JPH0315607B2 - - Google Patents
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Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
本発明は鶏の大腸菌症を免疫的に予防し得る方
法に関する。 鶏の大腸菌症は特定の血清型を有する大腸菌の
感染により発症する。この病気の種類としては、
大腸菌性敗血症をはじめ、関節炎、出血性腸炎等
が挙げられる。このものに感染した鶏は気嚢炎、
心膜炎、関節炎および下痢等の症状を示して重症
の場合は死に至る。またこの大腸菌症は集団的ま
たは散発的に発生するものであり特にブロイラー
での発生が多く、被害の大きいものである。 かかる大腸菌症の予防のためには薬剤の投与が
実施されているが、薬剤耐性菌が多く出現してい
るために効果はあまり期待できない。また、治療
の場合も薬剤の選択、投与方法、労力等に問題が
多く、優れた予防効果を有するものの出現が望ま
れている。 そこで本発明者らは前記の問題を解決すべく研
究を行なつた結果、大腸菌を鶏の総排泄腔より接
種することにより大腸菌症を予防し得ることを見
い出した。 本発明の大腸菌は動物の臓器または糞便から分
離されたものであり、例としては大腸菌O1、O2
および大腸菌（E.coli）NS−244（微工研菌寄第
5757号）が挙げられる。 大腸菌NS−244は牛の糞便を大腸菌の選択培地
であるDHL寒天〔栄研化学(株)製〕上に画線培養
し出現したコロニーより得られた一株である。こ
のものの菌学的性質を述べる。 １ 形態学的所見 1.0〜4.0×0.4〜0.7μ グラム陰性棹菌 運動性あり 芽胞を形成しない ２ 培地上の所見 肉エキス培地で容易に発育する 肉エキス１％、ペプトン１％および塩化ナト
リウム0.3％を含有する寒天培地での生育良好 コロニーは低い凸状を示し、無色でＳ型、か
なり不透明、周辺はまるい ３ 生物学的性状 生育PH3.0〜10.0（至適PH7.0） 生育温度20〜40℃（至適温度37℃） 好気性および通性嫌気性 ４ 非抗酸性 カタラーゼ 陽性 オキシターゼ 陰性 KCN培地における発育は認められない β−ガラクトシターデ 陽性 ブドウ糖からのガス産生あり インドールの生成あり TSI培地での硫化水素生成せず ウレアーゼ生成せず ゼラチン液化能なし フエニルアラニン・デアミナーゼ 陰性 リジン・デカルボキシラーゼ 陽性 オルニチン・デカルボキシラーゼ 陽性 アルギニン・ジヒドロラーゼ 陰性 グルタミン酸デカルボキシラーゼ 陽性 MR反応 陽性 VP反応 陰性 単一炭素源として酢酸を利用するがクエン酸を
利用できない ４ 炭水化物からの酸産生能 ブドウ糖 陽性 アラビノース 陽性 セロビオース 陰性 乳糖 陽性 麦芽糖 陽性 ラフイノース 陰性 ラムノース 陽性 白糖 陰性 トレハロース 陽性 キシロース 陽性 アドニツト 陰性 ズルシツト 陽性 エスクリン 陰性 マンニツト 陽性 ソルビツト 陽性 グリセリン 陽性 サリシン 陰性 イノシツト 陰性 以上の菌学的性状から「Bergey's Manual of
Determinative Bacteriology」第８版の分類の
基準にしたがつて既知の菌株との異同を検討した
結果、本発明において使用する菌株（NS−244）
は大腸菌（Escherichia coli）と同定された。 この大腸菌NS−244の鶏に対する病原性を調べ
た結果、全く病原性がないことを確認した。すな
わち大腸菌NS−244の生菌を３週令の鶏10羽に１
羽当り1.1×1011個で静脈内投与した。７日後、
鶏の状態を観察したが死亡例は０であり、大腸菌
症の特徴的な病変である心膜炎や肝包膜炎の出現
は全く認められなかつた。 本発明で用いる大腸菌NS−244は生菌の状態で
用いることができるが、不活化したものを用いた
方が扱い易い。本発明で用いる大腸菌O1、O2は
不活化して用いる。大腸菌NS−244と大腸菌O1、
O2は紫外線照射、ガンマー線照射またはホルマ
リン処理で不活化するのがよいが、フエノール、
アセトン、アルコール、凍結融解、加熱、超音波
あるいは圧力などで処理して不活化することもで
きる。さらに、このものに水酸化アルミニウムゲ
ル、フロインドの完全アジユバンドのようなアジ
ユバンド（免疫賦活剤）を加えることも妨げな
い。さらにこのものに他の疾病の免疫的抗原や非
病原性の抗原を混合して総排泄腔に接種すること
もできる。前記の免疫的抗原とは、鶏コクシジウ
ム原虫、ニユーカツスル病などのワクチン、伝染
性コリーザの原因菌であるHaemophilus
paragallinarum、鶏マイコプラズマ病の原因菌
であるMycoplisma gallisepticum、Clostridium
perfringens、Salmonella pullorum、
Bifidobacterium、Lactobacillusおよび大腸菌
O1、O2、O78以外で大腸菌症に罹患した鶏から分
離される他のＯ抗原を有する大腸菌または健康な
鶏から分離される非病原性大腸菌などが挙げられ
る。 次いで前記大腸菌を鶏に接種する。接種に適当
な状態としては抗大腸菌症剤を水、生理食塩水、
PBS（リン酸バツフアー）および組織培養液など
の溶液に懸濁せしめたもの、または前記の不活化
処理そしてまたアジユバンド処理を行なつたもの
が例として挙げられる。このものを鶏の総排泄腔
に接種する。接種の具体的な方法としては鶏の肛
門、総排泄腔あるいはフアブリシウス嚢内に抗大
腸菌剤を上記の溶液に懸濁せしめ１羽当り0.002
ml〜0.2mlを滴下、注入、塗布、スプレーまたは
肛門部を浸すことによつて投与する方法が挙げら
れる。抗大腸菌症剤の接種菌量は鶏１羽当り1.0
×105個以上を用いる。 本発明に係る抗大腸菌症剤を本発明の接種方法
で使用すれば副作用を起こすことなく大腸菌症を
ほとんど完全に予防し得る。さらに、従来の薬剤
投与法では、薬剤耐性大腸菌の出現が多かつた
が、本発明の予防方法を用いれば、薬剤耐性大腸
菌の出現はない。 次に本発明の効果を示すための実施例を挙げ
る。 実施例 １ ０日令の鶏（ブロイラー専用種ハバード）10羽
の肛門に試料を接種し、また対照(2)〜(9)は試料を
それぞれの方法で接種した。次いでこれらの鶏に
21日令において大腸菌O78を１羽当り1.4×1010個
静脈内接種して感染させる。対照(1)は試料を接種
せずに感染のみを行なつたものである。感染後７
日目に斃死率について観察した。結果は表１に示
す。試料の種類および接種方法については下記に
示す。 本発明(1)：大腸菌NS−244の４×1011個をPBS10
mlに懸濁せしめた懸濁液〔試料(1)〕を鶏の肛門
に１羽当り１滴（約0.025ml）滴下する。 本発明(2)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで４
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml塗付
する。 本発明(3)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで100
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴（約
0.025ml）滴下する。 本発明(4)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで400
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml塗付
する。 本発明(5)：大腸菌NS−244の４×1011個をPBSに
懸濁せしめ、さらにホルマリンを0.5％になる
ように加えて死菌懸濁液とした後、PBSを用
いてホルマリンを十分に除去し、遠心分離
（10000rpm、20分間）を行ない、死菌体を集め
そしてPBSに浮遊させて10mlとする〔試料
(2)〕。この試料(2)を鶏の肛門に１羽当り１滴
（約0.025ml）滴下する。 本発明(6)：本発明(5)で用いた試料(2)をPBSで４
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml塗付
する。 本発明(7)：本発明(5)で用いた試料(2)をPBSで100
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴（約
0.025ml）滴下する。 本発明(8)：本発明(5)で用いた試料(2)をPBSで400
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml塗付
する。 本発明(9)：大腸菌NS−244の1.2×1012個を
PBS2.5mlに浮遊させ、シヤーレ（Falcon製
1001型シヤーレ）に入れ、紫外線殺菌灯（東芝
殺菌ランプ GL15）21.5cm下に置き、30分毎
に撹拌を４回行ない、さらに静置状態で16時間
照射し、不活化乾燥した菌体に2.5mlになるよ
うにPBSを加えて死菌体浮遊液〔試料(3)〕を
得る。この試料を鶏の肛門に１羽当り１滴（約
0.025ml）滴下する。 本発明(10)：本発明(9)で用いた試料(3)をPBSで４
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml塗付
する。 本発明（11）：本発明(9)で用いた試料(3)をPBSで
100倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴（約
0.025ml）滴下する。 本発明（12）：本発明(9)で用いた試料(3)をPBSで
400倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml塗
付する。 本発明（13）：大腸菌NS−244の1.2×1012個を
PBSで10mlになるように浮遊させ、試験管に
入れ、 60Coを線源としそして放射線照射（３
メガラツド）を行なつた〔試料(4)〕。この試料
(4)を鶏の肛門に１羽当り１滴（約0.025ml）滴
下する。 本発明（14）：本発明（13）で用いた試料(4)を
PBSで４倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約
0.1ml塗付する。 本発明（15）：本発明（13）で用いた試料(4)を
PBSで100倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１
滴（約0.025ml）滴下する。 本発明（16）：本発明（13）で用いた試料(4)を
PBSで400倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約
0.1ml塗付する。 対照(1)：試料を接種せず、感染のみを行なう。 対照(2)：本発明(1)で用いた試料(1)を鶏の胸筋に同
様量注射する。 対照(3)：本発明(1)で用いた試料(1)を鶏に同様量経
口投与する。 対照(4)：本発明(5)で用いた試料(2)を鶏の胸筋に同
様量注射する。 対照(5)：本発明(5)で用いた試料(2)を鶏に同様量経
口投与する。 対照(6)：本発明(9)で用いた試料(3)を鶏の胸筋に同
様量注射する。 対照(7)：本発明(9)で用いた試料(3)を鶏に同様量経
口投与する。 対照(8)：本発明（13）で用いた試料(4)を鶏の胸筋
に同様量注射する。 対照(9)：本発明（13）で用いた試料(4)を鶏に同様
量経口投与する。
法に関する。 鶏の大腸菌症は特定の血清型を有する大腸菌の
感染により発症する。この病気の種類としては、
大腸菌性敗血症をはじめ、関節炎、出血性腸炎等
が挙げられる。このものに感染した鶏は気嚢炎、
心膜炎、関節炎および下痢等の症状を示して重症
の場合は死に至る。またこの大腸菌症は集団的ま
たは散発的に発生するものであり特にブロイラー
での発生が多く、被害の大きいものである。 かかる大腸菌症の予防のためには薬剤の投与が
実施されているが、薬剤耐性菌が多く出現してい
るために効果はあまり期待できない。また、治療
の場合も薬剤の選択、投与方法、労力等に問題が
多く、優れた予防効果を有するものの出現が望ま
れている。 そこで本発明者らは前記の問題を解決すべく研
究を行なつた結果、大腸菌を鶏の総排泄腔より接
種することにより大腸菌症を予防し得ることを見
い出した。 本発明の大腸菌は動物の臓器または糞便から分
離されたものであり、例としては大腸菌O1、O2
および大腸菌（E.coli）NS−244（微工研菌寄第
5757号）が挙げられる。 大腸菌NS−244は牛の糞便を大腸菌の選択培地
であるDHL寒天〔栄研化学(株)製〕上に画線培養
し出現したコロニーより得られた一株である。こ
のものの菌学的性質を述べる。 １ 形態学的所見 1.0〜4.0×0.4〜0.7μ グラム陰性棹菌 運動性あり 芽胞を形成しない ２ 培地上の所見 肉エキス培地で容易に発育する 肉エキス１％、ペプトン１％および塩化ナト
リウム0.3％を含有する寒天培地での生育良好 コロニーは低い凸状を示し、無色でＳ型、か
なり不透明、周辺はまるい ３ 生物学的性状 生育PH3.0〜10.0（至適PH7.0） 生育温度20〜40℃（至適温度37℃） 好気性および通性嫌気性 ４ 非抗酸性 カタラーゼ 陽性 オキシターゼ 陰性 KCN培地における発育は認められない β−ガラクトシターデ 陽性 ブドウ糖からのガス産生あり インドールの生成あり TSI培地での硫化水素生成せず ウレアーゼ生成せず ゼラチン液化能なし フエニルアラニン・デアミナーゼ 陰性 リジン・デカルボキシラーゼ 陽性 オルニチン・デカルボキシラーゼ 陽性 アルギニン・ジヒドロラーゼ 陰性 グルタミン酸デカルボキシラーゼ 陽性 MR反応 陽性 VP反応 陰性 単一炭素源として酢酸を利用するがクエン酸を
利用できない ４ 炭水化物からの酸産生能 ブドウ糖 陽性 アラビノース 陽性 セロビオース 陰性 乳糖 陽性 麦芽糖 陽性 ラフイノース 陰性 ラムノース 陽性 白糖 陰性 トレハロース 陽性 キシロース 陽性 アドニツト 陰性 ズルシツト 陽性 エスクリン 陰性 マンニツト 陽性 ソルビツト 陽性 グリセリン 陽性 サリシン 陰性 イノシツト 陰性 以上の菌学的性状から「Bergey's Manual of
Determinative Bacteriology」第８版の分類の
基準にしたがつて既知の菌株との異同を検討した
結果、本発明において使用する菌株（NS−244）
は大腸菌（Escherichia coli）と同定された。 この大腸菌NS−244の鶏に対する病原性を調べ
た結果、全く病原性がないことを確認した。すな
わち大腸菌NS−244の生菌を３週令の鶏10羽に１
羽当り1.1×1011個で静脈内投与した。７日後、
鶏の状態を観察したが死亡例は０であり、大腸菌
症の特徴的な病変である心膜炎や肝包膜炎の出現
は全く認められなかつた。 本発明で用いる大腸菌NS−244は生菌の状態で
用いることができるが、不活化したものを用いた
方が扱い易い。本発明で用いる大腸菌O1、O2は
不活化して用いる。大腸菌NS−244と大腸菌O1、
O2は紫外線照射、ガンマー線照射またはホルマ
リン処理で不活化するのがよいが、フエノール、
アセトン、アルコール、凍結融解、加熱、超音波
あるいは圧力などで処理して不活化することもで
きる。さらに、このものに水酸化アルミニウムゲ
ル、フロインドの完全アジユバンドのようなアジ
ユバンド（免疫賦活剤）を加えることも妨げな
い。さらにこのものに他の疾病の免疫的抗原や非
病原性の抗原を混合して総排泄腔に接種すること
もできる。前記の免疫的抗原とは、鶏コクシジウ
ム原虫、ニユーカツスル病などのワクチン、伝染
性コリーザの原因菌であるHaemophilus
paragallinarum、鶏マイコプラズマ病の原因菌
であるMycoplisma gallisepticum、Clostridium
perfringens、Salmonella pullorum、
Bifidobacterium、Lactobacillusおよび大腸菌
O1、O2、O78以外で大腸菌症に罹患した鶏から分
離される他のＯ抗原を有する大腸菌または健康な
鶏から分離される非病原性大腸菌などが挙げられ
る。 次いで前記大腸菌を鶏に接種する。接種に適当
な状態としては抗大腸菌症剤を水、生理食塩水、
PBS（リン酸バツフアー）および組織培養液など
の溶液に懸濁せしめたもの、または前記の不活化
処理そしてまたアジユバンド処理を行なつたもの
が例として挙げられる。このものを鶏の総排泄腔
に接種する。接種の具体的な方法としては鶏の肛
門、総排泄腔あるいはフアブリシウス嚢内に抗大
腸菌剤を上記の溶液に懸濁せしめ１羽当り0.002
ml〜0.2mlを滴下、注入、塗布、スプレーまたは
肛門部を浸すことによつて投与する方法が挙げら
れる。抗大腸菌症剤の接種菌量は鶏１羽当り1.0
×105個以上を用いる。 本発明に係る抗大腸菌症剤を本発明の接種方法
で使用すれば副作用を起こすことなく大腸菌症を
ほとんど完全に予防し得る。さらに、従来の薬剤
投与法では、薬剤耐性大腸菌の出現が多かつた
が、本発明の予防方法を用いれば、薬剤耐性大腸
菌の出現はない。 次に本発明の効果を示すための実施例を挙げ
る。 実施例 １ ０日令の鶏（ブロイラー専用種ハバード）10羽
の肛門に試料を接種し、また対照(2)〜(9)は試料を
それぞれの方法で接種した。次いでこれらの鶏に
21日令において大腸菌O78を１羽当り1.4×1010個
静脈内接種して感染させる。対照(1)は試料を接種
せずに感染のみを行なつたものである。感染後７
日目に斃死率について観察した。結果は表１に示
す。試料の種類および接種方法については下記に
示す。 本発明(1)：大腸菌NS−244の４×1011個をPBS10
mlに懸濁せしめた懸濁液〔試料(1)〕を鶏の肛門
に１羽当り１滴（約0.025ml）滴下する。 本発明(2)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで４
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml塗付
する。 本発明(3)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで100
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴（約
0.025ml）滴下する。 本発明(4)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで400
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml塗付
する。 本発明(5)：大腸菌NS−244の４×1011個をPBSに
懸濁せしめ、さらにホルマリンを0.5％になる
ように加えて死菌懸濁液とした後、PBSを用
いてホルマリンを十分に除去し、遠心分離
（10000rpm、20分間）を行ない、死菌体を集め
そしてPBSに浮遊させて10mlとする〔試料
(2)〕。この試料(2)を鶏の肛門に１羽当り１滴
（約0.025ml）滴下する。 本発明(6)：本発明(5)で用いた試料(2)をPBSで４
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml塗付
する。 本発明(7)：本発明(5)で用いた試料(2)をPBSで100
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴（約
0.025ml）滴下する。 本発明(8)：本発明(5)で用いた試料(2)をPBSで400
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml塗付
する。 本発明(9)：大腸菌NS−244の1.2×1012個を
PBS2.5mlに浮遊させ、シヤーレ（Falcon製
1001型シヤーレ）に入れ、紫外線殺菌灯（東芝
殺菌ランプ GL15）21.5cm下に置き、30分毎
に撹拌を４回行ない、さらに静置状態で16時間
照射し、不活化乾燥した菌体に2.5mlになるよ
うにPBSを加えて死菌体浮遊液〔試料(3)〕を
得る。この試料を鶏の肛門に１羽当り１滴（約
0.025ml）滴下する。 本発明(10)：本発明(9)で用いた試料(3)をPBSで４
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml塗付
する。 本発明（11）：本発明(9)で用いた試料(3)をPBSで
100倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴（約
0.025ml）滴下する。 本発明（12）：本発明(9)で用いた試料(3)をPBSで
400倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml塗
付する。 本発明（13）：大腸菌NS−244の1.2×1012個を
PBSで10mlになるように浮遊させ、試験管に
入れ、 60Coを線源としそして放射線照射（３
メガラツド）を行なつた〔試料(4)〕。この試料
(4)を鶏の肛門に１羽当り１滴（約0.025ml）滴
下する。 本発明（14）：本発明（13）で用いた試料(4)を
PBSで４倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約
0.1ml塗付する。 本発明（15）：本発明（13）で用いた試料(4)を
PBSで100倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１
滴（約0.025ml）滴下する。 本発明（16）：本発明（13）で用いた試料(4)を
PBSで400倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約
0.1ml塗付する。 対照(1)：試料を接種せず、感染のみを行なう。 対照(2)：本発明(1)で用いた試料(1)を鶏の胸筋に同
様量注射する。 対照(3)：本発明(1)で用いた試料(1)を鶏に同様量経
口投与する。 対照(4)：本発明(5)で用いた試料(2)を鶏の胸筋に同
様量注射する。 対照(5)：本発明(5)で用いた試料(2)を鶏に同様量経
口投与する。 対照(6)：本発明(9)で用いた試料(3)を鶏の胸筋に同
様量注射する。 対照(7)：本発明(9)で用いた試料(3)を鶏に同様量経
口投与する。 対照(8)：本発明（13）で用いた試料(4)を鶏の胸筋
に同様量注射する。 対照(9)：本発明（13）で用いた試料(4)を鶏に同様
量経口投与する。
【表】
【表】
実施例 ２
０日令の鶏（ブロイラー専用種ハバード）10羽
の肛門に試料を接種し、また対照２〜19及び対照
21〜38は試料をそれぞれの方法で接種した。対照
１、20は試料は接種しない。次いでこれらの鶏に
21日令において、本発明１〜27の鶏と対照１〜19
の鶏は大腸菌O2を１羽当り5.0×108個静脈内接種
し、本発明28〜54の鶏と対照20〜38の鶏は大腸菌
O78を１羽当り1.4×1010個静脈内接種して感染さ
せる。感染後７日目に斃死率について観察した。
結果は表２に示す。試料の種類および接種方法に
ついては下記に示す。 本発明(1)：大腸菌NS−244の1.2×1012個および
大腸菌O2の1.0×1012個をPBSに懸濁せしめ、
さらにホルマリンを0.5％になるように加え、
死菌懸濁液とした後、PBSを用いてホルマリ
ンを十分に除去し遠心分離（10000rpm、20分
間）を行ない、死菌体を集めそしてPBSに浮
遊させて10mlとする〔試料(1)〕。この試料(1)を
鶏の肛門に１羽当り１滴（約0.025ml）滴下す
る。 本発明(2)：本発明(1)で用いた試料(1)を鶏の総排泄
腔に同様量注入する。 本発明(3)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで４
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1mlスプ
レーする。 本発明(4)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで100
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴（約
0.025ml）滴下する。 本発明(5)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで100
倍に希釈し、鶏の総排泄腔に同様量注入する。 本発明(6)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで400
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1mlスプ
レーする。 本発明(7)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで
10000倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴
（約0.025ml）滴下する。 本発明(8)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで
10000倍に希釈し、鶏の総排泄腔に同様量注入
する。 本発明(9)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで
40000倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml
スプレーする。 本発明(10)：大腸菌NS−244の1.2×1012個および
大腸菌O2の1.0×1012個をPBS2.5mlに混合して
浮遊させ、シヤーレ（Falon製1001型シヤー
レ）に入れ、紫外線殺菌灯（東芝殺菌ランプ
GL 15）21.5cm下に置き、30分毎に撹拌を４回
行ない、さらに静置状態で16時間照射し、不活
化乾燥した菌体に2.5mlになるようにPBSを加
え死菌体浮遊液〔試料(2)〕を得る。この試料を
鶏の肛門に１羽当り１滴（約0.025ml）滴下す
る。 本発明（11）：本発明(10)で用いた試料(2)を鶏の総
排泄腔に同様量注入する。 本発明（12）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
４倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1mlス
プレーする。 本発明（13）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
100倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴（約
0.025ml）滴下する。 本発明（14）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
100倍に希釈し、鶏の総排泄腔に同様量注入す
る。 本発明（15）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
400倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1mlス
プレーする。 本発明（16）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
10000倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴
（約0.025ml）滴下する。 本発明（17）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
10000倍に希釈し、鶏の総排泄腔に同様量注入
する。 本発明（18）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
40000倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml
スプレーする。 本発明（19）：大腸菌NS−244の4.0×1011個およ
び大腸菌O2の1.0×1012個をPBSで10mlになる
ように混合浮遊させ、試験管に入れ、 60Coを
線源とし放射線照射（３メガラツド）を行なつ
た〔試料(3)〕。この試料(3)を鶏の肛門に１羽当
り１滴（約0.025ml）滴下する。 本発明（20）：本発明（19）で用いた試料(3)を鶏
の総排泄腔に同様量注入する。 本発明（21）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで４倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約
0.1mlスプレーする。 本発明（22）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで100倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１
滴（約0.025ml）滴下する。 本発明（23）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで100倍に希釈し、鶏の総排泄腔に同様量
注入する。 本発明（24）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで400倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約
0.1mlスプレーする。 本発明（25）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで10000倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り
１滴（約0.025ml）滴下する。 本発明（26）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで10000倍に希釈し、鶏の総排泄腔に同様
量注入する。 本発明（27）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで40000倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り
約0.1mlスプレーする。 本発明（28）：本発明(1)と全く同様に行なう。 本発明（29）：本発明(2)と全く同様に行なう。 本発明（30）：本発明(3)と全く同様に行なう。 本発明（31）：本発明(4)と全く同様に行なう。 本発明（32）：本発明(5)と全く同様に行なう。 本発明（33）：本発明(6)と全く同様に行なう。 本発明（34）：本発明(7)と全く同様に行なう。 本発明（35）：本発明(8)と全く同様に行なう。 本発明（36）：本発明(9)と全く同様に行なう。 本発明（37）：本発明(10)と全く同様に行なう。 本発明（38）：本発明（11）と全く同様に行なう。 本発明（39）：本発明（12）と全く同様に行なう。 本発明（40）：本発明（13）と全く同様に行なう。 本発明（41）：本発明（14）と全く同様に行なう。 本発明（42）：本発明（15）と全く同様に行なう。 本発明（43）：本発明（16）と全く同様に行なう。 本発明（44）：本発明（17）と全く同様に行なう。 本発明（45）：本発明（18）と全く同様に行なう。 本発明（46）：本発明（19）と全く同様に行なう。 本発明（47）：本発明（20）と全く同様に行なう。 本発明（48）：本発明（21）と全く同様に行なう。 本発明（49）：本発明（22）と全く同様に行なう。 本発明（50）：本発明（23）と全く同様に行なう。 本発明（51）：本発明（24）と全く同様に行なう。 本発明（52）：本発明（25）と全く同様に行なう。 本発明（53）：本発明（26）と全く同様に行なう。 本発明（54）：本発明（27）と全く同様に行なう。 対照(1)：試料を接種せず、感染のみを行なう。 対照(2)：本発明(1)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(3)：本発明(1)で用いた試料を鶏に同様量経口
投与する。 対照(4)：本発明(4)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(5)：本発明(4)で用いた試料を鶏に同様量経口
投与する。 対照(6)：本発明(7)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(7)：本発明(7)で用いた試料を鶏に同様量経口
投与する。 対照(8)：本発明(10)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(9)：本発明(10)で用いた試料を鶏に同様量経口
投与する。 対照(10)：本発明（13）で用いた試料を鶏の胸筋に
同様量注射する。 対照（11）：本発明（13）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（12）：本発明（16）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（13）：本発明（16）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（14）：本発明（19）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（15）：本発明（19）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（16）：本発明（22）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（17）：本発明（22）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（18）：本発明（25）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（19）：本発明（25）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（20）：試料を接種せず、感染のみを行なう。 対照（21）：本発明(1)で用いた試料を鶏の胸筋に
同様量注射する。 対照（22）：本発明(1)で用いた試料を鶏に同様量
経口投与する。 対照（23）：本発明(4)で用いた試料を鶏の胸筋に
同様量注射する。 対照（24）：本発明(4)で用いた試料を鶏に同様量
経口投与する。 対照（25）：本発明(7)で用いた試料を鶏の胸筋に
同様量注射する。 対照（26）：本発明(7)で用いた試料を鶏に同様量
経口投与する。 対照（27）：本発明(10)で用いた試料を鶏の胸筋に
同様量注射する。 対照（28）：本発明(10)で用いた試料を鶏に同様量
経口投与する。 対照（29）：本発明（13）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（30）：本発明（13）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（31）：本発明（16）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（32）：本発明（16）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（33）：本発明（19）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（34）：本発明（19）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（35）：本発明（22）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（36）：本発明（22）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（37）：本発明（25）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（38）：本発明（25）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。
の肛門に試料を接種し、また対照２〜19及び対照
21〜38は試料をそれぞれの方法で接種した。対照
１、20は試料は接種しない。次いでこれらの鶏に
21日令において、本発明１〜27の鶏と対照１〜19
の鶏は大腸菌O2を１羽当り5.0×108個静脈内接種
し、本発明28〜54の鶏と対照20〜38の鶏は大腸菌
O78を１羽当り1.4×1010個静脈内接種して感染さ
せる。感染後７日目に斃死率について観察した。
結果は表２に示す。試料の種類および接種方法に
ついては下記に示す。 本発明(1)：大腸菌NS−244の1.2×1012個および
大腸菌O2の1.0×1012個をPBSに懸濁せしめ、
さらにホルマリンを0.5％になるように加え、
死菌懸濁液とした後、PBSを用いてホルマリ
ンを十分に除去し遠心分離（10000rpm、20分
間）を行ない、死菌体を集めそしてPBSに浮
遊させて10mlとする〔試料(1)〕。この試料(1)を
鶏の肛門に１羽当り１滴（約0.025ml）滴下す
る。 本発明(2)：本発明(1)で用いた試料(1)を鶏の総排泄
腔に同様量注入する。 本発明(3)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで４
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1mlスプ
レーする。 本発明(4)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで100
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴（約
0.025ml）滴下する。 本発明(5)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで100
倍に希釈し、鶏の総排泄腔に同様量注入する。 本発明(6)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで400
倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1mlスプ
レーする。 本発明(7)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで
10000倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴
（約0.025ml）滴下する。 本発明(8)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで
10000倍に希釈し、鶏の総排泄腔に同様量注入
する。 本発明(9)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで
40000倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml
スプレーする。 本発明(10)：大腸菌NS−244の1.2×1012個および
大腸菌O2の1.0×1012個をPBS2.5mlに混合して
浮遊させ、シヤーレ（Falon製1001型シヤー
レ）に入れ、紫外線殺菌灯（東芝殺菌ランプ
GL 15）21.5cm下に置き、30分毎に撹拌を４回
行ない、さらに静置状態で16時間照射し、不活
化乾燥した菌体に2.5mlになるようにPBSを加
え死菌体浮遊液〔試料(2)〕を得る。この試料を
鶏の肛門に１羽当り１滴（約0.025ml）滴下す
る。 本発明（11）：本発明(10)で用いた試料(2)を鶏の総
排泄腔に同様量注入する。 本発明（12）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
４倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1mlス
プレーする。 本発明（13）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
100倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴（約
0.025ml）滴下する。 本発明（14）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
100倍に希釈し、鶏の総排泄腔に同様量注入す
る。 本発明（15）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
400倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1mlス
プレーする。 本発明（16）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
10000倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１滴
（約0.025ml）滴下する。 本発明（17）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
10000倍に希釈し、鶏の総排泄腔に同様量注入
する。 本発明（18）：本発明(10)で用いた試料(2)をPBSで
40000倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約0.1ml
スプレーする。 本発明（19）：大腸菌NS−244の4.0×1011個およ
び大腸菌O2の1.0×1012個をPBSで10mlになる
ように混合浮遊させ、試験管に入れ、 60Coを
線源とし放射線照射（３メガラツド）を行なつ
た〔試料(3)〕。この試料(3)を鶏の肛門に１羽当
り１滴（約0.025ml）滴下する。 本発明（20）：本発明（19）で用いた試料(3)を鶏
の総排泄腔に同様量注入する。 本発明（21）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで４倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約
0.1mlスプレーする。 本発明（22）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで100倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り１
滴（約0.025ml）滴下する。 本発明（23）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで100倍に希釈し、鶏の総排泄腔に同様量
注入する。 本発明（24）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで400倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り約
0.1mlスプレーする。 本発明（25）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで10000倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り
１滴（約0.025ml）滴下する。 本発明（26）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで10000倍に希釈し、鶏の総排泄腔に同様
量注入する。 本発明（27）：本発明（19）で用いた試料(3)を
PBSで40000倍に希釈し、鶏の肛門に１羽当り
約0.1mlスプレーする。 本発明（28）：本発明(1)と全く同様に行なう。 本発明（29）：本発明(2)と全く同様に行なう。 本発明（30）：本発明(3)と全く同様に行なう。 本発明（31）：本発明(4)と全く同様に行なう。 本発明（32）：本発明(5)と全く同様に行なう。 本発明（33）：本発明(6)と全く同様に行なう。 本発明（34）：本発明(7)と全く同様に行なう。 本発明（35）：本発明(8)と全く同様に行なう。 本発明（36）：本発明(9)と全く同様に行なう。 本発明（37）：本発明(10)と全く同様に行なう。 本発明（38）：本発明（11）と全く同様に行なう。 本発明（39）：本発明（12）と全く同様に行なう。 本発明（40）：本発明（13）と全く同様に行なう。 本発明（41）：本発明（14）と全く同様に行なう。 本発明（42）：本発明（15）と全く同様に行なう。 本発明（43）：本発明（16）と全く同様に行なう。 本発明（44）：本発明（17）と全く同様に行なう。 本発明（45）：本発明（18）と全く同様に行なう。 本発明（46）：本発明（19）と全く同様に行なう。 本発明（47）：本発明（20）と全く同様に行なう。 本発明（48）：本発明（21）と全く同様に行なう。 本発明（49）：本発明（22）と全く同様に行なう。 本発明（50）：本発明（23）と全く同様に行なう。 本発明（51）：本発明（24）と全く同様に行なう。 本発明（52）：本発明（25）と全く同様に行なう。 本発明（53）：本発明（26）と全く同様に行なう。 本発明（54）：本発明（27）と全く同様に行なう。 対照(1)：試料を接種せず、感染のみを行なう。 対照(2)：本発明(1)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(3)：本発明(1)で用いた試料を鶏に同様量経口
投与する。 対照(4)：本発明(4)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(5)：本発明(4)で用いた試料を鶏に同様量経口
投与する。 対照(6)：本発明(7)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(7)：本発明(7)で用いた試料を鶏に同様量経口
投与する。 対照(8)：本発明(10)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(9)：本発明(10)で用いた試料を鶏に同様量経口
投与する。 対照(10)：本発明（13）で用いた試料を鶏の胸筋に
同様量注射する。 対照（11）：本発明（13）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（12）：本発明（16）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（13）：本発明（16）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（14）：本発明（19）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（15）：本発明（19）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（16）：本発明（22）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（17）：本発明（22）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（18）：本発明（25）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（19）：本発明（25）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（20）：試料を接種せず、感染のみを行なう。 対照（21）：本発明(1)で用いた試料を鶏の胸筋に
同様量注射する。 対照（22）：本発明(1)で用いた試料を鶏に同様量
経口投与する。 対照（23）：本発明(4)で用いた試料を鶏の胸筋に
同様量注射する。 対照（24）：本発明(4)で用いた試料を鶏に同様量
経口投与する。 対照（25）：本発明(7)で用いた試料を鶏の胸筋に
同様量注射する。 対照（26）：本発明(7)で用いた試料を鶏に同様量
経口投与する。 対照（27）：本発明(10)で用いた試料を鶏の胸筋に
同様量注射する。 対照（28）：本発明(10)で用いた試料を鶏に同様量
経口投与する。 対照（29）：本発明（13）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（30）：本発明（13）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（31）：本発明（16）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（32）：本発明（16）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（33）：本発明（19）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（34）：本発明（19）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（35）：本発明（22）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（36）：本発明（22）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。 対照（37）：本発明（25）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（38）：本発明（25）で用いた試料を鶏に同
様量経口投与する。
【表】
【表】
【表】
実施例 ３
孵化後72時間以内の鶏（ブロイラー専用種ハバ
ード）10羽の肛門に試料を接種し、また対照(2)〜
(10)及び対照（12）〜（20）及び対照（22）〜
（30）は試料をそれぞれの方法で接種した。対照
(1)，（11），（21）は試料を接種しない。次いでこ
れらの鶏に21日令において、本発明(1)〜(9)と対照
(1)〜(10)の鶏は大腸菌O1を１羽当り1.2×109個静脈
内接種し、本発明(10)〜（18）と対照（11）〜
（20）の鶏は大腸菌O2を１羽当り5.0×108個静脈
内接種し、そして本発明（19）〜（27）と対照
（21）〜（30）の鶏は大腸菌O78を１羽当り1.4×
1010個静脈内接種して感染させる。感染後７日目
に斃死率について観察した。結果は表３に示す。
試料の種類、接種方法については下記に示す。 本発明(1)：大腸菌NS−244の3.6×1012個、大腸
菌O1の3.0×1012個および大腸菌O2の3.0×1012
個をPBSに混合懸濁せしめ、さらにホルマリ
ンを0.5％になるように加え死菌懸濁液とした
後、PBSを用いてホルマリンを十分に除去し、
遠心分離（10000rpm、20分間）を行ない、死
菌体を集めそしてPBSに浮遊させて10mlとす
る〔試料(1)〕。この試料(1)に鶏の肛門を１羽当
り約0.075mlとなるように浸す。 本発明(2)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで100
倍に希釈したもので、鶏の肛門を同様量になる
ように浸す。 本発明(3)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで
10000倍に希釈したもので、鶏の肛門を同様量
になるように浸す。 本発明(4)：大腸菌NS−244の3.0×1012個、大腸
菌O1の3.0×1012個および大腸菌O2の3.0×1012
個をPBS2.5mlに混合して浮遊させ、シヤーレ
（Falon製1001型シヤーレ）に入れ、紫外線殺
菌灯（東芝殺菌ランプGL15）21.5cm下に置き、
30分毎に撹拌を４回行ない、さらに静置状態で
16時間照射し、かくして不活化乾燥した菌体に
2.5mlになるようにPBSを加えて死菌体浮遊液
〔試料(2)〕を得る。この試料(2)に鶏の肛門を１
羽当り0.075mlになるように浸す。 本発明(5)：本発明４(4)用いた試料(2)をPBSで100
倍に希釈したもので、鶏の肛門を同様量になる
ように浸す。 本発明(6)：本発明(4)で用いた試料(2)をPBSで
10000倍に希釈したもので、鶏の肛門を同様量
になるように浸す。 本発明(7)：大腸菌NS−244の3.6×1012個、大腸
菌O1の3.0×1012個および大腸菌O2の3.0×1012
個をPBS10mlに浮遊させ、試験管に入れ、
60Coを線源とし放射線照射（３メガラツド）を
行なつた〔試料(3)〕。この試料(3)に鶏の肛門を
１羽当り0.075mlになるように浸す。 本発明(8)：本発明(7)で用いた試料(3)をPBSで100
倍に希釈したものに、鶏の肛門を同様量になる
ように浸す。 本発明(9)：本発明(7)で用いた試料(3)をPBSで
10000倍に希釈したものに、鶏の肛門を同様量
になるように浸す。 本発明(10)：本発明(1)と全く同様に行なう。 本発明（11）：本発明(2)と全く同様に行なう。 本発明（12）：本発明(3)と全く同様に行なう。 本発明（13）：本発明(4)と全く同様に行なう。 本発明（14）：本発明(5)と全く同様に行なう。 本発明（15）：本発明(6)と全く同様に行なう。 本発明（16）：本発明(7)と全く同様に行なう。 本発明（17）：本発明(8)と全く同様に行なう。 本発明（18）：本発明(9)と全く同様に行なう。 本発明（19）：本発明(1)と全く同様に行なう。 本発明（20）：本発明(2)と全く同様に行なう。 本発明（21）：本発明(3)と全く同様に行なう。 本発明（22）：本発明(4)と全く同様に行なう。 本発明（23）：本発明(5)と全く同様に行なう。 本発明（24）：本発明(6)と全く同様に行なう。 本発明（25）：本発明(7)と全く同様に行なう。 本発明（26）：本発明(8)と全く同様に行なう。 本発明（27）：本発明(9)と全く同様に行なう。 対照(1)：試料を接種せず、感染のみを行なう。 対照(2)：本発明(1)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(3)：本発明(2)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(4)：本発明(3)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(5)：本発明(4)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(6)：本発明(5)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(7)：本発明(6)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(8)：本発明(7)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(9)：本発明(8)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(10)：本発明(9)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照（11）：試料を接種せず、感染のみを行なう。 対照（12）：本発明(10)で用いた試料を鶏の胸筋に
同様量注射する。 対照（13）：本発明（11）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（14）：本発明（12）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（15）：本発明（13）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（16）：本発明（14）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（17）：本発明（15）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（18）：本発明（16）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（19）：本発明（17）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（20）：本発明（18）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（21）：試料を接種せず、感染のみを行なう。 対照（22）：本発明（19）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（23）：本発明（20）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（24）：本発明（21）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（25）：本発明（22）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（26）：本発明（23）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（27）：本発明（24）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（28）：本発明（25）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（29）：本発明（26）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（30）：本発明（27）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。
ード）10羽の肛門に試料を接種し、また対照(2)〜
(10)及び対照（12）〜（20）及び対照（22）〜
（30）は試料をそれぞれの方法で接種した。対照
(1)，（11），（21）は試料を接種しない。次いでこ
れらの鶏に21日令において、本発明(1)〜(9)と対照
(1)〜(10)の鶏は大腸菌O1を１羽当り1.2×109個静脈
内接種し、本発明(10)〜（18）と対照（11）〜
（20）の鶏は大腸菌O2を１羽当り5.0×108個静脈
内接種し、そして本発明（19）〜（27）と対照
（21）〜（30）の鶏は大腸菌O78を１羽当り1.4×
1010個静脈内接種して感染させる。感染後７日目
に斃死率について観察した。結果は表３に示す。
試料の種類、接種方法については下記に示す。 本発明(1)：大腸菌NS−244の3.6×1012個、大腸
菌O1の3.0×1012個および大腸菌O2の3.0×1012
個をPBSに混合懸濁せしめ、さらにホルマリ
ンを0.5％になるように加え死菌懸濁液とした
後、PBSを用いてホルマリンを十分に除去し、
遠心分離（10000rpm、20分間）を行ない、死
菌体を集めそしてPBSに浮遊させて10mlとす
る〔試料(1)〕。この試料(1)に鶏の肛門を１羽当
り約0.075mlとなるように浸す。 本発明(2)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで100
倍に希釈したもので、鶏の肛門を同様量になる
ように浸す。 本発明(3)：本発明(1)で用いた試料(1)をPBSで
10000倍に希釈したもので、鶏の肛門を同様量
になるように浸す。 本発明(4)：大腸菌NS−244の3.0×1012個、大腸
菌O1の3.0×1012個および大腸菌O2の3.0×1012
個をPBS2.5mlに混合して浮遊させ、シヤーレ
（Falon製1001型シヤーレ）に入れ、紫外線殺
菌灯（東芝殺菌ランプGL15）21.5cm下に置き、
30分毎に撹拌を４回行ない、さらに静置状態で
16時間照射し、かくして不活化乾燥した菌体に
2.5mlになるようにPBSを加えて死菌体浮遊液
〔試料(2)〕を得る。この試料(2)に鶏の肛門を１
羽当り0.075mlになるように浸す。 本発明(5)：本発明４(4)用いた試料(2)をPBSで100
倍に希釈したもので、鶏の肛門を同様量になる
ように浸す。 本発明(6)：本発明(4)で用いた試料(2)をPBSで
10000倍に希釈したもので、鶏の肛門を同様量
になるように浸す。 本発明(7)：大腸菌NS−244の3.6×1012個、大腸
菌O1の3.0×1012個および大腸菌O2の3.0×1012
個をPBS10mlに浮遊させ、試験管に入れ、
60Coを線源とし放射線照射（３メガラツド）を
行なつた〔試料(3)〕。この試料(3)に鶏の肛門を
１羽当り0.075mlになるように浸す。 本発明(8)：本発明(7)で用いた試料(3)をPBSで100
倍に希釈したものに、鶏の肛門を同様量になる
ように浸す。 本発明(9)：本発明(7)で用いた試料(3)をPBSで
10000倍に希釈したものに、鶏の肛門を同様量
になるように浸す。 本発明(10)：本発明(1)と全く同様に行なう。 本発明（11）：本発明(2)と全く同様に行なう。 本発明（12）：本発明(3)と全く同様に行なう。 本発明（13）：本発明(4)と全く同様に行なう。 本発明（14）：本発明(5)と全く同様に行なう。 本発明（15）：本発明(6)と全く同様に行なう。 本発明（16）：本発明(7)と全く同様に行なう。 本発明（17）：本発明(8)と全く同様に行なう。 本発明（18）：本発明(9)と全く同様に行なう。 本発明（19）：本発明(1)と全く同様に行なう。 本発明（20）：本発明(2)と全く同様に行なう。 本発明（21）：本発明(3)と全く同様に行なう。 本発明（22）：本発明(4)と全く同様に行なう。 本発明（23）：本発明(5)と全く同様に行なう。 本発明（24）：本発明(6)と全く同様に行なう。 本発明（25）：本発明(7)と全く同様に行なう。 本発明（26）：本発明(8)と全く同様に行なう。 本発明（27）：本発明(9)と全く同様に行なう。 対照(1)：試料を接種せず、感染のみを行なう。 対照(2)：本発明(1)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(3)：本発明(2)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(4)：本発明(3)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(5)：本発明(4)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(6)：本発明(5)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(7)：本発明(6)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(8)：本発明(7)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(9)：本発明(8)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照(10)：本発明(9)で用いた試料を鶏の胸筋に同様
量注射する。 対照（11）：試料を接種せず、感染のみを行なう。 対照（12）：本発明(10)で用いた試料を鶏の胸筋に
同様量注射する。 対照（13）：本発明（11）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（14）：本発明（12）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（15）：本発明（13）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（16）：本発明（14）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（17）：本発明（15）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（18）：本発明（16）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（19）：本発明（17）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（20）：本発明（18）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（21）：試料を接種せず、感染のみを行なう。 対照（22）：本発明（19）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（23）：本発明（20）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（24）：本発明（21）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（25）：本発明（22）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（26）：本発明（23）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（27）：本発明（24）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（28）：本発明（25）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（29）：本発明（26）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。 対照（30）：本発明（27）で用いた試料を鶏の胸
筋に同様量注射する。
【表】
【表】
実施例 ４
孵化後72時間以内の鶏（ブロイラー専用種ハバ
ード）10羽の肛門に下記に示す試料を１羽当り１
滴（約0.025ml）の量で滴下した。 試料(1)：ニユーカツスル病生ワクチン液30ml
（1000ドーズ）に実施例１の本発明(1)で用いた
試料(1)10mlを懸濁せしめたもの。 試料(2)：アイメリア・テネラのスポロゾイト
4000000個とアイメリア・ブルネツテイのスポ
ロゾイト4000000個とを実施例１の本発明(1)で
用いた試料(1)10mlに懸濁せしめたもの。 試料(3)：Bifidobacterium、Lactobacillusおよび
非病原性大腸菌の各１×1011個をPBS10mlに混
合懸濁せしめ、さらに実施例３の本発明(1)で用
いた試料(1)10mlを加えて懸濁混合せしめたも
の。 試料(4)：Clostridium perfringensおよび
Salmonella pullorumのそれぞれ１×1011個を
PBSに懸濁せしめ、さらにホルマリンを0.5％
になるように加え、死菌懸濁液とした後、ホル
マリンを十分に除去し、遠心分離（10000rpm、
20分間）を行ない、死菌体を集めてPBSに浮
遊させたものに実施例３の本発明(1)で用いた試
料(1)を10ml懸濁混合せしめたもの。 試料(5)：Haemophilue paragallinarumおよび
Mrcoplasma gallisepticumのそれぞれ１×
1010個をPBS2.5mlに浮遊させ、シヤーレ
（Falcon製1001型シヤーレ）に入れ、紫外線殺
菌灯（東芝殺菌ランプGL15）21.5cm下に置き、
30分毎に撹拌を４回行ない、さらに静置状態で
16時間照射し、その後2.5mlになるようにPBS
を加えて死菌体浮遊液を得、このものに実施例
３の本発明(4)で用いた試料(2)を2.5ml加えて懸
濁混合せしめたもの。 試料(1)、(2)、(3)、(4)および(5)に用いたニユーカ
ツスル病生ワクチン、アイメリア・テネラのスポ
ロゾイト、アイメリア・ブルネツテイのスポロゾ
イト、Bifidobacterium、Lactobacillus、非病原
性大腸菌、Clostridium、perfringens、
Salmonella pullorum、Haemophilus
paragallinarum、Mycoplasma gallisepticumの
調製法は下記のとおりである。 試料(1)に用いたニユーカツスル病生ワクチン液
は化学及び血清療法研究所製のニユーカツスル病
生ワクチンの溶解用液30ml中に乾燥予防液を1000
ドーズ分になるように溶解して調製した。 試料(2)に用いたアイメリア・テネラのスポロゾ
イトの調製法は次のとおりである。アイメリア・
テネラの成熟オーシストを経口投与した鶏の糞、
盲腸壁および盲腸内容物を集め、３％重クロム酸
カリウム溶液に浮遊せしめそして28℃において２
日間培養した。得られた成熟オーシストを含む溶
液を遠心分離（3000rpm、10分間）しそして沈澱
を集める。次いでこの沈澱を水で洗浄し且つ飽和
食塩水を添加する。この溶液を遠心分離
（3000rpm、10分間）し、上澄をとり、この上澄
を水で希釈し、希釈液を更に遠心分離
（1000rpm、３分間）しそして沈澱を集める。こ
の沈澱はほとんどオーシストのみよりなる。前記
オーシストに水および５％の次亜鉛素酸ナトリウ
ム液を加え且つ15分間放置した後、遠心分離
（2000rpm、３分間）を行う。得られた沈澱を水
で洗浄し、次いでホモジナイザーで磨砕する。こ
の磨砕物はほとんどスポロシストよりなる。この
スポロシストに５％鶏胆汁および0.25％トリプシ
ンPBS（−）溶液を加えそして40℃の温浴中でお
よび1.5時間消化せしめる。得られた消化液を遠
心分離して沈澱を集め、そしてこの沈澱をPBS
（−）溶液で洗浄する。このものはほとんどスポ
ロゾイトよりなる。これにPBS（−）溶液を加え
た。 試料(2)で用いたアイメリア・ブルネツテイのス
ポロゾイトは上記のアイメリア・テネラのスポロ
ゾイト調製法に準じて行なう。ただしアイメリ
ア・テネラの代わりに、アイメリア・ブルネツテ
イを使用する。 試料(3)に用いたBifidobateriumは鶏の腸管か
ら分離し、アスコルビン酸ソーダとＬ−システイ
ン塩酸塩加ブレイン・ハートインフイユージヨン
ブロス（Difco Laboratory社製）を用いて37℃
で20時間培養した後、10000rpmにおいて20分間
遠心分離を行つてBifidobacteriumの湿菌体を得
る。 試料(3)に用いたLactobacillusは試料(3)に用い
たBifidobacteriumの調製法と同様に行なつた。 試料(3)に用いた非病原性大腸菌は健康な鶏の腸
管より分離し、ハート・インフユージヨンブロス
（Difco Laboratory社製）を用いて37℃で18時間
培養した後、10000rpmにおいて20分間遠心分離
を行なつて非病原性大腸菌の湿菌体を得る。 試料(4)に用いたClostreidium perfringensは試
料(3)に用いたBifidobacteriumの調製法と同様に
行なつた。 試料(4)に用いたSalmonella pullorumは雛白痢
に罹患した鶏の糞便より分離し、ハート・インフ
イユージヨンブイヨン（Difco Laboratory社製）
を用いて37℃で18時間培養した後、10000rpmに
おいて20分間遠心分離を行なつてSalmonella
pullorumの湿菌体を得る。 試料(5)に用いたHaemophilus
pararagllinarumは伝染性コリーザに罹患した鶏
の鼻腔より分離し、チヨコレート寒天培地〔日清
化学(株)製クリメデイア〕で画線培養し、増殖した
コロニーをコンラージ棒を用いてかき取つた。 試料(5)に用いたMycoplasma gallisepticum
は、鶏呼吸器性マイコプラズマ病に罹患した鶏の
気嚢より分離した。分離方法は「Bull.Nat.Inst.
Anim.Hlth.」No.53（1966年８月）第10頁に準じて
行なつた。すなわち、気嚢の内側を滅菌綿棒でぬ
ぐい、それを0.5％イーストエクストラクト
（Difco社製）加燐酸緩衝食塩液１mlに振り出し、
この培養材料の１白金耳を寒天平板培地に塗抹す
るとともに0.1mlを２mlを液体培地に移植した。
平板培地は乾燥を防ぐ目的で水でしめらした脱脂
綿を入れたデシケーター中に収め、液体培地はそ
のままそれぞれ37℃で培養した。平板培地は６日
後に50倍の拡大で集落の有無を観察した。液体培
地は10日間観察し、その間培地の黄変したものは
その都度平板培地に塗抹培養して集落の有無を検
査した。ここで使用した液体培地は、鶏１羽分の
もも肉、胸肉、心、肝を細坐し、２倍量の蒸溜水
を加えて１夜永室に静置し、その後100℃に30分
加熱し、過後NaClを0.5％、鶏血液を５％そし
て10％NaClを１％加え、100℃30分加熱し、PH
7.8に修正後過および過滅菌を行なつた液
(1)に、非働性馬血清20％、10％ブドウ糖１％、１
％フエノールレツド0.2％、５％酢酸タリウム１
％およびペニシリン1000μ／mlを加えたものを使
用した。また、ここで使用した寒天平板培地は、
液体培地作成時に使用した液１を約60℃に加熱
し、15％寒天液の加熱溶解したもの1/10量を加え
て短時間加熱して完全に溶解させ、50℃に冷却
し、非働性馬血清20％、５％酢酸タリウム１％お
よびペニシリン1000U／mlを加えて寒天培地とし
た。分離したMycoplasma gallisepticumは５ml
PPLO増殖培地（栄研）を用いて37℃において３
日間培養し、次に100mlのPPLO培地（栄研）に
植え次いで37℃で３日間培養し、次に3000mlの
PPLO増殖培地に植え、次いで37℃で５日間培養
し、次に20000Gで30分間遠心分離して集収した。
ード）10羽の肛門に下記に示す試料を１羽当り１
滴（約0.025ml）の量で滴下した。 試料(1)：ニユーカツスル病生ワクチン液30ml
（1000ドーズ）に実施例１の本発明(1)で用いた
試料(1)10mlを懸濁せしめたもの。 試料(2)：アイメリア・テネラのスポロゾイト
4000000個とアイメリア・ブルネツテイのスポ
ロゾイト4000000個とを実施例１の本発明(1)で
用いた試料(1)10mlに懸濁せしめたもの。 試料(3)：Bifidobacterium、Lactobacillusおよび
非病原性大腸菌の各１×1011個をPBS10mlに混
合懸濁せしめ、さらに実施例３の本発明(1)で用
いた試料(1)10mlを加えて懸濁混合せしめたも
の。 試料(4)：Clostridium perfringensおよび
Salmonella pullorumのそれぞれ１×1011個を
PBSに懸濁せしめ、さらにホルマリンを0.5％
になるように加え、死菌懸濁液とした後、ホル
マリンを十分に除去し、遠心分離（10000rpm、
20分間）を行ない、死菌体を集めてPBSに浮
遊させたものに実施例３の本発明(1)で用いた試
料(1)を10ml懸濁混合せしめたもの。 試料(5)：Haemophilue paragallinarumおよび
Mrcoplasma gallisepticumのそれぞれ１×
1010個をPBS2.5mlに浮遊させ、シヤーレ
（Falcon製1001型シヤーレ）に入れ、紫外線殺
菌灯（東芝殺菌ランプGL15）21.5cm下に置き、
30分毎に撹拌を４回行ない、さらに静置状態で
16時間照射し、その後2.5mlになるようにPBS
を加えて死菌体浮遊液を得、このものに実施例
３の本発明(4)で用いた試料(2)を2.5ml加えて懸
濁混合せしめたもの。 試料(1)、(2)、(3)、(4)および(5)に用いたニユーカ
ツスル病生ワクチン、アイメリア・テネラのスポ
ロゾイト、アイメリア・ブルネツテイのスポロゾ
イト、Bifidobacterium、Lactobacillus、非病原
性大腸菌、Clostridium、perfringens、
Salmonella pullorum、Haemophilus
paragallinarum、Mycoplasma gallisepticumの
調製法は下記のとおりである。 試料(1)に用いたニユーカツスル病生ワクチン液
は化学及び血清療法研究所製のニユーカツスル病
生ワクチンの溶解用液30ml中に乾燥予防液を1000
ドーズ分になるように溶解して調製した。 試料(2)に用いたアイメリア・テネラのスポロゾ
イトの調製法は次のとおりである。アイメリア・
テネラの成熟オーシストを経口投与した鶏の糞、
盲腸壁および盲腸内容物を集め、３％重クロム酸
カリウム溶液に浮遊せしめそして28℃において２
日間培養した。得られた成熟オーシストを含む溶
液を遠心分離（3000rpm、10分間）しそして沈澱
を集める。次いでこの沈澱を水で洗浄し且つ飽和
食塩水を添加する。この溶液を遠心分離
（3000rpm、10分間）し、上澄をとり、この上澄
を水で希釈し、希釈液を更に遠心分離
（1000rpm、３分間）しそして沈澱を集める。こ
の沈澱はほとんどオーシストのみよりなる。前記
オーシストに水および５％の次亜鉛素酸ナトリウ
ム液を加え且つ15分間放置した後、遠心分離
（2000rpm、３分間）を行う。得られた沈澱を水
で洗浄し、次いでホモジナイザーで磨砕する。こ
の磨砕物はほとんどスポロシストよりなる。この
スポロシストに５％鶏胆汁および0.25％トリプシ
ンPBS（−）溶液を加えそして40℃の温浴中でお
よび1.5時間消化せしめる。得られた消化液を遠
心分離して沈澱を集め、そしてこの沈澱をPBS
（−）溶液で洗浄する。このものはほとんどスポ
ロゾイトよりなる。これにPBS（−）溶液を加え
た。 試料(2)で用いたアイメリア・ブルネツテイのス
ポロゾイトは上記のアイメリア・テネラのスポロ
ゾイト調製法に準じて行なう。ただしアイメリ
ア・テネラの代わりに、アイメリア・ブルネツテ
イを使用する。 試料(3)に用いたBifidobateriumは鶏の腸管か
ら分離し、アスコルビン酸ソーダとＬ−システイ
ン塩酸塩加ブレイン・ハートインフイユージヨン
ブロス（Difco Laboratory社製）を用いて37℃
で20時間培養した後、10000rpmにおいて20分間
遠心分離を行つてBifidobacteriumの湿菌体を得
る。 試料(3)に用いたLactobacillusは試料(3)に用い
たBifidobacteriumの調製法と同様に行なつた。 試料(3)に用いた非病原性大腸菌は健康な鶏の腸
管より分離し、ハート・インフユージヨンブロス
（Difco Laboratory社製）を用いて37℃で18時間
培養した後、10000rpmにおいて20分間遠心分離
を行なつて非病原性大腸菌の湿菌体を得る。 試料(4)に用いたClostreidium perfringensは試
料(3)に用いたBifidobacteriumの調製法と同様に
行なつた。 試料(4)に用いたSalmonella pullorumは雛白痢
に罹患した鶏の糞便より分離し、ハート・インフ
イユージヨンブイヨン（Difco Laboratory社製）
を用いて37℃で18時間培養した後、10000rpmに
おいて20分間遠心分離を行なつてSalmonella
pullorumの湿菌体を得る。 試料(5)に用いたHaemophilus
pararagllinarumは伝染性コリーザに罹患した鶏
の鼻腔より分離し、チヨコレート寒天培地〔日清
化学(株)製クリメデイア〕で画線培養し、増殖した
コロニーをコンラージ棒を用いてかき取つた。 試料(5)に用いたMycoplasma gallisepticum
は、鶏呼吸器性マイコプラズマ病に罹患した鶏の
気嚢より分離した。分離方法は「Bull.Nat.Inst.
Anim.Hlth.」No.53（1966年８月）第10頁に準じて
行なつた。すなわち、気嚢の内側を滅菌綿棒でぬ
ぐい、それを0.5％イーストエクストラクト
（Difco社製）加燐酸緩衝食塩液１mlに振り出し、
この培養材料の１白金耳を寒天平板培地に塗抹す
るとともに0.1mlを２mlを液体培地に移植した。
平板培地は乾燥を防ぐ目的で水でしめらした脱脂
綿を入れたデシケーター中に収め、液体培地はそ
のままそれぞれ37℃で培養した。平板培地は６日
後に50倍の拡大で集落の有無を観察した。液体培
地は10日間観察し、その間培地の黄変したものは
その都度平板培地に塗抹培養して集落の有無を検
査した。ここで使用した液体培地は、鶏１羽分の
もも肉、胸肉、心、肝を細坐し、２倍量の蒸溜水
を加えて１夜永室に静置し、その後100℃に30分
加熱し、過後NaClを0.5％、鶏血液を５％そし
て10％NaClを１％加え、100℃30分加熱し、PH
7.8に修正後過および過滅菌を行なつた液
(1)に、非働性馬血清20％、10％ブドウ糖１％、１
％フエノールレツド0.2％、５％酢酸タリウム１
％およびペニシリン1000μ／mlを加えたものを使
用した。また、ここで使用した寒天平板培地は、
液体培地作成時に使用した液１を約60℃に加熱
し、15％寒天液の加熱溶解したもの1/10量を加え
て短時間加熱して完全に溶解させ、50℃に冷却
し、非働性馬血清20％、５％酢酸タリウム１％お
よびペニシリン1000U／mlを加えて寒天培地とし
た。分離したMycoplasma gallisepticumは５ml
PPLO増殖培地（栄研）を用いて37℃において３
日間培養し、次に100mlのPPLO培地（栄研）に
植え次いで37℃で３日間培養し、次に3000mlの
PPLO増殖培地に植え、次いで37℃で５日間培養
し、次に20000Gで30分間遠心分離して集収した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 大腸菌NS−244の生菌または死菌体を活性成
分とする抗大腸菌症剤を鶏の総排泄腔に接種する
ことを特徴とする鶏の大腸菌症の予防法。 ２ 大腸菌NS−244の生菌または死菌体と、大腸
菌O1あるいはO2あるいはO1とO2の死菌体の組み
合わせからなる抗大腸菌症剤を鶏の総排泄腔に接
種することを特徴とする鶏の大腸菌症の予防法。 ３ 大腸菌の不活化がガンマー線照射、紫外線照
射またはホルマリンでの処理でなされたものであ
る特許請求の範囲第１項または第２項記載の大腸
菌症の予防法。 ４ 抗大腸菌症剤の接種菌量が１羽当り1.0×105
個以上である特許請求の範囲第１項または第２項
記載の大腸菌症の予防法。 ５ 抗大腸菌症剤の接種方法が滴下、注入、スプ
レー、浸漬または塗付によりなされる特許請求の
範囲第１項または第２項記載の大腸菌症の予防
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1815182A JPS58135819A (ja) | 1982-02-09 | 1982-02-09 | 鶏の大腸菌症の予防法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1815182A JPS58135819A (ja) | 1982-02-09 | 1982-02-09 | 鶏の大腸菌症の予防法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58135819A JPS58135819A (ja) | 1983-08-12 |
| JPH0315607B2 true JPH0315607B2 (ja) | 1991-03-01 |
Family
ID=11963607
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1815182A Granted JPS58135819A (ja) | 1982-02-09 | 1982-02-09 | 鶏の大腸菌症の予防法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58135819A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69016129T2 (de) * | 1989-08-18 | 1995-05-24 | Akzo Nobel Nv | Vakzin gegen Escherichia coli. |
-
1982
- 1982-02-09 JP JP1815182A patent/JPS58135819A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58135819A (ja) | 1983-08-12 |
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