JPS6231909B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPS6231909B2 JPS6231909B2 JP54038418A JP3841879A JPS6231909B2 JP S6231909 B2 JPS6231909 B2 JP S6231909B2 JP 54038418 A JP54038418 A JP 54038418A JP 3841879 A JP3841879 A JP 3841879A JP S6231909 B2 JPS6231909 B2 JP S6231909B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- serum
- cells
- medium
- culture
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、生体外で動物細胞を効率よく増殖さ
せる方法に関するものである。
せる方法に関するものである。
ガラス、プラスチツクなどの人工基材上での動
物細胞の増殖は周知であり、ワクチン、ホルモン
などの生物製剤の製造を可能にした。
物細胞の増殖は周知であり、ワクチン、ホルモン
などの生物製剤の製造を可能にした。
また最近では、特殊なイオン交換樹脂ビーズ
（マイクロキヤリア）や半透性の中空繊維を培養
基材として用い、より高密度の、あるいは生体内
に近い状態での培養をおこなう試みがなされつつ
ある。
（マイクロキヤリア）や半透性の中空繊維を培養
基材として用い、より高密度の、あるいは生体内
に近い状態での培養をおこなう試みがなされつつ
ある。
しかし、マウスＬ細胞あるいはラツテ肉腫細胞
のように基材表面に付着しないでも増殖可能な特
殊な細胞以外は、分裂・増殖に先立つて、基材表
面への接着・変形が細胞の増殖にとつて不可欠で
あり（細胞増殖の接着依存性、anchoring
effect）一定時間内に表面に接着できなかつた細
胞は死滅することになる。
のように基材表面に付着しないでも増殖可能な特
殊な細胞以外は、分裂・増殖に先立つて、基材表
面への接着・変形が細胞の増殖にとつて不可欠で
あり（細胞増殖の接着依存性、anchoring
effect）一定時間内に表面に接着できなかつた細
胞は死滅することになる。
特に前述したマイクロキヤリアを用いた浮遊培
養や曲率の小さな中空系を基材として用いる場合
には、細胞と基材表面の接触確率あるいは接触時
間が少ないため、細胞初期接着量が少なく、うえ
ついだ細胞量が効率よく増殖しない場合がある。
養や曲率の小さな中空系を基材として用いる場合
には、細胞と基材表面の接触確率あるいは接触時
間が少ないため、細胞初期接着量が少なく、うえ
ついだ細胞量が効率よく増殖しない場合がある。
一方、動物細胞が正常な増殖活動を行なうため
には、各種アミノ酸、ビタミン、糖、塩類、酸素
などの他に血清成分（特に子牛あるいは牛胎児
の）が必要とされるため、通常、細胞は血清を含
む培地中で増殖、保存されている。
には、各種アミノ酸、ビタミン、糖、塩類、酸素
などの他に血清成分（特に子牛あるいは牛胎児
の）が必要とされるため、通常、細胞は血清を含
む培地中で増殖、保存されている。
本発明者らは前記の細胞初期接着量を多くする
目的で鋭意検討した結果、細胞培養に必須である
血清成分が細胞接着に大きな影響を与えることを
見出し、本発明に到達した。
目的で鋭意検討した結果、細胞培養に必須である
血清成分が細胞接着に大きな影響を与えることを
見出し、本発明に到達した。
即ち本発明は、血清を事実上含有しない培地に
懸濁した細胞と培養基材を接触させた後、培地に
血清を添加することを特徴とする細胞を培養する
方法に関するものである。
懸濁した細胞と培養基材を接触させた後、培地に
血清を添加することを特徴とする細胞を培養する
方法に関するものである。
血清を含まない細胞懸濁液は、血清を含む培地
中で増殖している細胞層から培地を抜きとりさら
に、血清を含まない培地（たとえばイーグル
MEMなど）で数回洗浄した後、トリプシン、
EDTAなどで基材からはがした細胞を血清を含ま
ない培地に懸濁して得ることができる。このよう
にして得られた細胞懸濁液と基材とを0.02〜10時
間、好ましくは0.1〜５時間、37℃の炭酸ガスイ
ンキユベーター中で接触させた後、５〜10％濃度
になるように血清（好ましくは子牛あるいは牛胎
児の）を添加するかあるいは５〜10％の血清を含
む培地と交換し、培養を続行する。
中で増殖している細胞層から培地を抜きとりさら
に、血清を含まない培地（たとえばイーグル
MEMなど）で数回洗浄した後、トリプシン、
EDTAなどで基材からはがした細胞を血清を含ま
ない培地に懸濁して得ることができる。このよう
にして得られた細胞懸濁液と基材とを0.02〜10時
間、好ましくは0.1〜５時間、37℃の炭酸ガスイ
ンキユベーター中で接触させた後、５〜10％濃度
になるように血清（好ましくは子牛あるいは牛胎
児の）を添加するかあるいは５〜10％の血清を含
む培地と交換し、培養を続行する。
本発明の方法は、いかなる培養方法にも適用で
き、ガラスやプラスチツク製のシヤーレや培養び
んを用いる従来の培養方法でも、半透性膜等を用
いる新しい方法でもよい。特に前記のマイクロキ
ヤリア法、中空繊維を用いる培養方法は、本発明
の効果が顕著にあらわれる。
き、ガラスやプラスチツク製のシヤーレや培養び
んを用いる従来の培養方法でも、半透性膜等を用
いる新しい方法でもよい。特に前記のマイクロキ
ヤリア法、中空繊維を用いる培養方法は、本発明
の効果が顕著にあらわれる。
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
る。
る。
実施例 １
血清を含まないイーグル培地にヒト胎児由来細
胞を懸濁し（細胞数1.5×105個／ml）、Falcon
ポリスチレンシヤーレに５mlを分注して３時間37
℃の炭酸ガスインキユベーター中で培養し、さら
に５％の子牛血清を含むイーグル培地と置換して
48時間培養を行ない、細胞蛋白量をローリー法で
定量したところ42μｇ／cm2であつた。
胞を懸濁し（細胞数1.5×105個／ml）、Falcon
ポリスチレンシヤーレに５mlを分注して３時間37
℃の炭酸ガスインキユベーター中で培養し、さら
に５％の子牛血清を含むイーグル培地と置換して
48時間培養を行ない、細胞蛋白量をローリー法で
定量したところ42μｇ／cm2であつた。
一方同じ方法と条件で血清を最初から添加した
場合には、蛋白量は30μｇ／cm2であつた。
場合には、蛋白量は30μｇ／cm2であつた。
実施例 ２
血清を含まないイーグル培地にヒト包皮由来細
胞（Flow7000）を懸濁し（細胞数２×105個／
ml）、アミコン社中空糸細胞培養器（Vitafiber）
に注入し、２時間37℃の炭酸ガスインキユベータ
ー中で培養し、さらに10％の子牛血清を含むイー
グル培地と置換して、中空糸内部に新鮮な培地を
潅流し、１週間培養を継続し増殖細胞量を定量し
たところ血清を最初から添加した場合の2.3倍の
細胞量が得られた。
胞（Flow7000）を懸濁し（細胞数２×105個／
ml）、アミコン社中空糸細胞培養器（Vitafiber）
に注入し、２時間37℃の炭酸ガスインキユベータ
ー中で培養し、さらに10％の子牛血清を含むイー
グル培地と置換して、中空糸内部に新鮮な培地を
潅流し、１週間培養を継続し増殖細胞量を定量し
たところ血清を最初から添加した場合の2.3倍の
細胞量が得られた。
Claims (1)
- １ 血清を事実上含有しない培地に懸濁した細胞
と培養基材を接触させた後、培地に血清を添加す
ることを特徴とする細胞を培養する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3841879A JPS55131387A (en) | 1979-04-02 | 1979-04-02 | Cultivation of cell |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3841879A JPS55131387A (en) | 1979-04-02 | 1979-04-02 | Cultivation of cell |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55131387A JPS55131387A (en) | 1980-10-13 |
| JPS6231909B2 true JPS6231909B2 (ja) | 1987-07-10 |
Family
ID=12524755
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3841879A Granted JPS55131387A (en) | 1979-04-02 | 1979-04-02 | Cultivation of cell |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS55131387A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100437081B1 (ko) * | 2001-09-12 | 2004-06-23 | 주식회사 엘지생명과학 | 이산화탄소 농도를 조절하여 재조합 단백질의 생산성을증가시키는 동물세포의 배양방법 |
-
1979
- 1979-04-02 JP JP3841879A patent/JPS55131387A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS55131387A (en) | 1980-10-13 |
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