JPS6132288B2

JPS6132288B2 -

Info

Publication number: JPS6132288B2
Application number: JP57183676A
Authority: JP
Inventors: Fumio Kuzutani; Kyoji Kito; Hisaaki Uchida
Original assignee: Meito Sangyo KK
Current assignee: Meito Sangyo KK
Priority date: 1982-10-21
Filing date: 1982-10-21
Publication date: 1986-07-25
Also published as: US4621076A; JPS5973524A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、公知化合物グアノシンモノホスフエ
ート（GMP）もしくはその塩類を有効成分とす
る血栓性疾患処置剤に関し、とくに下記式（）但し、Ｘ、Ｙ及びＺの１つはH₂PO₃基を示し、
他の２つは水素原子を示す、で表わされるグアノシンモノホスフエート
（GMP）もしくはその医薬的に許容し得る塩類を
有効成分として含有することを特徴とする血栓性
疾患処置剤に関する。例えば、外傷、動脈硬化、その他の原因で血管
内膜に傷害を生ずると、血管壁内皮細胞がはくり
して内皮下のコラーゲンが露出し、ここに血小板
が粘着し、この粘着した血小板はその内蔵するア
デノシン5′−ジホスフエート（以下5′−ADP）、
血小板第３因子などの種々の物質を放出し、血流
の血小板をさらに粘着せしめ且つ血小板相互を付
着させて、血小板凝集塊（白色血栓）を形成す
る。更に、放出された血小板第３因子が関与して
内因性血液凝固系の活動を促進し、形成された血
小板凝集塊上に、強固なフイブリン網が形成さ
れ、その中に赤血球が捕捉されて完全な血栓（赤
色血栓）が形成される。このようにして形成された血栓は、必ずしもそ
の形成場所に留まらず、血流中を循環することも
あり、このような状態の血栓は塞栓と呼ばれ、最
終的には四肢、心臓、脳などの繊細な毛細管内に
宿ることがある。もし、これらが心臓や脳の血流
を阻止すれば心筋梗塞や脳梗塞の原因となりう
る。上述のように、血栓の形成には血液中の血小板
が重要な因子となつていることはよく知られてお
り、この点に着目して、血小板の凝集機能を抑制
する薬剤を血栓性疾患の予防および治療などの処
置剤として用いる試みが数多く提案されている。従来、血小板凝集抑制剤としては、例えばアス
ピリン、インドメサシン等の非ステロイド系抗炎
症剤、スルフインピラゾンのようなピラゾール誘
導体、ジピリダールなどのピリミドピリミジン誘
導体、などが知られているが薬理効果および安全
性の面から、より優れた薬剤の開発が望まれてい
る。又、血栓性疾患の予防および治療薬として、例
えばヘパリン、ジクマロールなどの上記内因性血
液凝固系の活動を阻害する抗凝固薬が古くより使
われているが、これらは、過剰投与時に、出血傾
向を来たすため、投薬中は定期的に血液凝固時間
を測定し、過剰投与に傾かぬよう監視しなければ
ならない。従つて、実際の使用には多くの制約を
受ける不利益がある。一方、上記血小板凝集塊の形成を阻害する血小
板凝集抑制剤の場合には、過剰投与しても上記抗
凝固薬におけるような不都合な現象は現われない
ので、血栓性疾患の処置剤として抗凝固薬より優
れた利点を有する。又、ヌクレオシドホスフエート類中には、この
ような血小板凝集に影響を及ぼすものの存在する
ことが知られている。例えば、アデノシン5′−ジ
ホスフエート（5′−ADP）は血小板凝集促進作用
を示すが、一方、アデノシン5′−モノホスフエー
ト（5′−AMP）は弱い血小板凝集抑制作用を有
することが知られている（M.H.Maguire et al，
Experientia，30(8)922−４（1974））。従来、この
ような作用に着目して、アデノシンの各種の誘導
体を合成し、そのいくつかについて血小板凝集抑
制作用を示すことも報告されている。しかしながら、グアノシンモノホスフエート
（GMP）が血小板凝集抑制作用を有することにつ
いては、本発明者等の知る限り、従来全く知られ
ていない。従来、グアノシン5′−ジホスフエート（5′−
GDP）については、高濃度に於ては5′−ADP誘発
血小板凝集に対して抑制作用があるという報告が
知られている（American Journal of
Physiology，vol.227、No.５、1143〜1148頁、
1974年）。しかしながら、この報告に於ては、グ
アノシンモノホスフエート（GMP）の作用に関
しては全く言及されていない。更に、本発明者ら
の試験によれば、5′−GDPはトロンビン誘発血小
板凝集に対して全く抑制作用を示さない。そし
て、前述したように、アデノシンホスフエートの
場合には、〓5′−ADPと5′−AMPは血小板凝集
作用に対して、全く異なつた逆の作用を示すこと
が知られている。本発明者等は、グアノシンモノホスフエート
（GMP）の血小板凝集作用に与える影響について
研究を行つてきた。その結果、前記式（）で表わされるグアノシ
ンモノホスフエートが強力な血小板凝集抑制作用
を示し、更に極めて低毒性であつて、長期間連用
可能で且つ確実な効果を示す血小板凝集抑制作用
物質であつて、血栓性疾患処置剤として有用であ
ることを発見した。本発明者等の研究によれば、式（）化合物は
in vitroのトロンビン誘発血小板凝集作用に対し
て強力な阻害作用を示し、経口及び静脈投与によ
る動物（ウサギ）実験でも、トロンピン誘発血小
板凝集作用に対して強力な阻害作用を示すことが
わかつた。従つて、本発明の目的は、公知式（）GMP
もしくはその医薬的に許容し得る塩類を有効成分
として含有する血栓性疾患処置剤を提供するにあ
る。本発明の上記目的及び更に多くの他の目的なら
びに利点は、以下の記載から一層明らかとなるで
あろう。前記式（）で示されるGMPは生体内公知物
質であり、例えば膵臓、肝臓、脾臓などに含有さ
れ、またグアノシンは膵臓中に分布しており、こ
れらはホルモン作用を果しているとも云われてい
るが、その作用の詳細は不明である。式（）化合物は種々の方法で製造することが
でき、の製法も公知である（例えば、Methods
in Carbohydrate Chemistry ，p451−456
Academic Press（1972）；Y.Fujimoto and M.
Teranishi，Selective Phosphorylation of
Ribonucleosides）。その製造の一態様について、以下に説明する。
式（）化合物の製造に用いる原料化合物グアノ
シン（式（）に於て、Ｘ、Ｙ及びＺが共に水素
原子である化合物）は、例えば下記のようにして
合成できる。リボースの水酸基を、適当な保護基たとえばア
セチル基もしくはベンゾイル基で、それ自体公知
の方法で保護する。反応は、例えば、ピリジンの
ような有機塩基を溶媒として、無水酢酸もしくは
塩化ベンゾイルのような酸無水物や酸塩化物を作
用させて行うことができる。たとえば、上述のよ
うにして得られるリボースのテトラ−Ｏ−アセテ
ート（もしくはベンゾエート）を適当な溶媒中た
とえばエーテル中で臭化水素と接触させることに
より一方の反応成分であるトリ−Ｏ−アセチル
（もしくはベンゾイル）−Ｄ−リボフラノシルブロ
マイドを形成する。この反応は、例えば、テトラ
−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−リボフラノースを０℃
で臭化水素ガスを飽和させたエーテルに溶かし、
密封して０℃に１時間放置して行うことができ
る。一方、それ自体公知の方法で、グアニンの２−
位をベンゾイル化し、９−位を塩化第二水銀で活
性化して、他方の反応成分である２−ベンゾイル
−９−クロロマーキユリ−グアニンを形成する。
この反応は、例えば、緩和なアルカリ溶液に昇コ
ウ（HgCl₂）のエタノール溶液を添加して行うこ
とができる。上述のようにして得ることのできる両反応成分
を、適当な溶媒たとえば乾燥キシレン中で反応さ
せ、アルカリで脱保護基反応を行つて、原料化合
物グアノシンを製造することができる。この反応
は、例えば、トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−リボフラ
ノシルブロマイドを乾燥キシレンに溶かし、２−
ベンゾイル−９−クロロマーキユリーグアニンを
加え、湿気をたつて２時間還流撹拌して行うこと
ができる。例えば、上述のようにして得ることのできるグ
アノシンを用いて、式（）中、Ｘ及びＹが水素
原子でＺがH₂PO₃〔Ｐ（Ｏ）（OH）₂〕である化合
物グアノシン5′モノホスフエート（5′−GMP）
は、例えば以下のようにして製造することができ
る。たとえば、上記グアノシンをアセトン中塩化亜
鉛と反応させて、グアノシンの2′−及び3′−位の
水酸基をイソプロピリデン化し、更にジシクロヘ
キシルカルボジイミド（DCC）の存在下に、ピ
リジン溶媒中で２−シアノエチルリン酸と反応さ
せて5′−位をシアノエチルリル酸化した化合物を
得る。このようにして得られた化合物を、水酸化
リチウム、陽イオン交換樹脂（Ｈ⁺）で脱保護基
反応に賦して、5′−GMPを得ることができる。
この反応は、例えば、次の様にして行うことがで
きる。即ち2′，3′−Ｏ−イソプロピリデングアノ
シンと４倍モルの２−シアノエチルリン酸を50％
ピリジン水に溶かし、減圧下30℃で溶媒を留去
し、残さをピリジンに溶かし、ジシクロヘキシル
カルボジイミド（DCC）を加えて、室温で18時
間放置する。少量の水を加えて１時間放置した後
減圧濃縮し、0.4N水酸化リチウム溶液を加え
て、１時間煮沸還流する。又、ＹがH₂PO₃でＸ及びＺが水素原子の化合物
即ちグアノシン3′−モノホスフエート（3′−
GMP）、ＸがH₂PO₃でＺ及びＹが水素原子の化合
物即ち、グアノシン2′−モノホスフエート（2′−
GMP）は、BrownとToddの方法（D.M.Brown，
A.R.ToddJ.Chem.Soc.，44（1952））に従つて次
のようにして得ることができる。すなわち、グア
ノシンとトリナルクロリドを無水ピリジン中60℃
で３日間反応させ、5′−位に選択的にトリチル化
された5′−トリチルグアノシンを得る。5′−トリ
チルグアノシンをピリジンに溶かし、−20℃に冷
却しながらジフエニルリン酸クロリドを加え、グ
アノシンの2′及び3′−モノホスフエートのトリチ
ル誘導体の混合物を得る。得られる混合物を80％
酢酸に溶解し、加熱還流して脱トリチル化し2′−
GMP及び3′−GMPの混合物を得る。この混合物
をDowex １（ギ酸型）のカラムにかけて、
0.1Nギ酸でグアノシン2′−モノホスフエートを溶
出させ、1Nギ酸でグアノシン3′−モノホスフエ
ートを溶出させる。いずれも濃縮し、凍結乾燥
し、さらに水から再結晶することにより、目的の
2′−GMP及び3′−GMPを分離して得ることがで
きる。上述のようにして得ることのできる本発明式
（）有効成分化合物は、その医薬的に許容し得
る塩類の形であることができる。このような塩類
は、式（）の遊離形のGMP水溶液を、酸性塩
の場合は、無機酸あるいは有機酸でPHを酸性側に
調節し、溶媒を減圧下留去することにより、塩基
性塩の場合は、例えば水酸化アルカリやアンモニ
ア水でPH7.0付近に中和し、エタノールに注入す
ることにより、各々の塩の形で目的物を作ること
ができる。このようにして得ることのできる式（）
GMPの医薬的に許容し得る塩類の例としては、
例えば、硫酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩などの如
き鉱酸塩類；ナトリウム酸、カリウム塩などの如
きアルカリ金属塩；アンモニウム塩；安息香酸
塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、クエン
酸塩などの如き有機酸塩を例示することができ
る。次に、式（）化合物の代表例として、グアノ
シン5′−モノホスフエート（5′−GMP）を用いた
血小板凝集抑制効果についてのin vitro及びin
vivoテスト及びその結果を示す。 (1) in vitroでの種々血小板凝集誘発物質による
血小板凝集に対するGMPの抑制効果：− ボーン（Born）の方法J.Physiol.168巻、178
頁、1963年）により測定した。すなわち、健康正常人の前腕正中静脈よりう
つ血を避けて採血し、血液９容に対して、１容
の3.8％クエン酸ナトリウム液を加え、室温
で、1000rpm.10分間遠心分離して多血小板血
漿（PRP）を得た。PRP0.7mlに後掲表−１に
示した各種濃度の5′−GMP溶液0.1mlを加えた
のち、後掲表−１に示した種々の血小板凝集誘
発剤を加え、吸光度の変化をアグリゴメーター
（Evans社）により測定し、血小板凝集阻害率
を次式により求めた。血小板凝集阻害率（％）＝Ｃ−Ｓ／Ｃ×100 ここで、Ｃは、生理食塩水を添加したときの最
大凝集率を示す透光度変化を表わし、Ｓは被験物
質添加時の最大凝集率を示す透光度変化を表わ
す。テストの結果を下掲表−１に示した。

【表】ート
この表から明らかなように、5′−GMPはい
ずれの凝集誘発剤に対しても抑制効果を示す
が、殊にトロンビン凝集に対して著効を示し
た。 (2) in vitroでのトロンビン凝集に対する一般式
（）で示される化合物の血小板凝集抑制効
果：− 血小板凝集誘発剤として0.25u／mlのトロン
ビンを用いた他は(1)と同様にして実験した。その結果を表−２に示す。

【表】この表から、いずれの化合物もトロンビン誘
発血小板凝集に対して強い抑制効果を示すこと
がわかる。 (3) in vivoにおける血小板凝集抑制効果：− 凝集抑制効果の持続性ウサギに5′GMPを静脈内投与で50mg／
Kg、経口投与で１ｇ／Kgを投与し、一定時間
後（静注で30秒〜４分、経口で１時間〜５時
間）採血し、血液９容に対して、１容の3.8
％クエン酸ナトリウム液を加え、室温で
1000rpm，10分間遠心して多血小板血漿
（PRP）を得た。PRP0.7mlに0.75単位／mlの
トロンビン溶液0.1mlを加えたのちの吸光度
変化をアグリゴメータ（Evans社）にて測定
した。結果を表−３および４に示す。

【表】

【表】表から明らかなように、経口投与でも著しい血小板凝集阻害を示
し、５時間後でもその効果は持続した。 GMP用量と凝集抑制効果の関係ウサギを用いて、in vivoで、5′−GMPの
血小板凝集抑制作用のDose Responseを調
べた。5′−GMPは経口投与し、投与１時間
後に採血し、）項と同様にして、PRPを得
て、アグリゴメータにより血小板凝集抑制の
程度を測定した。その結果を表−５に示し
た。

【表】 (4) GMPの急性毒性：− 本発明化合物の急性毒性を調べた。 ddy系マウス（体重20ｇ〜25ｇ）を用い、被
験化合物（グアノシン5′−モノホスフエート）
を生理食塩水に溶解し、この溶液を静脈内投与
あるいは経口投与した。投与後３日間観察を行
い、LD₅₀値はリツチフイールド−ウイルコク
ソン法により算出した。その結果を下表−６に示す。表中の括弧内は
95％信頼限界を示す。

【表】以上の薬理効界データー及び毒性テストの結果
に示されるように、本発明有効成分は、優れた血
小板凝集抑制効果を示し且つ低毒性であつて、血
栓性疾患処置剤として有用である。本発明有効成
分は、既存の血小板凝集抑制剤では認められない
トロビン誘導血小板凝集に対してとくに強い抑制
作用を示すという特徴が認められ、従来の抑制剤
には期待できない効果の達成が期待される。斯くして、本発明の血栓性疾患処置剤は脳血管
の血栓・塞栓による脳梗塞、あるいは一過性虚血
発作（TIA）などの脳血管障害、虚血性心疾患、
四肢動脈血栓症、深部静脈血栓症、血栓性血小板
減少性紫斑病を初めとする血栓性疾患の予防およ
び治療に有用である。さらには、血液透析時にお
ける動静脈シヤントあるいは動脈カテーテル部に
形成される血栓の予防、人工弁への血栓形成の防
止などにも利用できる。本発明の血栓性疾患処置剤は、式（）グアノ
シンモノホスフエートもしくはその医薬的に許容
し得る塩類の単独でまたは２種以上の混合物の形
でそのまま用いてもよいが、通常は医学的に許容
しうる希釈剤と配合して、例えば、散剤、顆粒
剤、カプセル剤、錠剤、シロツプ剤、水剤、その
他の経口剤、注射剤などの非経口剤などの剤型に
して使用することができる。上記、希釈剤としては、各種液状もしくは固体
状の希釈剤をあげることができる。これら希釈剤
としては、例えば、リン酸カルシウム、炭酸カル
シウム、ブドウ糖、乳糖、シヨ糖、テキストリ
ン、シヨ糖エステル、デンプン、ソルビツト、マ
ンニツト、結晶セルロース、タルク、カオリン、
合成ケイ酸アルミニウム、カルボキシメチルセル
ロース、メチルセルロース、セルロースアセテー
トフタレート、アルギン酸ナトリウム、ポリビニ
ルピロリドン、ポリビニルアルコール、アラビア
ゴム、トラガントゴム、ゼラチン、寒天末、シエ
ラツクなどの固体希釈剤；例えば、水、生理食塩
水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエ
チレングリコール、グリセリン、リンゲル液など
の液体希釈剤を例示できる。式（）の化合物の有効投与量は、症状、投与
経路等により異なるが、例えば静脈内投与の場
合、成人について１日当り約50〜0.01mg／Kg、好
ましくは約20〜0.1mg／Kg、経口投与の場合約500
〜１mg／Kg、好ましくは約200〜５mg／Kgであ
る。以上、本発明について述べたが、以下に実施例
により、本発明の数態様について、更に詳しく例
示する。これらは、単に例示にすぎず、本発明は
以上述べたところに従つて、種々変更できること
は云うまでもない。実施例１錠剤 5′−GMP 50ｇ乳糖 90ｇトウモロコシデンプン 35ｇヒドロキシプロピルセルロース５ｇステアリン酸カルシウム２ｇ 182ｇ打錠機で錠剤とする。実施例２カプセル剤 2′−GMP 50ｇ乳糖 60ｇバレイシヨデンプン 50ｇ結晶セルロース 10ｇステアリン酸カルシウム１ｇ 171ｇカプセルに充填して、１カプセル中有効成分を
100mgを含有するカプセル剤とする。実施例３注射剤 3′−GMP 25ｇＤ−ソルビトール 20ｇ注射用蒸留水 500ml この溶液を0.22μｍのメンブレンフイルターで
過し、２mlアンプルに分注し熔封した後、常法
通り加熱滅菌して注射剤とする。

Claims

【特許請求の範囲】１下記式（）但し式中、Ｘ、Ｙ及びＺの１つはH₂PO₃基を示
し、他の２つは水素原子を示す、で表わされるグアノシンモノホスフエート
（GMP）もしくはその医薬的に許容し得る塩類を
有効成分として含有することを特徴とする血栓性
疾患処置剤。