JPS606485B2 - 落射型螢光測光顕微鏡 - Google Patents
落射型螢光測光顕微鏡Info
- Publication number
- JPS606485B2 JPS606485B2 JP15944877A JP15944877A JPS606485B2 JP S606485 B2 JPS606485 B2 JP S606485B2 JP 15944877 A JP15944877 A JP 15944877A JP 15944877 A JP15944877 A JP 15944877A JP S606485 B2 JPS606485 B2 JP S606485B2
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- Japan
- Prior art keywords
- light
- wavelength
- excitation
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- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Microscoopes, Condenser (AREA)
- Spectrometry And Color Measurement (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は落射型の蜜光側光顕微鏡に関し、特に試料の励
起波長スペクトルを求める際の装置関数を除去した落射
型蜜光側光顕微鏡に関する。
起波長スペクトルを求める際の装置関数を除去した落射
型蜜光側光顕微鏡に関する。
蟹光顕微鏡が広く一般に行き渡った今日、マクロの分光
技術の発達と相まって、顕微鏡レベルでの蟹光の発光強
度や蟹光波長スペクトルあるいは励起波長スペクトルを
求め、物質や蟹光色素の同定判定、鱗折を行なう顕微綾
光側光技術が盛んに用いられるようになってきた。この
ような顕徴蟹光側光技術に用いられる落射型蟹光側光顕
微鏡を第１図によって説明する。第１図において、１は
光源、２は励起側モノクロメー夕、３はダィクロイック
ミラ−、４は対物レンズ、５はステージ、６は試料、７
は顕微鏡の光路中に挿脱できる観察用プリズム、８は後
眼レンズ、９は蜜光側モノクロメータ、１０はフオトマ
ル等で構成される検知器「 １１は記録計である。この
ような顕微鏡において試料６の励起波長スペクトルを求
めるには、観察用プリズム７を光路中に挿入して視野を
決め、その後観察用プリズム７を光路から取外し、蟹光
側モノクロ〆−夕９を試料６の最大蟹光波長近傍のある
波長入Ｆに設定し「励起側モノクロメータ２を走査する
。この時、検知器１０から得られるスペクトルＳ，入は
、顕微鏡の各要素の有する波長特性の影響である装置関
数と試料６の蟹光波長スペクトルとの積で与えられる。
蟹光側モノクロメータ９は、試料６からの蟹光のうち波
長入Ｆの光東のみしか透過しないから、試料６からの蟹
光に対する対物レンズ４、ターーィクロィツクミラー３
、蟹光側モノクロメータ９、検知器１０の波長特性は考
える必要がない。それ故、装置関数としては励起光東に
関係する光源１、励起側モノクロメー夕２、ダィクロィ
ックミラ−３、対物レンズ４の波長特性を考えればよい
。いま励起光東の波長入に対する光源１、励起側モノク
ロメー夕２、ダィクロィックミラー３、対物レンズ４の
波長特性をそれぞれＬ入、Ｍ，入トＢＸ「 ０入とすれ
ば、検知器１０で得られるスペクトルＳ，入と試料６の
励起波長スペクトルＳＴ入Ｆ入との間には次式（１｝が
成立する。ＳＩ入＝Ｌ人■ＭＩ入・ＳＴ人Ｆ入川川”【
１）すなわち、上述の従来技術では検知器１０から得ら
れるスペクトルＳ，入は「試料６の励起波長スペクトル
ＳＴふ入の外に光源亀〜励起側モノクロメータ２、ダィ
クロイックミラー３、対物レンズ４の波長特性を含んだ
値となってしまう。
技術の発達と相まって、顕微鏡レベルでの蟹光の発光強
度や蟹光波長スペクトルあるいは励起波長スペクトルを
求め、物質や蟹光色素の同定判定、鱗折を行なう顕微綾
光側光技術が盛んに用いられるようになってきた。この
ような顕徴蟹光側光技術に用いられる落射型蟹光側光顕
微鏡を第１図によって説明する。第１図において、１は
光源、２は励起側モノクロメー夕、３はダィクロイック
ミラ−、４は対物レンズ、５はステージ、６は試料、７
は顕微鏡の光路中に挿脱できる観察用プリズム、８は後
眼レンズ、９は蜜光側モノクロメータ、１０はフオトマ
ル等で構成される検知器「 １１は記録計である。この
ような顕微鏡において試料６の励起波長スペクトルを求
めるには、観察用プリズム７を光路中に挿入して視野を
決め、その後観察用プリズム７を光路から取外し、蟹光
側モノクロ〆−夕９を試料６の最大蟹光波長近傍のある
波長入Ｆに設定し「励起側モノクロメータ２を走査する
。この時、検知器１０から得られるスペクトルＳ，入は
、顕微鏡の各要素の有する波長特性の影響である装置関
数と試料６の蟹光波長スペクトルとの積で与えられる。
蟹光側モノクロメータ９は、試料６からの蟹光のうち波
長入Ｆの光東のみしか透過しないから、試料６からの蟹
光に対する対物レンズ４、ターーィクロィツクミラー３
、蟹光側モノクロメータ９、検知器１０の波長特性は考
える必要がない。それ故、装置関数としては励起光東に
関係する光源１、励起側モノクロメー夕２、ダィクロィ
ックミラ−３、対物レンズ４の波長特性を考えればよい
。いま励起光東の波長入に対する光源１、励起側モノク
ロメー夕２、ダィクロィックミラー３、対物レンズ４の
波長特性をそれぞれＬ入、Ｍ，入トＢＸ「 ０入とすれ
ば、検知器１０で得られるスペクトルＳ，入と試料６の
励起波長スペクトルＳＴ入Ｆ入との間には次式（１｝が
成立する。ＳＩ入＝Ｌ人■ＭＩ入・ＳＴ人Ｆ入川川”【
１）すなわち、上述の従来技術では検知器１０から得ら
れるスペクトルＳ，入は「試料６の励起波長スペクトル
ＳＴふ入の外に光源亀〜励起側モノクロメータ２、ダィ
クロイックミラー３、対物レンズ４の波長特性を含んだ
値となってしまう。
本発明は「試料の励起波長スペクトルを求める際に、検
知器からの信号に含まれる装置関数を除去し、試料の励
起波長スペクトルのみを取り出すことのできる落射型の
蟹光側光顕微鏡の提供を目的とする。
知器からの信号に含まれる装置関数を除去し、試料の励
起波長スペクトルのみを取り出すことのできる落射型の
蟹光側光顕微鏡の提供を目的とする。
以下第２図に基づいて本発明の実施例を説明する。
クセノソランプ等の光源２黄からの光東は励起側モノク
ロ〆山夕２２へ入射する。
ロ〆山夕２２へ入射する。
励起側モノクロメータ２２は光源２１からの入射光東の
うち「あらかじめ設定した波長の光東のみを選択して射
出する。励起側モノクロメータ２２から射出した光東は
、ダィクロィックミラー２３で反射され、対物レンズ２
４を透過してステ−ジ２５上の被測定物２６を照明する
。被測定物２６からの光東は、対物レンズ２４、によっ
てダィクロィックミラ−２３を透過してスリット２７上
に集光する。スリット２７に設けたピンホールを透過し
た光東は蟹光側モノクロメータ２９に入射する。蟹光側
モノクロメータ２９はあらかじめ設定した波長の光東の
みを選択して射出する。蟹光側モノクロメータ２９を射
出した光東は検知器３川こよって、その光強度に比例し
た電気信号に変えられる。スイッチＳＷは検知器３０か
らの信号を割算回路３１の一方の入力端子ａもしくは記
憶回路３２の入力端子ｂに選択的に印加する。割算回路
３１の他方の入力端子ｃには記憶回路３２から読み出さ
れた信号が印加される。記憶回路３２からの信号の読み
出し‘ま、同期手段３３からの信号によって行なわれる
。割算回路３１は両入力信号の比をとり、記録計３４を
駆動する。測定は以下のように行なう。
うち「あらかじめ設定した波長の光東のみを選択して射
出する。励起側モノクロメータ２２から射出した光東は
、ダィクロィックミラー２３で反射され、対物レンズ２
４を透過してステ−ジ２５上の被測定物２６を照明する
。被測定物２６からの光東は、対物レンズ２４、によっ
てダィクロィックミラ−２３を透過してスリット２７上
に集光する。スリット２７に設けたピンホールを透過し
た光東は蟹光側モノクロメータ２９に入射する。蟹光側
モノクロメータ２９はあらかじめ設定した波長の光東の
みを選択して射出する。蟹光側モノクロメータ２９を射
出した光東は検知器３川こよって、その光強度に比例し
た電気信号に変えられる。スイッチＳＷは検知器３０か
らの信号を割算回路３１の一方の入力端子ａもしくは記
憶回路３２の入力端子ｂに選択的に印加する。割算回路
３１の他方の入力端子ｃには記憶回路３２から読み出さ
れた信号が印加される。記憶回路３２からの信号の読み
出し‘ま、同期手段３３からの信号によって行なわれる
。割算回路３１は両入力信号の比をとり、記録計３４を
駆動する。測定は以下のように行なう。
まずステージ２５上の被測定物としてローダミンＢ３ｇ
′そエチレングリコール溶液を用いる。ローダミンＢ３
ｇ′そエチレングリコール溶液は励起光東の波長（ほぼ
３０価ｍ〜６０仇ｍ）にかかわらず蟹光の発光効率の一
定な蟹光物質である。このローダミンＢ聡／そエチレン
グリコール溶液は、周知のマイクロセルに入れてステー
ジ上に教壇される。この状態で蟹光側モノクロメーク２
９を試料の最大蟹光波長近傍のある値入Ｆに設定しト励
起側モノクロメータ２２を走査する。この時、スイッチ
ＳＷは端子ｂに接続されている。励起側モノクロメー夕
２２の設定波長を入．とし光源２１、励起側モノクロメ
ータ２２「ダィクロィックミラ−２３、対物レンズ２４
の波長特性をそれぞれＬ＾，，Ｍ人・，Ｂ入・，０入・
とすれば、検知器３０で得られるスペクトル強度Ｓ２人
，はローダミンＢの蟹光スペクトルをｋとして次式‘２
｝で与えられる。Ｓ２＾・ ＝Ｌ入１・ＭＩ入１・Ｂ入
１ 。
′そエチレングリコール溶液を用いる。ローダミンＢ３
ｇ′そエチレングリコール溶液は励起光東の波長（ほぼ
３０価ｍ〜６０仇ｍ）にかかわらず蟹光の発光効率の一
定な蟹光物質である。このローダミンＢ聡／そエチレン
グリコール溶液は、周知のマイクロセルに入れてステー
ジ上に教壇される。この状態で蟹光側モノクロメーク２
９を試料の最大蟹光波長近傍のある値入Ｆに設定しト励
起側モノクロメータ２２を走査する。この時、スイッチ
ＳＷは端子ｂに接続されている。励起側モノクロメー夕
２２の設定波長を入．とし光源２１、励起側モノクロメ
ータ２２「ダィクロィックミラ−２３、対物レンズ２４
の波長特性をそれぞれＬ＾，，Ｍ人・，Ｂ入・，０入・
とすれば、検知器３０で得られるスペクトル強度Ｓ２人
，はローダミンＢの蟹光スペクトルをｋとして次式‘２
｝で与えられる。Ｓ２＾・ ＝Ｌ入１・ＭＩ入１・Ｂ入
１ 。
。入１ ０ｋ ……｛２１スペクト
ル強度Ｓ２入ｉ は励起側モノクロメータ２２で設定さ
れる波長に従って順次記憶回路３２へ記憶される。次に
ステージ２５上に試料を教壇する。この時「蟹光側モノ
クロメー夕２９は波長入Ｆに設定されたままであり、ス
イッチＳＷは端子ａに接続されるように切換えられる。
このとき励起側モノクロ〆−夕２２を走査すると励起側
モノクロメータ２２の設定波長が入２の時、検知器３０
からは次式（３｝で与えられるスペクトル強度Ｓ３入２
が生ずる。Ｓ３入２ ＝Ｌ＾２ ・ＭＩ＾２ ・Ｂ＾２
・。入２・ＳＴ人Ｆ入２……（３，ただしＳＴ入Ｆ入
２は励起側モノクロメータの設定波長＾２のときの試料
の励起波長スペクトルである。
ル強度Ｓ２入ｉ は励起側モノクロメータ２２で設定さ
れる波長に従って順次記憶回路３２へ記憶される。次に
ステージ２５上に試料を教壇する。この時「蟹光側モノ
クロメー夕２９は波長入Ｆに設定されたままであり、ス
イッチＳＷは端子ａに接続されるように切換えられる。
このとき励起側モノクロ〆−夕２２を走査すると励起側
モノクロメータ２２の設定波長が入２の時、検知器３０
からは次式（３｝で与えられるスペクトル強度Ｓ３入２
が生ずる。Ｓ３入２ ＝Ｌ＾２ ・ＭＩ＾２ ・Ｂ＾２
・。入２・ＳＴ人Ｆ入２……（３，ただしＳＴ入Ｆ入
２は励起側モノクロメータの設定波長＾２のときの試料
の励起波長スペクトルである。
同期手段３３は、ステージ２５上に試料を戦置した時、
励起側モノクロメー夕２２の設定波長入２ に同期した
波長における記憶回路３２の記憶内容を読み出して割算
回路３１に印加する。すなわち割算回路３１は、ステー
ジ２５上に試料を戦層した時とローダミンＢ３ｇ／〆エ
チレングリコール溶液を敷遣した時の励起側モノクロメ
ータ２２の設定波長の等しい場合、すなわち入，＝入２
＝＾におけるスペクトル強度の間で比をとる。よって割
算回路３１の出力は次式｛４｝で与えられる。幹−Ｓ学
入肌【４）式｛４｝‘こおいてｋ！ま既知の定数である
から、試料の励起波長スペクトルＳＴ入Ｆ入は容易に求
めることができる。
励起側モノクロメー夕２２の設定波長入２ に同期した
波長における記憶回路３２の記憶内容を読み出して割算
回路３１に印加する。すなわち割算回路３１は、ステー
ジ２５上に試料を戦層した時とローダミンＢ３ｇ／〆エ
チレングリコール溶液を敷遣した時の励起側モノクロメ
ータ２２の設定波長の等しい場合、すなわち入，＝入２
＝＾におけるスペクトル強度の間で比をとる。よって割
算回路３１の出力は次式｛４｝で与えられる。幹−Ｓ学
入肌【４）式｛４｝‘こおいてｋ！ま既知の定数である
から、試料の励起波長スペクトルＳＴ入Ｆ入は容易に求
めることができる。
なお、以上の実施例においていくつかの変形が可能であ
る。
る。
例えば、先にステージ２５上に試料を戦層して測定を行
ない、この結果を記憶回路３２に記憶させ、後にローダ
ミンＢ３ｇ′そエチレングリコール溶液をステージ２５
上に載直して測定を行なっても同様の結果が得られる。
また、励起側モノクロメータ２２の設定波長毎にローダ
ミンＢ３ｇ′クェチレングリコール溶液と試料を交換し
て試料の励起波長スペクトルを求めるようにもできる。
以上述べたように本発明によれば、滋射型の蟹光側光顕
微鏡によって試料の励起波長スペクトルを求める際に、
検知器からの信号に含まれる装置関数を除去できる。
ない、この結果を記憶回路３２に記憶させ、後にローダ
ミンＢ３ｇ′そエチレングリコール溶液をステージ２５
上に載直して測定を行なっても同様の結果が得られる。
また、励起側モノクロメータ２２の設定波長毎にローダ
ミンＢ３ｇ′クェチレングリコール溶液と試料を交換し
て試料の励起波長スペクトルを求めるようにもできる。
以上述べたように本発明によれば、滋射型の蟹光側光顕
微鏡によって試料の励起波長スペクトルを求める際に、
検知器からの信号に含まれる装置関数を除去できる。
【図面の簡単な説明】
第１図は従来の頭徴蟹光額９光技術に用いられる蕗射型
蟹光側光顕微鏡の説明図、第２図は本発明の実施例の説
明図である。 主要部分の符号の説明、ＳＷ・・・・・・スイッチ、３
０…・・・検知器、３１…・・・割算回路、３２…・・
・記憶回路、３３・・…・同期手段、３４・・・・・・
記録計、２５．．・・・・ステージ、２６・・・・・・
被測定物。 フャへ 図フャ２図
蟹光側光顕微鏡の説明図、第２図は本発明の実施例の説
明図である。 主要部分の符号の説明、ＳＷ・・・・・・スイッチ、３
０…・・・検知器、３１…・・・割算回路、３２…・・
・記憶回路、３３・・…・同期手段、３４・・・・・・
記録計、２５．．・・・・ステージ、２６・・・・・・
被測定物。 フャへ 図フャ２図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 異なった波長の励起光を順次設定し出射する光源手
段と、所定の波長の光を検出し、該検出した光を光電変
換する検知手段と、前記光源手段からの励起光にて試料
を落射照明し、該試料からの螢光を前記検知手段に入射
せしめる光学手段とを有する落射型の螢光測光顕微鏡に
おいて、入力端子からの光電変換信号を前記励起光の波
長に対応せしめて記憶する記憶手段と、２つの入力端子
を有し、そのうちの一方が前記記憶手段の出力端子に接
続される割算手段と、前記検知手段の出力を前記記憶手
段の入力端子と前記割算手段の他方の入力端子とに選択
的に入力せしめる選択手段と、前記記憶手段の記憶値か
ら前記光源手段の波長設定に同期せしめて、該設定波長
に対応する記憶値を呼び出す同期手段と、を有し、 前記割算手段の出力によって試料の励起波長スペクトル
を求めることを特徴とする螢光測光顕微鏡。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15944877A JPS606485B2 (ja) | 1977-12-28 | 1977-12-28 | 落射型螢光測光顕微鏡 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15944877A JPS606485B2 (ja) | 1977-12-28 | 1977-12-28 | 落射型螢光測光顕微鏡 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5491345A JPS5491345A (en) | 1979-07-19 |
| JPS606485B2 true JPS606485B2 (ja) | 1985-02-19 |
Family
ID=15693967
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15944877A Expired JPS606485B2 (ja) | 1977-12-28 | 1977-12-28 | 落射型螢光測光顕微鏡 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS606485B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61153585U (ja) * | 1985-03-16 | 1986-09-24 | ||
| JPS61153584U (ja) * | 1985-03-16 | 1986-09-24 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6148353U (ja) * | 1984-09-01 | 1986-04-01 |
-
1977
- 1977-12-28 JP JP15944877A patent/JPS606485B2/ja not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61153585U (ja) * | 1985-03-16 | 1986-09-24 | ||
| JPS61153584U (ja) * | 1985-03-16 | 1986-09-24 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5491345A (en) | 1979-07-19 |
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