JPS6313675B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPS6313675B2 JPS6313675B2 JP55075458A JP7545880A JPS6313675B2 JP S6313675 B2 JPS6313675 B2 JP S6313675B2 JP 55075458 A JP55075458 A JP 55075458A JP 7545880 A JP7545880 A JP 7545880A JP S6313675 B2 JPS6313675 B2 JP S6313675B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- medium
- washing
- microcarrier
- microcarriers
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は、ミクロキヤリヤ表面上に付着増殖し
た細胞の洗浄方法に関する。 最近、ある種のワクチン、インターフエロン等
の生物薬品の製造に関連して、二倍体細胞等の係
留依存性動物細胞を大量培養することの重要性が
増すにともない、その培養方法も著るしく進歩し
てきた。 かかる培養方法の１例が、培地中に懸濁した適
当な素材の微小粒子即ちミクロキヤリヤの表面に
細胞を付着せしめ、そこで増殖せしめる方法、す
なわち、一般にミクロキヤリヤ培養法と称される
方法である。一般に、このような方法を用いて細
胞培養を行なう過程において、更には、培養した
細胞に例えばインターフエロンを産生させる過程
等において、例えば下記(a)，(b)等の場合の如く古
い培地を除去し、新しい培地もしくは緩衝液から
なる塩水溶液（以下単に洗浄液と呼ぶ場合があ
る）におきかえる操作すなわち細胞を洗浄する操
作が必須である。 (a) 係留依存性細胞の増殖は、一般には細胞付着
面をほゞ完全におおい尽すまで増殖すると増殖
速度が著るしく低下し、ついには増殖が停止す
る。したがつて更に大量の細胞を得る目的等の
ために細胞培養を続けるには、タンパク質分解
酵素でいわゆる消化処理を施し、細胞と細胞付
着面との結合および細胞どうしの結合を切り、
単一細胞の懸濁液となし、新たな細胞付着表面
を有する系に再接種する操作、即ち細胞継代操
作を行なうことが必要である。 前記タンパク質分解酵素としてはトリプシン
が最も好適に利用されるが、トリプシンを少量
でかつ効果的に作用せしめるためには、トリプ
シンを失活させるタンパク質および細胞と細胞
接着面、細胞どうしの接着に関与している
Ca++イオンの濃度を充分さげた状態でトリプ
シンを作用させることが肝要である。 一方細胞培養に用いた培地中には、血清由来
のタンパク質、細胞の代謝生成物に由来するタ
ンパク質およびCa++イオンが不可避的に含ま
れていることは衆知のとうりである。 したがつて細胞継代操作に際しての消化処理
に先だち培地中に存在するタンパク質、Ca++
イオン等を充分取り除くために細胞をタンパク
質およびCa++イオンを含まない洗浄液で洗浄
する必要がある。 (b) 培養した細胞に、例えばインターフエロンを
産生させる方法としては、スーパーインダクシ
ヨン法と呼ばれる方法等が知られている。この
方法は、２重鎖核酸等のインターフエロン誘発
剤により細胞に処理を施し、更に、シクロヘキ
シミド、アクチノマイシンＤ等の代謝阻害剤を
作用させた後培地をインターフエロン産生培地
に交換してインターフエロンを該培地中に産生
させる方法である。 この際インターフエロン産生培地中のインタ
ーフエロン誘発剤、代謝阻害剤の残存量が多す
ぎるとインターフエロン産生を著るしく阻害す
る。 また、インターフエロン産生培地中にタンパ
ク質が存在すると、得られるインターフエロン
の比活性即即ちタンパク質重量あたりのインタ
ーフエロン活性が低くなり、後に続く精製過程
の負荷を増大する。 したがつて、培地をインターフエロン産生培
地に交換するに際し、培地中に含まれるインタ
ーフエロン誘発剤、代謝阻害剤、さらにはタン
パク質を充分取り除くために、細胞をタンパク
質を含まない洗浄液で洗浄することが肝要であ
る。 ミクロキヤリヤ培養法において上記細胞洗浄を
実施する具体的方法としては、例えば、表面に細
胞が付着増殖したミクロキヤリヤを沈降させ、上
澄培地を吸い取つた後、洗浄液を加え再懸濁させ
るという操作を必要回数繰返えして細胞を洗浄す
る方法がある。かかる細胞洗浄を実施する際、培
地および洗浄液の抜き出しおよび供給にともなう
液の乱れにより細胞の一部がミクロキヤリヤ表面
より剥離する。ミクロキヤリヤ培養法においては
主に下記(a)，(b)，(c)の理由により、かかる細胞の
剥離が特に多く、著じるしい場合には40〜50％に
も達することがあり重大な問題である。 (a) 含水性ミクロキヤリヤを用いる場合には特
に、また、非含水性ミクロキヤリヤを用いる場
合でも一般には、たとえばルー瓶もしくはロー
ラ瓶を用いる培養方法に比較して細胞の洗浄を
効率よく行いがたく、したがつて充分な洗浄を
行なうためには比較的多量の洗浄液で洗浄する
ことが必要である。 (b) ミクロキヤリヤは培地、洗浄液の抜き出しお
よび供給にともなう液流れとともに流動・撹拌
され細胞が剥離しやすい。 (c) ミクロキヤリヤ培養法は特に大スケールの培
養に好適な培養方法であるが、大きいスケール
においては培地および洗浄液の抜き出しおよび
供給にともなう液の流動、乱れが相対的に激し
くなる。ミクロキヤリヤ表面より剥離し、洗浄
液中に浮遊する細胞は、例えば過法もしくは
遠心分離法等の方法により回収することも可能
ではあるが、細胞培養においては、かかる操作
を全て無菌的に遂行する必要があることと相ま
つて、多大な余分な労力を必要とすることとな
る。また、例えばインターフエロン産生に際し
ては、一たんミクロキヤリヤ表面より剥離した
細胞はたとえ回収しても、もはやインターフエ
ロン産生には寄与しない。 本発明の目的は、洗浄時に細胞がミクロキヤリ
ヤ表面から剥離することを効果的に防止すること
のできるミクロキヤリヤ表面上に増殖した細胞の
洗浄方法を提供することにある。 上記本発明の目的は、ミクロキヤリヤ表面上に
増殖した細胞を非タンパク性水溶性高分子物質を
含む塩水溶液で洗浄することからなる細胞洗浄方
法によつて極めて効果的に達成される。 本発明方法に供する被洗浄物質たるミクロキヤ
リヤ表面上に増殖した細胞は公知のミクロキヤリ
ヤ培養法に従がつて適宜取得されうる。 ミクロキヤリヤとしては、正に荷電した化学残
基を有する多糖類微小粒体（例えばジエチルアミ
ノエチル化した架橋デキストラン微粒子、ジメチ
ルアミノプロピル化したポリアクリルアミド微粒
子等）が最も一般的に用いられるが、合成高分子
微小粒体（例えばポリスチレン微小粒体）、無機
質微小粒体（例えばガラス微小粒体）その他細胞
と親和性を有する素材よりなる微小粒体もしくは
微小体等であつてもよい。 ミクロキヤリヤは培地中に懸濁させた状態で培
養に供されるのが最も一般的方法であるが、たと
えば、ミクロキヤリヤの流動層を形成させた状態
で培養に供する方法、ミクロキヤリヤの固定床を
形成した状態で培養に供する方法も用いられる。 次にミクロキヤリヤの表面上に増殖した細胞を
洗浄する方法の例について説明する。 まず表面に細胞が付着増殖したミクロキヤリヤ
を沈降させ上澄培地を吸い取る。この際上澄培地
の流れとともに細胞が付着したミクロキヤリヤが
流出しないよう注意が必要である。このために上
澄培地を吸い取るラインの吸込口もしくはライン
の途中に材を設けることは効果がある。次に洗
浄のための培地もしくは緩衝液からなる塩水溶液
すなわち洗浄液を加えミクロキヤリヤを再懸濁さ
せる。かゝる操作を必要回数繰返えして洗浄を行
なう。上記の洗浄方法は、細胞の付着したミクロ
キヤリヤと培地もしくは洗浄液の分離を沈降分離
法を利用して行う方法であるが、該分離を過法
を利用して行なつてもよくまた両法の組合せで行
なつてもよい。 さらに、上記方法は培地もしくは洗浄液を除い
た後に洗浄液を加えるいわゆる回分法であるが、
培地もしくは洗浄液の除去と洗浄液の供給を並行
して行なう連続法であつてもよい。本発明の方法
においては上記洗浄液中に適当濃度の非タンパク
性水溶性高分子物質を含有させることを本質とす
る。この非タンパク性水溶性高分子物質により、
培地および洗浄液の抜き出し、供給にともなう液
流動、乱れによりミクロキヤリヤ表面から細胞が
剥離することが防止される。 本発明において使用される非タンパク性水溶性
高分子物質の具体例としては、デキストラン、ア
ルギン酸等の天然より得られる水溶性多糖類、メ
チルセルローズ、カルボキシメチルセルローズ、
可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデン粉等の天
然多糖類の誘導体およびポリビニルピロリドン、
ポリオキシエチレン―ポリオキシプロピレン共重
合体等の合成高分子物質等が挙げられる。細胞洗
浄液中の好適な非タンパク性水溶性高分子物質の
濃度に関しては、用いる高分子物質の種類、ミク
ロキヤリヤの種類さらには細胞の種類によつても
異なり、それぞれ実験によつて適宜に決定されう
るが、一般には洗浄液に対して0.0001〜１重量
％、より好ましくは0.001〜0.1重量％の範囲が適
当である。これら高分子物質の分子量の範囲につ
いては水溶性であるかぎりとくに制限はない。洗
浄液としては適当な浸透圧に調整された塩水溶液
が用いられるが、リン酸緩衝液等の緩衝液、場合
によつてはある種の栄養素を含む培地等が特に好
適に用いられる。 次に実施例を用いて本発明の効果の例について
具体的に説明する。 実施例 １ ジエチルアミノエチル化した架橋デキストラン
ミクロキヤリヤ0.25％、仔牛血清５％を含むイー
グルMEM培地中にヒト２倍体細胞4.6×104ケ／
mlを接種し、37℃撹拌条件下で６日間培養した。
途中１回培養培地を仔牛血清５％を含む新しいイ
ーグルMEM培地に交換した。６日目の細胞数は
5.6×105ケ／mlであつた。該懸濁液200mlづつを、
内面をシリコーン処理したガラス容器４本に分注
し、ミクロキヤリヤを沈降させた後それぞれの上
澄培地170mlを吸い取つた。しかる後、２本は
PBS（Ca++マイナス）を、残る２本はメチルセル
ローズ0.05％を含むPBS（Ca++マイナス）をそれ
ぞれ170mlを加え再懸濁し、それぞれサンプリン
グして１回洗浄後の細胞数をカウントした。更に
上記の操作を２回繰り返えし、２回洗浄後、３回
洗浄後の細胞数をカウントした。同一条件の２本
づつの細胞数をそれぞれ平均した細胞数と初期細
胞数5.6×105ケ／mlの差すなわち、剥離した細胞
数の初期細胞数に対する比率をメチルセルローズ
0.05％を含むPBS（Ca++マイナス）で３回洗浄し
た際の剥離した細胞数はメチルセルローズを含ま
ない場合のそれの約４割であつた。細胞数のカウ
ントするには、小量をサンプリングし、ミクロキ
ヤリヤを沈降させて上澄液を吸い取り、吸い取つ
た上澄液と同量のクエン酸0.1M、クリスタルバ
イオレツト0.1％水溶液を加え37℃で数時間イン
キユベートした後、血球計算盤を用いて細胞核数
をカウントした。 実施例 ２ ジエチルアミノエチル化した架橋デキストラン
ミクロキヤリヤ0.25％、仔牛血清５％を含むイー
グルMEM培地中にヒト２倍体細胞9.0×104ケ／
mlを接種し７日間37℃で培養した。途中２回培養
培地を仔牛血清５％を含む新しいイーグルMEM
培地に交換した。７日目の細胞数は7.3×105ケ／
mlであつた。該懸濁液200mlづつを、内面をシリ
コーン処理したガラス容器９本に分注し、実施例
１と同様の方法でそれぞれ表１に示す種類および
濃度の非タンパク性水溶性高分子物質を含む
PBS（Ca++マイナス）で３回洗浄した後細胞数を
実施例１と同様の方法によりカウントした。結果
を表―１に示す。 更に番号１および４に関してミクロキヤリヤを
沈降させ上澄PBS（Ca++マイナス）を吸い取つた
後、トリプシンを作用させ、ミクロキヤリヤより
細胞を剥がした。
た細胞の洗浄方法に関する。 最近、ある種のワクチン、インターフエロン等
の生物薬品の製造に関連して、二倍体細胞等の係
留依存性動物細胞を大量培養することの重要性が
増すにともない、その培養方法も著るしく進歩し
てきた。 かかる培養方法の１例が、培地中に懸濁した適
当な素材の微小粒子即ちミクロキヤリヤの表面に
細胞を付着せしめ、そこで増殖せしめる方法、す
なわち、一般にミクロキヤリヤ培養法と称される
方法である。一般に、このような方法を用いて細
胞培養を行なう過程において、更には、培養した
細胞に例えばインターフエロンを産生させる過程
等において、例えば下記(a)，(b)等の場合の如く古
い培地を除去し、新しい培地もしくは緩衝液から
なる塩水溶液（以下単に洗浄液と呼ぶ場合があ
る）におきかえる操作すなわち細胞を洗浄する操
作が必須である。 (a) 係留依存性細胞の増殖は、一般には細胞付着
面をほゞ完全におおい尽すまで増殖すると増殖
速度が著るしく低下し、ついには増殖が停止す
る。したがつて更に大量の細胞を得る目的等の
ために細胞培養を続けるには、タンパク質分解
酵素でいわゆる消化処理を施し、細胞と細胞付
着面との結合および細胞どうしの結合を切り、
単一細胞の懸濁液となし、新たな細胞付着表面
を有する系に再接種する操作、即ち細胞継代操
作を行なうことが必要である。 前記タンパク質分解酵素としてはトリプシン
が最も好適に利用されるが、トリプシンを少量
でかつ効果的に作用せしめるためには、トリプ
シンを失活させるタンパク質および細胞と細胞
接着面、細胞どうしの接着に関与している
Ca++イオンの濃度を充分さげた状態でトリプ
シンを作用させることが肝要である。 一方細胞培養に用いた培地中には、血清由来
のタンパク質、細胞の代謝生成物に由来するタ
ンパク質およびCa++イオンが不可避的に含ま
れていることは衆知のとうりである。 したがつて細胞継代操作に際しての消化処理
に先だち培地中に存在するタンパク質、Ca++
イオン等を充分取り除くために細胞をタンパク
質およびCa++イオンを含まない洗浄液で洗浄
する必要がある。 (b) 培養した細胞に、例えばインターフエロンを
産生させる方法としては、スーパーインダクシ
ヨン法と呼ばれる方法等が知られている。この
方法は、２重鎖核酸等のインターフエロン誘発
剤により細胞に処理を施し、更に、シクロヘキ
シミド、アクチノマイシンＤ等の代謝阻害剤を
作用させた後培地をインターフエロン産生培地
に交換してインターフエロンを該培地中に産生
させる方法である。 この際インターフエロン産生培地中のインタ
ーフエロン誘発剤、代謝阻害剤の残存量が多す
ぎるとインターフエロン産生を著るしく阻害す
る。 また、インターフエロン産生培地中にタンパ
ク質が存在すると、得られるインターフエロン
の比活性即即ちタンパク質重量あたりのインタ
ーフエロン活性が低くなり、後に続く精製過程
の負荷を増大する。 したがつて、培地をインターフエロン産生培
地に交換するに際し、培地中に含まれるインタ
ーフエロン誘発剤、代謝阻害剤、さらにはタン
パク質を充分取り除くために、細胞をタンパク
質を含まない洗浄液で洗浄することが肝要であ
る。 ミクロキヤリヤ培養法において上記細胞洗浄を
実施する具体的方法としては、例えば、表面に細
胞が付着増殖したミクロキヤリヤを沈降させ、上
澄培地を吸い取つた後、洗浄液を加え再懸濁させ
るという操作を必要回数繰返えして細胞を洗浄す
る方法がある。かかる細胞洗浄を実施する際、培
地および洗浄液の抜き出しおよび供給にともなう
液の乱れにより細胞の一部がミクロキヤリヤ表面
より剥離する。ミクロキヤリヤ培養法においては
主に下記(a)，(b)，(c)の理由により、かかる細胞の
剥離が特に多く、著じるしい場合には40〜50％に
も達することがあり重大な問題である。 (a) 含水性ミクロキヤリヤを用いる場合には特
に、また、非含水性ミクロキヤリヤを用いる場
合でも一般には、たとえばルー瓶もしくはロー
ラ瓶を用いる培養方法に比較して細胞の洗浄を
効率よく行いがたく、したがつて充分な洗浄を
行なうためには比較的多量の洗浄液で洗浄する
ことが必要である。 (b) ミクロキヤリヤは培地、洗浄液の抜き出しお
よび供給にともなう液流れとともに流動・撹拌
され細胞が剥離しやすい。 (c) ミクロキヤリヤ培養法は特に大スケールの培
養に好適な培養方法であるが、大きいスケール
においては培地および洗浄液の抜き出しおよび
供給にともなう液の流動、乱れが相対的に激し
くなる。ミクロキヤリヤ表面より剥離し、洗浄
液中に浮遊する細胞は、例えば過法もしくは
遠心分離法等の方法により回収することも可能
ではあるが、細胞培養においては、かかる操作
を全て無菌的に遂行する必要があることと相ま
つて、多大な余分な労力を必要とすることとな
る。また、例えばインターフエロン産生に際し
ては、一たんミクロキヤリヤ表面より剥離した
細胞はたとえ回収しても、もはやインターフエ
ロン産生には寄与しない。 本発明の目的は、洗浄時に細胞がミクロキヤリ
ヤ表面から剥離することを効果的に防止すること
のできるミクロキヤリヤ表面上に増殖した細胞の
洗浄方法を提供することにある。 上記本発明の目的は、ミクロキヤリヤ表面上に
増殖した細胞を非タンパク性水溶性高分子物質を
含む塩水溶液で洗浄することからなる細胞洗浄方
法によつて極めて効果的に達成される。 本発明方法に供する被洗浄物質たるミクロキヤ
リヤ表面上に増殖した細胞は公知のミクロキヤリ
ヤ培養法に従がつて適宜取得されうる。 ミクロキヤリヤとしては、正に荷電した化学残
基を有する多糖類微小粒体（例えばジエチルアミ
ノエチル化した架橋デキストラン微粒子、ジメチ
ルアミノプロピル化したポリアクリルアミド微粒
子等）が最も一般的に用いられるが、合成高分子
微小粒体（例えばポリスチレン微小粒体）、無機
質微小粒体（例えばガラス微小粒体）その他細胞
と親和性を有する素材よりなる微小粒体もしくは
微小体等であつてもよい。 ミクロキヤリヤは培地中に懸濁させた状態で培
養に供されるのが最も一般的方法であるが、たと
えば、ミクロキヤリヤの流動層を形成させた状態
で培養に供する方法、ミクロキヤリヤの固定床を
形成した状態で培養に供する方法も用いられる。 次にミクロキヤリヤの表面上に増殖した細胞を
洗浄する方法の例について説明する。 まず表面に細胞が付着増殖したミクロキヤリヤ
を沈降させ上澄培地を吸い取る。この際上澄培地
の流れとともに細胞が付着したミクロキヤリヤが
流出しないよう注意が必要である。このために上
澄培地を吸い取るラインの吸込口もしくはライン
の途中に材を設けることは効果がある。次に洗
浄のための培地もしくは緩衝液からなる塩水溶液
すなわち洗浄液を加えミクロキヤリヤを再懸濁さ
せる。かゝる操作を必要回数繰返えして洗浄を行
なう。上記の洗浄方法は、細胞の付着したミクロ
キヤリヤと培地もしくは洗浄液の分離を沈降分離
法を利用して行う方法であるが、該分離を過法
を利用して行なつてもよくまた両法の組合せで行
なつてもよい。 さらに、上記方法は培地もしくは洗浄液を除い
た後に洗浄液を加えるいわゆる回分法であるが、
培地もしくは洗浄液の除去と洗浄液の供給を並行
して行なう連続法であつてもよい。本発明の方法
においては上記洗浄液中に適当濃度の非タンパク
性水溶性高分子物質を含有させることを本質とす
る。この非タンパク性水溶性高分子物質により、
培地および洗浄液の抜き出し、供給にともなう液
流動、乱れによりミクロキヤリヤ表面から細胞が
剥離することが防止される。 本発明において使用される非タンパク性水溶性
高分子物質の具体例としては、デキストラン、ア
ルギン酸等の天然より得られる水溶性多糖類、メ
チルセルローズ、カルボキシメチルセルローズ、
可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデン粉等の天
然多糖類の誘導体およびポリビニルピロリドン、
ポリオキシエチレン―ポリオキシプロピレン共重
合体等の合成高分子物質等が挙げられる。細胞洗
浄液中の好適な非タンパク性水溶性高分子物質の
濃度に関しては、用いる高分子物質の種類、ミク
ロキヤリヤの種類さらには細胞の種類によつても
異なり、それぞれ実験によつて適宜に決定されう
るが、一般には洗浄液に対して0.0001〜１重量
％、より好ましくは0.001〜0.1重量％の範囲が適
当である。これら高分子物質の分子量の範囲につ
いては水溶性であるかぎりとくに制限はない。洗
浄液としては適当な浸透圧に調整された塩水溶液
が用いられるが、リン酸緩衝液等の緩衝液、場合
によつてはある種の栄養素を含む培地等が特に好
適に用いられる。 次に実施例を用いて本発明の効果の例について
具体的に説明する。 実施例 １ ジエチルアミノエチル化した架橋デキストラン
ミクロキヤリヤ0.25％、仔牛血清５％を含むイー
グルMEM培地中にヒト２倍体細胞4.6×104ケ／
mlを接種し、37℃撹拌条件下で６日間培養した。
途中１回培養培地を仔牛血清５％を含む新しいイ
ーグルMEM培地に交換した。６日目の細胞数は
5.6×105ケ／mlであつた。該懸濁液200mlづつを、
内面をシリコーン処理したガラス容器４本に分注
し、ミクロキヤリヤを沈降させた後それぞれの上
澄培地170mlを吸い取つた。しかる後、２本は
PBS（Ca++マイナス）を、残る２本はメチルセル
ローズ0.05％を含むPBS（Ca++マイナス）をそれ
ぞれ170mlを加え再懸濁し、それぞれサンプリン
グして１回洗浄後の細胞数をカウントした。更に
上記の操作を２回繰り返えし、２回洗浄後、３回
洗浄後の細胞数をカウントした。同一条件の２本
づつの細胞数をそれぞれ平均した細胞数と初期細
胞数5.6×105ケ／mlの差すなわち、剥離した細胞
数の初期細胞数に対する比率をメチルセルローズ
0.05％を含むPBS（Ca++マイナス）で３回洗浄し
た際の剥離した細胞数はメチルセルローズを含ま
ない場合のそれの約４割であつた。細胞数のカウ
ントするには、小量をサンプリングし、ミクロキ
ヤリヤを沈降させて上澄液を吸い取り、吸い取つ
た上澄液と同量のクエン酸0.1M、クリスタルバ
イオレツト0.1％水溶液を加え37℃で数時間イン
キユベートした後、血球計算盤を用いて細胞核数
をカウントした。 実施例 ２ ジエチルアミノエチル化した架橋デキストラン
ミクロキヤリヤ0.25％、仔牛血清５％を含むイー
グルMEM培地中にヒト２倍体細胞9.0×104ケ／
mlを接種し７日間37℃で培養した。途中２回培養
培地を仔牛血清５％を含む新しいイーグルMEM
培地に交換した。７日目の細胞数は7.3×105ケ／
mlであつた。該懸濁液200mlづつを、内面をシリ
コーン処理したガラス容器９本に分注し、実施例
１と同様の方法でそれぞれ表１に示す種類および
濃度の非タンパク性水溶性高分子物質を含む
PBS（Ca++マイナス）で３回洗浄した後細胞数を
実施例１と同様の方法によりカウントした。結果
を表―１に示す。 更に番号１および４に関してミクロキヤリヤを
沈降させ上澄PBS（Ca++マイナス）を吸い取つた
後、トリプシンを作用させ、ミクロキヤリヤより
細胞を剥がした。
【表】
それぞれ仔牛血清５％を含むイーグルMEM培
地を総量が100mlとなるまで加え撹拌した後ミク
ロキヤリヤを沈降分離し細胞懸濁液を得た。 別途、ミクロキヤリヤ0.25％、仔牛血清５％を
含むイーグルMEM190mlを入れたスピナーフラ
スコ４本を準備し、番号１より得た上記細胞懸濁
液10mlづつを２本のスピナーフラスコに、番号４
より得たそれを残り２本のスピナーフラスコに接
種し、37℃撹拌下で６日間培養した。途中２回培
養培地を仔牛血清５％を含む新しい培地に交換し
た。 接種後４日目の番号１より接種した２本のスピナ
ーフラスコの細胞数の平均値は2.7×105ケ／
ml、番号４より接種した２本のスピナーフラ
スコの細胞数の平均値は3.3×105ケ／mlであ
つた。 接種後６日目のそれぞれの値は6.7×105ケ／mlお
よび8.4×105ケ／mlであつた。
地を総量が100mlとなるまで加え撹拌した後ミク
ロキヤリヤを沈降分離し細胞懸濁液を得た。 別途、ミクロキヤリヤ0.25％、仔牛血清５％を
含むイーグルMEM190mlを入れたスピナーフラ
スコ４本を準備し、番号１より得た上記細胞懸濁
液10mlづつを２本のスピナーフラスコに、番号４
より得たそれを残り２本のスピナーフラスコに接
種し、37℃撹拌下で６日間培養した。途中２回培
養培地を仔牛血清５％を含む新しい培地に交換し
た。 接種後４日目の番号１より接種した２本のスピナ
ーフラスコの細胞数の平均値は2.7×105ケ／
ml、番号４より接種した２本のスピナーフラ
スコの細胞数の平均値は3.3×105ケ／mlであ
つた。 接種後６日目のそれぞれの値は6.7×105ケ／mlお
よび8.4×105ケ／mlであつた。
図は実施例１の結果を示す線図であり、１はメ
チルセルローズ共存系、２は非タンパク性水溶性
高分子物質非存系についての結果である。
チルセルローズ共存系、２は非タンパク性水溶性
高分子物質非存系についての結果である。
Claims (1)
- １ ミクロキヤリヤ表面上に増殖した細胞を塩水
溶液で洗浄するに際し、該水溶液に非タンパク性
水溶性高分子物質を共存せしめることを特徴とす
る細胞の洗浄方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7545880A JPS572682A (en) | 1980-06-06 | 1980-06-06 | Washing method of cell |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7545880A JPS572682A (en) | 1980-06-06 | 1980-06-06 | Washing method of cell |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS572682A JPS572682A (en) | 1982-01-08 |
| JPS6313675B2 true JPS6313675B2 (ja) | 1988-03-26 |
Family
ID=13576862
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7545880A Granted JPS572682A (en) | 1980-06-06 | 1980-06-06 | Washing method of cell |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS572682A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6244176A (ja) * | 1985-08-21 | 1987-02-26 | Toray Ind Inc | 動物細胞の継代方法 |
-
1980
- 1980-06-06 JP JP7545880A patent/JPS572682A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS572682A (en) | 1982-01-08 |
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