マウスを注射した。この手順を、ストック溶液からのＭｅｎＡ－ＣＲＭ_１９７の製剤にも用いた。

２回及び３回の投与後のＥＬＩＳＡ応答を表３に報告する。表３から分かるように、群２及び３が、本発明によるものである。群２については、ｎ＝６及び上記のようなランダムアセチル化を有するオリゴマーコンジュゲートを用いた。群３については、ｎ＝８及び上記のようなランダムアセチル化を有するオリゴマーコンジュゲートを用いた。群２及び３のコンジュゲートのアセチル化レベルは約７５％であった。

図５ａ及び５ｂは、２回及び３回の投与後のＥＬＩＳＡ力価を提供している。ｐ値は、ベンチマーク天然ＭｅｎＡ－ＣＲＭ_１９７と他の群との比較を指すものである。

本発明の上記のランダムＯ－アセチル化カルバＭｅｎＡ ＤＰ８類縁体を、Ｏ－アセチル化率が約７０％である位置３のみ選択的にＯ－アセチル化されたカルバＭｅｎＡ ＤＰ８と、そして陽性対照としてのＭｅｎＡワクチンと比較することにより、下記に記載の方法に従って、第２の免疫学的試験を行い、これらは全てＣＲＭ_１９７にコンジュゲートしていた。

Ｂａｌｂ／Ｃマウス１０匹の３群を、上記のコンジュゲートで免疫した。マウスは、２週間間隔で３回の皮下（ｓ．ｃ．）投与（糖質ベースで２μｇ、製剤２００μＬ／マウス）で免疫した。カルバＭｅｎＡコンジュゲートに使用したワクチン製剤は、第１の免疫学的研究について上記で報告のものと同一であった。抗ＭｅｎＡ ＣＰＳ応答を評価し、データは、３Ｏ－アセチル化カルバＭｅｎＡ ＤＰ８の３回目の免疫化後の総ＩｇＧ応答が、ＭｅｎＡワクチンベンチマークの約１０分の１であることを示した。逆に、本発明のランダムＯ－アセチル化カルバＭｅｎＡ ＤＰ８コンジュゲートは、３Ｏ－アセチル化コンジュゲートと比較して、天然ＭｅｎＡ ＣＰＳに対して有意に高い応答を誘発し、ＭｅｎＡワクチンベンチマークの応答と実質的に同等であった（図６）。

ｉｎ ｖｉｔｒｏ殺菌アッセイ
ｉｎ ｖｉｔｒｏ殺菌アッセイで髄膜炎菌の補体介在溶解を測定することによって、ワクチン免疫化によって誘発された機能性抗体を分析した。

市販のロットの乳仔ウサギ補体を、ｒＳＢＡの活性補体の供給源として使用し、インフォームドコンセント下でボランティアドナーから得たヒト血漿をｈＳＢＡの補体供給源として用いた。即ち、髄膜炎菌株をチョコレート寒天プレート上で３７℃、５％ＣＯ_２で一晩増殖させた。コロニーを、０．２５％グルコースを含むＭｕｅｌｌｅｒ－Ｈｉｎｔｏｎブロスに接種して、ＯＤ６００を０．０５～０．０８に到達させ、振盪しながら３７℃でインキュベートした。細菌懸濁液のＯＤ６００が０．２５～０．２７に達したとき、細菌をアッセイ緩衝液（１％ＢＳＡ及び０．１％グルコースを含むＤＰＢＳ）で作業希釈率（約１０^４ＣＦＵ／ｍＬ）で希釈した。各ウェルにおける総体積は５０μＬで、試験血清の連続２倍希釈液が２５μＬ、作業希釈率での細菌が１２．５μＬ及び補体源が１２．５μＬであった。試験血清をプールし、５６℃で３０分間熱不活化した。陰性対照は、試験血清を含まない補体血清及び試験血清を含む補体血清並びに熱不活化補体と、別にインキュベートした細菌を含めた。乳仔ウサギ補体の添加直後に、陰性対照を、傾斜法（時間０）を使用してＭｕｅｌｌｅｒ－Ｈｉｎｔｏｎ寒天プレートに蒔いた。マイクロタイタープレートを３７℃で１時間インキュベートし、次に各サンプルをミューラーヒントン寒天プレートに二連でスポット添加し、対照は傾斜法を用いて蒔いた（時間１）。寒天プレートを３７℃で一晩インキュベートし、時間０及び時間１に相当するコロニー（生残細菌）をカウントした。血清殺菌力価は、反応混合物中で細菌を６０分間インキュベートした後に、時間０での対照ＣＦＵ／ｍＬと比較して、コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍＬが５０％低下する血清希釈液として定義した。典型的には、補体存在下で試験血清なしでインキュベートした細菌（陰性対照）は、６０分間のインキュベーション期間中に、ＣＦＵ／ｍＬにおいて１５０～２００％の増加を示した。髄膜炎菌血清型Ａの基準株はＦ８２３８であった。

図７及び表４に報告されている結果は、抗ＭｅｎＡ抗体がＭｅｎＡ株に対して殺菌性である能力を示している。特に、天然ＭｅｎＡ－ＣＲＭ_１９７ワクチン及びランダムＯ－アセチル化合成カルバ類縁体で得られたワクチン（群２及び群３）は、ヒト補体で試験した場合も、有意な殺菌活性を維持することができた。図７は、ウサギ（ｒＳＢＡ）及びヒト（ｈＳＢＡ）の補体で得られた２回投与及び３回投与後のＳＢＡ力価を描いたものである。

図８は、３回の投与後、本発明の選択的３－Ｏ－アセチル化カルバＭｅｎＡ ＤＰ８及びランダムアセチル化カルバＭｅｎＡ ＤＰ８の前記ＣＲＭ_１９７コンジュゲートによって誘発されたヒト補体介在血清殺菌力価を示している。依然として、ＭｅｎＡ－ＣＲＭ_１９７ワクチンが陽性対照であった。

ランダムＯ－アセチル化カルバＭｅｎＡ－ＣＲＭ_１９７コンジュゲートによって誘発されたＳＢＡ力価は、３回の投与後にＭｅｎＡワクチンベンチマークと統計的に同等であったが、３Ｏ－アセチル化カルバＭｅｎＡ－ＣＲＭ_１９７コンジュゲートは、ワクチンベンチマークと比較して血清中ではるかに低いＳＢＡ力価を誘発し、それらはいずれも、乳仔ウサギ補体とヒト補体の両方で測定した。

統計法
ＥＬＩＳＡから取得したデータについてはノンパラメトリックｔ検定を行い、マン・ホイットニーは、二つの対象群（ＣＲＭ_１９７－ＭｅｎＡ ａｖＤＰ１５とＣＲＭ_１９７－ＭｅｎＡ ＤＰ６ＯＡｃ又はＤＰ８ＯＡｃ）間のランクを比較するＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを適用して実行した。ＥＬＩＳＡデータは、ＣＩ９５％の幾何平均として報告した。さらに、固定効果として、群（４と５を除く全て）、時間及び群／時間相互作用などのｌｏｇ_１０抗体力価に分散分析（ＡＮＯＶＡ）モデルを適合させた。グループ間で同一の分散が想定されなかったことから、異種分散モデルを使用した。各エンドポイントについて、このモデルを使用して、群の幾何平均とそれの９５％ＣＩ、並びに幾何平均比（Ｏ－アセチル化製剤対ベンチマーク）及び９５％ＣＩを推算した。これとは異なり、ＳＢＡデータの場合、各時点（血清のプール）で各群について単一の観察があることから、グラフ分析のみを行った。

最終コンジュゲート中の加水分解ＭｅｎＡ及びカルバＭｅｎＡオリゴマーの定量のためのプロトコール
ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤを用いて、本発明のＭｅｎＡ及びカルバＭｅｎＡコンジュゲートから経時的に放出されるモノマーの量を定量した。図９に報告されている力価は、サンプルを最終濃度６ＭのＨＣｌで１１０℃で２時間にわたり乾燥機中で加水分解することによって得た。インキュベーション後、サンプルをＳｐｅｅｄｖａｃシステムで乾燥させ、水に再溶解し、０．４５μｍで濾過した。定量は、ＮＭＲで定量され、サンプルとして処理されたカルバＭｅｎＡ ＤＰ７で０．５～５．０μｇ／ｍＬの範囲で作成された標準曲線を用いることで行った。分析は、ガード付きのＣａｒｂｏＰａｃ ＰＡ１カラムを備えたＩＣＳ５０００システム（Ｄｉｏｎｅｘ－Ｔｈｅｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で実行した。溶離は、１．０ｍＬ／分で１００ｍＭ水酸化ナトリウム存在下での酢酸ナトリウム勾配を用いて行い、炭水化物についての四倍波形を用いることでパルス積算電流測定でピークを検出した。 結果は、Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎ（商標名）７．２クロマトグラフィーデータシステム（ＣＤＳ）ソフトウェアで作成した。
結論
得られたデータに基づいて、本発明のカルバＭｅｎＡオリゴマーは、より安定なバージョンのＭｅｎＡワクチンを開発するのに使用可能であり、オリゴマー長と組み合わせたＯＡｃ部分が、ＭｅｎＡ株に対する機能的免疫応答を誘発する上での鍵であると結論付けることができる。

Claims (15)

1. 式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）のオリゴマーコンジュゲート抗原。
   ［式中、
   ｎは≧６であり；
   ＲはＨ又は－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ″） _２ であり、Ｒ″はＨ又は薬学的に許容されるリン酸対イオンであり；
   Ｒ′はＨ又は薬学的に許容されるリン酸対イオンであり；
   Ｒ ^ｘ はＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ _３ であり、各繰り返し単位において同一であっても異なっていても良く；
   Ｒ ^ｙ はＨ又は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ _３ であり、各繰り返し単位において同一であっても異なっていても良く；
   Ｒ ^ｘ 及びＲ ^ｙ の両方が、オリゴマーの少なくとも一つの同じ繰り返し単位において－Ｃ（Ｏ）ＣＨ _３ であり、総合すると、オリゴマー中のＲ ^ｘ 及びＲ ^ｙ の約５０～９０％が－Ｃ（Ｏ）ＣＨ _３ であり；
   Ａｚは、－ＮＨ（ＣＯ）Ｒ ^１ 、－Ｎ（Ｒ ^１ ） _２ 及び－Ｎ _３ からなる群から選択されるアザ置換基であり、Ｒ ^１ は、Ｈ、直鎖又は分岐のＣ _１ －Ｃ _６ －アルキル及び直鎖又は分岐のＣ _１ －Ｃ _６ －ハロアルキルからなる群から独立に選択され；
   Ｚはリンカー又は結合であり、
   Ｚがリンカーの場合は、Ｚは下記式を有するリンカーである：
   ［式中、
   ^＊は接続箇所を表し、
   ｐは独立に１～１０から選択され；
   Ｘは、－Ｏ－、－Ｓ－及び－ＮＨ－から選択される］；又は
   Ｚは下記式を有するリンカーであり：
   ［式中、ｍは独立に１～１０から選択される。］、
   Ｐは、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ＣＲＭ_１９７、大腸菌ＳＴ及び緑膿菌外毒素（ｒＥＰＡ）から選択される不活化細菌毒素であるか、Ｐは、ポリ（リジン：グルタミン酸）などのポリアミノ酸であるか、Ｐは、Ｂ型肝炎ウイルスコアタンパク質又はＳＰＲ９６－２０２１、又は髄膜炎菌血清型Ｂ抗原ｆＨｂｐ－２３１である。］
2. 式（ＩＩａ）によって定義される、請求項１に記載のオリゴマーコンジュゲート抗原。
3. ｎが８である、請求項１又は請求項２に記載のオリゴマーコンジュゲート抗原。
4. ｎが８～１５である、請求項１又は請求項２に記載のオリゴマーコンジュゲート抗原。
5. Ａｚが－ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ_３である、請求項１～４のいずれか１項に記載のオリゴマーコンジュゲート抗原。
6. Ｒ^ｘ及びＲ^ｙの両方が、前記オリゴマーの繰り返し単位の４０～５０％において、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３である、請求項１～５のいずれか１項に記載のオリゴマーコンジュゲート抗原。
7. 前記オリゴマーの残りの繰り返し単位の１０～３０％において、Ｒ^ｘ又はＲ^ｙのうちの一方が－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、前記オリゴマーにおける残りの繰り返し単位がＲ^ｘ＝Ｒ^ｙ＝Ｈを有する、請求項６に記載のオリゴマーコンジュゲート抗原。
8. 前記ＰがＣＲＭ_１９７である、請求項１に記載のコンジュゲートコンジュゲート抗原。
9. 下記構造を有する、請求項１～８のいずれか１項に記載のオリゴマーコンジュゲート抗原。
   ［式中、ｎ、Ｒ、Ｒ^ｘ及びＲ^ｙは、請求項１～７のいずれか１項で定義される。］
10. （ａ）請求項１～９のいずれか１項に記載のオリゴマーコンジュゲート抗原、及び（ｂ）少なくとも一つの薬学的に許容される賦形剤を含む、免疫原性組成物。
11. アジュバントをさらに含む、請求項９に記載の免疫原性組成物。
12. 髄膜炎菌血清型Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ及び任意にＡのうちの一つから誘導される少なくとも一つの抗原をさらに含む、請求項１０又は１１に記載の免疫原性組成物。
13. 請求項１～９のいずれか１項に記載のオリゴマーコンジュゲート抗原、又は請求項１０～１２のいずれか１項に記載の免疫原性組成物を含むワクチン。
14. 髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹの治療又は予防に使用するための、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、又は請求項１３に記載のワクチン。
15. 髄膜炎Ａ、Ｃ、Ｗ１３５又はＹに対する免疫応答を誘発する際に使用するための、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、又は請求項１３に記載のワクチン。