【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
〔産業上の利用分野〕
本発明はヒヨドリジヨウゴ（Solanum
Iyratum Thunb：白英、白毛藤）のエキスを有
効成分として含有する健康食品に関するものであ
る。
〔従来技術とその問題点（発明の背景）〕
ヒヨドリジヨウゴは日本、インド、中国大陸な
どの山野、路傍等に自生するナス科の蔓性多年性
草本であり、従来より民間薬として解熱、利尿、
強荘、健胃、鎮痛などの効用のあることが知られ
ているが、また一方では毒性があるともいわれて
いたことからあまり使用される、またその有効成
分や効用、毒性等についての究明が未だ充分にな
されていなかつた。そこでこのような現状に鑑
み、本発明者たちはヒヨドリジヨウゴに含まれる
成分について、その生理作用を詳細に研究してい
たところ、ヒヨドリジヨウゴの水等による抽出物
には抗腫瘍作用があると共に、意外にもとりたて
ていう程の毒性もないことを知り、これを用いる
ことにより優れた効用を有する健康食品が得られ
ることを見出し本発明を完成するに至つた。
〔発明の構成〕
このような事情を背景としてなされた本発明の
要旨とするところは、ヒヨドリジヨウゴエキスを
有効成分とし、抗腫瘍作用を有する健康食品を構
成したことにある。本明細書においてヒヨドリジ
ヨウゴエキスとはヒヨドリジヨウゴを水もしくは
水溶性有機溶剤、または水と水溶性有機溶剤とを
混合したもので抽出して得た抽出物をいうもので
ある。
本発明で有効成分として用いるヒヨドリジヨウ
ゴエキスは、たとえば生または乾燥もしくは半乾
燥したヒヨドリジヨウゴの葉、茎、茎葉および全
草のうちのいずれかを水又は水溶性有機溶媒（た
とえばメタノール、エタノールその他のアルコー
ル類）もしくはこれらの混合液で室温において浸
出するか、加熱して抽出するかして得られる抽出
液を濾過後、噴霧乾燥、凍結乾燥もしくは濃縮乾
固など通常の乾燥方法により乾燥して得られる。
なお水溶性有機溶剤として他の公知のものを使用
することも可能であるが、健康に悪影響を及ぼさ
ないものが望ましい。
本発明の健康食品は、これをそのまま利用して
もよく、また常法に従つてヒヨドリジヨウゴエキ
スの摂取量が成人１日当り約１ｇとなるような割
合で、食品用の公知の賦形剤、その他の配合物を
混合して通常の食品の形態、たとえば粉末、錠
剤、カプセル剤、顆粒剤、懸濁液、シロツプ、そ
の他の固体、半固体もしくは液状の通常の食品の
形態にすることもできる。他の配合成分は特に限
定するものではない。また、ヒヨドリジヨウゴエ
キスを上記のような割合で他の食品に添加するこ
とも可能である。
〔発明の効果〕
本発明によれば、抗腫瘍作用を有するものを食
品として摂取でき、健康保持に寄与するところが
大きい。
いずれにしても、本発明におけるヒヨドリジヨ
ウゴエキスを有効成分とする健康食品が、抗腫瘍
作用を有することはもちろん、とりたてていう程
の毒性もないということは未だ知られておらず、
本発明の意義は極めて大きいといえる。
〔実施例〕
以下実施例、実験例をあげて本発明をさらに説
明するが、本発明はこれにより限定されるもので
はない。
実施例 １
乾燥したヒヨドリジヨウゴの葉60Kgに水1600
を加えてエキス抽出機により100℃で１時間抽出
し、不溶物を濾過した後得られた抽出液を40℃で
減圧濃縮し、さらに噴霧乾燥し、黄褐色の乾燥エ
キス末４Kgを得た。収率約6.7％であつた。
実施例 ２
乾燥したヒヨドリジヨウゴの全草45Kgを100℃
で１時間熱水抽出し、不溶物を濾過した抽出液を
40℃で真空低温濃縮し、濃度12％の軟エキス（流
状エキス）38を得た。エキス１ml当たり乾燥エ
キス末量が0.28ｇ／mlであつた。
実施例 ３
（錠剤）
上記実施例１で製造した乾燥エキス２Kgを、乳
糖２Kgと混合し、さらに微量の香料を添加し１個
１ｇの錠剤に打錠した。この錠剤は１日２個ずつ
摂食させる。
つぎに、本発明の健康食品の効用について試験
した結果を示す。
試験例 １
マウスを使つたSarcoma180（腫瘍細胞）に対
する抑制効果
（試料の調整）
風乾したヒヨドリジヨウゴの茎700ｇを60℃の
水で温水抽出し、抽出物を水とｎ−ブタノールと
の溶媒間分配により水層とブタノール（BuOH）
層とに分画し、さらに水層の画分をAmberlite
XAD−２（商品名）を用いたカラムクロマトグラ
フイーにより、メタノール（MeOH）溶出液、
水溶出液に分画した。
（試料の投与および効果）
上記分画で得た試験液を用いてSarcoma180に
対する活性を調べた。すなわち、Sarcoma180を
鼠蹊部皮下に移植したマウスに水層、BuOH層、
水溶出液、MeOH溶出液の画分を、それぞれ
2000、3000、3000、1000mg／Kg体重の割合で１日
１回、計10回投与したところ、表、表に示す
ようにすべて対照群（無投与群）より増殖が抑制
された。特に、BuOH層では腫瘍の重量が対照群
の約1/3で最も強い抑制効果を示した。
[Industrial Field of Application] The present invention is directed to Solanum
This invention relates to a health food containing an extract of Iyratum Thunb (Hakuei, Hakue Wisteria) as an active ingredient. [Prior Art and its Problems (Background of the Invention)] Bulbul japonica is a climbing perennial herb of the Solanaceae family that grows wild in the mountains and roadsides of Japan, India, mainland China, etc. It has traditionally been used as a folk medicine to reduce fever and diuretic,
Although it is known to have effects such as stimulant, stomachic, and analgesic, it is also said to be toxic, so it is not used much, and its active ingredients, effects, toxicity, etc. have not been investigated. It hasn't been done enough yet. In view of this current situation, the present inventors conducted a detailed study on the physiological effects of the components contained in Red-spotted bulbul, and found that extracts from water and other sources of Red-spotted bulbs have anti-tumor effects. At the same time, the present inventors surprisingly discovered that the compound was not particularly toxic, and found that by using it, a health food with excellent efficacy could be obtained, leading to the completion of the present invention. [Structure of the Invention] The gist of the present invention, which was made against the background of the above circumstances, is to construct a health food having anti-tumor action, which contains a red-spotted plant extract as an active ingredient. In the present specification, the term "Libernator stingray extract" refers to an extract obtained by extracting Red-breasted bulbul with water, a water-soluble organic solvent, or a mixture of water and a water-soluble organic solvent. The extract used as an active ingredient in the present invention is, for example, fresh, dried, or semi-dried leaves, stems, foliage, and whole plants of the bulbul extract used in water or a water-soluble organic solvent (e.g., methanol, ethanol, etc.). After filtration, the extract obtained by leaching at room temperature or heating with a mixture of these alcohols or other alcohols) or a mixture thereof is dried by a conventional drying method such as spray drying, freeze drying, or concentration drying. can be obtained.
It is also possible to use other known water-soluble organic solvents, but those that do not adversely affect health are desirable. The health food of the present invention may be used as it is, or may be prepared by adding known excipients for food at a rate such that the intake of Bulbul stinging plant extract is approximately 1 g per day for an adult. , and other formulations to give conventional food forms such as powders, tablets, capsules, granules, suspensions, syrups and other solid, semi-solid or liquid conventional food forms. can. Other ingredients are not particularly limited. Moreover, it is also possible to add the Red-spotted Bulbul extract to other foods at the above-mentioned ratios. [Effects of the Invention] According to the present invention, foods having antitumor effects can be ingested as food, which greatly contributes to maintaining health. In any case, it is not yet known that the health food of the present invention, which contains the red-spotted bulb extract as an active ingredient, not only has an antitumor effect, but also has no particular toxicity.
It can be said that the significance of the present invention is extremely large. [Example] The present invention will be further explained below with reference to Examples and Experimental Examples, but the present invention is not limited thereto. Example 1 60kg of dried bulbul leaves and 1600g of water
was added and extracted at 100°C for 1 hour using an extract extractor, and after filtering insoluble matters, the resulting extract was concentrated under reduced pressure at 40°C and further spray-dried to obtain 4 kg of yellowish brown dry extract powder. The yield was about 6.7%. Example 2 45 kg of dried whole plant of Bulbul spp. at 100℃
Extract with hot water for 1 hour and filter the insoluble matter.
A soft extract (fluid extract) 38 with a concentration of 12% was obtained by vacuum low temperature concentration at 40°C. The amount of dry extract powder per ml of extract was 0.28 g/ml. Example 3 (Tablet) 2 kg of the dry extract produced in Example 1 above was mixed with 2 kg of lactose, a small amount of flavoring agent was added, and the mixture was compressed into tablets each weighing 1 g. These tablets are to be taken twice a day. Next, the results of testing the efficacy of the health food of the present invention will be shown. Test example 1 Suppressive effect on Sarcoma180 (tumor cells) using mice (sample preparation) Extract 700 g of air-dried stems of Physcomitrella sinensis with warm water at 60°C, and mix the extract between water and n-butanol as a solvent. Partition aqueous layer and butanol (BuOH)
The aqueous layer fraction is further divided into Amberlite.
By column chromatography using XAD-2 (trade name), methanol (MeOH) eluate,
It was fractionated into an aqueous eluate. (Sample Administration and Effect) The activity against Sarcoma180 was investigated using the test solution obtained from the above fractionation. In other words, aqueous layer, BuOH layer,
Fractions of water eluate and MeOH eluate were collected, respectively.
When administered once a day at a rate of 2000, 3000, 3000, and 1000 mg/Kg body weight, a total of 10 times, growth was suppressed in all cases compared to the control group (no administration group) as shown in the table. In particular, the BuOH layer showed the strongest suppressive effect when the tumor weight was approximately one-third that of the control group.
【表】【table】
【表】
試験例 ２
マウスを使つたJTC−26（人子宮頚癌由来細胞）
に対する抑制効果
（試料の調整）
第１図に示すようにしてヒヨドリジヨウゴの抽
出を行い、試料を得た。
すなわち、風乾したヒヨドリジヨウゴの茎1.1
Kgを60℃の温水で３回抽出をくり返し、抽出液を
60℃以下で減圧濃縮し、水エキス133ｇを得た。
これを酢酸エチル（AcOEt）400mlで処理後、残
渣124ｇを水３に懸濁し、BuOH3で振盪抽出
した。一方、温水抽出後の茎をMeOHで熱時２
回抽出をくり返し、抽出液は減圧下濃縮し、
MeOHエキス38ｇを得た。なお、水エキス、
AcOEt可溶部、BuOH層、水層、MeOHエキス
のそれぞれについて薄層クロマトグラフイーで検
索したところ第２図に示すクロマトグラムが得ら
れ、AcOEt可溶部には脂肪などが、水層には主
として糖が移行していることが判明した。
ついでBuOH層について減圧下濃縮し、残渣51
ｇを得、第１図に示すようにSephadex LH−20
（商品名）を用いたカラムクロマトグラフイー、
シリカゲルカラムクロマトグラフイー、再結晶等
を繰り返し、ステロイドサポニンSL−０(2)、SL
−(1)、SL−(3)をそれぞれ結晶として7.9、
1.6、3.4ｇを得た。乾燥原料に対する収率はそれ
ぞれ0.72、0.15、0.31％であつた。またMeOHエ
キスからはシリカゲルカラムクロマトグラフイー
を繰り返すことにより、SL−(1)3.9ｇ（乾燥原
料に対して0.36％）を得た。
（試料の投与および効果）
前述の方法で得たステロイドサポニンSL−０
(2)、SL−(1)、SL−(3)についてJTC−26（人
子宮頚癌由来細胞）に対する作用を検討した。
JTC−26を１×105個／mlとなるようにMEM
Eagles90％、Feta−１ Calf Serum（商品名：
Microbio−logical社製）10％の培地に入れて、
さらに化合物を各濃度になるよう調整して注入し
た。各試料を５個ずつ調整し、無添加試料のもの
を対照群として、37℃、144時間CO2気流中でイ
ンキユベイトし、生存細胞数を計測して対照群と
平均値で比較して増殖抑制率を測定した。その結
果を表に示す。この結果からSL−(1)および
SL−(3)に強い抑制効果があることが判明した。
SL−(3)は低濃度では活性を示さないが、8.0μ
ｇ／mlより濃度が高くなると急激に活性を増し、
抑制率100％を示している。一方、フロスタノー
ルグリコシドSL−０(2)には全く活性が見られな
かつた。[Table] Test example 2 JTC-26 using mice (human cervical cancer-derived cells)
Inhibitory effect on (preparation of sample) Bulbul stingray was extracted as shown in FIG. 1 to obtain a sample. i.e. 1.1 stems of air-dried bulbul
Repeat the extraction of Kg with warm water at 60℃ 3 times and extract the extract.
The mixture was concentrated under reduced pressure at a temperature below 60°C to obtain 133 g of water extract.
After treating this with 400 ml of ethyl acetate (AcOEt), 124 g of the residue was suspended in 3 parts of water and extracted by shaking with BuOH3. On the other hand, the stems after hot water extraction were heated with MeOH2.
The extraction was repeated twice, and the extract was concentrated under reduced pressure.
38g of MeOH extract was obtained. In addition, water extract,
When the AcOEt soluble part, BuOH layer, aqueous layer, and MeOH extract were searched using thin layer chromatography, the chromatogram shown in Figure 2 was obtained. It was found that mainly sugar was transferred. The BuOH layer was then concentrated under reduced pressure to obtain a residue 51
g and Sephadex LH-20 as shown in Figure 1.
Column chromatography using (product name),
Repeated silica gel column chromatography, recrystallization, etc., steroid saponin SL-0(2), SL
−(1) and SL−(3) respectively as crystals, 7.9,
1.6, 3.4g were obtained. The yields based on dry raw materials were 0.72, 0.15, and 0.31%, respectively. Further, from the MeOH extract, 3.9 g (0.36% based on the dry raw material) of SL-(1) was obtained by repeating silica gel column chromatography. (Sample administration and effect) Steroid saponin SL-0 obtained by the above method
(2), SL-(1), and SL-(3) were examined for their effects on JTC-26 (human cervical cancer-derived cells).
MEM JTC-26 to 1×10 5 pieces/ml
Eagles90%, Feta-1 Calf Serum (Product name:
(manufactured by Microbiological) in a 10% medium.
Furthermore, the compound was adjusted to each concentration and injected. Five samples were prepared from each sample, and the non-additive sample was used as a control group and incubated at 37°C in a CO2 stream for 144 hours.The number of viable cells was counted and the average value was compared with the control group to inhibit proliferation. The rate was measured. The results are shown in the table. From this result, SL−(1) and
It was found that SL-(3) had a strong inhibitory effect.
SL-(3) shows no activity at low concentrations, but at 8.0μ
When the concentration is higher than g/ml, the activity increases rapidly,
It shows a suppression rate of 100%. On the other hand, furostanol glycoside SL-0(2) showed no activity at all.
【表】
試験例 ３
ヒヨドリジヨウゴエキスの毒性の有無を調べる
ために、マウスなどを用いて次のような急性毒性
試験と亜急性毒性試験を行つた。
急性毒性試験はマウス（BALB／ｃ、Anw
Crj）に実施例１、２で得たヒヨドリジヨウゴエ
キスを経口投与もしくは腹孔内投与を行つた。
経口投与の場合は、実施例２で得たヒヨドリジ
ヨウゴエキスを一群10匹８週令の雄性マウスに投
与量が5.6ｇ／Kg体重と、11.2ｇ／Kg体重となる
ようにして行つた。72時間経過後のLD50は11.2
ｇ／Kg以上であつた。腹孔内投与の場合は、実施
例１で得たヒヨドリジヨウゴエキスをエキス濃度
が0.38ｇ／Kg、0.95ｇ／Kg、1.9ｇ／Kg、3.8ｇ／
Kg、7.6ｇ／Kgとなるように生理的食塩水を用い
て懸濁し、一群10匹４週令の雄性マウスに投与液
量が10ml／Kgとなるようにして行つた。72時間経
過後のLD50は2.05ｇ／Kgであつた。
クマ笹の乾燥葉の熱水可溶分画のLD50は経口
投与で10ｇ／Kg以上、腹孔内投与で2.20ｇ／Kg
（1975年星薬科大学柴田氏らが日本薬理学雑誌に
発表：クマ笹の薬理学的研究）であるが、ヒヨド
リジヨウゴエキスの経口投与、腹孔内投与の
LD50もほぼこれと同程度のものであり、特に毒
性は認められなかつた。
亜急性毒性試験は、４週令、８週令の雌雄マウ
ス（BALB／ｃ、AnwCrj）、６週令の雌ラツト
（Crj、Wistar）および４週令の雌モルモツト
（Crj、Hartley）を用いて行い、８週間投与の場
合の１匹体重当りの体内摂取量は、エキス乾燥末
換算でマウスが約38ｇ／Kg、ラツトが約12.2ｇ／
Kg、モルモツトが14.8ｇ／Kg、13週間投与の場合
のそれはマウスが55ｇ／Kg、ラツトが16.7ｇ／
Kg、モルモツトが24.4ｇ／Kgとした。この試験に
よれば、８週間、13週間の観察において期間の差
による顕著な変化はみられず、一般状態も正常
で、体重変化、摂食量とも対照群と比較して有意
差は認められなかつた。また、病理組織学的所
見、蛋白代謝等における性差による変化もみられ
ず、対照群と比べて血球数等に有意差は認められ
なかつた。さらに、主要臓器等の病理組織学的な
観察においてマウス、ラツト、モルモツト共に正
常であり、全般的に見て顕著な異常状態は観察さ
れなかつた。
以上の試験からヒヨドリジヨウゴエキスには、
とりたてていう程の毒性がないことは明らかであ
る。
なお、前記各実施例等では、ヒヨドリジヨウゴ
は乾燥したものを使用しているが、生や半乾燥の
ものを使用することも可能である。[Table] Test Example 3 In order to investigate the toxicity of the Red-spotted Bulbul extract, the following acute toxicity test and subacute toxicity test were conducted using mice and the like. Acute toxicity tests were conducted in mice (BALB/c, Anw
Crj) were administered orally or intraperitoneally with the Red-breasted Psyllium extract obtained in Examples 1 and 2. In the case of oral administration, the Psyllium japonica extract obtained in Example 2 was administered to groups of 10 8-week-old male mice at doses of 5.6 g/Kg body weight and 11.2 g/Kg body weight. LD 50 after 72 hours is 11.2
g/Kg or more. In the case of intraperitoneal administration, the extract concentration of the brown-spotted bulbul extract obtained in Example 1 was 0.38 g/Kg, 0.95 g/Kg, 1.9 g/Kg, or 3.8 g/Kg.
The suspension was suspended in physiological saline at a concentration of 7.6 g/Kg, and administered to a group of 10 4-week-old male mice at a volume of 10 ml/Kg. LD 50 after 72 hours was 2.05 g/Kg. The LD 50 of the hot water soluble fraction of dried leaves of Kumazasa is 10 g/Kg or more when administered orally and 2.20 g/Kg when administered intraperitoneally.
(Published in the Japan Pharmacological Journal by Mr. Shibata et al. of Hoshi Pharmaceutical University in 1975: Pharmacological research on bear bamboo).
The LD 50 was also approximately the same, and no particular toxicity was observed. Subacute toxicity tests were conducted using 4-week-old and 8-week-old male and female mice (BALB/c, AnwCrj), 6-week-old female rats (Crj, Wistar), and 4-week-old female guinea pigs (Crj, Hartley). When administered for 8 weeks, the internal intake per animal body weight was approximately 38 g/Kg in terms of dry extract powder for mice and approximately 12.2 g/Kg for rats.
kg, 14.8g/Kg for guinea pigs, 55g/Kg for mice and 16.7g/Kg for rats after 13 weeks of administration.
kg, Guinea piglet was 24.4g/Kg. According to this study, no significant changes were observed between the 8-week and 13-week observations, the general condition was normal, and there were no significant differences in body weight changes or food intake compared to the control group. Ta. Furthermore, no gender-related changes were observed in histopathological findings, protein metabolism, etc., and no significant differences were observed in blood cell counts, etc. compared to the control group. Furthermore, histopathological observations of major organs etc. were normal in mice, rats, and guinea pigs, and no significant abnormal conditions were observed overall. From the above tests, the brown-spotted bulbul extract has the following properties:
It is clear that it is not particularly toxic. In addition, in each of the above-mentioned Examples and the like, dried lily pads are used, but it is also possible to use fresh or semi-dried ones.
【図面の簡単な説明】[Brief explanation of drawings]
第１図は本発明の試験用試料の分画工程図であ
り、第２図はヒヨドリジヨウゴエキスの薄層クロ
マトグラムである。
FIG. 1 is a diagram of the fractionation process of a test sample of the present invention, and FIG. 2 is a thin layer chromatogram of a red-spotted bulb extract.