【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
本発明は血液凝固促進剤に関し、詳しくはXII因
子活性化能を有する血液凝固促進剤に関する。
近年、検査技術の目覚しい進歩と相俟つて、血
清生化学検査、血清免疫学検査、血球検査等の血
液検査が広く普及し、病気予防や早期診断に大き
く貢献するに至つている。なかでも血清検査は血
液検査の主体をなしており、この検査において必
要な血清は、通常、血液を血液検査用容器に採取
し、これを凝固させた後、遠心分離によつて比重
の異なる血餅、即ち、フイブリンと血球が混合し
たゲル様塊状物を分離させ、血清部分をピペツト
で吸い上げたり、或いはデカンテーシヨンして採
取している。
しかしながら、一般に血液は凝固するまでにか
なりの時間を要し、従来、迅速に検査を実施する
ことが困難である。最も血液凝固時間が短いとさ
れているガラス製血液検査用容器でさえ、血液を
注入した後、凝固に至るまでに40分乃至60分を必
要とし、合成樹脂製血液検査用容器に至つては、
血液凝固までに４時間以上の放置を必要とする。
このため、XII因子活性化能を有し、血液凝固を
促進するガラス、カオリン、ベントナイト、シリ
カ、エラジン酸等が血清検査における血液凝固促
進剤としてのほか、血液の凝固機能検査の一つで
ある活性化部分トロンボプラスミン時間の測定試
薬の一成分として実用に供されているが、その純
度や組成等によつてその活性化能が安定しない問
題がある。
本発明は上記した問題を解決するためになされ
たものであつて、XII因子を活性化せ、血液凝固に
要する時間を大幅に短縮させると共に、その血液
凝固の促進効果が極めて安定している血液凝固促
進剤を提供することを目的とする。
本発明の血液凝固促進剤は、一般式
（但し、Ａは環式化合物の残基を示す。）
で表わされ、且つ、上記二つの相隣るカルボニル
基が立体的に実質的に同一の平面上にある環式有
機化合物からなり、該二つの相隣るカルボニル基
を含む環が６員環又は５員環であることを特徴と
するものである。
上述の「二つの相隣るカルボニル基が立体的に
実質的に同一の平面上にある」とは、隣り合つて
並んだ二つのカルボニル基を構成する２個の炭素
と２個の酸素が実質的に同一の平面上に存在する
ことを意味する。
本発明による血液凝固促進剤としての上記環式
有機化合物は、二つの相隣るカルボニル基と残基
Ａとが形成する同素環式又は異節環式化合物のい
ずれであつてもよく、また、このような環式化合
物は単環式であつても、多環式化合物であつても
よいが、二つのカルボニル基を含む環は、６員環
又は５員環からなるものである。
特に、好ましい６員環式化合物は次式
（但し、R1、R2、R3及びR4は水素、炭化水素
基、極性置換基又は多環式化合物における残基を
示す。）
で表わされるｏ―キノン環を有する化合物であ
る。上記式において炭化水素基は特に制限される
ものではないが、好ましくはアルキル基であり、
また、上記極性置換基もも特に制限されるもので
はないが、例えば、カルボキシル基、カルボン酸
エステル基、水酸基、アミノ基、メルカプト基等
である。従つて、ｏ―キノン環を有する化合物の
好ましい具体例として、例えば、ｏ―キノン、次
の一般式
（但し、R5はアルキル基を示す。）
で表わされる没食子酸アルキルエステル酸化物、
次式
でそれぞれ表わされるエラジン酸部分酸化物及び
完全酸化物、次式
で表わされる１，４―ジ（３，４―ジヒドロキシ
フエニル）２，３―ジメチルブタン部分酸化物及
び完全酸化物等を挙げることができる。
また、二つのカルボニル炭素を含む環が５員環
である同素環式化合物の好ましい具体例として、
次式
で表わされる１，２，３―トリケトヒドロインデ
ンを挙げることができる。
更に、本発明による血液凝固促進剤としての好
ましい異節環式化合物の一つは、次の一般式
（但し、R6は水素、炭化水素基又は多環式化合
物における残基を示し、R7及びR8は水素、炭化
水素基、極性置換基又は多環式化合物における残
基を示す。）
で表わされ、ここに、上記炭化水素基及び極性置
換基については前記と同じである。
このような化合物の好ましい具体例として、例
えば、次式で表わされるイサチンを挙げることが
できる。
これら一群の化合物は、いずれも分子内に立体
的に同一の乃至は近似的に同一の平面上に二つの
相隣るカルボニル基をもち、詳細な作用機序は不
明であるが、血液凝固因子に対して特異的な効果
を示す。一方、同じく分子内に相隣るカルボニル
基をもちながら、それらが同一平面上にないため
に血液凝固促進機能をもたない化合物としては、
例えば次式で表わされる１，２―ジケトシクロヘ
キサンがある。
この場合、二つの相隣るカルボニル基をつなぐ
脂環はかなりのフレキシビリテイーを有し、その
ためにこれらカルボニル基同士は立体反発によつ
て相互にゴーシユの位置にあり、同一平面上にな
い。すなわち、この場合は、炭素―炭素結合のま
わりのカルボニル基どうしの回転角が60゜であり、
本発明の実質的に同一という範囲を超えている。
そして、この化合物は血液凝固因子に対して何ら
特異的な効果を示さない。これらの事実はおそら
く立体的に特別な位置にある二つの相隣るカルボ
ニル基がタンパク質である血液凝固因子のある特
定の部位と立体構造的に特殊な関係をもつためで
あろうと推測される。
本発明の血液凝固促進剤としての上記化合物の
使用においては、例えば、血液を血液検査用容器
に採取し、これを凝固させる際にこれを血液中に
存在させるが、上記血液検査用容器は特に制限さ
れず、従来より通常に用いられているガラス製又
は樹脂製の容器が適宜に用いられる。また、上記
化合物は、これをそのままの粉末状で、又は適宜
の溶剤に溶解若しくは分散させて、血液中に添加
してもよいが、血液が血液検査用容器内において
瞬間的に、又は部分的に高濃度のこれら化合物と
接触した場合、血液中のタンパク質成分が変質す
るおそれがあるので、比表面積の大きい担体に上
記化合物を担持させ、これを血液検査用容器中の
血液に添加するのが好ましい。この方法によれ
ば、上記化合物は均一な小さい濃度で血液中に分
散され、これら化合物の溶液又は分散液を希釈し
て血液に添加する場合と異なり、血液を希釈し
て、検査に支障を来すこともない。
上記担体としては、血液検査に有害な影響を与
えず、大きい比表面積を有するものであれば、特
に制限されることなく、種々のものを用いること
ができるが、例えば、不織布、織布、樹脂ビーズ
等を好適に用いることができる。このような担体
に上記化合物を担持させるには、例えば、その溶
液や分散液を塗布し、又はこれに浸漬した後、乾
燥して、担体に付着させればよい。また、アラビ
アゴム等の適宜の助剤と混合して水分散液とし、
これを急速凍結乾燥する等の方法により、上記化
合物を担持した粒子状物を得ることもできる。
血液凝固促進剤としての上記化合物の血液中に
おける存在量は、血液１mlについて少なくとも１
×10-10ｇであり、これよりも少ないときは、血
液凝固の促進効果が乏しい。しかし、余りに多量
に存在させるときは、却つて血液検査に種々の支
障を来すおそれがあるので、10-1ｇ以下とするの
が好ましい。
本発明の血液凝固促進剤は、以上のように、特
定の化合物であるので、その製造及び精製が簡単
であり、しかも、安定してすぐれた血液凝固促進
作用を有し、種々の臨床検査分野において使用す
ることができる。従つて、例えば、これを血液中
に存在させるとき、XII因子が迅速に活性化され、
容器に血液を採取後の凝固に要する時間が著しく
短縮される。更に、出血創の止血等にも使用する
ことができる。
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本
発明はこれら実施例により何ら限定されるもので
はない。
実施例 １
没食子酸ｎ―プロピル酸化物、エラジン酸酸化
物（前記式(v)）、１，４―ジ（３，４―ジヒドロ
キシフエニル）２，３―ジメチルブタン酸化物
（前記式（））、１，２，３―トリケトヒドロイ
ンデン、イサチン及び１，２―ジケトシクロヘキ
サンのそれぞれ0.05重量％生理食塩水分散液を調
製した。
クエン酸ナトリウム抗凝固ウサギ血漿１mlに上
記試験液１ml及び0.025M塩化カルシウム水溶液
１mlを混合し、25℃に保つて、混合直後から血液
が凝固するまでの時間（以下、カルシウム再加時
間という。）を測定した。
比較例 １
ガラス粉末の0.05重量％生理食塩水分散液を調
製し、実施例１と同様にクエン酸ナトリウム抗凝
固ウサギ血漿１mlにこの試験液１ml及び0.025M
塩化カルシウム水溶液１mlを混合し、25℃でカル
シウム再加時間を測定した。
比較例 ２
クエン酸ナトリウム抗凝固ウサギ血漿１mlに生
理食塩水１ml及び0.025M塩化カルシウム水溶液
１mlを混合し、25℃でカルシウム再加時間を測定
した。
The present invention relates to a blood coagulation promoter, and more particularly to a blood coagulation promoter capable of activating factor XII. In recent years, with the remarkable progress in testing technology, blood tests such as serum biochemical tests, serum immunological tests, and hematology tests have become widespread, and have greatly contributed to disease prevention and early diagnosis. Among these, serum tests are the main body of blood tests, and the serum required for this test is usually obtained by collecting blood into a blood test container, coagulating it, and then centrifuging it to collect blood with different specific gravities. The mochi, that is, a gel-like mass containing a mixture of fibrin and blood cells, is separated, and the serum portion is collected by pipetting or decanting. However, blood generally takes a considerable amount of time to coagulate, making it difficult to conduct tests quickly. Even with glass blood test containers, which are said to have the shortest blood coagulation time, it takes 40 to 60 minutes for blood to coagulate after blood is injected, and synthetic resin blood test containers do not. ,
It takes 4 hours or more for blood to coagulate. For this reason, glass, kaolin, bentonite, silica, ellagic acid, etc., which have the ability to activate factor XII and promote blood coagulation, are used as blood coagulation promoters in serum tests as well as in blood coagulation function tests. Although it has been put to practical use as a component of a reagent for measuring activated partial thromboplasmin time, there is a problem that its activation ability is unstable depending on its purity, composition, etc. The present invention has been made in order to solve the above-mentioned problems, and provides blood that activates factor XII, significantly reduces the time required for blood coagulation, and has an extremely stable blood coagulation promoting effect. The purpose is to provide a coagulation accelerator. The blood coagulation promoter of the present invention has the general formula (However, A represents a residue of a cyclic compound.) and consists of a cyclic organic compound in which the two adjacent carbonyl groups are sterically substantially on the same plane, The ring containing the two adjacent carbonyl groups is a 6-membered ring or a 5-membered ring. The above-mentioned "two adjacent carbonyl groups are sterically on substantially the same plane" means that the two carbons and two oxygens constituting the two adjacent carbonyl groups are substantially on the same plane. means that they are on the same plane. The above-mentioned cyclic organic compound as a blood coagulation promoter according to the present invention may be either a homocyclic or heterocyclic compound formed by two adjacent carbonyl groups and a residue A; Although such a cyclic compound may be a monocyclic compound or a polycyclic compound, the ring containing two carbonyl groups is a 6-membered ring or a 5-membered ring. Particularly preferred six-membered cyclic compounds are of the following formula: (However, R 1 , R 2 , R 3 and R 4 represent hydrogen, a hydrocarbon group, a polar substituent, or a residue in a polycyclic compound.) It is a compound having an o-quinone ring represented by: In the above formula, the hydrocarbon group is not particularly limited, but is preferably an alkyl group,
Further, the polar substituents mentioned above are also not particularly limited, and include, for example, carboxyl groups, carboxylic acid ester groups, hydroxyl groups, amino groups, mercapto groups, and the like. Therefore, as a preferable specific example of a compound having an o-quinone ring, for example, o-quinone, the compound having the following general formula (However, R 5 represents an alkyl group.) Gallic acid alkyl ester oxide represented by
The following formula ellagic acid partial oxide and complete oxide, respectively represented by the following formula: Examples include 1,4-di(3,4-dihydroxyphenyl)2,3-dimethylbutane partial oxide and complete oxide represented by the following. Further, as a preferable specific example of a homocyclic compound in which the ring containing two carbonyl carbons is a 5-membered ring,
The following formula Examples include 1,2,3-triketohydroindene represented by: Furthermore, one of the preferred heterocyclic compounds as a blood coagulation promoter according to the present invention has the following general formula: (However, R 6 represents hydrogen, a hydrocarbon group, or a residue in a polycyclic compound, and R 7 and R 8 represent hydrogen, a hydrocarbon group, a polar substituent, or a residue in a polycyclic compound.) where the above hydrocarbon group and polar substituent are the same as above. A preferred specific example of such a compound is isatin represented by the following formula. All of these group of compounds have two adjacent carbonyl groups on the same or approximately the same steric plane within the molecule, and although the detailed mechanism of action is unknown, blood coagulation factors It shows a specific effect on. On the other hand, compounds that have carbonyl groups adjacent to each other in the molecule but do not have a blood coagulation promoting function because they are not on the same plane include:
For example, there is 1,2-diketocyclohexane represented by the following formula. In this case, the alicyclic ring connecting two adjacent carbonyl groups has considerable flexibility, and therefore these carbonyl groups are in mutually gauche positions due to steric repulsion and are not on the same plane. That is, in this case, the rotation angle between the carbonyl groups around the carbon-carbon bond is 60°,
It goes beyond the scope of the present invention to be substantially identical.
This compound does not exhibit any specific effect on blood coagulation factors. These facts are probably due to the fact that two adjacent carbonyl groups in special steric positions have a special steric relationship with a specific site of a blood coagulation factor, which is a protein. In using the above-mentioned compound as a blood coagulation promoter of the present invention, for example, blood is collected into a blood test container, and when it is coagulated, it is present in the blood. There are no limitations, and conventional glass or resin containers can be used as appropriate. Furthermore, the above compound may be added to blood in the form of a powder as it is, or dissolved or dispersed in an appropriate solvent, but blood may be added to blood instantly or partially in a blood test container. If a person comes into contact with these compounds at a high concentration, the protein components in the blood may be denatured. preferable. According to this method, the above-mentioned compounds are dispersed in the blood at a uniformly small concentration, and unlike the case where a solution or dispersion of these compounds is diluted and added to the blood, it dilutes the blood and does not interfere with the test. There's nothing to do. As the carrier, various carriers can be used without particular limitation as long as they do not have a harmful effect on blood tests and have a large specific surface area. For example, nonwoven fabrics, woven fabrics, resins, etc. Beads and the like can be suitably used. In order to support the above-mentioned compound on such a carrier, for example, the solution or dispersion may be applied or immersed therein, followed by drying and adhering to the carrier. In addition, it can be mixed with appropriate auxiliary agents such as gum arabic to form an aqueous dispersion.
A particulate material supporting the above compound can also be obtained by a method such as rapid freeze-drying. The amount of the above-mentioned compound as a blood coagulation promoter in the blood is at least 1% per ml of blood.
×10 −10 g, and if the amount is less than this, the effect of promoting blood coagulation is poor. However, if it is present in too large a quantity, it may cause various problems in blood tests, so it is preferable to limit the amount to 10 -1 g or less. As described above, since the blood coagulation promoter of the present invention is a specific compound, it is easy to manufacture and purify, and has a stable and excellent blood coagulation promoting effect, and is suitable for various clinical testing fields. It can be used in Therefore, for example, when it is present in the blood, factor XII is rapidly activated,
The time required for coagulation after blood is collected into a container is significantly reduced. Furthermore, it can also be used to stop bleeding from bleeding wounds. The present invention will be explained below with reference to Examples, but the present invention is not limited to these Examples in any way. Example 1 Gallic acid n-propyl oxide, ellagic acid oxide (formula (v) above), 1,4-di(3,4-dihydroxyphenyl)2,3-dimethylbutane oxide (formula (v) above) ), 1,2,3-triketohydroindene, isatin, and 1,2-diketocyclohexane, respectively, in physiological saline dispersions of 0.05% by weight were prepared. Mix 1 ml of the above test solution and 1 ml of 0.025M calcium chloride aqueous solution with 1 ml of sodium citrate anticoagulated rabbit plasma, keep at 25°C, and wait the time immediately after mixing until the blood coagulates (hereinafter referred to as calcium re-addition time). was measured. Comparative Example 1 A 0.05% by weight dispersion of glass powder in physiological saline was prepared, and 1 ml of this test solution and 0.025M sodium citrate was added to 1 ml of anticoagulated rabbit plasma in the same manner as in Example 1.
1 ml of calcium chloride aqueous solution was mixed and the calcium re-addition time was measured at 25°C. Comparative Example 2 1 ml of sodium citrate anticoagulated rabbit plasma was mixed with 1 ml of physiological saline and 1 ml of 0.025M calcium chloride aqueous solution, and the calcium re-addition time was measured at 25°C.
【表】
以上の結果を表に示す。本発明の血液凝固促進
剤がすぐれた血液凝固促進作用を有することが明
らかである。[Table] The above results are shown in the table. It is clear that the blood coagulation promoter of the present invention has an excellent blood coagulation promoting effect.