JP7788559B2

JP7788559B2 - 含窒素飽和複素環誘導体

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Publication number: JP7788559B2
Application number: JP2024537271A
Authority: JP
Inventors: 仁渡辺; 柊哉山田; 克志北原; 真理子小林
Original assignee: Sumitomo Dainippon Pharma Co Ltd; Sumitomo Pharma Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Pharma Co Ltd
Priority date: 2022-07-29
Filing date: 2023-07-28
Publication date: 2025-12-18
Anticipated expiration: 2043-07-28
Also published as: KR20250043463A; MX2025001173A; EP4563574A1; JP2026041923A; US20250051305A1; JPWO2024024962A1; CN119630649A; US12398125B2; US12172987B2; TW202415651A; US20240124429A1; WO2024024962A1; AU2023315096A1; CA3260890A1; US20250382282A1

Description

本発明は、脳内タンパク質の異常凝集体の蓄積抑制または減少作用を有する含窒素飽和複素環誘導体またはその製薬学的に許容される塩、並びに該誘導体を有効成分とする脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患の治療剤および／または予防剤に関する。また、本発明は、神経スフェロイドによるパーキンソン病病態の再現方法およびそれを用いたα－シヌクレイン凝集体量の評価方法を提供することにある。

アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症に代表される神経変性疾患では、患者脳内に異常凝集したタンパク質が形成され、当該凝集体が神経毒性を示し、発症、病態進行の原因となると考えられている。

疾患により凝集体の構成タンパク質は異なり、パーキンソン病の原因となる凝集体の主要構成成分としてはα－シヌクレインが報告されている。異常凝集したα－シヌクレインが神経毒性を示し、さらに凝集したα－シヌクレインは神経細胞間を伝播することが報告されている。

パーキンソン病の治療薬としては、対処療法であるドパミン前駆物質であるレボドパの投与があるが、現在のところ根本的な治療法は確立されていない。近年パーキンソン病の疾患修飾薬の開発が精力的に行われているが、現在のところ臨床試験が行われている剤で強力にα－シヌクレイン凝集体を蓄積抑制または減少させる剤は報告されていない。

α－シヌクレイン凝集体はパーキンソン病を含むレビー小体病（レビー小体型認知症、多系統萎縮症、ゴーシェ病、乳児神経軸索ジストロフィーなど）の原因の背景にあると考えられている。従って、α－シヌクレイン凝集体を蓄積抑制または減少させる薬剤はこれらの疾患に対して病態改善効果を発揮することが期待される。

これまで、神経細胞内において内在的に生ずるα－シヌクレイン凝集体を再現したin vitro評価系は報告されておらず、α－シヌクレイン病態に対する評価系については、in vitroで合成されたα－シヌクレインオリゴマーの添加によるリン酸化α－シヌクレイン量の増加量で示されることが多く、α－シヌクレイン凝集体の蓄積抑制、または蓄積したα－シヌクレイン凝集体の減少作用について評価することは不可能であった。

これまで、α－シヌクレイン凝集体形成阻害作用をもつ薬剤として、NPT200-11（Neuropore社）やAnle138b（MODAG社）などが報告されているが、それらは、試験管内で人工的にα－シヌクレインを凝集させる際の凝集形成能の阻害作用で評価されてきた（特許文献１、２）。

また、これまでに、（４ａＲ，８ａＳ）－ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン誘導体である（４ａＲ，８ａＳ）－６－｛４－［５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－カルボニル｝ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オンや（４ａＲ，８ａＳ）－６－［４－（５－エチルピリジン－３－イル）ピペリジン－１－カルボニル］ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オンが、モノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）阻害作用を有し、神経炎症、神経変性疾患等に有用であることが報告されている（特許文献３）。また、（アゼチジン－１－イル）（フェニル）メタノン誘導体である２－クロロ－３－｛３－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］アゼチジン－１－カルボニル｝－４－［（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）オキシ］ベンゾニトリルや２－メトキシ－３－｛３－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］アゼチジン－１－カルボニル｝－４－［（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）オキシ］ベンゾニトリルが、グリシントランスポーター１（ＧｌｙＴ１）阻害作用を有し、神経変性疾患等に有用であることが報告されている（特許文献４）。
しかし、これらの化合物は、いずれも本発明の含窒素飽和複素環誘導体とは異なるものである。そして、これら文献には本発明の含窒素飽和複素環誘導体に関する開示はなく、また何ら示唆もされていない。また、脳内タンパク質の異常凝集体の蓄積抑制または減少作用に関して、何ら示唆されていない。

国際公開第２０１１／０８４６４２号公報国際公開第２０１０／０００３７２号公報国際公開第２０１９／１８０１８５号公報国際公開第２０１６／０７３４２０号公報

本発明の課題は、脳内タンパク質の異常凝集体の蓄積抑制または減少作用により特徴づけられる中枢神経系疾患の予防若しくは治療に使用するための化合物またはその製薬学的に許容される塩、当該化合物を含む組成物等を提供することにある。また、神経スフェロイドによるパーキンソン病病態の再現方法およびそれを用いたα－シヌクレイン凝集体量の評価方法を提供することにある。

本発明者らは、鋭意研究した結果、下記式（１）で表される化合物またはその製薬学的に許容される塩（以下必要に応じ「本発明化合物」と略称することがある。）が、脳内タンパク質の異常凝集体の蓄積抑制または減少作用を有することを見出し、また、神経スフェロイドによるパーキンソン病病態の再現方法およびそれを用いたα－シヌクレイン凝集体量の評価方法を見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、以下のとおりである。

［項１］
式（１）：
［式中、
Ｘは、酸素またはＮＲ^７を表し、
Ｒ^７は、水素、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、またはシクロプロピルを表し、
Ｙは、ＣＨまたは窒素を表し、
ｍは、０、１または２を表し、
ｎは、０または１を表し、
ｒは、０、１、２、３または４を表し、
ｓは、０、１または２を表し、
（ただし、ｓ＝０のとき、ＹはＣＨ、かつｒは１、２、３、または４であり、
ｓ＝１のとき、ＹはＣＨ、かつｒは０、１、２、または３であり、
ｓ＝２のとき、ｒは１または２である）
Ｒ^１は、水素、ハロゲン、メチルまたはヒドロキシを表し、
Ｒ^２は、水素、ハロゲン、メチルまたはヒドロキシを表し、
Ｒ^３は、水素、またはＣ_１－３アルキルを表し、
Ｒ^４は、水素、またはＣ_１－３アルキルを表し、
ここにおいて、Ｒ^３とＲ^４は一緒になって、架橋したメチレンまたはエチレンを形成していてもよく、
Ｒ^５は、ハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルコキシを表し、
Ｒ^６は、水素、ハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルコキシを表し、
Ｈｙは、ピリジン環、ピリダジン環、ピリミジン環、またはピラジン環を表し、
ここにおいて、
（Ｉ）Ｒ^５およびＲ^６を含むＨｙが５－フルオロピリジン－２－イルであり、かつｍおよびｎが１であるとき、ｒは０かつｓは１であり、
（ＩＩ）Ｒ^５およびＲ^６を含むＨｙが６－メトキシピリジン－３－イルであり、かつｍおよびｎが１であり、かつＸが酸素であるとき、ｒは０かつｓは１であり、
（ＩＩＩ）Ｒ^５およびＲ^６を含むＨｙが５－メトキシピリジン－２－イルであり、かつｍおよびｎが１であり、かつＸがＮＲ^７であるとき、ｒは０かつｓは１であり、
（ＩＶ）Ｒ^５がメチルであり、かつＲ^６が水素であるとき、ｒは０かつｓは１であり、
ただし、
（Ｉ’）Ｒ^５およびＲ^６を含むＨｙは４，６－ジメチルピリミジン－２－イル、または５－ブロモピリミジン－２－イルでなく、
（ＩＩ’）Ｒ^５およびＲ^６を含むＨｙが５－クロロピリジン－２－イルであるとき、ｍおよびｎは１であり、かつＲ^１およびＲ^２は共に水素ではなく、
ただし、以下の化合物
（ＩＩＩ’）（１－イソプロピルピペリジン－４－イル）｛３－（２－メトキシピリジン－３－イル）ピロリジン－１－イル｝メタノン、および
（ＩＶ’）（３－エトキシオキセタン－３－イル）［３－｛４－（トリフルオロメチル）ピリミジン－２－イル｝ピロリジン－１－イル］メタノン、
を除く］
で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項２］
ｍが、１であり、
ｎが、１である、
項１に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項３］
Ｒ^１およびＲ^２が、それぞれ独立して、水素、メチル、またはフッ素である、
項１又は２に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項４］
Ｒ^１およびＲ^２が、水素である、
項１又は２に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項５］
Ｘが、酸素、ＮＨまたはＮＭｅである、
項１～４のいずれか一項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項６］
Ｒ^３が、水素である、
項１～５のいずれか一項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項７］
Ｒ^４が、メチルまたはエチルである、
項１～６のいずれか一項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項８］
Ｙが、ＣＨである、
項１～７のいずれか一項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項９］
ｓが１である、
項１～８のいずれか一項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項１０］
ｒが０、およびｓが１である、
項１～９のいずれか一項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項１１］
式（２）：
［式中、
Ｘは、酸素、ＮＨまたはＮＭｅを表し、
Ｒ^４は、メチルまたはエチルを表し、
Ｒ^５は、ハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルコキシを表し、
Ｒ^６は、水素、ハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルコキシを表し、
Ｈｙは、ピリジン環、ピリダジン環、ピリミジン環、またはピラジン環を表し、
ただし、
Ｒ^５およびＲ^６を含むＨｙは、５－クロロピリジン－２－イルではない］
で表される、項１に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項１２］
Ｈｙが、ピリジン環である、
項１～１１のいずれか一項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項１３］
Ｒ^５が、トリフルオロメチルである、
項１～１２のいずれか一項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項１４］
Ｈｙが、ピリジン－３－イルである、
項１～１３のいずれか一項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項１５］
Ｘが、酸素である、
項１～１４のいずれか一項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項１６］
Ｒ^４が、メチルである、
項１～１５のいずれか一項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項１７］
Ｘが、ＮＨまたはＮＭｅである、
項１～１４のいずれか一項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項１８］
Ｘが、ＮＭｅである、
項１～１４のいずれか一項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩。

［項１９］
以下の化合物群から選択される、項１に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩：
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例１）、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例２）、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［４－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例３）、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４）、
｛４－［５－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝（３－メチルオキセタン－３－イル）メタノン（実施例２９）、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［４－メチル－６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例３１）、
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４１）、
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４２）、
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［４－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４３）、および
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４４）。

［項２０］
以下の化合物群から選択される、項１に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩：
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例１）、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例２）、
｛４－［５－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝（３－メチルオキセタン－３－イル）メタノン（実施例２９）、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［４－メチル－６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例３１）、
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４２）、および
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４４）。

［項２１］
項１～２０のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。

［項２２］
項１～２０のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患の治療剤または予防剤。

［項２３］
脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患が、タウ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、またはポリグルタミンが関与する中枢神経系疾患である、項２２に記載の治療剤または予防剤。

［項２４］
脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患が、アルツハイマー病、前頭側頭葉型変性症、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、ゴーシェ病、乳児神経軸索ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、または脊髄小脳失調症である、項２２に記載の治療剤または予防剤。

［項２５］
脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患が、α－シヌクレインが関与する中枢神経系疾患である、項２２に記載の治療剤または予防剤。

［項２６］
脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患が、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、ゴーシェ病、または乳児神経軸索ジストロフィーである、項２２に記載の治療剤または予防剤。

［項２７］
治療が必要な患者に、治療上の有効量の項１～２０のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩を投与することを含む、脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患を治療または予防するための方法。

［項２８］
脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患の治療剤または予防剤を製造するための、項１～２０のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩の使用。

［項２９］
脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患の治療または予防に使用するための、項１～２０のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩。

［項３０］
項１～２０のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩と、L-dopa、ドパミンアゴニスト、MAO-B阻害剤、カテコール-O-メチル転移酵素（COMT）阻害薬、αSyn抗体およびそれらの製薬学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも一種の薬剤とを組み合わせてなる、脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患の治療剤または予防剤。

［項３１］
L-dopa、ドパミンアゴニスト、MAO-B阻害剤、カテコール-O-メチル転移酵素（COMT）阻害薬、αSyn抗体およびそれらの製薬学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも一種の薬剤と併用して脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患を治療または予防するための、項１～２０のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。

［項３２］
式（１）：
［式中、
Ｘは、酸素またはＮＲ^７を表し、
Ｒ^７は、水素、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、またはシクロプロピルを表し、
Ｙは、ＣＨまたは窒素を表し、
ｍは、０、１または２を表し、
ｎは、０または１を表し、
ｒは、０、１、２、３または４を表し、
ｓは、０、１または２を表し、
（ただし、ｓ＝０のとき、ＹはＣＨ、かつｒは１、２、３、または４であり、
ｓ＝１のとき、ＹはＣＨ、かつｒは０、１、２、または３であり、
ｓ＝２のとき、ｒは１または２である）
Ｒ^１は、水素、ハロゲン、メチルまたはヒドロキシを表し、
Ｒ^２は、水素、ハロゲン、メチルまたはヒドロキシを表し、
Ｒ^３は、水素、またはＣ_１－３アルキルを表し、
Ｒ^４は、水素、またはＣ_１－３アルキルを表し、
ここにおいて、Ｒ^３とＲ^４は一緒になって、架橋したメチレンまたはエチレンを形成していてもよく、
Ｒ^５は、水素、ハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルコキシを表し、
Ｒ^６は、水素、ハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルコキシを表し、
Ｈｙは、ピリジン環、ピリダジン環、ピリミジン環、またはピラジン環を表す］
で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患の治療剤又は予防剤。

［項３３］
ｍが、１であり、
ｎが、１である、
項３２に記載の治療剤又は予防剤。

［項３４］
Ｒ^１およびＲ^２が、それぞれ独立して、水素、メチル、またはフッ素である、
項３２又は３３に記載の治療剤又は予防剤。

［項３５］
Ｒ^１およびＲ^２が、水素である、
項３２又は３３に記載の治療剤又は予防剤。

［項３６］
Ｘが、酸素、ＮＨまたはＮＭｅである、
項３２～３５のいずれか一項に記載の治療剤又は予防剤。

［項３７］
Ｒ^３が、水素である、
項３２～３６のいずれか一項に記載の治療剤又は予防剤。

［項３８］
Ｒ^４が、メチルまたはエチルである、
項３２～３７のいずれか一項に記載の治療剤又は予防剤。

［項３９］
Ｙが、ＣＨである、
項３２～３８のいずれか一項に記載の治療剤又は予防剤。

［項４０］
ｓが１である、
項３２～３９のいずれか一項に記載の治療剤又は予防剤。

［項４１］
ｒが０、およびｓが１である、
項３２～４０のいずれか一項に記載の治療剤又は予防剤。

［項４２］
式（２）：
［式中、
Ｘは、酸素、ＮＨまたはＮＭｅを表し、
Ｒ^４は、メチルまたはエチルを表し、
Ｒ^５は、水素、ハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルコキシを表し、
Ｒ^６は、水素、ハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルコキシを表し、
Ｈｙは、ピリジン環、ピリダジン環、ピリミジン環、またはピラジン環を表す］
で表される、項３２に記載の治療剤又は予防剤。

［項４３］
Ｈｙが、ピリジン環である、
項３２～４２のいずれか一項に記載の治療剤又は予防剤。

［項４４］
Ｒ^５が、トリフルオロメチルである、
項３２～４３のいずれか一項に記載の治療剤又は予防剤。

［項４５］
Ｈｙが、ピリジン－３－イルである、
項３２～４４のいずれか一項に記載の治療剤又は予防剤。

［項４６］
Ｘが、酸素である、
項３２～４５のいずれか一項に記載の治療剤又は予防剤。

［項４７］
Ｒ^４が、メチルである、
項３２～４６のいずれか一項に記載の治療剤又は予防剤。

［項４８］
Ｘが、ＮＨまたはＮＭｅである、
項３２～４５のいずれか一項に記載の治療剤又は予防剤。

［項４９］
Ｘが、ＮＭｅである、
項３２～４５のいずれか一項に記載の治療剤又は予防剤。

［項５０］
脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患が、タウ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、またはポリグルタミンが関与する中枢神経系疾患である、項３２～４９のいずれか一項に記載の治療剤または予防剤。

［項５１］
脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患が、アルツハイマー病、前頭側頭葉型変性症、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、ゴーシェ病、乳児神経軸索ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、または脊髄小脳失調症である、項３２～４９のいずれか一項に記載の治療剤または予防剤。

［項５２］
脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患が、α－シヌクレインが関与する中枢神経系疾患である、項３２～４９のいずれか一項に記載の治療剤または予防剤。

［項５３］
脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患が、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、ゴーシェ病、または乳児神経軸索ジストロフィーである、項３２～４９のいずれか一項に記載の治療剤または予防剤。

［項５４］
治療が必要な患者に、治療上の有効量の項３２～４９のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩を投与することを含む、脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患を治療または予防するための方法。

［項５５］
脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患の治療剤または予防剤を製造するための、項３２～４９のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩の使用。

［項５６］
脳内のタンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患の治療または予防に使用するための、項３２～４９のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩。

［項５７］
項３２～４９のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩と、L-dopa、ドパミンアゴニスト、MAO-B阻害剤、カテコール-O-メチル転移酵素（COMT）阻害薬、αSyn抗体およびそれらの製薬学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも一種の薬剤とを組み合わせてなる、脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患の治療剤または予防剤。

［項５８］
L-dopa、ドパミンアゴニスト、MAO-B阻害剤、カテコール-O-メチル転移酵素（COMT）阻害薬、αSyn抗体およびそれらの製薬学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも一種の薬剤と併用して脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患を治療または予防するための、項３２～４９のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。

［項５９］
工程（Ｉ）を含む、シヌクレオパチー関連遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞を用いた三次元培養での神経スフェロイドによるパーキンソン病病態の再現方法；
（Ｉ）神経スフェロイドからα－シヌクレイン凝集体量を測定する工程。

［項６０］
工程（Ｉ）を含む、シヌクレオパチー関連遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞を用いた三次元培養での神経スフェロイドによるパーキンソン病病態におけるα－シヌクレイン凝集体の蓄積抑制、また減少作用をもつ薬剤を評価する方法；
（Ｉ）神経スフェロイドからα－シヌクレイン凝集体量を測定する工程。

［項６１］
式（３）：
［式中、
Ｒ^４は、メチルまたはエチルを表し、
Ｒ^５は、トリフルオロメチルを表し、
Ｒ^６は、水素、ハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルコキシを表し、
Ｈｙは、ピリジン－３－イルを表す。］
で表される化合物またはその製薬学的に許容される塩の製造方法であって、
下記の工程１を含む製造方法；
(工程１)式（４）：
［式中、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＨｙは、上記と同じ基を表す。]
で表される化合物またはその塩と式（５）:
［式中、Ｒ^４は、上記と同じ基を表し、
Ａは、ＯＨまたはハロゲンを表す。］
で表される化合物またはその塩を縮合して、式（３）で表される化合物またはその製薬的に許容される塩を製造する工程。

［項６２］
式（３）：
［式中、
Ｒ^４は、メチルまたはエチルを表し、
Ｒ^５は、トリフルオロメチルを表し、
Ｒ^６は、水素、ハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルコキシを表し、
Ｈｙは、ピリジン－３－イルを表す。］
で表される化合物またはその製薬学的に許容される塩の製造方法であって、
下記の工程１を含む製造方法；
(工程１)式（４）：
［式中、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＨｙは、上記と同じ基を表す。]
で表される化合物またはその塩と式（５）：
［式中、Ｒ^４は、上記と同じ基を表し、
Ａは、ＯＨを表す。］
で表される化合物またはその塩を、２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスホリナン－２，４，６－トリオキシドおよびトリエチルアミン存在下で縮合して、式（３）で表される化合物またはその製薬的に許容される塩を製造する工程。

［項６３］
式（６）：
［式中、
Ｒ^４は、メチルを表し、
Ｒ^５は、トリフルオロメチルを表し、
Ｒ^６は、水素、ハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルコキシを表し、
Ｈｙは、ピリジン－３－イルを表す。］
で表される化合物またはその製薬学的に許容される塩の製造方法であって、
下記の工程１～３を含む製造方法；
(工程１) 式（４）：
［式中、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＨｙは、上記と同じ基を表す。]
で表される化合物またはその塩と式（７）：
［式中、Ｒ^４は、上記と同じ基を表し、
Ａは、ＯＨまたはハロゲンを表し、
Ｐｒｏは、アミノ基の保護基を表す。］
で表される化合物またはその塩を縮合して、式（８）：
［式中、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｈｙ、およびＰｒｏは、上記と同じ基を表す。]
で表される化合物またはその塩を製造する工程、
(工程２) 式（８）で表される化合物またはその塩のアミノ基の保護基を脱保護して、式（９）：
［式中、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＨｙは、上記と同じ基を表す。]
で表される化合物またはその塩を製造する工程、
(工程３) 式（９）で表される化合物またはその塩を、還元剤存在下でホルムアルデヒド又はその等価体と反応して、式（６）で表される化合物またはその製薬的に許容される塩を製造する工程。

［項６４］
式（６）：
［式中、
Ｒ^４は、メチルを表し、
Ｒ^５は、トリフルオロメチルを表し、
Ｒ^６は、水素、ハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキル、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルコキシを表し、
Ｈｙは、ピリジン－３－イルを表す。］
で表される化合物またはその製薬学的に許容される塩の製造方法であって、
下記の工程１～３を含む製造方法；
(工程１) 式（４）：
［式中、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＨｙは、上記と同じ基を表す。]
で表される化合物またはその塩と式（７）：
［式中、Ｒ^４は、上記と同じ基を表し、
Ｐｒｏはｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルを表し、
Ａは、ＯＨを表す。］
で表される化合物またはその塩を、２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスホリナン－２，４，６－トリオキシドおよびトリエチルアミン存在下で縮合して、式（８）：
［式中、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｈｙ、Ｐｒｏは、上記と同じ基を表す。]
で表される化合物またはその塩を製造する工程、
(工程２) 式（８）で表される化合物またはその塩のアミノ基の保護基を、トリフルオロ酢酸にて脱保護して、式（９）：
［式中、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＨｙは、上記と同じ基を表す。]
で表される化合物またはその塩を製造する工程、
(工程３) 式（９）で表される化合物またはその塩を、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムおよび酢酸存在下、ホルムアルデヒドと反応させて、式（６）で表される化合物またはその製薬的に許容される塩を製造する工程。

本発明により、式（１）で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩を提供することが可能になった。当該化合物又はその製薬学的に許容される塩は、脳内タンパク質の異常凝集体の蓄積抑制または減少作用を有し、脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患、特にα－シヌクレインが関与する神経変性疾患（パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、ゴーシェ病、乳児神経軸索ジストロフィー等）に対する治療剤又は予防剤として有用である。また、パーキンソン病病態である神経細胞内における自発的なα－シヌクレイン凝集体を再現することにより、α－シヌクレイン凝集体の蓄積抑制、また減少作用をもつ薬剤を評価する評価方法として有用である。

図１は健常人ｉＰＳ細胞由来神経スフェロイドとＰＬＡ２Ｇ６変異ｉＰＳ細胞由来神経スフェロイド内の凝集体量の差を示す。縦軸は神経スフェロイド内の凝集体量を示し、横軸は培養日数を示す。また、白色のグラフは健常人由来神経スフェロイドの凝集体量を示し、黒色のグラフはＰＬＡ２Ｇ６変異ｉＰＳ細胞由来神経スフェロイドの凝集体量を示す。図２は健常人ｉＰＳ細胞由来ドパミン神経スフェロイドとＰＬＡ２Ｇ６変異ｉＰＳ細胞由来ドパミン神経スフェロイド内の凝集体量の差を示す。縦軸はドパミン神経スフェロイド内の凝集体量を示し、横軸は培養日数を示す。また、白色のグラフは健常人由来神経スフェロイドの凝集体量を示し、黒色のグラフはＰＬＡ２Ｇ６変異ｉＰＳ細胞由来神経スフェロイドの凝集体量を示す。図３は培養２６日目の健常人ｉＰＳ細胞由来ドパミン神経スフェロイドとＰＬＡ２Ｇ６変異ｉＰＳ細胞由来ドパミン神経スフェロイド内のチロシン水酸化酵素量の差を示す。縦軸はドパミン神経スフェロイド内のチロシン水酸化酵素量を示す。また、白色のグラフは健常人由来神経スフェロイド、黒色のグラフはＰＬＡ２Ｇ６変異ｉＰＳ細胞由来神経スフェロイドのチロシン水酸化酵素量を示す。図４は培養４０日目の健常人ｉＰＳ細胞由来ドパミン神経スフェロイドとＰＬＡ２Ｇ６変異ｉＰＳ細胞由来ドパミン神経スフェロイド内のcleaved caspase3量の差を示す。縦軸はドパミン神経スフェロイド内のcleaved caspase3量を示す。また、白色のグラフは健常人由来神経スフェロイド、黒色のグラフはＰＬＡ２Ｇ６変異ｉＰＳ細胞由来神経スフェロイドのcleaved caspase3量を示す。図５は健常人ｉＰＳ細胞由来ドパミン神経スフェロイドとＧＢＡ１遺伝子ホモ変異ｉＰＳ細胞由来ドパミン神経スフェロイド内の凝集体量の差を示す。縦軸はドパミン神経スフェロイド内の凝集体量を示し、横軸は異なる培養日数を示す。また、白色のグラフは健常人由来神経スフェロイドの凝集体量を示し、黒色のグラフはＧＢＡ１遺伝子ホモ変異ｉＰＳ細胞由来神経スフェロイドの凝集体量を示す。

以下に、本発明を詳細に説明する。本明細書において「置換基」の定義における炭素の数を、例えば、「Ｃ_１－３」等と表記する場合もある。具体的には、「Ｃ_１－３アルキル」なる表記は、炭素数１から３のアルキルと同義である。

「ハロゲン」の具体例としては、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素が挙げられる。好ましくは、フッ素または塩素である。

「Ｃ_１－３アルキル」は、炭素数１～３個を有する直鎖状もしくは分枝状の飽和炭化水素基を意味する。好ましくは、「Ｃ_１－２アルキル」である。「Ｃ_１－３アルキル」の具体例としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル等が挙げられる。

「Ｃ_１－３アルコキシ」の「Ｃ_１－３アルキル」部分は、前記「Ｃ_１－３アルキル」と同義である。好ましくは、「Ｃ_１－２アルコキシ」である。「Ｃ_１－３アルコキシ」の具体例としては、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ等が挙げられる。

式（１）で表される本発明化合物の中でも、Ｘ、Ｙ、ｍ、ｎ、ｒ、ｓ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７で、好ましいものは以下のとおりであるが、本発明の技術的範囲は下記に挙げる化合物の範囲に限定されるものではない。

式（１）で表される化合物においてＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５およびＲ^６基は、置換可能であればいずれの炭素に置換してもよく、Ｒ^１とＲ^２、およびＲ^３とＲ^４においては置換可能であれば同一炭素上に置換していてもよく、またＲ^３およびＲ^４においてはＹがＣＨである場合のＣＨのＨと置換されてもよい。
式（１）で表される化合物において、含窒素飽和複素環とＨｙが結合するＨｙの結合部位（矢印）は、炭素である。

Ｘとして、好ましくは酸素、ＮＨ、ＮＭｅが挙げられ、より好ましくは酸素、ＮＭｅが挙げられる。

Ｙとして、好ましくはＣＨが挙げられる。

ｎとして、好ましくは１が挙げられる。

ｍとして、好ましくは１が挙げられる。

ＹがＣＨであるとき、ｒとして、好ましくは０、１、２が挙げられ、より好ましくは、０または１が挙げられ、さらに好ましくは０が挙げられる。
Ｙが窒素であるとき、ｒは１、２、３または４であり、好ましくは１が挙げられる。

ＹがＣＨであるとき、ｓとして、好ましくは０、１、２が挙げられ、より好ましくは１、２が挙げられ、さらに好ましくは１が挙げられる。Ｙが窒素であるとき、ｓは２である。

Ｒ^１として、好ましくは水素、メチル、フッ素が挙げられ、より好ましくは水素が挙げられる。

Ｒ^２として、好ましくは水素、メチル、フッ素が挙げられ、より好ましくは水素が挙げられる。

Ｒ^３として、好ましくは水素、メチル、エチル挙げられ、より好ましくは水素が挙げられる。

Ｒ^４として、好ましくは水素、メチル、エチルが挙げられ、より好ましくはメチル、エチルが挙げられ、さらに好ましくはメチルが挙げられる。

ＸおよびＹを含む環において、Ｒ^３とＲ^４が一緒になって、架橋したメチレンまたはエチレンを形成した構造として、ＸおよびＹを含む環と共に下記式（３）の構造が挙げられる。下記式（３）において、波線は式（１）におけるカルボニルへの結合部位を示す。また、下記式（３）において、ＸおよびＹは項１と同義である。

Ｒ^５として、好ましくはハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキルが挙げられ、より好ましくはハロゲン、１～３個のフッ素で置換されていてもよいメチルが挙げられ、さらに好ましくはトリフルオロメチル、メチル、フッ素が挙げられ、最も好ましくはトリフルオロメチルが挙げられる。

Ｒ^６として、好ましくは水素、ハロゲン、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキルが挙げられ、より好ましくは水素、ハロゲン、１～３個のフッ素で置換されていてもよいメチルが挙げられ、さらに好ましくは水素、ハロゲン、メチルが挙げられ、最も好ましくは水素、フッ素、メチルが挙げられる。

Ｒ^７として、好ましくは水素、Ｃ_１－３アルキルが挙げられ、より好ましくは水素、メチルが挙げられ、さらに好ましくはメチルが挙げられる。Ｒ^７の別の態様としては、重水素を１から５個含むＣ_１－３アルキルが挙げられる。

Ｈｙとして、好ましくはピリジン環が挙げられ、より好ましくは下記式（４）で表されるピリジン－３－イルが挙げられる。下記式（４）において、矢印は含窒素飽和環への結合位置を表す。

縮合反応に用いられる縮合剤としては、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスファート、２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスホリナン－２，４，６－トリオキシド等が挙げられる。好ましくは、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスファート、２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスホリナン－２，４，６－トリオキシドが挙げられる。

還元剤としては、水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム等が挙げられる。好ましくは、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムが挙げられる。

ホルムアルデヒドまたはその等価体としては、ホルムアルデヒド、１，３，５－トリオオキサン、パラホルムアルデヒドが挙げられる。好ましくは、ホルムアルデヒドである。

アミノ基の保護基としては、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられ、好ましくは、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基が挙げられる。

式（１）で表される化合物のうちで、好ましい化合物としては、以下のような化合物又はその製薬学的に許容される塩が挙げられる。

式（１）で表される化合物の１つの態様としては、以下の（Ａ）が挙げられる。
（Ａ）
Ｘが、酸素またはＮＲ^７であり、
Ｒ^７が、水素、Ｃ_１－３アルキルまたはシクロプロピルであり、
Ｙが、ＣＨまたは窒素であり、
ｍが、０、１、または２であり、
ｎが、０または１であり、
ｒが、０、１または２であり、
ｓが、０、１または２であり、
（ただし、ｓ＝０のとき、ＹはＣＨ、かつｒは１または２であり、
ｓ＝１のとき、ＹはＣＨ、かつｒは０、１または２であり、
ｓ＝２のとき、ｒは１または２である）
Ｒ^１が、水素、ハロゲン、メチルまたはヒドロキシであり、
Ｒ^２が、水素、ハロゲン、メチルまたはヒドロキシであり、
Ｒ^３が、水素、またはＣ_１－３アルキルであり、
Ｒ^４が、水素、またはＣ_１－３アルキルであり、
ここにおいて、Ｒ^３とＲ^４は一緒になって、架橋したメチレンまたはエチレンを形成していてもよく、
Ｒ^５が、ハロゲン、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキルであり、
Ｒ^６が、水素、ハロゲン、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキルであり、
Ｈｙが、ピリジン環、ピリダジン環、ピリミジン環、またはピラジン環であり、
ここにおいて、
（Ｉ）Ｒ^５およびＲ^６を含むＨｙが５－フルオロピリジン－２－イルであり、かつｍおよびｎが１であるとき、ｒは０かつｓは１であり、
（ＩＩ）Ｒ^５がメチルであり、かつＲ^６が水素であるとき、ｒは０かつｓは１であり、
ただし、
（Ｉ’）Ｒ^５およびＲ^６を含むＨｙは４，６－ジメチルピリミジン－２－イル、または５－ブロモピリミジン－２－イルでなく、
（ＩＩ’）Ｒ^５およびＲ^６を含むＨｙが５－クロロピリジン－２－イルであるとき、ｍおよびｎは１であり、かつＲ^１およびＲ^２は共に水素ではなく、
ただし、以下の化合物
（ＩＩＩ’）（３－エトキシオキセタン－３－イル）［３－｛４－（トリフルオロメチル）ピリミジン－２－イル｝ピロリジン－１－イル］メタノン、
を除く
で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩。

式（１）で表される化合物の１つの態様としては、以下の（Ｂ）が挙げられる。
（Ｂ）
Ｘが、酸素またはＮＲ^７であり、
Ｒ^７が、水素、Ｃ_１－３アルキル、またはシクロプロピルであり、
Ｙが、ＣＨまたは窒素であり、
ｍが、０、１、または２であり、
ｎが、０または１であり、
ｒが、０、１または２であり、
ｓが、０、１または２であり、
（ただし、ｓ＝０のとき、ＹはＣＨ、かつｒは１または２であり、
ｓ＝１のとき、ＹはＣＨ、かつｒは０、１または２であり、
ｓ＝２のとき、ｒは１または２である）
Ｒ^１が、水素、ハロゲン、メチルまたはヒドロキシであり、
Ｒ^２が、水素、ハロゲン、メチルまたはヒドロキシであり、
Ｒ^３が、水素、またはＣ_１－３アルキルであり、
Ｒ^４が、水素、またはＣ_１－３アルキルであり、
ここにおいて、Ｒ^３とＲ^４は一緒になって、架橋したメチレンまたはエチレンを形成していてもよく、
Ｒ^５が、ハロゲン、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキルであり、
Ｒ^６が、水素、ハロゲン、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキルであり、
Ｈｙが、ピリジン環であり、
ここにおいて、
（Ｉ）Ｒ^５およびＲ^６を含むＨｙが５－フルオロピリジン－２－イルであり、かつｍおよびｎが１であるとき、ｒは０かつｓは１であり、
（ＩＩ）Ｒ^５がメチルであり、かつＲ^６が水素であるとき、ｒは０かつｓは１であり、
ただし、
（Ｉ’）Ｒ^５およびＲ^６を含むＨｙが５－クロロピリジン－２－イルであるとき、ｍおよびｎは１であり、かつＲ^１およびＲ^２は共に水素ではない
で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩。

式（１）で表される化合物の１つの態様としては、以下の（Ｃ）が挙げられる。
（Ｃ）
Ｘが、酸素またはＮＲ^７であり、
Ｒ^７が、水素、Ｃ_１－３アルキルまたはシクロプロピルであり、
Ｙが、ＣＨであり、
ｍが、１であり、
ｎが、１であり、
ｒが、０、１または２であり、
ｓが、０、１または２であり、
（ただし、ｓ＝０のとき、ｒは１または２であり、
ｓ＝１のとき、ｒは０、１または２であり、
ｓ＝２のとき、ｒは１または２である）
Ｒ^１が、水素、メチルまたはフッ素であり、
Ｒ^２が、水素、メチルまたはフッ素であり、
Ｒ^３が、水素、メチルまたはエチルであり、
Ｒ^４が、水素、メチルまたはエチルであり、
Ｒ^５が、ハロゲン、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキルであり、
Ｒ^６が、水素、ハロゲン、または同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキルであり、
Ｈｙが、ピリジン環であり、
ここにおいて、
（Ｉ）Ｒ^５およびＲ^６を含むＨｙが５－フルオロピリジン－２－イルであるとき、ｒは０かつｓは１であり、
（ＩＩ）Ｒ^５がメチルであり、かつＲ^６が水素であるとき、ｒは０かつｓは１であり、
ただし、
（Ｉ’）Ｒ^５およびＲ^６を含むＨｙが５－クロロピリジン－２－イルであるとき、Ｒ^１およびＲ^２は共に水素ではない
で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩。

式（１）で表される化合物の１つの態様としては、以下の（Ｄ）が挙げられる。
（Ｄ）
Ｘが、酸素またはＮＲ^７であり、
Ｒ^７が、水素またはメチルであり、
Ｙが、ＣＨであり、
ｍが、１であり、
ｎが、１であり、
ｒが、０または１であり、
ｓが、１または２であり、
（ただし
ｓ＝２のとき、ｒは１である）
Ｒ^１が、水素であり、
Ｒ^２が、水素であり、
Ｒ^３が、水素であり、
Ｒ^４が、メチルまたはエチルであり、
Ｒ^５が、ハロゲン、または１～３個のフッ素で置換されていてもよいメチルであり、
Ｒ^６が、水素、ハロゲン、または１～３個のフッ素で置換されていてもよいメチルであり、
Ｈｙが、ピリジン－３－イルである、
で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩。

式（１）で表される化合物の１つの態様としては、式（２）の構造である以下の（Ｅ）が挙げられる。
（Ｅ）
式（２）において、
Ｘが、酸素またはＮＭｅであり、
Ｒ^４が、メチルであり、
Ｒ^５が、トリフルオロメチル、メチルまたはフッ素であり、
Ｒ^６が、水素、ハロゲンまたはメチルであり、
Ｈｙが、ピリジン－３－イルである、
で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩。

式（１）で表される化合物の１つの態様としては、以下の化合物またはその製薬学的に許容される塩が挙げられる。
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例１）、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例２）、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［４－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例３）、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４）、
｛４－［５－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝（３－メチルオキセタン－３－イル）メタノン（実施例２９）、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［４－メチル－６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例３１）、
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４１）、
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４２）、
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［４－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４３）、または
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４４）。

式（１）で表される化合物の１つの態様としては、以下の化合物またはその製薬学的に許容される塩が挙げられる。
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例１）、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例２）
｛４－［５－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝（３－メチルオキセタン－３－イル）メタノン（実施例２９）、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［４－メチル－６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例３１）、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［４－（トリフルオロメチル）ピリジン
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４２）、または
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン（実施例４４）。

本発明における、「製薬学的に許容される塩」としては、酸付加塩及び塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩又はクエン酸塩、シュウ酸塩、フタル酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐａｒａ－トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。また、塩基付加塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩、アルミニウム塩等の無機塩基塩、又はトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、２，６－ルチジン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン］、ｔｅｒｔ－ブチルアミン、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ－ジベンジルエチルアミン等の有機塩基との塩等が挙げられる。さらに、「製薬学的に許容される塩」としては、アルギニン、リジン、オルニチン、アスパラギン酸、グルタミン酸等の塩基性アミノ酸又は酸性アミノ酸とのアミノ酸塩も挙げられる。

出発化合物及び中間体の好適な塩及び医薬品原料として許容しうる塩は、慣用の無毒性塩であり、それらとしては、有機酸塩（例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ギ酸塩、ｐａｒａ－トルエンスルホン酸塩等）及び無機酸塩（例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等）のような酸付加塩、アミノ酸（例えば、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸等）との塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等）及びアルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩等）等の金属塩、アンモニウム塩又は有機塩基塩（例えば、トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ,Ｎ'－ジベンジルエチレンジアミン塩等）等の他、当業者が適宜選択することができる。

本発明の化合物の塩を取得したい場合、本発明の化合物が塩の形で得られるときには、そのまま精製すればよく、また、遊離の形で得られるときには、適当な有機溶媒に溶解若しくは懸濁させ、酸又は塩基を加えて通常用いられる方法により塩を形成させればよい。

本発明において、式（１）で表される化合物のいずれか１つ又は２つ以上の^１Ｈを^２Ｈ（Ｄ）に変換した重水素変換体も、式（１）で表される化合物に包含される。本発明には、式（１）で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩が含まれる。また、本発明の化合物は、水和物及び／又は各種溶媒との溶媒和物（エタノール和物等）の形で存在することもあるので、これらの水和物及び／又は溶媒和物も本発明の化合物に含まれる。さらに、本発明には、本発明の化合物（１）のあらゆる互変異性体、存在するあらゆる立体異性体、及びあらゆる様態の結晶形のもの、さらにこれらの混合物も含まれる。

本発明の化合物の中には、光学活性中心に基づく光学異性体、分子内回転の束縛により生じた軸性又は面性キラリティーに基づくアトロプ異性体、その他の立体異性体、互変異性体及び幾何異性体等が存在し得るものがある。そして、これらを含め、存在することが可能な全ての異性体及びそれらの混合物も本発明の化合物に包含される

特に、光学異性体やアトロプ異性体は、ラセミ体として又は光学活性の出発原料や中間体が用いられた場合には光学活性体として、それぞれ得ることができる。必要であれば、下記製造法の適切な段階で、対応する原料、中間体又は最終品のラセミ体を、光学活性カラムを用いた方法、分別結晶化法等の公知の分離方法によって、物理的に又は化学的にそれらの光学対掌体に分割することができる。具体的には、例えばジアステレオマー法では、光学活性分割剤を用いる反応によってラセミ体から２種のジアステレオマーを形成する。この異なるジアステレオマーは一般に物理的性質が異なるため、分別結晶化等の公知の方法によって分割することができる。

以下に、本発明における式（１）で表される化合物の製造法について、例を挙げて説明するが、本発明はもとよりこれに限定されるものではない。

製造法
本発明化合物は、下記に示す製造法、および公知の合成方法を組み合わせた方法により合成される。
反応式中の化合物はそれぞれ塩を形成している場合も含み、該塩としては、例えば、式（１）で表される化合物の塩と同様のものが挙げられる。なお、これらの反応は単なる例示であり、有機合成に習熟している者の知識に基づき、適宜、他の方法で本発明化合物を製造することもできる。

下記において説明する各製造法において、具体的に保護基の使用を明示していない場合であっても、保護が必要な官能基が存在する場合は、当該官能基を必要に応じて保護し、反応終了後または一連の反応を行った後に脱保護することにより目的物を得ることもある。

保護基の導入および脱離は、有機合成化学で常用される方法（例えば、T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 3rd Ed., John Wiley and Sons, inc., New York (1999)に記載されている方法等）またはそれに準じた方法により行うことができる。
アミノ基の保護基としては、例えば、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ｐ－トルエンスルホニル、ｏ－ニトロベンゼンスルホニル、４－メトキシベンジル、２，４－ジメトキシベンジル等が挙げられる。

製造法１
式（１）で表される化合物のうち、式（１ａ）で表される化合物は、例えば、下記に示される方法によって製造される。
［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、ｍ、ｎ、ｒ、ｓ、Ｙ、およびＨｙは、前記［項１］と同義であり；ＡはハロゲンまたはＯＨを表す。］

（工程１－１：化合物（１ａ）の製造工程）
化合物（１ａ）は、適当な不活性溶媒中、種々の縮合剤及び／又は塩基存在下又は非存在下、化合物（１－１）と化合物（１－２）と反応させることにより製造される。化合物（１－１）は、市販の化合物、または公知の方法（例えば、国際公開第ＷＯ２０１４／１９２８６８）により製造されたものを用いることができる。また、後記の製造法３～６より製造されたものを用いることができる。化合物（１－２）は、市販の化合物、または公知の方法（例えば、国際公開第ＷＯ２０１６／００４２７２）により製造されたものを用いることができる。本工程において使用される塩基としては、後述で例示される塩基等から適宜選択されるが、例えば、水素化ナトリウム、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン又は炭酸ナトリウムが挙げられる。本工程において使用される縮合剤は、有機合成反応で一般的に使用される種々の縮合剤を使用することができるが、例えば、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスファート、２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスホリナン－２，４，６－トリオキシド等が挙げられる。本工程において使用される溶媒は、後述で例示される溶媒等から適宜選択されるが、例えば、ＤＭＦ、ＴＨＦ、ジクロロメタン、クロロホルム、酢酸エチル等が挙げられる。本工程の反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。本工程の反応温度は、通常、－７８℃～２００℃であり、好ましくは－７８℃～８０℃である。

製造法２
式（１）で表される化合物のうち、式（１ｂ）および式（１ｃ）で表される化合物は、例えば、下記に示される方法によって製造される。
［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、ｍ、ｎ、ｒ、ｓ、Ｙ、およびＨｙは、前記［項１］と同義であり；Ｒ^８は、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキルまたはシクロプロピルを表し、ＡはハロゲンまたはＯＨを表し；Ｐｒｏはアミノ基の保護基を表す。］

（工程２－１：化合物（１ｃ）の製造工程）
化合物（１ｃ）は、化合物（１－１）と化合物（２－１）より、工程１－１に記載の方法に準じて製造される。化合物（２－１）は、市販の化合物、または公知の方法（例えば、国際公開第ＷＯ２０１０／０２６０９６）により製造されたものを用いることができる。

（工程２－２：化合物（２－３）の製造工程）
化合物（２－３）は、化合物（１－１）と化合物（２－２）より、工程１－１に記載の方法に準じて製造される。化合物（２－２）は、市販の化合物、または公知の方法（例えば、国際公開第ＷＯ２００８／０８５１１７）により製造されたものを用いることができる。

（工程２－３：化合物（１ｂ）の製造工程）
化合物（１ｂ）は、化合物（２－３）のアミノ基の保護基Ｐｒｏを、公知の方法（例えば、Protective Group in Organic Synthesis第３版（Theodora W. Green, Peter G. M. Wuts著、 John Wiley & Sons Inc発行、1999年）に記載の方法）で脱保護することにより製造される。アミノ基の置換基Ｐｒｏとしては、例えば、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられる。

（工程２－４：化合物（１ｃ）の製造工程）
化合物（１ｃ）は、適当な不活性溶媒中、還元剤の存在下、化合物（１ｂ）とＲ^８に対応する種々のアルデヒド、ケトン、ケトン等価体等を反応させることによって製造される。還元剤としては、有機合成反応で一般的に使用される種々の還元剤を使用することができるが、例えば、水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム等が挙げられる。本工程において使用される溶媒は、後述で例示される溶媒等から適宜選択されるが、例えば、トルエン、ＴＨＦ、ジクロロメタン、メタノール等が挙げられる。反応時間は、通常、５分～４８時間であり、好ましくは１時間～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～１００℃であり、好ましくは０℃～８０℃である。

また、化合物（１ｃ）は、適当な不活性溶媒中、塩基の存在下、化合物（１ｂ）とＲ^８に対応する種々のアルキルハライド、アルキルスルホナートを反応させることによっても製造される。塩基としては、後述で例示される塩基等から適宜選択されるが、例えば、炭酸カリウム、炭酸セシウム、水素化ナトリウム、リチウムジイソプロピルアミド等が挙げられる。本工程において使用される溶媒は、後述で例示される溶媒等から適宜選択されるが、例えば、ＤＭＦ、ジメチルスルホキシド、ＴＨＦ、１，４－ジオキサン等が挙げられる。反応時間は、通常、５分～４８時間であり、好ましくは１時間～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～１００℃であり、好ましくは０℃～８０℃である。

製造法３
式（１－１）で表される化合物は、例えば、下記に示される方法によって製造される。
［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、Ｒ^６、ｍ、ｎ、およびＨｙは、前記［項１］と同義であり；Ｗ^１およびＷ^２はハロゲンを表し；Ｐｒｏはアミノ基の保護基を表す。］

（工程３－１：化合物（３－３）の製造工程）
化合物（３－３）は、適当な不活性溶媒中、亜鉛及びパラジウム触媒存在下、化合物（３－１）と化合物（３－２）を反応させることにより製造される。化合物（３－１）は、市販の化合物、または公知の方法（例えば、国際公開第ＷＯ２００８／１４７８３１）により製造されたものを用いることができる。化合物（３－２）は、市販の化合物、または公知の方法（例えば、Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2006), 16(17), 4528-4532）により製造されたものを用いることができる。Ｗ^１およびＷ^２におけるハロゲンとしては、例えば、塩素、臭素、ヨウ素が挙げられる。アミノ基の置換基Ｐｒｏとしては、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられる。パラジウム触媒としては、常法で使用される種々のパラジウム触媒を使用することができるが、例えば、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）等が挙げられる。本工程において使用される溶媒は、後述で例示される溶媒等から適宜選択されるが、例えば、ＤＭＦ、ジメチルアセトアミド等が挙げられる。反応時間は、通常、５分～４８時間であり、好ましくは１時間～２４時間である。反応温度は、通常、０℃～１００℃であり、好ましくは０℃～８０℃である。

（工程３－２：化合物（１－１）の製造工程）
化合物（１－１）は、化合物（３－３）より、工程２－３に記載の方法に準じて製造される。

製造法４
式（１－１）で表される化合物のうち、式（１－１ａ）で表される化合物は、例えば、下記に示される方法によって製造される。
［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、Ｒ^６、ｎ、およびＨｙは、前記［項１］と同義であり；Ｗ^２はハロゲンを表し；Ｐｒｏはアミノ基の保護基を表し；Ｔはボロン酸またはボロン酸エステルを表す。］

（工程４－１：化合物（４－２）の製造工程）
化合物（４－２）は、適当な不活性溶媒中、パラジウム触媒の存在下、化合物（４－１）と化合物（３－２）を反応させることにより製造される。本工程は、必要に応じて塩基および／またはリン配位子の存在下で行うことができる。化合物（４－１）は、市販の化合物、または公知の方法（例えば、国際公開第ＷＯ２０１９／１６３８６５）により製造されたものを用いることができる。アミノ基の置換基Ｐｒｏとしては、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられる。パラジウム触媒としては、常法で使用される種々のパラジウム触媒を使用することができるが、例えば、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）等が挙げられる。本工程において使用される塩基としては、後述で例示される塩基等から適宜選択されるが、例えば、炭酸カリウム、炭酸セシウム等が挙げられる。本工程において使用されるリン配位子としては、有機合成反応で一般的に使用される種々のリン配位子を使用することができるが、例えば、トリフェニルホスフィンやビス（ジフェニルホスフィノ）メタン等が挙げられる。本工程において使用される溶媒は、後述で例示される溶媒等から適宜選択されるが、例えば、１，４－ジオキサン、テトラヒドロフラン、水およびこれらの混合溶媒等が挙げられる。反応温度は通常、０℃～２００℃、好ましくは２０℃～１５０℃であり、必要に応じてマイクロ波照射下で行うこともできる。反応時間は、反応温度、使用されるパラジウム触媒、原料、および溶媒等の条件によって異なるが、通常、５分～７２時間であり、好ましくは１時間～２４時間である。

（工程４－２：化合物（４－３）の製造工程）
化合物（４－３）は、適当な不活性溶媒中、触媒存在下、水素雰囲気下で化合物（４－２）を反応させることにより製造される。本工程において使用される溶媒は、後述で例示される溶媒等から適宜選択されるが、例えば、メタノール、エタノール、クロロホルムおよびこれらの混合溶媒等が挙げられる。触媒としては、接触還元反応で一般的に使用される種々の触媒を使用することができるが、例えば、パラジウム炭素や水酸化パラジウム等が挙げられる。反応時間は、通常、５分～４８時間であり、好ましくは１時間～２４時間である。反応温度は、通常、０℃～１００℃であり、好ましくは０℃～４０℃である。

（工程４－３：化合物（１－１ａ）の製造工程）
化合物（１－１ａ）は、化合物（４－３）より、工程２－３に記載の方法に準じて製造される。

製造法５
式（１－１）で表される化合物のうち、式（１－１ｂ）で表される化合物は、例えば、下記に示される方法によって製造される。
［式中、Ｒ^２、Ｒ^５、Ｒ^６、ｍ、ｎ、およびＨｙは、前記［項１］と同義であり；Ｗ^２はハロゲンを表し；Ｐｒｏはアミノ基の保護基を表す。］

（工程５－１：化合物（５－２）の製造工程）
化合物（５－２）は、適当な不活性溶媒中、アルキルリチウム存在下、化合物（３－２）と化合物（５－１）を反応させることにより製造される。化合物（５－１）は、市販の化合物、または公知の方法（例えば、国際公開第ＷＯ２００５／０５８８８８）により製造されたものを用いることができる。アミノ基の置換基Ｐｒｏとしては、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられる。アルキルリチウムとしては、常法で使用される種々のアルキルリチウムを使用することができるが、例えば、ブチルリチウム等が挙げられる。本工程において使用される溶媒は、後述で例示される溶媒等から適宜選択されるが、例えば、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等が挙げられる。反応時間は、通常、５分～４８時間であり、好ましくは１時間～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～１００℃であり、好ましくは－７８℃～４０℃である。

（工程５－２：化合物（１－１ｂ）の製造工程）
化合物（１－１ｂ）は、化合物（５－２）より、工程２－３に記載の方法に準じて製造される。

製造法６
式（１－１）で表される化合物のうち、式（１－１ｃ）で表される化合物は、例えば、下記に示される方法によって製造される。
［式中、Ｒ^２、Ｒ^５、Ｒ^６、ｍ、ｎ、およびＨｙは、前記［項１］と同義であり；Ｑはハロゲンを表し；Ｐｒｏはアミノ基の保護基を表す。］

（工程６－１：化合物（６－１）の製造工程）
化合物（６－１）は、適当な不活性溶媒中、ハロゲン化剤存在下、化合物（５－２）を反応させることにより製造される。アミノ基の置換基Ｐｒｏとしては、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられる。Ｑにおけるハロゲンとしては、フッ素、塩素が挙げられる。ハロゲン化剤としては、常法で使用される種々のハロゲン化剤を使用することができるが、例えば、（ジエチルアミノ）サルファートリフルオリド、ビス（２－メトキシエチル）アミノサルファートリフルオリド、オキシ塩化リン等が挙げられる。本工程において使用される溶媒は、後述で例示される溶媒等から適宜選択されるが、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、１，４－ジオキサン、トルエン等が挙げられる。反応時間は、通常、５分～４８時間であり、好ましくは１時間～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～１００℃であり、好ましくは－７８℃～４０℃である。

（工程６－２：化合物（１－１ｃ）の製造工程）
化合物（１－１ｃ）は、化合物（６－１）より、工程２－３に記載の方法に準じて製造される。

製造法７
式（１）で表される化合物のうち、式（１ｄ）で表される化合物は、例えば、下記に示される方法によって製造される。
［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、ｍ、ｎ、ｒ、ｓ、およびＨｙは、前記［項１］と同義である。］

（工程７－１：化合物（１ｄ）の製造工程）
化合物（１ｄ）は、適当な不活性溶媒中、トリホスゲンおよび塩基存在下、化合物（７－１）を反応させた後、化合物（１－１）と反応させることにより製造される。本工程において使用される塩基としては、後述で例示される塩基等から適宜選択されるが、例えば、ピリジンやトリエチルアミンが挙げられる。本工程において使用される溶媒は、後述で例示される溶媒等から適宜選択されるが、例えば、ジクロロメタン、クロロホルムが挙げられる。反応時間は、通常、５分～４８時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～１００℃であり、好ましくは０℃～８０℃である。

製造法８
式（１）で表される化合物のうち、式（１ｅ）で表される化合物は、例えば、下記に示される方法によって製造される。
［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、ｍ、ｎ、ｒ、ｓ、およびＨｙは、前記［項１］と同義であり；Ｒ^８は、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキルまたはシクロプロピルを表す。］
（工程８－１：化合物（１ｅ）の製造工程）
化合物（１ｅ）は、化合物（８－１）と化合物（１－１）より、工程７－１に記載の方法に準じて製造される。

製造法９
式（１）で表される化合物のうち、式（１ｅ）および式（１ｆ）で表される化合物は、例えば、下記に示される方法によって製造される。
［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、ｍ、ｎ、ｒ、ｓ、およびＨｙは、前記［項１］と同義であり；Ｒ^８は、同種もしくは異種の１～３個のハロゲンで置換されていてもよいＣ_１－３アルキルまたはシクロプロピルを表し；Ｐｒｏはアミノ基の保護基を表す。］

（工程９－１：化合物（９－２）の製造工程）
化合物（９－２）は、化合物（９－１）と化合物（１－１）より、工程７－１に記載の方法に準じて製造される。アミノ基の置換基Ｐｒｏとしては、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられる。

（工程９－２：化合物（１ｆ）の製造工程）
化合物（１ｆ）は、化合物（９－２）より、工程２－３に記載の方法に準じて製造される。

（工程９－３：化合物（１e）の製造工程）
化合物（１ｅ）は、化合物（１ｆ）より、工程２－４に記載の方法に準じて製造される。

前記で説明した製造法で用いている原料又は中間体のうち、特にあらためてその製造法を記載しなかったものについては、市販化合物であるか、又は市販化合物から当業者に公知の方法、若しくはそれに準じた方法によって合成することができる。

前記の各製造法の各工程において使用される塩基は、反応や原料化合物の種類等によって適時選択されるべきであるが、例えば、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム等の重炭酸アルカリ類；炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等の炭酸アルカリ類；水素化ナトリウム、水素化カリウム等の金属水素化類；水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物；ナトリウムメトキシド、ナトリウムｔ－ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシド類；ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド等の有機金属塩基類；トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）等の有機塩基類等が挙げられる。

前記の各製造法の各工程において使用される溶媒は、反応や原料化合物の種類等によって適時選択されるべきであるが、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール類；アセトン、メチルケトン等のケトン類；塩化メチレン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類；テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン等のエーテル類；トルエン、ベンゼン等の芳香族炭化水素類；ヘキサン、ヘプタン等の脂肪族炭化水素類；酢酸エチル、酢酸プロピル等のエステル類；Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ－メチル－２－ピロリドン（ＮＭＰ）等のアミド類；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等のスルホキシド類；アセトニトリル等のニトリル類等が挙げられる。これらの溶媒は単独又は２種類以上混合して用いることができる。また、反応の種類によっては、ジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）等の有機塩基類を溶媒として用いてもよい。

式（１）で表される本発明の化合物又はその中間体は、当業者に公知の方法で分離又は精製することができる。それらの方法としては、例えば、抽出、分配、再沈殿、カラムクロマトグラフィー（例えば、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、イオン交換カラムクロマトグラフィー若しくは分取液体クロマトグラフィー）又は再結晶等が挙げられる。
再結晶溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、２－プロパノール等のアルコール系溶媒；ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒；酢酸エチル等のエステル系溶媒；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素系溶媒；アセトン等のケトン系溶媒；ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン系溶媒；ヘキサン等の炭化水素系溶媒；ジメチルホルムアミド、アセトニトリル等の非プロトン系溶媒、水、又はこれらの混合溶媒等を用いることができる。その他の精製方法としては、実験化学講座（日本化学会編、丸善）１巻等に記載された方法等を用いることができる。また、本発明の化合物の分子構造の決定は、それぞれの原料化合物に由来する構造を参照して、核磁気共鳴法、赤外吸収法、円二色性スペクトル分析法等の分光学的手法、及び／又は質量分析法により容易に行える。

また、前記製造方法における中間体又は最終生成物は、その官能基を適宜変換すること、また特に、アミノ、水酸基、カルボニル、ハロゲン等を足がかりに種々の側鎖を伸張すること、及びその際に必要に応じて前記の保護、脱保護を行うことによって、本発明に含まれる別の化合物へ導く事もできる。官能基の変換及び側鎖の伸張は、通常行われる一般的方法（例えば、Comprehensive Organic Transformations, R. C. Larock, John Wiley & Sons Inc.（１９９９）等を参照）によって行うことができる。

式（１）で表される本発明の化合物には、不斉が生じる場合又は不斉炭素を有する置換基を有する場合があり、そのような化合物にあっては光学異性体が存在する。本発明の化合物にはこれらの各異性体の混合物や単離されたものも含まれ、通常の方法に従って製造することができる。製造方法としては、例えば、不斉点を有する原料を用いる方法か、又は途中の段階で不斉を導入する方法が挙げられる。例えば、光学異性体の場合、光学活性な原料を用いるか、製造工程の適当な段階で光学分割等を行うことで、光学異性体を得ることができる。光学分割法としては例えば、式（１）で表される化合物又はその中間体が、塩基性官能基を有する場合には、不活性溶媒中（例えば、メタノール、エタノール、２－プロパノール等のアルコール系溶媒；ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒；酢酸エチル等のエステル系溶媒；トルエン等の炭化水素系溶媒；アセトニトリル等の非プロトン系溶媒又は前記溶媒から選択される２種以上の混合溶媒）、光学活性な酸（例えば、マンデル酸、Ｎ－ベンジルオキシアラニン、乳酸等のモノカルボン酸；酒石酸、ｏ－ジイソプロピリデン酒石酸、リンゴ酸等のジカルボン酸；カンファースルフォン酸、ブロモカンファースルホン酸等のスルホン酸等）を用いて塩を形成させるジアステレオマー法が挙げられる。式（１）で表される本発明の化合物又はその中間体が、カルボキシル基等の酸性官能基を有する場合には、光学活性なアミン（例えば、１－フェニルエチルアミン、キニン、キニジン、シンコニジン、シンコニン、ストリキニーネ等の有機アミン）を用いて、塩を形成させることにより、光学分割を行うこともできる。

塩を形成させる温度としては、－５０℃から溶媒の沸点までの範囲、好ましくは０℃から沸点までの範囲、より好ましくは室温から溶媒の沸点までの範囲から選択される。光学純度を向上させるためには、一旦、溶媒の沸点付近まで温度を上げることが望ましい。析出した塩を濾取する際、必要に応じて冷却し、収率を向上させることができる。光学活性な酸又はアミンの使用量は、基質に対し約０．５～約２．０当量の範囲、好ましくは１当量前後の範囲が適当である。必要に応じ結晶を不活性溶媒中（例えば、メタノール、エタノール、２－プロパノール等のアルコール系溶媒；ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒；酢酸エチル等のエステル系溶媒；トルエン等の炭化水素系溶媒；アセトニトリル等の非プロトン系溶媒又は前記溶媒から選択される２種以上の混合溶媒）で再結晶し、高純度の光学活性な塩を得ることもできる。また、必要に応じて光学分割した塩を通常の方法で酸又は塩基で処理し、フリー体として得ることもできる。

パーキンソン病等のレビー小体病では、患者脳内に異常凝集したα－シヌクレインが認められる。従って、α－シヌクレイン凝集体を蓄積抑制または減少させる本願の薬剤は、これらの疾患に対して病態改善効果を発揮することが期待される。

また、当該凝集体が神経毒性を示し、神経脆弱性や神経細胞死を誘発し、発症、病態進行の原因となると考えられている。従って、α－シヌクレイン凝集体を伴う神経毒性や神経細胞死を抑制させる本願の薬剤は、パーキンソン病等のレビー小体病に対して病態改善効果を発揮することが期待される。

神経伝達物質の産生は神経機能の一つであり、神経伝達物質の減少は神経脆弱性を示す。その神経脆弱性は、例えばドパミン神経においては、ドパミン代謝に関与するチロシン水酸化酵素量の減少によって示される。

さらに、パーキンソン病等のレビー小体病においては脳波の異常が報告されている。脳波は神経同期活動の現れである。従って、α－シヌクレイン凝集体を伴う神経同期活動を正常化させる本願の薬剤は、これらの疾患に対して病態改善効果を発揮することが期待される。

α－シヌクレイン凝集体量を測定するのに用いられる神経スフェロイドは、例えば、神経分化誘導下で、シヌクレオパチー関連遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞から作成した神経幹細胞やドーパミン（ＤＡ）神経前駆細胞を三次元培養することによって作成できる。三次元培養をした神経スフェロイドを用いて、α－シヌクレイン抗体を用いたタンパク質解析の手法で高分子量のα－シヌクレイン量を測定することにより、α－シヌクレイン凝集体量を評価することができる。
また、三次元培養した神経スフェロイドを用いて、蛍光カルシウムプローブを用いたイメージング解析を行うことにより、同期神経発火を評価することができる。
さらに、α－シヌクレイン凝集体量を測定する工程と、神経スフェロイドにおける同期神経発火を測定する工程を用いることにより、パーキンソン病病態を再現することができ、またパーキンソン病病態におけるα－シヌクレイン凝集体の蓄積抑制または減少作用をもつ薬剤を評価することができる。

シヌクレオパチー関連遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞からの神経幹細胞への分化誘導は、例えば、健常人由来ｉＰＳ細胞株（クローン名201B7, 京都大学ｉＰＳ細胞研究所より入手）から樹立したＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異細胞を用い、StemFitAK03N培地（味の素社、Basic03）中37℃、5% CO₂の条件で培養し、PSC Neuronal Induction Medium（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製, cat#A1647801）を用いて誘導することでできる。

神経幹細胞の培養培地としては、例えば、以下の組成のものを用いることができる。
＜神経幹細胞の培養培地組成＞
Neurobasal 培地（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製 2113049）
Advanced DMEM/F-12培地（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製 12634028）
Neural Induction Supplement（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製 A1647801）

神経幹細胞の神経スフェロイドへの分化誘導については、例えば、神経幹細胞（10000 cells/well）を96穴Ｕ字プレート(サーモフィッシャーサイエンティフィック社製 cat#174929)に播種し、培養培地中、37℃、5% CO₂の条件で培養し、分化誘導後２日目、４日目に半量培地交換しすることによって行うことができる。

神経幹細胞の神経スフェロイドの分化培地としては、例えば、以下の組成のものを用いることができる。
＜神経スフェロイドの培養培地組成＞
BrainPhys Neuronal Medium (STEMCELL Technologies社製, cat#ST-05793)
NeuroCult SM1 Neuronal Supplement (STEMCELL Technologies社製, cat#05711)
N2 Supplement-A (STEMCELL Technologies社製, cat#07152)
20 ng/mL BDNF (Peprotech社製, cat#450－02)
20 ng/mL GDNF (Peprotech社製, cat#450－10)
1 mM dibutyryl cAMP (ナカライ社製, cat#11540－74)
200 nM ascorbic acid (ナカライ社製, cat#03420－52)

シヌクレオパチー関連遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞からのドパミン神経前駆細胞への分化誘導については、例えば、ドパミン神経誘導キット（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製, cat#A3147701）を用いて、ＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異細胞や健常人由来ｉＰＳ細胞株から樹立したＧＢＡ１遺伝子ホモ変異細胞からドパミン神経前駆細胞を誘導することでできる。

ドパミン神経前駆細胞の神経スフェロイドの分化誘導については、例えば、凍結保存したドパミン神経前駆細胞を、Floor Plate Cell expansionキット(サーモフィッシャーサイエンティフィック社製、cat#A3165801)により、37℃、5% CO₂の条件で培養し、ドパミン神経前駆細胞（10000 cells/well）を96穴Ｕ字プレート(サーモフィッシャーサイエンティフィック社製 cat#174929)に播種し、培養培地中、37℃、5% CO₂の条件で培養し、分化誘導後３、４日毎に半量培地交換することによって行うことができる。

ドパミン神経前駆細胞のドパミン神経スフェロイドの培養培地としては、例えば以下の組成のものを用いることができる。
＜ドパミン神経スフェロイドの培養培地組成＞
BrainPhys Neuronal Medium (STEMCELL Technologies社製, cat#ST-05793)
Dopaminergic Neuron Maturation Supplement (サーモフィッシャーサイエンティフィック社製、cat#A3147401)
20 ng/mL BDNF (Peprotech社製, cat#450－02)
20 ng/mL GDNF (Peprotech社製, cat#450－10)
1 mM dibutyryl cAMP (ナカライ社製, cat#11540－74)
200 nM ascorbic acid (ナカライ社製, cat#03420－52)

神経スフェロイドにおけるα－シヌクレイン凝集体量の測定については、例えば、分化誘導した神経スフェロイドを上記培養培地から取り出し、1% TritionX-100（ナカライ社製, cat#12967－32）を添加したＴＢＳ溶液（ナカライ社製, cat#12748-31）を加え、超音波破砕機によりタンパク質を抽出し、α－シヌクレイン抗体（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製,cat#AHB0261）によるSimple Westernシステムを用いた非還元状態でのタンパク質解析（Protein Simple社製, cat#SM-W008）により分子量約300 kD付近で示される波形について定量評価することにより行うことができる。

神経スフェロイドにおける神経脆弱性の測定については、例えば、分化誘導したドパミン神経スフェロイドを、1% TritionX-100（ナカライ社製, cat#12967－32）を添加したＴＢＳ溶液（ナカライ社製, cat#12748-31）に移し、超音波破砕機によりタンパク質を抽出し、チロシン水酸化酵素抗体（Millipore社製, cat#AB152）によるSimple Westernシステムを用いた還元状態でのタンパク質解析（Protein Simple社製, cat#SM-W004）により分子量約60kD付近で示される波形について定量評価することにより行うことができる。

神経スフェロイドにおける神経細胞死の測定については、例えば、分化誘導したドパミン神経スフェロイドを、1% TritionX-100（ナカライ社製, cat#12967－32）を添加したＴＢＳ溶液（ナカライ社製, cat#12748-31）に移し、超音波破砕機によりタンパク質を抽出し、cleaved caspase 3抗体（Cell singnaling Technology社製, cat#9664）によるSimple Westernシステムを用いた還元状態でのタンパク質解析（Protein Simple社製, cat#SM-W004）により分子量約20 kD付近で示される波形について定量評価することにより行うことができる。

神経スフェロイドにおける異常な神経活動の測定については、、例えば、三次元培養をした神経スフェロイドによる蛍光カルシウムプローブを用いたイメージング解析を行うことにより、同期神経発火を測定することでできる。
神経スフェロイドにおける同期神経発火の測定については、例えば、蛍光カルシウムプローブ（モレキュラー・デバイス社製，商品名FLIPR Calcium 6 Assay Bulk Kit, cat#R8191）を含む測定用培地を利用した、イメージング解析することによって行うことができる。
測定用培地としては、例えば、２０ｍＭＨｅｐｅｓ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製，cat#15630-080）、０．１％牛血清アルブミン（シグマアルドリッチ社製，cat#A9576）含有Ｈａｎｋ’ｓ緩衝液（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製，cat#14065-056）を用いることができる。

本発明の化合物は、脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患の治療剤及び／又は予防剤として有用である。
前記の脳内タンパク質の異常凝集体が関与する中枢神経系疾患としては、タウ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、またはポリグルタミンが関与する中枢神経系疾患が挙げられる。
前記のタウが関与する中枢神経系疾患としては、アルツハイマー病、前頭側頭葉型変性症等が挙げられ、α―シヌクレイン凝集体が関与する疾患としては、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、ゴーシェ病、乳児神経軸索ジストロフィー等が挙げられ、ＴＤＰ－４３が関与する中枢神経系疾患としては、筋萎縮性側索硬化症、前頭側頭葉型変性症等が挙げられ、ポリグルタミンが関与する中枢神経系疾患としては、ハンチントン病、脊髄小脳失調症等が挙げられる。
本願の化合物は、好ましくは、アルツハイマー病、前頭側頭葉型変性症、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、ゴーシェ病、乳児神経軸索ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、または脊髄小脳失調症の治療剤及び／又は予防剤として有用である。
本願の化合物は、より好ましくは、α－シヌクレイン凝集体が関与する疾患の治療剤及び／又は予防剤として有用である。
本願の化合物は、更により好ましくは、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、ゴーシェ病、または乳児神経軸索ジストロフィーの治療剤及び／又は予防剤として有用である。
なお、本発明において、「予防」とは、疾患を発症していない健常人に対して本発明の有効成分を投与する行為であり、例えば、疾患の発症を防止することを目的とするものである。「治療」とは、医師により疾患を発症していると診断をされた人（患者）に対して本発明の化合物を有効成分として投与する行為である。

本発明化合物及びこれを含有する医薬は、経口投与または非経口投与により、直接または適当な剤形を用いて製剤にし、投与することができる。剤形は、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、液剤、懸濁剤、注射剤、貼付剤、パップ剤等が挙げられるがこれに限らない。製剤は、製薬学的に許容される添加剤を用いて、公知の方法で製造される。
添加剤は、目的に応じて、賦形剤、崩壊剤、結合剤、流動化剤、滑沢剤、コーティング剤、溶解剤、溶解補助剤、増粘剤、分散剤、安定化剤、甘味剤、香料等を用いることができる。具体的には、例えば、乳糖、マンニトール、結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、トウモロコシデンプン、部分α化デンプン、カルメロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ステアリン酸マグネシウム、フマル酸ステアリルナトリウム、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、酸化チタン、タルク等が挙げられる。

投与経路としては、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましく、経口、または、静脈内、塗布、吸入および点眼等の非経口を挙げることができるが、好ましくは経口投与である。投与形態としては、例えば錠剤、注射剤等を挙げることができるが、好ましくは錠剤である。これらの医薬組成物の投与量や投与回数は、投与形態、患者の疾患やその症状、患者の年齢や体重等によって異なり、一概に規定することができないが、通常は成人に対し１日あたり有効成分の量として約０．０００１～約５０００ｍｇの範囲、好ましくは約０．００１～約１０００ｍｇの範囲、さらに好ましくは約０．１～約５００ｍｇの範囲、特に好ましくは約１～約３００ｍｇの範囲を１日１回または数回、好ましくは１日１～３回に分けて投与することができる。

本発明化合物及びこれを含有する医薬は、その効果の増強および／または副作用の軽減を目的として、他の薬物と併用して用いることができる。例えば、L-dopa、ドパミンアゴニスト（例えば、ロピニロール塩酸塩、アポモルヒネ塩酸塩水和物等）、MAO-B阻害剤（例えば、セレギリン塩酸塩等）、カテコール-O-メチル転移酵素（COMT）阻害薬（例えば、エンタカポン等）、αSyn抗体（例えば、Prasenimab等）、またはその製薬学的に許容される塩等の中枢神経系疾患治療薬と併用することができる。以下、本発明化合物と併用し得る薬物を、併用薬剤と略記する。

本発明化合物及びこれを含有する医薬並びに併用薬剤の投与期間は限定されず、これらを投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。また、本発明化合物と併用薬剤の合剤としてもよい。併用薬剤の投与量は、臨床上用いられている用量を基準として適宜選択することができる。また、本発明化合物と併用薬剤の配合比は、投与対象、投与ルート、対象疾患、症状、組み合わせなどにより適宜選択することができる。例えば投与対象がヒトである場合、本発明化合物１重量部に対し、併用薬剤を０．０１～１００重量部用いればよい。また、その副作用抑制の目的として、制吐剤、睡眠導入剤、抗痙攣薬などの薬剤（併用薬剤）と組み合わせて用いることができる。

以下に本発明を、参考例、実施例および試験例により、さらに具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。本明細書において、例えば、「実施例１」は「実施例１の化合物」、「参考例１」は「参考例１の化合物」のように、実施例や参考例という言葉は化合物を意味する場合がある。なお、以下の参考例および実施例において示された化合物名は、必ずしもＩＵＰＡＣ命名法に従うものではない。

明細書の記載を簡略化するために、参考例、実施例及び試験例において、以下に示すような略号を用いることもある。
Ｍｅ：メチル
Ｅｔ：エチル
Ｐｒ：ノルマルプロピル
ｉＰｒ：イソプロピル
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＨＡＴＵ：１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスファート

ＮＭＲに用いられる記号としては、ｓは一重線、ｄは二重線、ｄｄは二重線の二重線、ｔは三重線、ｔｄは三重線の二重線、ｑは四重線、ｍは多重線、ｂｒは幅広い、ｂｒｓは幅広い一重線、ｂｒｍは幅広い多重線及びＪは結合定数を意味する。

高速液体クロマト質量分析計；ＬＣＭＳの測定条件は、以下の通りであり、観察された質量分析の値［ＭＳ（ｍ／ｚ）］をＭＨ^＋で、保持時間をＲｔ（分）で示す。なお、各実測値においては、測定に用いた測定条件をＡ又はＢで付記する。

測定条件Ａ
検出機器：
ＭＳｄｅｔｅｃｔｏｒ：ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＳＱＤｅｔｅｃｔｏｒ
ＨＰＬＣ：ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣ
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８１．７μｍ２．１×３０ｍｍ
流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ
オーブン温度：４０℃
測定波長：２５４、２２０ｎｍ
移動層：Ａ液０．０６％ギ酸水溶液
Ｂ液０．０６％ギ酸アセトニトリル
タイムプログラム：
ステップ時間（分）
１０．０－１．３Ａ液：Ｂ液＝９８:２～４：９６
２１．３－１．５Ａ液：Ｂ液＝４：９６～９８；２

測定条件Ｂ
検出機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１２００Ｓｅｒｉｅｓ、Ａｇｉｌｅｎｔ６１１０ＱｕａｄｒｕｐｏｌｅＬＣＭＳ
カラム：ＸｂｒｉｄｇｅＣ１８３．５μｍ４．６×５０ｍｍ
流速：１．８ｍＬ／ｍｉｎ
測定波長：２５４、２１４ｎｍ
移動層：Ａ液１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液
Ｂ液アセトニトリル
タイムプログラム：
ステップ時間（分）
１０．０－１．５Ａ液：Ｂ液＝９０:１０～５：９５
オーブン温度：５０℃

参考例１
５－（ピペリジン－４－イル）－２－（トリフルオロメチル）ピリジン
１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－１，２，３，６－テトラヒドロ－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン（６．７ｇ）のシクロペンチルメチルエーテル／水（４／１）（１００ｍＬ）溶液に、５－ブロモ－２－（トリフルオロメチル）ピリジン（４．１ｇ）、１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウムジクロリド（０．６６ｇ）、炭酸セシウム（１２ｇ）を加え、１００℃で３０分撹拌した。室温に冷却した後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥後の有機層の溶媒を減圧留去した後、アミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン／酢酸エチル）で簡易的に精製した。得られた粗精製物をメタノール（５０ｍＬ）に溶かし、１０％パラジウム炭素（５５％ｗｅｔ）（０．３０ｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。反応液を一度セライトろ過し、メタノールで洗浄した後、得られたろ液の溶媒を減圧留去した。残渣を再度メタノール（５０ｍＬ）に溶かし、１０％パラジウム炭素（５５％ｗｅｔ）（０．３０ｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。反応液をセライトろ過し、メタノールで洗浄した後、得られたろ液の溶媒を減圧留去した。得られた残渣をクロロホルム（１０ｍＬ）に溶かし、トリフルオロ酢酸（２０ｍＬ）を加えた。室温で１分撹拌した後、溶媒およびトリフルオロ酢酸を減圧留去した。得られた残渣をアミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン／酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール）で精製することにより参考例１（３．８ｇ）を得た。
LC/MS ([M+H]+/Rt(min)): 231.2/0.50（測定条件Ａ）

参考例２～１１
参考例１に記載の方法に準じ、対応する原料化合物を用いて、表１に示す化合物を得た。

参考例１２
５－（アゼチジン－３－イル）－２－（トリフルオロメチル）ピリジン
乾燥したシュレンクチューブ内に亜鉛粉末（０．３３ｇ）を加え、内部を窒素置換した。窒素雰囲気下、ＤＭＦ（１．０ｍＬ）、ヨウ素（５１ｍｇ）を加え室温下５分間攪拌した。活性化させた亜鉛溶液に、ｔｅｒｔ－ブチル３－ヨードアゼチジン－１－カルボキシレート（０．１９ｍＬ）のＤＭＦ（１．０ｍＬ）溶液を添加し、４０℃で１時間攪拌した。調製したアルキル亜鉛溶液に、５－ブロモ－２－（トリフルオロメチル）ピリジン（０．２３ｇ）とテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５８ｍｇ）が溶解したＤＭＦ（１．０ｍＬ）溶液を添加し８０℃で２時間攪拌した。反応溶液を０℃まで冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液をゆっくり滴下し反応の停止を行った。生じた沈殿物は吸引ろ過で取り除き、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を酢酸エチルで抽出し、得られた有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。有機層の溶媒を減圧留去した後、得られた粗生成物にクロロホルム（１．０ｍＬ）とトリフルオロ酢酸（３．０ｍＬ）を加え２０分間還流した。室温へ冷却し、溶媒およびトリフルオロ酢酸を減圧留去した。得られた残渣をアミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン／酢酸エチル）で精製することにより参考例１２（７５ｍｇ）を得た。
LC/MS ([M+H]+/Rt(min)): 203.1/0.47（測定条件Ａ）

参考例１３
４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－４－オール
乾燥した２口フラスコ内に５－ブロモ－２－（トリフルオロメチル）ピリジン（２．０ｇ）を加え、内部を窒素置換した。窒素雰囲気下、乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）を加え－７８℃に冷却した。２．６ｍｏｌ／Ｌのｎ－ブチルリチウムヘキサン溶液（５．１ｍＬ）を滴下し、－７８℃で１時間攪拌した。１－Ｂｏｃ－４－ピペリドン（１．８ｇ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を調製し、反応溶液に滴下し、滴下完了後に室温まで昇温させた。１時間後、反応溶液を０℃まで冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液をゆっくり滴下し反応の停止を行った。反応溶液を酢酸エチルで抽出し、得られた有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。有機層の溶媒を減圧留去した後、アミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン／酢酸エチル９５：５－０：１００）で簡易精製を行った。得られた粗生成物にクロロホルム（２．０ｍＬ）とトリフルオロ酢酸（４．０ｍＬ）を加え室温下３０分間攪拌した。溶媒およびトリフルオロ酢酸を減圧留去し、得られた残渣をアミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン／酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール）で精製することにより参考例１３（０．２３ｇ）を得た。
LC/MS ([M+H]+/Rt(min)): 247.1/0.46（測定条件Ａ）

参考例１４
５－（４－フルオロピペリジン－４－イル）－２－（トリフルオロメチル）ピリジン
ａ）ｔｅｒｔ－ブチル４－ヒドロキシ－４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｗ１）の製造
乾燥した２口フラスコ内に５－ブロモ－２－（トリフルオロメチル）ピリジン（２．０ｇ）を加え、内部を窒素置換した。窒素雰囲気下、乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）を加え－７８℃に冷却した。１．６ｍｏｌ／Ｌのｎ－ブチルリチウムヘキサン溶液（６．８ｍＬ）を滴下し、－７８℃で２０分攪拌した。１－Ｂｏｃ－４－ピペリドン（１．７６ｇ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液を調整し、反応溶液に滴下、滴下完了後に室温まで昇温させた。１時間後、反応溶液を０℃まで冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液をゆっくり滴下し反応の停止を行った。反応溶液を酢酸エチルで抽出し、得られた有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。有機層の溶媒を減圧留去した後、アミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン／酢酸エチル）で精製することにより、化合物Ｗ１（１．１８ｇ）を得た。
LC/MS ([M+H]+/Rt(min)): 347.2/0.93（測定条件Ａ）

ｂ）５－（４－フルオロピペリジン－４－イル）－２－（トリフルオロメチル）ピリジン（参考例１４）の製造
化合物Ｗ１（０．１２ｇ）をクロロホルム（１．５ｍＬ）に溶解させ、ビス（２－メトキシエチル）アミノサルファートリフルオリド（０．２４ｍＬ）を加えた後、室温下３０分間攪拌した。反応溶液を濃縮し、アミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン／酢酸エチル）で簡易的に精製した。得られた化合物をクロロホルム（０．５０ｍＬ）に溶かし、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）を作用させ、室温下５分間攪拌した。反応溶液を濃縮し、トルエンで共沸することで過剰のＴＦＡを取り除いた。得られた粗生成物をアミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン／酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール）で精製することにより参考例１４（１８ｍｇ）を得た。
LC/MS ([M+H]+/Rt(min)): 249.1/0.60（測定条件Ａ）

参考例１５～２１
参考例１に記載の方法に準じ、対応する原料化合物を用いて、表２に示す化合物を得た。

実施例１
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン
参考例１（３０ｍｇ）のクロロホルム（１．０ｍＬ）溶液に、３－メチルオキセタン－３－カルボン酸（１８ｍｇ）、トリエチルアミン（２７μＬ）、ＨＡＴＵ（６０ｍｇ）を加え、室温下３０分間攪拌した。その後、炭酸セシウム（４２ｍｇ）を加え再び室温下３０分間攪拌した。反応溶液をアミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン／酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール）で精製することにより実施例１（４１ｍｇ）を得た。
LC/MS ([M+H]+/Rt(min)): 329.2/0.75（測定条件Ａ）
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.72 (1H, d, J = 1.6 Hz), 8.02 (1H, dd, J = 2.0, 8.4 Hz), 7.84 (1H, d, J = 8.8 Hz), 4.83 (2H, dd, J = 6.4, 8.8 Hz), 4.55-4.52 (1H, m), 4.28 (2H, t, 6.8 Hz), 3.18-3.05 (2H, m), 3.01-2.93 (1H, m), 2.67 (1H, t, J = 12 Hz), 1.85-1.81 (2H, brs), 1.72-1.57 (5H, m).

実施例１の化合物は、下記の方法によっても合成することができる。

参考例１の塩酸塩（１００ｍｇ）の酢酸エチル（１．０ｍＬ）溶液に、３－メチルオキセタン－３－カルボン酸（５２ｍｇ）、トリエチルアミン（０．１７ｍＬ）、５０％２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスホリナン－２，４，６－トリオキシド酢酸エチル溶液（０．４０ｍＬ）を加え、室温下１時間攪拌した。反応溶液をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；酢酸エチル／メタノール）で精製することにより実施例１（９３ｍｇ）を得た。

実施例２～３２
対応する原料化合物を用いて、実施例１の合成法に準じた方法により、表３に示す化合物を得た。

実施例３３
(３－メチルアゼチジン－３－イル)｛４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン
参考例１（５０ｍｇ）のクロロホルム（１．０ｍＬ）溶液に、１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－３－メチルアゼチジン－３－カルボン酸（５６ｍｇ）、トリエチルアミン（４５μＬ）、ＨＡＴＵ（９９ｍｇ）、炭酸セシウム（７１ｍｇ）を加えた。室温下１時間攪拌した後、反応溶液をアミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン／酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール）で簡易精製し粗生成物を得た。得られた粗生成物をクロロホルム（１．０ｍＬ）に溶解させ、ＴＦＡ(１．０ｍＬ)を添加し、室温下５分間攪拌した。反応溶液を濃縮し、アミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン／酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール）で精製することで実施例３３（６５ｍｇ）を得た。
LC/MS ([M+H]+/Rt(min)): 328.2/0.60（測定条件Ａ）
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.71 (1H, d, J = 2.0 Hz), 8.00 (1H, dd, J = 8.4, 2.0 Hz), 7.83 (1H, d, J = 8.4 Hz), 4.53 (1H, d, J = 12.8 Hz), 3.87 (2H, t, J = 8.4 Hz), 3.35-3.30 (1H, m), 3.16-3.07 (3H, m), 2.97 (1H, tt, J = 12, 3.6 Hz), 2.63 (1H, t, J = 12 Hz), 1.84 (2H, d, J = 12.8 Hz), 1.65-1.47 (5H, m).

実施例３３の化合物は、下記の方法によっても合成することができる。

参考例１の塩酸塩（１００ｍｇ）の酢酸エチル（１．０ｍＬ）溶液に、１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－３－メチルアゼチジン－３－カルボン酸（９７ｍｇ）、トリエチルアミン（０．１７ｍＬ）、５０％２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスホリナン－２，４，６－トリオキシド酢酸エチル溶液（０．４０ｍＬ）を加え、室温下１時間攪拌した。反応溶液をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；酢酸エチル／メタノール）で簡易精製し粗生成物を得た。得られた粗生成物をクロロホルム（１．０ｍＬ）に溶解させ、ＴＦＡ(１．０ｍＬ)を添加し、室温下１時間攪拌した。反応溶液を濃縮し、アミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；酢酸エチル／メタノール）で精製することで実施例３３（９０ｍｇ）を得た。

実施例３４～４０
対応する原料化合物を用いて、実施例３３の合成法に準じた方法により、表４に示す化合物を得た。ただし、実施例が塩の場合、塩化の工程を含む。

実施例４１
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン塩酸塩
実施例３３（２０ｍｇ）のＴＨＦ（０．５０ｍL）溶液に、３６％ホルムアルデヒド水溶液（１９μＬ）、酢酸（５．２μＬ）を加え、室温下溶液を攪拌しながらナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（３９ｍｇ）を添加し３０分間攪拌した。反応溶液をアミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン／酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール）で精製した。得られたオイル状化合物を酢酸エチル（１ｍＬ）に溶解させ、室温下４ｍｏｌ／Ｌ塩酸の酢酸エチル溶液を作用させ実施例４１（１５ｍｇ）を得た。
LC/MS ([M+H]+/Rt(min)): 342.3/0.63（測定条件Ａ）
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 10.6 (1H, brs), 8.72 (1H, d, J = 1.6 Hz), 7.99 (1H, dd, J = 8.0, 1.6 Hz), 7.86 (1H, d, J = 8.8 Hz), 4.52 (1H, d, J = 12.8 Hz), 4.13-4.12 (2H, m), 3.92-3.90 (2H, m), 3.32-3.29 (1H, m), 3.15 (1H, t, J = 12.8 Hz), 3.00 (1H, tt, J = 12, 3.2 Hz), 2.72 (3H, s), 1.91-1.83 (2H, m), 1.68-1.50 (5H, m).

実施例４２～４８
対応する原料化合物を用いて、実施例４１の合成法に準じた方法により、表５に示す化合物を得た。ただし、実施例が塩ではない場合、塩化の工程は不要である。

実施例４９
（モルホリン－４－イル）｛４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン
参考例１（３０ｍｇ）のクロロホルム（１．０ｍＬ）溶液に、モルホリン－４－カルボニルクロライド（１８μＬ）、Ｎ－エチル－Ｎ－イソプロピルプロパン－２－アミン（３４μＬ）を加え室温下１時間攪拌した。反応溶液をアミノシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン／酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール）で精製することで実施例４９（４４ｍｇ）を得た。
LC/MS ([M+H]+/Rt(min)): 344.2/0.79（測定条件Ａ）
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.70 (1H, d, J = 2.0 Hz), 7.98 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz), 7.83 (1H, d, J = 8.0 Hz), 3.74 (2H, d, J = 13.6 Hz), 3.58 (4H, m), 3.15 (4H, m), 2.93-2.83 (3H, m), 1.82-1.79 (2H, m), 1.70-1.59 (2H, m).

実施例５０～５９
対応する原料化合物を用いて、実施例１の合成法に準じた方法により、表６に示す化合物を得た。

実施例６０
（１，４－オキサゼパン－４－イル）｛４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン」－１－イル｝メタノン
１，４－オキサゼパン（６１ｍｇ）のジクロロメタン（２．０ｍＬ）溶液にピリジン（９５ｍｇ）を加え、０℃に冷却した。トリホスゲン（７２ｍｇ）を加え、０℃で３０分攪拌した。ジイロプロピルエチルアミン（０．２３ｇ）および参考例１（６９ｍｇ）を加え、室温で１時間攪拌した。応溶液を濃縮し分取ＨＰＬＣで精製することで実施例６０（３１ｍｇ）を得た。
LC/MS ([M+H]+/Rt(min)): 357.9/1.54（測定条件Ｂ）
¹H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 8.63 (1H, s), 7.74-7.72 (1H, m), 7.66 (1H, d, J = 8.0 Hz), 3.83-3.79 (6H, m), 3.55-3.52 (4H, m), 2.95-2.90 (2H, m), 2.86-2.81 (1H, m), 2.02-2.00 (2H, m), 1.91 (2H, d, J = 11.0 Hz), 1.80-1.72 (2H, m).

実施例６１～６３
対応する原料化合物を用いて、実施例６０の合成法に準じた方法により、表７に示す化合物を得た。

実施例６４～６５
対応する原料化合物を用いて、実施例４１の合成法に準じた方法により、表８に示す化合物を得た。ただし、実施例が塩ではない場合、塩化の工程は実施しなかった。

実施例６６
［３－メチル－１－（２，２，２－トリフルオロエチル）アゼチジン－３－イル］｛４－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン
実施例３４（４６ｍｇ）のＴＨＦ（３．０ｍＬ）溶液に２，２，２－トリフルオロエチルトリフルオロメタンスルホナート（４２ｍｇ）およびトリエチルアミン（７１ｍｇ）を加え、室温で終夜攪拌した。反応液を濃縮し分取ＨＰＬＣで精製することで実施例６６（１９ｍｇ）を得た。
LC/MS ([M+H]+/Rt(min)): 410.1/1.78（測定条件Ｂ）
¹H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 8.59 (1H, d, J = 4.8 Hz), 7.79 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.51 (1H, dd, J = 7.6, 4.8 Hz), 4.79 (1H, d, J = 13.2 Hz), 3.54-3.50 (4H, m), 3.41 (1H, d, J = 12.4 Hz), 3.26-3.17 (2H, m), 3.01 (2H, q, J = 9.2 Hz), 2.69 (1H, t, J = 12.8 Hz), 1.90 (2H, d, J = 12.8 Hz), 1.81-1.77 (1H, m), 1.69 (3H, s), 1.67-1.57 (1H, m).

実施例６７
（１－シクロプロピル－３－メチルアゼチジン－３－イル）｛４－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン
実施例３４（４６ｍｇ）のエタノール（４．０ｍL）溶液に、（１－エトキシシクロプロポキシ）トリメチルシラン（７３ｍｇ）、酢酸（１３ｍｇ）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（４４ｍｇ）を加え６０℃で終夜攪拌した。反応溶液を室温に冷却し濃縮後、分取ＨＰＬＣで精製することで実施例６７（２２ｍｇ）を得た。
LC/MS ([M+H]+/Rt(min)): 368.2/1.68（測定条件Ｂ）
¹H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 8.58 (1H, dd, J = 4.4, 0.8 Hz), 7.79 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.50 (1H, dd, J = 8.0, 4.8 Hz), 4.81 (1H, d, J = 12.8 Hz), 3.53-3.50 (3H, m), 3.38-3.31 (2H, m), 3.25-3.12 (2H, m), 2.76-2.65 (1H, m), 1.89-1.84 (3H, m), 1.71-1.61 (2H, m), 1.59 (3H, s), 0.38-0.35 (4H, m).

試験例１：ＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞を用いた三次元培養での神経スフェロイドによるパーキンソン病病態（α－シヌクレイン凝集体蓄積）の再現試験
健常人由来ｉＰＳ細胞株（クローン名201B7,京都大学ｉＰＳ細胞研究所より入手）から樹立したＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異細胞を、StemFitAK03N培地（味の素社、Basic03）を用いて37℃、5%CO₂の条件で培養した。

ｉＰＳ細胞からPSC Neuronal Induction Medium（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製, cat#A1647801）を用いて神経幹細胞を誘導し、細胞ストックを作成した。

凍結保存した神経幹細胞を、培養培地中、37℃、5% CO₂の条件で培養した。神経幹細胞の培養培地としては、以下の組成のものを用いた。

神経幹細胞の培養培地組成
Neurobasal 培地（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製 2113049）
Advanced DMEM/F-12培地（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製 12634028）
Neural Induction Supplement（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製 A1647801）

神経幹細胞（10000 cells/well）を96穴Ｕ字プレート(サーモフィッシャーサイエンティフィック社製 cat#174929)に播種し、培養培地中、37℃、5% CO₂の条件で培養した。培養液は３～４日に１回、半量交換した。神経スフェロイドの培養培地としては、以下の組成のものを用いた。

BrainPhys Neuronal Medium (STEMCELL Technologies社製, cat#ST-05793)
NeuroCult SM1 Neuronal Supplement (STEMCELL Technologies社製, cat#05711)
N2 Supplement-A (STEMCELL Technologies社製, cat#07152)
20 ng/mL BDNF (Peprotech社製, cat#450－02)
20 ng/mL GDNF (Peprotech社製, cat#450－10)
1 mM dibutyryl cAMP (ナカライ社製, cat#11540－74)
200 nM ascorbic acid (ナカライ社製, cat#03420－52)

分化誘導した神経スフェロイドを上記培養培地から取り出し、1% TritionX-100（ナカライ社製, cat#12967－32）を添加したＴＢＳ溶液（ナカライ社製, cat#12748-31）を加え、超音波破砕機によりタンパク質を抽出した。

抽出したタンパク質についてα－シヌクレイン抗体（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製,cat#AHB0261）によるSimple Westernシステムを用いた非還元状態でのタンパク質解析（Protein Simple社製, cat#SM-W008）によりα－シヌクレイン凝集体量を測定し、分子量約300 kD付近で示される波形について定量評価した。

α－シヌクレイン凝集体は培養７日目から培養９日目にかけて急激に増加した。培養９日目では、α－シヌクレイン凝集体がＰＬＡ２Ｇ６変異ｉＰＳ細胞から作成した神経スフェロイドは、健常人ｉＰＳ細胞由来神経スフェロイドと比較して５倍以上の凝集体量を示した。培養９日目以降は緩慢な増加傾向を示した。結果を図１に示す。

試験例２：ＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞から作成した神経スフェロイドを用いたα－シヌクレイン凝集体蓄積抑制評価
（１）ヒトｉＰＳ細胞から神経細胞への分化誘導
PSC Neuronal Induction Medium（ThermoFisher社製, cat#A1647801）を用いてＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異細胞から神経幹細胞を誘導した。誘導した神経幹細胞から、三次元培養法を用いて神経スフェロイドを作製し、NeuroCult SM1 Neuronal Supplement、N2 Supplement-A、20 ng/mL BDNF、20 ng/mL GDNF、1mM dibutyryl cAMP、200 nM ascorbic acidを含むBrainPhys Neuronal Medium (STEMCELL Technologies社製, cat#ST-05793)を用いて維持した。培養液は分化誘導後２日目、４日目に半量交換した。
試験化合物を最終濃度の２倍濃度液になるように培養液で希釈して、分化誘導４日後の半量交換の際に、各wellに２倍濃度液を等量添加した。

（２）α－シヌクレイン凝集体量の評価
分化誘導９日後の神経スフェロイドから1% TritionX-100を添加したＴＢＳ溶液によりタンパク質を抽出し、α－シヌクレイン抗体（ThermoFisher社製,cat#AHB0261）によるSimple Westernシステムを用いたタンパク質解析（Protein Simple社製, cat#SM-W008）によりα－シヌクレイン凝集体量を測定した。
DMSO溶液を添加した神経スフェロイドの凝集体量を100%として、各試験化合物を添加した神経スフェロイドの凝集体量を測定した。代表的化合物添加時の凝集体量を表９に示す。

試験例３：ＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞から作成した神経スフェロイドを用いたα－シヌクレイン凝集体蓄積減少評価
（１）ヒトｉＰＳ細胞から神経細胞への分化誘導
PSC Neuronal Induction Medium（ThermoFisher社製, cat#A1647801）を用いてＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異細胞から神経幹細胞を誘導した。誘導した神経幹細胞から、三次元培養法を用いて神経スフェロイドを作製し、NeuroCult SM1 Neuronal Supplement、N2 Supplement-A、20 ng/mL BDNF、20 ng/mL GDNF、1 mM dibutyryl cAMP、200 nM ascorbic acidを含むBrainPhys Neuronal Medium (STEMCELL Technologies社製, cat#ST-05793)を用いて維持した。培養液は３～４日に１回、半量交換した。
試験化合物を最終濃度の２倍濃度液になるように培養液で希釈して分化誘導１０日後の半量交換の際に、各wellに２倍濃度液を等量添加した。

（２）α－シヌクレイン凝集体量の評価
分化誘導15日後の神経スフェロイドから1% TritionX-100を添加したＴＢＳ溶液によりタンパク質を抽出し、α－シヌクレイン抗体（ThermoFisher社製,cat#AHB0261）によるSimple Westernシステムを用いたタンパク質解析（Protein Simple社製, cat#SM-W008）によりα－シヌクレイン凝集体量を測定した。
各試験化合物を添加した神経スフェロイドの凝集体量を測定した。DMSO溶液を添加した神経スフェロイドの凝集体量を100%として、代表的化合物添加時の凝集体量のデータ（％）を表１０に示す。

試験例４：ＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞から作成したドパミン神経スフェロイドによるパーキンソン病病態（α－シヌクレイン凝集体蓄積）の再現試験
ドパミン神経誘導キット（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製, cat#A3147701）を用いてＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異細胞からドパミン神経前駆細胞を誘導し、細胞ストックを作成した。

凍結保存したドパミン神経前駆細胞を、Floor Plate Cell expansionキット(サーモフィッシャーサイエンティフィック社製、cat#A3165801)により、37℃、5% CO₂の条件で培養した。

まず、ドパミン神経前駆細胞（10000 cells/well）を96穴Ｕ字プレート(サーモフィッシャーサイエンティフィック社製 cat#174929)に播種し、培養培地中、37℃、5% CO₂の条件で培養した。培地交換は分化誘導後３、４日毎に半量交換した。ドパミン神経スフェロイドの培養培地としては、以下の組成のものを用いた。

BrainPhys Neuronal Medium (STEMCELL Technologies社製, cat#ST-05793)
Dopaminergic Neuron Maturation Supplement (サーモフィッシャーサイエンティフィック社製、cat#A3147401)
20 ng/mL BDNF (Peprotech社製, cat#450－02)
20 ng/mL GDNF (Peprotech社製, cat#450－10)
1 mM dibutyryl cAMP (ナカライ社製, cat#11540－74)
200 nM ascorbic acid (ナカライ社製, cat#03420－52)

分化誘導したドパミン神経スフェロイドを上記培養培地から取り出し、1% TritionX-100（ナカライ社製, cat#12967－32）を添加したＴＢＳ溶液（ナカライ社製, cat#12748-31）を加え、超音波破砕機によりタンパク質を抽出した。

抽出したタンパク質についてα－シヌクレイン抗体（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製, cat#AHB0261）によるSimple Westernシステムを用いた非還元状態でのタンパク質解析（Protein Simple社製, cat#SM-W008）によりα－シヌクレイン凝集体量を測定し、分子量約300 kD付近で示される波形について定量評価した。

α－シヌクレイン凝集体は培養１０日目から培養２１日目にかけて急激に増加した。培養２１日目では、α－シヌクレイン凝集体がＰＬＡ２Ｇ６変異ｉＰＳ細胞から作成したドパミン神経スフェロイドは、健常人ｉＰＳ細胞由来ドパミン神経スフェロイドと比較して５倍以上の凝集体量を示した。培養２１日目以降は緩慢な増加傾向を示した。結果を図２に示す。

試験例５：ＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞から作成したドパミン神経スフェロイドを用いたα－シヌクレイン凝集体蓄積抑制評価
（１）ヒトｉＰＳ細胞から神経細胞への分化誘導
ドパミン神経誘導キット（ThermoFisher社製, cat#A3147701）を用いてＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異細胞からドパミン神経前駆細胞を誘導した。誘導したドパミン神経前駆細胞から、三次元培養法を用いてドパミン神経スフェロイドを作製し、NeuroCult SM1 Neuronal Supplement、N2 Supplement-A,20 ng/mL BDNF、20 ng/mL GDNF、1 mM dibutyryl cAMP、200 nM ascorbic acidを含むBrainPhys Neuronal Medium (STEMCELL Technologies社製, cat#ST-05793)を用いて維持した。培養液は３～４日に１回、半量交換した。
試験化合物を最終濃度の2倍濃度液になるように培養液で希釈して、分化誘導２１日後の半量交換の際に、各wellに２倍濃度液を等量添加した。

（２）α－シヌクレイン凝集体量の評価
分化誘導２６日後のドパミン神経スフェロイドから1% TritionX-100を添加したＴＢＳ溶液によりタンパク質を抽出し、α－シヌクレイン抗体（ThermoFisher社製,cat#AHB0261）によるSimple Westernシステムを用いたタンパク質解析（Protein Simple社製, cat#SM-W008）によりα－シヌクレイン凝集体量を測定した。
各試験化合物を添加した神経スフェロイドの凝集体量を測定した。DMSO溶液を添加した神経スフェロイドの凝集体量を100%として、代表的化合物添加時の凝集体量のデータ（％）を表１１に示す。

試験例６：ＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞から作成したドパミン神経スフェロイドを用いた神経脆弱性の再現方法
（１）ヒトｉＰＳ細胞から神経細胞への分化誘導
ドパミン神経誘導キット（ThermoFisher社製, cat#A3147701）を用いてＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異細胞からドパミン神経前駆細胞を誘導した。誘導したドパミン神経前駆細胞から、三次元培養法を用いてドパミン神経スフェロイドを作製し、NeuroCult SM1 Neuronal Supplement、N2 Supplement-A、20 ng/mL BDNF、20 ng/mL GDNF、1 mM dibutyryl cAMP、200 nM ascorbic acidを含むBrainPhys Neuronal Medium (STEMCELL Technologies社製, cat#ST-05793)を用いて維持した。培養液は３～４日に１回、半量交換した。

（２）チロシン水酸化酵素量の評価
分化誘導２６日後のドパミン神経スフェロイドから1% TritionX-100を添加したＴＢＳ溶液によりタンパク質を抽出し、チロシン水酸化酵素抗体（Millipore社製,cat#AB152）によるSimple Westernシステムを用いたタンパク質解析（Protein Simple社製, cat#SM-W008）によりチロシン水酸化酵素量を測定した。結果を図３に示す。

試験例７：ＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞から作成したドパミン神経スフェロイドを用いた神経脆弱性の改善評価
（１）ヒトｉＰＳ細胞から神経細胞への分化誘導
ドパミン神経誘導キット（ThermoFisher社製, cat#A3147701）を用いてＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異細胞からドパミン神経前駆細胞を誘導する。誘導したドパミン神経前駆細胞から、三次元培養法を用いてドパミン神経スフェロイドを作製し、NeuroCult SM1 Neuronal Supplement、N2 Supplement-A、20 ng/mL BDNF、20 ng/mL GDNF、1 mM dibutyryl cAMP、200 nM ascorbic acidを含むBrainPhys Neuronal Medium (STEMCELL Technologies社製, cat#ST-05793)を用いて維持する。培養液は３～４日に１回、半量交換する。
試験化合物を最終濃度の２倍濃度液になるように培養液で希釈して、分化誘導２１日後の半量交換の際に、各wellに２倍濃度液を等量添加する。

（２）チロシン水酸化酵素量の評価
分化誘導２６日後のドパミン神経スフェロイドから1% TritionX-100を添加したＴＢＳ溶液によりタンパク質を抽出し、チロシン水酸化酵素抗体（Millipore社製,cat#AB152）によるSimple Westernシステムを用いたタンパク質解析（Protein Simple社製, cat#SM-W008）によりチロシン水酸化酵素量を測定する。

試験例８：ＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞から作成した神経スフェロイドを用いた神経細胞死の再現方法
（１）ヒトｉＰＳ細胞から神経細胞への分化誘導
ドパミン神経誘導キット（ThermoFisher社製, cat#A3147701）を用いてＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異細胞からドパミン神経前駆細胞を誘導した。誘導したドパミン神経前駆細胞から、三次元培養法を用いてドパミン神経スフェロイドを作製し、NeuroCult SM1 Neuronal Supplement、N2 Supplement-A、20 ng/mL BDNF、20 ng/mL GDNF、1 mM dibutyryl cAMP、200 nM ascorbic acidを含むBrainPhys Neuronal Medium (STEMCELL Technologies社製, cat#ST-05793)を用いて維持した。培養液は３～４日に１回、半量交換した。

（２）神経細胞死の評価
分化誘導３５日目から培養液中に10μMドパミンを添加し、分化誘導４０日後のドパミン神経スフェロイドから1% TritionX-100を添加したＴＢＳ溶液によりタンパク質を抽出し、cleaved caspase 3抗体（Cell singnaling Technology社製,cat#9664）によるSimple Westernシステムを用いたタンパク質解析（Protein Simple社製, cat#SM-W008）により神経細胞死量を測定した。結果を図４に示す。

試験例９：ＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞から作成した神経スフェロイドを用いた神経細胞死の抑制評価
（１）ヒトｉＰＳ細胞から神経細胞への分化誘導
ドパミン神経誘導キット（ThermoFisher社製, cat#A3147701）を用いてＰＬＡ２Ｇ６遺伝子変異細胞からドパミン神経前駆細胞を誘導する。誘導したドパミン神経前駆細胞から、三次元培養法を用いてドパミン神経スフェロイドを作製し、NeuroCult SM1 Neuronal Supplement、N2 Supplement-A、20 ng/mL BDNF、20 ng/mL GDNF、1 mM dibutyryl cAMP、200 nM ascorbic acidを含むBrainPhys Neuronal Medium (STEMCELL Technologies社製, cat#ST-05793)を用いて維持する。培養液は３～４日に１回、半量交換する。
試験化合物を最終濃度の２倍濃度液になるように培養液で希釈して、分化誘導３５日後の半量交換の際に、10μMドパミンと共に各wellに２倍濃度液を等量添加する。

（２）神経細胞死の評価
分化誘導４０日後のドパミン神経スフェロイドから1% TritionX-100を添加したＴＢＳ溶液によりタンパク質を抽出し、cleaved caspase 3抗体（Cell singnaling Technology社製,cat#9664）によるSimple Westernシステムを用いたタンパク質解析（Protein Simple社製, cat#SM-W008）により神経細胞死量を測定する。

試験例１０：ＧＢＡ１遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞を用いた三次元培養での神経スフェロイドによるパーキンソン病病態（α－シヌクレイン凝集体蓄積）の再現方法
健常人由来ｉＰＳ細胞株から樹立したＧＢＡ１遺伝子ホモ変異細胞を、StemFitAK03N培地（味の素社、Basic03）を用いて37℃、5% CO₂の条件で培養した。
ドパミン神経誘導キット（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製, cat#A3147701）を用いてＧＢＡ１遺伝子ホモ変異ｉＰＳ細胞からドパミン神経前駆細胞を誘導し、細胞ストックを作成した。

ドパミン神経前駆細胞（10000 cells/well）を96穴Ｕ字プレート(サーモフィッシャーサイエンティフィック社製 cat#174929)に播種し、培養培地中、37℃、5% CO₂の条件で培養した。培地交換は分化誘導後３、４日毎に半量交換した。ドパミン神経スフェロイドの培養培地としては、以下の組成のものを用いた。

α－シヌクレイン凝集体は培養21日目から培養40日目にかけて急激に増加し、培養４０日目において凝集体量は飽和に達し、それ以降は量に変化は認められなかった。結果を図５に示す。

試験例１１：ＧＢＡ１遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞から作成したドパミン神経スフェロイドを用いたα－シヌクレイン凝集体蓄積減少評価
（１）ヒトｉＰＳ細胞から神経細胞への分化誘導
ドパミン神経誘導キット（ThermoFisher社製, cat#A3147701）を用いてＧＢＡ１遺伝子変異細胞からドパミン神経前駆細胞を誘導した。誘導したドパミン神経前駆細胞から、三次元培養法を用いてドパミン神経スフェロイドを作製し、NeuroCult SM1 Neuronal Supplement、N2 Supplement-A、20 ng/mL BDNF、20 ng/mL GDNF、1 mM dibutyryl cAMP、200 nM ascorbic acidを含むBrainPhys Neuronal Medium (STEMCELL Technologies社製, cat#ST-05793)を用いて維持した。培養液は３～４日に１回、半量交換した。
試験化合物を最終濃度の２倍濃度液になるように培養液で希釈して、分化誘導４０日後の半量交換の際に、各wellに２倍濃度液を等量添加した。

（２）α－シヌクレイン凝集体量の評価
分化誘導４４日後のドパミン神経スフェロイドから1% TritionX-100を添加したＴＢＳ溶液によりタンパク質を抽出し、α－シヌクレイン抗体（ThermoFisher社製,cat#AHB0261）によるSimple Westernシステムを用いたタンパク質解析（Protein Simple社製, cat#SM-W008）によりα－シヌクレイン凝集体量を測定した。
各試験化合物を添加した神経スフェロイドの凝集体量を測定した。DMSO溶液を添加した神経スフェロイドの凝集体量を100%として、代表的化合物添加時の凝集体量のデータ（％）を表１２に示す。

試験例１２：ＧＢＡ１遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞を用いた三次元培養での神経スフェロイドによる同期発火異常の確認
健常人由来ｉＰＳ細胞株から樹立したＧＢＡ１遺伝子ホモ変異細胞を、StemFitAK03N培地（味の素社、Basic03）を用いて37℃、5% CO₂の条件で培養する。

ドパミン神経誘導キット（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製, cat#A3147701）を用いてＧＢＡ１遺伝子ホモ変異ｉＰＳ細胞からドパミン神経前駆細胞を誘導し、細胞ストックを作成する。

凍結保存したドパミン神経前駆細胞を、Floor Plate Cell expansionキット(サーモフィッシャーサイエンティフィック社製、cat#A3165801)により、37℃、5% CO₂の条件で培養する。

ドパミン神経前駆細胞（10000 cells/well）を96穴Ｕ字プレート(サーモフィッシャーサイエンティフィック社製 cat#174929)に播種し、培養培地中、37℃、5% CO₂の条件で培養する。培地交換は分化誘導後３、４日毎に半量交換する。ドパミン神経スフェロイドの培養培地としては、以下の組成のものを用いる。

BrainPhys Neuronal Medium(STEMCELL Technologies社製, cat#ST-05793)
Dopaminergic Neuron Maturation Supplement (サーモフィッシャーサイエンティフィック社製、cat#A3147401)
20 ng/mL BDNF (Peprotech社製, cat#450－02)
20 ng/mL GDNF (Peprotech社製, cat#450－10)
1 mM dibutyryl cAMP (ナカライ社製, cat#11540－74)
200 nM ascorbic acid (ナカライ社製, cat#03420－52)

分化誘導４０日目以降に培養液を半量除去し、蛍光カルシウムプローブ（モレキュラー・デバイス社製，商品名FLIPR Calcium 6 Assay Bulk Kit, cat#R8191）を含む測定用培地を残りの培地の等量添加し、３０分静置した後測定する。測定用培地は２０ｍＭＨｅｐｅｓ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製，cat#15630-080）、０．１％牛血清アルブミン（シグマアルドリッチ社製，cat#A9576）含有Ｈａｎｋ’ｓ緩衝液（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製，cat#14065-056）を用いる。撮影は一秒につき一フレーム取得する。

試験例１３：ＧＢＡ１遺伝子変異ヒトｉＰＳ細胞から作成したドパミン神経スフェロイドを用いた同期発火異常改善評価試験
（１）ヒトｉＰＳ細胞から神経細胞への分化誘導
ドパミン神経誘導キット（ThermoFisher社製, cat#A3147701）を用いてＧＢＡ１遺伝子変異細胞からドパミン神経前駆細胞を誘導する。誘導したドパミン神経前駆細胞から、三次元培養法を用いてドパミン神経スフェロイドを作製し、NeuroCult SM1 Neuronal Supplement、N2 Supplement-A、20 ng/mL BDNF、20 ng/mL GDNF、1 mM dibutyryl cAMP、200 nM ascorbic acidを含むBrainPhys Neuronal Medium (STEMCELL Technologies社製), cat#ST-05793)を用いて維持する。培養液は３～４日に１回、半量交換する。
試験化合物を最終濃度の２倍濃度液になるように培養液で希釈して、分化誘導４０日後の半量交換の際に、各wellに２倍濃度液を等量添加した。

（２）同期発火の評価
分化誘導４４日後のドパミン神経スフェロイドの培養液を半量交換し、蛍光カルシウムプローブ（モレキュラー・デバイス社製,商品名FLIPR Calcium 6 Assay Bulk Kit, cat#R8191）を含む測定用培地を残りの培地の等量添加し、30分静置した後測定する。測定用培地は２０ｍＭＨｅｐｅｓ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製，cat#15630-080）、０．１％牛血清アルブミン（シグマアルドリッチ社製，cat#A9576）含有Ｈａｎｋ’ｓ緩衝液（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製，cat#14065-056）を用いる。撮影は一秒につき一フレーム取得する。

本発明化合物は、α－シヌクレイン凝集体の蓄積抑制または減少作用を示すことから、脳内タンパク質の異常凝集体の蓄積抑制または減少作用により特徴づけられる中枢神経系疾患の治療剤および／または予防剤として有用である。また、本発明は、神経スフェロイドによるパーキンソン病病態の再現方法、およびそれを用いたα－シヌクレイン凝集体量の評価方法として有用である。

以上で説明したように、式（１）で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩は、α－シヌクレイン凝集体抑制または減少作用を示す。したがって、式（１）で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩は、α－シヌクレイン凝集体が関与するパーキンソン病やレビー正体型認知症などの中枢神経疾患に対する治療剤及び／又は予防剤として有用である。

Claims

以下の化合物群から選択される化合物またはその製薬学的に許容される塩：
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン、
｛４－［５－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝（３－メチルオキセタン－３－イル）メタノン、
（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［４－メチル－６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン、
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン、および
（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノン。
化合物が（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノンである、請求項１に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩。
化合物が（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノンである、請求項１に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩。
化合物が｛４－［５－フルオロ－６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝（３－メチルオキセタン－３－イル）メタノンである、請求項１に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩。
化合物が（３－メチルオキセタン－３－イル）｛４－［４－メチル－６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノンである、請求項１に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩。
化合物が（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノンである、請求項１に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩。
化合物が（１，３－ジメチルアゼチジン－３－イル）｛４－［５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］ピペリジン－１－イル｝メタノンである、請求項１に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩。