JPS603473B2 - Culture medium for tissue culture - Google Patents
Culture medium for tissue cultureInfo
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- JPS603473B2 JPS603473B2 JP52019444A JP1944477A JPS603473B2 JP S603473 B2 JPS603473 B2 JP S603473B2 JP 52019444 A JP52019444 A JP 52019444A JP 1944477 A JP1944477 A JP 1944477A JP S603473 B2 JPS603473 B2 JP S603473B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は改良された組織培養用培養液、更に詳細には血
清を全く含むことなく組織培養細胞を増殖せしめること
のできる組織培養用培養液に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to an improved tissue culture medium, and more particularly to a tissue culture medium that is capable of growing tissue culture cells without containing any serum.
近年、組織培養法は、医学、生物学を初めウイルス学、
生イｂ学、免疫学、遺伝学および細胞生物学の分丹野、
さらには環境変異原物質のスクリーニングテスト等の分
Ｍ野で不可欠とされている技法である。In recent years, tissue culture methods have been used in medicine, biology, virology,
Department of biology, immunology, genetics and cell biology,
Furthermore, it is a technique that is considered indispensable in fields such as screening tests for environmental mutagens.
現在、組織培養にあたっては、種々のアミノ酸、各種ビ
タミン、塩類、ブドウ糖、有機酸を含む培地、競中特に
イーグルＭＥＭ培地、（ＨＥａｇｅ，１９５９）に動物
血清を約１０％添加したものが培養液として使用されて
いる。Currently, for tissue culture, culture media containing various amino acids, various vitamins, salts, glucose, and organic acids, especially Eagle's MEM medium (HEage, 1959), with approximately 10% animal serum added are used as culture media. It is used.
しかし、従来の培養液は細胞増殖のために血清の添加を
必須とするものであるが、血清中には極々の抗体や細胞
増殖阻害物質が存在し、免疫学を初めとする各分野にお
ける組織塔養成積に不都合な結果を惹起することが知ら
れている。従って、従来から血清を添加することなく細
胞の増殖を行うことのできる培養液の開発が所望され、
多くの研究がなされているが未だ満足なものは提供され
ていない。そこで、本発明者は斯る匁点を解決せんとゥ
シ血清アルブミン画分（コーンの血清画分Ｖ）（以下既
Ａと称する）と高級脂肪酸を含む培養液の細胞増殖作用
について種々研究を重ねていたところ、これにポリエチ
レンィミンを添加すれば細胞増殖作用が著しく増大し、
ＢＳＡの量を極めて少量にすることができることを見出
し、本発明を完成した。However, conventional culture media require the addition of serum for cell growth, but serum contains extremely high levels of antibodies and cell growth inhibitors, and is used in various fields such as immunology. It is known that this causes unfavorable results in tower cultivation. Therefore, it has been desired to develop a culture solution that can grow cells without adding serum.
Many studies have been conducted, but nothing satisfactory has been provided yet. Therefore, in an attempt to solve this momme point, the present inventor conducted various studies on the cell proliferation effect of a culture solution containing a bovine serum albumin fraction (Cohn's serum fraction V) (hereinafter referred to as A) and a higher fatty acid. When polyethyleneimine was added to this layer, the cell proliferation effect was significantly increased.
The present invention was completed based on the discovery that the amount of BSA can be reduced to an extremely small amount.
従って、本発明は、ゥシ血清アルブミン画分およびポリ
エチレンイミンを含有する細細織培養用培養液を提供せ
んとするものである。Accordingly, the present invention aims to provide a culture medium for culturing fine tissue containing a bovine serum albumin fraction and polyethyleneimine.
本発明の培養液は、イーグルＭＥＭ培地に更にピルビン
酸ナトリウム（１１仇夕／そ‐‐‐‐以下単位は省略す
る）、ロイコポリンカルシウム塩（１）、チミジン（２
）、プトレツシン塩酸塩（０．１）、デオキシシチジン
（０．０３）、デオキシアデノシン（１）、６，８ージ
ハイドロオキシブリン（０．３）グリタミン（２舵）、
グルコース（２０００）、アスパラギン・１水塩（１５
）、グリシン（１５）、セリン（２１）、ィノシトール
（１２）、童酒石酸コリン（２９）、硫酸第１鉄・７水
塩（０．８）、硫酸亜鉛・７水塩（０．０２９）、塩化
カルシウム（１００）、インシュリン結晶（１）、コレ
ステロール（１）、リノール酸メチルェステル（３）、
オレィン酸メチルェステル（３）、プロピレングリコ−
ル（２の【）、ビオチン（０．０２）、コハク酸（７５
）、コハク酸ナトリウム（１００）を加えた基礎培地を
用いるのが最も良い結果を与える。The culture solution of the present invention is made of Eagle MEM medium, sodium pyruvate (11 kyu/so--- units are omitted below), leukoporin calcium salt (1), thymidine (2
), putrescine hydrochloride (0.1), deoxycytidine (0.03), deoxyadenosine (1), 6,8-dihydroxybulin (0.3), glitamine (2 rudders),
Glucose (2000), asparagine monohydrate (15
), glycine (15), serine (21), inositol (12), choline tartrate (29), ferrous sulfate heptahydrate (0.8), zinc sulfate heptahydrate (0.029), Calcium chloride (100), insulin crystals (1), cholesterol (1), linoleic acid methyl ester (3),
Oleic acid methyl ester (3), propylene glycol
(2), biotin (0.02), succinic acid (75
), a basal medium supplemented with sodium succinate (100) gives the best results.
当該基礎塔地に加えられたポリエチレンィミンは、その
平均分子量が約５００００のものが好ましく、その添加
量は１〜１．２の９／ぐが好ましい。The polyethyleneimine added to the base material preferably has an average molecular weight of about 50,000, and the amount added is preferably 1 to 1.2 9/g.
またＢＳＡは２０〜３００の９／その極めて少ない量で
充分である。次に実施例を挙げて説明する。Further, BSA is sufficient in an extremely small amount of 9/20 to 300. Next, an example will be given and explained.
実施例
下記の基礎培地１のこ既ＡＯ．０１％およびポリエチレ
ンィミン塩酸塩（分子量約５万）０．３２脚を添加した
培養液は、第１図にみられる如く、ポリエチレンィミン
１．０〜１．物ｃを加えたものはラット腹鰹内培養吉田
肉腫細胞に対して、ＢＳＡＩ％を含む基礎培地（イーグ
ルＭＥＭ培地に牛血清１０％添加した培養液に相当する
）と同等またはそれ以上の増殖促進作用を示した。Example The following basal medium 1 was prepared using AO. 01% and polyethyleneimine hydrochloride (molecular weight approximately 50,000) (molecular weight approximately 50,000). As shown in FIG. The addition of substance C promotes the growth of Yoshida sarcoma cells cultured in rat abdominal bonito as much as or more than the basal medium containing BSAI% (equivalent to Eagle MEM medium with 10% bovine serum added). The effect was shown.
尚第１図は、基礎塔地に０．０１％ＢＳＡおよび各種塩
基性ポリマーを添加したときの細胞の増殖作用を示すも
ので、図中ＰＯはポリ−Ｌーオルニチン、ＰＬはポリー
Ｌ−リジン、ＰＡはポリ−Ｌ−アルギニン、ＰＥＩはポ
リエチレンィミンを表わす。Figure 1 shows the cell proliferation effect when 0.01% BSA and various basic polymers are added to the base material. In the figure, PO is poly-L-ornithine, PL is poly-L-lysine, PA represents poly-L-arginine, and PEI represents polyethyleneimine.
基礎培地処方（無表示のものはの９′〆）：塩化ナトリ
ウム（６８００．００）、塩化カリウム（４００．００
）、リン酸二水素ナトリウム（１１５．００）、硫酸マ
グネシウム（９３．５０）、塩化カルシウム（３００．
００）、硫酸第一鉄・７水塩（０．８０）、硫酸亜鉛・
７水塩（０．０２９）、Ｌーアルギニン塩酸塩（１２６
．００）、Ｌ−システイン塩酸塩、（３１．４０）、Ｌ
ーチロシン（３６００）、Ｌーヒスチジン塩酸塩・１水
素（４２．００）、Ｌーイソロイシン（５２．００）、
Ｌ−ロイシン（５２．００）、Ｌ−リジン塩酸塩（７３
．００）、Ｌ−メチオニン（１５．００）、Ｌーフエニ
ルアラニン（３２．００）、Ｌースレオニン（４８．０
０）、Ｌ−トリプトフアン（１０．００）、Ｌ−バリン
（４６．００）、ダリシン（１５．００）、Ｌーセリン
（２１．００）、Ｌ−アスパラギン・１水塩（１５．０
０）「 Ｌ−グルタミン（５８４．００）、車酒石酸コ
リン（３０．８０）、藁酸（１．００）、ｉーイノシト
ール（２．００）、ニコチン酸アミド（１．００）、パ
ントテン酸カルシウム（１．００）、塩酸ピリドキサー
ル（１．００）、リポフラビソ（０．１０）、塩酸チア
ミン（１．００）、ロイコボリンカルシウム塩（１．０
０）、ピオチン（０．０２）、ブドウ糖（３０００．０
０）、ピルビン酸ナトリウム（１１０．００）、コハク
酸（７５．００）、コハク酸ナトリウム（１００．００
）、チミジン（２．００）、プトレツシン塩酸塩（０．
１０）、デオキシシチジン（０．０３）、デオキシアデ
ノシン（１．００）、６，８ージハイドロオキシプリン
（０．３０）、インシュリン結晶（１．００）、コレス
テロール（１．００）、ＩＪ／ール酸メチルェステル（
３．００）、オレィン酸メチルェステル（３．００）、
プロピレングリコール（２．００柵／そ）、フェノール
レッド（３．００）、カナマイシン（６０．００）。Basal medium prescription (unlabeled is 9'): Sodium chloride (6800.00), potassium chloride (400.00)
), sodium dihydrogen phosphate (115.00), magnesium sulfate (93.50), calcium chloride (300.00).
00), ferrous sulfate heptahydrate (0.80), zinc sulfate
Heptahydrate salt (0.029), L-arginine hydrochloride (126
．． 00), L-cysteine hydrochloride, (31.40), L
-Tyrosine (3600), L-histidine hydrochloride monohydrogen (42.00), L-isoleucine (52.00),
L-leucine (52.00), L-lysine hydrochloride (73
．． 00), L-methionine (15.00), L-phenylalanine (32.00), L-threonine (48.0)
0), L-tryptophan (10.00), L-valine (46.00), dalicin (15.00), L-serine (21.00), L-asparagine monohydrate (15.0)
0) "L-glutamine (584.00), choline bitartrate (30.80), strawic acid (1.00), i-inositol (2.00), nicotinamide (1.00), calcium pantothenate ( 1.00), pyridoxal hydrochloride (1.00), lipoflaviso (0.10), thiamine hydrochloride (1.00), leucovorin calcium salt (1.0
0), piotin (0.02), glucose (3000.0
0), sodium pyruvate (110.00), succinic acid (75.00), sodium succinate (100.00)
), thymidine (2.00), putretsucine hydrochloride (0.
10), deoxycytidine (0.03), deoxyadenosine (1.00), 6,8-dihydroxypurine (0.30), insulin crystals (1.00), cholesterol (1.00), IJ/ Methyl acid ester (
3.00), oleic acid methyl ester (3.00),
Propylene glycol (2.00/s), phenol red (3.00), kanamycin (60.00).
第１図は、塩基性ポリマーの添加と組織培養細胞の増殖
作用との関係を示す。
第１図FIG. 1 shows the relationship between the addition of a basic polymer and the proliferation effect of tissue culture cells. Figure 1
Claims (1)
を含有することを特徴とする組織培養用培養液。 ２ ポリエチレンイミンが平均分子量約５００００のも
のである特許請求の範囲第１項記載の組織培養用培養液
。 ３ ポリエチレンイミンの含有量が１．０〜１．２ｍｇ
／ｌである特許請求の範囲第１項記載の組織培養用培養
液。[Scope of Claims] 1. A tissue culture medium containing a bovine serum albumin fraction and polyethyleneimine. 2. The tissue culture medium according to claim 1, wherein the polyethyleneimine has an average molecular weight of about 50,000. 3 Content of polyethyleneimine is 1.0 to 1.2 mg
The culture solution for tissue culture according to claim 1, which is /l.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52019444A JPS603473B2 (en) | 1977-02-24 | 1977-02-24 | Culture medium for tissue culture |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52019444A JPS603473B2 (en) | 1977-02-24 | 1977-02-24 | Culture medium for tissue culture |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS53104788A JPS53104788A (en) | 1978-09-12 |
| JPS603473B2 true JPS603473B2 (en) | 1985-01-28 |
Family
ID=11999466
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP52019444A Expired JPS603473B2 (en) | 1977-02-24 | 1977-02-24 | Culture medium for tissue culture |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS603473B2 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5774085A (en) * | 1980-10-25 | 1982-05-10 | Ajinomoto Co Inc | Culture medium for cells originating from lymphocytes |
-
1977
- 1977-02-24 JP JP52019444A patent/JPS603473B2/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS53104788A (en) | 1978-09-12 |
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