JPS6337089B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、人IgGのＬ鎖（以下単にＬ鎖と記す
ことがある。）を主成分とする消化器潰瘍治療予
防剤に係る。 従来IgGのＬ鎖の薬理効果は知られていなかつ
た。従つてこれを医薬として用いることはなかつ
た。 IgGのＬ鎖は、公知のIgGの構成断片としてす
でに報告されており、例えば、フライシマンら
（Fleischman et al）の報告〔Arch.Biochem.
Biophys.，Supple）(1)，174，（1962）〕がある。
本発明において有効成分として特定されるＬ鎖は
人由来のIgGからIgGのジスルフイド結合を切断
して得られる分子量23000±1000のポリペプチド
鎖であり、その回収法は、前記フライシマンらに
よつて確立されている。 本発明に係るＬ鎖の代表的回収法の概要は次の
とおりである。 IgGを0.55Mのトリス―HCl緩衝液、PH8.2に約
２％の濃度に溶かす。静かに窒素ガスを通じてか
ら２―メルカプトエタノールを終濃度0.75Mにな
るように加え、室温に１時間放置して還元を行な
う。ついで、氷水浴で冷却し、これに２―メルカ
プトエタノールと同量の0.75Mモノヨードアセト
アミドを加え、溶液のPHをトリメチルアミン添加
により8.0に保ちつつ１時間反応させたのち冷食
塩水に透析して余剰の試薬を除く。この反応で遊
離のSH基がアルキル化によりブロツクされる。
次に冷却した1Mプロピオン酸に透析してＨ鎖と
Ｌ鎖を解離させ、1Mプロピオン酸で平衡化した
セフアデツクス（Sephadex）Ｇ―75のカラムを
通過させるとＨ鎖とＬ鎖が分離した二つのピーク
として溶出される。Ｌ鎖画分を回収後、透析、除
菌過、加熱処理、凍結乾燥等の医薬品として提
供されうる所望の公知の処理を旋す。 本発明に用いられるＬ鎖は、勿論上記の回収法
のみにより得られたものではなく、応用可能な他
の方法に従つて製造されたＬ鎖であつてもよい。 このＬ鎖は、そのSH基がアルキル化又は、ス
ルホ化など薬理的に許容される処理により保護さ
れていてもよい。 次にＬ鎖の薬理作用と効果、臨床試験、急性毒
性試験、投与量及び投与方法等を確認するために
行つた実験の方法ならびにその結果を示す。 （） 薬理効果 実験動物に(1)幽門結紮潰瘍及び、(2)フエニルブ
タゾン潰瘍をそれぞれおこし、Ｌ鎖の効果を調べ
た。 (1) シヤイ（Shay）らの方法〔Gastroentero―
logy，５，43，（1945）〕に準じて幽門結紮潰瘍
を作成した。すなわち、ウイスター系雄性ラツ
ト（体重200〜250ｇ）を24時間絶食後、エーテ
ル麻酔下に幽門部を結紮した。絶食絶水下に16
時間放置後、エーテル麻酔下に胃を摘出し、前
胃部に発生した潰瘍をナルミ（Narumi）らの
方法〔J.Takeda Res.Lab.，29，85，（1970）〕
に従い、次のような潰瘍指数により評価した。 ０：正常 １：エロジオンまたは出血斑 ２：10個以下の小潰瘍（直径１mm以下） ３：10個以上の小潰瘍または10個以下の中潰
瘍（直径２〜４mm） ４：10個以上の中潰瘍または大潰瘍（直径４
mm以上） ５：穿孔 なお検体は、滅菌生理食塩水に溶解し、結紮
直後および８時間目に表１に示す量を２回、腹
腔内投与した。 (2) 鈴木らの方法〔Japan J.Pharmaco.，26，
471（1976）〕によつてフエニルブタゾン潰瘍を
作成した。 ウイスター系雄性ラツト（体重150〜200ｇ）
を24時間絶食後、表２に示す量の検体を腹腔内
投与し、その30分後にフエニルブタゾン（５％
アラビアゴムで懸濁）200mg／Kgを経口投与し
た。絶食絶水下に５時間放置後、エーテル麻酔
下に胃を摘出し、ホルマリン固定した。腺胃部
に生じた潰瘍は、次のようにスコア（score）
を決めて合計した値を潰瘍指数として表わし
た。 score1：潰瘍の長径１mm score2：１〜２mm score3：２〜３mm score4：３〜４mm score5：４〜５mm score10：＞５mm score25：穿孔しているもの (1)及び(2)の結果をそれぞれ表１及び表２に示
す。 表１によれば、Ｌ鎖の幽門結紮潰瘍に対する作
用は、Ｌ鎖それぞれ50mg／Kg及び10mg／Kg各２回
投与では、対照の生理食塩水投与に比し潰瘍発生
率は約90％に抑制される。さらに用量を下げた５
mg／Kg２回で68％抑制し、１mg／Kg２回投与でも
40％近い抑制の活性が認められる。

【表】 表２によれば、Ｌ鎖のフエニルブタゾン潰瘍に
対する予防作用は、Ｌ鎖５mg／Kgの用量で82％の
有意な活性が認められた。

【表】 （） 薬理作用 Ｌ鎖の抗潰瘍作用機構に関する検討をおこなつ
た。 (1) Ｌ鎖の胃液分泌抑制作用を検討した。投与
は、腹腔内投与のほか、静脈内投与を行つた。 胃液分泌抑制活性は、シヤイ（Shay）らの
方法〔Gastroenterology26，906，（1954）〕に
準じて測定した。すなわち、48時間絶食したウ
イスター系雄性ラツト（体重150〜200ｇ）の幽
門部を結紮後４時間の貯留胃液について、その
液量、総酸度、総ペプシン活性を測定した。総
酸度は、フエノールフタレインを指示薬とし
て、1/50Ｎ NaOHで滴定して求め、また、
総ペプシン活性は、カゼインを基質としてアン
ソン（Anson）法〔Brit.J.Pharmacol.，13，
54，（1958）〕に準じて求めた。検体は滅菌生理
食塩水に溶解し、結紮直後に腹腔内投与あるい
は股静脈内投与した。 結果は、表３に示される。対照群の胃液量に対
し、Ｌ鎖５mg／Kgを腹腔内投与した場合、73％抑
制し、さらに１mg／Kgでも有意に抑制した。この
傾向は、総酸度及び総ペプシン活性とも同様に抑
制が認められた。静脈内投与した場合も、５mg／
Kg、１mg／Kg投与ともそれぞれ用量に応じた強い
胃液分泌抑制活性を認めた。

〔メタケイ酸アルミン酸マグネシウム 20％ トウモロコシデンプン 30％ 乳 糖 50％〕

(3)結晶セルロース 24.0mg (4) カルボキシルメチルセルロース・カルシウム
4.0mg (5) ステアリン酸マグネシウム 0.4mg (1)，(3)および(4)はいずれも予め100メツシユの
ふるいに通す。この(1)，(3)，(4)と(2)をそれぞれ乾
燥して一定含水率にまで下げた後、上記の重量割
合で混合機を用いて混合する。全質均等にした混
合末に(5)を添加して短時間（30秒間）混合し、混
合末を打錠（杵：6.3mmφ、6.0mmＲ）して、１錠
80mgの錠剤とした。 この錠剤は必要に応じて通常用いられる胃溶性
フイルムコーテイング剤（例、ポリビニルアセタ
ールジエチルアミノアセテート）や食用性着色剤
でコーテイングしてもよい。 実施例２ （静脈内注射剤） (1) 人IgG由来カルバモイルメチル化Ｌ鎖 50mg (2) ブドウ糖 100mg (3) 生理食塩水 10ml (3)に(1)と(2)を上記の重量割合で加えて撹拌し、
完全に溶解させる。この溶解液を孔径0.45μのメ
ンブランフイルターを用いて濾過した後、再び孔
径0.20μのメンブランフイルターを用いて除菌濾
過を行なう。濾過液を10mlずつ無菌的にバイアル
に分注し、窒素ガスを充填した後密封して静脈内
注射剤とする。 実施例３ （カプセル剤） (1) 人IgG由来カルバモイルメチル化Ｌ鎖 50ｇ (2) 乳 糖 935ｇ (3) ステアリン酸マグネシウム 15ｇ 上記成分をそれぞれ秤量して合計1000ｇを均一
に混合し、混合粉体をハードゼラチンカプセルに
200mgずつ充填する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 人IgGのＬ鎖を活性成分とする消化器潰瘍治
   療予防剤。 ２ Ｌ鎖がアルキル化Ｌ鎖である特許請求の範囲
   第１項記載の消化器潰瘍治療予防剤。 ３ 形態が経口投与用の散剤、錠剤又はカプセル
   である特許請求の範囲第１項記載の消化器潰瘍治
   療予防剤。 ４ 形態が、静脈内、筋肉内又は経口投与用の液
   状である特許請求の範囲第１項記載の消化器潰瘍
   治療予防剤。