JPH029602B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH029602B2 JPH029602B2 JP58214583A JP21458383A JPH029602B2 JP H029602 B2 JPH029602 B2 JP H029602B2 JP 58214583 A JP58214583 A JP 58214583A JP 21458383 A JP21458383 A JP 21458383A JP H029602 B2 JPH029602 B2 JP H029602B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gel
- styrene
- liquid chromatography
- water
- performance liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
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- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
Description
技術分野
本発明は高速液体クロマトグラフイー用親水性
ゲルの製造方法、特に、高速液体クロマトグラフ
イー用に適したスチレン系疎水性高分子ゲルに糖
類を導入することにより、水溶性高分子の高速液
体クロマトグラフイー分析に適した親水性ゲルを
製造する方法に関する。 従来技術 蛋白質や糖類に代表される水溶性生体高分子な
どを液体クロマトグラフイーで分析するときに
は、その充填剤として、多糖類を架橋したゲルが
用いられる。このゲルは、非特異的吸着のほとん
どない優れた充填剤であるが軟質ゲルであるた
め、耐圧限界が低い。それゆえ、高速液体クロマ
トグラフイーには利用できない。高速液体クロマ
トグラフイー用には、非特異的吸着を防止するた
めにシリカゲル基材にシラン表面処理をしたゲル
（化学結合型シリカゲル）が用いられる。特開昭
56−93043号公報には、シリカゲルなどの多孔性
無機粒子の表面をγ―グリシドキシプロピルトリ
メトキシシランのような末端にエポキシ基を有す
るシランカツプリング剤で処理し、これに糖鎖を
反応させて得られる親水性ゲルを蛋白質などのゲ
ル過クロマトグラフイー用充填剤として利用す
ることが開示されている。しかし、このような充
填剤はシリカゲルを基材としているため酸性側で
しか使用できる。PH８以上での連続使用は不可能
である。 酸性・アルカリ性のいずれにおいても優れた安
定性を示し、さらに物理的強度に優れ高速液体ク
ロマトグラフイーに使用できるゲルには、スチレ
ン―ジビニルベンゼン共重合体のポリスチレンゲ
ルがある。しかし、これは疎水性相互作用が強
く、蛋白質などにおいては非特異的吸着が起こ
る。そのため、イオン性の基を導入した誘導体に
よるイオン交換クロマトグラフイーの他は疎水系
のクロマトグラフイー用にしか利用されえない。 発明の目的 本発明の目的は生体内に存在する蛋白質や糖類
などの水溶性高分子を高速液体クロマトグラフイ
ーにより分析するための充填剤の製造方法を提供
することにある。本発明の他の目的は、使用する
PHに影響されずしかも非特異的吸着のおこらない
高速液体クロマトグラフイー用充填剤の製造方法
を提供することにある。 発明の要旨 本発明の高速液体クロマトグラフイー用親水性
ゲルの製造方法は、高速液体クロマトグラフイー
用に適したスチレン系疎水性高分子ゲルを、これ
に親水性基として分子内に多数の水酸基をもつ糖
類を導入することにより、親水性ゲルに変換する
方法であり、スチレン系疎水性高分子ゲルを形成
するスチレンのベンゼン環にヒドロキシメチル基
を導入する工程、およびそのヒドロキシメチル基
に糖類を反応させグリコシド結合を介してその糖
類を結合させる工程を含有する。そのことにより
上記目的が達成される。 スチレン系疎水性高分子ゲルとして汎用されて
いるポリスチレンはスチレン―ジビニルベンゼン
共重合体である。これに無水塩化第二スズの存在
下でクロルメチルメチルエーテルを反応させる
と、下記式で示すように、スチレンのベンゼン環
にクロルメチル基が導入される。さらに例えばテ
トラブチルアンモニウムのような相間移動触媒の
存在下でアルカリを作用させるとヒドロキシメチ
ル基に変換される。 このヒドロキシメチル化ポリスチレンゲルの水
酸基に無水塩化第二スズ存在下で糖類を作用させ
グリコシド化反応を行なう。例えば、β―Ｄ―グ
ルコースを導入するには、下記式で示すように、
ペンタアセチル―β―Ｄ―グルコースを作用させ
てグリコシド結合を形成する。 次いで、これにさらに、下記式で示すように、
アルカリを用いてケン化し、保護基であるアセチ
ル基を除去する。 実施例 以下に本発明を好適な実施例について説明す
る。 (A) スチレン系疎水性ゲルのヒドロキシメチル
化：１のセパラブルフラスコに一晩減圧乾燥
したポリスチレンゲル（スチレン―ジビニルベ
ンゼン共重合体；球形、平均粒径10μm）50ｇ
を仕込み乾燥クロロホルム300mlを加えて懸濁
させた。これを室温で２時間撹拌した。これを
０℃に冷却し、クロルメチルメチルエーテル25
mlを塩化第二スズ25mlと共に加えて１時間反応
させた。反応混合物を過し、別したゲルを
ジオキサン―水混液（３：1v／ｖ）、ジオキサ
ン―希塩酸混液（３：1v／ｖ）の順で洗浄し、
純水から徐々にジオキサンに置換した。取し
たクロルメチル化スチレンゲルを一晩60℃で減
圧乾燥させた。その収量は46.7ｇ、そして塩素
含量は5.6重量％（フラスコ燃焼法−硝酸銀滴
定法）であつた。得られたクロルメチル化スチ
レンゲル20ｇをｏ―ジクロルベンゼン150mlに
懸濁させた。酢酸カリウム28ｇおよび水酸化カ
リウム９ｇを含む水溶液（55ml）をこれに加
え、さらに、相間移動触媒として水酸化テトラ
ブチルアンモニウム６mlを添加した。これを80
℃で24時間激しく撹拌し反応させた。反応後、
ゲルを別し、メタノール、水、テトラヒドロ
フラン―水混液（３：1v／ｖ）、テトラヒドロ
フラン、アセトン、ジクロルメタン、メタノー
ルを順に用いて洗浄した。これを室温で一晩減
圧乾燥させた。その収量は18.2ｇであつた。 (B) スチレン系疎水性ゲルへの糖鎖の導入：(A)項
で得られたヒドロキシメチル化スチレンゲル10
ｇをジクロルメタン80mlに０℃で30分間懸濁さ
せた。別にペンタアセチル―β―Ｄ―グルコー
ス（東京化成(株)製）20ｇおよび無水塩化第二ス
ズ12ｇをジクロルメタン150mlに０℃で溶解さ
せ、これを、上記のスチレンゲルの懸濁液に加
え、０℃で４時間反応させた。ゲルを別し、
メタノール、水、希塩酸、蒸留水、メタノール
―水混液（１：１）を順に用いて洗浄した。得
られたゲルを一晩減圧乾燥させた。その収量は
10ｇであつた。赤外線スペクトル（KBrデイ
スク法）によりエステルの吸収（1750cm-1）を
確認した。得られたゲル10ｇをメタノール―水
混液（１：１）200mlに水酸化カリウム５ｇを
溶解させた液に加え、40℃で２時間処理した。
ゲルを別し、水、メタノールで順次洗浄し
た。次いで、水―メタノール（１：１）に懸濁
させ、超音波洗浄機で５分間にわたり分散させ
た。そして、静置し、沈澱しない部分をデカン
テーシヨンで除去した。沈澱したゲルを取
し、一晩減圧乾燥させた。その収量は9.0ｇで
あつた。赤外線スペクトルにより、エステルの
吸収が消失していることを確認した。水酸基に
もとづく吸収が3300cm-1に巾広く出現している
ことを確認した。 (C) ゲルのカラムへの充填および性能試験：(B)項
で得られた親水化ゲル20ｇを水―メタノール混
液（１：1v／ｖ）に懸濁させた。この懸濁液
を、送液モードを定圧送液（70Kg／cm2）とし、
水を圧送液として径7.9mm、長さ500mmのステン
レスカラムに充填した。圧送液300mlを流した
ところで充填機より取りはずし、分析用高速液
体クロマト装置に接続した。試料として、マル
トース、マルトヘキサノース、仔ウシ血清アル
ブミン（BSA）、ポリエチレングリコール
（MW600）の水溶液を用い、各試料の保持時間
を測定した。その結果を下表に示す。ポンプは
日本分光製Tri Rotar Ｖを用いた。溶離液は
PH８、0.1Mトリス−塩酸緩衝液を１ml／分の
流速で流した。検出器にはウオーターズ社製の
示差屈折計を用いた。 比較例 親水化ゲルの代わりにポリスチレンゲルを実施
例１(C)項と同様にしてカラムに充填し、以下同様
に各種試料の保持時間を測定した。その結果を下
表に示す。
ゲルの製造方法、特に、高速液体クロマトグラフ
イー用に適したスチレン系疎水性高分子ゲルに糖
類を導入することにより、水溶性高分子の高速液
体クロマトグラフイー分析に適した親水性ゲルを
製造する方法に関する。 従来技術 蛋白質や糖類に代表される水溶性生体高分子な
どを液体クロマトグラフイーで分析するときに
は、その充填剤として、多糖類を架橋したゲルが
用いられる。このゲルは、非特異的吸着のほとん
どない優れた充填剤であるが軟質ゲルであるた
め、耐圧限界が低い。それゆえ、高速液体クロマ
トグラフイーには利用できない。高速液体クロマ
トグラフイー用には、非特異的吸着を防止するた
めにシリカゲル基材にシラン表面処理をしたゲル
（化学結合型シリカゲル）が用いられる。特開昭
56−93043号公報には、シリカゲルなどの多孔性
無機粒子の表面をγ―グリシドキシプロピルトリ
メトキシシランのような末端にエポキシ基を有す
るシランカツプリング剤で処理し、これに糖鎖を
反応させて得られる親水性ゲルを蛋白質などのゲ
ル過クロマトグラフイー用充填剤として利用す
ることが開示されている。しかし、このような充
填剤はシリカゲルを基材としているため酸性側で
しか使用できる。PH８以上での連続使用は不可能
である。 酸性・アルカリ性のいずれにおいても優れた安
定性を示し、さらに物理的強度に優れ高速液体ク
ロマトグラフイーに使用できるゲルには、スチレ
ン―ジビニルベンゼン共重合体のポリスチレンゲ
ルがある。しかし、これは疎水性相互作用が強
く、蛋白質などにおいては非特異的吸着が起こ
る。そのため、イオン性の基を導入した誘導体に
よるイオン交換クロマトグラフイーの他は疎水系
のクロマトグラフイー用にしか利用されえない。 発明の目的 本発明の目的は生体内に存在する蛋白質や糖類
などの水溶性高分子を高速液体クロマトグラフイ
ーにより分析するための充填剤の製造方法を提供
することにある。本発明の他の目的は、使用する
PHに影響されずしかも非特異的吸着のおこらない
高速液体クロマトグラフイー用充填剤の製造方法
を提供することにある。 発明の要旨 本発明の高速液体クロマトグラフイー用親水性
ゲルの製造方法は、高速液体クロマトグラフイー
用に適したスチレン系疎水性高分子ゲルを、これ
に親水性基として分子内に多数の水酸基をもつ糖
類を導入することにより、親水性ゲルに変換する
方法であり、スチレン系疎水性高分子ゲルを形成
するスチレンのベンゼン環にヒドロキシメチル基
を導入する工程、およびそのヒドロキシメチル基
に糖類を反応させグリコシド結合を介してその糖
類を結合させる工程を含有する。そのことにより
上記目的が達成される。 スチレン系疎水性高分子ゲルとして汎用されて
いるポリスチレンはスチレン―ジビニルベンゼン
共重合体である。これに無水塩化第二スズの存在
下でクロルメチルメチルエーテルを反応させる
と、下記式で示すように、スチレンのベンゼン環
にクロルメチル基が導入される。さらに例えばテ
トラブチルアンモニウムのような相間移動触媒の
存在下でアルカリを作用させるとヒドロキシメチ
ル基に変換される。 このヒドロキシメチル化ポリスチレンゲルの水
酸基に無水塩化第二スズ存在下で糖類を作用させ
グリコシド化反応を行なう。例えば、β―Ｄ―グ
ルコースを導入するには、下記式で示すように、
ペンタアセチル―β―Ｄ―グルコースを作用させ
てグリコシド結合を形成する。 次いで、これにさらに、下記式で示すように、
アルカリを用いてケン化し、保護基であるアセチ
ル基を除去する。 実施例 以下に本発明を好適な実施例について説明す
る。 (A) スチレン系疎水性ゲルのヒドロキシメチル
化：１のセパラブルフラスコに一晩減圧乾燥
したポリスチレンゲル（スチレン―ジビニルベ
ンゼン共重合体；球形、平均粒径10μm）50ｇ
を仕込み乾燥クロロホルム300mlを加えて懸濁
させた。これを室温で２時間撹拌した。これを
０℃に冷却し、クロルメチルメチルエーテル25
mlを塩化第二スズ25mlと共に加えて１時間反応
させた。反応混合物を過し、別したゲルを
ジオキサン―水混液（３：1v／ｖ）、ジオキサ
ン―希塩酸混液（３：1v／ｖ）の順で洗浄し、
純水から徐々にジオキサンに置換した。取し
たクロルメチル化スチレンゲルを一晩60℃で減
圧乾燥させた。その収量は46.7ｇ、そして塩素
含量は5.6重量％（フラスコ燃焼法−硝酸銀滴
定法）であつた。得られたクロルメチル化スチ
レンゲル20ｇをｏ―ジクロルベンゼン150mlに
懸濁させた。酢酸カリウム28ｇおよび水酸化カ
リウム９ｇを含む水溶液（55ml）をこれに加
え、さらに、相間移動触媒として水酸化テトラ
ブチルアンモニウム６mlを添加した。これを80
℃で24時間激しく撹拌し反応させた。反応後、
ゲルを別し、メタノール、水、テトラヒドロ
フラン―水混液（３：1v／ｖ）、テトラヒドロ
フラン、アセトン、ジクロルメタン、メタノー
ルを順に用いて洗浄した。これを室温で一晩減
圧乾燥させた。その収量は18.2ｇであつた。 (B) スチレン系疎水性ゲルへの糖鎖の導入：(A)項
で得られたヒドロキシメチル化スチレンゲル10
ｇをジクロルメタン80mlに０℃で30分間懸濁さ
せた。別にペンタアセチル―β―Ｄ―グルコー
ス（東京化成(株)製）20ｇおよび無水塩化第二ス
ズ12ｇをジクロルメタン150mlに０℃で溶解さ
せ、これを、上記のスチレンゲルの懸濁液に加
え、０℃で４時間反応させた。ゲルを別し、
メタノール、水、希塩酸、蒸留水、メタノール
―水混液（１：１）を順に用いて洗浄した。得
られたゲルを一晩減圧乾燥させた。その収量は
10ｇであつた。赤外線スペクトル（KBrデイ
スク法）によりエステルの吸収（1750cm-1）を
確認した。得られたゲル10ｇをメタノール―水
混液（１：１）200mlに水酸化カリウム５ｇを
溶解させた液に加え、40℃で２時間処理した。
ゲルを別し、水、メタノールで順次洗浄し
た。次いで、水―メタノール（１：１）に懸濁
させ、超音波洗浄機で５分間にわたり分散させ
た。そして、静置し、沈澱しない部分をデカン
テーシヨンで除去した。沈澱したゲルを取
し、一晩減圧乾燥させた。その収量は9.0ｇで
あつた。赤外線スペクトルにより、エステルの
吸収が消失していることを確認した。水酸基に
もとづく吸収が3300cm-1に巾広く出現している
ことを確認した。 (C) ゲルのカラムへの充填および性能試験：(B)項
で得られた親水化ゲル20ｇを水―メタノール混
液（１：1v／ｖ）に懸濁させた。この懸濁液
を、送液モードを定圧送液（70Kg／cm2）とし、
水を圧送液として径7.9mm、長さ500mmのステン
レスカラムに充填した。圧送液300mlを流した
ところで充填機より取りはずし、分析用高速液
体クロマト装置に接続した。試料として、マル
トース、マルトヘキサノース、仔ウシ血清アル
ブミン（BSA）、ポリエチレングリコール
（MW600）の水溶液を用い、各試料の保持時間
を測定した。その結果を下表に示す。ポンプは
日本分光製Tri Rotar Ｖを用いた。溶離液は
PH８、0.1Mトリス−塩酸緩衝液を１ml／分の
流速で流した。検出器にはウオーターズ社製の
示差屈折計を用いた。 比較例 親水化ゲルの代わりにポリスチレンゲルを実施
例１(C)項と同様にしてカラムに充填し、以下同様
に各種試料の保持時間を測定した。その結果を下
表に示す。
【表】
発明の効果
本発明の方法によれば、疎水性スチレン系高分
子ゲルが、これに親水性基として複数の水酸基を
有する糖類が導入され親水性ゲルに変わる。その
ため、生体内に存在する蛋白質や糖類などの水溶
性高分子の高速液体クロマトグラフイーでの分析
が可能となる。変性前のゲルがゲルパーミエーシ
ヨンクロマトグラフイー用の排除限界の大きいゲ
ルであれば、親水性基を導入することにより水系
ゲルパーミエーシヨンクロマトグラフイー用のゲ
ルにすることが可能である。 さらにこの方法により製造される親水性高分子
ゲルは試料溶液の液性にかかわりなく広いPHの範
囲で使用されえ、試料の非特異的吸着がおこらな
いという利点を有する。
子ゲルが、これに親水性基として複数の水酸基を
有する糖類が導入され親水性ゲルに変わる。その
ため、生体内に存在する蛋白質や糖類などの水溶
性高分子の高速液体クロマトグラフイーでの分析
が可能となる。変性前のゲルがゲルパーミエーシ
ヨンクロマトグラフイー用の排除限界の大きいゲ
ルであれば、親水性基を導入することにより水系
ゲルパーミエーシヨンクロマトグラフイー用のゲ
ルにすることが可能である。 さらにこの方法により製造される親水性高分子
ゲルは試料溶液の液性にかかわりなく広いPHの範
囲で使用されえ、試料の非特異的吸着がおこらな
いという利点を有する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ (1) スチレン系疎水性高分子ゲルを形成する
スチレンのベンゼン環にヒドロキシメチル基を
導入する工程；および (2) 該ヒドロキシメチル基に糖類を反応させグリ
コシド結合により該糖類を結合させる工程； を含有する高速液体クロマトグラフイー用親水性
ゲルの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58214583A JPS60106802A (ja) | 1983-11-14 | 1983-11-14 | 親水性ゲルの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58214583A JPS60106802A (ja) | 1983-11-14 | 1983-11-14 | 親水性ゲルの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60106802A JPS60106802A (ja) | 1985-06-12 |
| JPH029602B2 true JPH029602B2 (ja) | 1990-03-02 |
Family
ID=16658116
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58214583A Granted JPS60106802A (ja) | 1983-11-14 | 1983-11-14 | 親水性ゲルの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60106802A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5783678A (en) * | 1995-03-24 | 1998-07-21 | Nippon Shokubai Co., Ltd. | Acrylic ester derivative and producing of the same and acrylic-ester-based polymer |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5461289A (en) * | 1977-10-24 | 1979-05-17 | Iwao Tabuse | Method of making polystyrene base polymer containing cyclodextrine derivative |
-
1983
- 1983-11-14 JP JP58214583A patent/JPS60106802A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60106802A (ja) | 1985-06-12 |
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