JPS6145770B2 - - Google Patents
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- JPS6145770B2 JPS6145770B2 JP54074253A JP7425379A JPS6145770B2 JP S6145770 B2 JPS6145770 B2 JP S6145770B2 JP 54074253 A JP54074253 A JP 54074253A JP 7425379 A JP7425379 A JP 7425379A JP S6145770 B2 JPS6145770 B2 JP S6145770B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- stirrer
- antigen
- cell
- reaction
- measurement
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/255—Details, e.g. use of specially adapted sources, lighting or optical systems
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01F—MIXING, e.g. DISSOLVING, EMULSIFYING OR DISPERSING
- B01F33/00—Other mixers; Mixing plants; Combinations of mixers
- B01F33/50—Movable or transportable mixing devices or plants
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01F—MIXING, e.g. DISSOLVING, EMULSIFYING OR DISPERSING
- B01F2101/00—Mixing characterised by the nature of the mixed materials or by the application field
- B01F2101/23—Mixing of laboratory samples e.g. in preparation of analysing or testing properties of materials
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- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Optical Measuring Cells (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
本発明は抗原―抗体反応の光学的測定法に関す
るものである。特に本発明は極めて少量の試料を
用いて、抗原―抗体反応の進行に伴う該反応混合
物の光学的特性を精度よく測定する方法に関する
ものである。 光学測定用セル内で抗原―抗体反応を行なわ
せ、反応の進行に伴う試料の光学的特性、例えば
吸光度の変化を光学的に追跡して、反応の進行状
態を知ることは公知であり、この手法は各種の分
析方法に応用されている。本発明は最近脚光をあ
びている、感作ラテツクスを使用する抗原―抗体
反応による抗原又は抗体の測定に適用される。抗
原―抗体反応の典型的な例では、平均粒径が1.6
ミクロン以下の不溶性担体に抗原又は抗体を支持
させた感作ラテツクスを光学測定用セルに入れ、
これに抗体及び/又は抗原を含む試料を添加し
て、撹拌下に抗原―抗体反応を生起させる。セル
には波長が0.6〜2.4μでラテツクスの平均粒径の
1.1倍以上、特に1.5倍以上の光を照射し、ラテツ
クスの光学的特性、通常は透過光量の変化を測定
する。測定は通常、吸光度又は透過率の変化速
度、一定時間後の吸光度又は一定吸光度に達する
時間のいずれかの測定として行なわれる。 このような抗原―抗体反応の測定に於ては、セ
ル内を均一にし且つ反応を促進させるためにセル
内の液体を適度な強さで撹拌することが必要であ
る。通常用いられる撹拌機は、セルの容積の一部
分を占めるのみであり、且つ照射される光の光路
外に設けられている。また光路内に設ける場合に
は、測定時に撹拌機を取外し、撹拌機により光が
吸収されたり散乱されたりして測定が不正確とな
らないように配慮している。 本発明はこのような従来法とは異なり、透明で
且つセルの容積に対して十分大きな角柱状の撹拌
機を光路内に設置したセルを用い、且つ撹拌機の
存在下に測定を行なうことにより、少量の試料を
用いて精度よく測定を行なう方法を提供するもの
である。 すなわち本発明の要旨は、光学測定用セル内で
感作ラテツクスを使用して抗原―抗体反応を行な
わせ、反応の進行に伴う該反応混合物の光学的特
性を追跡して、反応の進行状態を測定する方法に
おいて、内部に大きな角柱状の透光性のある撹拌
機を有する角型の光学測定用セルを使用し、かつ
測定用光線の光路内で該撹拌機を回転させつつ該
反応混合物の光学的特性を測定することを特徴と
する抗原―抗体反応の光学的測定法に存する。 本発明を詳細に説明すると、本発明では内部に
大きな角柱状の透光性のある撹拌機を入れた角型
のセルを使用する。大きな撹拌機を用いるのは、
セルの空間部の容積を減少させるためであり、か
くすることにより少量の試料でセルの空間部分を
満すことができる。通常はセルの断面積の25%以
上、好ましくは30%以上の断面積を有する角柱を
使用する。撹拌機を角柱状とするのは、良好な撹
拌効率を確保するためである。同時にこれは撹拌
機による光の散乱を少くするのにも役立つ。最も
好ましいものは断面が正方形のセルに同じく断面
正方形の撹拌機を挿入することである。撹拌機は
セル内で自由に回転し得ることが必要である。撹
拌機とセルの内壁との間隙は少くとも0.3mm以上
であるのが好ましい。通常は0.5〜2.0mmの間隙を
保持する。 本発明方法により角柱状の撹拌機を光路内で回
転させつつセルに光を照射すると、有効光路長及
び撹拌機により散乱される光の割合は、撹拌機の
回転に依存して周期的に変化する。従つて各瞬間
において測定される光学的特性は、試料に全く変
化が生じなくても、周期的に変化する。しかし回
転数が毎分数百〜数千回転と大きい場合には、通
常の測定装置では周期的変化の平均値が自動的に
測定されるので測定には全く支障がない。回転数
が小さくて回転に伴う周期的変化が測定に影響す
る場合には、光学的特性を一定時間にわたり積分
して測定すればよい。なお、当然のことながら、
回転速度は試料の光学的特性の変化速度よりも十
分に大きくし、回転の影響を消除するに際し試料
の光学的特性の変化が影響しないようにする。 本発明方法によれば、撹拌機の存在が測定の障
害とならないので、撹拌機で直接に撹拌している
部分で抗原―抗体反応の測定を行なうことがで
き、抗原―抗体反応の測定に及ぼす撹拌の影響を
最少限に抑えることができる。 また有効な光路長が短くなるので、単位光路長
当りの試料の吸光度や散乱度を大きくすることが
できる。従つて感作ラテツクスを用いて抗原―抗
体反応を行うに際し、ラテツクスの濃度を高くし
たり、粒径の大きいラテツクスを用いたりして測
定の感度を向上させることができる。 更に最も一般的に用いられているプロペラ型
(タービン型)撹拌翼は、回転に伴い液の内部に
剪断力が加わるが、本発明方法で使用する角柱状
の撹拌機では剪断力はあまり強くない。従つて感
作ラテツクスを用いて抗原―抗体反応を行うに際
し、回転速度を上げるプロペラ型撹拌翼では反応
により生成した凝集塊が破壊されることがある
が、本発明方法ではこのようなことは殆んど起ら
ない。 次に実施例により本発明を更に詳細に説明する
が、本発明はその要旨を超えない限り、以下の実
施例に限定されるものではない。 実施例 下記の試薬を用いて、本発明方法により感作ラ
テツクスを用いる抗原―抗体反応の吸光度を測定
した。 (1) 抗hcG抗体感作ラテツクス 抗hcG抗体のクリシン緩衝溶液(濃度:2
mg/ml)10mlに、平均粒径が0.234μのポリス
チレンラテツクス(タウンケミカル社製、固形
分濃度:10重量%)1mlを加え、室温において
30分間撹拌し、次いで40℃に加温してさらに30
分間撹拌したのち、2〜4℃の冷却下に50分間
遠心分離(12000rpm)した。沈澱を傾瀉し、
分離した抗hcG抗体感作ラテツクスを牛血清ア
ルブミン溶液(濃度:0.2重量%)に懸濁さ
せ、感作ラテツクス粒子濃度が0.1重量%の抗
hcG感作ラテツクス試薬を得た。 (2) 測定装置 セルは7mm角の透明プラスチツク容器に、同
じく透明プラスチツク製の4mm角の撹拌棒を底
から2mmの位置まで挿入するようにしたものを
用いた。光源は赤外線発光ダイオード(モンサ
ント社製 ME7124.中心波長0.94μ、波長半値
幅0.05μ)を用いた。透過光の検出にはシリコ
ンフオトデイテクター(ベルハウエル社製
509―10)を用いた。 (3) 測 定 基準透過率の測定 セルに0.2mlの0.2%牛血清アルブミン含有生
理食塩水と、0.2mlの抗hcG感作ラテツクス試
薬とを入れた。撹拌棒で1400rpmで3秒間撹拌
したのち、引続いて800rpmで撹拌を行ないな
がら透過率(T0)を測定した。以下、この透過
率はT0を基準として抗原、抗体反応の進行に
伴なう試料の透過率を時間変化を測定する。 透過率の測定 セルに0.2mlの標準hcG溶液と、0.2mlの抗
hcG感作ラテツクスとを入れた。撹拌棒で
1400rpmで3秒間撹拌したのち引続いて
800rpmで撹拌を行なつた。800rpmで撹拌を行
ないながら、8秒間透過率を測定し、2秒間測
定を中止する操作を反復した。 第3回目の測定で得られた平均透過率T3
(すなわち800rpmで撹拌を開始してから20〜28
秒間の平均透過率)と、第8回目の測定で得ら
れた平均透過率T8(すなわち70〜78秒間の平
均透過率)を用いて、吸光度の平均変化速度V
を V=60/50log(T3/T8) として算出した。結果を第1表に示す。
るものである。特に本発明は極めて少量の試料を
用いて、抗原―抗体反応の進行に伴う該反応混合
物の光学的特性を精度よく測定する方法に関する
ものである。 光学測定用セル内で抗原―抗体反応を行なわ
せ、反応の進行に伴う試料の光学的特性、例えば
吸光度の変化を光学的に追跡して、反応の進行状
態を知ることは公知であり、この手法は各種の分
析方法に応用されている。本発明は最近脚光をあ
びている、感作ラテツクスを使用する抗原―抗体
反応による抗原又は抗体の測定に適用される。抗
原―抗体反応の典型的な例では、平均粒径が1.6
ミクロン以下の不溶性担体に抗原又は抗体を支持
させた感作ラテツクスを光学測定用セルに入れ、
これに抗体及び/又は抗原を含む試料を添加し
て、撹拌下に抗原―抗体反応を生起させる。セル
には波長が0.6〜2.4μでラテツクスの平均粒径の
1.1倍以上、特に1.5倍以上の光を照射し、ラテツ
クスの光学的特性、通常は透過光量の変化を測定
する。測定は通常、吸光度又は透過率の変化速
度、一定時間後の吸光度又は一定吸光度に達する
時間のいずれかの測定として行なわれる。 このような抗原―抗体反応の測定に於ては、セ
ル内を均一にし且つ反応を促進させるためにセル
内の液体を適度な強さで撹拌することが必要であ
る。通常用いられる撹拌機は、セルの容積の一部
分を占めるのみであり、且つ照射される光の光路
外に設けられている。また光路内に設ける場合に
は、測定時に撹拌機を取外し、撹拌機により光が
吸収されたり散乱されたりして測定が不正確とな
らないように配慮している。 本発明はこのような従来法とは異なり、透明で
且つセルの容積に対して十分大きな角柱状の撹拌
機を光路内に設置したセルを用い、且つ撹拌機の
存在下に測定を行なうことにより、少量の試料を
用いて精度よく測定を行なう方法を提供するもの
である。 すなわち本発明の要旨は、光学測定用セル内で
感作ラテツクスを使用して抗原―抗体反応を行な
わせ、反応の進行に伴う該反応混合物の光学的特
性を追跡して、反応の進行状態を測定する方法に
おいて、内部に大きな角柱状の透光性のある撹拌
機を有する角型の光学測定用セルを使用し、かつ
測定用光線の光路内で該撹拌機を回転させつつ該
反応混合物の光学的特性を測定することを特徴と
する抗原―抗体反応の光学的測定法に存する。 本発明を詳細に説明すると、本発明では内部に
大きな角柱状の透光性のある撹拌機を入れた角型
のセルを使用する。大きな撹拌機を用いるのは、
セルの空間部の容積を減少させるためであり、か
くすることにより少量の試料でセルの空間部分を
満すことができる。通常はセルの断面積の25%以
上、好ましくは30%以上の断面積を有する角柱を
使用する。撹拌機を角柱状とするのは、良好な撹
拌効率を確保するためである。同時にこれは撹拌
機による光の散乱を少くするのにも役立つ。最も
好ましいものは断面が正方形のセルに同じく断面
正方形の撹拌機を挿入することである。撹拌機は
セル内で自由に回転し得ることが必要である。撹
拌機とセルの内壁との間隙は少くとも0.3mm以上
であるのが好ましい。通常は0.5〜2.0mmの間隙を
保持する。 本発明方法により角柱状の撹拌機を光路内で回
転させつつセルに光を照射すると、有効光路長及
び撹拌機により散乱される光の割合は、撹拌機の
回転に依存して周期的に変化する。従つて各瞬間
において測定される光学的特性は、試料に全く変
化が生じなくても、周期的に変化する。しかし回
転数が毎分数百〜数千回転と大きい場合には、通
常の測定装置では周期的変化の平均値が自動的に
測定されるので測定には全く支障がない。回転数
が小さくて回転に伴う周期的変化が測定に影響す
る場合には、光学的特性を一定時間にわたり積分
して測定すればよい。なお、当然のことながら、
回転速度は試料の光学的特性の変化速度よりも十
分に大きくし、回転の影響を消除するに際し試料
の光学的特性の変化が影響しないようにする。 本発明方法によれば、撹拌機の存在が測定の障
害とならないので、撹拌機で直接に撹拌している
部分で抗原―抗体反応の測定を行なうことがで
き、抗原―抗体反応の測定に及ぼす撹拌の影響を
最少限に抑えることができる。 また有効な光路長が短くなるので、単位光路長
当りの試料の吸光度や散乱度を大きくすることが
できる。従つて感作ラテツクスを用いて抗原―抗
体反応を行うに際し、ラテツクスの濃度を高くし
たり、粒径の大きいラテツクスを用いたりして測
定の感度を向上させることができる。 更に最も一般的に用いられているプロペラ型
(タービン型)撹拌翼は、回転に伴い液の内部に
剪断力が加わるが、本発明方法で使用する角柱状
の撹拌機では剪断力はあまり強くない。従つて感
作ラテツクスを用いて抗原―抗体反応を行うに際
し、回転速度を上げるプロペラ型撹拌翼では反応
により生成した凝集塊が破壊されることがある
が、本発明方法ではこのようなことは殆んど起ら
ない。 次に実施例により本発明を更に詳細に説明する
が、本発明はその要旨を超えない限り、以下の実
施例に限定されるものではない。 実施例 下記の試薬を用いて、本発明方法により感作ラ
テツクスを用いる抗原―抗体反応の吸光度を測定
した。 (1) 抗hcG抗体感作ラテツクス 抗hcG抗体のクリシン緩衝溶液(濃度:2
mg/ml)10mlに、平均粒径が0.234μのポリス
チレンラテツクス(タウンケミカル社製、固形
分濃度:10重量%)1mlを加え、室温において
30分間撹拌し、次いで40℃に加温してさらに30
分間撹拌したのち、2〜4℃の冷却下に50分間
遠心分離(12000rpm)した。沈澱を傾瀉し、
分離した抗hcG抗体感作ラテツクスを牛血清ア
ルブミン溶液(濃度:0.2重量%)に懸濁さ
せ、感作ラテツクス粒子濃度が0.1重量%の抗
hcG感作ラテツクス試薬を得た。 (2) 測定装置 セルは7mm角の透明プラスチツク容器に、同
じく透明プラスチツク製の4mm角の撹拌棒を底
から2mmの位置まで挿入するようにしたものを
用いた。光源は赤外線発光ダイオード(モンサ
ント社製 ME7124.中心波長0.94μ、波長半値
幅0.05μ)を用いた。透過光の検出にはシリコ
ンフオトデイテクター(ベルハウエル社製
509―10)を用いた。 (3) 測 定 基準透過率の測定 セルに0.2mlの0.2%牛血清アルブミン含有生
理食塩水と、0.2mlの抗hcG感作ラテツクス試
薬とを入れた。撹拌棒で1400rpmで3秒間撹拌
したのち、引続いて800rpmで撹拌を行ないな
がら透過率(T0)を測定した。以下、この透過
率はT0を基準として抗原、抗体反応の進行に
伴なう試料の透過率を時間変化を測定する。 透過率の測定 セルに0.2mlの標準hcG溶液と、0.2mlの抗
hcG感作ラテツクスとを入れた。撹拌棒で
1400rpmで3秒間撹拌したのち引続いて
800rpmで撹拌を行なつた。800rpmで撹拌を行
ないながら、8秒間透過率を測定し、2秒間測
定を中止する操作を反復した。 第3回目の測定で得られた平均透過率T3
(すなわち800rpmで撹拌を開始してから20〜28
秒間の平均透過率)と、第8回目の測定で得ら
れた平均透過率T8(すなわち70〜78秒間の平
均透過率)を用いて、吸光度の平均変化速度V
を V=60/50log(T3/T8) として算出した。結果を第1表に示す。
【表】
【表】
第1表から明らかなように、本発明方法によ
れば、少量の試料を用いて再現性の良い結果を
得ることができる。
れば、少量の試料を用いて再現性の良い結果を
得ることができる。
第1図は本発明で用いる測定用セルの1例の模
式図である。 1…セル器壁、2…撹拌棒、3…液面。
式図である。 1…セル器壁、2…撹拌棒、3…液面。
Claims (1)
- 1 光学測定用セル内で感作ラテツクスを使用し
て抗原―抗体反応を行なわせ、反応の進行に伴う
該反応混合物の光学的特性を追跡して、反応の進
行状態を測定する方法において、内部に大きな角
柱状の透光性のある撹拌機を有する角型の光学測
定用セルを使用し、かつ測定用光線の光路内で該
撹拌機を回転させつつ該反応混合物の光学的特性
を測定することを特徴とする抗原―抗体反応の光
学的測定方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7425379A JPS55166028A (en) | 1979-06-13 | 1979-06-13 | Optical measurement of liquid sample |
| US06/152,161 US4320977A (en) | 1979-06-13 | 1980-05-22 | Method for optically assaying liquid samples with polyganol transparent stirrer |
| DE8080103224T DE3061768D1 (en) | 1979-06-13 | 1980-06-10 | Method for optically assaying liquid samples |
| EP80103224A EP0021236B1 (en) | 1979-06-13 | 1980-06-10 | Method for optically assaying liquid samples |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7425379A JPS55166028A (en) | 1979-06-13 | 1979-06-13 | Optical measurement of liquid sample |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55166028A JPS55166028A (en) | 1980-12-24 |
| JPS6145770B2 true JPS6145770B2 (ja) | 1986-10-09 |
Family
ID=13541801
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7425379A Granted JPS55166028A (en) | 1979-06-13 | 1979-06-13 | Optical measurement of liquid sample |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4320977A (ja) |
| EP (1) | EP0021236B1 (ja) |
| JP (1) | JPS55166028A (ja) |
| DE (1) | DE3061768D1 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4857454A (en) * | 1987-04-09 | 1989-08-15 | a Division of Yeshiva University Albert Einstein College of Medicine of Yeshiva University | Spectrophotometric method for kinetic absorbance measurements in two-phase enzyme immunoassay and apparatus therefor |
| US5371600A (en) * | 1992-08-12 | 1994-12-06 | Candela Laser Corporation | Fiber optic probe apparatus and method |
| DE69416680T2 (de) | 1993-07-29 | 1999-06-24 | Wesley-Jessen Corp., Des Plaines, Ill. | Vorrichtung zur untersuchung von optischen elementen |
| JP3390354B2 (ja) * | 1999-01-22 | 2003-03-24 | 松下電器産業株式会社 | 光学特性測定系の制御方法 |
| DE29901791U1 (de) * | 1999-02-02 | 2000-07-06 | Novartis Ag, Basel | Linsenmesseinrichtung |
| US6765661B2 (en) | 2001-03-09 | 2004-07-20 | Novartis Ag | Lens inspection |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE388284B (sv) * | 1969-12-18 | 1976-09-27 | Kowa Co | Gelmedium for diagnos av primert hepatom medelst immundiffusion eller elektrofores |
| DE2156655A1 (de) * | 1971-11-15 | 1973-05-24 | Max Planck Gesellschaft | Verfahren zur messung der agglutination von biologischen zellstrukturen und einrichtung zur durchfuehrung des verfahrens |
| DE2409273A1 (de) * | 1974-02-27 | 1975-09-04 | Behringwerke Ag | Verfahren und vorrichtung zum messen von antigen-antikoerper-reaktionen |
| GB1545538A (en) * | 1975-11-17 | 1979-05-10 | Gradient Pty Ltd | Method and apparatus for simultaneously recording reaction times |
| US4003988A (en) * | 1976-06-01 | 1977-01-18 | Warner-Lambert Company | Direct agglutination test for pregnancy |
| JPS5529780A (en) * | 1978-08-24 | 1980-03-03 | Kyoto Denshi Kogyo Kk | Colorimetric analyzer |
-
1979
- 1979-06-13 JP JP7425379A patent/JPS55166028A/ja active Granted
-
1980
- 1980-05-22 US US06/152,161 patent/US4320977A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-06-10 DE DE8080103224T patent/DE3061768D1/de not_active Expired
- 1980-06-10 EP EP80103224A patent/EP0021236B1/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0021236A1 (en) | 1981-01-07 |
| DE3061768D1 (en) | 1983-03-03 |
| EP0021236B1 (en) | 1983-01-26 |
| JPS55166028A (en) | 1980-12-24 |
| US4320977A (en) | 1982-03-23 |
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