【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
本発明は血液凝固促進剤に関し、詳しくはXII因
子活性化能を有する血液凝固促進剤に関する。
近年、検査技術の目覚しい進歩と相俟つて、血
清生化学検査、血清免疫学検査、血球検査等の血
液検査が広く普及し、病気予防や早期診断に大き
く貢献するに至つている。なかでも血清検査は血
液検査の主体をなしており、この検査において必
要な血清は、通常、血液を血液検査用容器に採取
し、これを凝固させた後、遠心分離によつて比重
の異なる血餅、即ち、フイブリンと血球が混合し
たゲル様塊状物を分離させ、血清部分をピペツト
で吸い上げたり、或いはデカンテーシヨンして採
取している。
しかしながら、一般に血液は凝固するまでにか
なりの時間を要し、従来、迅速に検査を実施する
ことが困難である。最も血液凝固時間が短いとさ
れているガラス製血液検査用容器でさえ、血液を
注入した後、凝固に至るまでに40分乃至60分を必
要とし、合成樹脂製血液検査用容器に至つては、
血液凝固までに４時間以上の放置を必要とする。
このため、XII因子活性化能を有し、血液凝固を
促進するガラス、カオリン、ベントナイト、シリ
カ、エラジン酸等が血清検査における血液凝固促
進剤としてのほか、血液の凝固機能検査の一つで
ある活性化部分トロンボプラスチン時間の測定試
薬の一成分として実用に供されているが、その純
度や組成等によつてその活性化能が安定しない問
題がある。
本発明は上記した問題を解決するためになされ
たものであつて、XII因子を活性化させ、血液凝固
に要する時間を大幅に短縮させると共に、その血
液凝固の促進効果が極めて安定している血液凝固
促進剤を見出して本発明に至つたものである。
本発明の血液凝固促進剤は、シユウ酸の金属塩
であつて、該金属塩を構成する金属イオンが
Cu2+，Co2+，Fe2+，Ni2+，Mg2+及びCe3+の群か
ら選ばれた２価以上の金属イオンであるシユウ酸
塩からなることを特徴とするものである。
本発明による血液凝固促進剤としての上記シユ
ウ酸塩における金属イオンは、Cu2+，Co2+，
Fe2+，Ni2+，Mg2+及びCe3+からなる群から選ば
れた２価以上の金属イオンである。
本発明者は既に、分子内に相隣るカルボニル基
を有し、且つ、これらが立体的に実質的に同一の
平面上にある一群の環式有機化合物がタンパク質
である血液の凝固因子に対して特異的な作用をも
つことを明らかにしたが、（特願昭58−114659
号）、シユウ酸塩を形成する金属イオンが上記２
価以上の金属イオンであつて、シユウ酸イオンが
当該金属イオンを介してキレート様の塩構造を形
成し、炭素−炭素結合が自由回転を阻害されると
き、シユウ酸塩は分子内に相隣るカルボニル基を
有し、且つ、これらが立体的に実質的に同一の平
面上に位置するような立体構造をとるために、作
用機序は明らかではないが、上記と同様にして血
液凝固因子に対して特異的な効果を有するものと
考えられる。
なお、金属イオンが１価であるとき、シユウ酸
塩は炭素−炭素間結合が自由に回転することがで
きると共に、カルボニル基相互の立体的な反発や
二つの金属イオンの静電的な反発のために、相隣
るカルボニル基が立体的に実質的に同一の平面上
にないために、血液凝固に対して特異的な作用を
有しないのであろう。
因にシユウ酸の１価の金属塩、例えば、シユウ
酸カリウムやシユウ酸ナトリウムは血液中におい
て解離して、重要な血液凝固因子であり、且つ、
K+やNa+よりもイオン化傾向の小さいCa2+と難
溶性のキレート化合物を形成するので、Ca2+を
失つた血液は凝固機構を阻害され、従つて、上記
１価金属塩は従来より血液の抗凝固剤として広く
使用されている。
本発明の血液凝固促進としてのシユウ酸塩の使
用においては、例えば、血液を血液検査用容器に
採取し、これを凝固させる際にこれを血液中に存
在させるが、上記血液検査用容器は特に制限され
ず、従来より通常に用いられているガラス製又は
樹脂製の容器が適宜に用いられる。また、上記シ
ユウ酸塩は、これをそのままの粉末状で、又は適
宜の溶剤に溶解若しくは分散させて、血液中に添
加してもよいが、血液が血液検査用容器内におい
て瞬間的に、又は部分的に高濃度のこれらシユウ
酸塩と接触した場合、血液中のタンパク質成分が
変質するおそれがあるので、比表面積の大きい担
体にシユウ酸塩を担持させ、これを血液検査用容
器中の血液に添加するのが好ましい。この方法に
よれば、シユウ酸塩は均一な小さい濃度で血液中
に分散され、また、シユウ酸塩の溶液又は分散液
を希釈して血液に添加する場合と異なり、血液を
希釈して、検査に支障を来すこともない。
上記担体としては、血液検査に有害な影響を与
えず、大きい比表面積を有するものであれば、特
に制限されることなく、種々のものを用いること
ができるが、例えば、不織布、織布、樹脂ビーズ
等を好適に用いることができる。このような担体
にシユウ酸塩を担持させるには、例えば、その溶
液や分散液を塗布し、又はこれに浸漬した後、乾
燥して、担体に付着させればよい。また、アラビ
アゴム等の適宜の助剤と混合して水分散液とし、
これを急速凍結乾燥する等の方法により、シユウ
酸塩を担持した粒子状物を得ることもできる。
血液凝固促進剤としてのシユウ酸塩の血液中に
おける存在量は、血液１mlについて少なくとも１
×10-10ｇであり、これより少ないときは、血液
凝固の促進効果が乏しい。しかし、余りに多量に
存在させるときは、却つて血液検査に種々の支障
を来すおそれがあるので、10-1ｇ以下とするのが
好ましい。
本発明の血液凝固促進剤は、以上のように、特
定の金属イオンを有するシユウ酸塩であるので、
その製造及び精製が簡単であり、しかも、安定し
てすぐれた血液凝固促進作用を有し、種々の臨床
検査分野において使用することができる。従つ
て、例えば、これを血液中に存在させるとき、XII
因子が迅速に活性化され、容器に血液を採取後の
凝固に要する時間が著しく短縮される。更に、出
血創の止血等にも使用することができる。
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本
発明はこれら実施例により何ら限定されるもので
はない。
実施例 １
シユウ酸のCu塩、Co塩、Fe塩、Ni塩、Mg塩、
Ce塩並びにガラス粉末及びエラジン酸のそれぞ
れの0.05重量％生理食塩水分散液を調製した。
クエン酸ナトリウム抗凝固ウサギ血漿１mlに上
記試験液１ml及び0.025M塩化カルシウム水溶液
１mlを混合し、25℃に保つて、混合直後から血液
が凝固するまでの時間、（以下、カルシウム再加
時間という。）を測定した。
比較例
クエン酸ナトリウム抗凝固ウサギ血漿１mlに生
理食塩水１ml及び0.025M塩化カルシウム水溶液
１mlを混合し、25℃でカルシウム再加時間を測定
した。
結果を表に示す。本発明の血液凝固促進剤によ
れば、エラジン酸に比肩し得る良好な血液凝固促
進作用を有することが明らかである。
The present invention relates to a blood coagulation promoter, and more particularly to a blood coagulation promoter capable of activating factor XII. In recent years, with the remarkable progress in testing technology, blood tests such as serum biochemical tests, serum immunological tests, and hematology tests have become widespread, and have greatly contributed to disease prevention and early diagnosis. Among these, serum tests are the main body of blood tests, and the serum required for this test is usually obtained by collecting blood into a blood test container, coagulating it, and then centrifuging it to collect blood with different specific gravities. The mochi, that is, a gel-like mass containing a mixture of fibrin and blood cells, is separated, and the serum portion is collected by pipetting or decanting. However, blood generally takes a considerable amount of time to coagulate, making it difficult to conduct tests quickly. Even with glass blood test containers, which are said to have the shortest blood coagulation time, it takes 40 to 60 minutes for blood to coagulate after blood is injected, and synthetic resin blood test containers do not. ,
It takes 4 hours or more for blood to coagulate. For this reason, glass, kaolin, bentonite, silica, ellagic acid, etc., which have the ability to activate factor XII and promote blood coagulation, are used as blood coagulation promoters in serum tests as well as in blood coagulation function tests. Although it is in practical use as a component of a reagent for measuring activated partial thromboplastin time, there is a problem that its activation ability is unstable depending on its purity, composition, etc. The present invention has been made in order to solve the above-mentioned problems, and provides blood that activates factor XII, significantly reduces the time required for blood coagulation, and has an extremely stable blood coagulation promoting effect. The present invention was achieved by discovering a coagulation accelerator. The blood coagulation promoter of the present invention is a metal salt of oxalic acid, and the metal ions constituting the metal salt are
It is characterized by being composed of oxalate, which is a divalent or higher metal ion selected from the group of Cu 2+ , Co 2+ , Fe 2+ , Ni 2+ , Mg 2+ and Ce 3+ . The metal ions in the above oxalate as a blood coagulation promoter according to the present invention include Cu 2+ , Co 2+ ,
It is a divalent or higher metal ion selected from the group consisting of Fe 2+ , Ni 2+ , Mg 2+ and Ce 3+ . The present inventor has already discovered that a group of cyclic organic compounds that have adjacent carbonyl groups in the molecule and that are sterically located on substantially the same plane are related to blood coagulation factors, which are proteins. (Patent application 114659/1986)
No. 2), the metal ions forming oxalate are
When an oxalate ion is a metal ion with higher valence and forms a chelate-like salt structure through the metal ion, and the free rotation of the carbon-carbon bond is inhibited, the oxalate ion forms a chelate-like salt structure through the metal ion. Although the mechanism of action is not clear, because it has a steric structure in which it has a carbonyl group and is located on substantially the same steric plane, blood coagulation factors It is thought that it has a specific effect on. In addition, when the metal ion is monovalent, the carbon-carbon bond in oxalate can freely rotate, and the steric repulsion between carbonyl groups and the electrostatic repulsion between two metal ions can occur. Therefore, adjacent carbonyl groups are not sterically located on substantially the same plane, and therefore do not have a specific effect on blood coagulation. In fact, monovalent metal salts of oxalic acid, such as potassium oxalate and sodium oxalate, are dissociated in the blood and are important blood coagulation factors, and
Since it forms a poorly soluble chelate compound with Ca 2+ , which has a smaller ionization tendency than K + and Na + , blood that has lost Ca 2+ has its coagulation mechanism inhibited. Widely used as a blood anticoagulant. In the use of oxalate to promote blood coagulation according to the present invention, for example, blood is collected into a blood test container, and when coagulating it, it is present in the blood. There are no limitations, and conventional glass or resin containers can be used as appropriate. Further, the above oxalate may be added to blood in the form of a powder as it is, or after being dissolved or dispersed in an appropriate solvent. If these oxalates come in contact with partially high concentrations, protein components in the blood may be denatured. Therefore, oxalate is supported on a carrier with a large specific surface area, and the blood in the blood test container is loaded with oxalates. It is preferable to add it to. According to this method, oxalate is dispersed in the blood in a small uniform concentration, and unlike the case where a solution or dispersion of oxalate is diluted and added to the blood, the blood is diluted and tested. It does not cause any trouble. As the carrier, various carriers can be used without particular limitation as long as they do not have a harmful effect on blood tests and have a large specific surface area. For example, nonwoven fabrics, woven fabrics, resins, etc. Beads and the like can be suitably used. In order to support oxalate on such a carrier, for example, a solution or dispersion thereof may be applied or immersed therein, followed by drying and adhering to the carrier. In addition, it can be mixed with appropriate auxiliary agents such as gum arabic to form an aqueous dispersion.
A particulate material carrying oxalate can also be obtained by a method such as rapid freeze-drying. The amount of oxalate present in the blood as a blood clotting promoter is at least 1 ml per ml of blood.
×10 −10 g, and if it is less than this, the effect of promoting blood coagulation is poor. However, if it is present in too large a quantity, it may cause various problems in blood tests, so it is preferable to limit the amount to 10 -1 g or less. As described above, the blood coagulation promoter of the present invention is an oxalate having a specific metal ion, so
It is easy to produce and purify, has stable and excellent blood coagulation promoting effects, and can be used in various clinical testing fields. Therefore, for example, when it is present in the blood, XII
The factors are rapidly activated and the time required for clotting after blood is collected into a container is significantly reduced. Furthermore, it can also be used to stop bleeding from bleeding wounds. The present invention will be explained below with reference to Examples, but the present invention is not limited to these Examples in any way. Example 1 Oxalic acid Cu salt, Co salt, Fe salt, Ni salt, Mg salt,
A 0.05% by weight physiological saline dispersion of each of Ce salt, glass powder and ellagic acid was prepared. Mix 1 ml of the above test solution and 1 ml of 0.025M calcium chloride aqueous solution with 1 ml of sodium citrate anticoagulated rabbit plasma, keep at 25°C, and wait for the time from immediately after mixing until the blood coagulates (hereinafter referred to as calcium re-addition time). ) was measured. Comparative Example 1 ml of sodium citrate anticoagulated rabbit plasma was mixed with 1 ml of physiological saline and 1 ml of 0.025M calcium chloride aqueous solution, and the calcium re-addition time was measured at 25°C. The results are shown in the table. It is clear that the blood coagulation promoter of the present invention has a good blood coagulation promoting effect comparable to that of ellagic acid.
【表】【table】
【表】【table】