JPS5950285B2 - わさび幼苗の増大法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はわさび幼苗の大量育種法に関する。

従来、わさび裁培法に於ては、わさびの幼苗を大量に育
種することは、わさびの増殖率が低いだめ極めて困難で
あった。

本発明者等は、この点を改良するため鋭意研究を進めた
結果、ワサビ植物の組織のカルス化及び再分化を行うこ
とにより、ワサビの幼苗を大量に増大する方法を発明す
るに至った。

即ち本発明はワサビア属に属するアブラナ科の植物の組
織を２０℃以下の低温でカイネチン、２．４−Ｄ及びサ
イアミンを含有するカルス誘導用培地で培養し、カルス
を誘導する第１工程と、誘導カルスを増殖用培地で増殖
しカルスとする第２工程及びカルスをココナツミルクを
含有する再分化用培地で培養し再分化（発根）シ、これ
を育ててワサビ幼苗とする第３工程の３工程からなるワ
サビ幼苗の増大方法である。

現在様々の植物組織のカルス培養が行われているが、ワ
サビ植物組織のカルス誘導は未だなされていない。

本発明者等は、ワサビ植物組織のカルスが出来れば、と
のカルスを再分化させることによりワサビ幼苗を大量に
増大できるとの着想に基づいて種々研究を重ねた結果、
ワサビア属の植物組織を２０℃以下の低温、望ましくは
４０〜１５°Ｃの低温で、カイネチン、２．４−Ｄ及び
サイアミンを含有するカルス誘導用培地で培養すると２
・３ケ月後にカルスが誘導されることを発見した。

本発明はこの発見を基にしてなされたものである。

カルス誘導用培地は糖、無機塩及びミョーイノシトール
から成る基本培地に、カイネチン、２゜４Ｄ。

サイアミン及び酵母エキスを加えたものが使用されるが
、この基本培地のみではカルスの誘導は著しく困難であ
る。

基本培地はグルコース、シュークロース等の糖と次に示
すような無機塩類から成る通常の植物組織培養に用いら
れるものである。

使用される無機塩類： カルスの誘導に用いられるワサビの組織としてはワサビ
幼苗の組織がすぐれている。

これは通常のワサビ幼苗の無菌組織を用いれば良いが、
安定した品質のものを随意に得るには休眠種子を発芽・
育成したものが望ましい。

この方法を採用すると第１工程は次のようになる。

第１工程： ワサビ休眠種子をギベレリンを含む水溶液に数日間浸漬
し、休眠覚醒処理を行い次に９５％エタノール洗浄、０
．６％アンチホルミンに浸漬し種子の殺菌処理を行う。

ついでこれを洗浄後、通常の糖、無機塩類培地上に播種
し、冷暗所で培養し発芽せしめ数ケ月すると幼苗が得ら
れる。

次にこの幼苗を前記カルス誘導培地に置床し１５℃℃の
低温で暗所で数ケ月培養を続けるとカルスの誘導が始ま
る。

第１工程のカルスの誘導は２０℃以下の温度で行う必要
が有り、１０〜１５℃で行うことが望ましく３０℃では
カルスは誘導されない。

第２工程のカルスの増殖工程は、第１工程で得られる誘
導カルスをカルス増殖用培地で好気的に液体培養又は固
体培養することにより増殖カルス（培養細胞）とする工
程である。

この工程で使用されるカルスの増殖用培地は前述のカル
ス誘導用培地と同じものでも良いが、ココナツミルクは
カルスの増殖を促進させるので、これにココナツミルク
を１０〜２０％添加したものが望ましい。

カルスの増殖温度は１０〜１５°Ｃが望ましく、低温の
場合、カルスは例え凍結しても死滅することはなく単に
増殖が遅れるのみであるが、３０°Ｃで培養するとカル
スは黒変し増殖がとまる。

従って第２工程も第１工程同様２０℃以下の温度で行わ
ねばならない。

カルスの増殖培養は好気的条件で行うことが望ましく、
培養法は固体培養法、液体培養法のいずれでも良いが、
工業的見地からは液体培養法が望ましい。

この液体培養法で増殖したカルスは培養細胞と呼ばれ、
わさび様風味を有し、培養液から分離・採取後必要に応
じて乾燥・粉末化することによりわさび様風味料として
使用される。

このようにして得られたカルスから実際、農家のワサビ
栽培用のワサビ幼苗とするだめには、カルスを再分化せ
しめる第３工程が必要である。

ワサビカルスは、通常の植物カルスの再分化に用いられ
る培地では再分化は困難である。

そこで再分化のだめの有効成分を調べたところ、通常の
植分カルス再分化培地にココナツミルクを添加すること
で容易に再分化することができた。

即ち第３工程のワサビ再分化工程は、糖・無機塩類から
なる基本培地にカイネチン又はベンジルアデニン等を添
加した通常の植物カルス再分化培地にココナツミルクを
１０〜２０％添加したワサビカルス再分化培地に、第２
工程で得られる増殖カルス（培養細胞）を置床し２０℃
以下の温度で培養し出芽・発根せしめ（置床から約６ケ
月後に芽が形成され同時に発根する）・さらに同条件下
で２〜３ケ月間培養して幼苗を得る工程である。

本発明で得られるワサビ幼苗は、親植物と同様の辛味を
有し、実際に農家の畑地で常法に従い栽培することによ
り全て親植物と同様の辛味を有するワサビ植物が得られ
、農家のワサビ栽培用の幼苗に供せられる。

実施例 Ｉ Ｗａｓａｂｉａ ｊａｐ’ｏｎｉｃａ Ｍａｔｓｕ
ｍｕｒａに属するアブラナ科のワサビ植物でダルマ系株
の市販種子１．Ｏｌを２０ｒｎｌのジベレリンＡ３溶液
（濃度１００ｐ１Ｎ＋１）に、１０℃の冷暗所で４日間
浸漬して種子休眠覚醒処理を行い、この種子を９５％エ
タノールで一回洗浄し、さらに０．６％アンチホルミン
溶液５０ＷＬｌに漬け３０分間軽く振盪して殺菌処理を
行った。

殺菌処理後滅菌水で３回洗浄し、この洗浄種子１５粒を
表−１に示す基本培地（寒天プレート培地）上に播種し
、１０℃の冷暗所に２ケ月間放置した。

その結果約１．０ｃｍの幼苗が１０本得られた。

次にこれらをカイネチン、０．２７７２！ｉｌ／１１ν
２．４−Ｄｌ、０■／！２サイアミン・ＨＣ／１．０〜
／！２酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ社製’）４．０？／ＩＩ
を夫夫表−１の基本培地に添加したカルス誘導用の試験
管寒天培地上に夫夫置床し、１０℃の冷暗所で３ケ月間
培養を行うと、カルスの誘導が始まる。

更にこれらを６ケ月間同条件下で培養をつづけると、一
片が約１０朋のカルス片（一次カルスと称スる）が得ら
れた。

このカルス片６ケを前記カルス誘導用寒天培地上で更に
継代培養し、カルスを増殖せしめ、１５０？（湿重量）
の増殖カルス（二次カルス）を得た。

二次カルスを一片約１０闘のカルス片に細分した後、こ
れら細分二次カルスを表−１の基本培地にココナツミル
クを１５０ ｙ／ｊ！ｌｓカイネチン１．０■／！を夫
夫添加した再分化用培地（寒天プレート培地）に移植し
、１０℃の冷暗所で再分化培養を行った。

その結果、約６ケ月後に約１１０本の芽が形成され同時
に発根が始まった。

更にこのまま２ケ月間培養することにより１１０本の幼
苗が得られた。

これら幼苗を任意選出し、畑地で常法に従い裁培したと
ころ、通常の農家で得られているワサビ植物とほぼ同じ
品質のワサビ親植物が得られた。

実施例 ２ 実施例１と同様の方法で得られた増殖カルス（二次カル
ス）約２．４Ｆ−（湿潤重量）を、カルス増殖用液体培
地（組成はカルス誘導用培地と同一）でフラスコ振盪培
養を行った。

このフラスコ振盪培養は、フラスコ張込量； ２０ｍｌ
／ ５００ｙｒｔｌ容フラスコ、振巾；７Ｃｆｆｌ、１
０５０ｓ ｃ ｉ １Ｆｍ、の条件の下に１０℃の冷暗
所で１ケ月間行つだ。

得られた培養液から培養細胞を分離・採取したところ湿
重量１８．０７−のワサビ培養細胞が得られた。

これはワサビ様の風味を有していた。

このようにして得られたワサビ培養細胞１０１（湿重量
）を前記カルス再分化寒天培地（但し、カイネチンの代
りにベンジルアデニン１．０■／１使用）上に置床し、
実施例１と同様の方法で再分化せしめた結果、９本の幼
苗が得られた。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ワサビア属に属するアブラナ科の植物組織をカイネ
   チン、２．４〜Ｄ及びサイアミンを含有するカルス誘導
   用培地を用いて２０℃以下の低温で培養し、カルスを誘
   導・増殖せしめ、該増殖カルスをココナツミルク及びカ
   イネチンを含有する再分化培地で再分化し幼苗とせしめ
   ることを特徴とするわさび幼苗の増大方法。